FUNDAMENTOS DE BIOQUIMICA PARA CIENCIAS BIOLOGICAS, AGRONOMICAS E FLORESTAIS

PROF. DR. LUIZ ANTONIO GALLO PROF. DR. LUIZ CARLOS BASSO

2010

FUNDAMENTOS DE BIOQUIMICA PARA CIENCIAS BIOLOGICAS, AGRONOMICAS E FLORESTAIS

PERMITIDO A REPRODUO DESDE QUE SEM FINS LUCRATIVOS

Prof. Dr. Luiz Antonio Gallo Prof. Dr. Luiz Carlos Basso 5/19/2010

ESCOLA SUPERIOR DE AGRICULTURA LUIZ DE QUEROZ UNIVERSIDADE DE SO PAULO ESALQ USP

FUNDAMENTOS DE BIOQUIMICA PARA CIENCIAS BIOLOGICAS, AGRONOMICAS E FLORESTAIS MATERIAL DIDATICO PARA OS ALUNOS DE GRADUAO CONTEM TEXTOS DA INTERNET MATERIAL INCOMPLETO AINDA EM FASE DE REDAO

PROFS. LUIZ ANTONIO GALLO LUIZ CARLOS BASSO Departamento de CIENCIAS BIOLOGICAS

PIRACICABA =2010=

NDICE Conceitos se objetivos...........................................................................................1 Carboidratos ........................................................................................................3 Lipdios ..............................................................................................................13 Aminocidos ......................................................................................................22 Protenas ............................................................................................................35 cidos Nuclicos ...............................................................................................44 Energtica Bioqumica .......................................................................................52 Enzimas ..............................................................................................................60 Gliclise .............................................................................................................76 Ciclo de Krebs ....................................................................................................82 Cadeia Respiratria ............................................................................................86 Via Pentose Fosfato ............................................................................................90 Metabolismo dos Triglicerdios ..........................................................................93 Metabolismo Degradativo das Protenas e Aminocidos ....................................99 Integrao do Metabolismo .................................................................................106 Excreo do Nitrognio .......................................................................................111 Fotossntese .........................................................................................................116 Ciclo do Nitrognio .............................................................................................135 Biossntese de Protenas ......................................................................................157

BIOQUMICA ELEMENTAR CONCEITO E OBJETIVOS A Bioqumica o ramo da qumica que se preocupa com as transformaes moleculares dos constituintes celulares. Ao conjunto dessas transformaes denominamos Metabolismo. Dependendo da organizao estrutural atingida pelas molculas, o metabolismo pode ser dirigido no sentido de sntese (anabolismo) ou de degradao (catabolismo). Durante o metabolismo degradativo, molculas estruturalmente complexas so demolidas em entidades mais simples, ao passo que a fase anablica se caracteriza pela formao de estruturas moleculares mais complicadas a partir dessas entidades mais simples. O anabolismo e o catabolismo ocorrem concomitantemente numa clula viva. Esses constituintes celulares tambm denominados de biomolculas, se apresentam em elevado nmero nas diferentes espcies. Assim estima se que em uma clula da bactria E. coli existam 3000 diferentes protenas e nenhuma delas semelhantes s 100.000 diferentes protenas encontras na clula humana. Levando se em considerao o nmero de espcies animais e vegetais calcula se em 1010 ou 1012 o nmero de diferentes protenas. Embora as macro biomolculas sejam extremamente numerosas, elas so formadas de um nmero relativamente pequeno de algumas molculas simples (os blocos construtivos). Assim todas as inmeras protenas so formadas pela unio de 20 diferentes aminocidos. Os cidos nuclicos so formados por 8 diferentes nucleotdeos. Os cidos nuclicos so formados de glicerol e alguns cidos graxos, e os polissacardios por uns poucos monossacardios. Todas as molculas encontradas na clula desempenham uma ou mais funes, dentre as quais podemos mencionar: a . funo estrutural: constituem o arcabouo ou envlucro, como as membranas, limitando matria viva (protoplasma) e as vezes compartimentalizando os processos bioqumicos, ou quer como esqueleto sustentando e dando forma ao organismo. b. Funo energtica: quando atravs da degradao de tais compostos, a energia qumica encerrada nas ligaes covalentes (C-C C-H e C-OH) de alguma forma utilizada para a sntese de ATP (adenosina Trifosfato). O ATP posteriormente empregado na realizao dos diversos trabalhos fisiolgicos (contrao muscular, excreo, transporte ativo, etc) bem como nas atividades de biossntese ou anabolismo. 5

A bioqumica, embora uma cincia recente, no pode ser considerada uma extenso da Qumica Orgnica, se reduzindo uma coleo dos compostos orgnicos encontrados na clula e suas propriedades. Atualmente assentada em seus prprios princpios, fundamentados na Lgica molecular da vida, a Bioqumica a cincia que tem por objetivo estudar, no seu maior grau de intimidade, ou seja, ao nvel molecular, a natureza dos diversos processos biolgicos (respirao, crescimento, transmisso da hereditariedade, fotossntese, etc) que ocorrem nos organismos vivos, quer animais ou vegetal, superiores ou inferiores. FUNDAMENTOS DE QUIMICA ORGANICA FUNES Como se forma o nome do composto? Com base na estrutura ou cadeia fundamental vamos indicar as caractersticas especiais do composto. Estas caractersticas so indicadas por meio de prefixos e sufixos e por meio de nmeros (para as localizar). Quando existe mais do que um tipo de substituinte, aplicam-se as regras de prioridade indicadas na tabela seguinte. O grupo principal indicado pelo sufixo correspondente. Os outros grupos funcionais eventualmente presentes na molcula sero indicados por prefixos. Priorid Classe ade 1 Caties 2 3 4 5 cidos carboxlicos cidos sulfnicos Sais steres Grupo -COOH -(C)OOH -SO2OH -COOM -(C)OOM -COOR -(C)OOR -COX -(C)OX -CONH2 -(C)ONH2 -C(=NH)NH2 Sufixo -nio cido ...carboxlico cido ... ico cido ... sulfnico ..carboxilato de M -..(o)ato de M ..carboxilato de R -..(o)ato de R halogeneto de ..carbonilo halogeneto de ..(o)ilo -carboxamida -amida -carboxamidina CarbamoilAmidinoPrefixo

CarboxiSulfoCarboxilato de M R-oxicarbonil

Halogenetos de cidos

Haloformil-

7 8

Amidas Amidinas

-(C)(=NH)NH2 -amidina

9 10 11

Nitrilos Isocianetos Aldedos

-CN -(C)N -NC -CHO -(C)HO

-carbonitrilo -nitrilo -isonitrilo -carbaldedo -al

CianoIsocianoFormilOxo-

12 Cetonas -(C)O -ona Oxo13 Alcois -OH -ol Hidroxi14 Fenis -OH -ol Hidroxi15 Tiis -SH -tiol Mercapto16 Aminas -NH2 -amina Amino17 Iminas =NH -imina Imino(Os tomos de carbono entre parntesis fazem parte da cadeia (ou estrutura) do composto primitivo, pelo que so includos no nome do composto primitivo e no no sufixo) Nombres de grupos Funcionales en orden de prioridad. El grupo funcional que se encuentre ms abajo de la tabla ser el de mayor orden de prioridad y se usar como sufijo Si mas de un grupo funcional se encuentra presente el que tenga mayor prioridad se usar como sufijo y los otros como prefijos. Modelo

Sufixo -amina -tiol -ol -tiona -ona -al -nitrilo

Prefixo Amino mercapto Hidroxi Tiol oxo Oxo ciano *

- NH2 - SH - OH

-amida Haleto de -anoila Ac. -sulfonico Acido -oico -oato

Sulfo carboxi * -

* Estos prefijos el nombre incluye el carbono del grupo funcional. Cuando se cuente no debe de contarse este carbono 1- Efeito Indutivo na cadeia carbnica Analise o esquema abaixo:

Na ligao C - C numa sucesso s de tomos de carbono os eltrons da ligao esto equidistantes de cada tomo. J numa sucesso de carbonos terminada por um elemento muito eletronegativo, como o cloro, por exemplo, ocorre uma deslocalizao de eltrons das ligaes C - C por causa do efeito da ligao C - Cl. Esse efeito chamado efeito indutivo. O cloro funciona com um ponto de atrao eletrnica, "puxando" para si os eltrons da ligao com o carbono ligado a ele. como uma trilha de domin em que as peas caem umas sobre as outras: o cloro atrai para si os eltrons da ligao com o carbono ligado a ele; este, por sua vez, fica com uma certa "deficincia eletrnica" e, por isso, atrai para si os eltrons da ligao com o carbono seguinte, tentando compensar

essa deficincia, e assim sucessivamente. Isso acaba gerando uma polarizao na cadeia carbnica. Do ponto de vista do efeito indutivo, existem duas espcies de grupos que podem se ligar a uma cadeia carbnica: Grupos eltron-atraentes (efeito indutivo -I): So aqueles que atraem os eltrons das ligaes em sua direo. Os mais importantes grupos eltronatraentes so aqueles que possuem elementos muito eletronegativos em relao ao carbono (F, O, N, Cl, Br, I etc.) ou radicais insaturados. Os radicais insaturados possuem ligaes pi, que por efeito de ressonncia, iro atrair os eltrons das ligaes em sua direo. Grupos eltron-repelentes (efeito indutivo +I): So aqueles que "empurram" os eltrons das ligaes em direo oposta a eles. Os mais importantes grupos eltron-repelentes so os radicais saturados (alquila) e os que possuem carga eltrica negativa. Nos radicais alquila, quanto mais tomos de C e H (com simples ligaes) tiver o radical mais eltron-repelente ele ser. 2- Algumas consequncias do Efeito Indutivo 2.1) A estabilidade dos carboctions: Uma consequncia importantssima do efeito indutivo relaciona-se com a estabilidade do carboction numa reao qumica em que h formao desta espcie como intermediria no processo. O tipo de carboction formado pode determinar que produtos sero formados e em que propores relativas. O carboction um on que possui um carbono com apenas trs ligaes (sp2), isto , possui uma carga positiva. Experimentalmente verifica-se uma grande facilidade de se formarem carboctions tercirios (cuja carga positiva est num carbono tercirio) em relao a carboctions secundrios ou primrios. Essa estabilidade diminui do carboction tercirio para o secundrio e deste para o primrio. Veja abaixo a possvel explicao para esse fato:

Nesse caso, a carga positiva funciona como o centro de atrao eletrnica na cadeia. Perceba que no carboction primrio apenas um sentido de corrente eletrnica est disponvel para compensar a deficincia de eltrons do carbono sp2. J no secundrio existem dois sentidos de corrente, e no tercirio, trs sentidos. Logicamente, quanto maior a disponibilidade eletrnica para compensar a carga positiva, maior a facilidade do carboction e maior a facilidade de ser formado. Muitas vezes, devido alta instabilidade, os carboctions primrios nem chegam a se formar. A no ser que as condies do meio em que ocorre a reao sejam favorveis sua formao. Maiores detalhes sero vistos adiante nas reaes qumicas que passam por carboctions. 2.2) Fora de cidos e bases: Outra conseqncia interessante do efeito indutivo relaciona-se com a fora de cidos e bases orgnicos. Carter cido - Vejamos um cido carboxlico que possui um grupo de induo ligado cadeia. Esse grupo pode ser eltron-atraente ou eltronrepelente:

No primeiro caso (a) o grupo X eltron-atraente. O efeito indutivo -I e, portanto, deixa a carbonila com dficit eletrnico, o que leva a um enfraquecimento da ligao com o hidrognio cido. Logo, ser mais fcil a liberao do prton. Assim, o carter cido aumenta. 10

No segundo caso (b) o grupo X eltron-repelente. O efeito indutivo +I e, portanto, deixa a carbonila com supervit eletrnico, o que leva a um aumento da fora de ligao com o hidrognio cido. Logo, ser mais difcil a liberao do prton. Assim, o carter cido diminui. Carter bsico - Vejamos agora o que ocorre com uma amina (base orgnica):

Segundo a teoria de Lewis, base uma espcie qumica que possui um ou mais pares eletrnicos no-ligantes, ou seja, capaz de coordenar pares eletrnicos. Dessa forma, assim como a fora de um cido est relacionada com a sua capacidade de receber eltrons, a "fora" de uma base relaciona-se com sua capacidade de coordenar eltrons. Logo, quanto maior a disponibilidade eletrnica em uma espcie qumica, maior ser seu carter bsico. No primeiro caso (a) o grupo X eltron-atraente. O efeito indutivo -I e, portanto, deixa o grupo amino com dficit eletrnico, o que leva a uma diminuio do seu carter bsico. No segundo caso (b) o grupo X eltron-repelente. O efeito indutivo +I e, portanto, deixa o grupo amino com supervit eletrnico, o que leva a um aumento do seu carter bsico.

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CARBOIDRATOS 1. CONCEITO Quimicamente podem ser definidos como aldedos ou cetonas poliidroxilados ou substncias que mediante hidrlise liberem tais compostos. Apresentam uma formulao geral Cx (H2O) Y, com raras excees. Assim a desoxirribose (encontrada no DNA) apresenta frmula C5H1004, onde a relao H:O no de 2:1. Igualmente pode nos encontrar carboidratos com outros elementos alm do C, H O. Embora no muito freqente, N, S e P podem integrar molculas de carboidratos. Outras denominaes: hidratos de carbono, acares, glucdios e glcides.

2. ESTEREOISOMERIA TICA um fenmeno muito difundido entre os carboidratos, e vem a ser decorrncia do composto apresentar um ou mais tomos de carbono assimtrico na molcula. tomo de carbono assimtrico aquele que se liga a 4 radicais diferentes, e resulta, geralmente, que os compostos que os apresentam se mostram oticamente ativos, ou seja, desviam o plano da luz polarizada. Se o desvio for para a direita, o composto dito de dextrorrotatrio (+) e se para a esquerda levorrotatrio (-). Como referncia utilizando o gliceraldeido que apresenta 2 ismeros ticos:

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As configuraes D e L esto relacionadas com o posicionamento da hidroxila (OH) do carbono assimtrico mais distante do grupo funcional (aldedo ou cetona), e necessariamente nada tem com as propriedades dextro ou levorrotatria desses compostos, exceto para o gliceraldedo. 3. CICLIZAO DE PENTOSES E HEXOSES Dependendo do comprimento da cadeia carbnica os carboidratos podem adquirir uma estrutura cclica mantida pela ligao hemiacetal. Esta ligao explica a baixa reatividade dos grupamentos aldedos e cetonas de alguns acares. Assim, a molcula de glicose pode se dobrar de modo a permitir uma aproximao entre o grupo aldedo do carbono 1 com a hidroxila do carbono 5, estabelecendo a ligao hemiacetal: Configuraes e conformaes lcools reagem com grupos carbonilas de aldedos e cetonas formando um hemiacetal ou um hemicetal, respectivamente (figura 4). Da mesma forma, a hidroxila e o grupo aldedo ou grupo cetona de um monossacardeo podem reagir intramolecularmente para formar hemiacetais ou hemicetais cclicos. Tais configuraes podem ser representadas atravs da projeo de Haworth. Um monossacardeo composto por um anel de seis membros chamado de piranose, enquanto um monossacardeo formado por uma anel de cinco membros chamado de furanose (figura 5).

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4. CLASSIFICAO DOS CARBOIDRATOS Segundo uma complexidade so estrutural os carboidratos podem ser classificados em monossacardios, oligossacardios e polissacardios. 4.1. Monossacardios: So os mais simples dos acares, no sofrem hidrlise; possuem baixo peso molecular e so solveis em gua. Apresentam sabor doce, so cristalinos quando no estado slido. So todos considerados acares redutores. Os monossacardios se subdividem segundo o nmero de tomos de carbono na molcula: N de tomos de C Nome genrico Representantes de importncia fisiolgica 2 diose glicaldeido 3 triose gliceraldeido, dihidroxiacetona 4 tetrose eritrose, treose 5 pentose xilose, xilulose, ribose 6 hexose glicose, frutose, manose, galactose 7 heptose sedoheptulose 8 octose _ _ 9 nonose _ _

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4.2. Oligossacardios: So aucares compostos que hidrolisados originam monossacardios; so classificados de acordo com o nmero de monossacardios que

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so liberados por molculas: dissacardios, trissacardios, tetrassacardios, pentassacardios e hexassacardios. Estudaremos apenas alguns dissacardios. sacarose: - glicose - 1,2 - frutose maltose: - glicose - 1,4 - glicose lactose: - galactose 1,4 glicose celobiose: glicose 1,4 glicose trehalose: glicose 1,1 glicose

Maltose

celobiose

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Os dissacardeos so formados por dois monossacardeos unidos por ligao covalente. Existem vrios dissacardeos presentes na alimentao, como, por exemplo:

Trealose = glicose + glicose a (1-1); Celobiose = b-glicose + b-glicose (1- 4); Maltose (1 - 4) e a Iso-maltose (1 - 6): duas molculas de glicose e esto presente no malte (maltose) e so subproduto da digesto do amido e glicognio (isomaltose); Lactose glicose + galactose (1- 4): o principal carboidrato do leite; Sacarose: glicose + frutose (1 - 2), sendo a forma mais comum de acar, obtida da cana-de-acar.

Acar redutor: aquele que apresenta um grupo aldedo ou um grupo cetnico livre, isto , no participante de ligao glicosdica. A ligao hemiacetal, responsvel pela estrutura cclica de alguns aucares, no compromete o carter redutor. Os aucares redutores so assim chamados por poderem reduzir o on Cu++ em meio alcalino.

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reativo 1 - Tese de Fehling sol. Cupro alcalina 2 - Teste de Benedict 3 - Reao de Molish 4- de Bial 5- de Tollens 6 - de Seliwanoff

detecta a.redutores glicose geral AR pentoses pentoses frutose

colorao vermelho azul anel prpura azul rosa vermelho

4.3 Polissacardios: So compostos que por hidrlise liberam grande nmero de monossacardios. So inspidos, insolveis em gua e amorfos no estado slido. Apresentam elevado peso molecular. Diversos representantes desempenham funes estrutural e energtica nos diversos organismos. a. Amido: reserva energtica dos organismos vegetais, constitudo de amilose e amilopectina. A amilose constituda de - glicose mantida pela ligao - 1,4 glicosdica, apresentando peso molecular entre 4.000 e 150.000. A amilopectina formada de - glicose mantida por ligaes - 1,4 e - 1,6 com peso molecular de at 500.000.

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b. Glicognio: Reserva energtica dos organismos animais, estruturalmente semelhantes amilopectina, porm mais ramificado, isto , com maior proporo de ligaes 1,6, o que torna a molcula mais compacta. Apresenta peso molecular de at 2.000,000.

c. Celulose: Formada de - glucose unidas pela ligao - 1,4; constitui a parede celular das clulas vegetais.

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d. Quitina: Constitui a carapaa (exoesqueleto) dos insetos e crustceos. um polmero de N acetil - - glicosamina, altamente insolvel.

Sob o mar Descobrindo a rtentabilidade que existe nos desperdicios marinhos Por Nancy Garcia

A quitina um polissacardeo formadora da carapaa dos insetos e crustceos. um produto

do processamento industrial de camares, siris, lagostas, e tem novas e prometedoras aplicaes industriais. A quitina um polissacardeos formado pela polimerizao de resduos de N-acetil glicosamina. o segundo produto orgnico mais abundante que existe na natureza depois da celulose. o principal componente da cutcula dos artropodos, crustceos e insetos, estando presente em moluscos e forma parte das paredes celulares de alguns microorganismos como fungos e leveduras. Entre suas principaius caractersticas esta a abundancia, ser biodegradvel e no txica. A carapaa dos crustaceos e camares representam a primeira fonte para se obter quitina. As carapaas alem de conter quitina, tambm contem pigmentos vermelhos e protenas com a mesma qualidade da carne do crustceo. A quitina e um polmero muito grande parecido com a celuilose. Por no ser degradvel em gua, e necessariose modificar a estrutura do polmero para se obter seus derivos solveis. Dentre estes derivados esto a qutinase, empregada como biocida , como bactericida, fungicida e herbicida, e o quitosam que serve para o tratamento de guas industriais e como um ingrediente nutritivo, pois ajuda a eliminar o colesterol, ajuda previnir doenas cardiovasculares e tem efeito anti gstrico e anti atritico.

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O quitosan aplicado em industrias papeleiras, permite que a polpa tenha maior fora para fixar as tintas e os corantes dostecidos. Na industria de alimentos empregado como espumante e emulsificante.

A travs de dicho polmero se encapsulan medicamentos de liberacin prolongada. Se emplea como biomaterial para hacer lentes de contacto, hilos de sotura y prtesis, ya que tiene la propiedad de ayudar a la regeneracin de huesos. En el rea de la ciruga plstica ayuda al reestablecimiento de los tejidos, evita la mala cicatrizacin, sirve para la fabricacin de piel sinttica y es un agente que inhibe las infecciones en heridas. Es material para la creacin de pelculas envolventes que prolongan la vida de los alimentos perecederos como envases biodegradables. (Para ahondar en este tema, consulte la seccin Marketing de esta edicin y considere los beneficios de emplear estos envases en su negocio).

Las oportunidades
Mxico es uno de los pases con mayor produccin de camarones al ocupar el sptimo lugar a nivel mundial (casi 100 mil toneladas de peso vivo durante 2001, segn datos de Sagarpa). Tambin se producen, en promedio, 20 mil toneladas anuales de jaiba, tres mil 500 de langostino y casi tres mil toneladas de langosta (todos en peso vivo). Es posible capturar estas especies en la regin comprendida del Atlntico, la pennsula de Yucatn y el Golfo de Mxico. En la regin al Este de la Repblica se ha reportado la produccin de una langostilla que, debido a su tamao pequeo, no sirve para consumo y se considera ms una plaga al ser capturada junto con el camarn y causar un sobrepeso que rompe las redes. Esta langostilla no se ha aprovechado ampliamente (slo se le utiliza para la creacin de harina para granjas camaroneras), sin embargo, se ha calculado que tiene una produccin anual de 250 mil toneladas que se queda varada en las costas originando un verdadero problema ambiental. Sera ideal utilizarla para producir quitina. En la captura de crustceos slo se aprovecha su carne, quedando los caparazones como desperdicios; Escudero expresa que "a partir de este desperdicio se puede comenzar toda una industria dedicada a la produccin de quitina y sus diferentes derivados". Por su parte, Patricia Miranda comenta que el costo de una empresa dedicada a la produccin de quitina se calcula alrededor de dos millones de pesos por el tipo de instalaciones y equipo que se usa en el proceso. Escudero comenta que para instalarla se necesita bsicamente un reactor de desmineralizacin, otro de desproteinizador, molino, secador y fermentador. Los productos pueden ser refinados lo cual aumenta su valor, por lo que se debe contar con espectrofotmetro, centrifugadora, balanza, autoclave y agitadora. La inversin en maquinaria es de alrededor de un milln de pesos. El precio de la materia prima, las

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cutculas de los crustceos, no se ha establecido al ser un desperdicio, por lo mismo ambas investigadoras afirman que se puede llegar a un acuerdo con las cooperativas camaroneras para determinar un valor. La quitina en el mercado tiene un costo aproximado de US$20 por kilo, la quitinasa refinada con alto grado de desacetilacin tiene un precio de US$300, diez gramos; mientras que el quitosn de baja calidad llega a US$70 por kilo. "Una de las ventajas es que no se necesita personal especializado, slo capacitado para poder operar los reactores y conocer el proceso", afirma Miranda.

Los mercados
De acuerdo con Escudero, la quitina y sus derivados tienen uso potencial en diferentes pases, principalmente Japn, China y Estados Unidos. En todos ellos ya existe una industria consolidada alrededor de este polmero, siendo China el principal productor y exportador de quitina. Chile y Espaa estn en una fase incipiente, a la par de Amrica Latina. En Mxico es prcticamente un tema nuevo, no obstante, ya existe una empresa que comienza a abrirse camino en este campo: Neptuno, ubicada en Sonora. Representantes de Neptuno comentaron que, junto con un grupo de investigadores, llevan a cabo una serie de actividades como participar en exposiciones o en conferencias para promover sus productos, a pesar de que mundialmente el uso de la quitina y sus derivados va en aumento. De hecho hay amplias posibilidades de exportarlo a la Unin Americana y algunos pases latinoamericanos.

Recoleccin de caparazones
Una posibilidad para poder entrar en el negocio sin tener que realizar una inversin tan importante al inicio, consiste en recolectar los caparazones, limpiarlos y molerlos, que es el proceso primario para la elaboracin de la quitina. El caparazn molido se puede vender a las empresas que elaboran el compuesto y de ah capitalizar para adquirir el equipo necesario para la fabricacin del polisacrido. De hecho, empresas como Neptuno y otras en Estados Unidos, estn dispuestas a comprar los caparazones limpios sin necesidad de molerlos. Para ello slo se necesita establecer las formas de recoleccin, sin dejar de considerar que entre ms jvenes sean los crustceos mayor ser la cantidad y calidad de las sales de calcio; contar con secadoras y grandes cantidades de agua. En caso de no contarse con los secadores se pude secar al sol, en un terreno amplio y colocar limpios los caparazones. Existen institutos y empresas dedicadas al diseo de envase y embalaje (Instituto Mexicano de Profesionales en Envase y Embalaje) que en estos casos dan asesora para enviar el producto con costos reducidos.

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El ejemplo de la quitina es uno de los tantos avances cientficos que ha tenido una aplicacin prctica en la industria, y por ende abre brecha para desarrollar ms de uno de los tantos negocio del futuro.

Cientos de posibilidades
El quitosn sirve para: En tratamiento de aguas residuales. En la elaboracin de pulpa para papel estndar, fotogrfico y carbn. En el campo mdico y de salud se le emplea en la creacin de vasos sanguneos artificiales, como antinflamatorio, inhibidor de tumores y de placa dental, antiviral y procesos de cicatrizacin. Tambin se usa en la formacin de esponjas y vendas para heridas, as como en la confeccin de ropa estril para personas convalecientes. Es un material que protege contra la radiacin. En el sector de alimentos es un aditivo para la estabilizacin del color, conservadores y remocin de slidos. En el rea cosmtica se usa para fabricar polvo para maquillaje, barniz de uas, humectante, fijadores para el cabello, crema humectante, pasta de dientes. En la agricultura se utiliza para el recubrimiento de semillas y hojas, fertilizantes y liberacin de controlada de agroqumicos.

La quitina y su potencial industrial

Como un escudo de alta eficiencia construido con pura qumica, una sustancia que forma parte del carapazn defiende a insectos, crustceos, moluscos y otros seres vivos de su contacto con lo externo. La poseen en diversa cantidad jaibas, camarones, langostas, araas y cucarachas. Incluso algunos hongos y algas. Se llama quitina y es un compuesto natural con variados beneficios para el ser humano, til en las industrias farmacutica, de alimentos, cosmtica y de empaques. De basura a materia prima que filtra agua contaminada, ofrece consistencia a alimentos procesados, atrapa grasa, es antibactericida y sirve como envoltura biodegradable, entre otros beneficios, la quitina est involucrada en la proteccin de varias especies. Su nombre, derivado del griego ktos, significa cavidad o bveda, y el sitio en que se encuentra, el caparazn de muchos artrpodos, tambin refiere su capacidad para enfrentar a diversos agentes externos. Despus de la celulosa, es el segundo polmero ms abundante en el planeta, por lo que su utilizacin a gran escala en Mxico es muy prometedora, como lo ha sido en Japn, en donde alrededor de 250 empresas explotan la quitina.

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Una investigadora de la Universidad Nacional Autnoma de Mxico (UNAM), la maestra en ciencias Patricia Miranda Castro, estudia desde hace siete aos la quitina y su principal derivado, el quitosn. En el Laboratorio de Biotecnologa de la Facultad de Estudios Superiores Cuautitln (FES-C), esta qumica farmacobiloga ha logrado una metodologa propia para extraer la quitina y el quitosn del camarn, utilizando caparazones y cabezas de los crustceos que para la industria pesquera son desechos. "Mxico es el sptimo productor de camarn en el mundo, as que muchas toneladas de cabezas del crustceo regresan al mar cada ao, y grandes cantidades de caparazones se tiran da a da en las marisqueras de todo el pas. Nos parece interesante sumarnos a un proceso en donde la sustancia que buscamos est en lo que otros consideran basura", explica la maestra Miranda, quien en su laboratorio ha ensayado durante varios aos una forma eficiente para obtener la quitina. La patente de esta metodologa para la extraccin, obtencin y purificacin de la quitina y el quitosn est en trmite ante el Instituto Mexicano de Propiedad Industrial y de otorgarse la UNAM podr realizar transferencias tecnolgicas con este producto de origen natural. De la marisquera al laboratorio La quitina es un polmero, es decir, una molcula de gran tamao constituida esencialmente de azcares (es un polisacrido) y oxgeno. Sus molculas son fibrosas, y logran un material de gran resistencia qumica y mecnica. "Las caractersticas ms tiles para la industria estn en el quitosn, un derivado de la quitina. As que lo primero que hicimos fue conseguir en las marisqueras caparazones de diversos animales, estudiar en donde existe la sustancia en mayor cantidad, y desarrollar un mtodo propio para extraer la quitina y transformarla en quitosn. Encontramos que los caparazones de jaibas y langostas tienen ms calcio y menos quitina, mientras que las de camarn, ms blandas, contienen mayor cantidad de la sustancia", explica la especialista. Ya en el laboratorio, los caparazones se limpian, se muelen hasta pulverizarse y se someten a un proceso de hidrlisis cida, utilizando cido clorhdrico, el cual convierte a los carbonatos en cloruros y solubiliza los minerales, bsicamente el calcio. Ya desmineralizado, se aplica una hidrlisis alcalina, pues el lcali que se usa rompe la estructura de la matriz y hace solubles las protenas, las cuales arrastran consigo grasas y pigmentos, componentes todos que constituyen el caparazn. Los pigmentos ya separados (de colores rosa y anaranjado) son un subproducto del proceso que pueden utilizarse para alimentar flamingos y salmones, especies a las que les ayuda a mantener su color caracterstico. Despus de ambas etapas se obtiene la quitina en polvo, que no es soluble en agua, lo que lo hace poco prctica para su aplicacin. As que se somete a un proceso llamado "desacetilar", que significa quitar de la sustancia una parte de su estructura, el grupo acetilo. Con esto se obtiene como derivado el quitosn, presente en el 70 por ciento de la quitosina, pero ahora ya aislado y purificado.Esta metodologa es una innovacin tecnolgica de la maestra Patricia Miranda Castro. 26

Las cualidades del quitosn El quitosn es soluble en agua acidificada. Esta solubilidad y su viscosidad (que puede hacerse ms espesa o ms ligera, segn se requiera) son caractersticas que lo hacen aplicable a usos variados, as como su accin de "imn bioqumico", capaz de detectar sustancias nocivas. Por ejemplo, en el estmago humano, atrapa grasas como el colesterol y los triglicridos, a los que conduce por el intestino capturados hasta evacuarlos. As que una aplicacin farmacutica lo utiliza como regulador del peso corporal, mientras que tambin sirve como regulador de la presin arterial, consecuente a la disminucin de grasas. En la industria de alimentos este derivado de la quitosina se utiliza para dar consistencia y viscosidad a los aderezos para ensaladas y mayonesas, mientras que en las frutas y verduras frescas sirve como un protector antimicrobiano. Otras aplicaciones estn en la industria de los cosmticos, en donde el quitosn se introduce en cremas humectantes, pues es una molcula que absorbe el agua. Algunos fabricantes de shampoo lo utilizan como ingrediente, ya que desarrolla una pelcula que da proteccin y brillo al cabello. En la industria papelera, donde el principal insumo es la celulosa, el quitosn sirve para fijar y dar resistencia al papel, mientras que una de sus ms prometedoras aplicaciones podra ser como plstico biodegradable, sustituyendo al plstico tradicional derivado del petrleo, uno de los materiales ms utilizados en el mundo y ms difciles de degradarse, lo que genera mucha contaminacin. Como material plstico alternativo, el quitosn ya ha sido sometido a pruebas en el Laboratorio de Biotecnologa de la maestra Patricia Miranda Castro, quien desarroll una especie de celofn a partir de esta sustancia natural, "una envoltura que incluso podra comerse", finaliza la especialista universitaria. e. Outros polissacardios estruturais e de reserva: Entre os principais polissacardeos de reserva em plantas esto o amido, os frutanos e os polissacardeos de reserva de parede celular (PRPC). Como compostos de reserva, o amido e os frutanos possuem as vantagens de serem formados por glucose e frutose, respectivamente. Esses acares so prontamente utilizados pelo metabolismo de gerao de energia e tambm fornecem carbono para a biossntese da maioria das biomolculas presentes em clulas vegetais. Cada um dos principais polissacardeos de reserva apresenta caractersticas que fazem com que eles sejam mais convenientes para o metabolismo em certas situaes. Uma dessas caractersticas o fato que nenhum deles possui radicais livres. Esta uma vantagem quando 27

comparada ao acmulo de monossacardeos, uma vez que a presena de tais compostos poderia levar glicosilao inespecfica de elementos celulares. Outra vantagem a relativa inatividade osmtica dos polmeros.

A tabela

a seguir resume as principais caractersticas dos trs tipos de grupos mais

importantes de polissacardeos de reserva de plantas. Estas evidenciam diferentes funes considerando como eles so degradados e seus locais de deposio na clula e na planta.

Composto reserva Amido

de Biossntese

Mobilizao

Localizao

Localizao na planta e Sementes, caule,

celular A partir de ADP- Hidrlise por Plastdeos glucose fosforilao de Hidrlise por grnulos citossol Vacolos fluido

no folhas, frutos e rgos e Folhas, razes, caules e rgos subterrneos e rgos

Frutanos

partir

sacarose PRPC

transglicosilao A partir de Hidrlise

apoplstico e Parede celular Sementes

UDP/GDP acares transglicosila no Golgi complexo de o

subterrneos

Dextrana polissacardios elaborado pelo Leuconostoc mesenteroides a partir de sacarose. Causa viscosidade no caldo de cana bem como diminui o rendimento da cristalizao da sacarose. POLISSACARDEOS DE PAREDE CELULAR (PRPC) Os polissacardeos de reserva de parede celular (PRPC) so relativamente inertes no que concerne sua reatividade qumica e apresentam 28

diferentes graus de solubilidade em gua. Essas caractersticas conferem : alta compactao e baixa reatividade e tornam possvel a existencia de um compartimento celular ( a parede celular) que permite o fluxo de gua com um grau de liberdade considervel. O custo para produzir tais polmeros alto, pois tais compostos necessitam de um complexo sistema de biossntese, secreo e montagem no meio extracelular. A biossntese dos polissacardeos de parede celular requer nucleotdeoacares como doadores de monossacardeos. Na tabela a seguir esto relacionados alguns dos polissacardeos de parede e seus respectivos nucleotdeo-acares doadores. Polissacardeos Nucleotdeos-acares Celulose UDP-glucose Calose UDP-glucose Glucanos de cadeia mista UDP-glucose Xiloglucano UDP-glucose, UDP-galactose, UDPxilose e GDP-fucose Galactomanano GDP-manose, UDP-galactose Glucoronoarabinoxilanos UDP-arabinose, UDP-xilose, UDPdico galacturnico Ramnogalacturonano GDP-ramnose, UDP-dico galacturnico

FRUTANOS Os frutanos encontram-se entre os carboidratos alternativos de reserva mais amplamente distribudos entre as plantas superiores, sendo encontrados em aproximadamente 15% das angiospermas. A presena de frutanos em Asteraceae foi amplamente documentada para a flora de regies temperadas e para a flora tropical e subtropical em regio restrita do cerrado brasileiro. A maioria das espcies ricas em frutanos encontra-se fora da regio tropical, sendo mais abundantes em reas onde o crescimento sazonal. Vrios autores sugerem que o acmulo de altas concentraes de frutanos e de acares solveis pode contribuir para o aumento do potencial osmtico das clulas e por conseguinte promover tolerncia seca e ao congelamento. Os frutanos so acumulados em rgos fotossintetizantes como folhas e caules, em rgos subterrneos de reserva como razes tuberosas, tubrculos e bulbos, e em inflorescncia e sementes. Nas clulas, os frutanos e as enzimas envolvidas em seu metabolismo so encontrados nos vacolos, embora recentemente sua presena e a da enzima frutaexohidrolase tenham sido detectadas no fluido apoplstico.

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Frutanos consistem de sries homlogas de oligo e polissacardeos no redutores, onde cada membro da srie contm um resduo a mais de frutose do que o membro anterior. Esses polmeros de D - frutose carregam um resduo de D - glucose geralmente localizado na extremidade da cadeia, unido por uma ligao do tipo 1,2 como na sacarose, sendo assim o frutano mais simples um monofrutosil sacarose, um trissacardeo. O trissacardeo que d origem srie da inulina, a 1- cestose ou 1- cestotriose (1 - F - frutosil sacarose, -glu-1,2- -fru-1,2-fru), foi o primeiro a ser caracterizado por Bell e colaboradores (Pollock et al. 1996 e referncias ali contidas). A 1-cestose encontrada em todas as espcies que acumulam frutanos, mesmo naquelas onde a srie predominante apresenta outro tipo de ligao entre os resduos de frutose. Cinco classes estruturais de frutanos foram identificadas (figura 11): a) frutano baseado em 1-cestose, com ligaes - 2,1 (inulina), encontrado principalmente em Asterales (ex.: tubrculos de Helianthus tuberosus); b) frutano baseado em 6-cestose com ligaes - 2,6 (levano), caracterstico de Poales (ex.: folhas de Phleum pratense); c) frutano com ligaes mistas e ramificados, com glucose na extremidade da cadeia, tambm encontrado em Poales ( ex.: Triticum); d) frutano baseado em neocestose com ligaes - 2,1, encontrado em Liliaceae ( ex. : Asparagus ) e e) frutano baseado em neocestose, com ligaes -2,6, presente em alguns membros de Poales ( ex. : Avena ).

Pectinas A pectina o maior constituinte da parede celular primria e tambm est presente na lamela mdia entra as clulas de todos os tipos. Contm uma alta concentrao de resduos de cido D-galacturnico unidos por ligaes (1-4). Dentre as pectinas encontrados : Homogalacturonanos: que apresentam predominante ou exclusivamente esta estrutura (cido galacturnico e resduos metilgalacturonados) como mostrado na figura 15. ramnogalactoruronanos : contm resduos de L-ramnose. Neste caso, o cido galacturnico se liga ramnose por ligao(1-2), e a ramnose ao outro resduo de cido galacturnico por ligao (1-4). Os resduos de ramnose servem como pontos de ancoragem para cadeias laterais se unirem, ramificando o polmero (figura 16). Galactanos : Existem dois tipos de galactanos. Um formado por ligaes - 1,3-1,6 com algumas ligaes - 1,4 e o outro, mais frequente composto (figura 17) por ligaes -1,4 com ramificaes de L-arabinofuranose a cada 16-21 resduos da cadeia principal. Aps a germinao, maior parte da galactose e arabinose removida da parede, deixando um material residual enriquecido em ramnose, cido urnico e glucose. Matheson e Saini (1977) reportaram a presena de

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duas -arabinosidases e trs -galactosidases em cotildones de Lupinus luteus, estas enzimas aumentaram aps a germinao e os autores levantaram a possibilidade do galactano estar envolvido no controle da expanso celular, alm de ser um polissacardeo de reserva. Hemicelulose Alguns autores consideram hemicelulose o material extrado da parede por extrao alcalina. Para outros, trata-se de um polmero da parede celular com um tipo particular de estrutura molecular e com provvel funo de mobilidade. Dentre as hemiceluloses encontramos:

Galactoglucomananos: (figura 18) molcula linear, cadeia cam resduos de D-glucopiranose e D-manopiranose unidos por ligaes (1-4). Difere da celulose pela presena dos resduos de manose. A razo manosil:glucosil geralmente 3. A cadeia de glucomanano apresenta curtas ramificaes: resduos de D-gactopiranosil unidos por ligaes (1-6) aos resduos de manose. Arabino-4-O-metilglucuronoxilano: polmero linear de D-xilose unidos por ligao (1-4), com cadeias laterais de dois tipos: resduos de 4-Ometil D-glucurnico unidos xilose por ligao (1-2) ou resduos de Larabinose unidos xilose por ligao (1-3) (figura 19). 4-O-metilglucuronoxilano: cadeia de resduos de D-xilopiranose unidos por ligao (1-4) e substitudo por resduos de 4-O-metil-Dglucurnico unidos por ligao (1-2) na cadeia de xilose. Glucomananos: semelhantes estrutura de galactoglucomananos, com a glucose e a manose unidas por ligao (1-4). Xilanos de parede secundria de gramneas, (figura 20) aparece grande variedade de cadeias laterais curtas 1-4) D-xilano), incluindo: L- arabinofuranose no carbono 2 ou 3 da xilose -D-glucosano e 4-O-metil-D-glucuronopiranose no carbono 2 da xilose cadeias laterais mais complexa, contendo galactose e xilose Glucanos de cadeias mistas (1-3) e (1-4), figura 21. Xiloglucano de sementes apresentam uma cadeia principal de -D-1,4glucano ramificada com ligaes -1,6 por resduos de Dxilopiranosdeos ou -D-galactopiranosdeos-(1,2)-D-xilopiranosdeos (figura 22). Exceto pela ausncia de terminais fucosil ligados [-L-(1,2)] nos grupos -D-galactosdeos, existe uma grande semelhana entre xiloglucanos de reserva (em sementes) e xiloglucanos estruturais de paredes primrias. Teriam funes no controle da embebio de gua e xeroproteo. Foi proposta uma nomenclatura para os blocos estruturais de xiloglucano com base na cadeia principal. Glucoses no substitudas so denominadas G, glucoses ramificadas com xilose so denominadas X e se a galactose est ligada xilose, o trissacardeo

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denominado L. As propores entre estas unidades demonstraram a existncia de estruturas finas (distribuio das ramificaes de galactose) especficas entre as diferentes espcies e entre populaes de mesma espcie crescidas em diferentes ambientes. Apesar das diferenas em estrutura fina, todos os xiloglucanos de sementes examinados apresentam proporo de monossacardeos muito prxima, preservando, desse modo, o total de ramificaes com galactose de forma independente da sua distribuio. J foram isoladas as quatro principais enzimas responsveis pela degradao de xiloglucano em Tropaeolum majus, sendo : uma endo--1,4-glucanase especfica para xiloglucano ou xiloglucano endo-transglicosilase (XET); uma galactosidase com alta especificidade para xiloglucano; uma xilosidase ou oligoxiloglucano exo-hidrolase especfica para oligossacardeos de xiloglucanos e uma -glucosidase. No modelo proposto por Crombie et al. (1998) as quatro enzimas atacam o polmero de um modo sincronizado, produzindo galactose, glucose e xilose livres. Embora nenhuma evidncia direta indique ainda que os xiloglucanos de sementes tenham dupla funo, esta proposio pode ser feita com base no fato de que os xiloglucanos possuem propriedades hidrodinmicas muito semelhantes s encontradas em galactomananos, isto , os xiloglucanos teriam funes no controle da embebio de gua e xeroproteo. interessante observar que, as relaes entre estrutura e funo em xiloglucano esto nas mudanas de estrutura fina que so tambm relacionadas com o posicionamento das galactoses na molcula. O grau de ramificao dos mananos define suas relaes estrutura-funo. Quanto menos ramificado, maior a indicao de que a funo biolgica est relacionada com a dureza e a proteo do embrio. Por outro lado, quanto maior o grau de ramificao, mais solvel o polissacardeo e maior a participao deste em funes como as relaes hdricas. Mananos e galactomanos so molculas multifuncionais, desempenhando suas funes durante fases distintas do crescimento e desenvolvimento das plantas.

Mananos puros so artificialmente definidos como contendo mais de 90% de manose formando uma cadeia linear do tipo 1,4 sem ramificaes, podendo ou no o restante estar ramificado com galactose. So estruturalmente relacionados aos galactomananos, apenas apresentando um grau menor de ramificao com galactose. Abaixo de 10% de ramificaes, os mananos tornam-se insolveis e precipitam rapidamente em soluo aquosa. Assim, os mananos so estruturalmente relacionados aos galactomananos, apenas

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apresentando um grau menor de ramificao com galactose. Os mananos, portanto, apresentam alto grau de interatividade intermolecular, formando cristais na parede celular, o que confere dureza e diminui sua solubilidade. So encontrados em endospermas de sementes de espcies como Phoenix dactylifera, Phytelephas macrocarpa e Coffea arabica. Aparentemente tem outras funes alm de reserva, eles conferem dureza s sementes que os acumulam e isso pode ser associado com um sistema de proteo do embrio contra danos mecnicos. Sendo assim, os mananos exerceriam as funes de constritor e protetor mecnico do embrio e tambm de polissacardeos de reserva. Galactomananos so compostos por uma cadeia linear de resduos de manose unidas por ligaes glicosdicas -1,4 qual resduos de galactose esto unidos por ligaes do tipo 1,6 (figura 23). Os galactomananos ocorrem tipicamente em endospermas de sementes de leguminosas. A razo manose:galactose e a distribuio dos resduos de galactose ao longo da cadeia de manose variam de espcie para espcie, sendo importante para estudos quimiotaxonomicos e evolutivos. As trs famlias de Leguminosae podem ser distinguidas utilizando-se este parmetro. A mobilizao de galactomananos foi estudada em leguminosas, sendo detectada a presena de trs enzimas hidrolticas (-galactosidase, endo--mananase e -manosidase) confirmando que a mobilizao do galactomanano ocorre atravs da hidrlise. Em todos os casos estudados, o polissacardeo desmontado at seus monossacardeos constituintes (manose e galactose) ao mesmo tempo em que h produo de sacarose. Alm do papel de reserva, o galactomanano influencia no fluxo de gua devido a sua maior solubilidade nos primeiros estgios da germinao. Este polissacardeo absorve grande quantidade de gua e redistribui ao redor do embrio. O endosperma embebido protege o embrio contra perda de gua atravs de um efeito conhecido como tampo de gua durante perodos de seca ps-embebio. 5. FATORES ANTINUTRITIVOS DE NATUREZA GLUCDICA: a. Linamarina: carboidratos cianognio encontrado em certas variedades

Mecanismo de detoxicao da planta: CN + S2O3 = SCN + SO3 = O tiocianato (SCN) impede a captao de iodo pela tireide, causando o bcio.

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A intoxicao crnica com cianeto (CN), acarreta a Neuropatia Tropical, que se caracteriza por alterao irreversveis das clulas nervosas, provocando falta de coordenao dos movimentos e uma apatia generalizada. A ocorrncia de bcio no litoral nordeste brasileiro pode ser atribudo ao elevado consumo de produtos de mandioca. b. Fatores causadores de flatulncia: Muitos legumes ( feijo, soja, etc. ) apresenta os oligossacardios rafinose, estaquiose e verbascose, que escapam digesto por no termos a enzima galactosidase, no sendo, pois, absorvidos ao nvel do intestino delgado. As bactrias do intestino grosso metabolizam esses aucares produzindo CO2, H2e abaixando o ph, So pois, responsveis pela flatulncia quando d ingesto de legumes. c. Glucosinolatos: Substncias encontradas nas crucferas, especialmente do gnero Brassica, que diminuem o valor biolgico dos alimentos. Manifestam atividades bocgena, acarretando hipertrofia das tireides. So comumente encontradas em couve, repolho, nabo, mostarda, colza, etc. El potencial teraputico de algunas verduras Por el Dr. Hctor E. Solrzano del Ro Coordinador de Medicina Ortomolecular del Centro de Estudios de Medicina Integradora de la Universidad Autnoma de Guadalajara y Presidente de la Sociedad Mdica de Investigaciones Enzimticas, A.C. El indol-3-carbinol es un producto derivado de la glucobrasicina glucosinolato tambin conocido como indol-3-glucosinolato. Los glucosinolatos se encuentran principalmente en los vegetales crucferos (brcoli, col, col de Bruselas, coliflor, col rizada, nabos, etc.). Entre las recomendaciones que se dan para seguir una buena dieta, est el consumir diariamente 5 raciones de verduras frescas y 5 raciones de frutas frescas. En un antiguo tratado Romano de medicina se afirma que "si aparece una lcera cancerosa en las mamas, aplquese una hoja de col machacada y se pondr bien". Con el machacar una hoja de col, el indol-3-glucosinolato se convertira en indol-3-carbinol entre otras reacciones (Albert-Puleo M. Physiological effects of cabbage with reference to its potential as a dietary cancer-inhibitor and its use in ancient medicine. J Ethnopharm, 1983; 9:261-272). El propio I-3-C no es activo. Cuando el I-3-C entra en contacto con el cido gstrico se convierte en sus metabolitos activos, el diindoilmetano y el indoilcarbazol. Por eso, el I-3-C administrado parenteralmente no produce metabolitos activos. En la actualidad, sabemos que el I-3-C puede modular el metabolismo de los estrgenos. Tambin puede tener efectos anti-aterognicos, antioxidantes y anticancergenos. El I-3-C puede estimular a las enzimas naturales desintoxicantes de nuestro cuerpo.

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Se ha demostrado que los metabolitos estrognicos 16 alfa-hidroxiestrona y 4-hidroxiestrona son cancergenos y se cree que son responsables los posibles efectos cancergenos del estrgeno. Por otro lado, se ha descubierto que el metabolito estrognico 2-hidroxiestrona es protectora contra varios tipos de cncer, incluyendo el cncer de mam. Se ha demostrado que el I-3-C aumenta la relacin de 2-hidroxiestrona a 16 alfa-hidroxiestrona y tambin inhibe la 4-hidroxilacin del estradiol (Bailey GS, Hendricks JD, Shelton DW et a. Enhancement of carcinogenesis by the natural anti-carcinogen indole-3-carbinol. J Natl Cancer Inst. 1987; 78:931-934). Algunos estudios han demostrado que el I-3-C restaura la funcin del gen supresor p21, retrasa la propagacin de clulas aberrantes de prstata y mama e induce la apoptosis de clulas aberrantes. Como ya lo mencion arriba, el I-3-C induce la sntesis de 2-hidroxiestrona. Se he descubierto que la 2-hidroxiestrona inhibe la oxidacin de la lipoprotena de baja densidad. Esto nos indica que el I-3-C tiene un efecto antioxidante indirecto. Parece que la 2-hidroxiestrona tambin tiene la capacidad de inhibir la proliferacin del msculo liso. La inhibicin de la proliferacin de msculo liso y la inhibicin de la oxidacin de LDL son importantes para los efectos antiaterognicos del I-3-C. Algunas de nuestras investigaciones nos han demostrado que el I-3-C puede ser til para inhibir la formacin de quistes de papilomatosis causados por el virus del papiloma humano, incluyendo en la boca, los pulmones y las cuerdas vocales. Parece que el tratamiento con I-3-C durante 12 semanas causa una regresin completa de la neoplasia intraepitelial cervical en el 50 % de las pacientes con estadio II-III de la NIC (Bell MC, Crwoley Nowick P, Bradlow HL et al. Preliminary results of the use of indole-3-carbinol in the treatment of CIN. Gynecol Oncol 2000; 78:123-9). Hay un estudio que reporta por primera vez que el I-3-C ejerce efectos anticancerosos en las clulas tumorales pancreticas in vitro. Se ha demostrado que el I-3-C inhibe el crecimiento de varias lneas de clulas cancerosas ovricas lo mismo que sobre el cncer de mama y de prstata. El ensayo mencionado se enfoc en los efectos anticancergenos en varios biomarcadores moleculares y celulares del cncer de pncreas. Se investigaron los efectos del I-3-C sobre la proliferacin celular, la apoptosis, la expresin de la DT-diaforasa, la expresin de Cox-1 y 2, la expresin de NFkappaB y sus efectos sobre la invasin celular tumoral. Una de las claves acerca de la causa del envejecimiento es que los animales senectos desarrollan autoinmunidad. La autoinmunidad consiste en que el cuerpo se hace alrgico a sus propias clulas y empieza a destruirlas. Los autoanticuerpos provocan una respuesta inflamatoria crnica. Cuando los autoanticuerpos atacan, por ejemplo, a las articulaciones, se presenta la artritis reumatoide. Se conocen aproximadamente 60 enfermedades autoinmunes. Entre stas, encontramos a la esclerosis mltiple, la alopecia areata, el vitligo, la espondilitis anquilosante, etc. El tratamiento convencional se basa en la administracin de corticoides e inmunosupresores, lo cual causa graves efectos adversos (Alving CR, Swartz GM Jr. Antibodies to cholesterol, 35

cholesterol conjugates and liposomes: implications for atherosclerosis and autoimmunity. Crit Rev Immunol. 1991;10(5):441-53. Varios estudios realizados en algunas universidades en ratones autoinmunes -- los cuales usualmente desarrollan enfermedad renal mortal autoinmune-- mostraron buenos resultados con el I-3-C. El I-3-C tiene un efecto importante protector contra la autoinmunidad. Las pruebas demostraron que este complemento alimenticio redujo drsticamente la enfermedad renal autoinmune. Despus de un ao, todos los animales que recibieron el complemento todava estaban vivos, comparado con solamente el 30 % de los controles. Dos meses ms tarde, todos los controles haban muerto, mientras que muchos de los ratones que recibieron el I-3-C sobrevivieron otros 6 meses y unos pocos sobrevivieron durante ms de 20 meses; casi el 50 % ms que los ratones controles. Se ha notado en forma interesante que la restriccin calrica podra tener los mismos efectos en los ratones autoinmunes (Ogura M, Ogura H, Lorenz E, Ikehara S, Good RA. Undernutrition without malnutrition restricts the numbers and propor tions of Ly-1 B lymphocytes in autoimmune (MRL/I and BXSB) mice. Proc Soc Exp Biol Med. 1990 Jan;193(1):6-12). La restriccin calrica revierte la autoinmunidad y extiende el perodo de vida. Pues bien, se cree que el I-3-C puede imitar los efectos de la restriccin calrica y prolongar el perodo de vida (Howitz KT, Bitterman KJ, Cohen HY, et al. Small molecule activators of sirtuins extend Saccharomyces cerevisiae life span. Nature. 2003 Sep 11;425 (6954):191-6. Epub 2003 Aug 24). El I-3-C y la restriccin calrica afectan a un proceso conocido como metilacin (Morse MA, LaGreca SD, Amin SG, Chung FL. Effects of indole-3-carbinol on lung tumorigenesis and DNA methylation induced by 4-(methylnitrosamino)-1-(3- pyridyl)-1butanone (NNK) and on the metabolism and disposition of NNK in A/J mice. Cancer Res. 1990 May 1;50(9):2613-7). Puedo mencionar que la metilacin es una reaccin bioqumica que sucede en forma natural dentro de nuestro cuerpo. Este proceso disminuye con la edad y se altera con la autoinmunidad (Yung R, Ray D, Eisenbraun JK, et al. Unexpected effects of heterozygous dnmt1 null mutation on age-dependent DNA hypomethylation and autoimmunity. J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 2001 Jun;56(6):B268-76). Las ltimas tendencias en la investigacin nutricional y oncolgica estn examinando cmo ciertos compuestos fitoteraputicos afectan a los genes, utilizando microarreglos de ADN. Los microarreglos para el I-3-C muestran que esta substancia natural ejerce un potente efecto en los genes relacionados con el cncer. Entre otras cosas, estas substancias activan a los genes tumorales supresores, a otros genes que destruyen a las clulas cancerosas y a los genes que nos desintoxican de agentes qumicos. Tambin el I-3-C suprime genes que capacitan a las clulas cancerosas a comunicarse con otras clulas. Esta capacidad para entrar en las clulas cancerosas y activar o desactivar genes es una poderosa arma contra el crecimiento del cncer. Esta habilidad para ejercer estos efectos sin alguna toxicidad (como lo hace el I-3-C) lo convierte en un agente quimiopreventivo extremadamente deseable.

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En pocas palabras, el I-3-C se usa para la prevencin y tratamiento del cncer de mama, cncer de colon y otros tipos de cncer. Tambin se usa oralmente para fibromialgia, papilomatosis larngea, displasia cervical y en varias enfermedades autoinmunes como el lupus eritematoso sistmico. Varios estudios demuestran que es til para equilibrar los niveles hormonales, desintoxicar a los intestinos y el hgado y para apoyar al sistema inmunolgico

Couve-brcolo - potenciais efeitos anticancergenos

Ana Sofia Rodrigues
(1),

Eduardo Rosa

(2) (1)

Escola Superior Agrria de Ponte de Lima, Mosteiro de Refoios, 4990-706 Ponte de Lima, Portugal,

(2)

Universidade Trs-os-Montes e Alto Douro, Dpt. Fitotcnia, Apartado 202, 5001-911 Vila Real, Portugal.

Resumo As plantas da famlia Brassicaceae, incluindo a couve-brcolo, apresentam um grupo de compostos secundrios, os glucosinolatos, com reconhecidas propriedades anticancergenas, especialmente os hidrolisados do glucosinolato glucorafanina e dos glucosinolatos indlicos. Contudo, os potenciais benefcios na sade dependem das concentraes destes compostos que por sua vez dependem das variedades consumidas e das condies de crescimento da cultura. Neste estudo, avaliou-se a variao do teor em glucosinolatos, nas inflorescncias primrias e secundrias de onze cultivares de couve-brcolo, em duas estaes de crescimento, Primavera-Vero e Vero-Inverno. Os teores em glucosinolatos foram significativamente superiores no Vero-Inverno. Nesta estao os teores mais elevados ocorreram nas inflorescncias secundrias. O grupo dos glucosinolatos indlicos representou entre 19 e 77% dos totais. A glucorafanina foi o glucosinolato que surgiu em maior concentrao (>500 moles.100 g-1 PS) em todas as cultivares. Considerando o potencial efeito anticancergeno do isotiocianato derivado da glucorafanina, sulforafano, a cultivar Shogun destaca-se das outras por apresentar maiores teores desse glucosinolato.

3- Butenilglucosinolato (GLUCONAPINA)

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38

39

40

2- Hidrxi 3- butenil glucosinolato (PROGOITRINA) CH2 = CH CH CH2 NCS + HSO 4 + C6H12O6 ( - glicose) OH 2- Hidrxi 3- butenil isotiocianato 5- Vinil oxazolidina 2- tiona (5-vinil-2-tioxazolidina) (GOITRINA)

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Lipdios
1. CONCEITO Os lipdios constituem, juntamente com os carboidratos e protenas outra classe de substncias consideradas como alimento. Os seus representantes so compostos bastante heterogneos, das mais variadas funes qumicas, que se caracterizam pela insolubilidade em gua e solubilidade em solventes orgnicos (ter, acetona, lcool, clorofrmio, etc.). Essa natureza hidrofbica conseqncia da natureza qumica da molcula, que possui extensas cadeias de carbono e hidrognio, lembrando muito os hidrocarbonetos. So considerados os mais energticos dos alimentos devido a essas cadeias hidrocarbonetadas, apresentando o tomo de carbono em estgio bastante reduzido, isto , com baixo nmero de oxidao, devido ao baixo teor de oxignio na molcula. Composio qumica elementar (%) Classe Protena Carboidratos Lipdios C 53 44 76 O 23 49 11 H 7 6 12 K cal/g________ N____________________ 16 4 _ 4 _ 9___________

Constituem, portanto, uma excelente opo para a clula viva ou organismo qualquer, o armazenamento de energia qumica na forma de lipdios. Do ponto de vista estrutural os lipdios constituem as membranas de permeabilidade diferencial como a membrana citoplasmtica e as membranas que revestem as organelas e outras entidades de atividade bioqumica especializadas (como o retculo endoplasmtico, o sistema lamelar dos cloroplastos, etc.). Alguns representantes dessa classe ainda desempenham funes altamente especializadas como algumas vitaminas e a clorofila (pigmento receptor da energia radiante no processo fotossinttico). 2. CLASSIFICAO Segundo suas propriedades qumicas, os lipdios podem ser classificados em: 2.1 Lipdios neutros glicerdios ceras monoglicerdios diglicerdios triglicerdios

2.2 fosfatdios 2.3 esfingolipdios 2.4 glicolipdios 2.5 lipoprotenas 2.6 terpenides carotenides esterides

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3. TRIGLICERDIOS Constituem a quase totalidade da frao lipdios de uma dieta alimentar ou uma reao animal. tambm a forma pela qual os organismos animais ou vegetais armazenam parte significativa da energia qumica. Quimicamente so steres do glicerol e cidos graxos, produtos esses que so obtidos mediante hidrlise dos triglicerdios. As propriedades fsicoqumicas os triglicerdios so regidas pela natureza dos cidos graxos integrantes, desde que o glicerol comum a todos eles. 3.1. Hidrlise dos triglicerdios: Existem 3 modalidades de se promover a hidrlise dos triglicerdios: 1. hidrlise cida (reversvel) 2. hidrlise alcalina ou reao de saponificao (irreversvel). 3. hidrlise enzimtica (pela ao das lpases) Da hidrlise alcalina resulta um sal sdico ou potssico (conforme se use NaOH ou KOH para a hidrlise) do cido graxo, o qual denominado de sabo, com propriedade detergente. Para que uma substncia manifeste propriedade detergente, a mesma deve apresentar em sua molcula, uma poro hidrofbica (apolar) e outra hidroflica (polar). Os detergentes, estabelecendo uma ponte, aproximando as molculas polares (gua) das molculas apolares (gordura), promove a solubilizao ou emulsificao das gorduras e dos leos. 3.2. cidos Graxos: So cidos carboxlicos que apresentam um radical R de natureza graxa ou apolar: R COOH, onde R deve se apresentar com mais de 4 tomos de carbono em estgio reduzido. De um modo geral, aumentando-se o nmero de tomos de carbono na molcula, aumenta-se o ponto de fuso do cido graxo (at 8 tomos de carbono os cidos carboxlicos so lquidos; com 1 e 2 tomos de C, so volteis). A presena da dupla ligao na cadeia do cido graxo diminui o ponto de fuso do mesmo.

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cidos graxos Saturados Lurico Mirstico Palmtico Esterico Araqudico Benico Lignocrico No-saturados Olico Vaccnico Ricinoleico Linoleico Linolnico Araquidnico Pouco comuns -alaioesterico Taririco Isnico Lactobacilico Vernlico

Estrutura CH3(CH2)10COOH CH3(CH2)12COOH CH3(CH2)14COOH CH3(CH2)16COOH CH3(CH2)18COOH CH3(CH2)20COOH CH3(CH2)22COOH

Ponto de Fuso 44 54 63 70 75 80 84

CH3(CH2)7CH= CH(CH2)7COOH CH3(CH2)5CH= CH(CH2)9COOH CH3(CH2)5CHOHCH2CH= CH(CH2)7COOH CH3(CH2)4(CH= CHCH2)2(CH2)6COOH CH3CH2(CH= CHCH2)3(CH2)6COOH CH3(CH2)4(CH= CHCH2)4(CH2)2COOH

CH3(CH2)3CH= CHCH= CHCH= CH

(CH2)7COOH CH3(CH2)10CC(CH2)4COOH CH2= CH(CH2)4C C C(CH2)7COOH C CH2

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Os leos de origem vegetal so triglicerdios que apresentam elevada proporo de cidos graxos poliinsaturados, que possuem baixo ponto de fuso, conferindo a esses triglicerdios o estado lquido temperatura ambiente (20-25C). J as gorduras de origem animal se apresentam no estado slido temperatura ambiente pelo fato de haver predominncia de cidos graxos saturados. Uma dieta rica leos vegetais aconselhvel s pessoas com distrbios cardiovasculares, possuidoras de elevados teores de colesterol no sangue. Tais problemas so manifestados pela arteriosclerose (endurecimento das artrias) e/ou ateroesclerose (diminuio da luz arterial). Sabe-se que o colesterol no inferior da clula se encontra livre ao passo que fora dela (no sangue, por exemplo) se encontra asterificado por cidos graxos. Dependendo da saturao do cido graxo, o mesmo pode propiciar a disposio do ster do colesterol na parede interna das artrias, diminuindo a luz das mesmas, causando os citados distrbios cardiovasculares. ster do colesterol com c. Graxo saturado

ster do colesterol com cido graxo poli-insaturado

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A margarina, obtida pela hidrogenao cataltica do leos vegetais com a finalidade de dar aos mesmos a consistncia slida da manteiga, no se constitui num substituto adequado desta, quando se pretende evitar os inconvenientes da gordura animal. Isto porque a caracterstica desejvel dos leos vegetais (presena de cidos graxos poliinsaturados) alterada quando se efetua a hidrogenao dos mesmos para se obter um produto de maior ponto de fuso

4. CRAS Quimicamente so steres de cidos graxos de cadeia longa com alcoois monohidroxilados tambm de cadeia longa (16 a 36 tomos de carbono) A . cra de abelha (palmitado de miricila)

B. cra de carnuba (cerotato de miricila)

Devido natureza das cadeias tanto do cido graxo como do lcool, tais compostos so bastante hidrofbicos, altamente insolveis em gua, razo pela qual plantas e animais optaram por uma camada cerosa para proteo e impermeabilizao. Assim certas plantas apresentam uma camada de cra (cutcula) para proteo da epiderme; aves aquticas efetuam a impermeabilizao das penas com auxlio de matria cerosa das glndulas cericgenas. 5. FOSFATDIOS So derivados do cido fosfatdico. Um representante desse grupo a lecitina, que est associada s membranas de permeabilidade diferencial, com funo ainda pouco conhecida, talvez regendo o transporte de substncias atravs dessas membranas.

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6. GLICOLIPDIOS Citamos os galactolipdios e sulfolipdios, encontrados no tecido fotossintetizador das plantas. Suas funes no so bem conhecidas. 7. LIPOPROTENAS So associaes entre protenas e lipdios, especialmente fosfolipdios, que se arranjam segundo a polaridade das molculas, sem envolvimento de ligao covalentes. As membranas de permeabilidade diferencial (citoplasmtica e aquelas que revestem as organelas celulares, bem como o retculo endoplasmtico e o sistema lamelar dos cloroplastos) so constitudos de lipoprotenas.

8. TERPENIDES, CAROTENIDES E OUTROS COMPOSTOS DE NATUREZA LIPDICA Como os lipdios congregam compostos da mais variada natureza qumica, encontramos representantes desempenhando funes altamente especializadas, alm daquelas j mencionadas (funes energtica e estrutural). Assim, algumas vitaminas bem como pigmentos receptores de energia radiante no processo fotossinttico, so exemplo de lipdios desempenhando outras funes.

AMINOACIDOS E PROTEINAS AMINOCIDOS 1. CONCEITO Como o nome indica, os aminocidos so compostos que carregam em suas molculas um grupo amino (de carter bsico) e um grupo carboxlico (de carter cido). So eles as entidades que constituem as protenas, e o conhecimento de suas estruturas se reveste de um particular interesse pelas propriedades que conferem molcula protica que integram. Ademais os aminocidos desempenham outras funes especficas, quer participando de processos biolgicos (ciclo da uria, por exemplo) ou se constituindo em substrato para muitos constituintes celulares. Os aminocidos encontrados normalmente nas protenas so identificados com sendo - Laminocido. Alfa ( ) porque o grupo amino (-NH2) se prende ao carbono de posio ,

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adjacente carboxila (-COOH), e L devido a configurao do grupo amino, tendo como referncia o D-gliceraldeido: 2. TITULAO DE AMINOCIDOS E EVIDNCIA DE SEU CARTER INICO Os aminocidos, via de regra so solveis em gua e insolveis em solventes orgnicos (clorofrmio, acetona, ter, lcool, etc.). Tal propriedade no coaduna com a estrutura geral formulada (R-CHNH2-COOH). Como sabe, os cidos carboxlicos e as aminas orgnicas so pouco ou quase insolveis em gua, especialmente os compostos de cadeia aliftica ou aromtica com diversos tomos de carbono. Outra propriedade fsica interessante o alto ponto fuso dos aminocidos, em situao oposta aos cidos carboxlicos e aminas que apresentam baixo ponto de fuso e bem definido. A real estrutura dos aminocidos pode ser visualizada em soluo considerando o seu comportamento como eletrlito. Assim, um aminocido pelo fato de conter um grupo carboxlico e um grupo amino, pode reagir tanto como uma base como um cido, sendo considerado uma substncia anftera. Se o amino cido estiver dissolvido em um meio cido ele se torna carregado positivamente (migra para o ctodo num campo eletrofortico); e se o meio for alcalino ele se torna carregado negativamente:

Para se melhor compreender o carter inico dos aminocidos inicialmente necessrio conhecer algumas caractersticas dos diversos grupos ionizveis. Para tal estudaremos as ionizaes da carboxila de um cido e do grupo amino de uma amina orgnica. 2.1 Titulao da carboxila de um cido (actico): O cido actico se ioniza, liberando prton (H+) conforme a equao: A constante de dissociao (K) do cido actico : Para esse valor de K, podemos afirmar que o cido actico um cido fraco, pois apenas uma pequena frao das molculas que se ionizam prton.

Aplicando-se logartimos:

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Quando o ph do meio for numericamente igual ao ph, Teremos:

Portanto:

Isto as concentraes das formas protonizada e desprotonizada se equivalem. Podemos concluir, portanto, que o ph de um grupo ionizvel corresponde a um valor de ph no qual coexistem as formas protonizada e desprotonizada em idnticas concentraes. Em outras palavras, o ph que corresponde semi-titulao ou semi-neutralizao do referido grupo ionizvel.

Curva de titulao do cido actico:

2.2. Titulao do Grupo Amino (-NH2) Seja a amina metilina que pode ceder prton conforme a equao:

Curva de Titulao da Metilamina:

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2.3. Titulao de um amino cido neutro (alamina):

Formas Inicas Carga eletrofortica +1 Curva de titulao da alamina:

Problema: Quais as formas inicas existentes, bem como as propores das mesmas para alamina no pH fisiolgico (7.0)?

Resposta: a forma inica da alamina mais abundante no pH fisiolgico (7.0) a forma =99, 81%, desprovida de carga eletrofortica:

2.4. Titulao de um minocido dicarboxlico: cido asprtico

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Curva de Titulao do cido Asprtico:

3. Curva de titulao obtida quendo 20 ml de cido asprtico HCI0,1M so titulados com NaOH0,1M

Problema: Calcular as propores das formas inicas do cido asprtico existentes no pH fisiolgico (Ph=7,0). PH=Pk+log R PH=7,0 PK=pK3=9,8 (o mais prximo de 7,0) do grupo -amino R= cone. da forma protonizada em relao ao grupo amino= [IV] coc. da forma protonizada em relao ao grupo amino [III] Substituindo: 7 = 9,8 +log [IV] [III] 7 = 9,8 + log R log R = 7-9,8 = -2,8 log 1 = 2,8 R 1 =629 ou R = _1_ = R 629 R = __1_ = [IV] 629 [III] [III] = 629 . [IV] [III] + [IV] = 100% (1)

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substituindo o valor de III em (1), temos: 629 . [IV] + [IV] = 100% 630 . [IV] = 100%

[IV] = _100_ = 0,16 % 630 [III] = 629 X 0,16 (0,1587301) [III] = 99,84 % Resposta: A forma mais abundante (99,84%) a forma III, carregada negativamente. 2.5. Titulao de um aminocido bsico (lisina):

Problema: Qual e em que proporo se apresenta a forma inica mais abundante do aminocido lisina no pH fisiolgico (7,0)? PH = pK + log R PH = 7,0 PK = Pk2 = 9,0 ( o mais prximo de 7,0; corresponde ao grupo -amino) R = conc. da forma desprotonizada em relao ao grupo -amino = [III] conc. da forma protonizada em relao ao grupo -amino [II] Substituindo: 7,0 = 9,0 + log R log R=7,0 9,0 = -2,0 log 1 = 2 52

R 1= 100 ou R = _1__ R 100 Portanto: R = __1__ = _[III]_ ou 100 [II] [II] =100 . [III] [II] + [III] = 100% (1) Substituindo o valor de [II] em (1): 100 . [III] + [III] = 100% 101 . [III] = 100 [III] = _100_ = 0,99% 101 Logo: [II] = 100 X 0,99 = 99% Resposta: A forma inica mais abundante a forma II, na proporo de 99% Resumindo o que se observou para os 3 aminocidos, temos: Aminocido Neutro cido Bsico pI forma inica predominante no pH fisiolgico (7,0)

7 sem carga eletrofortica < 7 carregado negativamente > 7 carregado positivamente

4. CLASSIFICAO DOS AMINOCIDOS Os aminocidos so classificados segundo a natureza do radical R. vrios critrios de classificao podem ser adotados. Assim quanto estrutura do radical R eles podem ser classificados em: a . aminocidos alifticos b . aminocidos aromticos c . aminocidos heterocclicos Mais significativa, entretanto a classificao baseada na polaridade do radical R, uma vez que ela enfatiza o papel funcional que cada aminocido desempenha na protena.Assim os 20 aminocidos comumente encontrados nas protenas so classificados em: 3.1. Aminocidos com Radical R no Polar ou Hidrofbico: 53

3.2. Aminocidos com Radical R Polar, sem Carga no pH Fisiolgico. A maioria desses aminocidos tem um radical polar que pode participar de pontes de hidrognio; alguns possuem o grupo hidroxila (-OH), outros a sulfidrila (-SH), enquanto asparagina e glutamina possuem grupos amida. A glicina, embora desprovida de radical R, considerada uma molcula polar pelo fato dos grupos amino e carboxila representar grande parte da massa da molcula.

3.3. Aminocidos com Radical R Polar Carregados Negativamente no pH Fisiolgico Nesta classe esto aminocidos dicarboxlicos

3.3. Aminocidos com Radical R Polar Carregado Positivamente no pH Fisiolgico Trs aminocidos so includos nesta categoria: lisina (com grupo adicional E amino com pK = 10,5, arginina com o grupo guanidnico de pK = 12,5 e a histidina com o grupo imidazol com pK = 6,0)

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Outros aminocidos alm desses podem ser encontrados. Assim L-hidroxilisina e Lhidroxiprolina sao abundantes no colgeno apenas e por isso denominados de aminocidos proticos raros.

Muitos aminocidos no so encontrados em protenas, mas ocorrem na forma livre. So os aminocidos no proticos, que atualmente so em nmero de aproximadamente 200, encontrados comumente no reino vegetal. Alguns desempenham funes conhecidas (como a ornitina e citrulina que participam do ciclo da uria em plantas e animais, e a beta alanina que faz parte da estrutura do cido pantotnico) enquanto a maioria no tem uma funo fisiolgica definida. Alguns deles se mostram txicos para animais e humanos, como o cido , - diaminobutrico, encontrado nas sementes da Lathirus sativus o qual causa o Neurolatirismo (fraqueza muscular a paralizia dos membros inferiores).

Citrulina: encontrado pela 1 vez em Citrullus vulgaris melancia

PROTENAS 1. CONCEITO So polmeros formados pela unio dos aminocidos, unidos que so pela ligao peptdica. Tais polmeros apresentam peso molecular entre 10.000 a alguns milhes de Daltons. A ligao peptdica aquela que se estabelece entre a carboxila (-COOH) de aminocido com o grupo amino (-NH2) de outro aminocido:

A ligao peptdica de natureza covalente. Se une dois aminocidos teremos um dipeptdio; se une trs, um tripeptdio, e assim por diante. As protenas podem ser consideradas polipeptdios.

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2. NVEIS ESTRUTURAIS BSICOS A cadeia polipeptdica busca um estado de maior estabilidade termodinmica, que atingido aps rearranjos levando a protena nveis estruturais complexos. Tais nveis podem ser estendidas como as seguintes estruturas: 3. Estrutura primria: a seqncia de aminocidos na cadeia polipeptdica. mantida pela ligao peptdica.

Com os 21 aminocidos normalmente encontrado nas protenas podemos arranja-los formando polipeptdios com 100 at alguns milhares de aminocidos. Tais arranjos permitem a formao de um nmero extremamente grande de diferentes molculas proticas que possivelmente possam existir. 2.2. Estrutura Secundria: a cadeia polipeptdica pode adquirir a forma de uma espiral voltada direita, estrutura essa chamada de - hlice estabilizada por pontes de hidrognio que se estabelece entre o grupo carbonilo (=C=O) de uma ligao peptdica com o grupo imido (=NH) da 3 ligao peptdica na seqncia regular da cadeia. A estrutura secundria tambm pode se manifestar na forma de folha pregueada.

2.3. Estrutura Terciria: diz respeito ao dobramento da cadeia polipeptdica sobre se mesma, se enovelando e adquirindo uma chamada estrutura globular, mais compacta. A manuteno de tal estrutura atribuda s diferentes reatividades dos radicais R dos aminocidos componentes, e tal estrutura est intimamente relacionada com as propriedades catalticas das protenas biologicamente ativas, como as enzimas. Entre as ligaes envolvendo os radicais R, e responsveis pela estruturao terciria, podemos observar: a. ligaes ou interaes eletrostticas entre a carboxila dissociada (-COO-) e grupos protonizados (amino, guanidino ou amidazol). b. pontes de hidrognio c. interao hidrofbica d. interao dipolo dipolo com radicais de polarizao semelhantes) e. ligao ou ponte de dissulfeto (ligao covalente que se estabelece entre 2 tomos de S de dois resduos de cistena).

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Alguns tipos de ligaes no covalentes que estabilizam a estrutura protica: a) interao eletrosttica; b) ligao de hidrognio entre resduos de tirosina e grupos carboxlicos nas cadeias laterais; c)interao hidrofbica de cadeias laterais no polares causada pela mtua repulso de solventes; d) interao dipolo dipolo; e) ligao de dissulfeto, uma ligao covalente [De acordo com C. B. Anfinsen, The Molecular Basic of Evolution, John Wiley and Sons, Nova Iorque, p. 102,1959].

Representao esquemtica das cadeias polipeptdicos de protenas bem definidas. C indica o carboxilo de aminocido terminal; N grupo amino livre do aminocido terminal; os nmeros em parnteses so os radicais de aminocidos; -S-, ligaes de dissulfeto.

2.4. Estrutura Quaternrias: apresentada por apenas algumas protenas, e quase sempre biologicamente ativas; tal estruturao pode ser definida como o grau de polimerizao de unidades proticas formando dmeros, trmeros, tetrmeros, etc. As foras que mantm a estrutura quaternria so as mesmas responsveis pela manuteno da estrutura terciria. Em alguns casos, ctions metlicos (Ca++, K+, Mg++, Mn++, etc.) auxiliam a manuteno da estrutura quaternria. Assim a fosforilase a (tetrmero) formada pela unio de 4 subunidade proticas e manifesta atividades cataltica. J na forma de dmero (fosforilase b) a mesma inativa.

Um tetrmero de unidades proticas ilustrado quaternria de uma protena globular complexa 3. DESNATURAO DAS PROTENAS Vem a ser qualquer desarranjo nas estruturas secundrias, tercirias ou quaternria de uma protena. As enzimas assim que desnaturadas perdem a atividade cataltica. Os agentes desnaturantes das protenas so: cidos, bases, fora inica elevada, calor, solventes orgnicos (apolares), agitao mecnica, etc. 4. HIDRLISE DAS PROTENAS

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 o rompimento das ligaes peptdicas, que mantm a estrutura primria, e pode ser efetuada por cidos, bases ou enzimas (genericamente denominadas de proteases ou enzimas proteolticas). Tal hidrlise liberta os aminocidos na forma livre, os quais podem ser identificados e quantificados, conhecendo-se assim a composio aminoacdica das protenas. 5. FUNES BIOLGICAS DAS PROTENAS Devido ao nmero incrvelmente elevado de diferentes molculas proticas que podem ser fabricadas pelos organismos, cujas propriedades sero reflexo direto da seqncia de aminocidos na cadeia polipeptdica, a natureza, aproveitando-se desta particularidade, atribui inmeras funes para as protenas. Assim podemos identificar, classes de protenas de acordo com suas funes biolgicas: 5.1. Enzimas: protenas com atividade catalticas, acelerando reaes no interior da clula. 5.2. Protenas de Transporte: A Hemoglobina transporta oxignio; lipoprotenas do plasma transportam lipdios. A passagem de ons e outras substncias atravs das membranas (de permeabilidade diferencial) auxiliada por protenas de transporte. 5.3. Protenas Nutritivas: ovoalbumina, casena, ferritina (armazenadora de ferro), etc. 5.4. Protenas Contrcteis: Actina, miosina, tubulina (dos ciliados e flagelados). 5.5. Protenas Estruturais: colgeno, elastina, fibroinas, queratina, etc. 5.6. Protenas de Defesa: imunoglobulinas (anticorpos), fibrinognio e trombina 5.7. Protenas Reguladoras: hormnios e repressores (regulam a sntese de enzimas). 6. CLASSIFICAO DAS PROTENAS Diversos critrios podem ser adotadas para a classificao das protenas, todos eles algo subjetivo: 6.1. Quanto composio a. protenas simples - quando formadas apenas de aminocidos (albuminas globulinas) b. protenas conjugadas quando apresentam uma poro no protica (denominado de grupo prosttico) prso cadeia polipeptdica: protena conjugada grupo prosttico glicoprotena carboidrato lipoprotena lipdios nucleoprotena cido nuclico metaloprotena metal ______________________________________________ 6.2. Quanto conformao a. protenas globulares aqueles cuja cadeia polipeptdica se dobrou consideravelmente, adquirindo a forma esfrica ou globular, geralmente com os radicais polares dos aminocidos na superfcie externa e os apolares voltados para o 58

interior. Em conseqncia essas protenas globulares so solveis no sistemas aquosos e se difundem facilmente. Enzimas, hormnios e anticorpos so exemplos de protenas globulares e para a manifestao de suas atividades biolgicas a solubilidade uma propriedade desejada. b. Protena fibrosas essas protenas podem ser subdivididas em 3 classes segundo a estrutura detalhada das mesmas: - - hlice de passo direito (queratina da pele, plo, unhas) - folha - pregueada (seda) - hlice tripla (colgeno) Tais protenas so altamente insolveis, caracterstica necessria para as suas funes biolgicas. 7. FATORES ANTINUTRICIONAIS DE NATUREZA PEPTDICA Os gros de algumas leguminosas, como feijo e soja, apresentam peptdios de baixo peso molecular que possuem habilidade de inativar as enzimas digestivas - amilase e a tripsina. Tais peptdios j identificados, so denominados de fator anti-amilase e fator anti-tripsina e so responsveis, pelo menos em parte pelo efeito txico observado quando da indigesto de feijo cru, especialmente em animais domsticos, felizmente esses fatores antinutricionais so desnaturados pelo calor, de modo que o cozimento dos alimentos destri essa atividade antitrptica e antiamilsica de muitos gros de legumes e de alguns cereais. Em alguns legumes esses fatores so termoestveis.

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QUESTIONRIO 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Qual o objetivo da Bioqumica? O que vem a ser metabolismo? O que um carboidrato? O que uma ligao hemiacetal? O que uma ligao glicosdica? O que vem a ser um acar redutor? Por que a sacarose no redutora? Por que a clula prefere armazenar como reserva energtica, carboidrato na forma de polissacardio? 8. Quais os fatores antinutricionais de natureza glucdica encontrados na mandioca, nas crucferas e nos legumes? O que causam tais substncias? 9. Cite carboidratos desempenhado funo estrutural e energtica em animais e vegetais 10. O que um lipdio? 11. Por que so os mais energticos dos alimentos? 12. O que resulta da hidrlise de um triglicerdio? 13. Qual a relao entre a resistncia s geadas e a proporo de cidos graxos poliinsaturados nas membranas dos vegetais? 14. Por que os leos vegetais so recomendados aqueles que apresentam distrbios cardiovasculares? 15. Como se classificam os lipdios? 16. A margarina boa substituta da manteiga quando se pretende evitar os inconvenientes da gordura animal? 17. Cite lipdios desempenhando funo estrutural, funo energtica e outra funo especfica. 18. Por que os aminocidos so estruturas polares? 19. Qual o significado do pk de um grupo ionizvel? 20. Cite alguns aminocidos no proticos. 21. Cite um aminocido txico, onde encontrado e qual o distrbio de sua ingesto. 22. O que uma ligao peptdica e como pode ser rompida? 23. O que vem a ser estrutura primria, secundria e terciria de uma protena e quais as ligaes que as mantm? 24. O que vem a ser desnaturao de uma protena e quais os agentes que efetuam tal desnaturao?

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ENERGTICA BIOQUMICA 1. CICLO ENERGTICO CELULAR Parte da energia qumica liberada nos processos catablicos utilizada para a sntese se ATP (adenosina-trifosfato). O ATP eposteriormente empregado na realizao de trabalhos fisiolgicos (excreo, contrao muscular, transporte ativo, etc) e para atividades de biossntese de constituintes celulares (anabolismo).

2. CONCEITO DE ENERGIA LIVRE DE UMA REAO Seja uma reao qumica qualquer: A B. Os contedos de energia de A e B no podem ser medidos de modo absoluto, mas possvel medir a variao de energia quando A se transforma em B. G = EB - EA quando EA> EB, G negativa e a reao exergnica quando EB> EA, G positiva e a reao endergnia As reaes espontneas so espontneas so exergnicas, mas o valor de G no se relaciona com a velocidade de reao, a qual funo da energia de ativao (Ea). Energia de ativao uma quantidade de energia necessria para que os reagentes adquiram o estado excitado para que a reao ocorra. Considere-se combusto da glicose: C6-H2O6 + 6026C02 + 6H02; G= -686.000 cal/mol

Numa reao exergnica a variao de energia livre a quantidade mxima de energia que se torna disponvel a com a qual se pode realizar trabalho. 61

A rigor: H = G + T S ou G = H -T S, onde: H= variao de energia entalpia (variao calrica quando a reao se processa sob presso constante) G= variao de energia livre (utilizada para realizar trabalhos) S= variao de entropia (mede o grau de desordem de um sistema). Os processos fsicos e qumicos se conduzem no sentido de se aumentar a entropia. Numa reao em que A B, podemos derivar a seguinte expresso: G= G0 + RT1n [B] [A] onde G0 a variao de energia livre padro, R a constante universal dos gases (1987 cal/mol/grau), T a temperatura absoluta e [B] e [A] so as concentraes em molaridade. Para uma condio de equilbrio qumico no h converso lquida de A em B e portanto G=O. Igualmente a relao [B] [A] corresponder a constante de equilbrio Keq. Teremos ento: O= Go + RT 1n Keq Go=-RT 1n Keq Para uma condio de 25oC, portanto T= 273+25=2980K, teremos: G0=-1,987X298X1n Keq Go= -1,987x298x2,303 log Keq=-1.363 log Keq A tabela abaixo relaciona, Segundo a equao acima, a Keq com o correspondente valor de Go Relao entre Keq e Keq 0,001 0,01 0,1 1,0 10 100 1000 G0 log1 0Keq -3 -2 -1 0 1 2 3

G0= -1.363 log1 0Keq (cal) 4.089 2.726 1.363 0 -1.363 -2.726 4.089

Para uma situao em que [A]=[B] = 1M, temos: G= G0 + RT 1n 1 G= G0

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ou seja, G0 pode ser definida como a variao de energia livre quando reagentes e produtos esto presentes em concentraes unitrias, ou seja no estado padro, se H+ so produzidos ou utilizados na reao a sua concentrao deve ser considerada 1M ou pH=O. Como na clula as reaes no ocorrem em pH=O, mas sim ao redor de pH=7,0, o valor de Go corrigido para Go se a reao em questo envolver H+. Alguns metablitos e a variao de energia livre de sua hidrlise so apresentados na tabela abaixo: ____ Composto G a pH 7,0 (cal/mol)___ fosfoenol piruvato -12.800 1,3-difosfoglicerato -11.800 ATP -8.000 glicose-1-fosfato -5.000 frutose-1-fosfato -3.800 glicose-1-fosfato -3.300 ____________________________________________________ 3. COMPOSTOS RICOS EM ENERGIA Vem a ser qualquer composto que por hidrlise libere mais que 7.000 cal/mol, ou seja, que apresente G menor que 7.000 cal/mol. Entre tais compostos podemos identificar as seguintes caractersticas: a. compostos pirofosfatados (anidridos de cido fosfrico). A repulso entre os tomos de fosfrico, polarizados positivamente, causa uma instabilidade na molcula que aliviada pela hidrlise. A hidrlise do primeiro radical fosfato acompanhada da liberao de 8.000 cal/mol. Estrutura do ATP

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The Nature of ATP | Back to Top

Adenosine triphosphate (ATP), the energy currency or coin of the cell, transfers energy from chemical bonds to endergonic (energy absorbing) reactions within the cell. Structurally, ATP consists of the adenine nucleotide (ribose sugar, adenine base, and phosphate group, PO4-2) plus two other phosphate groups.
A 2-D stick view of the structure of ATP. The above drawing of ATP is from EcoCyc at http://hapuna.ai.sri.com:1555/new-image?type=COMPOUND-IN-PATHWAY&object=ATP

A cartoon and space-filling view of ATP. Image from Purves et al., Life: The Science of
Biology, 4th Edition, by Sinauer Associates (www.sinauer.com) and WH Freeman (www.whfreeman.com), used with permission.

Energy is stored in the covalent bonds between phosphates, with the greatest amount of energy (approximately 7 kcal/mole) in the bond between the second and third phosphate groups. This covalent bond is known as a pyrophosphate bond. We can write the chemical reaction for the formation of ATP as: a) in chemicalese: ADP + Pi + energy ----> ATP b) in English: Adenosine diphosphate + inorganic Phosphate + energy produces Adenosine
Triphosphate

The chemical formula for the expenditure/release of ATP energy can be written as: a) in chemicalese: ATP ----> ADP + energy + Pi

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b) in English Adenosine Triphosphate produces Adenosine diphosphate + energy + inorganic

Phosphate

An analogy between ATP and rechargeable batteries is appropriate. The batteries are used, giving up their potential energy until it has all been converted into kinetic energy and heat/unusable energy. Recharged batteries (into which energy has been put) can be used only after the input of additional energy. Thus, ATP is the higher energy form (the recharged battery) while ADP is the lower energy form (the used battery). When the terminal (third) phosphate is cut loose, ATP becomes ADP (Adenosine diphosphate; di= two), and the stored energy is released for some biological process to utilize. The input of additional energy (plus a phosphate group) "recharges" ADP into ATP (as in my analogy the spent batteries are recharged by the input of additional energy).
How to Make ATP | Back to Top

Two processes convert ADP into ATP: 1) substrate-level phosphorylation; and 2) chemiosmosis. Substrate-level phosphorylation occurs in the cytoplasm when an enzyme attaches a third phosphate to the ADP (both ADP and the phosphates are the substrates on which the enzyme acts).

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Enzymes and the formation of NADH and ATP. Images from Purves et al., Life: The
Science of Biology, 4th Edition, by Sinauer Associates (www.sinauer.com) and WH Freeman (www.whfreeman.com), used with permission.

Chemiosmosis involves more than the single enzyme of substrate-level phosphorylation. Enzymes in chemiosmotic synthesis are arranged in an electron transport chain that is embedded in a membrane. In eukaryotes this membrane is in either the chloroplast or mitochondrion. According to the chemiosmosis hypothesis proposed by Peter Mitchell in 1961, a special ATP-synthesizing enzyme is also located in the membranes. Mitchell would later win the Nobel Prize for his work.

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A typical representation of an electron transport chain. Images from Purves et al., Life:
The Science of Biology, 4th Edition, by Sinauer Associates (www.sinauer.com) and WH Freeman (www.whfreeman.com), used with permission.

During chemiosmosis in eukaryotes, H+ ions are pumped across an organelle membrane into a confined space (bounded by membranes) that contains numerous hydrogen ions. The energy for the pumping comes from the coupled oxidationreduction reactions in the electron transport chain. Electrons are passed from one membrane-bound enzyme to another, losing some energy with each tansfer (as per the second law of thermodynamics). This "lost" energy allows for the pumping of hydrogen ions against the concentration gradient (there are fewer hydrogen ions outside the confined space than there are inside the confined space). The confined hydrogens cannot pass back through the membrane. Their only exit is through the ATP synthesizing enzyme that is located in the confining membrane. As the hydrogen passes through the ATP synthesizing enzyme, energy from the enzyme is used to attach a third phosphate to ADP, converting it to ATP.

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A generalized view of an electron transport system. Image from Purves et al., Life: The
Science of Biology, 4th Edition, by Sinauer Associates (www.sinauer.com) and WH Freeman (www.whfreeman.com), used with permission.

Usually the terminal phosphate is not simply removed, but instead is attached to another molecule. This process is known as phosphorylation. W + ATP -----> W~P + ADP where W is any compound, for example: glucose + ATP -----> glucose~P + ADP Glucose can be converted into Glucose-6-phosphate by the addition of the phosphate group from ATP. ATP serves as the biological energy company, releasing energy for both anabolic and catabolic processes and being recharged by energy generated from other catabolic reactions.
Learning Objectives | Back to Top

These learning objectives are taken from my Biology for Nonmajors class (BIO 102). I have tried to add a link to each that will direct you to a part of this chapter or another website that will facilitate your completion of the objective.
1. Describe the components, organization, and functions of an electron transport

system.
2. ATP is composed of ribose, a five-carbon sugar, three phosphate groups, and

adenine , a nitrogen-containing compound (also known as a nitrogenous

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base). What class of organic macromolecules is composed of monomers similar to ATP?

3. ATP directly or indirectly delivers energy to almost all metabolic pathways.

Explain the functioning of the ATP/ADP cycle.

4. Adding a phosphate to a molecule is called phosphorylation. What two

methods do cells use to phosphorylate ADP into ATP?

http://www.emc.maricopa.edu/faculty/farabee/BIOBK/BioBookATP.html

Hidrlise dos nucleotdios de adenosina: ATP + H2O ADP + H3PO4 (Pi); G = -8.000 cal/mol ADP + H2O AMP + Pi; G = -6.500 cal/mol AMP + H2O Adenosina + Pi; G = -2.200 cal/mol b. acil fosfato: como no caso do 1,3-difosfoglicerato, alm da repulso entre fsforo e carbono positivamente polarizados, pode-se mencionar a tendncia dos produtos da reao de se dissociarem, deslocando o equilbrio favorecendo a hidrlise:

c. Tioster: o enxofre impede a possibilidade de ressonncia aumentando a tendncia de hidrlise: d. Fosfatos enlicos: o caso da hidrlise do fosfoenolpiruvato (PEP), com formao de um enol instvel que instantaneamente tautomeriza na forma certo mais estvel. e. Fosfatos guanidnicos: fosfocreatina e fosfoarginina nos quais os produtos da hidrlise apresentam um maior nmero de formas de ressonncia:

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4. G EM REAES DE XIDO-REDUO As reaes com transferncia de eltrons so denominadas de xido-reduo. A tendncia de um composto em fornecer eltrons quantificada pelo potencial de reduo (Eo) expresso em volts, tornando-se como referncia o H2 (com Eo = OV a pH=O). O valor do potencial de reduo corrigindo para pH 7,0 seria Eo=-0,420 V. Em relao a este valor padro possvel determinar o potencial determinar o potencial de reduo de qualquer composto capaz de se oxidar ou se reduzir com referncia ao hidrognio. Quanto maior o potencial de reduo maior a tendncia do composto em aceitar eltrons, reduzindo-se portanto, sendo tais compostos bons agentes oxidantes. Por outro lado os compostos com baixo potencial de reduo so bons agentes redutores. A tabela a seguir mostra o potencial de reduo de algumas reaes de importncia biolgicas. Potenciais de reduo de alguns hemi - reao redox de importncia biolgica Hemi reao (escrita com uma reduo)
+ -

1 +2H 2e H2O 2 Fe3 + + 1e Fe2+ Citocromo a-Fe3+1e- Citocromo a-Fe2+ Citocromo c-Fe3 + + 1e- Citocromo c-Fe2+ 0,25 + Ubiquinona + 2H + 2e Ubiquinona cido deidroascrbico + 2H+ + 2e- cido ascrbico Glutation oxidado + 2H + + 2e- 2 Glutation reduzido Fumarato + 2H + + 2e- Succinato Citocromo b-Fe3 + + 1e- Citocromo b-Fe2 + -0,04 + Oxalacetato +2H + 2e Malato Enzima amarela + 2H + +2e- Enzima amarela reduzida Acetaldeido + 2H + + 2e- Etanol Piruvato + 2H + + 2e- Lactato Riboflavina + 2H + + 2e- Riboflavina H2 cido,1,3-difosfoglicrico + 2H + +2e- Gliceraldeido 3 fosfato + Pi -0,29 NAD + + 2H + +2e- NADH + H + Acetil CoA + 2H + +2e- Acetaldeido + CoA SH H + +1e- 1 H2 2 Ferredoxina Fe3 + + 1e- Ferredoxina Fe2+ Acetato + 2H + + 2e- Acetaldeido + H2O Para uma reao de xido reduo podemos deduzir: G= - nF EO

E0 em Ph 7,0 (V) 0,82 0,77 0,29 0,10 0,06 0,04 0,03 -0,10 -0,12 -0,16 -0,19 -0,20 -0,32 -0,41 -0,42 -0,43 -0,47

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onde: n= n de eltrons transferidos na reao F= constante de Faraday = 23.063 cal/volt. Equiv. EO= diferena entre os potenciais de reduo do agente oxidante e agentes redutor. Consideremos a reduo do acetaldeido a etanol, ltima reao da fermentao alcolica, cujo agente redutor o NADH+H+: CHO CH2OH + NADH+H+ CH3 CH3 + NAD+ Acetaldeido etanol EO= potencial de reduo do acetaldeido (agente oxidante)- potencial de reduo do NADH+H+ (agente redutor) EO= -0,163 (-0,320) = + 0,157 volts Portanto: G= -nF Eo G= -2 x 23.063 x 0,157 = -7.240 cal/mol REAO ACOPLADAS: O ATP ocupa uma posio intermediria entre os diversos metablitos considerados, existindo compostos que aprisionam energia com maior eficincia. Essa posio intermediria responde pela grande importncia do APT visto que o mesmo pode ser formado quando da hidrlise de um metablito com G menor que 8.000 cal/mol. Igualmente o ATP pode fornecer energia para fosforilar a glicose, durante o catabolismo da mesma.

CELLULAR METABOLISM AND FERMENTATION

Glycolysis, the Universal Process

Nine reactions, each catalyzed by a specific enzyme, makeup the process we call glycolysis. ALL organisms have glycolysis occurring in their cytoplasm. At steps 1 and 3 ATP is converted into ADP, inputting energy into the reaction as well as attaching a phosphate to the glucose. At steps 6 and 9 ADP is converted into the higher energy ATP. At step 5 NAD+ is converted into NADH + H+. The process works on glucose, a 6-C, until step 4 splits the 6-C into two 3-C compounds. Glyceraldehyde phosphate (GAP, also known as phosphoglyceraldehyde, PGAL) is the more readily used of the two.
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Dihydroxyacetone phosphate can be converted into GAP by the enzyme Isomerase. The end of the glycolysis process yields two pyruvic acid (3-C) molecules, and a net gain of 2 ATP and two NADH per glucose.

Graphic summary of the glycolysis process. Image from Purves et al., Life: The Science
of Biology, 4th Edition, by Sinauer Associates (www.sinauer.com) and WH Freeman (www.whfreeman.com), used with permission. Anaerobic Pathways | Back to Top

Under anaerobic conditions, the absence of oxygen, pyruvic acid can be routed by the organism into one of three pathways: lactic acid fermentation, alcohol fermentation, or cellular (anaerobic) respiration. Humans cannot ferment alcohol in their own bodies, we lack the genetic information to do so. These biochemical pathways, with their myriad reactions catalyzed by reaction-specific enzymes all under genetic control, are extremely complex. We will only skim the surface at this time and in this course. Alcohol fermentation is the formation of alcohol from sugar. Yeast, when under anaerobic conditions, convert glucose to pyruvic acid via the glycolysis pathways, then go one step farther, converting pyruvic acid into ethanol, a C-2 compound.

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Fermentation of ethanol. Image from Purves et al., Life: The Science of Biology, 4th
Edition, by Sinauer Associates (www.sinauer.com) and WH Freeman (www.whfreeman.com), used with permission.

Many organisms will also ferment pyruvic acid into, other chemicals, such as lactic acid. Humans ferment lactic acid in muscles where oxygen becomes depleted, resulting in localized anaerobic conditions. This lactic acid causes the muscle stiffness couch-potatoes feel after beginning exercise programs. The stiffness goes away after a few days since the cessation of strenuous activity allows aerobic conditions to return to the muscle, and the lactic acid can be converted into ATP via the normal aerobic respiration pathways.

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Fermentation of lactate (lactic acid). Image from Purves et al., Life: The Science of
Biology, 4th Edition, by Sinauer Associates (www.sinauer.com) and WH Freeman (www.whfreeman.com), used with permission. Aerobic Respiration | Back to Top

When oxygen is present (aerobic conditions), most organisms will undergo two more steps, Kreb's Cycle, and Electron Transport, to produce their ATP. In eukaryotes, these processes occur in the mitochondria, while in prokaryotes they occur in the cytoplasm.

Overview of the cellular respiration processes. Image from Purves et al., Life: The
Science of Biology, 4th Edition, by Sinauer Associates (www.sinauer.com) and WH Freeman (www.whfreeman.com), used with permission. Acetyl Co-A: The Transition Reaction

Pyruvic acid is first altered in the transition reaction by removal of a carbon and two oxygens (which form carbon dioxide). When the carbon dioxide is removed, energy is given off, and NAD+ is converted into the higher energy form NADH. Coenzyme A attaches to the remaining 2-C (acetyl) unit, forming acetyl Co-A. This process is a prelude to the Kreb's Cycle.
Kreb's Cycle (aka Citric Acid Cycle)

The Acetyl Co-A (2-C) is attached to a 4-C chemical (oxaloacetic acid). The Co-A is released and returns to await another pyruvic acid. The 2-C and 4-C make another chemical known as Citric acid, a 6-C. Kreb's Cycle is also known as the Citric Acid Cycle. The process after Citric Acid is essentially removing carbon dioxide, getting
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out energy in the form of ATP, GTP, NADH and FADH2, and lastly regenerating the cycle. Between Isocitric Acid and -Ketoglutaric Acid, carbon dioxide is given off and NAD+ is converted into NADH. Between -Ketoglutaric Acid and Succinic Acid the release of carbon dioxide and reduction of NAD+ into NADH happens again, resulting in a 4-C chemical, succinic acid. GTP (Guanine Triphosphate, which transfers its energy to ATP) is also formed here (GTP is formed by attaching a phosphate to GDP). The remaining energy carrier-generating steps involve the shifting of atomic arrangements within the 4-C molecules. Between Succinic Acid and Fumaric Acid, the molecular shifting releases not enough energy to make ATP or NADH outright, but instead this energy is captured by a new energy carrier, Flavin adenine dinucleotide (FAD). FAD is reduced by the addition of two H's to become FADH2. FADH2 is not as rich an energy carrier as NADH, yielding less ATP than the latter. The last step, between Malic Acid and Oxaloacetic Acid reforms OA to complete the cycle. Energy is given off and trapped by the reduction of NAD+ to NADH. The carbon dioxide released by cells is generated by the Kreb's Cycle, as are the energy carriers (NADH and FADH2) which play a role in the next step.

Summary of the Krebs' (or citric acid) cycle. Image from Purves et al., Life: The Science
of Biology, 4th Edition, by Sinauer Associates (www.sinauer.com) and WH Freeman (www.whfreeman.com), used with permission.

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Electron Transport Phosphorylation

Whereas Kreb's Cycle occurs in the matrix of the mitochondrion, the Electron Transport System (ETS) chemicals are embedded in the membranes known as the cristae. Kreb's cycle completely oxidized the carbons in the pyruvic acids, producing a small amount of ATP, and reducing NAD and FAD into higher energy forms. In the ETS those higher energy forms are cashed in, producing ATP. Cytochromes are molecules that pass the "hot potatoes" (electrons) along the ETS chain. Energy released by the "downhill" passage of electrons is captured as ATP by ADP molecules. The ADP is reduced by the gain of electrons. ATP formed in this way is made by the process of oxidative phosphorylation. The mechanism for the oxidative phosphorylation process is the gradient of H+ ions discovered across the inner mitochondrial membrane. This mechanism is known as chemiosmotic coupling. This involves both chemical and transport processes. Drops in the potential energy of electrons moving down the ETS chain occur at three points. These points turn out to be where ADP + P are converted into ATP. Potential energy is captured by ADP and stored in the pyrophosphate bond. NADH enters the ETS chain at the beginning, yielding 3 ATP per NADH. FADH2 enters at Co-Q, producing only 2 ATP per FADH2.

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Electron transport system. Images from Purves et al., Life: The Science of Biology, 4th
Edition, by Sinauer Associates (www.sinauer.com) and WH Freeman (www.whfreeman.com), used with permission.

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Catabolism and Anabolism

The above image is from http://www.biosci.uga.edu/almanac/bio_104/notes/jun_4.html. REFERENCES

Biology Project Metabolism Problem Set (University of Arizona) Questions and answers along with tutorials about metaboilism, an excellent site. D.I.Y. Glycolysis (Leeds University, UK) An excellent tutorial on the molecular shifts needed to perform glycolysis. Introduction to Glycolysis (Leeds University, UK) An introduction for those less chemically skewed, perhaps a nioce start before tackling DIY Glycolysis (also be the same folks). Step-by-Step Glycolysis (Leeds University, UK) Browse fact sheets as well as view short animations. Glycolysis (OUMA Graphics) EcoCyc Glycolysis Pathway EcoCyc, an electronic encyclopedia of E. coli genes and metabolism, provides an interactive diagram of the glycolysis pathway. EcoCyc Fermentation Pathway EcoCyc, an electronic encyclopedia of E. coli genes and metabolism, provides an interactive diagram of alcohol (ethanolk) fermentation.

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Reconstructions of Metabolism Reconstructed metabolic pathways for bactreria, humans, and other critters. Glycolysis Main Page You will need the Chime plugin to view interactive rotating images of the molecules in the Glycolysis pathway. VERY cool. TCA Cycle Main Page Similar to the above, images and informastion about "Kreb's Cycle".

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ENZIMAS 1. INTRODUO Uma peculiaridade interessante da clula viva a de permitir que em seu interior ocorram reaes complexas a uma velocidade razovel temperatura do meio. Tais reaes no ocorreriam ou se processariam muito lentamente aquela temperatura, se na ausncia da clula. Isso possvel devido a presena de catalizadores biolgicos: as enzimas ou biocatalizadores. As enzimas so protenas sintetizadas pela prpria clula que aceleram reaes termodinamicamente possveis, no alterando a constante de equilbrio (k) e nem a variao de energia livre da reao ( G). Como catalizadores operam em concentraes extremamente baixas em relao quantidade de substrato transformada. Sendo uma protena, a enzima perde a sua atividade cataltica assim que desnaturada (a enzima fica inativa). Outra propriedade das enzimas vem a ser a sua especificidade: milhares de diferentes enzimas ocorrem no interior da clula. 2. MODALIDADE DE SE AUMENTAR A VELOCIDADE DE UMA REAO 2.1. Pelo Aumento da Temperatura: o aumento de temperatura causa um aumento na energia cintica das molculas (Ec) tornando-as mais aptas a transpor a barreira energtica estabelecida pela energia de ativao (Ea). 2.2. Pela Diminuio da Energia de Ativao: A energia de ativao uma quantidade de energia que deve ser fornecida s molculas reagentes, para atingir o estado excitado e se iniciar a reao. Supe-se que as enzimas, como os demais catalizadores, diminuam a energia de ativao requerida para que a reao ocorra.

Hidrlise da uria: CO (NH2)2 + H2O __H+__ CO2 + 2 NH3; Ea= 24.600 cal/mol CO (NH2)2 + H2O _urase CO2 + 2 NH3; Ea= 6.800 cal/mol Decomposio da gua oxidada: H2O2 __Fe + +__ H2O + 1 O2, Ea= 10.100 cal/mol 2 H2O2 __catalase__ H2O + 1 02, Ea= 1.700 cal/mol 2

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3. EQUAO DE MICHAELIS MENTEN No inicio da reao (tempo zero) existe apenas enzima e substrato.Aps um lapso de tempo ocorre a formao do complexo enzima-substrato e da a dissociao do mesmo para formar o produto da reao (P). Durante o transcurso da reao, o produto deve ser formado com uma velocidade constante, estando a reao no seu estado de equilbrio dinmico. Para que a velocidade de formao de produto seja constante a concentrao do complexo enzima-substrato (ES) igualmente dever ser constante: Para que [ES] seja constante a velocidade de sua dissociao (v2+v3).

Experimentalmente, em laboratrio, podemos controlar a concentrao de substrato [S] e a concentrao de enzima adicionada [E]. Seja portanto: [E] = concentrao de enzima adicionada [S] = concentrao de substrato [ES] = concentrao do complexo enzima-substrato no estado de equilbrio dinmico [E] = [ES] = concentrao de enzima livre Sabemos que V1= V2+V3 (I), para que [ES] seja constante. V1 = K1 {[E]} [ES]}.[S] V2 = K2 . [ES] V3-K3 . [ES] = velocidade de formao de produto = v (medida experimentalmente). Substituindo em I: K1 {[E] [ES]}. [S] = K2 [ES] + K3 [ES] K1 [E] . [S] - K1 [ES] [S] = [ES] (K2 + K3) Dividindo-se por K1 [E] [S] [ES] . [S] = [ES] . K2 + K3 K1 K2 + K3 = Km (constante de Michaelis) K1 [E] . [S] [ES] . [S] = [ES] . Km [ES] . Km + [ES] . [S] = [E] . [S] [ES] . (Km + [S]) = [E] . [S] [ES] = _[E] . [S]_ Km + [S] Multiplicando-se ambos os membros por K3, teremos: K3 [ES] = _K3 [E] . [S]_ 82

Km + [S] Ora, K3 [ES] = V (Velocidade de formao de produto, a qual medida experimentalmente). K3 [E] = Vm (Velocidade mxima de reao, quando toda enzima adicionada, [E], estiver na forma do complexo enzima-substrato, ES. Nessa ocasio [ES] = [E], ou seja, a mxima concentrao do complexo enzima-substrato que se pode conseguir). Logo: V = _Vm . [S]_ Km + [S] Esta uma equao de hiprbole quadrtica que representa, ou melhor, que se ajusta bem ao tipo de curva observada experimentalmente. Assim: lim _Vm . [S]_ = 00 (indeterminao matemtica) S Km + [S] 00 Levantando-se indeterminao (dividindo-se por [S]): Lim _____Vm_____ _Km _+ __[S]__ [S] [S] ____Vm____ = lim S 00 Vm _Km_ + 1 [S]

Ou seja, medida que a concentrao de substrato tende para o infinito (00) a velocidade de reao tende para a velocidade mxima. Quando: V= Vm, teremos: 2 Vm = __Vm . [S]__ Km + [S] 2 [S] = Km + [S] ou Km = [S] Donde se conclui que para uma velocidade de reao igual metade da velocidade mxima (_Vm_) a concentrao de substrato corresponde, numericamente, constante de Michaelis 2 (Km). Conclumos tambm que Km a concentrao de semi-saturao dos stios ativos da enzima. Portanto a constante de Michaelis pode ser bioquimicamente interpretada como sendo: a. concentrao de substrato que satura 50% dos stios ativos da enzimas presentes. b. Um valor, cujo inverso mede a afinidade entre a enzima e o substrato. c. Um valor muito prximo da constante de dissociao do complexo enzima-substrato.

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A velocidade mxima (Vm) aquela atingida quando toda enzima (100%) estiver na forma do complexo enzima-substrato, ou seja, quando todos os stios ativos possurem substrato alojado em seu interior. Dizendo que foi atingida a saturao dos stios ativos. RETIFICAO DA HIPRBOLE = TRANSFORMAO DE LINEWEAVER E BURK Experimentalmente muito mais simples trabalhar uma equao de reta do que curva hiperblica. Da a retificao da hiprbole: V = _Vm . [S]_ Km + [S] Tornando-se o inverso: _1_ = _Km + [S]_ V Vm . [S] _1_ = ___Km___ + ___[S]___ V Vm . [S] Vm . [S] _1_ = _Km_ . _1_ + _1_ (I) V Vm [S] Vm _1_ = varivel dependente V _1_ = varivel independente [S] _Km_ = coeficiente angular Vm _1_ = coeficiente linear Vm

Para _1_ = 0, teremos a interseco no eixo de _1_ V [S] _1_ = - _Km_ x.0 + __1__ _1_ = __1__ Vm Vm Vm V Vm Por intermdio deste tipo de anlise grfica determinamos experimentalmente os parmetros Km para uma reao enzimtica.

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4. FATORES QUE AFETAM A VELOCIDADE DE UMA REAO ENZIMTICA 4.1. Efeito da Concentrao de Enzima

A velocidade mxima (Vm) proporcional concentrao de enzima [E], mas Km constante que independe da concentrao de enzima. 4.2. Efeito da Concentrao de Substrato: foi estudado na equao de Michaelis-Menten.

4.3. Efeito da Concentrao Hidrogenioinica (Ph): Em valores extremos de pH (maiores que 10 e menores que 3) ocorre o efeito desnaturante do cido ou da base sobre a enzima; igualmente o efeito da fora inica elevada pode desnaturar a enzima. J em regies prximas ao pH timo, pequenas alteraes no pH acarretam alteraes na configurao espacial dos stios ativos, facilitando ou dificultando a entrada do substrato no mesmo.

O pH no interior da clula est ao redor da naturalidade (pH = 6 ou 7) sendo adequado para a maioria das enzimas. A clula regula o metabolismo exercendo um controle sobre o pH em algumas regies da clula. Em algumas ocasies as enzimas esto adaptadas s condies de pH do meio, nem sempre prxima neutralidade. 4.4. Efeito da Temperatura: Sabe-se que a cada aumento de 10C resulta numa duplicao da velocidade de uma reao qumica qualquer. Um aumento da temperatura, alm de aumentar a energia das molculas regentes, promove a termo-desnaturao das enzimas, tornando-as inativas. Essa a razo existncia de uma temperatura tima, onde a velocidade de reao mxima.

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A zero graus centgrados podemos ter 100% das molculas enzimticas ativas, aptas a catalizarem a reao, mas as molculas possuem baixa energia cintica e a reao no ocorre. Aumentando-se a temperatura, aumenta-se a energia cintica das molculas, mas igualmente aumenta-se proporo de enzimas desnaturada (inativa). Geralmente acima de 50%C a velocidade de reao nula, pois que a despeito da elevada energia cintica das molculas reagentes, todas as enzimas j sofrem termodesnaturao. Algumas enzimas so particularmente resistentes elevadas temperaturas, como a polifenoloxidase que manifesta atividade cataltica mesmo a 80C. 4.5. Efeito de Inibidores: Inibidores so substncias da mais variada natureza qumica, que penetram no stio ativo das enzimas, prejudicando a ao da catlise. Tais substncias, so, geralmente, estranhas ao metabolismo celular. Dependendo do mecanismo de ao eles podem ser considerados inibidores competitivos ou inibidores no competitivos. 4.5.1. Inibidores Competitivos: Tais inibidores apresentam semelhana estrutural com o substrato, ocupando o stio ativo sem sofrerem transformaes. Como exemplo desse tipo de inibio temos o cido malnico inibindo a desidrogenase succnica (enzima do ciclo de Klebs), cuja cintica de inibio apresenta as seguintes caractersticas:

A cintica dessa inibio demonstra que Vm atingida mesmo na presena do inibidor, mas Km aumentada. Conclumos que o inibidor deslocado do stio ativo mediante aumento na concentrao de substrato. Tal tipo de inibio reversvel. 4.5.2. Inibidores no Competitivos: Esses inibidores se ligam de maneira irreversvel no stio ativo, mediante ligao covalente, no sendo deslocados mediante aumento na concentrao de substrato. Tais concluses so obtidas da cintica de inibio que apresenta as seguintes caractersticas.

O fluoracetato (FCH2-COOH) encontrado em certas plantas txicas do gnero Policourea, os metais pesados (Hg, Pb, Cd, etc.), o gs de guerra (ou gs dos nervos ou Lewisita) assim como os inseticidas organo-fosforado so potentes inibidores da acetil-colinesterase e de outras 86

enzimas que apresentam o grupo sulfidrila (-SH) no stio ativo. Tais inibidores se ligam de maneira irreversvel com a sulfidrila do stio ativo. 4.6. Efetores Alostricos: So substncias consideradas metablitos normais da clula, que as alojam no stio alostrico de algumas enzimas (que recebem a denominao de enzima alostricas ou reguladoras). O efetor alosttico entrando no stio alostrico causa uma alterao na conformao espacial do stio ativo podendo facilitar ou dificultar a entrada do substrato no stio ativo. O seu efeito, portanto, de acelerar ou retardar a velocidade de uma reao, e o efetor qualificado de positivo ou negativo, respectivamente. A alosteria se constitui num mecanismo para a clula acelerar ou retardar a velocidade das reaes enzimticas com o propsito de se controlar o metabolismo.

Aumentando-se a concentrao do efetor alostrico positivo, aumenta-se a velocidade de reao. Aumentando-se a concentrao do efetor alostrico negativo, diminuiu-se a velocidade de reao.

Um dentre os inmeros exemplos de alosteria o controle na arginina a partir de cido asprtico.

Tal mecanismo tambm denominado de retroinibio, inibio pelo produto fina ou feedback. Tem por objetivo evitar que o cido asprtico seja consumido desnecessariamente (quando a sntese protica j no necessria) visto que o mesmo tambm usado na sntese de outros constituintes celulares. 4.7. Cofatores Enzimticos: So compostos da mais variada natureza qumica que auxiliam a catlise. Se subdividem em: a. grupo prosttico: estrutura no protica ligada covalentemente protena enzimtica: FMN = flavina-mononucleotdio FAD = flavina-adenina dinucleotdio 87

A flavina derivada da riboflavina (vitamina B2) b. coenzimas: So estruturas no proticas que no esto ligadas s protenas enzimticas. NAD+ = nicotinamida-adenina-dinucleotdio ou DPN+ = difosforidina nucleotdio NADP+ = nicotinamida-adenina-dinucleotdio fosfato ou TPN+ = trifosfopiridina nucleotdio TPP = tiamina pirosfofato (vitamina B1) Piridoxal fosfato (vitamina B6) c. Inios ativadores: muitas enzimas requerem ions para manifestar atividade cataltica. Os mais freqentes so Cl-, K+, Ca++, Mg++, Zn++, Cu++, F++, Mn++ etc. As necessidades de algumas vitaminas (especialmente do complexo B) e sais minerais podem ser explicadas em algumas situaes, pela funo dessas substncias de atuarem como cofatores enzimticos. Exemplos de reaes enzimticas com participao de grupo prosttico e coezima, respectivamente:

O cido succnico se oxidou a cido fumrico; para tal perdeu 2 eltrons (e-) e 2 prtons (H+). O FAD recebeu os 2 e- e os 2 H+ se reduzindo a FADH2.

O cido recebe 2H+ e 2 eltrons provenientes do NAD+, cedendo os H+ e eltrons.

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METABOLISMO DE CARBOIDRATOS RESPIRAO ANAEROBICA E AEROBICA GLICLISE 1. CONCEITO a degradao anaerbica dos carboidratos mediante uma seqncia de reaes catalisadas enzimticamente. de ocorrncia generalizada entre os organismos vivos (animais e vegetais) e ocorre predominantemente no citoplasma celular de tecidos que desempenham qualquer atividade fisiolgica ou biossntese, ou seja, onde houver demanda de energia (ATP). A gliclise tem por finalidade, pois, a rpida produo de energia (ATP) em condies de anaerobiose, bem ocorrer na mitocndria. 2. SEQUNCIA DE REAES Substrato Iniciais

Quando a degradao anaerbica do carboidrato efetuada por microorganismo, o processo denominado de fermentao.Assim a produo de cido ltico a partir de carboidrato pela bctria Lactobacillus sp Saccharomyces sp. O tempo gliclise, embora genrico, usado para denominar a degradao anaerbica dos carboidratos at cido ltico efetuada pelos demais organismos, como aquela processada pelos tecidos musculares.

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GLICLISE 3. BALANO DE COEZIMAS O processo anaerbico, no oxidativo portanto, o que pode ser observado pela constncia do nmero de oxidao do tomo de carbono: Tanto a glicose (substrato inicial) como o cido ltico igual a zero, no havendo oxidao e nem reduo nessa transformao. J na produo de etanol e CO2, observamos que uma poro da molcula de glicose, correspondente a 4 tomos de carbono sofre reduo, originando 2 molculas de etanol. A outra poro (com 2 tomos restantes) oxidada at gs carbnico. O que ocorre ento na fermentao alcolica uma ruptura da molcula de glicose, sendo que uma poro se reduz (recebendo 8 eltrons) s custas de outra que se oxida at CO2 (cedendo 8 eltrons), sem a necessidade de doadores ou receptores externos de eltrons. As reaes de xido-reduo da gliclise (catalisadas pelas desidrogenases de gliceraldedo-3fosfato e alcolica ou ltica) utilizam-se do NAD+ ou NADH+H+ (nicotinamida-adeninadinucleotdio), com a transferncia de 2 eltrons:

Na seqncia glicoltica temos uma reao em que o substrato oxidado, perdendo 2 eltrons (reao catalisada pela desidrogenase de gliceraldedo-3-fosfato) e posteriormente ocorre uma reduo de igual intensidade (recebimento de 2 eltrons) para a formao do cido ltico (pela desidrogenase ltica) ou para a formao de etanol (pela desidrogenase alcolica ). No computo geral, portanto, o carbono. Da o processo ser anaerbico, isto , no sendo oxidativo no exigiria a participao do oxignio (O2) como agente oxidante. 4. RENDIMENTO ENERGTICO EM ANAEROBIOSE Consideramos a degradao anaerbica processada pelas clulas do tecido muscular, quando transforma glicose em cido ltico: C6H12O6 2C3H6O3; G = -47.000cal/mol ATP + H2O ADP +Pi; G = -8.000 cal/mol N de ATP gastos: 1 ATP/glicose (pela hexoquinase) 1 ATP /glicose (pela fosfofrutoquinase) 2 ATP/glicose

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n de ATP formados: 2 APT/glicose (pela fosfogliceroquinase: 2 ATP/glicose (pela quinase pirvica) 3 ATP/glicose N de ATP lquido formado: 4 2 = 2 ATP/glicose Clculo de rendimento (R): 47.000 ______ 100% 2 X 8.000____R R = 100 X 2 X 8.000 = 34% 47.000 O rendimento energtico vem a ser o percentual da energia colocada em disponibilidade, que utilizada para a sntese de ATP. A energia restante dissipada na forma de calor, aquecendo o meio onde se processa a reao. 100% 47.000 calorias (energia colocada em disponibilidade) 34% 16.000 calorias (energia utilizada para a sntese de ATP) 66% 31.000 calorias (energia dissipada como calor) PROBLEMA: Calcular o rendimento energtico quando da degradao anaerbica do glicognio pela clula muscular. Dados: (C6H1206)n (C6H1206) n-1 + 2C3H6O3; G = -52.000 cal/mol ATP ADP + Pi; G = -8.000 cal/mol N de ATP gastos: 1 ATP/resduo de glicose (pela fosfofrutoquinase) N de ATP formados: 2 ATP/resduo de glicose (pela fosfogliceroquinase) 2 ATP/resduo de glicose (pela quinase pirvica) 4ATP/resduo de glicose n de ATP formado = 4-1 = 3 ATP/resduo de glicose do glicognio clculo do rendimento (R) 100% _______ 52.000 cal R __________ 3 x 8.000 cal R = 100 x 3 x 8.000 = 46% 52.000 O rendimento obtido pela clula quando degrada o glicognio maior que aquele obtido pela degradao de glicose. Isto porque a fosforilase adiciona um radical fosfato extremidade no redutora do glicognio sem gastos de ATP (ver esquema da gliclise - 1 reao).

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5. APLICAES PRTICAS DA GLICLISE, FERMENTAO LTICA E FERMENTAO ALCOLICA 5.1.Produo de lcool: a partir de monossacardios, dissacardios (especialmente sacarose) e polissacardios (amido de milho, mandioca, etc.). Quando se utiliza o amido como matria prima, este deve inicialmente ser hidrolisado, em glicose ou maltose (num processo denominado sacarificao do amido), aucares esses que podem ser desdobrados pela levedura Saccharomyces sp. A sacarificao pode ser: a. enzimtica: - amilase salivar (confeco do cauim pelos indgenas). - amilases de sementes em germinao (malte para produo de whisky, rum, etc. - amilases extradas de fungos e bactrias b. tratamento qumico (hidrlise c/HCl) - produo industrial de glicose de milho 5.2.Produo de cido Ltico: com finalidade de conservao de alimentos: picles, ensilagem, chucrutes, iogurtes e coalhadas. 5.3. Abate de Animais Descansados: o que propicia uma carne de mais fcil conservao e mais macia (devido formao de lactato a partir do glicognio muscular aps o abate) METABOLISMO AERBICO CICLO DE KREBS OU DOS CIDOS TRICARBOXLICOS 1. INTRODUO E ASPECTOS HISTRICOS Fisiologistas observaram que msculos estimulados a se contrarem, acumulavam cido ltico provenientes da gliclise. O acmulo de cido ltico o msculo fadiga, perdendo o mesmo a habilidade de contrao. Tal habilidade poderia ser restaurada em presena de oxignio molecular (aerobiose), quando ento havia desaparecimento do cido ltico. Posteriormente demonstrou-se que homogeinados de msculos eram capazes de catalisar a oxidao do lactato pelo O2. Isto demonstrava o processo como sendo de natureza enzimtica. Outros cidos podiam ser oxidados, sendo piruvato, citrato, oxaloacetato, fumarato, malato os mais rapidamente oxidados. Depois de elaborada a seqncia glicoltica em msculo e levedura, observou-se que o composto que era em suma oxidado at CO2 vinha a ser o cido pirvico, como demonstrava os experimentos de Gyorgi utilizando-se de homogeinados de msculos de peito de pombo. Muitos pesquisadores contriburam para o entendimento do processo, mas foi o bioqumico Ingls, Sir Hans Krebs, que em 1937 postulou um conjunto de reaes de natureza cclica, que 92

demonstrava a oxidao do piruvato at Co2. Devido importncia de suas descobertas Krebs recebeu em 1953 o Prmio Nobel de Medicina. O ciclo de Krebs de ocorrncia universal, sendo encontrado em clulas animais e vegetais, tanto em organismos superiores como inferiores. O equipamento enzimtico responsvel por tais reaes est confinado na mitocndria. 2. SEQUNCIA DE REAES

3. IMPORTNCIA ENERGTICA Tal ciclo de grande importncia na economia energtica da clula, visto que a energia liberada no processo enorme em relao ao processo anaerbico: 100% 7% 93% C6H12O6 + 6O2 6CO2 + 6H2O; C6H12O6 anaerobiose 2C3H6O3; C3H6O3 + 3O2 aerobiose 3CO2 + 3H2O; G = -686.000 cal/mol G = -47.000 cal/mol G = -319.500 cal/mol

Em anaerobiose apenas 7% (47.000cal/mol) da energia contida na molcula de glicose colocada em disponibilidade. O restante dessa energia (93%) contida no lactato posta em disponibilidade em condies de anaerobiose. 4. INIBIDORES DO CICLO DE KREBS 4.1. cido Malnico: Inibidor competitivo de desidrogenase succnica. Tal inibidor tem semelhana estrutural com o substrato natural (cido succnico), ocupando o stio ativo da enzima, mas sendo desalojado mediante aumanto na concentrao de substrato. H acmulo de succnato no sistema inibido. Adicionando-se ao sistema, fumarato, malato ou oxoloacetato, h oxidaodo piruvato, podendo ser adicionado em quantidades estequiomtricas equivalentes ao acetil CoA a ser consumido. A adio de citrato, isocitrato ou - cetolglutarato no permite a utilizao do acetil-CoA, pois que tais compostos estariam aqum da desidrogenase succnica na seqncia cclica de reaes. Foi a utilizaodo cido malnico como inibidor que demonstrou o processo como sendo de natureza cclica.

4.2. Fluoracetato (FCH2 COOH): Certas plantas africanas e algumas encontradas no Brasil, especialmente do gnero Policourea, possuem tal composto, o qual se constitui no principio txico. Tais plantas distantes dos centros consumidores.

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O fluoracetato, alm de inibir de maneira no competitiva as enzimas dependentes de sulfidrila (-SH) no stio ativo (como a acetilcolinesterase), pode se transformar num inibidor ativo (como de Krebs. Para tal, o fluoracetil CoA. Devido falta de especificidade de enzima de condensao (1 enzima do Ciclo de Krebs), o potente inibidor da aconitase acumulando-se cido ctrico no tecido envenenado. II.CADEIA RESPIRATRIA 1. CONCEITO E FUNO Vem a ser uma seqncia de reaes de xido reduo, em ordem estabelecida segundo o potencial de reduo de seus componentes, e que tem por finalidade transportar para o oxignio molecular (O2) os H+ e eltrons das coenzimas reduzidas (NADH + H+ e FADH2). Geradas no ciclo de Krebs. tambm chamada de cadeia de transporte de eltrons. Durante esse transporte, reaes com queda de potencial eletroqumico adequada, permitem a sntese de ATP a partir de ADP e Pi (fsforo inorgnico) pela chamada fosforilao oxidativa. A Fosforilao ao nvel de substrato se refere sntese de ATP em reaes acopladas, cuja energia obtida da hidrlise de certas ligaes ricas em energia (como na gliclise e no Ciclo de Krebs). Na cadeia respiratria os eltrons caminham a partir de um composto com baixo potencial de reduo para outro com potencial de reduo maior, isto , que tem maior tendncia em aceitar esses eltrons, ocorrendo uma queda citocromos que so metaloprotenas (ferroporfirinas) onde o tomo de F se oxida e se reduz, transportando assim os eltrons: F+3 + 1 e- ___reduo__ __oxidao__ (oxidado)

(reduzido)

O oxignio molecular (O2) o ltimo aceptor dos eltrons e H+, ocorrendo a biossntese da gua. Nesse processo formar-se 3 moles de ATP por mol NADH +H+ oxidado e 2 moles de ATP/mol de FADH2. 3. VENENOS RESPIRATRIOS Os citocromos, especialmente o citocromo oxidase (ou a3) pode ter o seu tomo de F complexado pelo CN- (cianeto), CO (monxido de carbono) ou H2O (gs sulfdrico), o que evita o mesmo de se oxidar ou se reduzir, interrompendo assim o transporte de eltrons. Essa a razo de tais compostos serem txicos para plantas e animais, ou seja, organismos que respirem, possuidores portanto da cadeia respiratria. O 2,4-DNP e a oligomicina promovem o desacoplamento da fosforilao oxidativa (consumo de O2 sem formao de ATP).

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4.ESTRUTURA DA MITOCNDRIA Ela considerada a casa de fora de uma clula. Nela esto contidas as enzimas do Ciclo de Krebs, bem como a Cadeia Respiratria. Nela deve entrar piruvato ou acetil-CoA, juntamente com acetil-CoA.

A parede interna da mitocndria se apresenta enrugada para aumentar a superfcie de contacto com o estroma, fazendo co que as coenzimas reduzidas geradas no Ciclo de Krebs sejam prontamente oxidadas na Cadeia Respiratria. Quando, portanto, escrevemos a equao geral da respirao da glicose: C6H12O6 + 6O2 _respirao_ + 6CO2 + 6H2O + 686.000 cal/mol devemos considerar que esse processo envolve dezenas de reaes sendo o CO2 liberando principalmente pelo Ciclo de Krebs e a gua (H2O) gerada na cadeia respiratria. Uma parte da energia liberada ser utilizada para a sntese de ATP tanto pela fosforilao ao nvel de substrato (gliclise e Ciclo de Krebs) como pela fosforilao oxidativa (acoplada cadeia respiratria). 5. RENDIMENTO ENERGTICO EM AEROBIOSE Consideremos a oxidao total o acetil-CoA pelo Ciclo de Krebs e cadeia respiratria:

Cada mol de acetil-CoA oxidado completamente (at CO2 e H2O) pelo Ciclo de Krebs e Cadeia Respiratria propcia a formao de 12 moles de ATP. Podemos agora calcular o rendimento energtico quando uma clula efetua a combusto completa (at CO2 e H2O) da glicose. Dados:

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44,3% da energia posta em disponibilidade utilizada para a sntese de ATP. O restante (10044,3 = 55,7%) dissipada na forma de calor, servindo apenas para aquecer o meio onde a reao se processa. VIA PENTOSE FOSFATO 1. INTRODUO A gliclise no a nica via degradativa da glicose, e entre elas se destaca a via pentose fosfato, que ocorre no citossol de clulas animais e vegetais. Tal via j fora percebida em tecidos que tinham capacidade de degradar a glicose mesmo na presena dos inibidores clssicos da gliclise (fluoretos e iodoacetato). A descoberta do NADP+, por Warburg e a oxidao da glicose-6-fosfato em cido 6-fosfoglucnico, levada a molcula de glucose para vias metablicas desconhecidas. O empregeo do C14 em pesquisas bioqumicas e os estudos de Lipmann, Dickens, Horecker e Racker resultaram no entendimento dos passos metablicos conhecidos como o desvio das pentoses. 2. SEQUNCIA DAS REAES

3. ESTEQUIOMETRIA DA VIA PENTOSE FOSFATO Consideremos o processamento de 6 molculas de glicose pelas trs primeiras reaes da via pentose. 6 hexosefosfato + 12 NADP+ 6H2O 6 pentosefosfato + 6CO2 + 12 NADPH + 12 H+ A seguir consideremos que 4 molculas de pentose fosfato reajam segundo as reaes 6 e 7 produzindo 2 molculas de tetrose-fosfato e 2 molculas de hexosefosfato: 2 pentose-fosfato 2 hexose-fosfato + 2 tetrose-fosfato Pela ao da transcetolase, 2 molculas de tetrose-fosfato reagem com 2 molculas de pentosefosfato para formar 2 molculas de hexose-fosfato e 2 molculas de triose-fosfato. 2 tetrose-fosfato + 2 pentose-fosfato 2 hexose-fosfato + 2 triose-P Quanto s 2 triose-fosfato, uma delas pode, por isomerizao se tranformar em dihidroxiacetona-fosfato; condensarem numa hexose-difosfato e se hidrolisar em hexose-fosfato + H3PO4:

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2 triose-fosfato 1 hexose-fosfato + H3PO4: A somatria dessas reaes individuais resulta que: Hexose-fosfato + 12 NADP+ + 6H2O 6CO2 + NADPH + 12H+ O processo oxidativo resultando em nucleotdio reduzindo. 4. SIGNIFICADO FISIOLGICO DA VIA PENTOSE FOSFATO O NADH gerado em reaes oxidativas da gliclise e Ciclo de Krebs tem como importante destino, ser oxidado pela cadeia respiratria propiciando a formao de ATP. J o NADPH no utilizado na cadeia respiratria, mas sim empregado em inmeros processos biossintticos, como na biossntese e lipdios, esterides, aminocidos etc,. A ribose gerada na via pentose utilizada na sntese dos cidos nuclicos enquanto a eritrose-fosfato precursora, via cido chiqumico, na produo de aminocidos, reguladores, compostos fenlicos, lignina e outros, especialmente em plantas. No que se refere a tecidos animais, a via pentose bastante ativa na glndulas mamrias, tecidos adiposos, crtex adrenal e fgado, onde o NADPH, fornece o poder redutor para as biossnteses. O msculo esqueltico, com pouca atividade de biossntese de lipdios no apresenta a via pentose fosfato. Em tecidos vegetais jovens e meristemticos a atividade glicoltica mais intensa e a medida que o tecido vai se tornando maduro a via pentose-fosfato se intensifica, para propiciar a disposio de lignina e demais compostos secundrios sintetizados com o concurso do NADPH. Ainda em plantas, a via pentose-fosfato supre o processo fotossinttico com NADPH necessrio assimilao do CO2 bem como est intimamente relacionada com a marcha do carbono na fotossntese. Outra funo da via pentose-fosfato seria estabelecer a possibilidade de converso de hexose, pentose, tetroses e trioses entre si, com bastante significado econmico nos processos biossintticos. Utilizando-se de glicose-1-14C e glicose-6-14C podemos avaliar as intensidades das vias glicoltica e pentose-fosfato em um tecido qualquer. A premissa de que, se apenas a glicose estiver operando, a evoluo de 14CO2 ser idntica quer se utilizado de glicose-1-14C ou de glicose-6-14C, pois que ambas ao serem metabolizadas (em ensaios separados) produziro cido pirvivo-metil-14C. Esse cido ser oxidado no Ciclo de Krebs liberando 14CO2. Por outro lado se apenas a via pentose estiver operando, a evoluo de 14Co2 ser primeiramente detectada quando da utilizao de glicose-1-14C.

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METABOLISMO DOS TRIGLICERDIOS 1. INTRODUO Os lipdios armazenados por organismos animais ou vegetais, quase que exclusivamente na forma de triglicerdios, constituem importante reserva energtica do ponto de vista quantitativo. Assim, enquanto os carboidratos constituem reserva energtica limitada, especialmente nos organismos animais (0,5%do peso muscular e 5% do peso do fgado), os depsitos de gordura subcutnea podem representar uma frao bastante significativa do peso corpreo. Do ponto de vista qualitativo, podemos afirmar que os lipdios so alimentos energticos Por excelncia.

A grande quantidade de energia liberada durante a combusto dos lipdios devido ao tomo de carbono estar reduzido (com baixo nmero de oxidao). Isso pelo baixo contedo de oxignio e elevado teor de hidrognio na molcula. Os triglicerdios constituem a quase totalidade da frao lipdica de nossa dieta ou de uma reao animal, e vem a ser a forma pela qual os organismos armazenam a maior parte da energia qumica. Da um maior interesse pelos triglicerdios. Essas reservas lipdicas (como a gordura subcutnea dos animais e os leos armazenam nas sementes dos vegetais) podem ser rapidamente mobilizadas para atender a demanda energtica ou outras necessidades do organismo em questo. 2. HIDRLISE DOS TRIGLICERDIOS E DESTINO DE SEUS PRODUTOS A degradao dos triglicerdios, quer sejam eles provenientes de uma dieta ou reao ou aqueles armazenados, inicia-se com a hidrlise enzimtica (pelas lpases) dos mesmos, originando glicerol e cidos graxos, seus constituintes essenciais:

O glicerol degradado pela via glicoltica se transformando em piruvato e posteriormente em acetil-CoA.:

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Os cidos graxos resultantes dos triglicerdios sofrem metabolizao diferente: sero transformados em acetil-CoA, independente do nmero de tomos de carbono, por um processo bioqumico denominado de beta-oxidao e efetuado pela mitocndria. LIPDIOS

-Oxidao de Lipdios & Ciclo do Glioxilato

Segundo Harper et al. (1982) os lipdios formam um grupo heterogneo de compostos relacionados, real ou potencialmente, com os cidos graxos. Tm a propriedade comum de serem relativamente insolveis na gua e solveis nos solventes no polares como o ter, o clorofrmio, o benzeno. Os lipdios, assim, compreendem as gorduras, os leos, as ceras e compostos relacionados. Os lipdios so constituintes importante da dieta, no s pelo elevado valor energtico como tambm, pelas vitaminas lipossolveis e cidos graxos essenciais encontrados na gordura dos alimentos naturais. No organismo a gordura serve de fonte eficiente de energia, tanto direta quanto potencialmente, quando armazenada no tecido adiposo. Serve como material isolante nos tecidos subcutneos e volta de certos rgos. O teor de gordura do tecido nervoso particularmente elevado. As combinaes de gordura e protena (lipoprotena) so constituintes celulares importantes, encontrando-se nas membranas celulares e nas mitocndrias no interior do citoplasma, e servindo tambm como meio de transporte dos lipdios no sangue. Muitos hormnios, vitaminas e detergentes biolgicos so lipdios (Harper et al., 1982; Wannmacher e Dias, 1988). A grande maioria dos lipdios possui em sua constituio pelo menos uma molcula de cidos graxos que so cidos carboxlicos, saturados (sem ligas duplas) ou insaturados (com uma ou mais ligas duplas), com nmero varivel de tomos de carbono, geralmente acclicos, havendo alguns ramificados e outros hidroxilados. Os cidos graxos so obtidos pela hidrlise das gorduras. Os cidos graxos existentes em gorduras naturais encerram usualmente um nmero par de tomos de carbono (porque so sintetizados a partir de dois carbonos) e so derivados de cadeia retilnea (Harper et al., 1982; Wannmacher e Dias, 1988). Os cidos graxos constituem importante fonte de energia para a maioria dos tecidos. Os cidos graxos circulam pelo sangue combinados com albumina ou sob forma de triglicerdios incorporados em lipoprotenas. Os triglicerdios, steres do lcool glicerol com cidos graxos, circulantes

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so originrios da dieta ou da biossntese heptica e resultam da hidrlise dos triglicerdios das lipoproteinas no leito vascular dos tecidos ou da hidrlise dos triglicerdios armazenados no tecido adiposo (Harper et al., 1982; Wannmacher e Dias, 1988). Lehninger, (1985) salienta que os triacilgliceris (triglicerdios) desempenham um papel extremamente importante coma fornecedor de energia nos animais. Entre os nutrientes principais eles possuem o maior contedo energtico (mais de 9 kcal/g); so depositados nas clulas do tecido gorduroso como gotculas quase puras de gordura e podem ser estocadas em grandes quantidades neste tecido. Nas populaes dos pases desenvolvidos, em mdia, quase quarenta por cento das necessidades energticas dirias so fornecidas pelos triacilgliceris da dieta. Eles fornecem mais da metade da energia consumida por alguns rgos, especialmente o fgado, o rim e o msculo esqueltico em repouso. Nos animais que hibernam e nos pssaros em migrao, os estoques de triacilgliceris so, praticamente, a nica fonte de energia. Cerca de noventa e cinco por cento da energia biologicamente obtida dos triacilgliceris reside nos seus trs cidos graxos de cadeias longa, apenas cinco por cento desta energia fornecida pelo glicerol. Por vias metablicas como a -oxidao esses cidos graxos ricos em energia so oxidados at dixido de carbono e gua. DEGRADAO OXIDATIVA DE CIDOS GRAXOS: - OXIDAO

1. APRESENTAO
METABLICOS: Conceito:

RESUMIDA

DOS

PRINCIPAIS

EVENTOS

Via catablica de degradao de cidos graxos para produo de energia Ocorre na matriz mitocondrial, aps a ativao e a entrada dos cidos graxos na mitocndria Pode ser dividida em 3 fases: A ativao do cido graxo A - oxidao propriamente dita A respirao celular

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Ativao Dos cidos Graxos A ativao dos cidos graxos consiste na entrada destes na mitocndria, na forma de ACIL-CoA. O processo depende:

1. Da ligao do cido graxo com a Coenzima A, formando o Acil-CoA no citosol. A reao catalizada pela enzima Acil-CoA Sintetase, localizada na membrana mitocondrial externa: CH3-(CH2)n-COOH + ATP + CoA-SH CH3-(CH2)n-CO-S-CoA + AMP + PPi 2. Do transporte do radical acila atravs da MMI, do citosol para a matriz, mediado pelo carreador especfico carnitina. A transferncia do radical acila da CoA para a carnitina catalizada pela enzima carnitina-Acil-Transferase I: Acil-S-CoA + Carnitina Acil-Carnitina + CoA-SH 3. Do lado da matriz mitocondrial, a carnitina doa novamente o radical acila para a CoA, regenerando o Acil-CoA no interior da mitocndria. A reao catalisada pela arnitina-Acil-Transferase II, localizada na face interna da MMI, e exatamente o inverso da descrita acima. - Oxidao do cido Graxo: Consiste na quebra por oxidao do cido graxo sempre em seu carbono b , convertendo-o na nova carbonila de um cido graxo agora 2 carbonos mais curto. O processo repetitivo, e libera cada quebra: 1 FADH2 1 Acetil CoA So 4 as enzimas envolvidas em cada etapa de oxidao da via. Exemplo: CH3-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CO-S-CoA + Acetil-CoA CH3-CH2-CH2-CH2-CH2-CO-S-CoA + Acetil-CoA CH3-CH2-CH2-CO-S-CoA + Acetil-CoA 101

1 NADH+H+

CH3-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CO-S-CoA + CoA-SH

 Acetil-CoA + Acetil-CoA

Respirao Celular: A sntese de ATP acoplada - oxidao vem: Do transporte de eltrons do NADH e do FADH 2 formados no processo pela cadeia respiratria; Da oxidao dos radicais acetil dos Acetil-CoAs no ciclo de Krebs.

Exemplo: A oxidao de uma cido graxo com 16 carbonos rende para a clula, em ATPs: 8 Acetil-CoA = 96 ATPs 7 NADH + H+ = 21 ATPs 7 FADH2 = 14 ATPs Total = 131 ATPs (12 : 1) (3 : 1) (2 : 1)

Regulao da - Oxidao: A regulao da via feita pela enzima reguladora carnitina-aciltransferase I, que regula a velocidade de entrada do cido graxo na mitocndria, desta forma, a velocidade de sua degradao. Esta enzima inibida por malonil-CoA, um intermedirio cuja concentrao aumenta na clula quando esta tem carboidrato disponvel, e que funciona como precursor na biossntese de cido graxo. Se o cido graxo a ser oxidado for insaturado, o processo tem dois passos enzimticos adicionais: A converso do ismero "cis" em "trans"; A saturao da dupla ligao pela adio de gua.

Oxidao de cidos Graxos Insaturados:

Uma vez o cido graxo saturado, ele pode seguir com o processo normal de oxidao.

Oxidao de cidos Graxos com Nmero mpar de Carbonos:

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A oxidao de um cido graxo com nmero de carbonos mpar leva formao de um resduo de propionol-CoA, que atravs de uma seqncia de reaes enzimticas e com gasto de energia (1 ATP hidrolisado para cada propionil-CoA convertido), convertido em succinil-CoA, que entra no ciclo de Krebs para ser oxidado. A oxidao dos cidos graxos no fgado leva formao de grande quantidade de Acetil-CoA, que pode ser oxidado no prprio fgado, ou convertido nos CORPOS CETNICOS. So 3 os corpos cetnicos formados a partir do Acetil-CoA: Acetoacetato - Hidroxibutirato Acetona

Corpos Cetnicos:

O objetivo da formao dos corpos cetnicos permitir o transporte da energia obtida pela oxidao dos cidos graxos aos tecido perifricos, para l serem utilizados na sntese de ATP. A formao de corpos cetnicos uma via de "superabundncia" atravs da qual o fgado distribui energia a todo o organismo. Nos tecidos perifricos os corpos cetnicos regeneram o Acetil-CoA, que entra no ciclo de Krebs para produo de energia Normalmente a quantidade de corpos cetnicos no sangue baixa, mas em situaes como o jejum prolongado ou o "diabetes mellitus", suas concentraes sricas podem aumentar muito, levando o indivduo a um estado de CETOSE, caracterizada por uma ACIDOSE METABLICA, que pode ser fatal.

2) -OXIDAO DE LIPDIOS 2.1 Os cidos graxos variam no comprimento da suas cadeias e no grau de nsaturao dos cidos graxos. Os cidos graxos em sistemas biolgicos comumente contm um mesmo nmero de tomos de carbonos. Tipicamente entre 14 e 24 tomos. Os cidos graxos que contm de 16 a 18 carbonos so mais 103

comuns. As cadeias de hidrocarbonetos so quase invarivel nos cidos graxos no ramificados de animais. A configurao de duplas ligaes em muitos cidos graxos insaturados tipo cis. As duplas ligaes em cidos graxos poli-insaturados so separadas por pelo menos um grupo metileno. As propriedades dos cidos graxos e lipdios derivados deles so marcadamente dependentes sobre o comprimento das cadeias deles e sobre o grau de saturao. cidos graxos saturados tem um menos ponto de derretimento do que os cidos graxos saturados de cadeia com o mesmo comprimento. Por exemplo, os ponto de derretimento do cido esterico 69,6 oC, e o cido oleico 13,4 oC, que contm uma dupla ligao cis. O ponto de fuso dos cidos graxos poli-insaturados da sria com 18 carbonos so muito mais baixos. O comprimento das cadeias tambm afeta o ponto de derretimento. Isto ilustrado pelo fato que a temperatura de derretimento do cido palmtico (C16) ser igual a 6,5 oC menor que o cido esterico (C18). Diante disto, cidos graxos com comprimento de cadeias curtas e aumento da insaturao e aumenta a fluidez dos cidos graxos e dos derivados deles. 2.2 Triacilgliceris so estoques de energia altamente concentrada. Triacilgliceris so estoques de energia metablica altamente concentradas devido elas serem quimicamente reduzidas e anidras. O rendimento de uma oxidao completa de cidos graxos de 9 kcal/g, em contraste com quase 4 kcal/g dos carboidratos e protenas. As bases desta grande diferena no rendimento calrico que os cidos graxos so muito mais altamente reduzidos. Entretanto, os triacilgliceris so muito apolares e assim eles so armazenados em uma forma quase anidra, j as protenas e carboidratos so muito mais polares e portanto mais altamente hidratados. De fato uma grama de glicognio seco liga-se a quase duas gramas de gua. Consequentemente uma grama de gordura quase anidra armazena mais que seis vezes a energia do que uma grama de glicognio hidratado, esta a razo para que os trigliceris foram evolutivamente selecionados como maior reserva de energia que o glicognio. Considerando o peso de um homem tpico, com 70 kg, que tem uma reserva de combustvel de 100.000 kcal em triacilgliceris, 25.000 kcal em protenas (mais em msculos), 600 kcal em glicognio e 40 kcal em glicose. Os triacilgliceris constituem quase 11 kg deste total do peso do corpo. Esta quantidade de energia se fosse armazenada em glicognio, seu peso total do corpo seria 55 kg maior.

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Em mamferos o maior stio de acmulo de triacilgliceris o citoplasma das clulas adiposas - clulas gordas. Gotculas de triacilglicerol unem-se para formar um grande glbulo, o qual pode ser maio do que o volume da clula. A clula adiposa especializada para a sntese e armazenamento de triacilgliceris e para a mobilizao interna de molculas de combustvel que so transportadas para outros tecidos pelo sangue. 2.3 Triacilgliceris so mobilizados por AMP cclico regulados pelas lipases. O evento inicial no uso das gorduras como fonte de energia a hidrlise dos triacilgliceris pelas lipases (Figura 1). A atividade das lipases em clulas adiposas regulada por hormnios. Epinefrinas, noraepinefrinas, glucagnio e hormnio adrenocorticotrpico estimulam a ciclase adenilato das clulas adiposas. O aumento do nvel de AMP cclico (monofosfato cclio de adenosina ento estimula a proteina quinase que por sua vez ativa a lipase pela fosforilao do AMP.

Figura 1: Esquema da degradao do tiacilglicerol para cidos graxos. Ento a epinefrinas, noraepinefrinas, glucagnio e hormnio adrenocorticotrpico causam a liplise. O AMP cclico o mensageiro secundrio na ativao da liplise em clulas adiposas. Que um processo anlogo a este papel na ativao de quebra do glicognio. E ao contrrio a insulina inibe a liplise. O glicerol formado pela liplise fosforilado e oxidado para dihidroxiacetona fostado, o qual sofre izomerizao para gliceroladido 3-

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fosfato. Estes intermedirios, ambos vo para as vias glicoltica e gliconeognica. Da glicerol pode ser convertido em piruvato ou glicose no fgado, que contm enzimas apropriadas. O processo reverso pode ocorrer pela reduo do dihidroxiacetona fosfato para glicerol 3-fosfato. A hidrlise por uma fosfatase d origem ao glicerol. Ento, glicerol e intermedirios glicolticos so prontamente interconversveis. 2.4 -Oxidao de Lipdios: Os cidos graxos so degradados pela remoo sequencial de duas unidades de carbono Em 1904, Franz Knoop contribuiu de forma importante e decisiva para elucidar o mecanismo da oxidao de cidos graxos. Ele alimentou cachorros com cidos graxos de cadeia reta, na qual o tomo de carbono estava unido ao grupo fenil. Knoop encontrou que a urina deste cachorros continham um derivado do cido fenilactico quando eles se alimentavam de fenilbutirato. Em contraste um derivado do cido benzico foi formado quando eles forma alimentados com fenilpropionato. De fato cido fenilactico foi produzido sem cido graxo contendo um mesmo nmero de tomos de carbono que forma os cachorros alimentados. No entanto o cido benzico foi formado contendo cidos graxos de nmero mpar/estranho ao que forma alimentados. Knoop deduziu destes achado que os cidos graxos so degradados pela oxidao carbono beta - . Estes experimentos foram marcados mundo fora na bioqumica, devido eles serem o primeiro a usar rtulo sinttico para elucidar mecanismos de reao. O deutrio e radioistopos foram usados em bioqumica apenas uma srie de anos mais tarde. 2.5 cidos graxos so ligados a Coenzima A (CoA) antes de serem oxidados Eugene Kennedy & Lehninger (1949), mostraram que os cidos graxos so oxidados na mitocndria. O trabalho subsequente demonstrou que eles so ativados ante de entrarem na matriz mitocondrial. O ATP (trifosfato de adenosina) dirige a formao da ligao tioster do grupo carboxila do cido graxo com o grupo sulfidrila da CoA. Esta reao de ativao ocorre sobre o lado de fora da membrana mitocondrial, onde ela catalisada pela enzima sintetase acil CoA (tambm chamada de tioquinase de cidos graxos.)

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Figura 2: Ativao do cido graxo ligando-o a CoA. Paul Berg mostrou que a ativao de cido graxo ocorre em dois passo: primeiro, o cido graxo reage com ATP para formar um adenilato acil. Nesta mistura anidirda, o grupo carboxila do cido graxo ligado ao grupo fosfato do AMP. Os outros dois grupos fosforilas do substrato ATP so liberados como pirofosfato. O grupo sulfidrila da CoA ento anexa o adenilato acil, o qual fracamente ligado s enzimas, para formar acil CoA e AMP.

Figura 3: entrada e sada da acil carintirna na matriz mitocondiral, mediada pela enzima translocase. Esta reao parcial livremente reversvel. De fato a constante de equilbrio da soma desta reao exatamente um (1). R - COO- + CoA + ATP acil CoA + AMP + PPi

Uma ligao altamente energtica quebrada (entre pirofosfato inorgnico e AMP) e uma reao altamente energtica formada (o tioster em acil CoA). Como esta reao dirigida?. A resposta que o pirofosfato inorgnico rapidamente hidrolisado por uma pirofosfatase. R - COO- + CoA + ATP + gua acil CoA + AMP + 2Pi + 2H+ Isto torna a reao altamente irreversvel devido ao consumo de duas ligaes altamente energticas. J que apenas uma formada. Outro exemplo de outro tema recorrente em bioqumica : 107

Muitas reaes biossintticas so feitas irreversveis pela hidrlise de pirofosfato inorgnico. Outro motivo surge nesta reao de ativao. O intermedirio adenilato acil ligado enzima no o nico para a sntese de acil CoA. O adenilato acil frequentemente formado quando grupos carboxilas so ativados em reaes bioqumicas. Por exemplo, aminocidos so ativados para a sntese de portenas por um mecanismo semelhante. 2.6 Carnitina promove a ativao de cidos graxos de cadeia longa dentro da matriz mitocondrial Os cidos graxos so ativados sobre a superfcie externa da membrana mitocondrial, onde os aminocidos so oxidados na matriz mitocondrial. Molculas acil CoA de cadeia longa no atravessam para o interior da membrana mitocondrial e assim necessrio um mecanismo especial de transporte. cidos graxos de cadeia longa so carregados para o interior da membrana mitocondrial pela carnitina, que um tampo (cargas positivas e negativas) formado a partir da lisina. Os grupos acil so transferidos do tomo de enxofre do CoA para os grupos hidroxilas da carnitina vinda da acil carnitina. Esta reao catalisada pela enzima carnitina aciltransferase 1, que esta localizada na face do lado do citossol e dentro da membrana mitocondrial.

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Figura 4: entrada e sada da acil carnitina na matriz mitocondrial, mediada pela enzima translocase. A carnitina acil ento lanada atravs do interior da membrana mitocondrial por uma translocase (Fig p474 meio Stryer). O grupo acil transferido de volta para a CoA, sobre o lado da matriz da membrana. Esta reao que catalisada por carnitina aciltransferase 2, e termodinamicamente vivel por causa da ligao O-acil na carnitina tendo um alto potencial na transferncia de grupos. Finalmente a carnitina retornada para o lado citosslico pela translocase na troca por uma acilcarnitina incomum. Um defeito na transferase ou translocase, ou uma deficincia de carnitina pode prejudicar a oxidao de cidos graxos de cadeia longa. Tal desordem tem de fato sido encontrada gmeos idnticos que tem tido cibras dores musculares desde a infncia. As dores foram precipitadas por rpido, exerccios ou alta teor de gordura na dieta. A oxidao de cidos graxo o processo de maior rendimento energtico nestes trs estados. As enzimas da gliclise e da glicogenlise foram encontradas ser normal. A liplise dos triacilgliceris foi normal, evidenciado pelo aumento na concentrao dos cidos graxos no esterificados encontrado no plasma aps a corrida. O ensaio de bipsia do msculo mostrou que a sintetase acil CoA de cadeia longa estava sempre ativa. Entretanto, cadeia de cidos graxos com comprimento mdio (C8 e C10) foram normalmente metabolizada. Isto mostra que a carnitina no requerida para a permeao dos grupos acil CoA de cadeia mdia no interior da matriz mitocondiral. Este caso demonstra que o fluxo prejudicado de um metablito de um compartimento da clula para outro pode causar esta doena. 2.7 Acetil CoA, NADH e FADH2 so gerados em cada volta do ciclo de oxidao dos cidos graxos. Um acil CoA saturado degradado por uma sequncia recorrente de quatro reaes: Oxidao por FAD (flavina adenina dinucleotdio) Hidratao Oxidao por NAD+ 109

Figura 5: Reao de degradao de cidos graxos (oxidao, hidratao oxidao e finalmente tilise, resultando numa molcula com dois carbonos a menos. A cadeia acil da gordura encurtada por dois tomos de carbono como um resultado destas reaes, e FADH2, NADH e acil CoA so gerados. 110

David Green, Severo Ochoa e Feodor Lyenen contriburam de forma importante para a elucidao destas srie de reaes, a qual chamaram de via da - oxidao. A primeira reao em cada volta da degradao a oxidao do acil CoA por uma acil CoA desidrogenase para dar uma enoil CoA com uma duplas ligao trans entre o C2 e C3. Acil CoA + E-FAD trans -
2

- enoil CoA + E-FADH2

Como na desidrogenao do succinato no ciclo do cido ctrico ,FAD mais que o NAD+ o aceptor de eltrons devido o G desta reao ser insuficiente para dirigir a reduo do NAD+. Os eltrons vindos do grupo prostcido do FADH2 da desidrogenase acil CoA reduzida so transferidos para a segunda flavoproteina chamada de flavoprotena transferidora de eltrons (ETF). Na volta a ETF doa eltrons para a ETF-ubiquinona redutase, uma protena Fe-S. Ubiquinona ento reduzida para ubiquinol que entrega seu alto potencial de eltrons ao stio de bombeamento de prtons da cadeia respeiratria. Consequentemente dois ATPs so gerados do FADH2 formado neste passo de desidrogenao como na oxidao do succinato para fumarato. O prximo passo a hidratao da dupla ligao entre o C2 e C3 pela enoil CoA hidratase. trans -
2

- enoil CoA + H2O L-3-hidroxilacil CoA + E-FADH2

A hidratao da enoil CoA estroespecfica, como a hidratao do fumarato e aconitato. Somente o L-ismero do 3-hidroxiacil CoA formado quanado a ligao trans- 2 hidratada. A enzima tambm hidrata a dupla ligao cis- 2, mas o produto ento do D-ismero. A hidratao da enoil CoA a prvia para reao da segunda oxidao, que converte o grupo hidroxila para C3 dentro do grupo ceto e gera NADH. Esta oxidao catalizada por L-3-hidroxiacil CoA desidrogenase, a qual absolutamente especfica para o L-ismero do substrato hidroxiacil. L-3-hidroxilacil CoA + NAD+ 3-cetoacil CoA + NADH + H+

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Estas trs reaes em cada volta do ciclo de degradao de cidos graxos assemelha-se em pelo menos um passo ao ciclo do cio cclico. Acil CoA enol CoA succinato oxaloacetato hidroxiacil CoA fumarato malato cetoacil CoA

A reao precedente tinha oxidado o grupo metileno no C3 para um grupo ceto. O passo final a clivagem/quebra do 3-cetoacil CoA por um grupo tiol de uma segunda molcula de CoA, a qual rende acetil CoA e acil CoA encurtadas por 2 tomos de carbono. Esta clivagem tioltica catalizada por -cetotiolase. 3-cetoacil CoA + HS-CoA aceil CoA + acil CoA (n -2 carbonos) O acil CoA encurtado, ento sofre outro ciclo de oxidao, comeando com a reao catalisada por acil CoA desidrogenase (Figura 6). -cetotiolase, hidroxiacil desidrogenase e enoil CoA hidratase tem ampla especificidade com respeito ao comprimento do grupo acil.

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Figura 6: As trs primeiras reaes de degradao de cido palmtico pela remoo de dois tomos de carbonos por ciclo de degradao. Principais reaes na oxidao de cidos graxos: 1) cido graxo + CoA + ATP 2) carnitina + acil CoA carnitina aciltransferase 3) Acil CoA + E-FAD trans- 2-enoil CoA + E-FADH2 L-3-hidroxiacil CoA 3-cetoacil CoA + NADH + H+ acil CoA desidrogenases (vrias) 4) trans- 2-enoil Coa + H2O 5) L-3-hidroxiacil CoA + NAD+ L-3-hidroxiacil CoA desidogenase 6) L-3-hidroxiacil CoA + CoA 2C) -cetotiolase (tiolase) O rendimento energtico derivados da oxidao de cidos graxos pode ser calculada. Em cada ciclo de reao, um acil CoA encurtada por dois carbonos e um FADH2 e formado NADH e acetil CoA. Cn-acil CoA + FAD + NAD+ + H2O + CoA Cn-2-acil CoA + FADH2 + NADH + acetil CoA + H+ A degradao do palmitoil CoA (C16-acil CoA) requer sete ciclos de reaes. No stimo ciclo, o C4-ceotoacil CoA tiolozado para duas molculas de acetil CoA. Ento a estequiometira da oxidao do palmitoil CoA : Palmitoil CoA + 7 FAD + 7 NAD+ + 7 H2O 8 acil CoA + 7 FADH2 + 7 NADH + 7 H+ acetil CoA + acil CoA (encurtada por enoil CoA hidratases (3-hidroxiacil CoA hidrolase) acil CoA + AMP + Ppi acil carnitina + CoA

acil CoA sintetase (tioquinase de cido graxo:CoA ligase [AMP]

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Trs ATPs so gerados quando cada destes NDAH oxidado pela cadeira respiratria, enquqnto 2 ATPs so formados para cada FADH2, devido aos seus eltrons entram na cadeia ao nvel do ubiquinol. Lembrando que a oxidao do acetil CoA pelo cclo do cido ctrico rende 2 ATPs. Considerando isto, o nmero de ATP formado na oxidao do Palmitoil CoA 21 e dos 7 FADH2, 21 dos 7 NADH e 96 das 8 molculas de acetil CoA, o que d um total de 131 ATPs. Duas ligaes fosfato de alta energia so consumidas na ativao do palmitato, na qual o ATP dividido AMP e 2 Pi. Ento o rendimento lquido da completa oxidao do palmitato e 129 ATPs. A eficincia da conservao da energia na oxidao de cidos graxos pode ser estimada, dado o nmero de ATP formado e da energia de oxidao do cido palmtico CO2 e H2O.

3) GERMINAO DE SEMENTES & -OXIDAO DE LIPDIOS No inicio da germinao, as protenas de armazenamento so degradadas para aminocidos atravs da sntese de enzimas requeridas para a mobilizao de lipdios. Estas enzimas incluem as lipases que catalisam a hidrlise de triacilgliceris para glicerol e cidos graxos. As lipases ligam-se s oleosinas do corpos de leo. O glicerol formado pela hidrlise do triacilglicerol pode ser alimentado dentro da via da gliconeognese aps a fosforilao do glicerol 3-fosfato e sua subsequente oxidao para diidroxicetona fosfato. A liberao de cidos graxos livres primeiro ativado como tiosteres de CoA e ento degradados para acetil CoA por oxidao. Este processo ocorre em peroxiossomos especializados , os quais so chamados de glioxiossomos. A -oxidao um processo biolgico importante para a germinao das sementes, em especial para as oleaginosas. Embora em princpio -oxidao represente uma forma invertida da sntese de cidos graxos, existe diferenas distintas como habilidade de alto fluxo metablico entre estas duas vias metablicas que operam em direes opostas. As principais diferenas entre -oxidao e a sntese de cidos graxos so:

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na desidrogenao do acil CoA, O hidrognio transferido via uma oxidase dependente de FAD para H2O2. A catalase irreversivelmente elimina a H2O2 no stio de sua produo pela converso em gua e O2.

-L-hidroxiacil CoA formada durante a hidratao da enoil CoA, in contrast para o correspondente D-enantioner durante a sntese. hidrognio transferido para o NAD durante o segundo passo da desidrogenao. Normalmente o sistema NAD na clula altamente oxidado, dirigindo a reao em direo a oxidao do hidroxiacil CoA. No conhecido qual reao utiliza o NADH formado nos peroxiossomos. Em uma reao irreversvel de tilises mediadas por CoASH que cliva -cetoacil CoA para formas uma molcula de acetil CoA e uma de acil CoA encurtada para dois tomos de carbono. Durante a degradao de cidos graxos insaturados, produtos intermedirios so formados e que no podem ser metabolizados por reaes de -oxidao. 3-cis-enoil CoA que formado durante a degradao do cido oleico convertido por uma isomerase mudando a ligao dupla para 2-trans-enoil CoA, que um intermedirio da oxidao. Na -oxidao dos cidos linolnico e linoleico a segunda ligao dupla no intermedirio correspondente est na posio correta, mas na configurao cis, com a consequncia que a hidratao pela hidratase enoil CoA, resulta na formao de -D-hidroxiacil CoA. Mais tarde convertido por uma epimerase para L-enantiomer, o qual um intermedirio da -oxidao. 4) CICLO DO GLIOXILATO Ao contrrio ao animais, os quais so hbeis para sintetizar glicose de acetil CoA. As plantas e muitas bactrias so capazes de crescer sobre acetato ou outros componentes que lhe rendam acetil CoA. As plantas podem fazer gliconeognesis, elas possuem as enzimas da gliconeognesis para o ciclo do glioxilato. Nesta via metablica acetil com duas unidades de carbono so convertidos para uma molcula de quatro carbonos (succinato). Esta sequncia de reaes chamada de ciclo do glioxilato, passagem livre para dois passos de descarboxilao no cilco do cido ctrico. Neste ciclo entram duas molculas de acetil CoA por cada ciclo/volta do ciclo do glioxilato. Uma ilustrao das principais reaes do ciclo do glioxilato apresentado na Figura 7. 115

Figura 7: Ciclo do glioxilato e suas principais reaes, produtos e intermedirios. O ciclo do glioxilato est ligado ao ciclo do cido ctrico da seguinte maneira: acetil CoA condensa com oxaloacetato atravs da enzima sintase do citrato e mais tarde convertido para isocitrato pela aconitase. Isocitrato e dividido pela isocitrato liase em succinato e glioxilato. Glioxilato mais acetil CoA so condensados pela sintase de malato para malato. Como no ciclo do citrato o malato oxidado pela desidrogenase do malato para oxaloacetato complementando o ciclo Uma molcula de succinato gera duas de acetil CoA.

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 succinato transferido para mitocndria e convertido para oxaloacetato (por reao parcial no ciclo do citrato). oxaloacetato transferido da mitocndria por um transportador e no citossol convertido para fosfoenolpiruvato (carboxiquinase do fosfoenolpiruvato). fosfoenolpiruvato precursor de hexoses na gliconeognese e outras rotas metablicas. BIBLIOGRAFIA ALBERTS, B.; BRAY, D.; LEWIS, J.; RAFF, M.; ROBERTS, K.; WASTON, J.D. Molecular biology of the cell. 2. ed. New York: Garland Publishing, Inc., 1989. FASMAN, G.D. Handbook of biochemistry and molecular biology Lipds, Carbohidrates, Steroids. 3 ed. Cleveland: CRC - Press, 1975. HELDT, H.W. Plant biochemistry & molecular biology. Oxford University Press, 1996. New York:

LEHNINGER, A.L. Princpios de bioqumica. So Paulo: Sarvier, 1985. MURRAY, R.K.; GRANNER, D.K.; MAYES, P.A.; RODWELL, V.W.; HARPER: Bioqumica. 7 ed. So Paulo: Atheneu, 1994. STRYER, L. Biochemistry. 3 ed. New York: W. H. Freemam and Company, 1988. VILLELA, G.G.; BACILA, M.; TASTALDI, H. Bioqumica. 3 ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 1976. WANNMACHER, C.M.D.; DIAS, R.D. Bioqumica fundamental. 6 ed. Porto Alegre: URGS, 1988.

3. BETA-OXIDAO DOS CIDOS GRAXOS 3.1. Histrico: Em 1904 Knoop administrou para ces, derivados fenilados de cidos graxos com diferentes nmeros de tomos de carbono na cadeia. Pelo fato do grupamento fenil ser de difcil transformao pelo organismo animal, poder-se-ia 117

pesquisar na urina os produtos de degradao de tais derivados fenilados e assim melhor conhecer o catabolismo dos cidos graxos. Quando eram ministrados derivados fenilados de cidos graxos com nmero par de tomos de carbono, havia excreo de cido fenilactico. Quando eram empregados derivados fenilados de cido dos graxos com nmero impar de tomo de carbono, havia excreo de cido benzico:

Knoop postulou que os cidos graxos sofreriam oxidaes sucessivas no carbono beta ( ), que se transformaria em carboxila, removendo-se assim, sucessivamente, unidades contendo 2 tomos de carbono (C2). Entretanto a exata compreenso do processo somente foi possvel depois da identificao da unidade C2 como sendo o acetil-CoA e dos estudos de Lynen e Green que isolaram de mitocndrias 5 enzimas que catalizavam a beta-oxidao dos cidos graxos. 3.2. Esquema helicoidal da beta-oxidao dos cidos graxos

1. tioquinase; 2. desidrogenase de acil; 3. hidrase de enoil; 4. desidrogenase de hidroxiacil; 5. tiolase. 3.3. Caracterstica da beta-oxidao a. Somente uma molcula de ATP requerida na ativao do cido graxo para sua completa transformao em acetil-CoA, independente do nmero de tomos de carbono. b. As enzimas responsveis pela beta-oxidao esto contidas na mitocndria, o que facilita o aproveitamento da energia, visto que o acetil-CoA formado prontamente oxidado pelo Ciclo de Krebs, bem como as coenzimas formadas so oxidadas na Cadeia Respiratria. c. O sistema oxidativo dos cidos de ocorrncia universal, sendo encontrado em plantas, animais e bactrias. 4. RENDIMENTO ENERGTICO DA BETA-OXIDAO Consideremos a oxidao biolgica completa do cido palmtico: C16H32O2 + 23O2 16CO2 + 16H2O; G= -2.338.000 cal/mol

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O cido palmtico (com 16 tomos de C), desdobrado pela beta-oxidao d origem a 8 molculas de acetil-CoA, cada uma carregando 2 tomos de C da molcula do cido graxo. Essas 8 molculas de acetil-CoA so geradas em 7 voltas da seqncia helicoidal de reaes, pois que na ltima volta se formam 2 molculas de acetil-CoA. Os equivalentes em ATP, em cada etapa, seriam:

Rendimento energtico: (R) 2.338.000 ..................... 100% 130 X 8.000 ................. R

R= 100 X 130 X 8.000 = 44.5% 2.338.000

Problema Calcular o nmero de molculas de ATP gerados Pela oxidao biolgica completa do triglicerdios abaixo estruturado:

CH2-O-CO-(CH2)14CH3 CH-O-CO-(CH2)16CH3 CH2-O-CO-(CH2)16CH3

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5. BIOSSNTESE DE CIDOS GRAXOS Logo de incio pensou-se em uma beta-mltipla condensao das mesmas unidades C2 (acetil-CoA), que resultasse na sntese de cidos graxos, mediante o reverso das reaes da beta-oxidao. Atualmente se sabe que a biossntese de cidos graxos processada por um equipamento enzimtico distinto, utilizado o acetil-CoA substrato:

A dessaturao dos cidos graxos, introduo de duplas ligaes, processada por plantas e animais, ao nvel mitocondrial ou microssomal, requerendo coenzimas reduzidas e oxignio molecular. Entretanto, somente as plantas superiores possuem a habilidade de introduzirem mais que uma dupla ligao, sintetizando assim cidos poliinsaturados. Tais cidos graxos so considerados assenciais aos organismos animais.

Nesta reao o O2 (oxignio molecular) se constitui em um substrato. Este pode ser um dos fatores que levam plantas e animais (com os peixes) de regies temperadas (mais frias) a sintetizarem cidos graxos poliinsaturados em maior proporo, visto que quanto menor a temperatura maior a concentrao de oxignio dissolvido no suco celular. Esse mecanismo parece ser responsvel, pelo menos em parte, pela resistncia ao frio manifestada por animais e vegetais das regies frias. Explicaria tambm porque o cacaueiro cultivado distante da linha do equador, formada um manteiga com menor ponto de fuso, ou seja, maior ndice de ido.

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METABOLISMO DEGRADATIVO DA PROTENAS E AMINOCIDOS 1. CONSIDERAES GERAIS Os aminocidos devem constar na dieta dos animais devido sua funo de constituintes das protenas corporais. Os estudos sobre a nutrio animal e humana mostram que os aminocidos podem ser divididos em dois grupos dependendo do metabolismo dos mesmos: a. aminocidos essenciais ou indispensveis aqueles que o organismo no sintetiza, ou se o faz em quantidades aqum da requerida: lisina, triptofano, metionina, valina, leucina, isoleucina, fenilalanina e treonina so essenciais ao homem; b. aminocidos no essenciais ou dispensveis aqueles que o organismo sintetiza nas quantidades requeridas: cido asprtico, cido glutmico, alanina, serina, etc... As protenas alimentares (presente nos alimentos) podem ser consideradas de boa qualidade quando rica em aminocidos essenciais e de m qualidade se so pobres em aminocidos essenciais. O milho opaco-2, melhorando geneticamente, apresenta maior contedo das protenas glutelina e zena que so ricas em lisina. De uma maneira geral os cereais so pobres em lisina ao passo que os gros da leguminosas so deficientes em metionina. As protenas que ingerimos como alimento so hidrolisadas nos aminocidos constituintes pelas enzimas digestivas do estmago (pepsina), suco pancretico (amino e carboxipeptidases) e suco intestinal (d - e tripeptidases). Os aminocidos livres, so absorvidos pelo intestino e atravs do sistema porta se dirigem ao fgado para a sntese das protenas corporais individuais (estruturais ou de atividade biolgica com enzimas e hormnios) ou sofrem reaes especficas para cada aminocido. At recentemente acreditava-se que as protenas, em contraste com os carboidratos e lipdios, fossem inertes metabolicamente. Assim, uma vez sintetizada, a molcula protica permaneceria intacta at a morte da planta ou animal, quando ento se iniciava a sua degradao. Este conceito prevaleceu, pois era observado que os teores de lipdios (e carboidratos) num organismo animal variavam dependendo da condio nutritiva. Assim que os depsitos de gordura podem ser aumentados quando da ingesto de uma dieta rica em calorias. Igualmente ocorre o consumo dos depsitos de gordura em condies de deficincia calrica. Em contraste, as protenas corporais no so utilizadas para a produo de energia, at que outras reservas (carboidratos e lipdios) tenham sido esgotadas, em condies de fome extrema. Entretanto, os Schoenheimen alimentando ratos adultos (que estavam em equilbrio nitrogenado nulo) com aminocidos marcados com istopo 15N, demonstraram que o tomo de N passou a integrar molculas de outros aminocidos (mediante reaes de transaminao) e igualmente foram encontrados integrando molculas proticas no fgado (sntese de protenas). Ficou estabelecendo ento, que em animais adultos, onde no h mais crescimento, ocorre sntese de protena com relativa velocidade, a qual contrabalanceada por uma degradao protica de mesma intensidade, de modo que o teor global de protena corprea permanece constate.

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Assim cada molcula protica difere quanto intensidade de reciclagem (turnover): a hemoglobina possui uma meia vida de 30dias enquanto esses valores seriam de 180 e 1000 dias para a miosina e colgeno, respectivamente. Para um humano adulto, calcula-se que 1,2 g de protena por dia sofram degradao e sntese por cada quilograma de peso vivo. Dessa degradao protica, um quarto dos aminocidos resultantes seriam oxidados, de modo que os mesmos devem ser restitudos pela protena da dieta. Desde que cerca de metade dos aminocidos oxidados so indispensveis, facilmente se compreende a necessidade desses aminocidos essenciais estarem contidos na dieta e nas quantidades adequadas. Quando h ingesto de protena, ou que a dieta ou reao seja deficiente em aminocidos essenciais, ou ainda, na maioria dos casos patolgicos, o organismo degrada suas prprias protenas para conseguir os aminocidos essenciais sntese de outras protenas necessrias no momento. Ocorre ento uma alterao no balano nitrogenado que passa a ser negativo. O balano nitrogenado a diferena entre o N ingerido por dia (dos alimentos) e o excretado (pelas fezes e urina). Um individuo ou organismo em fase de crescimento apresenta um balano nitrogenado positivo, isto , a quantidade de N ingerida maior que a excretada. Os indivduos adultos apresentam balano (ou equilbrio) nitrogenado nulo, visto que os organismos animais no mais acumulam compostos nitrogenados depois de cessado o crescimento. Ao contrario do que ocorre com os carboidratos e lipdios, as protenas no podem ser armazenadas. Da uma maior excreo de N devido a uma dieta rica em protenas. O zootecnista ou nutricionista deve, pois, levar em considerao no balanceamento de reaes ou dietas, que os carboidratos e lipdios devem satisfazer as exigncias energticas, enquanto que as protenas (a mais cara das trs classes de alimentos) devem constituir fonte de aminocidos para a sntese das protenas do organismo. 2. ESSENCIALIDADE DE AMINOACIDOS PARA OS RUMINANTES A medida que os organismos evoluem, perdem a habilidade de sntese de alguns compostos que lhes so essenciais, os quais devem ser encontrados em sua alimentao. Assim, enquanto as plantas sintetizam todos os aminocidos presentes em suas protenas, os organismos animais, em maior ou menor escala, necessitam de alguns previamente elaborados (heterotrofismo). A microflora (bactrias) existentes no rumem dos ruminantes, possui a habilidade de sintetizar todos os aminocidos a partir de carboidratos e compostos nitrogenados simples. Tais aminocidos iro integrar as protenas nas microbianas, as quais, aps a morte das bactrias, constituiro alimentos para os ruminantes. Nisto se fundamenta a zootecnista ao alimentar bovinos com melao e uria (ou outros compostos nitrogenados, como esterco de galinha etc...). Os vegetais, e a tambm as bactrias do rumem, possuem a enzima urase que hidrolisa a uria em NH3 e CO2: CO(NH2)2 + H2O CO2 + 2NH3 A amnia (NH3) assimilada pelas bactrias, formando aminocidos, cujo esqueleto carbnico orindo do acar do melao. Tais aminocidos, inclusive os essenciais ao bovino, iro integrar a protena microbiana.

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3. REAES ESPECFICAS PARA ALGUNS AMINOCIDOS 3.1. Desanimao: reao em que um aminocido perde o grupamento amino (-NH2) na forma de amnia (NH3), se transformando em no -cetcido correspondente. A desidrogenase glutmica uma enzima de ocorrncia universal, encontrada em organismos animais e vegetais. A reao reversvel de modo que pode operar no sentido de sntese ou de degradao do cido glutmico, conforme a convenincia:

3.2. Transaminao: reao em que ocorre a transferncia do grupamento amino (geralmente do cido glutmico) para um ceto cido (oxaloactico ou pirvico) formando outros aminocidos. Duas enzimas se destacam: transaminase glutmico-oxaloactico (TGO) e transaminase glutmico-pirvica (TGP), ambas exigindo piridoxina (vitamina B6) como cofator.

3.3. Descarboxilao: - o aminocido perde a carboxila na forma de CO2, se transformando em uma amina, geralmente exibindo efeitos fisiolgicos. A descarboxilase de histidina leva produo de histamina, amina esta que estimula a secreo gstrica e est presente em todos os processos alrgico.

O gama-aminobutrico formado no sistema nervoso, sendo a um componente essencial do metabolismo dos neurnios. A DOPAMINA precursora da adrenalina que tem atividade vasoconstritora. As aminas putrescina e cadaverina so formadas especialmente pela decomposio bacteriana dos materiais proticos (putrefao). Putrescina se acumula particularmente em plantas deficientes em potssio alcanando nveis txicos, causando os sintomas especficos que caracterizam a deficincia mineral em questo.

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4. REAES DEGRADATIVAS DOS AMINOCIDOS Cada um dos 20 aminocidos proticos sofrem diferentes reaes originando como produtos, dependendo do esqueleto carbnico dos mesmos, apenas acetil-CoA, cidos pirvico, oxaloactico ou alfa-cetoglutrico.

Os aminocidos que originam cido pirvico, oxaloactico ou alfa-cetoglutrico so chamados de glicognicos. Aqueles que do formao a acetoacetil-CoA so os cetognicos.

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INTEGRAO DO METABOLISMO DOS CARBOIDRATOS LIPDIOS E PROTENAS 1. FASES DA PRODUO DE ENERGIA Carboidratos, lipdios e protenas so as 3 principais fontes de energia para a maioria dos organismos vivos. Krebs e Kormberg deram nfase ao fato que apesar de muitos serem os compostos que servem como alimentos, o nmero de reaes pelas quais deles se obtem energia relativamente pequeno, independente do organismo: planta ou animal. A natureza , por conseguinte, bastante econmica nos processos por ela desenvolvido para degradar esses compostos, que podem ser enquadrados em 3 fases principais: a. Fase 1: a digesto dos alimentos de natureza hidroltica. Assim os polissacardios so hidrolizados em monossacardios, usulmente hexoses; os triglicerdios, que constituem a quase totalidade da frao lipdica de uma dieta, so hidrolizados em glicerol e cido graxos, e as protenas degradadas nos aminocidos constituintes. A energia contida nessas ligaes (glicosdicas dos oligo e polissacardios, steres dos triglicerdios e peptdicas das protenas) liberada na forma de calor, aumentando a temperatura do meio (que observada durante a digesto, e mesmo em sementes durante a germinao). b. Fase 2: Os monossacardios, glicerol, cidos graxos e aminocidos so posteriormente degradadas a 3 substncias apenas por processos que podem resultar na formao de algumas ligaes fosfatadas ricas em energia (ATP). O glicerol aps ser convertido em piruvato pela seqncia glicoltica dar origem a acetil-CoA. O mesmo ocorre com os carboidratos. Os cidos graxos pela beta-oxidao se transformam em acetil-CoA. Os 20 aminocidos integrantes das protenas, dependendo do seu esqueleto carbnico podem dar formao acetil-CoA, cido-cetoglutrico e cido oxaloactico. c. Fase 3: Os 3 compostos chaves formados anteriormante (acetil-CoA, cido alfa-cetoglutrico e cido oxaloactico) sero oxidados pelo Ciclo de Krebs mediante a reduo de apenas 2 tipos de coenzimas (DPNH + H+ e FADH2), que o serem reoxidadas na Cadeia Respiratrias, s custas do oxignio molecular, propiciam a fosforilao oxidativa.

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2. CONVERSO DE CARBOIDRATOS, LIPDIOS E PROTENAS ENTRE SI 2.1.Transformao de carboidratos em lipdios: Pela formao primeira dos aminocidos (no essenciais ao organismo em questo).Mediante as reaes de desaminao e transaminao, o NH3 pode ser incorporado em esqueletos carbnicos formando cido glutmico, asprtico, alanina etc..., desde que haja os cetocidos disponveis muitas enzimas podem formar cetocidos dicarboxlicos a partir de intermedirios da gliclise.

2.3. Transformao de protenas em carboidratos ou lipdios: - Estima-se que mais da metade dos aminocidos existentes nas protenas animais podem se transformar em carboidratos (glicose). Isto de suma importncia para o metabolismo animal, pois que 50% de suas protenas so potencialmente capazes de se transformar em acar. Para tal os aminocidos glicognicos se transformar em cido pirvico, oxaloactico ou alfacetoglutrico, produtos esses que se transformar em cido fosfoenolpirvico (PEP), e mediante o reverso da gliclise iro formar acar (processo esse denominado gluconeognese). A gluconeognese a formao de glicose a partir de substncias no glucdicas. Os aminocidos que ao serem degradados levam produo de acetoacetil-CoA, so chamados de cetognicos, pois so responsveis pelo aparecimento dos corpos cetnicos (acetoacetato, hidroxibutiratoe acetona). Um animal quando submeto a um regime de fome, e aps esgotar suas reservas de carboidratos (glicose do sangue e glignio muscular e heptico) e de lipdios (depsito subscutneos de gordura), passa a se utilizar de suas protenas corporais. Neste processo o organismo utiliza primeiramente as protenas de menor importncia fisiolgica: de inicio as protenas do sangue (albuminas e globulinas), depois as do tecido muscular, do tecido sseo e finalmente as do tecido nervoso. Neste estgio o organismo no tem mais recuperao. 2.4. Transformao de lipdios em carboidratos: - Tal transformao somente possvel em plantas, fungos e bactrias, organismos esses que possuem o Ciclo do Glioxilato, em funo de possurem duas enzimas especiais: sntese mlica e isocitrase.

Tais enzimas so particularmente ativas durante a germinao de sementes ricas em leos. No so encontradas no tecido animal. Da a impossibilidade dos organismos animais transformarem gordura em carboidrato, uma vez que a oxidase pirvica catalisa irreverssivelmente a transformao de piruvato em acetil-CoA. 126

EXCREO DO NITROGNIO 1. CONSIDEREO GERAIS Do metabolismo degradativo dos compostos nitrogenados, especialmente dos aminocidos, resulta a amnia (NH3). Devido a natureza dinmica dos processos metablicos, parte da amnia reutilizada pela clula mediante o processo da assimilao da amnia, enquanto o restante deve ser eliminada por excreo. Sabe-se que os animai excretam o nitrognio em uma das trs seguintes formas nitrogenadas de excreo: amnia, uria e cido rico. Destas formas a amnia a mais txicas e altamente solvel em gua; a uria bem menos txicas mas igualmente solvel, ao passo que o cido rico bastante insolvel e no txico. Um dos captulos mais interessantes da bioqumica comparada vem a ser aquele referente excreo do nitrognio. Existe evidncias suficientes de que a forma nitrogenada excretada por um organismo geralmente determinada pela disponibilidade de gua para esse organismo. Assim os animais aquticos, que vivem circundados pela gua, podem excretar a amnia, a qual, a despeito de ser txica no acarreta nenhum inconveniente, devido diluio instantnea no meio ambiente. J os animais terrestres, que possuem um suprimento limitado de gua, no podem acumular a amnia, excretando pois o nitrognio na forma de uria ou cido rico. A escolha entre uria ou cido estabelecida pelas condies do desenvolvimento embrionrio. Assim os mamferos, nos quais o feto se desenvolve em contato ntimo com o corpo materno atravs do sistema circulatrio, sintetizam uria, a qual sendo solvel pode ser removida do embrio e excretada pela me. J os embries de pssaros e rapteis que se desenvolvem no interior de um sistema fechado, o ovo, com um contedo de gua bastante limitado, no podem utilizar a uria como forma de excreo devido sua solubilidade e toxidez. Tais organismos optaram ento pelo cido rico, o qual sendo insolvel, depositar-seia na forma de um slido na parte interna da casca. Essas caractersticas de excreo nitrogenada to importante para o desenvolvimento do embries, seriam ento mantidas no organismo adulto. 2. EXCREO DA AMNIA (NH3) Nos animais amoniotlicos, ou seja, aqueles que excretam predominantes a amnia (como a maior parte dos vertebrados aquticos, especialmente os peixes sseos e as larvas de anfbios), o catabolismo dos aminocidos se inicia com uma transaminao envolvendo -cetoglutarato formando-se glutamato. Glutamato igualmente pode ser formado pela desidrogenase glutmica utilizando-se de amnia livre (NH3). Entretanto devido carga negativa do glutamato no pH fisiolgico (apresenta as carboxilas desprotonizadas) o mesmo no atravessa as membranas lipoproticas. Para contornar tal problema o glutamato se combina enzimaticamente com mais amnai, pela ao da glutamina sintetase, formando glutamina, uma molcula neutra no txica capaz de se translocar, transportando o N na forma amdica para o fgado (no caso da maioria dos animais terrestres) ou para as guelras das formas aquticas.

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Nas guelras a glutamina perde o nitrognio amdico, pela ao da glutaminase a presente, liberando o nitrognio na forma de amnia (NH3) que excretada no meio exterior.

3. EXCREO DA URIA A uria a principal forma nitrogenada de excreo dos ureotlicos que compreende as maior parte dos vertebrados terrestres. A formao da uria foi estudada por KREBS e HENSELEIT, utilizando-se de fatias de fgado de rato. Tal tecido tinha habilidade de sintetizar uria a partir de CO2 e NH3 em um processo endergnico, ou seja, exigente em energia (ATP). Tais pesquisadores demonstravam que quantidades catalticas de arginina, citrulina e ornitina, propiciavam a formao de uma quantidade aprecivel de uria. Foi proposto ento um ciclo de reaes, que tinha por finalidade promover a desintoxicao da amnia, o qual mencionado com ciclo da uria, ciclo da ornitina-ureia ou ciclo de Krebs-Henseleit. Tal ciclo opera em animais e em plantas. Entretanto em plantas, devido presena da urase, a sntese da uria no teria propsito e a funo do ciclo seria unicamente de propiciar a sntese de arginina.

O previlgio de se excretar o nitrognio na forma de uria tem um preo energtico: 4 molculas de ATP so grandes por molculas de uria formada, computando-se apenas as reaes do ciclo propriamente dito. 4. FORMAO DO CIDO RICO Os animais uricotlicos, pssaros e rpteis, excretam o nitrognio mormente na forma insolvel de cido rico. Composto com 33% de nitrognio. Entretanto o cido rico tambm o principal sub-produto da degradao das purinas (adenina e guanina) nos primatas, pssaros e rpteis.

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H um considervel gasto de energia para a fabricao do cido rico, que realizada s custas de pequenas molculas. Inicialmente o nitrognio de alguns aminocidos, juntamente com o carbono de outras molculas doadoras so empregados para se confeccionar as bases adenina e guanina, as quais em seguida so transformadas em cido rico.

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FOTOSSNTESE 1. INTRODUO A fotossntese um importante processo biolgico que ocorre na biosfera, e dele dependem todas as formas viventes. O sol fornece energia para todos os processos biolgicos em nosso planeta.Alm de ser o responsvel pelo movimento de ar e gua na superfcie terrestre, a vida se originou na terra de modo a depender exclusivamente de seu contnuo fornecimento de energia. Os organismos pigmentados, e com especial referncia, as plantas verdes, utilizam a energia radiante e a armazena na forma de ligaes qumicas. Este fenmeno chamado de fotossntese, cuja equao geral :

2. CLOROPLASTOS E PIGMENTOS O centro Biolgicos da fotossntese uma organela inclusa no citoplasma celular denominada de cloroplasto. Dentro do cloroplasto esto os compostos responsveis pela absoro da energia radiante e a posterior transformao em energia qumica. Os compostos que recebem essas radiaes so as clorofilas a e b, carotenides e ficobilinas. A posterior reduo o CO2 ao nvel de carboidratos efetuada por um equipamento enzimtico a presente. Esses pigmentos ocorrem na forma de lipoprotenas dentro dos cloroplastos. Os cloroplastos se apresentam de forma elipsoidal com 3-5 de comprimento por 2 de espessura, cujo nmero varia nas algas. A estrutura dos cloroplastos revelada pela microscopia eletrnica se mostrou altamente organizada: uma membrana dupla isola a organela do citoplasma. Inclusa numa matriz denominada de estroma esto corpos em forma de disco (tilacides) dispostos em camadas e que se chama de grana. O tilacide a unidade fotossinttica, formada de camadas alternadas de protenas (enzimas) e lipdios (pigmentos e fosfolipdios).

Pesquisa-se constantemente os passos bioqumicos da fotossntese e ainda pouco se sabe o fenmeno da converso quntica, ou seja, como a energia luminosa transformada em energia qumica. As clorofilas a e b logo se apresentaram como sendo pigmentos muito relacionados com a fotossntese quando se estudou os seus espectros de absoro e a eficincia fotossinttica para os diversos comprimentos de onda. 130

O fato existir fotossinttica em comprimento de onda que no so absorvidos pelas clorofilas (500 a 600nm) levou-se a acreditar que outros pigmentos (carotenides e ficobilinas) absorvessem essa luz e transferissem a energia para a molcula de clorofila. Salienta-se ainda o fato de que os carotenides evitam a fotoxidao da clorofila. Os carotenides apresentam pico de absoro em 430nm, enquanto a ficobilina azul os apresentam em 560e 570nm, e 660nm. A ficobilina vermelha exibe picos de absoro em 500 e 570nm. 3. UTILIZAO DA GUA NA FOTOSSNTESE Segundo a reao anterior, a gua o agente que oxidado a O2. O estudo com microorganismo fotossintetizadores (bactrias) fornecem dados para se poder especular a respeito do papel da gua na fotossntese. Em sulfobactias a reao pode ser assim representada:

Van Niel observou a analogia dessa reao com aquela das plantas verdes e escreveu uma equao geral da fotossntese: No caso especfico das plantas verdes notamos que h necessidade da ciso da molcula de H2O como primeiro passo para a reduo do CO2, havendo pois evoluo de O2 e que segundo Van Niel este seria provenientes da gua. Tal afirmativa foi comprovada com o uso de H2O18, e a reao correta seria: No processo da fotossntese a gua seria sintetizada e consumida. 4. REAO DE HILL Em 1937, Hill na Inglaterra, estudou as reaes da fotossntese trabalhando com cloroplastos isolados de espinafre, acreditando conseguir melhores resultados. No conseguiu o seu intento em promover a reduo do CO2 ao nvel de carboidratos, mas conseguiu promover a fotlise da H2O na presena de outro agente oxidante; o ferrioxalato de K.

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Observou-se ainda que a evoluo de O2 se processava segundo uma estequiometria em relao ao agente oxidante adicionado. Posteriormente foram identificados substitutos do ferrioxalato: benzoquinona, 2,6diclorofenolindofenol, etc. Essas reaes foram muito criticadas na poca pelo fato de tais compostos no serem de ocorrncia natural na clula, no tendo importncia fisiolgica ou bioqumica. Mas em 1952, nos EUA, foi observado que TPN+ (NADP+) podia ser facilmente reduzido na presena de luz e cloroplastos de espinafre. Tal fato se revestiu de particular interesse pois que j era conhecida a capacidade do TPNH em promover a reduo de uma srie de substrato orgnico:

Um dos enigmas da fotossntese havia sido descoberto: a fotoreduo do TPN+. Faltava apenas o que em 1954, na Califrnia, foi conseguido por ARNON: a reduo do CO2 a carboidrato, pela ao da luz, com cloroplastos intactos, sem exigir outros componentes celulares. O CO2 foi reduzido enquanto houve oxidao da gua. Neste trabalho ARNON demonstrou uma segunda funo do cloroplastos: produzir ATP a partir de ADP + Pi com auxilio da luz.

O processo foi chamado de fotofosforilao. Ainda mais, iluminado-se cloroplastos em presena de ADP, Pi e TPN+, e na ausncia de CO2 acumulavam-se ATP e NADPH. Esse material, quando em presena de CO2, promovia a reduo do mesmo ao nvel de carboidrato, mesmo na obscuridade. Separam-se ento duas reaes: reao luminosa e reao no escuro.

5. CICLO DE CALVIN O ciclo de reduo do CO2 foi estabelecido por Calvin e seus colaboradores quando buscavam as respostas para as seguintes perguntas: qual o primeiro composto orgnico formado pela fixao ou reduo do CO2 durante a fotossntese? Como seria, bioquimicamente, essa fixao? Calvin utilizou o 14CO2, algas chlorella e tcnicas cromatogrficas para identificar o primeiro composto formado na fotossntese. A considerao bsica era que:

Aps exposio ao 14CO2 durante 30 segundos apareceram marcados diversos aminocidos, cidos orgnicos e aucares. 132

Depois de 7 segundos de exposio, 12 compostos radioativos, entre eles, hexose, trioses e tetroses. Depois de 5 segundos o cido 3-fosfoglicrico retinha a maior atividade especifica e a radioatividade estava no carbono da carboxila.

Acredita-se de incio que o composto que recebia o CO2 seria uma molcula com 2 tomos de carbono, mas a busca foi infrutfera. Segundo uma tcnica de interrupo brusca no fornecimento de CO2, observou-se o acmulo de Ribulose 1,5-difosfato, o aceptor de CO2. Posteriormente a enzima carboxidismutase foi identificada. Ao mesmo tempo os estudos dos compostos radioativos, suas atividades especficas e a posio do 14C na molcula permitiram a calvin estabelecer o caminho do carbono na fotossntese.

6. VIA C-4 DOS CIDOS DICARBOXLICOS J era conhecido, h mais de quinze anos, que algumas gramneas tropicais e outras espcies de plantas adaptas ao clima rido se distinguiam pela alta taxa de fotossntese, baixa perda de CO2 na luz (fotorrespirao), anatomia foliar caracterstica e baixo consumo de gua por unidade de matria seca produzida. Todas estas caractersticas, identificadas isolada e independentemente, tm conexo como processo de fixao do CO2 que ocorre em vrios grupos de plantas que realizam a fotossntese atravs do ciclo C-4. Esta fixao do CO2, diferente daquela proposta pelo ciclo de calvin, j tinha sido identificada em milho e canadeacar atravs de experimentos com14CO2 e subseqente identificao dos produtos radioativos formados. Os resultados mostravam que um composto com 4 tomos de carbono aparecia como primeira substncia marcada, diferente do 3-PGA como as plantas C-3. Folhas de cana-de-acar aps 1 segundo de exposio ao 14CO2 apresentavam 80% da radioatividade nos cidos oxaloactico, mlico asprtico. O mesmo era observado com milho, sorgo e outras plantas com elevada capacidade fotossinttica ou de produo de massa verde. Em tais plantas observa-se um alto valor de Km para o CO2 frente carboxi-dismutase (Ribulose-1,5-difosfato carboxilase). Foram Kortschak e colaboradores, em 1965, que mostravam, de maneira convincente, que o primeiro composto acumulado durante a fotossntese de cana-de-acar era o malato. Hatch e Slack, durante 1966 a 1970, completaram os estudos e estabeleceram as bases para o conhecimento do ciclo C-4, embora muitas adies tenham sido feitas mais recentemente. 133

Uma caracterstica anatmica associada ao processo de fixao do CO2 pelas folhas das plantas C-4 refere-se presena de um anel de clulas que circundam os feixes vasculares, a bainha vascular.

A assimilao do CO2 da atmosfera ocorre nas clulas do mesfilo, sendo incorporado na molcula do cido fosfoenolpirvico (PEP), produzindo cido oxaloactico (AOA) e, em seguida, malato ou aspartato, dependendo do tipo de planta considerada. O malato ou aspartato transportado para a bainha vascular onde descarboxilado, sendo o CO2 produzindo na reao imediatamente fixado atravs do ciclo de calvin. As reaes iniciais da fixao do CO2 so as seguintes:

7. METABOLISMO CIDO DAS CRASSULCEAS (CAM) Vrias espcies de plantas que habitam em ambientes ridos e quentes apresentam um sistema de fixao do CO2 especializado, destinado, principalmente, a manter um balano positivo de carbono nos tecidos, ao mesmo tempo que desenvolvem um eficiente mecanismo de economia de gua. Estas espcies so geralmente suculentas e englobam os membros da famlia das crassulceas. Entretanto, vrios outros grupos de plantas exibem comportamento fisiolgico semelhante ao das crassulceas (cactos, abacaxi, orqudeas), caracterizado por uma produo cclica diria de cidos orgnicos; da a denominao de metabolismo cido das crassulceas (CAM). As plantas que assimilam o gs carbnico atravs do sistema CAM, devido s restries na disponibilidade de gua e grande presso ambiental, que resulta em elevada transpirao, fecham os estmatos durante o dia a fim de manter a hidratao dos tecidos. noite, os estmatos se abrem e permitem a entrada do CO2, que assimilado atravs da reao catalisada pela enzima PEP-carboxilase.

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O oxaloacetato produzido transformao em malato pela NADH-malato desidrogenase e se acumula. No perodo seguinte de iluminao, o malato descarboxilado na reao catalisada pela enzima do cido mlico-NADP (em algumas espcies pela PEP-carboxiquinase), sendo que o piruvato formado reage com ATP e regenera o PEP na reao da piruvato-diquinase. O CO2 liberado no processo captado pela RuDP-carboxilase e, pela operao do ciclo de calvin, resulta na produo de amido. Estas reaes, que ocorrem durante o dia, so restritas aos cloroplastos, enquanto o sistema que opera durante a noite ocorre no citoplasma. O amido que se acumula durante o dia degradado na noite seguinte, formando hexose-fosfato, que so oxidadas nas reaes glicolticas que resultam em cido fosfoenolpirvato (PEP). O carter adaptativo da plantas CAM altamente evoludo e permite sua sobrevivncia em condies extremas de ambiente. O fechamento dos estmatos durante o dia resulta em um aumento da temperatura das folhas, que pode atingir at 50%C. Entretanto, a temperatura tima para a atividade da enzima de descarboxilao (enzima do cido mlico) e tambm bastante alta, permitindo que a liberao interna do CO2 ocorra normalmente. Em condies climticas mais amenas, com boa disponibilidade de gua, as plantas CAM comportam-se de maneira semelhante s espcies de fotossntese C-3 e o CO2 fixado, durante o dia, pelo ciclo de calvin. 8. FOTORRESPIRAO Umas das caractersticas fisiolgicas mais importantes que diferenciam as plantas C-4 das C-3 a ocorrncia de perdas de carbono pelas folhas, simultaneamente com o processo de absoro de gs carbnico pela fotossntese. Este fenmeno de liberao de CO2 na luz, funcional e metabolicamente ligado fotossntese, denominado fotorrespirao. O termo fotorrespirao, inicialmente empregado por Decker no final da dcada de 50, significa que os tecidos fotossintetizantes liberam CO2 com maior intensidade na luz do que na obscuridade, considerando que o processo da respirao (gliclise, ciclo de Krebs e transporte eletrnico no mitocndrio) ocorre continuamente, tanto no perodo iluminado como no escuro. Uma das diferenas bsicas entre o fenmeno de fotorrespirao e respirao refere-se ao efeito do O2 sobre os dois sistemas. A fotorrespirao aumentada com o aumento da concentrao de oxignio no meio, a partir de 1-2%. Em contraste, a respirao satura quando o O2 atinge aproximadamente 2%, e no h e nenhum efeito da elevao do contedo de oxignio at aproximadamente 21%. Esta influncia do oxignio sobre a fotorrespirao esta intimamente associada com o efeito do oxignio sobre a fotossntese. J em 1929, Warburg descreveu uma diminuio da fotossntese com o aumento da concentrao de O2. Esta inibio, denominada efeito de Warburg, podia ser removida pelo aumento da concentro de CO2, sugerindo processos competitivos. Mas foi com a interpretao dada por Decker e Tio (1959), na tentativa de explicar o brusco aumento da liberao de CO2 que ocorre imediatamente aps a interrupo da iluminao, que os estudos do mecanismo da fotorrespirao foram intensificados. Folhas iluminadas, em condies de equilbrio no que se refere s trocas de CO2 com o ambiente (ponto de compensao de CO2), liberam alta quantidade de gs carbnico nos primeiros minutos que seguem ao incio do perodo de escuro. Este aumento ps-iluminao da liberao de CO2 parecia significar que algum composto sintetizado na luz se armazenaria e sua utilizao continuaria a ocorrer no escuro enquanto houvesse disponibilidade de substrato para o processo. 135

A associao entre fotossntese e a fotorrespirao foi definitivamente esclarecida com a descrio do processo de oxidao da ribulose difosfato atravs da enzima RuDPcarboxilase/oxigenase. Em condies normais (0,03% CO2; 21% O2) a enzima apresenta duas atividades: carboxilase e oxigenase. A relao entre as duas atividades de aproximadamente 70:30%, dependendo da idade da folha, condies climticas, espcies de planta, etc. Desta competio decorre uma diminuio da assimilao lquida do CO2, o que normalmente resulta em um decrscimo da produtividade da planta. O processo de fotorrespirao se inicia com a produo do cido gliclico, a partir da queda da molcula de RuDP pela ao do O2 sobre a enzima RuDP-carboxilase:

O cido fosfogliclico transformado em cido gliclico atravs da reao catalisada pela fosfatase, e se configura com o principal substrato para a fotorrespirao. O metabolismo do cido gliclico se d nos peroxissomos, que so organelas celulares presentes em todas as clulas verdes, em geral localizados prximos dos cloroplastos, freqentemente com os envelopes externos justapostos a estes. Nos peroxissomos o cido gliclico oxidado a cido glioxlico e em seguida produzida a glicina. A glicina formada no peroxissomo transferida para o mitocndrio, onde se acumula e produz serina. Neste processo, a condensao de duas molculas de glicina resulta na formao de serina com a liberao de CO2:

O gs carbnico formado transportado para o meio externo constituindo-se em fonte de perda de carbono pela fotorrespirao. A serina volta ao peroxissomo, transformada em cido hidroxipirvico e, em seguida em cido glicrico:

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Com a transferncia do cido glicrico para o cloroplasto, ocorre a produo de cido fosfoglicrico que, em seguida, incorporado no ciclo de calvin. 9. FISIOLOGIA COMPARA DAS PLANTAS C-3 e C-4 Interna atividade de pesquisa, desenvolvida nos ltimos quinze anos, mostrou que a atividade fotossinttica dos vrios grupos de plantas difere em funo de caracterstica especficas do ponto de vista fisiolgico, anatmico e bioqumico. Um dos parmetros mais importantes na diferenciao das plantas C-4 das C-3 refere-se capacidade dos tecidos das espcies C-4 de concentrarem o CO2 atmosfrico nos stios de produo de carboidratos, ou seja, nas clulas da bainha vascular. Sabe-se que ambas as plantas C-4 e C-3 apresentam o processo de fotorrespirao ativo, se bem com intensidades diferentes, mas as primeiras tm a capacidade de capturar o CO2, no seu caminho em direo atmosfera externa, pela reao da PEP-carboxilase, que mostra grande afinidade com o gs carbnico (baixo valor do Km). Desta maneira, as plantas C-4 no perdem CO2 para a atmosfera e o sistema de descarboxilao do malato ou oxaloacetato, que ocorre na bainha vascular quantidade de gs carbnico disponvel no sitio da enzima RuDP-carboxilase, que funciona em concentrao de CO2 de 60 M, ou mais (Hatch,1976). Nestas condies, a RuDP-carboxilase apresenta mxima velocidade de reao, pois encontra-se em saturao de substrato, considerando em Km de 20 M (Hatch, 1976). A caracterstica anatmica das plantas C-4 representada pela sndrome de Kranz propicia que os produtos da assimilao do carbono, principalmente os carboidratos, aminocidos e cidos orgnicos, sejam facilmente transferidos para o sistema vascular (floema) e translocados para outras partes da planta com menor gasto de energia metablica. De maneira geral, as plantas C-4 apresentam elevada resistncia dos estmatos ao fluxo de CO2 e de vapor dgua que ocorre entre a folha e a atmosfera externa. Entretanto, devido grande afinidade da enzima PEP-carboxilase com o seu substrato, o gs carbnico, as clulas tm capacidade de assimilar o CO2 com bastante eficincia, ao mesmo tempo que restringem a perda de gua atravs da transpirao. Assim, as plantas C-4 chegam a apresentar 50% mais eficincia na utilizao da gua para a produo de matria seca do que as plantas C-3. Outra importante caracterstica fisiolgica que diferencia as plantas C-3 e C-4 refere-se eficincia de utilizao do nitrognio nos processos de assimilao. Recentemente, Black e colaboradores (1977) demonstraram que as plantas C-4, em comparao com as C-3, produzem duas vezes mais matria seca por unidade de nitrognio. A localizao da RuDPcarboxilase, quase que exclusivamente nas clulas de bainha vascular, faz com que as espcies C-4 utilizem de 10 a 25% da protena solvel das folhas para a produo da enzima, enquanto as plantas C-3 investem de 40 a 50% no mesmo processo. Desta maneira, as plantas C-4 tem a capacidade de sobreviver e produzir satisfatoriamente em solos pobres em nitrognio. Estas plantas, no qual os componentes so separados temporal e espacialmente. Assim, as enzimas que catalisam as reaes de reduo do nitrato nas folhas, especificamente redutase de nitrato, redutase de nitrato e glutamato desidrogenase, localizam-se nas clulas do mesfilo como o sistema de assimilao do nitrato requer, alm de esqueletos de carbono (Magalhes, 1978), alta quantidade de energia (ATP) e de compostos redutores (ferredoxina, NADPH), que tambm so necessrios para o processo de assimilao do CO2, altamente desejvel que os dois sistemas (fixao de CO2 e reduo de nitrato) estejam localizados em 137

compartimentos distintos, como ocorre nas folhas das plantas C-4. A competio que se estabelece entre os dois processos nas clulas das plantas C-3 parcialmente responsvel pela menor eficincia de utilizao do nitrognio nestas plantas, comparativamente com as plantas C-4. Como decorrncia da economia de CO2 que feita pelas espcies C-4 que no perdem gs carbnico pela fotorrespirao, aquelas plantas apresentam ponto de compensao ao redor de 5-10 ppm de CO2, enquanto as C-3 mostram ponto de compensao de 50 a 150 ppm de CO2. Em funo das respostas das vrias espcies com relao concentrao do gs carbnico da atmosfera, as plantas C-4 tm maior capacidade de enfrentar a competio que se estabelece em comunidades vegetais muito densas, nas quais poder ocorrer limitao de CO2 para a fotossntese. Estudos iniciais do ciclo C-4 mostraram que a ocorrncia daquele processo prevalecia nas plantas aclimatadas a ambiente tropical, ou seja, adaptadas temperatura elevada e alta intensidade luminosa. Investigaes mais recentes mostraram que vrias espcies C-3, como girassol, mandioca e Camissonia, que ocorrem em climas quentes e muito iluminados, fazem fotossntese eficientemente em condies de stress (Mooney et al., 1976). Em geral, as plantas C-4 fazem fotossntese tanto mais eficientemente quanto mais elevada for a intensidade luminosa sem, portanto, apresentar uma saturao na assimilao do CO2, como ocorre nas plantas C-3 em condies de iluminao relativamente baixa (1/3 da intensidade luminosa mxima). Associada com a resposta iluminao, as plantas C-4 apresentam temperatura tima para a fotossntese mais elevada do que as espcies C-3. Em soja (C-3), a fotossntese lquida decresce rapidamente com o aumento da temperatura elevada, entre 30 e 40C, no se mostra inibitria para a assimilao do CO2.

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CICLO DO NITROGNIO 1. INTRODUO Sob o aspecto agronmico, ecolgico e biolgico em geral, o CICLO DO NITROGNIO to importante quanto o processo fotossinttico. Tal Ciclo vem a ser uma relao de dependncia entre todos os compostos nitrogenados, quer orgnicos 9como aqueles encontrados na clula viva: aminocidos, protenas, cidos nuclicos, alcalides, vitaminas etc.), todos eles participantes deste fundamental processo que ocorre na biosfera. Na atmosfera se encontra a quase totalidade do nitrognio, na forma molecular (N2) representando 78% das molculas a existentes, constituindo-se num reservatrio praticamente inesgotvel de nitrognio expe um berrante contraste com a carncia de protena para humanos e animais bem como pela falta de nitrognio em muitos solos cultivados. A quantidade de nitrognio existentes nos solos pequena, com predominncia da forma ntrica (NO3-) sobre a amoniacal (NH3). Nas rochas sedimentares o on amnio (NH4+) pode estar preso rede cristalinas dos minerais silicatados, e nas rochas gneas o nitrognio mais escasso ainda. Por essa razo, at a primeira metade do sculoXIX, acreditava-se que o ar atmosfrico contivesse amnia (NH3) em quantidade suficiente para atender as exigncias dos vegetais. De fato, Liebig, famoso qumico alemo, convenceu os demais cientistas da poca de que a atmosfera era a principal fonte de nitrognio para as plantas, visto que plantas deficientes em nitrognio (cujas folhas se tornam amareladas) se tornavam de colorao verde escura saudvel quando expostas em ambiente com pequena quantidade de NH3 na atmosfera. Ensaios cuidadosamente conduzidos tem demonstrados que a atmosfera realmente contribui com algumas formas nitrogenadas. Assim a quantidade de nitrognio proporcional queda pluviomtrica. Enquanto que o nitrato (NO3-) formado pelas descartas eltricas na atmosfera, a amnia (NH3) pode advir da atividade vulcnica, queima de carvo e outros materiais orgnicos em fabricas, bem como pelo fogo em florestas e pastagens. Traos de nitrognio podem tambm ser carregadas do litoral para o interior, devido atomizao das guas ocenicas e subseqente arraste pelos ventos. Mas enquanto o cloro pode ser transportado centenas de quilmetros terra adentro, o oceano no parece ser importante fonte de nitrognio para as culturas. Isto pelo fato da maior parte do nitrognio do plncton estar na forma assimilada (orgnica), e predominante nas regies mais profundas. O nitrognio encontrado em formas qumicas com grande variabilidade no nmero de oxidao.

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Como se v, o nitrognio vem a se apresentar desde um estado altamente oxidado (NO-3) at um estado altamente reduzido (NH3). 2. FIXAO DO NITROGNIO A fixao do nitrognio vem a ser a converso do nitrognio molecular (N2) em qualquer uma das formas anteriormente citadas. A caracterstica do processo a separao dos dois tomos da molcula N2, mantidos por uma trplice ligao, envolvendo 3 parte de eltrons. A molcula bastante estvel, havendo necessidade de 24.000 cal/mol para transformar N2 em amnia:

A fixao do nitrognio pode ser efetuada por vrios processos: 2.1. Fixao No-Biolgica: aquela efetuada sem o concurso dos organismos vivos, podendo ser conduzida por um processo industrial ou por um processo natural. 2.1.1. Processo Industrial: Tal processo, tambm denominado de processo Haber, foi desenvolvido na Alemanha, durante a Primeira Guerra Mundial com o propsito de se obter explosivos. Atualmente esse processo est acoplado s refinarias de petrleo para a produo de fertilizantes nitrogenados: 2.1.2. Processo Natural: Durante as tempestades, s descargas eltricas na atmosfera, por intermdio das radiaes ultra-violetas, excitam o O2 e N2, que reagem produzindo xidos de nitrognio (NO, NO2 e outros) os quais hidratados do origem a nitrato e nitrato que se precipitam juntamente com a chuva. 2.2. Fixao Biolgica: Neste caso, o processo conduxido por diversos organismos tanto de vida livre como em associaes com outros organismos, podendo, portanto ser nosimbitica e simbitica, respectivamente. Neste processo o nitrognio molecular (N2) reduzido a amnia (NH3): A fixao biolgica no simbtica: pode ser processada por organismos auttrofos (Rnhodospirillum rubrum) ou hetertrofos (Clostridium e Azotobacter). A fixao biolgica simbitica encontrada em algumas associaes como os liquens onde ocorrem algas (do gnero Nostoc) e fungoa. Do ponto de vista agronmico associao entre o Rhizobium e leguminosas particularmente interessante, embora outras associaes entre

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espcies no leguminosas tambm podem fixar o nitrognio entre elas gramneas, como a cana-de-aucar. H duas dcadas foi estimada uma remoo de nitrognio, dos solos dos Estados Unidos (pelas colheitas e lixiviao), de 25 milhes de toneladas de N por ano. Trs milhes de toneladas de N por ano seriam adicionada na forma de fertilizantes. Igual quantidade teria sido resposta pelas chuvas. A fixao biolgica depositaria 10 milhes de toneladas anuais. Clostridium e Azotobacter sendo hetertrofos necessitam de uma fonte de carbono reduzido (carboidrato, geralmente) o qual quando oxidado forneceria hidrognios inicos (H+) e eltrons para a reduo do N2 a NH3. J a bactria Rhodospirillum rubrum utiliza a energia radiante para a liberao de eltrons que sero utilizados na reduo do N2 a NH3. As algas verdes-azuis (Nostoc), vivendo assimbiticamente, constituem-se no principal fornecedor de N para os campos irrigados de arroz na Asia. Geralmente so organismos de vida livre, mas podem se associar a certos fungos formando lquens. provvel que nessas algas os pigmentos fotossintticos captam a energia luminosa para a fotlise da gua, cujos eltrons removidos so utilizados para reduzir tanto o CO2 como o N2. O Rhizobium infecta as razes das leguminosas formando uma estrutura globular, o ndulo. A leguminosa fornece carboidratos que sero oxidados pelo microorganismo, e os eltrons restantes sero utilizados para reduo do N2 a NH3. O mecanismo de fixao, a despeito de sua importncia, ainda no bem compreendido, havendo necessidade de leg-hemoglobina (protena que contm F), molibdnio (como cofator), cobalto (constituinte da vitamina B12, envolvida na sntese de leg-hemoglobina), alm de, logicamente, uma fonte de carbono biologicamente oxidvel.

Estudos co N2 enriquecido com o istopo N15 demonstraram que o primeiro composto formando foi a amnia (NH3) e que o cido glutmico era o primeiro composto orgnico e se apresenta com o referido istopo. A amnia (NH3) formada no se acumula no organismo fixador, mas sim, utilizada nas snteses de protenas, cidos nuclicos, etc. O excesso de NH3 fixada excretada no meio: razes de leguminosas excretam NH3, aminocidos e peptdios. Tais plantas sintetizam tambm grande quantidade de glutamina e asparagina, muito possivelmente como reserva de nitrognio. Quando os organismos fixadores morrem, suas protenas so hidrolisadas e os aminocidos resultantes so degradados pela ao das aminocido-oxidases, transaminases e desidrogenase da microflora existentes no solo, liberando NH3 no mesmo. Assim a fertilidade do solo construda pela aquisio de NH3 diretamente dos organismos fixadores e indiretamente aps o tomo de N pertencer aos aminocidos e protenas dos organismos no fixadores. 3. NITRIFICAO

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Embora a amnia seja a forma na qual o nitrognio adicionado no solo, o teor da mesma baixo. Isto porque ela rapidamente transformada em nitrato (NO-3), sendo esta a principal fonte de nitrognio para os organismos no fixadores. Essa oxidao da amnia at nitrato efetuada por dois tipos de bactrias, denominadas de bactrias nitrificantes: a. Bactrias do gnero Nitrosomonas que transformam amnia em nitrito (NO-2), segundo a equao: b. Bactrias do gnero Nitrobacter, que transformam o nitrito em nitrato (NO-3):

Esses organismos so auttrofos, mais precisamente quimioauttrofos, reduzindo o CO2 ao nvel de carboidrato com a energia obtida nessas reaes de oxidao. 4. REDUO DO NITRATO Como o nitrato geralmente a forma nitrogenada mais abundante, as plantas demais organismos desenvolveram a habilidade de aproveitar esse nion como fonte de nitrognio para o seu desenvolvimento. Entretanto o nitrognio constituinte dos diversos compostos orgnicos se apresenta em nvel bastante reduzido, e logicamente uma primeira etapa na utilizao do nitrato seria a sua transformao em amnia. A transformao do nitrato em amnia, um processo redutivo portanto, efetuada por um equipamento enzimtico com necessidades de NADH, como coenzimas, e de ferro em molibidnio como metais ativadores.

A redutase de nitrato uma flavoprotena que exige molibdnio como inio ativador. A sua atividade influenciada pela intensidade luminosa. Em condies de baixa luminosidade, h baixa atividade enzimtica e conseqente acmulo de nitrato nos tecidos vegetais. A redutase de nitrito bastante ativa em condies de aerobiose, no permitindo acmulo de nitrito (altamente txico) durante a reduo do nitrato. A redutase de nitrito, geralmente presente em maior quantidade que a redutase de nitrito, uma ferroporfirina, cujo agrupamento siro-heme capaz de transferir 6 eltrons, permitindo a reduo do nitrito (NO2) at amnia (NH3), sem nenhum intermedirio. Para a reduo do nitrito a amnia, o agente redutor (doador de eltrons e H+) seria o NADPH + H+, o qual nos tecidos verdes seria formado na fase luminosa da fotossntese, enquanto que nos tecidos aclorofilados (como razes) seria produzido pela vista pentose fosfato). Existem razes ecolgicas para a amnia do solo ser rapidamente transformada em nitrato (nitrificao), e este novamente reduzido amnia antes do nitrognio integrar as molculas orgnicas. Como amnia pode se perder por volatilizao nos solos alcalinos, r ainda pelo fato 142

da mesma ser muito mais txica do que o nitrato, no podendo se acumular nos tecidos vegetais, percebe-se as vantagens dessas transformaes anteriormente citadas. Tanto assim que em relao amnia, o nitrato a forma mais abundante, tanto no solo quanto nos tecidos vegetais. 5. ASSIMILAO DA AMNIA A amnia (NH3) a forma utilizada na sntese dos diversos constituintes celulares nitrogenados, como protenas, adidos nuclicos, aminocidos, aminas, vitaminas, etc. A assimilao da amnia, ou seja, a transformao de uma forma nitrogenada orgnica (composto aminado) processada por umas poucas vias metablicas. Tais vias, denominadas pelas enzimas responsveis, e de grande significado na nutrio nitrogenada dos vegetais seriam: 5.1. Desidrogenase Glutmica: Enzima largamente distribuda na natureza, cataliza a aminao do -cetoglutarato:

O cido glutmico assim formado, doa, por reaes de transaminao, o grupo amino (-NH2) para a sntese de outros aminocidos. 5.2. Sintetase de Glutamina

A glutamina pode dar o seu grupo amido para o cido asprtico se transformar em asparagina: aspartato + glutamina + ATP asparagina + glutamato + AMP + PPi A glutamina e sparagina so amidas armazenadoras de nitrognio especialmente nas leguminosas. A glutamina contribui com o nitrognio amdico para a sntese se outros compostos nitrogenados como as bases pblicas e pirimdicas dos cidos nuclicos. 5.3.Carbamil-qunase

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O carbomil-fosfato doa o seu nitrognio amdico para a sntese das bases pirimdicas. Igualmente o grupo carbamil utilizado na formao do aminocido citrulina e posteriormente arginina. 6. DESNITRIFICAO O nitrato no solo que no absorvido pelos vegetais, lixiviado, e nas regies mais profundas do mesmo, fora do alcance das razes, metabolizado, em parte, por bactrias do gnero Pseudomonas. Essas bactrias, vivendo em condies de amaerobiose, provem a chamada respirao do nitrato, reduzindo-o a N2 que retorna atmosfera. Ao que parece esses organismos utilizam o NO-3 como aceptor de H+ e eltrons em suas oxidaes biolgicas.

7. O CICLO DO NITROGNIO As transformaes anteriores estudadas isoladamente, podem ser resumidas no quadro que se segue, obtendo-se assim uma viso global dos processos envolvendo os compostos nitrogenados.

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CIDOS NUCLICOS 1. INTRODUO Os cidos nuclicos tornaram-se objetos de investigaes cientficas assim foram primeiramente isolados do ncleo celular h quase 100 anos. Assim como as protenas, tais compostos demonstraram elevado peso molecular, estruturalmente definidos como biopolmeros em que a unidade repetitiva vem a ser o nucleotdio. Os cidos nuclicos so encontrados em todas as clulas vivas, atribuindo-se aos mesmos as importantes funes de conter, transmitir e traduzir as informaes genticas de um determinado organismo. Existem dois tipos de cidos nuclicos: b. o cido desoxi-ribonuclico (DNA) encontrado no ncleo dos eucariticos (que armazenam as informaes genticas e se mostram integrando nucleoprotenas que constituem os cromossomos); c. o cido ribonuclicos (RNA) encontrado predominantemente no citoplasma celular; existem diferentes tipos de RNA (m-RNA ou RNA mensageiro, s-RNA solvel e rRNA ribossmico). 2. CONSTITUINTES DOS CIDOS NUCLICOS O estudo qumico dos cidos nuclicos revelou que tais compostos so macromolculas estruturadas pela polimerizao de unidades que se repetem, unidades essas denominadas de nucleotdios. Os nucleotdios por sua vez podem ser desdobrados em entidades mais simples: uma base nitrogenada, um acar (pentose) e um radical fosfrico. As bases nitrogenadas so divididas em dois grupos: 2.1. Bases Pricas: adenina e guanina 2.2. Bases Pirimdicas: uracila (encontrada apenas no RNA) Timina (encontrada apenas no DNA) Citosina

As pentoses podem ser a ribose (encontrada no RNA) ou a desoxi-ribose (encontrada no DNA)

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O radical fosfrico oriundo do cido ortofosfrico (H3PO4) que apresenta 3 hidrognios ionizveis com pk1=2,1, pk2=7,2 e pk3=12,7: HO POH OH NUCLEOSDIO: as bases nitrogenadas so capazes de se ligar s pentoses para formar os nucleosdios. Tal ligao, semelhante glicosdica, se forma mediante uma desidratao entre o nitrognio 9 das bases pricas, ou o nitrognio 1 das bases pirimdicas com o carbono 1 da pentose. Se a pentose for a desoxi-ribose, tem-se o desoxi-ribonucleosdio. 0

NUCLEOTDIO: so obtidos quando o cido ortofosfrico esterifica a hidroxila de posio 5 da pentose de um nucleosdio

_____________________________________________nucleotdio*_____________ base nitrogenada nucleosdio monofosfatado difosfatado trifosfatado_______ adenina (A) adenosina AMP** ADP ATP guanina (G) guanosina GMP GDP GTP uracila (U) uridina UMP UDP UTP timina (T) timidina TMP TDP TTP citosina (C) citidina CMP CDP CTP

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Quando a pentose for a desoxi-ribose teremos os respectivos desoxiribonucleotdios: desoxiadeadenosina monofosfato (dAMP), dADP, dATP e assim por diante at dCTP.

** AMP= adenosina monofosfato; ADP= adenosinadifosfato e ATP= adenosina trifosfato. 3. POLINUCLEOTDIOS Quimicamente, os cidos nuclicos so polinucleotdios, ou seja, estruturas formadas pela unio de muitos nucleotdios. Esses nucleotdios so unidos mediante a ligao nucleotdica, uma ligao ster que se estabelece entre a hidroxila fosfrica de um nucleotdio com a hidroxila de posio 3 de outro nucleotdio, e assim por diante (fig. 7). Resulta ento uma cadeia polinucleotdica que busca uma configurao mais estvel do ponto de vista termodinmico, atribuindo-se mesma, quatro nveis estruturais bsicos.

4. ESTRUTURAS BSICAS DOS CIDOS NUCLICOS Os nveis estruturais bsicos dos cidos nuclicos so semelhantes aqueles descritos anteriormente para as protenas: 4.1. Estruturas Primrias: vem a ser a seqncia da nucleotdios e mantida pela ligao nucleotdica. Com nos nucleotidios de um determinado, a estrutura primria pode ser simplificadamente representada pela seqncia de bases: A-U-G-C-A-A-U. 4.2. Estrutura Secundria: encontrada especialmente no DNA que se apresenta com duas cadeias em espiral dupla, unidas entre si por pontes de hidrognio envolvendo as bases nitrogenadas. Adenina e timina permitem a formao de duas pontes de hidrognio ao passo que citosina e guanina permitem trs:

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Tais bases so ditas de complementares, assim com as cadeias polinucleotdicas (tambm referidas como cadeias antiparalelas). O pareamento de bases pode ocorrer tambm no RNA.

4.3. Estrutura Terciria: pode ser entendida com a disposio tridimensional da dupla hlice do DNA. Pode ser tambm a forma preferencial que uma nica cadeia nucleotdica adquire, estabilizada por pontes de hidrognio entre bases complementares da mesma cadeia, com o caso do t-RNA (RNA de transporte) que apresenta uma estrutura de folha-de-trevo. 4.4. Estrutura Quaternria: vem a ser aquela estabelecida pela unio de molculas individuais denominadas de unidades ou sub-unidades. Assim o r-RNA (RNA ribossmico) constitudo de duas unidades: uma com peso molecular de 1 milhaa e outra de 1,8 milhes. 5. HIDRLISE DOS CIDOS NUCLICOS As ligaes nucleotdicas (ster) podem ser hidrolizadas mediante: a. cido hidrlise cida b. base hidrlise alcalina c. enzimas hidrlise enzimtica As enzimas que hidrolizam os cidos nuclicos so denominados genericamente de nucleases: Rnse. O veneno de certas serpentes apresenta atividade de nuclease, e tem sido utilizado, assim como outras nucleases, para desvendar as estruturas dos cidos nuclicos.

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