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Biologia Molecular
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Sumrio
Prefcio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Xi Prlogo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .1 1 O Que Uma Clula? . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 15 Uma clula uma bolsinha de vida . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Todo organismo vivo feito de clulas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . As clulas esto vivas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Uma clula feita de vrias molculas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Eu nunca vi uma clula! . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . A clula mais longa em nossos corpos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Vamos olhar dentro de uma clula . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Vamos penetrar a membrana celular . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Organelas celulares . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . O ncleo: um pequeno crebro . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . O que existe no ncleo? . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Organismos unicelulares e pluricelulares . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Organismos procariticos e organismos eucariticos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 16 16 20 23 24 24 25 27 31 35 37 48 51
2 Protenas e DNA: Decifrando o Cdigo Gentico . . . . . . . . . . . . . . . . . . 53 As protenas guiam a atividade celular . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . O que atividade celular? . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Exploso de fora enzimtica! . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Protenas atuando como enzimas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . O papel das protenas na diviso celular . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Protenas e a contrao muscular . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Resumo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Protenas so feitas de aminocidos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Substituir um aminocido por outro uma grande coisa! . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Genes: o projeto de construo das protenas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Como as clulas sabem quais protenas criar? . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Um plano de construo garante que o arranjo de aminocidos esteja correto . . . . . . . . . . Nossos genes esto escritos em cdigo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . DNA e nucleotdeos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . O DNA tem uma estrutura de dupla hlice . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . O DNA composto por nucleotdeos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Os nucleotdeos so os caracteres do cdigo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Genoma: uma biblioteca de genes . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 59 59 61 69 70 71 72 73 75 77 77 78 79 81 81 82 84 88
3 Duplicao de DNA e Diviso Celular . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 91 As clulas se multiplicam por meio de divises . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 92 Reproduo: o evento mais importante da vida! . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 92 Diviso celular: a forma mais simples de reproduo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 97 A diviso celular ocorre nos corpos dos organismos pluricelulares . . . . . . . . . . . . . . . . . . 100 O DNA duplicado antes da diviso celular . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 105 O que acontece com os genes? . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 105 O DNA tem uma estrutura dupla . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 106 O papel da DNA polimerase na duplicao do DNA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 108 O que um cromossomo? . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 122 O corpo humano contm 24 tipos de cromossomos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 123 Cromossomos so visveis apenas no momento da diviso celular . . . . . . . . . . . . . . . . . 123 Diviso celular dinmica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 124 Mitose . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 124 Citocinese . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 127 O que um ciclo celular? . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 128 O que causa o cncer? . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 130 4 Como Feita Uma Protena? . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 131 Um gene torna-se til aps a transcrio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Como uma protena feita . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . O que transcrio? . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Cromatina e transcrio . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Tente puxar o fio do telefone . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . O mRNA sintetizado usando-se uma das fitas de DNA como modelo . . . . . . . . . . . . . . A RNA polimerase copia as informaes genticas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Clivagem do mRNA transcrito . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Embaralhamento de xons . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . O que o RNA? . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Caracteres do RNA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Dna e RNA usam acares diferentes . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . O RNA flexvel . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Existem vrios tipos de RNA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Rna transportador . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Ribossomo: o mecanismo de sntese de protena . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Mecnica do cdigo gentico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . O tRNA transporta aminocidos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . A protena est completa . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 132 132 138 144 144 146 148 153 155 156 156 158 160 161 165 165 167 170 174
viii sumrio
5 Tecnologia e Pesquisa Em Gentica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 175 O que tecnologia de recombinao gentica? . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Manipulao do DNA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Melhorias na espcie e teconologia de recombinao gentica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Um exemplo de tecnologia de recombinao gentica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Mtodos de deteco e isolamento de DNA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Animais transgnicos (camundongo-nocaute) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Medicina personalizada e terapia gnica: a gentica o futuro da preveno de doenas? . . . Terapia gnica . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . O renascimento do RNA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Interferncia de RNA: uso do RNA para alterar a expresso gentica . . . . . . . . . . . . . . . . O RNA pode curar doenas? . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Como funciona exatamente a PCR? . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Como produzir animais clonados . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Evoluo molecular: como os genes podem contar uma histria . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . O futuro da biologia molecular . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 176 181 183 187 191 192 196 198 201 201 203 203 205 208 209
sumrio
ix
Shhhh
OL, ENTREM.
O DR. MORO UM DOS PRINCIPAIS PESQUISADORES DE BIOLOGIA MOLECULAR - ELE CONSTRUIU EStE LABORATRIO USANDO VERBAS DE SUAS INVENES E PATENTES.
PATENTES?!
Prlogo
AQUI ESTO ELAS. TENTEM MEMORIZ-LAS. CLULA PROTENA DNA RNA Gene
UM DOS PRINCIPAIS TPICOS DAS SUAS AULAS DE RECUPERAO SER UM TIPO ESPECIAL DE MOLCULA - A PROTENA.
E O GENE TAMBM IMPORTANTE. POR CAUSA DOS GENES QUE VOC HERDA CARACTERSTICAS DE SUA Me E DE SEU PAI. UM GENE UM "projeto" DE COMO CRIAR PROTENAS E OUTRAS MOLCULAS.
O GENE TAMBM UMA MOLCULA? O QUE SO O DNA E O RNA? ESTAS SO QUESTES QUE AS AULAS DE RECUPERAO RESPONDERO. O APARENTEMENTE COMPLICADO MUNDO DAS MOLCULAS E PROTENAS MUITO MAIS FCIL DE ENTENDER QUANDO SE CONHECE O BSICO.
B lu u
Prlogo
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AGORA QUE VOCS SABEM O QUE QUEREMOS DIZER QUANDO FALAMOS sobre BIOLOGIA MOLECULAR, DEIXEM-ME FAZER UMA PERGUNTA.
EM NOSSOS CORPOS, UMA QUANTIDADE ENORME DE MOLCULAS SE JUNTAM PARA FORMAR UM ORGANISMO VIVO.
PARA PERMANECERMOS VIVOS, PRECISAMOS DOS RESULTADOS DAS INTERAES ENTRE ELAS.
UM MONTE DE MOLCULAS ACUMULADAS ISSO NO FORMARIA UMA CLULA GRANDONA? AMI, VOC ALGUM TIPO DE ORGANISMO DE UMA CLULA S?
SUA BOBONA!
COMO QUE ?
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VOU EXPLICAR COMO ESSES PROJETOS SO ESCRITOS com DETALHEs MAIS TARDE. POR ORA, LEMBREM-SE DE QUE ESSES GUIAS SO ESCRITOS NA FORMA DE GENES.
VOC PODE CONSIDERAR O DNA COMO SENDO UM ARQUIVO CHEIO DE PROJETOS E O RNA SERIA UM MANUAL DE INSTRUES CRIADO PELA CPIA DAS PARTES DE DNA NECESSRIAS PARA CONSTRUIR, DE FATO, AS PROTENAS.
INSTRUES?
CLARO.
O NOSSO DNA COMO UM LIVRO CHEIO DE RECEITAS (GENES). UMA CLULA COPIA OS GENES ESCRITOS NO DNA PARA O RNA,
O RNA o guia escrito de criao de protenas feito por meio da cpia das partes.
E OS ENVIA PARA O CITOPLASMA, ONDE OS RIBOSSOMOS CRIAM AS PROTENAS DE ACORDO COM AQUELE GUIA.
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TANTO AS PROTENAS QUANTO O DNA SO SUBSTNCIAS DENOMINADAS POLMEROS. AMBOS SO COMPOSTOS POR UNIDADES DENOMINADAS MONMEROS (AMINOCIDOS OU NUCLEOTDEOS) CONECTADOS EM LONGAS CADEIAS. A ORDEM DOS MONMEROS NA CADEIA MUITO IMPORTANTE EM OUTRAS PALAVRAS, A ORDEM DAS BASES NO DNA DETERMINA A ORDEM DOS AMINOCIDOS DE UMA PROTENA!
A INFORMAO SOBRE A DISPOSIO DOS AMINOCIDOS ARMAZENADA NO DNA COMO UM CDIGO E O CDIGO ESCRITO POR CARACERES EXCLUSIVOS AO DNA.
PRECISAMENTE!
Traduo
Sequncia de aminocidos
O CDIGO QUE ESPECIFICA EM QUAL SEQUNCIA OS AMINOCIDOS DEVEM SER DISPOSTOS.
86 Captulo 2 PROTENAS E DNA: DECIFRANDO O CDIGO GENTICO
C G AT G C A C G A AT C G AT C G . . . A G
C G A AT G C A G TA G C G AT . . . . .
representa um gene - os genes variam em tamanho, mas a maioria tem uma extenso de cerca de 1.000 bases.
As suas clulas contm 46 pares de cromossomos. Um cromossomo de cada par herdado de sua me, e o outro herdado do seu pai. Cada clula tem dois conjuntos de genes a nica exceo consiste nas clulas sexuais, que tm apenas um conjunto de 23 cromossomos, uma mistura de sua me e de seu pai. As clulas sexuais so usadas apenas na reproduo.
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O TERMO DIVISO NO MUITO CORRETO, J QUE O DNA DUPLICADO ENCONTRADO nAS duas CLULAS NOVAS. DUPLICAO SIGNIFICA APENAS CRIAR UMA CPIA EXATA.
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O QUE UM CROMOSSOMO?
Quando falamos sobre diviso celular, no podemos deixar de falar sobre cromossomos. O que um cromossomo? Um cromossomo o DNA em uma forma especfica ele contm informao gentica. Antes de comear a diviso celular, os cromossomos se renem no centro da clula. Quando a diviso celular comea, os cromossomos so divididos em duas partes. Um cromossomo composto por uma longa cadeia de uma substncia chamada cromatina. Vocs se lembram da cadeia de miangas de que vimos no Captulo 1? Aquilo a cromatina. Ela composta de protenas chamadas histonas, de DNA e de algumas outras molculas. Cada mianga da cadeia composta por 1,7 volta do DNA em torno de uma histona. Uma nica fita de DNA se enrola em torno de cada mianga, formando um fio espesso de cromatina. Na verdade, uma histona um conjunto de protenas oito molculas ligadas entre si, com duas molculas de cada um dos quatro tipos: H2A, H2B, H3 e H4. Os cromossomos, cada um sendo uma longa fita de cromatina, costumam ficar espalhados pelo ncleo e so invisveis mesmo com o uso de um microscpio. S quando eles se condensam em uma forma compacta para realizar a diviso celular que se tornam visveis ao microscpio.
DNA
Histonas
Cromossomos espalhados
Cromossomos condensados
DNA e cromossomos
Os cromossomos, que foram descobertos no sculo XIX, so nomeados assim devido tendncia de tingirem facilmente com certos corantes (chroma significa cor em grego voc j deve ter ouvido palavras como cromtico e monocromtico).
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O QUE TRANSCRIO?
VOCS SABEM QUE ESSE O PRIMEIRO PROCESSO PARA SE CRIAR UMA PROTENA.
FLUXO DE IN FORM A O G ENTI CA
DUPLI CAO
PROTE NA
A INFORMAO GENTICA HERDADA POR UMA CLULA OU ORGANISMO DA PRXIMA GERAO por meio DA DUPLICAO DO DNA.
A INFORMAO GENTICA TRANSCRITA EM CADA CLULA DO DNA PARA O RNA, E A PROTENA produzida com BASE NO RNA.
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PARA CRIAR VRIAS CPIAS DE UM BONECO, VOC DEVE PRIMEIRO CRIAR UM ORIGINAL. ENTO...
TAMPA
BONECO ORIGINAL
TAMPA
FORMA.
AGORA VOC PODE RECOLOCAR A TAMPA E DESPEJAR ALGUM LQUIDO PARA PRODUZIR O MESMO BONECO.
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PENSEM NA PROTENA CHAMADA INSULINA, QUE USADA COMO TRATaMENTO DA DIABETES DEVIDO SUA HABILIDADE DE BAIXAR OS NVEIS DE ACAR NO SANGUE. ANTIGAMENTE, ESSA PROTENA ERA EXTRADA A PARTIR DOS RGOS INTERNOS DE ANIMAIS, ENTO NO PODAMOS CRIAR UMA PRODUO EM MASSA DE INSULINA QUE PUDESSE SER USADA EM HUMANOS DE FORMA SEGURA.
RECOMBINAO GNICA
! GA DO OBRI
SIM.
INSULINA HUMANA TRANSDUZIDO PARA A E. COLI PRODUO EM MASSA DE INSULINA HUMANA PELA E. COLI
MAS A RECOMBINAO GNICA TEM PERMITIDO AOS CIENTISTAS REALIZAR A PRODUO EM MASSA DE INSULINA COMO TRATAMENTO DA DIABETES POR MEIO DA TRANSDUO DO GENE DE INSULINA PARA A ESCHERICHIA COLI (E. COLI).
O QUE TRANSDUO?
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Protuberncia
Protuberncia PCR
Gene amplificado
Enzima de restrio
As protuberncias, ou extremidades coesivas, so sequncias reconhecidas por uma enzima de restrio. Esse DNA pode, ento, ser incorporado em um vetor plasmdeo usando DNA ligase.
Um vulo fertilizado
2 clulas dividem-se em 4
Mrula
Blastocisto
Aprendemos bastante sobre como o estudo da gentica pode ser til para a humanidade. Durante anos, os cientistas tentaram desenvolver mtodos para criar plantas e animais com exatamente os mesmos genomas para que pudssemos melhor estudar e entender a gentica. Esse processo chamado de clonagem. Os conceitos de como ela funciona so simples, mas os pesquisadores demoraram anos para aperfeioar esses mtodos. Como podemos clonar um animal? Um embrio removido do tero de uma fmea em um estgio inicial e quebrado em clulas individuais. O ncleo de cada clula removido e, ento, reinserido em um vulo no fertilizado que j teve o seu ncleo removido. Os vulos so banhados em molculas de sinalizao qumica que convencem os vulos de que eles esto fertilizados. Esses vulos so, ento, transplantados nos teros de vrias outras fmeas. Como resultado, nascem vrios
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