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CHROMATOGRAPHIE

I. INTRODUCTION 1.1. Vocabulaire La chromatographie est un procd de sparation bas sur la diffrence de temps de rsidence dun solut entre une phase mobile et une phase stationnaire. La phase mobile (m) est appele luant dans le cas dun liquide et gaz porteur dans le cas dun gaz. La phase stationnaire (s) est soit un solide, soit un liquide. Le solut ou analyte i est distribu entre les deux phases stationnaires et mobiles. Une proportion pi du solut avance avec la vlocit de la phase mobile. Une proportion qi = 1pi est retenue dans la phase stationnaire soit sous forme dissoute dans cette phase, soit adsorbe linterface entre les deux phases. Le rapport de ces deux quantits dfinit le facteur de capacit appel aussi facteur de rtention du systme

ki ' =

qi pi

(1.1)

Ce facteur est reli au coefficient de distribution dfini par le rapport des concentrations de la phase stationnaire et de la phase mobile par

ki ' =

ni,s ni,m

Vs ci,s Vm ci,m

= K D,i

(1.2)

o est appel le rapport de phase dfini comme le rapport des volumes de la phase stationnaire et de la phase mobile. Il existe deux familles de techniques chromatographiques. Dans le premier cas, la phase mobile avance de lentre la sortie du systme. Les diffrents constituants tant retards, ils avancent plus lentement et se trouvent rpartis le long du systme. Ils sont alors soit visualiss par coloration (e.g. chromatographie en couche mince), soit analyss aprs segmentation (e.g. chromatographie prparative). Cette chromatographie sappelle chromatographie avancement limit.

Dans le deuxime cas, la phase mobile passe continuellement travers une colonne contenant la phase stationnaire, et les soluts sont injects en tte de colonne, et le passage des soluts, en sortie de colonne, est alors mesur laide dun dtecteur. Cette chromatographie sappelle chromatographie par lution. 1.2. La rtention Martin & Synge ont propos de caractriser le facteur de retardement (retardation factor) R comme le rapport de la vlocit de lavancement du solut par rapport celle de la phase mobile

Ri

ui um

pi um um

pi

(1.3)

o um est la vlocit de la phase mobile. En chromatographie avancement limit, la vlocit relative est thoriquement gale au rapport des distances parcourues par le solut et lluant.

RFi

di L

(1.4)

Les facteurs Ri et RFi sont thoriquement quivalents, mais leur interprtation physicochimique est diffrente dans la mesure o en chromatographie par avancement limit, les proprits de la phase mobile et de la phase stationnaire varient en fonction de la distance. En pratique, nous avons en chromatographie plane

0.8Ri

RFi

0.9Ri

(1.5)

En chromatographie par lution, le volume de phase mobile ncessaire lavancement du solut du point dinjection au dtecteur sappelle le volume de rtention VR,i . Si Vm est le volume de la phase mobile non retenue, on a

VR,i

Vm Ri

Vm pi

(1.6)

On dfinit de faon similaire le temps de rtention par


t R,i = L ui = VR,i FV

(1.7)

o FV est le dbit volumique ( volumic Flow rate ). Le temps de passage de lluant non retenu appel aussi temps mort est gal
2

tm

L um

Vm FV

(1.8)

Par analogie, Vm sappelle aussi le volume mort. Il est alors possible de dfinir un volume et un temps de rtention ajust appel aussi temps de rtention net tels que

t Rn,i
et

= t R,i t m

(1.9)

VRn,i

= VR,i Vm

(1.10)

tR tm tR,n

Illustration schmatique de pics de rtention

Ces paramtres de rtention permettent, partir des valeurs exprimentales, de calculer le facteur de rtention dun solut (anciennement facteur de capacit)

ki ' =

1 pi pi

1 Vm / VR,i Vm / VR,i

VRn,i Vm

t Rn,i tm

(1.11)

1.3. Le signal chromatographique Lhypothse de base est que la quantit dchantillon injecte est faible et que par consquent le signal z=0 est une impulsion Dirac. Durant lavancement du solut dans la colonne, lallure du signal se transforme et slargit cause de trois phnomnes principaux : - la vlocit de la phase mobile nest pas uniforme en chaque section de la colonne, - la diffusion du solut rsultant du gradient de concentration (diffusion axiale), - la cintique de distribution nest pas infiniment rapide En chromatographie par avancement limit, linfluence de ces effets sur la variance est directement proportionnelle la distance parcourue.
3

2 d,i

[ HETP ] di

(1.12)

Le facteur HETP sappelle la Hauteur Equivalente dun Plateau Thorique. Qualitativement, on peut dire que plus ce coefficient est faible, meilleure sera la qualit de la sparation. De plus, HETP est indpendante dans une large mesure du solut et cest pourquoi ce coefficient est utilis comme critre de qualit dune colonne. On dfinit le nombre de plateaux thoriques dune colonne N par le rapport :

di HETP

d = i d,i

(1.13)

En chromatographie par lution, tous les soluts parcourent la longueur de la colonne. Dans ce cas, on mesure soit le temps soit le volume de rtention. La variance sur lavancement devient une variance sur le temps ou sur le volume. On peut crire
2 t,i

[ HETP ]

t R,i ui

[ HETP ] t 2
L

R,i

(1.14)

Le nombre de plateaux thoriques est dfini alors par


L HETP t = R,i tR,i
2

V = R,i VR,i

(1.15)

On montrera que le signal chromatographique se rapproche assez vite dune distribution Gaussienne de concentration
1 t t R,i 2 t exp R,i
2

ci

1 Mi FV tR,i 2

(1.16)

o Mi est la masse de solut inject dans la colonne.

exp

x2 2

Proprits graphiques des courbes de Gauss

Dans le cas de distribution Gaussienne, le nombre de plateaux thoriques est souvent exprimentalement calcul en fonction de la largeur de la base du triangle quivalant au pic

t = 16 R w

(1.17)

1.4. La rsolution La rsolution R mesure la distance sparant deux pics Gaussiens en fonction de la dviation standard.
z

21

2 2

L 41 4 2

Rsolution de deux pics chromatographiques

z d

2z d1 + d2

(1.18)

Cependant, la coutume veut qu'en chromatographie on exprime la rsolution en fonction de la largeur de base de pic. Ainsi, dans le cas de la rsolution par rapport au temps, on a

R =

R 4

t w

(1.19)

Le facteur de sparation dfini en fonction des facteurs de capacit des soluts permet dvaluer la qualit dune sparation

2/1 =

k2 ' k1 '

(1.20)

Pour avoir une sparation raisonnable, le facteur de sparation doit tre plus grand que 1.02 en GC et que 1.10 en LC.

0.4

0.4

0.3

z=4

0.3

z=6

0.2

0.2

0.1

0.1

0.0 -10 -5 0 5 10

0.0 -10 -5 0 5 10

Sparation des pics chromatographiques

1.4.1. Comment optimiser la rsolution? Pour comprendre comment optimiser la rsolution, il est utile de driver la relation de Purnell

R = =

t R2 t R1 w

t R2 t R1 w2 =

t m [ k2 ' k1 '] 4t R2 / N = N 1 k2 ' 4 1 + k2 '


(1.21)

N k2 ' k1 ' 4 1 + k2 '

k ' N ( 1) 1 4 1 + k2 '

Une autre approche consiste dfinir un facteur de capacit moyen.


k' = t Rn1 + t Rn2 2t m = t Rn1 [1 + ] 2t m

(1.22)

Ainsi, la rsolution sexprime


R = t R2 t R1 w = t Rn1 [ 1] w

(1.23)

En calculant la largeur moyenne des pics, on a


t +t 4 w = R1 R2 N 2 = 2 N = 2 (tRn1 + tRn2 + 2tm ) N

1+ t Rn1 + t Rn1 + t Rn1 k '

(1.24)

w =
do
R =

2t Rn1 (1 + ) 1 + k ' k' N

(1.25)

N 2

1 k ' + 1 1 + k '

(1.26)

Par les deux mthodes, on voit que la rsolution est proportionnelle la racine carre du nombre de plateaux quivalents. En effet, lorsque le facteur de sparation tend vers 1 les quations (1.21) et (1.26) deviennent identiques.

II. CLASSIFICATION DES METHODES CHROMATOGRAPHIQUES 2.1 Types de chromatographies 2.1.1. Chromatographie en batterie Les phases mobiles et stationnaires sont des liquides partiellement immiscibles. Nous avons en gnral une sparation lors dun contre-courant de gouttelettes (phase mobile) dans une phase stationnaire, suivant une distribution de Craig. La batterie est un ensemble de cellules remplies de phases stationnaires. La phase mobile passe dans chaque cellule sous forme de gouttelettes et de cellule cellule dans des tubes capillaires.

2.1.2. Chromatographie en colonne La colonne est un tube de verre, de silice ou de mtal. Sa longueur varie de quelques centimtres quelques mtres et son diamtre de 0.05 50 mm. La phase stationnaire peut tre fixe de deux manires gnrales: - Dans les colonnes remplies (packed columns), le remplissage est un granul solide formant un lit aussi homogne que possible. Ce dernier peut tre actif et la rtention se fait alors par adsorption, ou bien inactif et dans ce cas, il agit comme support une phase stationnaire liquide qui forme un film autour du granul. - Dans les colonnes capillaires, la paroi du capillaire sert de support solide un film liquide dpaisseur variant de 0.1 1 m. 2.1.3. Chromatographie plane On distingue deux types de chromatographie plane: la chromatographie sur papier et la chromatographie sur couches minces. Dans le premier cas, la phase stationnaire est la cellulose du papier et dans le deuxime cas, cest une fine couche dadsorbant dpose sur du verre ou de laluminium. Dans les deux cas, la phase mobile avance par capillarit. 2.2. Phase mobile 2.2.1. Chromatographie en phase gazeuse La phase stationnaire est soit un liquide, soit un solide. On parle alors respectivement de chromatographie gaz/liquide et de chromatographie gaz/solide. 2.2.2. Chromatographie en phase liquide La phase stationnaire est soit un liquide, soit un solide. On parle alors respectivement de chromatographie liquide/liquide et de chromatographie liquide/solide. Pour cette dernire, si le remplissage est constitu de granuls de plusieurs micromtres de diamtre, la mthode sappelle HPLC ( High Pressure or Performance Liquid Chromatography) ou encore UPLC et UHPLC quand de trs hautes pressions sont utilises sur des billes de taille de lordre du micron. De plus, si la composition de lluant est constante, on parlera de conditions isocratiques; sinon, on parlera dlution par gradient de composition. 2.2.3. Chromatographie supercritique La phase mobile est du gaz CO2 supercritique qui se comporte comme un solvant apolaire.

2.3. Phnomnes physiques de rtention 2.3.1. Chromatographie de partage Les soluts de lchantillon sont distribus par absorption entre les phase mobiles et stationnaires. Ce phnomne est la base de la chromatographie en batterie. En chromatographie gaz/liquide, certains soluts sont retenus par partage, mais dautres phnomnes de rtention peuvent avoir lieu tels que ladsorption aux interfaces gaz/liquide et liquide/solide. 2.3.2. Chromatographie par adsorption La phase stationnaire est un solide absorbant. Pour des raisons historiques, les adsorbants polaires tels que le gel de silice, lalumine ou la magnsie sont considrs comme des adsorbants normaux. Ainsi, un adsorbant non polaire est dit polarit inverse; la technique sappelle alors chromatographie en phase inverse. 2.3.3. Chromatographie par taille La phase stationnaire est une poudre de particules poreuses: tamis molculaires, zolites, gel de silice poreuse, polymres hautes rticulations, etc. Les soluts de grosses tailles sont exclus des pores et avancent avec la phase mobile; les soluts de petites tailles sont absorbs et ont de larges volumes de rtention. Cette technique est intressante pour les molcules de tailles intermdiaires. 2.3.4. Chromatographie par affinit La phase stationnaire est recouverte de ligands spcifiques une classe de solut. Par exemple, les ligans peuvent tre des anticorps et les soluts retenus sont alors les antignes correspondants. 2.3.5 Chromatographie ionique La phase stationnaire est un changeur dions.

III. CHROMATOGRAPHIE EN BATTERIE 3.1. Equilibre de partage entre deux liquides Soit deux phases liquides immiscibles, l'une stationnaire et lautre mobile, de volumes respectifs Vs et Vm . La distribution dun solut entre les deux phases est thermodynamiquement dcrite par lgalit des potentiels chimiques

im

= is

(1.27)

En dfinissant pour chaque solvant un tat standard, cette quation devient

io ,m

+ RT ln aim

= io ,s

+ RT ln ais

(1.28)

Le coefficient de distribution est dfini par


Gto ,ms RT

K D,i

= exp

ais aim

(1.29)

o Gto ,ms reprsente lnergie Gibbs standard de transfert de la phase mobile la phase stationnaire
Gto ,ms = io ,s io ,m

(1.30)

Pour une solution idalement dilue, le coefficient de partition est gal au rapport des concentrations. Exprim en termes de probabilit, ce coefficient est donn par

K D,i

cis cim

qi / Vs pi / Vm

1 qi pi

ki '

(1.31)

est le rapport de phase gal au rapport du volume des phases mobile et stationnaire. On voit ainsi que la mesure du facteur de capacit permet de calculer le coefficient de partage si on connat le rapport de phase.
Dans le cas de deux soluts, le facteur de sparation ou facteur denrichissement est aussi gal au rapport des coefficients de distribution des deux soluts

2/1 =

K D,2 K D,1

k2 ' k1 '

p1q2 p2 q1

(1.32)

10

3.2. Chromatographie avancement limit. 3.2.1. Modle de Craig. Considrons une batterie de n+1 cellules. A chaque tape, on transfre la phase mobile de la cellule J1 la cellule J tout en rajoutant de lluant la cellule 0 . Ensuite, on agite les phases stationnaires et mobiles pour quelles squilibrent.

m m m m s 0 1 2 m m m

N
Schma de principe de la chromatographie en batterie

Si le nombre de transferts est j ,la distance maximum parcourue est videmment J . Ce procd peut se rsumer par le tableau suivant : Nombre de transferts j=0 Phase m s m s j=1 m s m s J=0 1 0 p q 1 0 q pq q2 q J=1 0 0 0 p 0 p2 pq p J=2 0 0 0 0 0 0 J=3 0 0 0 0 0 0 p+q 1

11

j=2

m s m s

0 q2 pq2 q3 q2 0 q3 pq3 q4 q3

pq pq 2p2q 2pq2 2pq pq2 2pq2 3p2q2 3pq3 3pq2

p2 0 p3 p2q p2 2p2q p2q 3p3q 3p2q2 3p2q

0 0 0 p3 0 p4 p3q p3 (p+q)3 (p+q)2

j=3

m s m s

Ainsi aprs n transferts, la quantit de solut i dans chaque cellule J est

mi (J, n) = mi (0, 0)

n! piJ qin J J!(n J )!

= mi (0, 0) fi (J, n)

(1.33)

o mi(0,0) est la quantit de solut introduite au dpart dans la cellule J=0 . 3.2.2. Distribution binomiale

n n! Le coefficient binomial = permet de calculer la probabilit Pi(J,n) davancer J J!(n J )! la cuve J en n transferts.
Pi (J, n) = n! piJ qin J J!(n J )! = fi (J, n)
(1.34)

fi (J, n) sappelle la fonction de distribution binomiale . Cette dernire est norme et donc son moment dordre zro est gal lunit

f (J, n)
i J =0

= ( p + q)n

= 1

(1.35)

La forme de cette fonction de distribution se transforme rapidement en une Gaussienne, comme lillustre la figure ci-dessous pour une srie de 21 transferts.

12

0.20

n=20 p=0.5

0.15
m(J,n)

0.10

0.05

0.00 0 5 10 J
Distribution de Craig pour une srie de 20 transferts

15

20

3.2.3. Moments de la distribution binomiale Dans ce genre de chromatographie, on appellera la distance davancement le premier moment de cette distribution. Dans le cas o la distribution atteint une limite Gaussienne, la moyenne est gale au sommet de la courbe.
=

Ji

J f (J, n)
i J =0

J J p q
J =0

J n J i i

(1.36)

Sachant que

n J J

n 1 = n J 1

(1.37)

car

n! J J!(n J )!

(n 1)! = n (J 1)!(n J )!

(1.38)

on a

Ji

= npi

J =1

n 1 J 1 n J J 1 pi qi
n1

= npi

k =0

n1

n 1 k n1 k k pi qi

(1.39)

= npi ( p + q )

= npi

13

De plus, la variance de la distribution est donne par la dviation standard, et correspond au deuxime moment centr

( J,i )

(J J )
i J =0

fi (J, n) =

J
J =0

2 n 2npi J + ( npi ) piJ qin J J

(1.40)

Soit en dveloppant,

( J,i )
= =

=
n

J =0

n J piJ qin J 2npi J


2

J =0

n 2 J piJ qin J + ( npi ) J

J p q
J =0

J n J i i


J =0 J =0 n

n 2 2 J 2 piJ qin J 2 ( npi ) + ( npi ) ( p + q)n J n 2 J 2 piJ qin J ( npi ) J

(1.41) En utilisant toujours la mme identit on a

( J,i )

J =0

n 2 J piJ qin J ( npi ) J


2

= npi

J J 1 p
J =1

n 1

J 1 n J i qi

( npi )

(1.42)

( J,i )

= npi

k =0

n1

n 1 k n1 k 2 (k + 1) ( npi ) pi qi k

= npi

k =0

n1

n 1 k n1 k 2 k + npi ( p + q)n1 ( npi ) pi qi k

(1.43)

( J,i )

npi2

(n 1)
l =0

n2

n 2 l n2l 2 pq + npi ( npi ) l i i


2

(1.44)

= npi2 (n 1)( p + q)n2 + npi ( npi )

= npi (1 pi )

soit en conclusion

( J,i )2

= n pi qi

(1.45)

14

3.2.4. Nombre de plateaux thoriques dune distribution binomiale La vlocit relative est donne par le rapport de lavancement moyen sur le nombre total de cellules atteintes

RFi

Ji n

pi

(1.46)

La largeur relative dun pic dfinie comme le rapport de la largeur de distribution sur le nombre total de cellules est proportionnelle 1 / n . En effet, on a

J,i n

npi qi n

RFi (1 RFi ) n
n , car elle est donne par

(1.47)

La rsolution de deux soluts est proportionnelle


= J1 J 2 J = R R F2 n F1 RF (1 RF )

(1.48)

Le nombre de plateaux thoriques N est alors

J = i J,i

n 2 pi2 npi qi

npi qi

(1.49)

et la hauteur quivalente de plateau thorique est

[ HETP ]

2 J,i = Ji

npi qi npi

= qi

(1.50)

3.2.5. Distribution Gaussienne Nous avons vu ci-dessus que la distribution binomiale devenait Gaussienne pour un nombre n de transferts assez grand. Nous pouvons dmontrer ceci en crivant la probabilit P(J,n) davancer la cuve J en n transferts.

n P(J ) = p J q n J J

(1.51)

Pour saffranchir des factoriels, on peut faire un dveloppement en sries de lnP(J) autour du maximum J pour lequel

15

dP(J ) = 0 dJ
En posant

(1.52)

J
nous avons

J +

(1.53)

ln P(J ) = ln P(J ) + B1 +
avec
Bk d k ln P(J ) = k dJ J = J

1 B 2 2! 2

1 B 3 3! 3

+ ...

(1.54)

(1.55)

Par dfinition, au maximum, le coefficient B1 est nul


d ln P(J )) B1 = dJ J = J = 0

(1.56)

Aussi, B2 doit tre ngatif car ln P(J ) est un maximum et nous posons

B2 = B2
En appliquant lapproximation de Stirling dans sa forme la plus simple, on a

(1.57)

ln J! =

J ln J J

(1.58)

la probabilit P(J) peut scrire

ln P(J ) = ln n! ln J! ln(n J )!+ J ln p + (n J )ln q


En drivant, on obtient

(1.59)

d ln J! dJ
et

( ln J + 1) 1

= ln J

(1.60)

d ln(n J )! dJ

d [(n J )ln(n J ) (n J )] = ln(n J ) dJ

(1.61)

16

soit

d ln P(J ) ln J + ln(n J ) + ln p ln q dJ
Au maximum de la distribution, on a

(1.62)

n J p ln J q
soit

= 0

(1.63)

n J p J q

= 1

(1.64)

et donc on retrouve comme prcdemment

= np

(1.65)

Maintenant pour les autres termes du dveloppement en sries, on a


B2 d 2 ln P(J ) = 2 dJ J = J = 1 1 J nJ = 1 npq = 1 np(1 p)

(1.66)

puis

d 3 ln P(J ) B3 = 3 dJ J = J

1 J
2

(n J )

q2 p2 n p q
2 2 2

1 2p n p (1 p)2
(1.67)
2 2

puis encore

B4

d 4 ln P(J ) = 4 dJ J = J =

2 J3

2 3p 2 3p + 1 n 3 p 3 (1 p)3

( n J )3

2 p 2 pq + q 2 n 3 p 3q 3

)
(1.68)

Pour les grandes valeurs de n, seul le deuxime terme est significatif

17

P(J ) = P(J ) e

B2 2 /2

(1.69)

La fonction de distribution tant norme, on obtient

P(J )dJ

P(J + )d = 1 =

P(J )e

B2 2 /2

d = P(J )

2 B2

(1.70) sachant que I(0) =

eax dx =

1 . Soit, 2 a
= ( J np )2 1 exp 2npq 2 npq

P(J ) =

B2 B2 (J J )2 /2 e 2

(1.71)

On retrouve ainsi unes distribution Gaussienne

P(J )

( J J )2 1 exp 2 2 2

(1.72)

3.3 Chromatographie par lution 3.3.1. Cas gnral La thorie dlution dune batterie de cellules peut tre divise en deux tapes. Dans un premier temps, lavancement sera calcul pour une batterie contenant un nombre infini de cellules. On appellera nombre de transferts de rtention nR,i le nombre de transferts ncessaires pour que le maximum du pic de solut atteigne la position N .

mi (J, nR,i ) = mi (0, 0)

nR,i ! J!(nR,i J )!

piJ qi R,i

(1.73)

Ce nombre de transferts de rtention est dtermin par la dfinition de la distance davancement moyenne

nR,i

N pi

N Ri

(1.74)

La largeur de la distribution est ainsi

18

( J,i )2

= nR,i pi qi

N (1 Ri )

(1.75)

Si chaque opration, on rajoute un volume lmentaire de phase mobile dVm la cellule zro, le volume de rtention sera dfini par

VR,i

= nR,i dVm

(1.76)

Par substitution, on obtient aussi

VR,i

N dVm pi

= Vm (1 + ki ')

(1.77)

o Vm est le volume de la phase mobile dans les N premires cellules. Ce volume est aussi appel volume mort. Exprim en fonction du coefficient de distribution KD,i et du rapport de phase , on obtient

VR,i

= Vm + K D,iVm

= Vm + K D,iVs

(1.78)

o Vs est le volume de la phase stationnaire dans les N premires cellules. Il est courant aussi dappeler volume de rtention ajust ou volume de rtention net la diffrence entre le volume de rtention et le volume mort

VN ,i

= VR,i Vm

= ki 'Vm

= K D,iVs

(1.79)

Cette quation donne un accs exprimental direct au coefficient ki ' . La dviation standard de la distribution peut aussi tre exprime sous la forme

J,i

N (1 Ri ) =

ki ' 1 + ki '

(1.80)

3.3.2. Soluts fortement retenus - Distribution de Poisson Pour les composs avanant lentement, le nombre de transferts de rtention nR,i tend vers linfini et le paramtre de probabilit pi tend vers zro. Par contre, lavancement moyen a une valeur finie N . En appliquant la formule de Stirling

n! = n

n+

1 2

exp n 2

(1.81)

et lapproximation suivante

19

x 1 + n
on obtient

= exp x

(1.82)

mi (J, n) = mi (0, 0)

n! piJ qin J J!(n J )! 1

n+

1 2

exp n 2 exp n+ J 2

J! ( n J ) npi 1 n

1 n J + 2

piJ qin J

J! 1

J n

n J +

1 2

J exp

( npi )

n J

(1.83)

si J << n, alors

mi (J, n) = mi (0, 0)

n! piJ qin J J!(n J )!

np ( npi )J 1 i n n J J J! 1 exp n 1

(1.84)

( npi )J expnpi
J!

Dans ce cas, nous avons une distribution de Poisson

mi (J, nR,i ) =

(n m (0, 0)
i

R,i pi

J!

exp

nR,i pi

= mi (0, 0)

NJ exp N J!
(1.85)

20

0.14 0.12 0.10 0.08 0.06 0.04 0.02 0.00 0 20 40 60

N=10 N=20 N=50

80

Distribution de Poisson pour N=10, N=20 et N=50

Cette fonction est indpendante du solut. Ainsi, chaque solut arrivant la cellule N aura la mme distribution dans une batterie de taille infinie. Dans le cas dune distribution de Poisson, lavancement moyen et la largeur de la distribution sont gaux

Ji
En effet,

2 = J,i

= nR,i pi

(1.86)

Ji

J =0

NJ J exp N J!

N exp

J =1

N J 1 = ( J 1)!

N exp

k =0

Nk k!

(1.87) puisque
N

exp

J =0

NJ J!

(1.88)

Pour la variance, on a

2 J,i

= =

J =0 J =1

( J Ji )
J

NJ exp N J!
N

N exp 2N 2 exp N ( J 1)!


21

( J 1)! + N
N
J =1

J 1

exp N

J =0

N J!

(1.89)

2 J,i

J =1

N J exp N J ( J 1)!

N exp

k =0

( k + 1)

Nk k!

N2

(1.90)

2 J,i

N + N exp

k =0

Nk k!

N2

(1.91)

Ainsi pour une distribution de Poisson, le nombre de plateaux thoriques est

N HETP

J = i J,i

N2 N

(1.92)

et la hauteur quivalente de plateau thorique est

[ HETP ]

2 J,i Ji

N N

= 1

(1.93)

Ainsi, les proprits d'une distribution de Poisson (premier moment, variance, HETP, etc) correspondent aux proprits d'une distribution binomiale lorsque q 1 Pour des valeurs de J suprieures 20, le factoriel peut tre valu par la formule de Stirling et ainsi la fonction de distribution de Poisson devient une fonction continue

N mi (J, nR,i ) = mi (0, 0) J

1 exp J N 2 J

(1.94)

22

0.4 1/sqrt(2 J)

0.3 N=4

0.2

0.1

N=25 N=100

0.0

20

40

60 J

80

100

120

140

Dans le cas dune lution, la phase mobile de la Nme cellule passe dans un dtecteur qui mesure la concentration de lespce i dans la phase mobile aprs j transferts. On sintresse donc la fonction pi mi(N,j) en fonction du volume (discontinu) ajout jdVm . Lorsque le maximum du pic arrive dans la Nme cellule, cette fonction est gale pi mi(N,nR) . La courbe dlution nest ni une distribution binomiale ni une distribution de Poisson, mais une distribution complique qui tend vers une distribution Gaussienne. 3.3.3. Distribution de Poisson et de Gauss Comme prcdemment montrons quune distribution de Poisson tend vers une distribution de Gauss pour un grand nombre de transferts. La distribution de Poisson donne par lquation (1.85) scrit
P(J ) = NJ exp N J!

(1.95)

Pour saffranchir des factoriels, nous pouvons comme pour lquation (1.94) prendre lquation de Stirling (1.81) ce qui donne

N J exp N ln P(J ) ln J J 2 J J exp


En dveloppant, on a alors

(1.96)

ln P(J ) =
soit

J ln N N J ln J + J ln 2 J

(1.97)

23

ln P(J ) =

N J ln + J N ln 2 J J

(1.98)

Comme au paragraphe 3.2.5, nous faisons un dveloppement limit autour du premier moment en posant

N +

(1.99)

et lquation (1.98) devient

ln P(J ) = ( N + ) ln 1 + + ln 2 J N
Un dveloppement limit sur le logarithme donne alors

(1.100)

2 3 ln P(J ) = ( N + ) + + .... + ln 2 J 2 3N 3 N 2N
soit en ne gardant que le premier terme
ln P(J ) =

(1.101)

2 ln 2 J 2N

(1.102)

ce qui donne bien une distribution Gaussienne

P(J ) =

( J N )2 1 exp 2N 2 J

(1.103)

3.4. Chromatographie en batterie avec mouvement continu de la phase mobile. 3.4.1 Modle de Martin & Synge. Avant la sparation, chaque cellule J de la batterie est remplie dun volume Vm de phase mobile et dun volume Vs de phase stationnaire. Lchantillon est introduit dans la cellule 0 o lquilibre seffectue instantanment. Ensuite, une unit de volume dVm de phase mobile est ajoute cette cellule, ce qui se rpercute sur toutes les cellules.

24

Bilan de matire pour une srie de cellules de mlanges avec coulement continu

Le bilan massique de la cellule J scrit

dmi (J,t) = dmi (J,t)

in

dmi (J,t)

out

= cim (J 1,t)dVm cim (J,t)dVm


(1.104)

p m (J 1,t) pi mi (J,t) = i i dVm Vm Vm


En divisant par dt, lquation diffrentielle rsultante est donc
dmi (J,t) + dt pi mi (J,t)FV Vm = pi mi (J 1,t)FV Vm

(1.105)

o FV est le dbit volumique On a ainsi un systme de N+1 quations diffrentielles: Pour la cuve J = 0, on a
dmi (0,t) + dt pi mi (0,t)FV Vm = 0

(1.106)

avec comme condition initiale mi (J = 0,t = 0) = mi (0, 0) Pour la cuve J = 1, on a:


dmi (1,t) + dt pi mi (1,t)FV Vm = pi mi (0,t)FV Vm

(1.107)

avec comme condition initiale mi (J = 1,t = 0) = 0 Les mmes quations et conditions aux limites s'appliquent aux cuves successives. On peut rsoudre ces quations en cascade. Pour la cuve J = 0, la solution est

25

pF mi (0,t) = mi (0, 0)exp i V t Vm

(1.108)

Cette quation peut tre r-injecte dans l'quation pour la cuve J = 1. Celle ci peut alors tre p F rsolue en multipliant par exp i V t pour avoir Vm

p F dmi (1,t) exp i V t + dt Vm =

p F pi mi (1,t)FV exp i V t Vm Vm pi mi (0, 0)FV Vm

pi FV d mi (1,t) exp t = dt Vm

(1.109)

dont la solution est

pF pF mi (1,t) = mi (0, 0) i V t exp i V t Vm Vm


de mme la solution pour la cuve J = 2 sera

(1.110)

mi (2,t) =

pF mi (0, 0) pi FV t exp i V t V 2 m Vm

(1.111)

1.0

0.8 exp(-x) xexp(-x) 0.6


y
2

x exp(-x)/2 x exp(-x)/6
3

0.4

0.2

0.0

4 x

10

Le rsultat est une distribution de Poisson identique au cas de transferts discontinus avec des espces avancement lent
26

mi (J,VR,i ) = mi (0, 0)

NJ exp N J!

(1.112)

avec
N pF = i V t Vm = VR pi Vm

(1.113)

Ainsi les formules tablies prcdemment pour le facteur de sparation et la rsolution restent valables. Un autre moyen de rsoudre le systme d'quations diffrentielles consiste prendre sa transforme de Laplace. Pour la cuve J = 0
pF mi (0, s) s + i V = mi (0, 0) Vm

(1.114)

et pour la cuve J = 1
pF pF mi (1, s) s + i V = mi (0, s) i V Vm Vm

(1.115)

soit

pF 1 mi (1, s) = mi (0, 0) i V 2 Vm pi FV s + V m
Sachant la transforme inverse suivante,

(1.116)

1 L = n [ s + a]
1

t n1 exp [ at ] (n 1)!

(1.117)

on retrouve ainsi directement le contenu de chaque colonne.

27

IV. APPLICATIONS ANALYTIQUES Les mthodes analytiques de la chromatographie en batterie sont surtout bases sur les techniques de chromatographie contre-courant. Il existe plusieurs variantes, dont les plus populaires sont : - DCCC Droplet counter current chromatography. Lappareil comporte environ 300 units de partition ( 60 cm de long, 2-4 mm de diamtre interne). La sparation dure quelques heures. Le nombre de plateaux thoriques est de 900 au maximum. Utilisation principale : Sparation de produits naturels. - CPC Centrifugal Partition Chromatography

28

V . RAPPEL DE STATISTIQUE 5.1. Fonction de distribution Une exprience de mesure exprimentale est appele stochastique si on peut la rpter maintes fois dans des conditions identiques. La probabilit de mesurer une valeur x comprise entre x1 et x2 est

P(x1 < x < x2 ) =

x2 x1

f (x)dx

(1.118)

o f(x) est la fonction de distribution de la variable x. La moyenne de la valeur x est donne par

x f (x)dx

(1.119)

Les moments dordre n de la variable x sont les moyennes des puissances dordre n de x

xn

x n f (x)dx

(1.120)

On appelle fluctuation x de la variable alatoire x lcart la moyenne

x =

xx

(1.121)

On appelle x n le moment intrinsque ou absolu, voire encore le moment centr dordre n le moment dordre n de la fluctuation.Par dfinition, x = 0 . En effet,

x = =

x f (x)dx = x

( x x ) f (x)dx
(1.122)

x f (x)dx

f (x)dx =

xx

= 0

Le moment centr dordre 2 sappelle aussi lcart quadratique moyen

x 2

( x x )2

x 2 2xx + x 2

x2 x 2

(1.123)

Cette quation se dmontre en crivant

29

x 2 = =

x 2 f (x)dx =

( x x )2

f (x)dx x2

x 2 f (x)dx 2x

xf (x)dx +

f (x)dx

(1.124)

x2 x 2

5.2. Fonction caractristique La fonction caractristique de la variable alatoire x est dfinie par

(t) = eitx

f (x) eitx dx

(1.125)

avec t rel. Dans la mesure o (t) est une transforme de Fourier, la transforme inverse nous donne

f (x) =

1 2

(t) eitx dt

(1.126)

En dveloppant en sries entires eitx , la fonction caractristique est donne par


(t) =

n=0

(it)n

xn n!

(1.127)

Ainsi, la fonction caractristique donne directement accs aux moments centrs de la distribution.

5.3. Variable alatoire Gaussienne Une variable alatoire est dite Gaussienne si sa fonction de distribution est la fonction de Gauss dfinie par
2 1 e 2 2 x2

f (x) =

(1.128)

La fonction caractristique est alors

(t) =

itx

1 e 2

x2 2
2

dx = e

2t 2 2

(1.129)

30

On en dduit x 2 = 2 , x 4 = 3 4 Aussi, la largeur de la distribution mi-hauteur est 2 2 ln 2 La probabilit pour que x soit suprieur une valeur x0 est donne par
1 2

P(x > x0 ) =

x2 2 2 dx

(1.130)

x0

En utilisant la fonction erreur dfinie par


erf(x) = 2

eu du

(1.131)

et en faisant le changement de variable x = 2 u , on a


P(x > x0 ) = = 1

u0

eu du =

eu du

u0

2 eu du

1 [1 erf(u0 )] = 2

1 x0 1 erf( 2 ) 2

(1.132)

Si lon compose deux variables alatoires gaussiennes stochastiquement indpendantes, on obtient une gaussienne de variance = 1 + 2 . En effet,
2 2t 2 2 t 2 1 e 2 e 2

(t) = 1 (t)2 (t) =

=e

2 2 1 + 2

)t

(1.133)

5.4. Variable alatoire de Lorentz Une variable alatoire est dite de Lorentz si la fonction de distribution est
f (x) =

1 x2 + 2

(1.134)

5.5. Variable alatoire de Poisson Il sagit dune variable alatoire discrte qui intervient dans de nombreux domaines tels que la densit numrique d'un gaz parfait.

31