TP 1 chap 13 TS spécifique

LA REACTION ANTIGENE ANTICORPS ET DEPISTAGE

L’organisme réagit à l’introduction d’un élément étranger appelé antigène par la production spécifique de cet
antigène.

On se propose ici de mettre en évidence la formation des complexes immuns

Mise en situation et recherche à mener

Certains humains sont allergiques à une protéine : la β lactoglobuline bovine, présente en particulier dans le
lait. Des industries agroalimentaires proposent la commercialisation de nouveaux laits dits hypoallergéniques
(notés A, B et C).
Compte tenu de la gravité de certaines réactions allergiques, on cherche à vérifier si les laits proposés peuvent
être consommés sans risques par un individu allergique à la β lactoglobuline bovine.

Ressources

Document 1 : principe du test d’ouchterlony :

Le but du test d’immunodiffusion sur gel d’Ouchterlony est la mise en évidence de la liaison antigène-
anticorps et de sa spécificité.
Pour cela le test réel utilise du sérum d’un petit Mammifère (un lapin par exemple) préalablement immunisé
par injection d’un antigène connu (en général de l’albumine sérique de bœuf BSA) et diverses solutions
d’antigènes dont celui injecté.
La présence dans le sérum d’anticorps dirigés contre l’antigène injecté préalablement et leur spécificité sont
testés par la méthode dite de double diffusion ou d’Ouchterlony qui repose sur deux principes :
- la diffusion dans le gel des anticorps du sérum à partir d’un puits central, où est effectué le dépôt, et celle
des divers antigènes à partir de puits périphériques, permettant ainsi la rencontre antigènesanticorps.
- la reconnaissance et fixation des anticorps sur les antigènes vis-à-vis desquels ils possèdent une spécificité.
Cette étape se traduisant par la formation de complexes immuns (complexes antigènes-anticorps) trop gros
pour poursuivre leur diffusions et visibles à l’œil nu sous forme d’un arc blanchâtre.

Document 2 : Matériel disponible :

- Solution de lait A
- Solution de lait B
- Solution de lait C
- Solution de β lactoglobuline bovine pure
- Solution d’anticorps anti- β lactoglobuline
- Eau distillée
- matériel courant de laboratoire (verrerie, instruments, matériel d’observation, de mesures, informatique
etc.)

Étape 1 : Concevoir une stratégie pour résoudre une situation problème (durée maximale
: 10 minutes)

Proposer une démarche d’investigation permettant de vérifier si ces laits sont consommables par un individu
allergique à la β lactoglobuline bovine.

Appeler l’examinateur pour vérifier votre proposition et obtenir la suite du sujet.

Votre proposition peut s’appuyer sur un document écrit (utiliser les feuilles de brouillon mises à votre
disposition) et/ou être faite à l’oral.
Étape 2 : Mettre en œuvre un protocole de résolution pour obtenir des résultats exploitables

Mettre en œuvre le protocole fourni, afin de vérifier si les laits sont consommables par un individu allergique
à la βlactoglobuline bovine

Appeler l’examinateur pour vérifier les résultats et éventuellement obtenir une aide.

Réalisation des puits dans le gel

- Poser la boîte (couvercle vers le haut) sur la mire qui sert de modèle et l’ouvrir.
- Tout en pinçant fermement la poire de l’emporte-pièce percer la gélose jusqu’au fond de la boîte au niveau d’un repère de la mire
puis relâcher la poire et retirer l’emporte-pièce. Le disque de gel formé reste dans l’emporte pièce et un puits apparaît dans la boîte.
- En suivant la même méthode réaliser les 5 autres puits.

Remarque : Si le disque de gel ne s’enlève pas lorsque l’emporte-pièce est retiré, il peut être facilement éliminé à l’aide d’un cure-
dent ou d’une épingle.

Attention : il est important de ne pas fendre le gel lors de la réalisation des puits et de respecter le modèle pour leur disposition.
Une augmentation de la distance entre le puits central et les puits périphériques nuit à la lisibilité des résultats.
Réfléchir à l’emplacement des différents produits (sérum et anticorps) puis marquer sur la
boîte de Pétri leur disposition, permettant de révéler la réaction de l’anticorps étudié avec les différents antigènes proposés
(marquage sous la boîte ou sur la tranche, surtout pas sur le gel)

Dépôts des produits

- Avant tout dépôt marquer au feutre sous la boîte et au niveau de chaque puits la lettre correspondant au réactif déposé afin de se
souvenir de la disposition des produits.
- Déposer dans le puits central une goutte de la solution - Solution d’anticorps anti- β lactoglobuline

- Déposer dans les puits périphériques selon le même mode opératoire une goutte des autres solutions

Obtention des résultats

Laisser reposer les boîtes à plat avec leur couvercle pendant

40 minutes environ. Les puits vont progressivement
s’assécher, signe que la diffusion a lieu, et les résultats vont
apparaître. Les résultats resteront visibles quelques jours si
on évite le dessèchement du gel en stockant les boîtes dans
une enceinte humide au frais.

Etape 3 : Présenter des résultats pour les communiquer

Présenter, sous la forme de votre choix, les résultats obtenus.

Appeler l’examinateur pour vérification de votre production.

Etape 4 : Exploiter les résultats obtenus pour répondre au problème

Exploiter les résultats pour déterminer quel(s) lait(s) sont consommables par un individu allergique à la
βlactoglobuline bovine. Justifier votre réponse.