EVALUACION DE LA TOXICIDAD GRAMOXONE SL (PARAQUET 2%) HERBICIDA, LORSBAN 4EC (INSECTICIDA), MANZATE 200WP (MANCOZEB 80%) FUNGICIDA, EN EXPLANTES

DE MELON Cucumis melo EN CONDICIONES IN VITRO E INVERNADERO. UNIVERSIDAD DE SANTANDER UDES FACULTAD DE CIENCIAS EXACTAS FISICAS Y NATURALES AREA DE CIENCIAS BASICAS (GENETICA) MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL Lizeth Paola Galindo Gonzlez, Wendy Dayana Garca Quijano, Diana Daz, Jhon Murillo

RESUMEN El siguiente proyecto se dividi en dos fases, una a nivel de invernadero y otra in-vitro. A nivel invernadero se utilizaron 100 plantas donde 10 de estas fueron el patrn y para cada uno de los agentes se tomaron 30 plantas distribuidas en tres grupos de 10 para cada una de las concentraciones; el riego de las plantas se hizo peridicamente y la adicin de los agentes se realizo tres veces una cada semana y en el momento de la aplicacin no se regaron para evitar el cambio de concentracin. En la fase in-vitro se realizaron varios pasos entre los cuales estn la desinfeccin de las semillas, preparacin del medio, escarificacin y siembra de las semillas y cotiledones; procesos que sern vistos a profundidad en el artculo. Para el poder obtener los resultados se disearon tablas para la toma de datos en el invernadero y el test de micro ncleos para ambas fases del proyecto. Los resultados fueron comparados teniendo en cuenta los promedios de cada una de las caractersticas comparadas con el patrn y estos a su vez con las caractersticas naturales de la planta obtenida de la bibliografa.

INTRODUCCION El meln (Cucumis melo) es una planta herbcea monoica de tallos rastreros. La planta posee tallos blandos y pilosos que crecen a ras de suelo. Sus hojas tienen peciolo acanalado y son palmadas, es decir, su aspecto es semejante al de una mano. Las flores son amarillas y cada una tiene un solo sexo. (2) El proyecto est basado en la aplicacin

de agentes qumicos como el gramoxone, lorsban y manzate. El gramoxone es una herbicida utilizado para el control de maleza en plantas de tallo bajo, puede actuar en presencia de varios factores meteorolgicos como lo son las lluvias o sequias, su mecanismo de accin se basa en la desecacin de las partes verdes de la planta directamente sobre los cloroplastos interrumpiendo la fotosntesis especficamente en el fotosistema I donde hay produccin de

electrones, el gramoxone se une a estos iones produciendo sper xidos los cuales atacan la membrana celular causando la muerte.(5) El lorsban es un insecticida utilizado para el control de plagas el cual acta por inhalacin, contacto o ingesta afectando la acetilcolina (neurotransmisor) provocando trastorno nervioso y mecnico lo que lleva a la muerte del insecto. Una caracterstica de este agente es que no es absorbido ni translocado en la planta. El manzate es un fungicida que acta por contacto o tambin sirve como proteccin, su mecanismo de accin se basa en el bloqueo del ciclo de Krebs en varias de sus etapas, adems de eso tiene la ventaja de ser multi-sitio lo que quiere decir que puede actuar sobre la sntesis de cidos nuclecos, respiracin micelial, permeabilidad de la membrana y reduccin de la esporulacin. Basados en el mecanismo de accin de los agentes a utilizar y en las caracterstica naturales de las plantas este proyecto se basa en los posibles daos que dichos puedan causar en la planta al ser expuesta en concentraciones diferentes basados en la concentraciones utilizadas comercialmente. Esto se realiza apoyado en el creciente inters por la obtencin de productos agrcolas libres de molculas producidas en control de plagas, el poder medir estadsticamente que cambios se pueden presentar en las plantas, si los cambios presentados son por accin mutagnica o no, las mutaciones pueden ser de tipo espontanea o inducida siendo esta ltima con ms frecuencia.(3) El uso de germicidas en la agricultura es una prctica muy generalizada que crea problemas ecolgicos y de salud pblica derivadas del incremento de la

contaminacin del ambiente y los alimentos, esto se debe a que muchos germicidas son absorbidos por la planta .por ende es importante realizar un anlisis genotoxicologico a travs de un test de micronucleos.(1) Los micronucleos son cromosomas enteros que son dejados durante la mitosis como resultado de quiebras cromosmicas. Son cuerpos citoplasmticos que contienen ADN los cuales son formados de lesiones en la etapa G0 y G1 y aparecen en aquellas clulas que han sufrido una divisin nuclear.1 El objetivo de este proyecto consiste en Determinar el efecto toxico de las sustancias gramoxone sl (parquet 2%) herbicida, Lorsban 4EC (insecticida), Manzate wp (mancozeb 80%) fungicida basndose en el desarrollo morfogentico de explantes cotiledonales del meln bajo condiciones in vitro e invernadero.

MATERIALES Y METODOS SIEMBRA EN INVERNADERO La siembra se realizo en una mezcla de tierra, abono y tamo de arroz en una proporcin 3.1.1 respectivamente la cual se empaco en 100 bolsas para siembra (20 cm alt. Por 10 cm anc. Aprox). Posterior a esto se procedi la siembra de las semillas en el abono a una profundidad aproximada de 2.5-3 cm. Se colocaron 2-3 semillas por bolsa. Luego de tener la semillas en las bolsas se adicionaron los agentes de la siguiente manera: La concentracin se est midiendo en miligramos sobre litros (mg / lt)

Loza, i sabel (2005)

Uso agrcola Mayor a 1.5 Mayor a 0.5 Mayor a 0.25

Germi cida Gramoxone Manzate Lorsban

Concentraci n1 1.5 5 1.25

Concentracin 2 0.5 0.5 0.5

Concentracin 3 0.25 0.25 0.25

TABLA # 1 CONCENTRACIONES APLICADAS EN SIEMBRA INVERNADERO La tabla nos indica las concentraciones a las que sern sometidos los explantes de meln. Se tomo un patrn con 10 plantas las cuales fueron regadas solo con agua. Cada germicida tuvo treinta explantes repartidos en 3 grupos cada uno de 10 explantes que fueron sometidos a 3 concentraciones diferentes .A cada tratamiento se le aplico 2ml semanales del germicida durante tres semanas sin olvidar el riego peridico de las plantas excepto el da de la aplicacin donde no se rego para evitar una distorsin en la concentracin de los agentes. La toma de datos se realizo a partir de la primera semana posterior a la siembra donde se planillo cada uno de los factores a estudiar estipulados en la planilla, y se sigui tomando los datos semanalmente dos veces manteniendo as tres datos en los resultados de las plantas con el fin de ver el crecimiento para identificar posibles cambios y en qu tiempo se presentaron. SIEMBRA EN invitro Para la siembra invitro se realizo: Desinfeccin de semillas En esta se colocaron 100 semillas en H2O jabonosa por 10 minutos con un agitador se lavaron 3 veces con agua destilada luego se aplico una solucin de hipoclorito al 2,5 % durante 15 minutos porteriormente se lavaron con agua destilada 3 veces y se pusieron en cajas de Petri debidamente esterilizadas con gasa y agua destilada durante 24 horas a una temperatura de 28 c en oscuridad (cmara de incubacin) Preparacin del medio Se utilizo un erlenmeyer de 1000 ml se agregaron las soluciones salinas (A, B, C, D, E, F, G), se pesaron en una balanza analtica 30 gr de sacarosa, 100 ml de mioinocitol. Las vitaminas fueron aplicadas directamente al medio (Tiamina, pirodoxina, acido nicotnico y glicina). Se adiciono el AG3 Se tomaron nueve erlenmeyer de 250 ml, tres erlenmeyer por cada tratamiento a los cuales se les adiciono las debidas concentraciones de dichos germicidas, ya aplicado el germicida se procedi a agregar 2 gr de agar. Preparados los medios estos se sometieron a calentamiento hasta su ebullicin. Para finalizar se procedi a servir los diferentes medios para la siembra. Escarificacin y siembra de semillas Se removieron en cmara de flujo laminar con pinzas estriles, desinfectadas en hipoclorito al 2% y lavadas 3 veces con agua destilada. Se incubaron en fotoperiodos de 16 horas

luz y oscuridad hasta su germinacin de 3 a 4 das. Siembra Ya escarificadas las semillas se procedi a la siembra la cual se llevo a cabo en la cmara de flujo laminar sembrando por cada tratamiento aproximadamente dos semillas por tarro; esperando sus posibles resultados. Metodologa microncleos Se escogieron las races ms grandes estas se colocaron en un vaso de precipitado, se realizo un corte de 2mm del meristemo apical de la raz se fijaron en etanol mas acido actico en una proporcin 3:1. Para la tincin de del meristemo apical de la raz se pusieron en etanol al 70% (v/v) por 15 minutos, esto para deshidratar las clulas de la raz. Posterior a esto se agrego HCl 5M por 30m a los meristemos aplicales de raz esto con la intencin de eliminar la Uso agrcola Mayor a 0.08 Mayor a 0.08 Mayor a 0.08 Germicida

pared celular y asi facilitar la entrada del colorante en este caso acetorceina. Para eliminar el exceso de HCl se realizo un lavado con H2O destilada. Ya eliminado el exceso de HCl se realizo la tincin con acetorceina por 40 minutos pasados los 40 minutos se aplico acido actico al 45% para eliminar el exceso de colorante. Se utilizo un colorante tipo bsico ya que tiene ms afinidad por las estructuras celulares. Ya teniendo sometidos los meristemos apicales de raz a estos procedimientos se procedieron a colocarlos sobre un portaobjetos y se realizo un squash para obtener las consistencias requeridas para la observacin de microncleos.

Concentracin 1 (Mg/ lt) 0.25 0.25 0.25

Concentracin 2 (Mg/ lt) 0.125 0.125 0.125

Concentracin 3 (Mg/ lt) 0.08 0.08 0.08

Gramoxone Manzate Lorsban

TABLA # 2 CONCENTRACIONES APLICADAS EN SIEMBRA INVITRO

RESULTADOS En resultados de tipo estadstico podemos observar las variaciones que se encuentran entre las diferentes concentraciones realizadas y sobre los diferentes agentes a las que fueron sometidas las plantas TRATAMIENTO ESTADISTICO DE LOS DATOS ESTUDIADOS A NIVEL INVITRO Para este anlisis estadstico se tuvo en cuenta los siguientes parmetros como son en el caso de la raz se tuvo en cuenta que el 1 tuvo presencia de raz y en el numero 2 no hay presencia de raz. Y en el caso de el color se tuvo en cuenta que el numero 1 significa que el color es beige y el numero 2 significa que el color es verde plido. Este anlisis se realizo a partir de las 48 horas estudiadas. GRAMOXONE HERBICIDA
Concentracin 1(0,25) raz A B color A B 1 2 2 1 1 2 2 2 1 1 3 2 2 1 1 4 2 2 1 1 5 2 2 1 1

Tabla # 3

Grafica # 1 Variaciones entre la presencia de la raz y el color de la planta.

CONCENTRACIN 2(0,125) RAIZ A B COLOR A B

1 1 1 1 1

2 1 1 1 1

3 2 2 1 1

4 1 2 1 1

5 2 2 1 1

Tabla # 4

Grafica # 2
CONCENTRACION 3(0,08) RAIZ A B COLOR A B 1 1 1 1 1 2 2 2 1 1 3 2 2 1 1 4 2 1 1 1 5 2 1 1 1

Tabla # 5

Grafica # 3

CONTRO L RAIZ COLOR Tabla # 6 A B A B

1 2 2 1 1

2 2 2 1 2

3 2 1 1 1

4 3 2 2 1

5 1 1 1 1

Grafica # 4 Comparacin entre las 5 plantas teniendo en cuenta raz y color de la planta Para el siguiente anlisis estadstico se tuvo en cuenta los siguientes parmetros: los valores en nmeros en cuanto el color significan: 1:verde; 2:verde palido;3:verde oscuro. Esto se realizo a las 72 horas del estudio realizado. CONCENTRAC ION 1(0,25) ALTURA( COLOR cm) P # HOJAS A B A B A B 1 0 0 2 1 0 0 2 0 0 0 0 0 0 3 0 0 0 0 0 0 4 0 0 0 0 0 0 5 0 0 0 0 0 0 Tabla # 7 Comparacin de las 5 plantas en la concentracin 1 teniendo en cuenta altura, color y numero de hojas

Grafica # 5 CONCENTRAC ION 2(0,125) ALTURA( cm) A 0 0 0 NO 0 COLOR P A 1 1 1 NO 1 # HOJAS A 0 0 0 NO 0

1 2 3 4 5 Tabla # 8

B 0 0 0 NO 0

B 1 1 1 NO 1

B 0 0 0 NO 0

Grafica # 6

CONCENTRAC ION 3(0,08) ALTURA( cm) A 4 0 0 0 0 COLOR P A 3 1 1 1 1 # HOJAS A 2 0 0 0 0

1 2 3 4 5 Tabla # 9

B 4 0 0 2 0

B 3 1 1 3 1

B 2 0 0 2 0

Grafica # 7

CONTRO L ALTURA( cm) A 4 3 4 4 2 COLOR P A 3 3 3 3 3 # HOJAS A 2 2 2 2 2

1 2 3 4 5 Tabla # 10

B 4 1 1 3 0

B 3 3 3 3 1

B 2 2 2 2 0

Grafica # 8

LORSBAN INSECTICIDA Para este anlisis estadstico se tuvo en cuenta los siguientes parmetros como son en el caso de la raz se tuvo en cuenta que el 1 tuvo presencia de raz y en el numero 2 no hay presencia de raz. Y en el caso de el color se tuvo en cuenta que el numero 1 significa que el color es beige y el numero 2 significa que el color es verde plido. Este anlisis se realizo a partir de las 48 horas estudiadas.

CONCENTRACION 1(0,25) RAIZ A B COLOR A B

1 2 1 1 2

2 1 1 2 2

3 1 1 2 2

4 1 1 2 2

5 1 1 2 2

Tabla # 11

Grafica # 9

CONCENTRACION 2 RAIZ COLOR A B A B

1 1 1 1 0

2 1 1 2 2

3 1 2 2 1

4 1 1 2 2

5 1 1 2 2

Tabla # 12

Grafica # 10

CONCENTRACION 3 RAIZ COLOR A B A B

1 1 1 2 2

2 1 2 2 2

3 1 2 1 2

4 1 1 2 2

5 1 1 2 2

Tabla # 13

Grafica # 11 control RAIZ COLOR Tabla # 14 A B A B 1 1 1 2 2 2 1 1 2 2 3 1 1 2 2 4 1 1 2 2 5 1 1 2 2

Grafica # 12 Para el siguiente anlisis estadstico se tuvo en cuenta los siguientes parmetros: los valores en nmeros en cuanto el color significan: 1:verde; 2:verde palido;3:verde oscuro. Este se realizo a las 72 horas del la siembra realizada.

CONCENTRAC ION 1 ALTURA( cm) A 3 4 2 3 4 COLOR P A 3 3 3 3 3 # HOJAS A 2 2 2 2 2

1 2 3 4 5 Tabla # 15

B no 2 2 2 3

B no 3 3 3 3

B no 2 2 2 2

Grafica # 13 CONCENTRAC ION 2 ALTURA( cm) A no 3 3 1 3 COLOR P A no 3 3 3 3 # HOJAS A no 2 2 2 2

1 2 3 4 5 Tabla # 16

B 2 1 1 3 3

B 3 3 3 3 3

B 2 2 2 2 2

Grafica # 14

CONCENTRAC ION 3 ALTURA( cm) A 4 5 0 2 5 COLOR P A 3 3 0 3 3 # HOJAS A 2 2 0 2 2

1 2 3 4 5 Tabla # 17

B 1 0 1 5 5

B 3 3 3 3 3

B 2 2 2 2 2

Grafica # 15

CONTRO L ALTURA( cm) A 4 1 4 2 4 COLOR P A 3 2 3 3 3 # HOJAS A 2 2 2 2 2

1 2 3 4 5 Tabla # 18

B 5 1 2 3 4

B 3 2 3 3 3

B 2 2 2 2 2

Grafica # 16 MANZATE FUNGICIDA Para este anlisis estadstico se tuvo en cuenta los siguientes parmetros como son en el caso de la raz se tuvo en cuenta que el 1 tuvo presencia de raz y en el numero 2 no hay presencia de raz. Y en el caso de el color se tuvo en cuenta que el numero 1 significa que el color es beige y el numero 2 significa que el color es verde plido. Este anlisis se realizo a partir de las 48 horas estudiadas.

CONCENTRACION 1 RAIZ A B COLOR A B

1 1 1 1 1

2 1 1 2 2

3 1 1 2 2

4 1 1 1 1

5 1 1 1 1

Tabla # 19

Grafica # 17
CONCENTRACION 2 RAIZ A B COLOR A B 1 1 1 2 2 2 1 1 2 2 3 1 1 2 2 4 1 2 2 2 5 1 1 2 2

Tabla # 20

Grafica #18

CONCENTRACION 3 RAIZ COLOR A B A B

1 1 1 2 2

2 1 1 2 2

3 1 1 2 2

4 1 1 2 2

5 1 1 2 2

Tabla # 21

Grafica # 19 CONTRO L RAIZ COLOR Tabla # 22 A B A B 1 2 1 2 2 2 1 1 2 2 3 1 1 2 2 4 1 1 2 2 5 1 1 2

Grafica # 20

Para el siguiente anlisis estadstico se tuvo en cuenta los siguientes parmetros: los valores en nmeros en cuanto el color significan: 1:verde; 2:verde palido;3:verde oscuro. Este se realizo a las 72 horas del la siembra realizada. CONCENTRAC ION 1 ALTURA( cm) A 1 2 1 1 1 COLOR P A 3 3 n 3 3 # HOJAS A 2 2 2 1 2

1 2 3 4 5 Tabla # 23

B 1 1 1 1 2

B 3 3 n 3 3

B 2 2 2 1 2

Grafica # 21 CONCENTRAC ION 2 ALTURA( cm) A 2 1 2 3 2 COLOR P A 3 3 3 3 3 # HOJAS A 2 2 2 2 2

1 2 3 4 5 Tabla # 24

B 1 2 2 2 1

B 3 3 3 3 3

B 2 2 2 2 2

Grafica # 22 CONCENTRAC ION 3 ALTURA( cm) A 4 1 1 2 2 COLOR P A 3 3 3 3 3 # HOJAS A 2 2 2 2 2

1 2 3 4 5 Tabla # 25

B 2 1 0 2 2

B 3 3 0 3 3

B 2 2 0 2 2

Grafica # 26

CONTRO L ALTURA A 1 3 3 1 3 COLOR P A 3 3 3 3 3 # HOJAS A 2 2 2 2 2

1 2 3 4 5 Tabla # 26

B 1 3 3 1 2

B 3 3 3 3 3

B 2 2 2 2 2

Grafica # 27 Con relacin al control el gramaxone inhibi el crecimiento de la planta cummis melo sin olvidar que la concentracin 3(0,0,8) mas baja la planta tuvo crecimiento. En las observaciones a estas plantas se observa que las plantas presentan malformaciones en las hojas y el color de estas era verde palido con algunas coloraciones amarillas. En el lorban se observo que comparndolo con el control la planta fenotpicamente presenta un crecimiento similar. En la concentracin 1 en este caso la mas alta (0,25) la planta se vio un poco afectada en el control de sus hojas ya que sus hojas presentaban un color palido en comparacin al control y a las dems concentraciones. En manzate se observo en comparacin con el control que no presentaba buen crecimiento de sus races secundarias, se observo tallos relativamente cortos el color de sus hojas fue de un verde oscuro, sus cotiledones tardaron demasiado tiempo en abrirse

ANALISIS ESTADISTICO A NIVEL INVERNADERO

AGENTE VARIABLE TALLO GROSOR COLOR CONSISTENCIA ALTURA FORMA COLOR NUMERO FORMA OVALADA TRIANGULAR DIVISIONES OVALADA TRIANGULAR 1.5 mg/L 0.35 cm Verde plido Blanda 4.05 cm Cilndrica Verde y caf 2.5 2 0.5 no+ si GRAMOXONE 0.5mg/L 0.37 cm Verde plido Blanda 4.03 cm Cilndrica Verde y caf 2.3 2 0.3 no+ si 0.25mg/L 0.34 cm Verde plido Blanda 3.9 cm Cilndrica Verde y caf 2.4 2 0.4 no+ si

HOJA

Tabla # 27 Promedio de las variables en el tratamiento de gramoxone presentado en la primera toma de datos ocho das posteriores a la siembra con una sola aplicacin del agente.
AGENTE VARIABLE TALLO GROSOR COLOR CONSISTENCIA ALTURA FORMA HOJA FORMA DIVISIONES COLOR NUMERO OVALADA TRIANGULAR OVALADA TRIANGULAR 1.25mg/L 0.38 cm Verde palido Blanda 4.04 cm Cilindrica Verde 2 2 crecimiento no+ ? LORSBAN 0.5mg/L 0.36 cm Verde palido Blanda 4.4 cm Cilindrica Verde 2 2 crecimiento no+ ? 0.25mg/L 0.36 cm Verde palido Blanda 4.01 cm Cilindrica Verde 2+ 2 crecimiento no+ ?

Tabla # 28 Promedio de las variables en el tratamiento de lorsban presentado en la primera toma de datos ocho das posteriores a la siembra con una sola aplicacin del agente.

AGENTE VARIABLE TALLO GROSOR COLOR CONSISTENCIA ALTURA FORMA HOJA FORMA DIVISIONES COLOR NUMERO OVALADA TRIANGULAR OVALADA TRIANGULAR 5mg/L 0.36 cm Verde palido Blanda 4.2 cm Cilindrica Verde 2.3 2 0.3 no+ si

MANZATE 0.5mg/L 0.38 cm Verde palido Blanda 4.1 cm Cilindrica Verde 2.1 2 0.1 no+ si 0.25mg/L 0.41 cm Verde palido Blanda 4.9 cm Cilindrica Verde 2+ 2 crecimiento no+ si

Tabla # 29 Promedio de las variables en el tratamiento de manzate presentado en la primera toma de datos ocho das posteriores a la siembra con una sola aplicacin del agente.
AGENTE VARIABLE TALLO GROSOR COLOR CONSISTENCIA ALTURA FORMA COLOR NUMERO FORMA DIVISIONES OVALADA TRIANGULAR OVALADA TRIANGULAR PATRON 0.32 cm Verde palido Blanda 4.32 cm Cilindrica verde 2.7 2 0.7 no+ si

HOJA

Tabla # 30 Promedio de las variables en el patrn presentado en la primera toma de datos ocho das posteriores a la siembra con una sola aplicacin del agente.

Tabla # 31 Promedio de las variables en el patrn presentado en la segunda toma de datos quince das posteriores a la siembra.
AGENTE VARIABLE TALLO GROSOR COLOR CONSISTENCIA ALTURA FORMA HOJA COLOR NUMERO FORMA OVALADA TRIANGULAR DIVISIONES OVALADA TRIANGULAR 1.5 mg/L 0.4 cm Verde palido Blanda 4.6 cm Cilindrica Verde y caf 2.5 2 0.5 no+ si GRAMOXONE 0.5mg/L 0.25mg/L 0.4 cm 0.4 cm Verde Verde palido palido Blanda Blanda 4.5 cm 4.4 cm Cilindrica Cilindrica Verde y caf 2.3 2 0.3 no+ si Verde y caf 2.4 2 0.4 no+ si

Tabla # 32 Promedio de las variables en el tratamiento de gramoxone presentado en la segunda toma de datos quince das posteriores a la siembra con dos aplicaciones del agente.
AGENTE VARIABLE TALLO GROSOR COLOR CONSISTENCIA ALTURA FORMA COLOR NUMERO FORMA OVALADA TRIANGULAR DIVISIONES OVALADA TRIANGULAR 1.25mg/L 0.45 Verde palido Blanda 4.6 cm Cilindrica Verde 3 2 1 no+ si LORSBAN 0.5mg/L 0.44 cm Verde palido Blanda 5.3 cm Cilindrica Verde 3 2 1 no+ si 0.25mg/L 0.43 cm Verde palido Blanda 4.6 cm Cilindrica Verde 3 2 1 no+ si

HOJA

Tabla # 33 Promedio de las variables en el tratamiento de lorsban presentado en la segunda toma de datos quince das posteriores a la siembra con dos aplicaciones del agente.
AGENTE VARIABLE TALLO GROSOR COLOR CONSISTENCIA ALTURA FORMA HOJA FORMA COLOR NUMERO OVALADA TRIANGULAR 5mg/L 0.45 cm Verde palido Blanda 4.6 Cilindrica Verde 2.3 2 0.3 MANZATE 0.5mg/L 0.43 cm Verde palido Blanda 4.5 Cilindrica Verde 2.1 2 0.1 0.25mg/L 0.48 cm Verde palido Blanda 5.1 Cilindrica Verde 3 2 1

DIVISIONES

OVALADA TRIANGULAR

no+ si

no+ si

no+ si

Tabla # 34 Promedio de las variables en el tratamiento de manzate presentado en la segunda toma de datos quince das posteriores a la siembra con dos aplicaciones del agente.

En la anteriores tablas, en general no se presentaros cambios de gran amplitud entre cada uno de los tratamientos y el patrn, si observamos (tabla 1,2,3 y 4) el grosor de tallo tan solo en la concentracin 0.25 mg/L de manzate se observo una considerable diferencia, otra variable que cambio fue la del color de las hojas donde en el patrn y en los tratamientos con manzate y lorsban se obtuvo un color verde uniforme mientras que en el tratamiento con gramoxone el verde normal de la planta se encontr alterado por discos de color caf. Las hojas de cada planta cambio pero no sus caractersticas ya que aquellas plantas que presentaron dos hojas tenan la misma morfologa que el patrn al igual que las plantas que presentaron tres y cuatro hojas, por lo general las dos primera hojas que nace son ovaladas con divisiones poco visibles por lo que en todas las tablas se denominaron no+. Las variables como color del tallo, forma del tallo y consistencia del tallo no cambio en ninguno de los nueve tratamientos. Comparando cada tabla de cada uno de los tratamiento con la primera toma y segunda toma se observa un crecimiento equilibrado en cada uno de los procedimientos por lo que se puede deducir que entre la primera y segunda toma de datos el agente no causo

ningn tipo de inconvenientes en esta fase de la planta. La presencia de micronucleos los tres agentes en sus diferentes concentraciones me indica el dao que estos agentes causaron en las `plantas de meln, los micronucleos observados me indican que hubo un cambio en el material gentico de la planta con posibilidades de alteracin de su carga gentica 2n dependiendo del tipo de dao que cada agente hubiera causado. Hasta el momento y con los resultados morfolgicos obtenidos y expresados en cada tabla no se alcanza a determinar un dao visible por lo que la presencia de micronucleos se pueden presentar en la flor o en el fruto afectando cualquier caracterstica de estas dos variables al momento de su germinacin. Para la segunda toma de datos las variables se comportaron de la misma manera que en la primera en las cuales no se expreso algn dao fenotpico causado por la presencia de micronucleos. Aunque el promedio en la presencia de hojas aumento debido al mayor tiempo de siembra. Cabe resaltar que tanto en la primera como segunda toma de datos en los tratamientos con gramoxone se presento una inhibicin de crecimiento muy minina con respecto al patrn.

REGISTRO FOTOGRAFICO

Foto # 1 tratamientos a nivel invitro

Foto # 2 comparacin de manzate fungicifda en las planta a nivel invernadero

Foto # 3 comparacion de lorsban insecticida en las plantas a nivel invernadero.

Foto # 4 comparacin de gramoxone herbicida en las plantas a nivel inveradero.

Foto # 5 tejido vegetal de la planta gramoxone 1,5

necrosado sometida a una concentracin de

Foto # 6 hojas con partes necrosadas a partir de una concentracin de gramoxone 1,5

Foto # 7 identificacin de micronucleos.

Foto # 8

Foto # 9

DISCUSION La inhibicin del crecimiento presenta en las plantas sometidas al tratamiento con gramoxone se debe a la accin que este ejerce sobre los cloroplastos donde se encuentran ubicados los sistemas fotosintticos los cuales son los encargados de la produccin de azucares necesarios para el metabolismo de la planta y su obtencin de energa al interponerse en estas rutas metablicas bloquea el buen funcionamiento de la planta provocando su desecacin o como en este caso inhibiendo su crecimiento.2 Hasta esta fase de crecimiento no se observaron cambios fenotpicos causados por la accin del lorsban aunque hubo presencia de micronucleos lo que da a entender es que dicho agente si causo un dao en el material gentico pero dicho material afectado no codifica para ninguna de las caractersticas de la planta estudiada en esta fase del crecimiento ( 15 das) . Entonces la presencia de estos micronucleos se puede presentar ms adelante en la formacin de sus hojas, fruto o semilla; pudiendo cambiar su morfologa, su color o su sabor en el caso del fruto.(4) Las plantas expuestas al agente qumico manzate presentaron poca desarrollo de sus raices secundarias debido a que produce alteraciones durante la divisin celular y el material gentico dando esto lugar a la presencia de micronucleos en este tratamiento. Durante la divisin celular el material gentico ADN, contenido en el nucleo celular se replica y se divide equitativamente dando lugar a dos clulas hijas idnticas este proceso puede producirse de manera errnea debido a errores durante la replicacin y posterior divisin del ADN, a rupturas cromosmicas y el efecto de sustancias genotoxicas produciendo perdidas cromosmicas y haciendo que el reparto del material gentico no sea equitativo. Cuando esto ocurre, el material gentico que se desprende y que, por tanto, queda excluido y no se incorpora correctamente al nucleo de la celula hija origina un nuevo nucleo de menor tamao denominado micronucleos. El material gentico desprendido puede derivar de cromosomas enteros o de fragmentos cromosmicos acntricos que quedan excluidos de los nucleos de las nuevas clulas durante la anafase mittica. La presencia de las mismas variables tales como forma, consistencia y color del tallo en todos los tratamientos me indican que los agentes no perjudicaron el material gentico que codifica para la produccin de dichas estructuras por lo cual se vieron igual en todos los tratamientos. El cambio en el grosor y en la altura del mismo tubo una pequea variacin entre un tratamiento y otro con respecto al patrn, debido a que esta variacin fue muy minina y cabe entre el promedio observado se puede decir que dichos cambio se deben al crecimiento normal de la naturaleza y no por el uso de los agentes. En cuanto al resultado obtenido en las hojas la forma de ellas fue siempre constante, siempre las dos primeras hojas presentaban una forma ovalada con divisiones poco visibles, la presencia de una tercera o cuarta hoja se debe al tiempo de crecimiento de la planta donde estas dos ltimas hojas presentaron una morfologa triangular y con divisiones mucho ms marcadas que en la ovaladas, lo anterior fue una constante en todos los tratamientos. En los tratamientos con gramoxone (tablas 1 y 6) se presento una alteracin en la uniformidad del color por la aparicin de ncleos color caf, aunque esto es un cambio morfolgico muy evidente se presento debido a
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una falla en el sistema de riego y aplicacin del agente debido a que se aplico directamente sobre la planta factor que causa dao en las hojas de la misma. Los factores ambientales pudieron haber influido en el crecimiento de la planta debido a que este tipo vegetal tiene una temperatura ptima de 30c temperatura la cual no se suministro por las condiciones ambientales. La presencia de micronucleos en todos los tratamientos me indica que el mecanismo de accin por el que comnmente se conocen estos agentes pudo haber cambiado para poder ingresar a la planta y causar el dao de su material gentico. El hecho de haber encontrado dichos micronucleos en las races de las plantas y no haber encontrado relacin con estos debido a los datos morfolgicos obtenidos en los cuales no se presentaron alteraciones significativas con respecto al patrn me lleva a pensar que al material gentico alterado e incluido en los micronucleos no codifican para ninguna de las caractersticas observados por lo que se pueden expresar ms adelante el estructuras como las flores o frutos del meln. Una comparacin muy interesante entre los tratamiento con gramoxone en invernadero y en in-vitro fue la inhibicin en el crecimiento de la planta a nivel in-vitro, esto se pudo haber causado por el tiempo de exposicin de la planta frente al agente, es decir, a nivel invernadero la planta tan solo fue sometida a una aplicacin a la hora de la siembra y otra ocho das posteriores a esta, adems el riego de las plantas pudo haber lavado parte del agente impidiendo su accin sobre la planta de meln, en cambio a nivel in-vitro la planta estuvo expuesta al agente durante todo el proceso por lo que su accin pudo ser ms eficaz expresndose en la inhibicin del crecimiento de la planta.

CONCLUSIONES La presencia de micronucleos a nivel invitro e invernadero debido a la perdida de material gentico puede deberse a un efecto residual de el agente qumico. En comparacin con las muestras en vivero e invitro se observo mayor cantidad de micronucleos porque en invitro la semilla se encontraba en contacto directo con el agente qumico; mientras que en invernadero se realiza el riego del agente qumico esparce por el suelo. Es recomendable continuar con los estudios para establecer si la presencia de micronucleos en relacin con la genotoxicidad produce daos o cambios fisicoqumicos en la planta y en el consumo humano del fruto. Los resultados muestra que la planta de meln expuestos a los 3 agentes qumicos a nivel invitro e invernadero presenta micronucleos.

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4. FERNANDA VIDIGAL DUARTE SOUZA, BEGOA GARCIA SOGO, ANTONIO DA SILVA SOUZA, AMPARO PEREZ SAN JUAN, VICENTE MORENO. Laboratorio de biotecnologa vegetal, C. P. 007; 44380000, Universidad politcnica de valencia, valencia Espaa. 2006 5. .Muoz de Malajovich, M. A. (2006) Biotecnologa. Editorial Universidad Nacional de Quilmes. 6. 7. 8. 9. Barcel et al. (1980) Fisiologa vegetal. Editorial Pirmide Barthelemy R, Dawson J, Lee A (1977) Tcnicas para el laboratorio de biologa. Compaa Editorial Continental Devlin, R. (1976) Fisiologa vegetal. Editorial Omega. Pierik, R.L.M. (1987) In vitro culture of higher plants. Editorial Martinus Nijhoff Publishers

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