ENZYMES SERIQUES
1. INTRODUCTION
La mesure de l'activité des différentes enzymes
sérique et tissulaire a pris depuis quelques années une
grande importance.
Ces enzymes se trouvent normalement dans le sérum
en faible quantité et à des taux bien déterminés.
Dès qu'un organe ou un tissu est lésé, il libère dans la
circulation générale des enzymes qui lui sont propres.
Ainsi, pour déterminer l'organe lésé, et au lieu de faire
une biopsie d'organe, il est beaucoup plus facile et
confortable pour le malade d'effectuer une prise de
sang.
Les enzymes que l'on retrouve dans le sérum
proviennent du foie, du cœur, du pancréas, de la
prostate et des muscles.
L'intérêt de la détermination de ces enzymes est
multiple :
- Elle permet de déceler une maladie avant
même qu'elle ne soit cliniquement
percevable;
- Elle permet de préciser l'organe lésé ;
- De préciser le degré d’atteinte
- Enfin pour certaines enzymes leur taux est un
bon marqueur de l'évolution de la maladie.
Cependant un grand nombre d’enzymes n’ont pas
tous un intérêt sémiologique et donc inutilement
dosables.
Dosage particulier des enzymes :
- Enzymes = faibles quantités (difficilement
mesurables) + durée de vie brève.
Alors on mesure son Activité enzymatique.
Vitesse = quantité d’enzyme.
- Dosage exprimé en Unité enzymatique : UI/L
Au lieu de doser l’enzyme, on mesure son activité
enzymatique, et ce en dosant la quantité de substrat
métabolisée par cette enzyme.
- Si le substrat est métabolisé fortement ->
quantité élevée d’enzyme ;
- Si le substrat est métabolisé dans un laps du
temps connu -> quantité normale d’enzyme.
Exception faite pour la CKMB : la seule enzyme qui est
dosée directement (concentration pondérale) ou
même en dosant son activité enzymatique.
2. Principe général de la mesure d’une activité
enzymatique :
Pour déterminer l'activité d'une enzyme on utilise la
réaction catalysée par l'enzyme et l’on dose :
- La quantité de produit formé ;
- Ou la quantité de substrat consommé au
cours d'un temps déterminé (minute).
Nous pouvons pour cela utiliser des méthodes
enzymatiques en UV en utilisant un coenzyme
nicotinique, soit dans une réaction directe, comme
c'est le cas pour (LDH) et (ASAT) (couple
NAD+,NADH.H) ou le couple NADP, NADPH,H pour
la (CK).
NB : De préférence il faut utiliser des méthodes
optimisées et standardisées (même méthode de
dosage , pour une meilleure comparaisons des
résultats).
Exemple : cinétique enzymatique en UV :
– NADH = absorbe fortement à 340 nm (e =
6.3 molL-1cm-1);
– NAD+ = n’absorbe pas à 340 nm.
Formation du produit -> DO positives |
Consommation du produit -> DO négatives.
On mesure l’augmentation et la diminution du NADH
au lieu de mesurer celle du NAD. En fait, le NAD
absorbe mieux à 360nm. À cette longueur d’onde, il y’en
a d’autres molécules qui absorbent, ce qui fausse la
mesure (contrairement au NADH ayant une meilleure
absorption à 340nm, longueur d’onde plus ou moins
spécifique).
Cette méthode nous permet de doser indirectement
la LDH (lactate déshydrogénase).
NB : notre but est de doser la LDH, celle-ci est
proportionnelle à la quantité de NADH apparu ou
disparu.
 3. Problèmes rencontrés en enzymologie
clinique :
Spécificité d’organe :
L'idéal serait de rencontrer pour chaque organe, une
enzyme spécifique produite uniquement par cet
organe.
Toutefois l'étude de la répartition des isoenzymes
dans différents organes permet de retrouver une
meilleure spécificité d'organe. Ex : la LDH qui peut
provenir du foie, du cœur, des reins, des globules
rouges, a une isoenzyme spécifique du cœur, LDH 1.
Température :
En ce qui concerne la température, la Société
allemande de chimie clinique (DGKC) conseille 25°C,
la Société française de biologie clinique (SFBC)
propose des normes à 30°C et les États-Unis 37°C.
Il est important de noter les différences de valeurs
usuelles obtenues en fonction de la température.
Il existe toutefois des facteurs de conversion pour
passer d'une température à l'autre.
NB : notion de standardisation : tous les laboratoires
utilisent les mêmes techniques pour aboutir aux
même normes, notamment la T°.
Ex : un paramètre dosé à 10 (15°C), on le multiplie par
un facteur pour avoir le chiffre à 37°C.
ENZYMES SERIQUES
Il existe 2 types d’enzymes :
- Enzymes d’excrétion : synthétisées par des
glandes exocrines. Ex : PAL du foie, phosphatase
acide de la prostate (abandonnée | remplacée par
un marqueur tumoral), amylase et lipase
pancréatique ;
- Enzymes cellulaires : ont une localisation très
particulière dans certains tissus. On peut ainsi
identifier l'organe d'où proviennent les enzymes
dont les taux sériques sont modifiés.
En comparant les résultats obtenus pour les enzymes
qui passent rapidement dans le plasma et qui ont une
durée de vie courte (CK, TGO) et pour les enzymes qui
ont une longue durée de vie et qui passent moins
rapidement dans le sérum (TGP).
1. Phosphatase alcaline :
Son activité optimale est comprise entre pH 7,5 et pH
9,6.
Elle se trouve dans de nombreuses cellules en
particulier dans les os, l’intestin, le rein, le foie,
leucocytes.
Valeurs usuelles :
Adultes: 30 à 125 - Enfants :110 à 400 U/l.
Plus élevée chez l’enfant, marquant une ostéogénèse
plus rapide.
Affections hépatiques :
- Un ictère avec taux PAL normal -> cirrhose,
hépatite, hémolyse ;
- Un ictère + taux élevé de PAL -> ictère par
rétention : cancers primitifs du foie ou calculs
des voies biliaires (cholestase).
Affections osseuses :
Les PAL sont augmentées dans les affections
suivantes :
- La maladie de Paget. Les taux de
phosphatases alcalines peuvent être 20 à 30
fois plus élevés que la normale.
Intérêt au début de la maladie lorsque les
signes radiologiques ne sont pas encore
visibles.
- Le rachitisme ;
- Les tumeurs osseuses.
NB : la maladie de Paget est une déformation de l’os à
cause d’un remodelage anormal dû à une action
ostéoclastique suivie d’une action ostéoblastique
formant un os de mauvaise qualité. Le taux de la PAL
est élevé, alors que le Ca2+, le phosphate, la PTH sont
tous normaux.
Il existe des isoenzymes de la PAL
- Fraction osseuse 50 à 70 % ;
- Fraction hépatique 30 à 50 %. Ces deux
fractions sont les plus importantes ;
- Fraction intestinale 0 à 20 %.
- Isoenzyme d'origine placentaire ;
Cette dernière est habituellement absente chez le
sujet normal, elle est retrouvée dans le placenta de la
femme enceinte.
2. La GGT (gamma glutamyl transférase) :
Elevée dans les affections suivantes :
Ethylisme chronique (hépatite toxique) :
Dans les cirrhoses d'origine éthylique, l'augmentation
est très importante.
Le retour à la normale est assez rapide dès l'arrêt de la
prise d'alcool alors que chez le cirrhotique les valeurs
baissent sans revenir à la normale.
Elle a une forte valeur prédictive Négative : un taux
diminué -> pas d’affections hépatiques.
Cholestase : augmentation rapide de la GGT.
Intoxications médicamenteuses : exemples des
anticoagulants, antiépileptiques, neuroleptiques et
contraceptifs oraux.
Affections pancréatiques et hépatiques :
Augmentation de la GGT dans les pancréatites aiguës
et dans le cancer du pancréas.
Dans les hépatites virales, la GGT ne présente pas
d'intérêt diagnostique. Elle peut néanmoins être
utilisée pour confirmer la guérison.
L’élévation des GGT est le test le plus sensible de
cholestase. Au cours de l'ictère obstructif, deux
enzymes présentent un grand intérêt, ce sont les GGT
et les PAL.
Les transaminases sont également augmentées mais
de façon bien moins importante que dans les
hépatites.
L’ élévation conjointe des 2 enzymes (PAL et GGT) est
spécifique de la cholestase.
Remarque : Une élévation isolée des PAL est
habituellement en rapport avec une maladie osseuse
(car l’élévation des GGT est plus sensible dans la
cholestase que celle des PAL).
Il y a cependant des situations où les GGT sont
élevées en l’absence de cholestase, il s’agit surtout de
phénomènes d’induction enzymatique : c’est
l’augmentation des GGT sous l’influence de
substances dites « inductrices » (alcool et certains
médicaments comme les antidépresseurs ou les
anticonvulsivants.)
La GGT est utilisée comme marqueur d’alcoolisme.
3. Amylase :
Deux isoformes existent chez l’homme : (S) de type
salivaire et (P) de type pancréatique. L’amylasémie
est augmentée dans tous ces cas :
Pancréatite aiguë
L'amylasémie augmente au cours de la pancréatite
aiguë, pouvant atteindre 30 à 40 fois la valeur
normale. Cette augmentation se manifeste entre la
2e et 12e heure après le début de l'affection, atteint
son maximum entre la 30° et la 48e heure et se
normalise entre 3 à 5 jours.
L'amylasémie doit toujours être complétée par
l'amylasurie. Avec un décalage de 6 à 12 heures.
Pancréatites chroniques et cancers du pancréas
L'augmentation de l'amylase n'est pas aussi
importante que dans les pancréatites aiguës.
Autres pathologies
L'amylasémie est augmentée dans les parotidites
virales telles que les Oreillons ( pathologie salivaire).
Elle est augmentée aussi lors des affections : des
perforations d'ulcères , occlusions intestinales , lithiase
biliaire, grossesse extra utérine, appendicites aigues,
péritonites.
Ainsi, l’amylasémie n’est pas spécifique, elle peut être
élevée dans toutes les urgences abdomino-pelviennes
(péritonites, appendicites…).
4. Lipase :
Plus spécifique du pancréas (Valeurs usuelles 20 à 210
U/l à 37 °C).
On rencontre une hyperlipasémie :
- Les pancréatites aiguës (PA) ;
- Les pancréatites chroniques ;
- Les cancers de la tête du pancréas ;
- Les atteintes hépatiques.
Amylase et lipase = bilan pancréatique = urgence
biologique.
Augmentations de la lipasémie dans la Panc Aigue
Les pancréatites aiguës, entraînent une
augmentation importante du taux de lipase sérique.
L’élévation s’observe dans les 4 à 8 heures après
l’épisode aigu, atteint un pic à 24 heures et se
normalise en 8 à 14 jours après le début clinique de la
poussée pancréatique.
Augmentations de la lipasémie en dehors de la PA
Dans certaines affections extra-pancréatiques,
l’activité de la lipase peut également augmenter en
absence ou en présence de douleur abdominale.
Cette augmentation est modérée, inférieure à 3 fois la
normale dans la majorité des affections extra-
pancréatiques et également au cours de l’éthylisme
chronique, de l’insuffisance rénale, cholécystite, et
perforation intestinale.
5. Lactate déshydrogénase LDH :
Trouvée dans de nombreux organes : cœur, foie,
muscle, rein.
Valeurs normales inférieures à 250 U/l
Affections cardiaques : moins utile que les Tn.
Affections hépatiques :
Les LDH augmentent au cours des hépatites, dans les
ictères pré-hépatiques et dans les métastases
hépatiques des cancers
Affection hématologiques : la LDH augmente dans :
L'anémie pernicieuse (valeurs extrêmement élevées
pouvant atteindre 10 000 Ul/L) et les anémies
hémolytiques (dans ce cas, il y aura libération de
l’hémoglobine dans le sang, celle-ci donnera de la
bilirubine lorsqu’elle éclate).
Elle est augmentée également au cours des affections
s’accompagnant de production cellulaire excessive
tels les leucémies, maladie de Hodgkin et lymphomes
(ces maladies concernent surtout les éléments
sanguins, elles augmentent ainsi la LDH).
Sa normalisation est un bon signe d’efficacité
thérapeutique (chimiothérapie, greffe de moelle) et
sa remontée constitue un signe de rechute.
Affections musculaires : toutes les myopathies (c’est
la LDH musculaire).
La LDH a une structure tétramérique résultant de
l’association de 4 sous unités de 2 types
génétiquement distincts: H (Heart) ou M (Muscle).
L’association de ces sous unités génère 5 isoenzymes
numérotées selon leur mobilité électrophorétique,
LDH-1 : (H4) ; LDH-2 : (H3M) ; LDH-3 : (H2M2) ; LDH-4
: (HM3) ; LDH-5 : (M4).
Isoenzyme Tissu
1 et 2 Cœur, hématies et rein
4 et 5 Muscles squelettiques
et foie
2, 3 et 4 Leucocytes, plaquettes,
tissus lymphoïdes.
Technique d’exploration : électrophorèse.
- Lors d'un infarctus du myocarde on trouve
surtout dans le sérum la LDH1 d'origine
cardiaque.
- Lors d'une hépatite infectieuse on constate
une augmentation de la LDH5.
6. Créatine Kinase CK ou CPK :
Une enzyme musculaire, retrouvée donc
physiologiquement augmentée chez les personnes de
race noire (plus musclés) ; Augmentée
pathologiquement dans les cas :
Dans l'infarctus du myocarde : non plus utilisée,
remplacée par l’étude de la cinétique troponine ;
Dans les myopathies : l'augmentation est
importante dès le début de la maladie. Elle concerne
surtout les myopathies génétiques.
Parfois, il y a des myopathies à transmission
autosomales récessives liées à l’X (la femme transmet
la maladie mais elle n’est pas atteinte), d’où l’intérêt
du dosage de la CK pour dépister les jeunes filles
hétérozygotes (porteuses du gène Leur taux de CK
est en effet toujours supérieur à celui d'une
population féminine du même âge.
Cette enzyme présente dans :
- Les muscles squelettiques
- Le muscle cardiaque,
Dosage enzymatique cinétique en UV ,valeurs usuelles:
40 – 250 UI/l.
De nombreuses variations physiologiques :
▪ Activité CK fonction de la masse musculaire
(H > F) ;
▪ Variation selon l’âge et le sexe en relation
avec la masse musculaire ;
▪ Exercice physique : > CK (+50%) ;
▪ Marathoniens : proportion de CK et de CK-MB
augmentées ;
▪ Augmente en cas d’injection intramusculaire.
Bilan musculaire = dosage des CPK ,transaminases
(ASAT) et LDH.
Isoenzymes de la CK :
• Double localisation cellulaire (cytosolique et
mitochondriale)
• Dimère formé de deux sous unités
polypeptidiques:
– M (muscle) ;
– B (brain = cerveau).
• 3 isoenzymes :
- CK1 = CK-BB (cerveau)
- CK2 = CK-MB (surtout dans le cœur),
- CK3 = CK-MM (muscle).
Proportions différentes des isoenzymes selon les
tissus : cerveau pratiquement 100% CK-BB
C’est la CKMB qui est dosée dans l’infarctus.
Les valeurs usuels pour la CKMB activitaire sont de 10
à 20 U/L.
Pour la CKMB pondérale , les valeurs physiologiques
sont inférieures à 2 µg/l.
C’est la seule enzyme qu’on peut la doser directement
(ça reste mieux de doser son activité).
Intérêt :
- Diagnostic IDM (si Tn indisponible) -> la
CKMB a une excellente spécificité.
- Diagnostic d’une récidive et suivi de
reperfusion.
7. Transaminases ASAT et ALAT :
Le foie, le myocarde et le muscle squelettique ont un
contenu important en transaminases.
L’ASAT aspartate aminotransférase | TGO
transaminase glutamate-oxaloacétate : existe sous
deux formes moléculaires localisées, l’une dans le
cytoplasme (ASATc) (30 %), l’autre dans les
mitochondries (ASATm) (70 %).
L’ALAT alanine aminotransférase | TGP :
transaminase glutamate-pyruvate : est
majoritairement cytoplasmique (hépatocyte).
- Le foie contient plus d’ALAT que d’ASAT, le
muscle contient plus d’ASAT (rapport
ASAT/ALAT élevé -> pathologie musculaire |
l’inverse pour le foie).
- L’ALAT est retrouvée en grande quantité
dans le foie ce qui la rend pratiquement
spécifique d’une cytolyse hépatique.
Elévation dans les affections suivantes :
Affections hépato-biliaires :
Dans les hépatites aiguës, l'augmentation des TGO
mais surtout des TGP commence avant même que
l'ictère ne soit déclaré.
L'augmentation du taux des TGP signe une cytolyse
hépatique qui permet de suivre l'évolution de la
maladie et une rechute éventuelle.
Dans les hépatites chroniques, l'augmentation des
transaminases est modérée.
Dans Les obstructions des voies biliaires
l’augmentation (cholestase) est modérée et le retour
à la normale est rapide (dans ce cas, c’est plus
pratique de doser l’ALP et la GGT).
En fait, pour un bilan hépatique, on dose les 4 molécules
plutôt qu’une seule : la GGT, TGO, TGP et la PAL.
Ainsi, dans les hépatites aiguës :
- Les transaminases sont très élevées,
Leur tau revient rapidement à la normale lorsque la
cause de l’atteinte est supprimée.
- La GGT et la PAL seront peu élevées.
Ce tableau caractérise la cytolyse hépatique.
Le tableau de cholestase est pratiquement l’inverse
de celui des hépatites aiguës :
- Transaminases modérément élevées,
- GGT et PAL très élevées.
Le syndrome de cytolyse est commun à toute
hépatite quelle qu'en soit l'origine.
Les transaminases sont les seules enzymes utilisées
en pratique pour dépister une hépatite.
L'augmentation des TGP avant même le début de
l'ictère, a un rôle prépondérant dans le diagnostic de
l'hépatite aiguë.
Bien que l'importance de l'augmentation soit
proportionnelle à la gravité des lésions, elle n'a pas de
valeur pronostique.
Dans les hépatite virales le rapport TGO/TGP est faible :
comme la TGP (ALAT) est très élevée dans l’atteinte
hépatique.
Cas des hépatites virales :
1 - Tests biochimiques → non – spécifiques
- Transaminases (ALT, AST) : élevées (x 10
-> 100) ;
- Bilirubine : élevée ictère à
bilirubine conjuguée ou mixte ;
- Phosphatase Alcaline : légèrement élevée ;
- Gamma GT : légèrement élevée ;
- TP > 50%.
L’ensemble réalise le syndrome de cytolyse
hépatique.
2 - Tests sérologiques -> marqueurs spécifiques
3 – Génétique (recherche ADN viral) -> spécifique
(PCR).
Récapitulatif :
La demi-vie ASAT <<< demi-vie ALAT.
La valeur diagnostique du rapport ASAT/ALAT :
- Le foie contient plus d’ALAT que d’ASAT ;
Donc , la cytolyse prédomine sur l’ALAT.
Il y a deux exceptions importantes à cette règle :
- L’hépatite alcoolique : dans ce cas la
cytolyse prédomine en ASAT. Le rapport
ASAT/ALAT est > 1 ;
- La cirrhose : une élévation de GGT Permet
de confirmer l'élévation du rapport à ce
stade, la cytolyse peut devenir prédominante
en ASAT,
Dans une maladie musculaire (et non hépatique) :
notamment myocardique, le rapport s’inverse dans ce
cas aussi, il y a plus d’ASAT dans le muscle.
Quick Tip: aSat -> S for muScle | aLat -> L for Liver.
Il faut donc savoir évoquer la nature musculaire d’une
cytolyse lors des élévations modérées des
transaminases qui prédominent en ASAT. En cas de
difficulté diagnostique, il faut doser la CK (élevée
dans les maladies musculaires et normale dans les
atteintes hépatiques).
En pratique :
- Une élévation importante des transaminases
(supérieure à 10 fois la limite supérieure)
témoigne d’une cytolyse hépatique.
- Si le rapport ASAT/ALAT> 1, il faut évoquer
une hépatite alcoolique ou une cirrhose
- En cas d’élévation modérée des
transaminases, Il peut s’agir d’une élévation
des transaminases d’origine musculaire
(doser la CK).
3 types de profil d’atteinte biologique :
* Hépatite cytolytique : ALAT / PAL > 5 ;
* Hépatite cholestatique : ALAT / PAL < 2 ;
* Hépatite mixte : ALAT/PAL Entre [2-5].
Hépatites cytolytiques aigues:
Intoxication volontaire: paracétamol, tricycliques…
Intoxication iatrogène: barbituriques et
antiépileptiques, antituberculeux, macrolides,
quinolones, sulfamides, azolés, cordarone et anti-
arythmiques, bétabloqueurs, statines, IEC…
 - Marqueurs utilisés :
Fibrose hépatique : accumulation excessive d’une o Alpha 2 macroglobuline ;
matrice extracellulaire de composition altérée dans le o Haptoglobine ;
parenchyme. Les atteintes hépatiques chroniques o Apolipoprotéine A1 ;
évoluent vers une cirrhose, puis au carcinome o Bilirubine totale ;
hépatocellulaire. o Gamma GT ;
o ALAT.

En pratique clinique, le degré de fibrose est un

paramètre pronostique important., elle permet
d'estimer le risque de progression vers la cirrhose et
intervient dans la décision thérapeutique.

Trois options peuvent à faire pour confirmer une

fibrose hépatique :

- Biopsie hépatique (invasive, trop douloureuse

aussi) ;
- Utiliser un appareil de poche « fibroscan » :
peut apprécier le stade de la fibrose ;
- Tests biologiques : ACTITEST ou FIBROTEST.
L’ACTITEST – FIBROTEST sont des tests alternatives
non agressifs à la biopsie du foie :
- Le FIBROTEST = index de fibrose qui combine le
dosage dans le sang de 5 marqueurs indirects de
fibrose, avec un ajustement selon l'âge et le sexe.
ENZYMES TISSULAIRES
Ces enzymes sont retrouvées uniquement dans les
tissus (pas dans le sang).
NB :
▪ Anomalies des enzymes sériques ->
élévation (libérée dans le sang en cas de
lésion) ;
▪ Anomalie des enzymes tissulaires ->
diminution de leur taux (déficit)

- L’ ACTITEST = index d’activité (inflammation et Leurs anomalies sont surtout génétiques, causant un
nécrose) qui combine les mêmes marqueurs + déficit de production.
ALAT Exemple de la G6PD : cette enzyme est responsable
de la production du NADPH,H+.
Un déficit en G6PD -> ↓ NADPH -> ↓glutathion
réduit ->↑stress oxydant lysant l’hémoglobine ->
anémie hémolytique.

La bilirubine totale et la LDH augmentent à cause de

la destruction des GR. Les corps de Henz apparaissent
au microscope. L’ictère sur le plan est retrouvé aussi.
L’haptoglobine est diminuée (protéine inflammatoire)
consommée dans l’hémolyse.

NB : l’anémie n’est pas toujours accompagnée

d’ictère sauf en cas d’hémolyse.