Polynuclaires neutrophiles :

Morphologie, fonctions, mthodes dexploration

Polynuclaires neutrophiles Morphologie : Le polynuclaire neutrophile est une cellule de 12 14 , dont le rapport nuclocytoplasmique est d'environ 30%.

Son noyau est multilob (2 5 lobes) : de minces ponts de chromatine relient les lobes les uns aux autres. La chromatine/ ros violac, prend la forme de mottes denses bien limites. Chez la femme, environ un sur dix polynuclaires prsente une petite masse de chromatine rattache au noyau par un filament, l'appendice nuclaire li au sexe. Le nombre de lobes augmente au cours de la vie du polynuclaire. Le pourcentage de polynuclaires possdant 1, 2,3, 4 ou 5 lobes est exprim par la formule d'Arneth :

Formule d'Arneth normale

Nombre de lobes Pourcentage de polynuclaires

1 5

2 34

3 45

4 14

5 2

Les carences en vitamines B 12 dvient la formule d'Arneth vers la droite et les polynuclaires peuvent alors avoir plus de 5 lobes. Les processus infectieux (septicmies) la dvient vers la gauche : la majorit des cellules ont un deux lobes. Des granulations brunes, dites neutrophiles (lysosomes) et des granulations azurophiles se dtachent sur un cytoplasme gris clair. Les colorations cytochimiques indiquent que les granulations spcifiques neutrophiles contiendraient des phosphatases alcalines tandis que les granulations azurophiles renfermeraient des peroxydases et des phosphatases acides.

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Ces deux types de granulations se colorent par le noir Soudan, rvlant ainsi leur contenu lipidique. Le PAS met en vidence du glycogne cytoplasmique. Les phosphatases alcalines sont diminues dans la leucmie mylode chronique (intrt diagnostique). Proprits : 1. Plasticit Cette cellule extrmement dformable franchit des orifices de 3 : ainsi, elle traverse un endothlium vasculaire en s'immisant dans les espaces intercellulaires. 2. Adhsivit Cette proprit lui permet d'adhrer aux parois vasculaires. L'adhrence n'est possible qu'en prsence de plasma, de cations bivalents Mn++, Mg++, Ca++. (A 4 C, l'adhrence est impossible). Sur un support, grce leur proprit d'adhsivit, les polynuclaires talent leur cytoplasme en un large voile mince circulaire autour du renflement central du noyau. Les polynuclaires peuvent former des agrgats. 3. Mobilit Les polynuclaires se dplacent en mettant des pseudopodes dont les extrmits adhrent un support. La rtraction des pseudopodes entrane le noyau, le cytoplasme, et dtache la cellule de la zone postrieure d'appui. A 37, ils parcourent 20 40 la minute. Ces mouvements dpendent des microfibrilles et des microtubules : 1 'ATP fournit l'nergie ncessaire. 4. Chimiotactisme Le chimiotactisme c'est l'orientation des dplacements d'une cellule mobile, induits par des substances. La proprit chimiotactique d'une substance est tudie in vitro en chambre de Boyden. La substance teste est introduite dans un compartiment spare des polynuclaires par une membrane permable leur passage (pores de 3 ). L'activit chimiotactique s'value en tudiant l'orientation de leurs mouvements. Les leucotaxines, les fragments activs du complment (C3, C5), les filtrats bactriens, les produits de ncrose cellulaire, les produits de dgradation de la fibrine sont directement chimiotactiques. Les substances leucotaxinognes, lysosomes des polynuclaires, des macrophages, des hpatocytes, complexe Ag-Ac, protases (plasmine, thrombine), endotoxines n'ont d'effet chimiotactique qu'aprs activation de fragments du complment.

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Fonctions : 1) Phagocytose Opsonisation Les opsonines sont des protines particulires qui se fixent sur les germes et favorisent la phagocytose. Elles comprennent des immunoglobulines (surtout les Ig G) qui fixent la particule au polynuclaire, le complment, et un ttrapeptide, la tuftsine, scrt par la rate et transport par les immunoglobulines.

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Les phases de la phagocytose Le polynuclaire dirige deux pseudopodes qui entourent la particule et fusionnent. En moins d'une minute, 37, les lysosomes primaires fusionnent avec l'htrophagosome qui devient un htrophagolysosome. Les granulations spcifiques interviennent dans ce processus avant les granulations azurophiles. La particule est dtruite si elle est sensible aux enzymes des granulations. Pendant la phagocytose, les polynuclaires restent immobiles. L'nergie est fournie par l'ATP dont la synthse dpend de la glycolyse. 2) La bactricidie La phagocytose produit des modifications mtaboliques qui vont rapidement concourir la destruction des organismes ingrs par une explosion mtabolique se manifestant par une consommation d'02, intervenant 30 60 secondes aprs le contact de l'agent activateur avec la membrane. Les systmes antimicrobiens sont de deux types : Bactricidie oxygne-dpendante, Lie la production de composs oxygns toxiques : ion superoxyde, peroxyde d'hydrogne H2O2, produits grce la voie des pentoses, par l'intermdiaire d'une NADPH- oxydase, localises au niveau de la membrane plasmique et internalise dans le phagosome au sommet de la phagocytose. La NADPH-oxydase est absente au cours de granulomatose chronique familiale, caractrise par des infections rptitions gravissimes. Cette action est complte par le systme de la myloproxydase en prsence d'halogne et H2O2, qui agit en altrant la membrane de la bactrie par fixation de l'halogne qui provoqu la perte de l'intgrit de la membrane bactrienne. Le dficit en myloproxydase provoque une rduction des capacits de bactricidie en partie compense par les autres mcanismes.

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Systmes de bactricidie indpendants de l'oxygne : Le pH acide a un effet directement bactricide Le lysozyme ou muramidase lyse la paroi bactrienne. La lactoferrine capte le fer ncessaire la croissance des bactries Les protines cationiques se combinent avec les groupements acides des micro-organismes. Les hydrolases acides et protases neutres achvent la dgradation du contenu des vacuoles. L'exocytose expulse les rsidus non digrs. Mais la dgranulation du polynuclaire entrane souvent sa mort (formation de pus). La fonction principale des polynuclaires est donc essentiellement une fonction de dfense de l'organisme contre les bactries, les levures, les particules inertes, les cellules altres ou trangres, les substances pathologiques (fibrine).

3) Polynuclaires et inflammation Les protines scrtes par les polynuclaires neutrophiles entranent une vasodilatation et une augmentation de la permabilit capillaire : ces phnomnes sont favoriss par l'histamine qu'ils librent. De plus, elles provoquent la dgranulation des mastocytes (principaux producteurs d'histamine) et l'afflux secondaire d'autres polynuclaires.

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Les polynuclaires librent galement des protines pyrognes et des enzymes (lastase, collagnase, protases, hyaluronidases) responsables de lsions vasculaires et tissulaires, en prsence d'endotoxines bactriennes ou de complexes antignes anticorps. Polynuclaires osinophiles Morphologie : De mme taille que le granulocyte neutrophile, il s'en distingue par un noyau bilob et des granulations oranges, sphriques, d'un diamtre plus grand (0,3 2,5 ). Ces granulations sont riches en peroxydases et en phosphatases acides.

Fonctions : Les osinophiles sont des cellules mobiles, attires par les substances chimiotactiques. Les complexes antignes/anticorps (Ig E) se fixent sur la membrane des mastocytes et provoque l'excrtion des grains de scrtion : les produits ainsi librs jouent un rle dterminant dans le chimiotactisme. Les polynuclaires osinophiles semblent phagocyter surtout les complexes Ag-Ac. Ils interviendraient galement dans le transport du plasminogne qui intervient dans le phnomne de cicatrisation. Dure de vie: On estime le temps de maturation mdullaire 2 ou 3 jours et la dure de vie dans le sang 6 ou 8 heures ; les granulocytes vivraient plusieurs jours dans les tissus (2 jours dans l'intestin). Les osinophiles disparaissent de la circulation sanguine aprs administration d' ACTH un sujet normal (par blocage de leur libration partir de la moelle). Polynuclaires basophiles Morphologie : Cette cellule d'environ 10 14 (A, au noyau tri ou tetra foli, possde de grosses granulations de forme irregulires 0,2 1,2 \i, colores en rouge sombre par le bleu de toluidine ( raction mtachromatique) .

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Les granulations spcifiques basophiles contiennent de l'histamine, de l'hparine, du ECFA (factor chimiotactique des osinophiles), du PAF (platelet activating factor). Fonctions : Les polynuclaires basophiles libreraient, par dgranulation, de l'histamine et une substance chimiotactique, dterminant, aprs activation par des immunoglobulines, l'afflux d'osinophiles. Ils joueraient un rle dans les ractions d'hypersensibilit retarde (type cuti-raction la tuberculine). L'hparine contenue dans leurs granulations interviendrait dans les phnomnes de coagulation. Dure de vie: Elle est estime une dizaine de jours, depuis la formation de la cellule la plus jeune de la ligne jusqu' sa mort dans les tissus Exploration des polynuclaires Etude quantitative: 1. La numration leucocytaire associe la formule leucocytaire apprcie le taux des granulocytes neutrophiles du compartiment circulant. Il est compris entre 1,7 et 7.109/L 2. Le mylogramme permet une apprciation du compartiment de division et de maturation et de rserve. Il ne fournit qu'une apprciation relative des diffrents lments de la ligne. On peut souponner un trouble de maturation quand il existe un dsquilibre entre les diffrents stades, une majoration des stades peu matures par rapport aux lments les plus matures. 3. La biopsie ostomdullaire permet plus justement, l'apprciation de : - La densit cellulaire - La caractrisation des troubles de maturation 4. Le dosage srique des produits synthtiss par les neutrophiles : - La transcobalamine, protine transporteuse de la vitamine B12 est un reflet du pool des granulocytes. - Le lysozyme contenu dans les granules primaires et secondaires est libr par la destruction des granulocytes. Le lysozyme est galement scrt par les monocytes. 5. Les mesures isotopiques de dure de vie des granulocytes du secteur vasculaire restent des mthodes exprimentales qui ne sont pas utilises en clinique. A16--Pollynucllaiirres..doc A16 Po ynuc a es doc 74

Etude fonctionnelle : 1. Les mthodes cytochimiques permettent l'apprciation d'activits fonctionnelles caractristiques de la ligne : La peroxydase caractrise par son abondance la ligne granulocytaire. La phosphatase alcaline leucocytaire (PAL) est un tmoin de la maturit des polynuclaires des neutrophiles. 2. Etude du chimiotactisme in vitro en chambre de Boyden, constitue de deux compartiments spars par un filtre. Les cellules dont on tudie la rponse une substance chimiotactique sont places dans la chambre suprieure, la substance chimiotactique tant dans la chambre infrieure. On dnombre les lments ayant franchis le filtre. 3. Test de rduction du nitro bleu de ttrazolium : ce test effectu in vitro met en prsence des particules de latex qui seront phagocytes par le polynuclaire, du NADP, et un colorant du nitro bleu de ttrazolium (NBT). Sous l'action de la NADP-oxydase stimule par la phagocytose, le NBT est rduit et prcipite sous forme de granules vert dense. Dans la granulomatose chronique le nombre de polynuclaires capables de rduction est infrieur 15%. 4. Bactricidie in vitro, consiste tudier le nombre de germes restant vivant aprs un certain temps d'incubation en prsence de polynuclaires neutrophiles. Variations pathologiques des polynuclaires Variations quantitatives 1. Neutrophilie 2. Neutropnie Variations fonctionnelles des neutrophiles Dans les formes congnitales, elles sont rvles par des infections cutanes et de la sphre ORL, rcidivantes. 1. Anomalies du chimiotactisme . Congnitale : Syndrome du leucocyte paresseux . Acquis : Alcoolisme, diabte, brlures au cours des traitements par la colchicine, les corticodes.

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2. Anomalies de la bactricidie . Granulomatose chronique familiale, rvle par des suppurations pulmonaires, cutanes, osseuses, ganglionnaires. . Dficit en myloproxydase. Tests d'exploration du secteur de rserve Test l'Etiocholanolone ou l'hydrocortisone : L'injection d'une de ces substances induit une mobilisation des polynuclaires du pool de rserve et permet de diagnostiquer les pathologies de rpartition par rapport aux dficits de production.

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