TD-Interactions protéine-ligand Enzymologie/L3-Biochimie (2022/2023) Dr H.

Boukhalfa

Exercice 1 :

L’équilibre de fixation du calcium sur la Désoxyribonucléase, à pH 9, a été étudié par la

méthode de filtration sur gel. On a pu, ainsi, déterminer la quantité de Ca +2 fixé par mole
d’enzyme, pour les différentes concentrations de Ca+2 libre. Les résultats de ces expériences
sont rassemblés dans le tableau suivant :

Ca+2 libre (102 µM) Nombre de Ca+2 fixé/ mole

d’enzyme

5 4
2 3,4
1 3
0,5 2,2
0,2 1,25
0,1 0,75
0,05 0,4
0,025 0,25

Déterminer le nombre de sites de fixation du calcium sur la Désoxyribonucléase et leur

constante de dissociation.

Exercice 2 :
On étudie une enzyme qui possède le NAD comme coenzyme. On peut mesurer la constante
d’affinité du NAD, et le nombre de sites de fixation sur l’enzyme.

1°) En travaillant en présence d’un excès de substrat ([S]>> Km), on a déterminé les vitesses de la
réaction, à différentes concentrations de NAD. Les vitesses ont été divisées par la concentration
d’enzyme (10-8M) avant d’être portées dans le tableau suivant :

[NAD]. 10-5 (M) Vitesse (s-1)

1 1,8
2,5 3,73
5 5,8
7,5 7,12
12,5 8,7
20 9,9
30 10,8

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Que peut-on déduire de ces expériences ?

2°) Pour compléter ce travail, on a réalisé une expérience de dialyse à l’équilibre, en présence
d’enzyme 1,2. 10-5 (M). La concentration du NAD dans le compartiment sans enzyme était
10-4 (M). La concentration du NAD dans le compartiment avec enzyme était 1,15. 10 -4 (M).
A partir de ces expériences, calculer la constante d’affinité du NAD pour l’enzyme et le nombre
de sites de fixation.