Estudio in silico de mutantes de la sialidasa NanA de Clostridium chauvoei para la optimizacin de vacunas contra gangrena gaseosa

Elian Mireille Martnez-Gmez, Juan Arturo Casteln-Vega, Rosa Mara RibasAparicio Laboratorio de Produccin y Control de Biolgicos, Departamento de Microbiologa Escuela Nacional Ciencias Biolgicas-IPN, Prolongacin de Carpio y Plan de Ayala s/n, Col. Santo Tomas C.P. 11340 Delegacin Miguel Hidalgo, Mxico D.F

INTRODUCCIN
C. chauvoei es una de las especies patgenas del gnero Clostridium ms importantes y ocasiona grandes perdidas en la industria pecuaria, a pesar de ser encontrada comnmente en rumiantes, ya se ha reportado un caso fatal de gangrena gaseosa fulminante en humanos en 2008; esto aunado a la existencia de dificultades para la identificacin entre C. septicum y C. chauvoei, nos da pauta a considerar que en un porcentaje de casos de gangrena gaseosa en humanos se encuentra involucrado C. chauvoei y hace evidente la necesidad de la bsqueda de inmungenos para el diseo de vacunas que garanticen una proteccin prolongada contra este microorganismo. Aunque se conoce poco de sus factores de virulencia a nivel gentico y molecular, se sabe que la sialidasa NanA es importante en la propagacin de las formas vegetativas bacterianas hacindola un buen candidato para el diseo de vacunas y mediante el estudio in silico podemos garantizar tener mas opciones viables sin recurrir a extensos desarrollos experimentales que tomaran tiempo y recursos para alcanzar el objetivo.

Figura 3. Grfica de energa de la NanA sialidasa mutada de C. chauvoei donde se muestran los posibles cambios estructurales mediante picos negativos y positivos si se mantiene estable la estructura.

Figura 4. Sitio activo de la NanA sialidasa silvestre (A) y mutada (B) de C. chauvoei donde se analiz la disminucin de interacciones con el sustrato cuando se realizan las mutaciones.

OBJETIVO
Caracterizar y evaluar por herramientas bioinformticas mutantes de la NanA sialidasa de C. chauvoei para la obtencin de un antgeno vacunal para la prevencin de la gangrena gaseosa Fig 5. Estructuras de la sialidasa NanA de

MATERIALES, MTODOS Y DESARROLLO

C. chauvoei. A. Estructura de la sialidasa NanA silvestre. B. Estructura de la sialidasa NanA con mutaciones en los residuos 49 y 317 del sitio activo.

CONCLUSIONES
Se realiz la prediccin de los modelos de la estructura silvestre y mutada en el sitio activo de NanA, seleccionando los residuos principales en el ciclo cataltico de las sialidasas y por medio de 2 mutaciones aseguramos que el cido silico no se coloque en la posicin correcta en el sitio activo y la eliminacin de una interaccin relevante en el ciclo cataltico de la enzima

REFERENCIA RESULTADOS
A B
Figura 2. Grfica de Ramachandran del modelo de la secuencia de la NanA sialidasa silvestre (A) y mutada (B) de C. chauvoei. Donde ms del 90% de las conformaciones de los enlaces phi y psi se encuentran en zonas permitidas. Vilei EM, Johansson A, Schlatter Y, Redhead K, Frey J. (2011): Genetic and functional characterization of the NanA sialidase from Clostridium chauvoei. Veterinary Research 42: 2 Noriyuki N., Shinji I., Haru K., Yoshimasa S., Motohide T., Koji S., Yukiko N., Yoshichika, A. (2008): Human Fulminant Gas Gangrene Caused by Clostridium chauvoei, J Clin Microbiol. 46:4
Garofolo G., Galante D., Serrecchia L., Buonavoglia D., Fasanella A. (2011): Development of a real time PCR Taqman assay based on the TPI gene for simultaneous identification of Clostridium chauvoei and Clostridium septicum. J Microbiol Methods. 84:(2)