TP 2 de biochimie clinique 18 août 2022

Dosage du glucose dans le sang : glucose oxydase

Introduction
Encore appelé dosage de la glycémie, le taux de sucre dans le sang, le dosage
du glucose dans le sang est un examen sang que le médecin prescrit de
manière routière. Mais il sert surtout à diagnostiquer un éventuel diabète. En
effet, le glucose est la meilleure source d’énergies pour les cellules de
l’organisme ; les principaux hormones qui régulent le taux de sucres dans le
sont le glucagon et l’insuline.

I- But du TP
Mettre en œuvre une technique expérimentale de dosage du glucose dans le
sang à la glucose oxydase/peroxydase

II- Principe du TP
La glucose oxydase (GOD) catalyse l’oxydation du glucose en acide gluconique
selon la réaction suivante :

β-D-Glucose + O2 + H2O Acide gluconique + H2O2

Dans une deuxième réaction indicatrice, le peroxyde d’hydrogène (H2O2)
produit, se détache au moyen d’un accepteur chromo génique d’oxygène, de
phénol-ampirone en présence de peroxydase (POD)
H2O2 + Phénol + ampirone Quinone + H2O

III- Matériel, réactifs, échantillons et mode opératoire

1- Matériel
- Spectrophotomètre
- Cuvettes de 1, 0 cm d’éclairage
- Equipement classique de laboratoire
2- Réactifs
R1 TRIS Ph 7,4 92
Tampon mmol/L
Phénol 0,3
mmol /L
TP 2 de biochimie clinique 18 août 2022

R2 Glucose oxydase (GOD) 15000 U/L

enzymes Peroxydase (POD) 1000U/L
4 – Aminophénazone (4 – AF) 2, 6 mmol/L
Glucose cal Patron primaire de détection du glucose 100
mg/dl

3- Echantillons
Sérum ou plasma, sans hémolyse1 ni LCR. Le sérum doit être séparé dès que
possible du caillot.
Stabilité : le glucose dans le sérum ou plasma est stable 3 jours à 2 - 8 oC
4- Mode opératoire
Blanc Etalon Echantillon
RT (mL) E1 E2 D1 D2
1,0
1,0 1,0 1,0 1,0
Etalon (remarque 1,2) (µL) -- 10 10 -- --
Echantillon (µL) -- -- -- 10 10

0,6 - 1,1g/L

 Homogénéiser
 Incuber à
température
E1 E2 D1 D2 ambiante pendant
10 min

IV- résultats