Introduccin a las Ciencias Biomdicas I

Mdulo IV: Biologa Molecular Dra. Marcia Puchi

2. ACIDOS NUCLEICOS
El DNA circular de los procariontes y el almacenado en un ncleo definido en el caso de los eucariontes no basta slo con que la informacin contenida exista, sino que esa informacin tiene que expresarse y para esto debe transcribirse a RNA. Si este RNA es un mensajero tiene que traducirse a una protena, es decir, la informacin que est como nucletido tiene que ser decodificada para ser expresada en aminocidos. Tanto en procariontes como en eucariontes vamos a tener estos dos procesos: Transcripcin y Traduccin. (*La informacin no solamente tiene que expresarse, sino que cuando hay estmulos para que la clula entre en proliferacin, esa informacin tiene que replicarse). Por muchos aos se pens que este era el flujo de la informacin: DNA RNA Protenas Y ese era el dogma de la biologa molecular, hasta que posteriormente se encontr que no siempre era as, ya que esta informacin tambin poda retroceder de DNARNA, y eso se llam: transcripcin reversa o retro transcripcin y se descubri gracias a algunos virus cuyo material gentico es RNA y cuando infectan la clula necesitan pasar por DNA, este DNA la mayora de las veces se integra y posteriormente a partir de este DNA se sintetiza nuevamente RNA, luego se sintetizan las protenas y este RNA tambin es el material gentico del virus; y esos virus se llaman retrovirus (ej. Virus del SIDA). Estos virus cuando infectan la clula, tienen esta enzima, la que hace pasar de DNARNA y esta enzima se llama transcriptasa reversa. El flujo de RNAproteina es irreversible, lo que es diferente se produce cuando uno tiene la secuencia de una protena y puede saber la secuencia del transcrito, porque se conoce el cdigo gentico. En procariontes y eucariontes tienen que haber: -replicacin (en el caso de proliferacin) -expresin del material gentico (transcripcin y traduccin) Estos mecanismo estn regulados, porque no todo el material gentico se est expresando en todas las clulas, sino que va a depender de si se activa determinado gen o si este est inactivo; as por ejemplo existen unos genes que son especficos; el ms comn es el de la insulina, el gen de la insulina est en todas las clulas pero solamente se expresa en el pncreas.

Metabolismo de los Nucletidos

-Los nucletidos son los precursores de los cidos nucleicos (ADN y ARN) - Los nucletidos participan en el metabolismo energtico (ATP y GTP) - Transportadores de metabolitos activados utilizados en procesos de biosntesis (coenzima A) - Componentes de las coenzimas (NADH, NADPH y FADH2) - Reguladores metablicos y molculas de sealizacin (cAMP y cGMP)

Introduccin a las Ciencias Biomdicas I Estructura general de los Nucletidos

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Cul es la diferencia entre un nucleosido y un nucletido? El fosfato, sin fosfato = nucleosido// con fosfato = nucletido

Las bases nitrogenadas generalmente son: adenina (A), guanina (G), citosina (C), timina (T) o uracilo (U). -Pueden ser ribonucleotidos o desoxirribonucleotidos. -Pueden ser purinas o pirimidinas.

Sntesis de los nucletidos

-Sntesis de Novo: a partir de precursores sencillos -Va de recuperacin o Salvamento (rescate): cuando hay una degradacin, se recuperan las bases, y estas bases que ya estn conformadas nuevamente sirven para formar nucletidos. Nosotros tambin ingerimos algunas nucleoprotenas, que por enzimas digestivas son degradados y es muy poco lo que aprovechamos de estas nucleoprotenas que nosotros ingerimos para la sntesis o aprovechamiento dentro de la clula. La mayor parte generalmente se cataboliza casi sin utilizar, entonces lo que ms se aprovecha es la sntesis de Novo y la va de rescate que sucede en la clula.

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Sntesis de Novo en PURINAS Estructura de una base de purina y sus precursores: - Nitrgeno 1 (N1) es aportado por el aspartato - Carbono 2 (C2) por el N-formil tetrahidrofolato ( tetrahidrofolato es una coenzima que da principalmente unidades de un carbono pero en distintos estados Redox) - Nitrgeno 3 y 9 tambin por un aminocido (la glutamina) - Carbono 4, 5 y 7 por la glicina - Carbono 6 por el CO2 - Carbono 8 por el N-formil THF igual que el carbono 2. Resumen formacin Anillo 1 2 3 4 5 6 7 N9 C4,C5,N7 C8 N3 C6 N1 C2 El primer precursor que se forma como nucletido es el IMP (base nitrogenada del IMP =hipoxantina) y a partir de este IMP se forma el AMP y el GMP.

La sntesis comienza a partir del fosforibosilpirofosfato que se sintetiza a partir de ribosa 5 fosfato. Esta ribosa 5-fosfato (proveniente de la va de las pentosas) por accin de una quinasa se transforma en el fosforibosil pirofosfato y se comienza a formar el anillo. El anillo se comienza a construir de la glutamina 3, luego glicina, despus N-formil THF, CO2 , aspartato, N-formil THF y se cierra el anillo (ver imagen superior). Formamos 5-fosforibosil-1-amina luego reacciona con glicina y as continuamente. Y el primer nucletido que se forma es el que tiene la base nitrogenada hipoxantina que corresponde al IMP, y a partir de este IMP por dos vas se puede sintetizar el AMP y el GMP, y de esa manera tenemos ya 2 nucleotidos puricos sintetizados, 2 ribonucleotidos. Entonces el costo es alto para sintetizar estos compuestos y por lo tanto es importante tambin poder recuperar estos nucletidos cuando va a hacer degradacin; de tal manera de ahorrar energa porque en este caso el gasto energtico es mucho menor que la sntesis de novo. Va de recuperacin o Salvamento en PURINAS Estas son las enzimas que son importantes para rescatar estas bases, que pueden ser la Adenina, la guanina en el caso de nucletidos puricos o tambin la hipoxantina; ya que ellas directamente pueden ser incorporados al fosforibosilpirofosfato para

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sintetizar los nucletidos. Y estas enzimas (HGPTR = hipoxantina guanina fosforibosiltransferasa) pueden entonces incorporar fosforibosilpirofosfato ya sea a la hipoxantina o a la guanina y hay otra transferasa que le incorpora a adenina y de esa manera nosotros estamos rescatando. En resumen: tenemos precursores sencillos (aminocidos, CO2, N-formil THF) que forman estos nucletidos, gasto de energa alto, y existiendo tambin la posibilidad de recuperar. Como toda va metablica tiene que ser regulada, generalmente son los productos finales quienes inhiben las primeras enzimas, las primeras enzimas son generalmente alostricas y de esa manera, si hay mucho inhiben, como por ejemplo el primer paso de ribosa 5-P a fosforibosilpirofosfato es inhibido por IMP, AMP y GMP. Y tambin inhibe el paso de fosforibosilpirofosfato a fosforibosilamina y el de IMP a AMP. De esa manera cuando hay mucho producto final se detiene su sntesis. Y posteriormente este AMP y GMP tiene que ser fosforilado para dar finalmente ATP y GTP. Sntesis de Novo en PIRIMIDINAS Las otras bases de pirimidinas tambin hay sntesis de Novo pero el ncleo es mucho mas sencillo, aqu tenemos que el Nitrogeno 3 y el carbono 2 son aportados por carboamilfosfato, y el resto (Carbono 4, 5, 6 y el nitrgeno 1) es aportado por aspartato. Y aqu es al revs, aqu se forma primero el ncleo y despus se incorpora al fosforibosilpirofosfato, para formar entonces el primer nucletido. Formndose finalmente el UTP, y a partir del UTP sintetizar CTP y el derivado de la timina (TMP) La diferencia entre el uracilo y la timina es el grupo metilo. El uracilo se tiene que metilar para transformarse en timina La reaccin comienza primero formndose el anillo (comienza con glutamina + CO2 + ATP para formar el carbamoilfosfato y posteriormente este carbamoilfosfato ms aspartato va a empezar a formar el anillo) *reaccin vista en el ciclo de la urea (carboamilfosfato) con la diferencia que en el ciclo de la urea la enzima es mitocondrial y esta es enzima citoplasmatica. Se forma as la primera base de pirimidina que es el orotato, esta base es la que se incorpora y reacciona con fosforibosilpirofosfato, formndose el primer nucletido que es el OMP y posteriormente se descarboxila y se transforma en el UMP. Y a partir del UMP se puede sintetizar; metilado posteriormente o transformado en CTP. Y finalmente fosforilado para dar los nucleotidos correspondientes.

Introduccin a las Ciencias Biomdicas I Va de recuperacin o Salvamento en PIRIMIDINAS

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Tambin hay una recuperacin, la ms importante es para los nucletidos de purina que para los de pirimidina.

Sntesis de DNA
Para la sntesis del DNA necesitamos transformar en los desoxiribonucleotidos correspondientes y para ello necesitamos nosotros transformar la ribosa en desoxirribosa, y la enzima que hace eso es la ribonucleotido reductasa. Y esta enzima puede transformar todos los ribonucleotidos en desoxi, transforma entonces el ADP, GDP, CDP y UDP en los desoxicorrespondientes. Se forma desoxiUDP (dUDP) pero este no est formando parte del DNA por lo tanto es a partir de este que se produce la metilacin para transformar entonces el uracilo en timina como desoxi. La ribonucleotido reductasa funciona con una tiorredoxina (que est reducida) que al catalizar esta reaccin se oxida y tiene que ser nuevamente reducida a partir del NADPH (que proviene principalmente de la va de las pentosas) Ahora tenemos que metilar el uracilo para hacer la base de timina, y se hace como dUMP no como dUDP, sino que pierde un fosfato queda como dUMP siendo de esta manera sustrato de la timidilato sintetasa as se transforma el uracilo en timina. El dador del grupo metilo es metilentetrahidrofolato que cuando entrega el grupo metilo se oxida y queda como dihidrofolato. Este dihidrofolato nuevamente tiene que pasar a tetrahidrofolato y nuevamente tiene que captar un grupo metilo para que pueda nuevamente ser dador (el grupo metilo es dado por la serina que se transforma en glicina). Esta reaccin es muy importante porque es una reaccin en la que

Sintesis de dTMP
O C HN O - O POCH 2 -O H H OH O C O H H CH CH N
fluordeoxiuridilato (Inhididor suicida) fluoruracilo

O C HN O C O - O POCH 2 -O H H H
NADPH

C CH N

CH3

(-)

Timidilato Sintetasa
N 5 ,N 10 -metilentetrahidrofolato
glicina

H
dihidrofolato

OH

dUMP

Dihidrofolato reductasa

dTMP
(-) por aminopterina y ametopterina (metotrexato)

tetrahidrofolato
serina

NADP+

estamos nosotros sintetizando un nucletido que es especifico para la sntesis de DNA, por lo tanto si nosotros podemos inhibir la produccin de este nucletido, estaramos deteniendo la sntesis de DNA en la replicacin y estaramos deteniendo la proliferacin, y en algunos cnceres se utilizan frmacos que inhibe a este tipo de nivel, y es el metotrexato. Este metotrexato inhibe el paso de dihidrofolato a tetrahidrofolato y al inhibir este paso no se va a poder metilar el uracilo y no vamos a tener sustrato para la replicacin y se puede detener la proliferacin. Tambin hay otros compuestos que se usan que son anlogos a estos nucletidos que inhiben a algunas enzimas que participan en la sntesis de novo y hay otros que se incorporan al DNA pero entonces ya producen una estructura que no es adecuada para la replicacin y se detiene la proliferacin.

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Otro compuesto es el FluorUracilo, se encuentra en el fluordeoxiuridilato que es un inhibidor de la timidilato sintetasa, es un Sustrato suicida. Otros compuestos: - Aminopterina inhibe al mismo nivel del metotrexato - Ametopterina sinnimo de metotrexato Es importante saber la funcin e importancia de la ribonucleotido reductasa y la timidilato sintetasa. Saber la sntesis y precursores (de donde provienen carbonos y nitrgenos). Va de Rescate. Tarea y Pregunta de certamen: Qu es un sustrato suicida? (M.Puchi). Qu otra va inhibimos al inhibir tetrahidrofolato? Afectamos los derivados de ATP y GTP. Adquiriendo importancia la va de rescate de estos nucletidos ya que se inhibe la sntesis de Novo. No solamente al inhibir el paso de dihidrofolato a tetrahidrofolato, estamos afectando la sntesis de los nucletidos de timina sino tambin afectamos la sntesis de novo de los nucletidos de purina. Un porcentaje de estos nucletidos tiene que ser degradado y la degradacin de los nucletidos de purina en que el AMP se transforma en IMP, y el IMP en hipoxantina hasta urato. -Problema del urato es que es muy poco soluble y cristaliza en las articulaciones produciendo la enfermedad conocida como la Gota. Este urato entonces es producto del catabolismo de las purinas y es poco soluble a pH bajo 6, eso facilita que cuando aumenta un poco su concentracin cristalice y se formen cristales de urato y adems se pueden formar clculos en las vas urinarias. Aqu vemos otra importancia de la va de rescate, ya que si esta estuviera inhibida o no existiera, tendramos ms degradacin y mayor concentracin de urato; entonces esta va de rescate hace que se regule un poco y podamos de alguna manera mejorar la parte de la insolubilidad del urato porque parte de los nucletidos los estamos rescatando y aprovechando nuevamente para utilizarlos como nucletidos y no degradarlo hasta urato. Esta imagen es de la degradacin de las purinas en que tenemos a partir del AMP se forma inosina, a partir del GMP se libera la base Xantina (donde se unen las dos vas). Hay un medicamento que es el alopurinol, se utiliza mucho para inhibir este metabolismo, para que no se forme tanto acido rico, actuando a nivel de la enzima xantina oxidasa que transforma la

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hipoxantina en xantina y est en acido rico. Entonces el alopurinol, un anlogo de la hipoxantina, es el inhibidor de la xantina oxidasa que se utiliza con ms frecuencia, siendo este un inhibidor competitivo de la xantina oxidasa.

La degradacin de las pirimidinas no es complicada, porque los productos son solubles, no hay ningn problema en el catabolismo de las pirimidinas en el que se forma metilmalonil-coa y succinato finalmente. En resumen esto es una visin general del metabolismo de los nucletidos, donde vemos que se tiene que formar todo los nucletidos ya sea los ribo o desoxiribonucleotidos, sirven para la sntesis de DNA, tambin se aprecia en este esquema la relacin que existe entre ellos para la sntesis de RNA. Y todo se forma a partir de precursores sencillos, como aminocidos, azucares de 5 carbonos, carbamoilfosfato, etc. Y es as como se van formando todos los nucletidos. Otro aspecto de cmo se puede utilizar la va de rescate, es en la produccin de anticuerpos monoclonales. En la produccin de anticuerpos monoclonales uno inyecta determinado antgeno en ratones, luego se asla clulas del bazo, y esas clulas uno las fusiona con clulas tumorales para formar hibridomas. Estas clulas del bazo no tienen la propiedad de sobrevivir muchas generaciones ya que ellas tienen una determinada vida y despus mueren, sin embargo las clulas tumorales tienen la propiedad de inmortalidad (dividirse y dividirse), entonces los hibridomas (fusin) van a poder sobrevivir por muchas generaciones. Cuando se hace la fusin de estas clulas del bazo (que estn produciendo estos anticuerpos) con las clulas tumorales no todas las clulas se fusionan, quedando clulas tumorales, clulas del bazo e hibridomas,

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entonces seleccionamos las clulas que pueden fusionarse y para eso se usa un medio llamado medio HAT. El medio HAT contiene hipoxantina, aminopterina y timidina. Al agregar aminopterina inhibimos la sintesis de los nucleotidos de purina y del nucleotido timina. Estas celulas tumorales no tienen la via de rescate activa, por lo tanto si nosotros colocamos aminopterina en el medio, como estas celulas tumorales no tienen via de rescate ellas a pesar de que se podrian dividir mueren porque no van a tener nucleotidos para poder replicar su ADN. Pero estas celulas al fusionarse con las del bazo si tienen la via de rescate, entonces el hibridoma sobrevive porque las clulas del bazo aportan la via de rescate y la celula tumoral aporta la sobrevivencia. Y de esa manera el hibridoma sobrevive. Por esa razon nosotros agregamos hipoxantina para poder utilizar la via de rescate y poder sintetizar AMP y GMP, y como tambien tenemos inhibida la sintesis de pirimidas tenemos que tambien dar estos nucleotidos. La via de rescate se utilza para seleccionar los hibridomas en la porcion de anticuerpos monoclonales. Y asi van a sobrevivir y vamos a tener distintos hibridomas y vamos a ver cuales son los que nos van a servir. *Las celulas tumorales no tienen via de rescate*

Patologas asociadas
Sindrome de Lesh Nyhan Se ha visto que la deficiencia de Hipoxantina guanina fosforribosil transferasa (enzima de la va de rescate) es un defecto gentico ligado al sexo masculino; una de las consecuencias es la alta produccin de acido rico, pero se genera una serie de anormalidades (neurolgicas, retardo mental, comportamiento autodestructivo o automutilacin), acumulacin de la fosforibosil pirfosfato, aumenta la sntesis de purina, pero no est claro la relacin de estos efectos con las anormalidades. Gota Enfermedad que se caracteriza por niveles elevados de acido rico, la acumulacin afecta a los riones y urteres por medio de los clculos, tambin es una deficiencia que se ha visto en la HGPRT, va acompaado con una deficiencia de glucosa 6-fosfatasa, pero tampoco est muy clara la relacin. Ambas enfermedades se alivian con el alopurinol. Inmunodeficiencia combinada severa Es una deficiencia de la enzima adenosina desaminasa, que es la que convierte adenosina en inosina, entonces no hay formacin de inosina y se ha visto que esa causa produce una destruccin de los linfocitos B y T. Al no estar esta enzima se acumula dATP en un alto porcentaje y se inhibe la ribonucleotidoreductasa lo cual inhibe la sntesis de otros ribonucleotidos y finalmente se inhibe la sntesis de DNA. Al destruirse los linfocitos B y T es grave en los nios recin nacidos con lo que respecta la parte inmunolgica. Aqu aparecen los llamados nios de burbuja. Hoy en da existe terapia gnica para esta enfermedad.

Replicacin del material gentico

Solamente cuando hay seales de proliferacin puede haber replicacin. Si una clula est en estado estacionario no hay replicacin, puede haber reparacin del DNA, es decir, parte del DNA

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que fue daado por radiacin UV puede ser reparado, pero replicacin solo est asociado a proliferacin. Esto sucede en procariontes y eucariontes. La replicacin como tal, es un proceso bien parecido en procariontes y eucariontes, los grandes sucesos son iguales, las enzimas son un poco distintas y los mecanismos un poco diferentes, pero se mantiene la universabilidad de este proceso. Cuando se postul el modelo de replicacin de Watson y Crick de la doble hlice, ellos inmediatamente propusieron que la replicacin era semiconservativa, es decir, una hebra va a servir como molde para sintetizar la hebra complementaria. Eso fue demostrado en un experimento muy sencillo que lo hizo Meselson y Stall Ellos vieron que si crecan bacterias en presencia de Nitrogeno 15. (Nitrgeno normal = 14, nitrgeno 15 es un isotopo pesado) Daban CsCl con nitrogeno15 entonces si ellos aislaban ah el DNA, ese DNA que estaba con N15 tena una posicin en el gradiente despus de una centrifugacin; si ellos crecan la bacteria solamente en nitrgeno liviano este DNA tena otra posicin al centrifugar (era ms alto), ellos se dieron cuenta de que al tener bacterias nada ms que con nitrgeno liviano (N14) podan diferenciarlo de las bacterias que haban sido crecidas en Nitrogeno pesado, porque su DNA tena una distinta posicin despus de ser centrifugado en un gradiente de CsCl. Es decir si nosotros tenemos bacterias que crecieron en N14 y otra muestra de bacterias que crecieron en N15, si a estas bacterias nosotros le asilamos el DNA y este DNA lo colocamos en un gradiente de CsCl la molcula va a tomar una determina posicin en el gradiente. Ellos dijeron: Qu pasa si estas bacterias que tenemos en N15 las cambiamos a un medio con N14? Estas bacterias en la primera generacin, les aislaron el DNA y vieron la posicin que ocupa en el gradiente, si fuera una replicacin conservativa la podemos diferenciar de una replicacin semiconservativa; porque si es semiconservativa la primera generacin seria una hebra N15 y otra de N14 y ese DNA si lo analizamos, no puede estar ni arriba ni abajo, tiene que estar al medio; y si hubiera sido conservativa se hubiera obtenido de las dos. Al analizar muestras de la primera generacin se encontr con que su DNA estaba en una posicin intermedia, al analizar ahora una segunda generacin (estas mismas bacterias se siguieron creciendo en N14 Dnde debera estar? Debera estar ms arriba, pero debera mantenerse la fig.2, por que este N15/14 en la segunda generacin me va a dar 15/14, 14/14, 14/14 y 15/14 entonces debera tener de los dos; y en la segunda l se encontr con que tenia los dos. Y qu debera pasar al seguir analizando una tercera y cuarta generacin Cul debera ir aumentando? La banda de arriba aumenta y disminuye la de abajo. De esa manera 5 aos despus se demostr en forma experimental que lo que haba postulado Watson y Crick era correcto, que la replicacin es semiconservativa, y esa es una caracterstica de la replicacin en procariontes y eucariontes.

Enzimas de replicacin
Uno de los investigadores fue Kowbery el encontr la primera actividad que l llam DNA polimerasa, en un extracto de bacterias si el colocaba nucletidos radiactivos, estos eran incorporados al DNA, entonces haba una actividad enzimtica que poda incorporar nucletidos al DNA. Como fue la primera que se encontr se llam DNA polimerasa I y existen tambin DNA pol II y III esto en procariontes. Y se encontr que las caractersticas de la DNA polimerasa tanto en eucariontes como en procariontes es solamente elongar cadenas, es decir son

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capaces de volcar nucletidos a cadenas preexistentes, NO pueden formar la primera unin fosfodiester. Qu es lo que hace la DNA polimerasa? Si nosotros tenemos una cadena, ellas, si hay otro pedazo de cadena y tiene el extremo 3OH ese nucletido libre, pueden ah ir agregando otro nucletido, se crea la unin fosfodiester, se libera pirofosfato y el nucletido que se agrega va a depender del nucletido que estaba, y as esta cadena puede ser elongada. Eso es lo que hacen las DNA polimerasa, elongan cadenas, agregan nucletidos, trifosfato, liberan pirofosfato y formndose la unin fosfodiester. Se ha visto que la estructura de la DNA polimerasa se asemeja a una estructura como el de la mano por donde pasa el DNA, entonces hay un sitio cataltico que incorpora el nucletido, produce la unin y de esa manera se va elongando la cadena, pero esta DNA polimerasa I se vio que no solamente tena esta actividad de polimerizar sino que tena dos actividades ms. 1. Teniendo la actividad polimerasa 5-3 (va agregando nucletidos al extremo 3 , entonces la cadena va creciendo del extremo 5- 3) 2. Actividad exonucleasa 3-5 3. Actividad exonucleasa 5-3. La misma polimerasa tiene 3 actividades catalticas. En el caso de la DNA polimerasa de E.coli, es una DNA polimerasa que tiene las tres actividades catalticas, es una enzima polifuncional.

Es una ventaja que la misma DNA polimerasa que esta agregando los nucletidos tenga la actividad exonucleasa, ya que est agregando nucletidos (en actividad polimerasa 5-3) pero a su vez tiene la actividad 3-5exonucleasa, es decir puede ir sacando los nucletidos, puede ir corrigiendo si es que hay errores. No se producen tantos errores en la replicacin por que la DNA polimerasa tiene esa posibilidad de que si no se agreg el nucletido adecuado, lo desconoce y lo saca. Esta actividad correctora es importante, para que no haya cambios de nucletidos en la replicacin y por eso la velocidad de mutacin es mucho menor si la comparsemos con la ausencia de esta actividad. La enzima una vez que se une agrega muchos nucletidos antes de que sea cambiada, eso se llama procesividad, es decir, la enzima se une, comienza a agregar nucletidos y despus de un tiempo se libera, y eso hace que la replicacin sea bastante rpida; porque si cada vez que se agregara un nucletido tuviera que entrar otra DNA polimerasa seria

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muchsimo ms lento; por eso es importante que una de las caractersticas es la procesividad que tienen las enzimas. En procariontes, los largos de la cadena que sintetiza la DNA polimerasa es mucho mayor que en eucariontes (en eucariontes hay procesividad pero menor). Las DNA polimerasas de eucarionte (Tabla 12.5) tienen otra nomenclatura. Las que participan en la replicacin son la delta, psilon y alfa. Algunos eventos que suceden a medida que est siendo replicado un fragmento del DNA, son por ejemplo: Todas las DNA polimerasa pueden elongar la cadena de extremos 5-3, qu pasa con la hebra complementaria; porque si la replicacin avanza, no hay ninguna DNA polimerasa que elongue en el otro sentido; por muchos aos se preguntaron Cmo se sintetiza la otra hebra? Porque la otra hebra est en el otro sentido y no hay ninguna DNA polimerasa que trabaje en el otro sentido, y ah se encontraron que la otra hebra se sintetiza a pedazos a travs de fragmentos, y estos fragmentos son los que se llaman fragmentos de Okazaki, entonces debido a que la DNA polimerasa slo elongan cadenas en sentido 5-3, la replicacin de la hebra complementaria que va en el otro sentido se soluciona a travs de la sntesis de los fragmentos de Okazaki. Los fragmentos de Okazaki en procariontes son mucho ms grandes, y los de eucariontes son ms cortos. Los de procariontes son de aproximadamente 1000 -2000 nucletidos, en eucarionte son alrededor de 200 nucletidos. Ahora como las DNA polimerasa no pueden sintetizar la primera unin fosfodiester (porque ellas solamente elongan), los primeros nucletidos los sintetiza una enzima que es la RNA polimerasa que puede sintetizar RNA y ella si puede iniciar cadenas; los RNA se sintetizan copiando una hebra de DNA, ellas si pueden iniciar cadenas. Pero, no podemos nosotros tener en el fragmento de Okazaki un pedazo de DNA y despus RNA y nuevamente DNA y RNA; esto no existe una vez que el DNA termino de ser replicado, entonces tienen que eliminarse los RNA en el procesamiento de estos fragmentos de okazaki. De tal manera que al salir los RNA, van a ser reemplazados por nucletidos. Entonces debido a que las DNA polimerasa no pueden iniciar cadenas, se inicia a travs de fragmentos cortos de RNA, estos fragmentos cortos de RNA son sintetizados por una RNA polimerasa especial, y a partir del extremo 3OH la DNA polimerasa elonga. Y estos RNA tienen que ser eliminados y los DNA tienen que ser unidos y aqu est la otra actividad de la DNA polimerasa I por ejemplo en procariontes que tiene la actividad exonucleasa 5-3, porque en un momento la DNA polimerasa I se junta con el RNA y como ella puede cortar desde el extremo 5,

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empieza a degradar los RNA y a agregar los otros nucletidos y posteriormente una ligasa une los fragmentos y queda solamente DNA. Como las DNA polimerasas no pueden iniciar cadenas los hacen los RNA polimerasa, pero en el procesamiento de los fragmentos de Okazaki, el fragmento que va ms atrs choca con el RNA y la DNA polimerasa I por actividad 5-3va cortando el RNA y va elongando, quedando justo los dos fragmentos, viene la DNA ligasa y los une. Entonces al final no hay RNA de la replicacin. La que sintetiza el fragmento de RNA en procariontes es la RNA polimerasa. La que sintetiza el fragmento de RNA en eucariontes es la DNA polimerasa que tienen una actividad primasa. La hebra que no tiene ningn problema para seguir elongandose es la llamada hebra conductora. La otra hebra que se sintetiza a partir de los fragmentos de Okazaki se llama hebra no conductora o hebra ms retrasada en la replicacin.

Cmo se llaman las enzimas que sacan los fragmentos de RNA? La misma DNA polimerasa I puede ir cortando los fragmentos de RNA Se llama primosoma a la enzima que est sintetizando el partidor y que generalmente est unida a una ligasa. DNA POLIMERASAS Escherichia coli Mamferos - DNA Pol Iniciacin sntesis DNA DNA Pol I Sntesis DNA, reparacin - DNA Pol Reparacin DNA Pol II Reparacin - DNA Pol Sntesis DNA mitocondrial DNA Pol III Sntesis DNA (principal) - DNA Pol Sintesis DNA (principal) DNA Pol IV-V Reparacin - DNA Pol , , No definida

RESUMEN -Los replicones contienen al menos un origen de replicacin y se replican bidireccionalmente -La replicacin comienza con una secuencia orquestada de interacciones en los orgenes de replicacin -Las polimerasas sintetizan en direccin 5-3 y necesitan cebador -La DNA Pol III es la responsable de la Replicacin -La DNA Pol I contribuye a la replicacin -La sntesis de las dos hebras est coordinada: DNA Pol III -El primosoma define la progresin de la replicacin -El ciclo celular est coordinado con la replicacin: si hay replicacin hay divisin