Université de Monastir

Faculté de Pharmacie de Monastir

Département(s) de Biologie clinique A

Support de cours :

Stratégie d’exploration du couple infertile (1) :

Exploration de l’infertilité masculine

Certificat : Pratique en Biologie

Module II : Biologie de l’infertilité et des maladies héréditaires

Niveau d’études : 4ème année Pharmacie

Elaboré par :
Pr Ag Henda Mustapha

Année universitaire 2022 – 2023

Sommaire
Introduction ........................................................................................................................... 1
1. Démarche d’exploration de l’infertilité masculine ............................................................ 2
2. Exploration clinique ........................................................................................................ 2
2.1. Interrogatoire ........................................................................................................... 2
2.2. Examen clinique ou andrologique............................................................................ 3
3. Spermogramme - spermocytogramme ........................................................................... 4
3.1. Prélèvement ............................................................................................................ 4
3.1.1. Conditions de recueil ........................................................................................ 4
3.1.2. Modalité du prélèvement .................................................................................. 5
3.2. Examen macroscopique .......................................................................................... 5
3.2.1. La liquéfaction .................................................................................................. 5
3.2.2. Aspect .............................................................................................................. 5
3.2.3. Viscosité........................................................................................................... 6
3.2.4. Volume ............................................................................................................. 6
3.2.5. pH .................................................................................................................... 6
3.3. Examen microscopique ........................................................................................... 6
3.3.1. Evaluation globale à faible grossissement ........................................................ 6
3.3.2. Evaluation de l’agglutination ou l’agrégation ..................................................... 7
3.3.3. Evaluation de la mobilité .................................................................................. 7
3.3.4. Evaluation de la vitalité ..................................................................................... 8
3.3.5. Mesure de la concentration des spermatozoïdes ............................................. 9
3.3.6. Mesure de la concentration des cellules rondes ..............................................10
3.3.7. Évaluation de la morphologie= Spermocytogramme .......................................10
3.4. Résultats et interprétation.......................................................................................13
4. Examens complémentaires ...........................................................................................15
4.1. Echographie des voies génitales ............................................................................15
4.2. Bilan hormonal .......................................................................................................15
4.3. Autres examens spermiologiques...........................................................................17
4.3.1. Spermoculture .................................................................................................17
4.3.2. Biochimie séminale .........................................................................................17
4.3.3. Exploration immunologique .............................................................................17
4.3.4. Recherche d’une éjaculation rétrograde ..........................................................17
4.4. Explorations génétiques .........................................................................................18
4.4.1. Caryotype ........................................................................................................18
4.4.2. Recherche de microdélétions du chromosome Y ............................................18
4.4.3. Recherche de mutations du gène CFTR .........................................................19
5. Test de migration et de survie des spermatozoïdes .......................................................19
5.1. Principe ..................................................................................................................19
5.2. Technique ..............................................................................................................19
5.3. Résultats et interprétation.......................................................................................21
Conclusion ...........................................................................................................................21
Messages à haute valeur pédagogique ................................................................................21
Références bibliographiques ................................................................................................22
 Liste des abréviations

ACAS : Anticorps anti-spermatozoïdes

Mobilité PR : mobilité progressive
Mobilité NP : mobilité non progressive

HOS test : test Hypo-osmotique

PNN : polynucléaires neutrophiles
IAM : Index d'anomalies multiples
MMAF : Multiple Morphological Abnormalities of the sperm Flagella
FSH : Hormone folliculo-stimulante
SHBG : Sex hormone binding globuline
LH : Hormone lutéinisante
AMP : Assistance médicale à la procréation
MAR-test : Réaction d’agglutination mixte
CFTR : Cystic fibrosis transmembrane conductance regulator
AZF : Azoospermia Factor

ICSI : Injection intra-cytoplasmique de spermatozoïdes

ABCD : Absence congénitale bilatérale des canaux déférents
TMS : Test de migration et de survie des spermatozoïdes
NTSM : Nombre total de spermatozoïdes mobiles
TD : Trajets directs
IIU : Insémination intra-utérine
FIV : Fécondation in vitro
 Liste des Figures

Figure 1 : Origines de l'infertilité du couple

Figure 2 : Evaluation de la viscosité du sperme par écoulement.

Figure 3 : Aspect en microscope optique d’une agglutination et d’une agrégation de

spermatozoïdes.

Figure 4 : Trajectoire des spermatozoïdes dans un champ microscopique après un

intervalle de temps ∆t.

Figure 5 : Aspect des spermatozoïdes sur frottis après coloration à l‘éosine nigrosine

Figure 6 : Aspect des spermatozoïdes après un test hypo-osmotique

Figure 7 : Cellule de Neubauer modifiée

Figure 8 : Coloration à la peroxydase des polynucléaires neutrophiles non dégranulés

Figure 9 : Aspect microscopique des spermatozoïdes sur un frottis coloré.

Figure 10 : Classification des anomalies morphologiques des spermatozoïdes selon

David modifié.

Figure 11 : Axe gonadotrope masculin

Figure 12 : Structure du chromosome Y humain

Figure 13 : Traitement du sperme par la technique de centrifugation sur gradient de

densité.

Figure 14 : Traitement du sperme par la technique de Swim up.

 Liste des Tableaux

Tableau I : Les valeurs seuil de référence des paramètres spermatiques selon les
normes de l’OMS 2010 et 2021.

Tableau II : Nomenclature des anomalies spermatiques

Tableau III : Indications des techniques d'AMP en fonction du rendement du TMS

Objectifs d’apprentissage

Au terme de ce cours, l’étudiant sera capable de :

 Définir l’infertilité et ses différents types.

 Décrire la démarche diagnostique d’une infertilité masculine.
 Interpréter les résultats d’un spermogramme-spermocytogramme.
 Proposer les examens complémentaires nécessaires en fonction des résultats
du spermogramme.
 Expliquer le principe, les techniques et l’intérêt d’un test de migration et survie
des spermatozoïdes
 Introduction
La fertilité est définit par la potentialité ou capacité d'un couple ou d'une personne de
procréer.
La fécondabilité est la probabilité mensuelle de conception, estimée en moyenne à
25% par cycle.
L'OMS définit l'infertilité comme « l'incapacité d'un couple en âge de procréer à
concevoir ou à obtenir une grossesse au-delà d'un délai de 12 mois de rapports
sexuels réguliers non protégés».
Par ailleurs, la stérilité est l’impossibilité définitive à faire un enfant, càd l’absence/perte
irréversible de la capacité de conception.
Il existe deux types d'infertilité. L'infertilité est dite primaire si le couple n’a jamais réussi
à amorcer une grossesse. Elle est de type secondaire si l'infertilité est constatée après
une ou plusieurs grossesses.
On estime qu’environ 15 à 20% des couples consultent pour troubles de la procréation.
Dans 80 à 90% des cas une étiologie est retrouvée, dans le reste des cas la cause
demeure inconnue et l’infertilité est classée idiopathique ou d’origine inexpliquée.
L’infertilité touche les hommes et les femmes également. Elle peut être d’origine
féminine ou masculine ou bien d’origine mixte (combinée) (Figure 1).
La part de l’homme dans les infertilités du couple est en augmentation ; et on estime
aujourd’hui qu’un facteur causal masculin (identifié ou non) est impliqué dans 30 à
50% des cas et que la fréquence du phénotype de l'infertilité masculine dans la
population humaine dépasse le 10%.

Figure 1 : Origines de l'infertilité du couple.

1
Les étiologies de l’infertilité masculine sont nombreuses et peuvent être classées en :
■ Causes pré-testiculaires : les troubles endocriniens, les troubles du coït…
■ Causes testiculaires : les anomalies congénitales (tel que la cryptorchidie), les
anomalies génétiques (tel que le syndrome de Klinefilter), varicocèle, l’exposition à des
substances reprotoxiques…
■ Causes post-testiculaires : obstructives (présence d’obstacles au niveau des voies
génitales masculines), immunologiques (anticorps anti-spermatozoïdes), infectieuses.

1. Démarche d’exploration de l’infertilité masculine

Chacun des deux partenaires du couple présentant une infertilité doit être exploré
cliniquement et bénéficier d'un bilan complémentaire.
D'une manière générale, l'évaluation du partenaire masculin est indispensable dans la
démarche étiologique et thérapeutique du couple infertile, et chez l'homme ayant un
facteur de risque d'hypofertilité. Elle doit suivre une démarche systématique et
structurée :
1- Exploration clinique : avec un interrogatoire complet et un examen clinique
2- Examens de première intention : exploration de base
3- Examens complémentaires : exploration à visée diagnostique, pronostique et
d’orientation thérapeutique.

2. Exploration clinique
2.1. Interrogatoire
 Histoire reproductive
- L’âge de des deux partenaires, la durée et le type de l'infertilité
- La fertilité antérieure du couple et des deux partenaires
- L'histoire sexuelle incluant : les troubles sexuels, la fréquence des coïts et leur
calendrier, les infections sexuellement transmises.

 Antécédents personnels
- Les pathologies de l'enfance et l'histoire du développement pubertaire (cryptorchidie,
troubles de la différenciation sexuelle).
- Les pathologies de système (diabète, obésité), cancers, maladies génétiques
(chromosomiques, mucoviscidose…), affections neurologiques, respiratoires et ORL.
- Les antécédents chirurgicaux notamment inguino-scrotales (cryptorchidie, hernie
inguinale).
- Notion de torsion du cordon spermatique ou traumatisme (bassin, organes génitaux
externes, périnée).
- Infections urogénitales (orchi-épididymites dans un contexte d'IST, orchite ourlienne,
urétrite, prostatite, infections urinaires, tuberculose génitale).

2
 Habitudes de vie
- Tabagisme, alcool, cannabis, stupéfiants, consommation de stéroïdes anabolisants.
- Exposition à des facteurs délétères pour la spermatogenèse (chaleur, perturbateurs
endocriniens).

 Facteurs de risque professionnels

L'exposition à la chaleur, à des toxiques, perturbateurs endocriniens (agriculture,
industrie chimique, produits de nettoyage, peinture, coiffure…), radiations ionisantes,
stress, travail de nuit.

 Antécédents familiaux
- Notion d'infertilité/ hypofertilité dans la famille (avec enquête familiale et constitution
de l'arbre généalogique).
- Pathologies de la sphère génito-urinaire (cryptorchidie, cancer du testicule).
- Recherche de pathologies génétiques familiales (mucoviscidose, malformations
infantiles et handicaps, mortalité périnatale).
- Notion de consanguinité (chez les parents du patient ou dans le couple).

 Traitements (actuels et antérieurs)

Doit être pris en considération tout traitement pouvant avoir un impact direct ou indirect
sur la spermatogenèse ou perturber l'axe gonadotrope ou interférer avec les réactions
sexuelles, tels que :
- Chimiothérapie antimitotique, radiothérapie (effet-dose).
- Certains médicaments anti-infectieux (nitrofuranes, kétoconazole).
- Les médicaments du système nerveux central (neuroleptiques et apparentés,…)
-Tous les stéroïdes particulièrement les androgéniques, ostrogéniques ou progestatifs.
- Autres médicaments (colchicine, α-bloquants, inhibiteurs de la 5 α-réductase,…)

2.2. Examen clinique ou andrologique

Tout homme infertile ou ayant un facteur de risque d'infertilité masculine doit faire
l'objet d'un examen clinique avant toute décision thérapeutique.
L'examen clinique doit comporter :

* Un examen général avec évaluation des caractères sexuels secondaires

(morphotype, pilosité, taille, distribution des graisses, index de masse corporelle) ;
* Un examen mammaire à la recherche d'une gynécomastie ;
* Un examen du pénis, avec localisation du méat urétral (hypospadias) ;

* Un examen scrotal bilatéral comparatif des testicules, épididymes et déférents :

3
  la palpation des testicules : mensuration, estimation de la consistance et
recherche systématique d'un nodule testiculaire,
 la présence et la consistance des déférents et épididymes (recherche des
signes obstructifs de la voie génitale).
 la recherche d'une varicocèle clinique réalisée en position debout et en
manoeuvre de Valsalva.
* Un toucher rectal (prostate, vésicules séminales) : recommandé en cas
d'antécédent infectieux, d'hypospermie, d'anomalie du plasma séminal, de suspicion
de déficit androgénique, ou si l'âge du patient justifie la recherche d'un cancer de la
prostate.

3. Spermogramme - spermocytogramme
Le spermogramme – spermocytogramme est le bilan de première intention à
demander systématiquement lors de l'exploration du couple infertile. C'est l’examen
clé de l'évaluation de la fertilité masculine. On estime qu'environ 10 à 15% des
hommes présentent des anomalies spermatiques.
L'examen de sperme est le reflet de :
 la spermatogenèse testiculaire
 la maturation et le stockage épididymaires
 les fonctions des glandes annexes : Prostate et Vésicules Séminales
 la perméabilité des 2 voies séminales
 le désir, plaisir, érection, éjaculation

3.1. Prélèvement
3.1.1. Conditions de recueil

L’examen du sperme se fait après un délai d’abstinence sexuelle standard de 2 à 5

jours et en dehors de toute situation de perturbation temporaire de la spermatogenèse
(épisode fébrile, maladie aiguë, chirurgie ou atteinte sévère de l’état général…). Une
bonne hydratation la veille et le matin de l’examen est souhaitable.
Le recueil du sperme se fait de préférence au laboratoire. Sinon le prélèvement doit
être acheminé rapidement au laboratoire (maximum dans l’heure qui suit le
prélèvement), sans être soumis à des températures inférieures à 20°C ou supérieures
à 37°C (réceptacle enrobé dans du coton et transporté au contact du corps).

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 3.1.2. Modalité du prélèvement

Le prélèvement de sperme se fait par masturbation, dans un réceptacle stérile, en

matériaux non toxique, comportant l’identification du patient et l’heure exacte du
prélèvement.
Il faut uriner au préalable puis recueillir la totalité de l’éjaculat dans le réceptacle de
manière aseptique (lavage soigneux des mains puis du gland avec un savon,
désinfection du gland avec une solution désinfectante). La perte d’une partie doit être
obligatoirement signalée. Les éjaculats incomplets ne peuvent être analysés.
Les recueils par rapport sexuel interrompu ou en utilisant un préservatif sont à proscrire
ainsi que l’usage de lubrifiant ou tout autre produit (gel, savon, huile).

Rappel : Composition de l’éjaculat

L'éjaculat comporte 2 fractions :
 La première fraction : de volume 0.5 – 1 ml, de pH 6- 6.5, formée
essentiellement des secrétions épididymo-testiculaire et prostatique.
 La deuxième fraction : est coagulée, de volume 1 - 5 ml, de pH alcalin, formée
principalement par les sécrétions des vésicules séminales.
La composition du plasma séminal est la suivante :
 68% sécrétions des vésicules séminales (pH = 7,5 -8)
 15% sécrétions de la prostatie (pH = 6- 6,5)
 12% sécrétions des épididymes / déférents (pH = 6,8 -7)
 4,5% sécrétions de glandes de Cowper
 0,5% sécrétions liquidiennes des testicules

3.2. Examen macroscopique

3.2.1. La liquéfaction

La liquéfaction du sperme se fait grâce aux enzymes protéolytiques d’origine

prostatique. Elle se fait pendant 20 minutes à 1 heure, à température ambiante ou à
l’étuve à 37°C. Si au bout d’une heure, le sperme ne se liquéfie pas, il faut procéder à
une agitation mécanique ou à une digestion enzymatique (en utilisant certaines
enzymes telles que la broméline, plasmine, caséine ou chymotrypsine).

3.2.2. Aspect

Un sperme normal doit avoir un aspect homogène gris opalescent.

Un aspect moins opaque ou clair reflète une concentration diminuée en
spermatozoïdes (Oligozoospermie). Une couleur rose brunâtre reflète une
hémospermie et une couleur jaunâtre témoigne de la présence d’une leucospermie.

5
 3.2.3. Viscosité

L'évaluation de la viscosité se fait par écoulement du sperme à l'extrémité d’une

pipette, en se basant sur une méthode semi-quantitative.
La viscosité est normale : si le sperme s'écoule en gouttes séparées.
Elle est modérément augmentée (+) : si le sperme s'écoule en gouttes non séparées
ou en filaments ± long (Figure 2).
Elle est fortement augmentée (++) : si le sperme s'écoule mal ou pas du tout, il reste
en bloc. Une 'absence de liquéfaction oriente vers une insuffisance prostatique.

Figure 2 : Evaluation de la viscosité du sperme par écoulement.

3.2.4. Volume

Le volume de l’éjaculat est mesuré à l'aide d'une pipette calibrée (de 5 ou 10 ml) ou
d'un tube gradué. L'estimation du volume par pesée est également possible surtout
pour les échantillons très visqueux en utilisant des réceptacles de prélèvement pré-
pesés (en considérant que la densité du sperme est égale à 1).

3.2.5. pH

Le pH doit être mesuré impérativement dans l'heure qui suit le prélèvement, à l'aide
d'un papier pH calibré de 6,1-10 ou d'un pH-mètre.

3.3. Examen microscopique

3.3.1. Evaluation globale à faible grossissement
Elle se fait en microscope optique au grossissement x10 ou x20. Il s’agit d’une
évaluation générale des caractéristiques spermatiques par balayage de plusieurs
champs microscopiques après avoir bien mélangé l’éjaculat et placé deux gouttes de
sperme entre lame et lamelle, dans le but de vérifier :
 l'homogénéité de la préparation
 la présence d'agglutinats/agrégats de spermatozoïdes.
 la présence d'éléments cellulaires ou de filaments muqueux.
 évaluer le facteur de dilution.

6
 3.3.2. Evaluation de l’agglutination ou l’agrégation

L’agglutination des spermatozoïdes est définie par l’attachement spécifique des

spermatozoïdes mobiles entre eux, soit par la tête, par le flagelle, par la pièce
intermédiaire ou de manière mixte. L’agrégation est l’attachement non spécifique des
spermatozoïdes immobiles entre eux ou à des filaments de substances mucineuses,
à d’autres cellules ou à des débris (Figure 3).
Le degré d’agglutination ou d’agrégation spermatique doit être estimé selon une
méthode semi-quantitative avec une cotation de 1 à 3 croix. Il est également important
de préciser le type d’agglutination (par la tête, le flagelle, la pièce intermédiaire ou de
manière mixte). La présence d’agglutinats incite à faire des tests immunologiques à la
recherche d’anticorps anti-spermatozoïdes (ACAS).

Figure 3 : Aspect en microscope optique d’une agglutination et d’une agrégation de

spermatozoïdes.
(A) Agglutination spécifique des spermatozoïdes mobiles par la tête
(B) Agrégation non spécifique +++ des spermatozoïdes immobiles.

3.3.3. Evaluation de la mobilité

L'évaluation de la mobilité spermatique se fait par observation de 5 à 10 champs

microscopique à l'objectif x40 en utilisant un microscope équipé d’une platine
thermostatée à 37° C (la mobilité étant sensible à la température). Les pourcentages
des différents types de mobilité spermatique doivent être évalués (Figure 4) :
 La mobilité progressive (PR) : incluant
 La mobilité type « a » rapide progressive selon une trajectoire rectiligne ;
dite fléchante.
 La mobilité type « b » lente ou faiblement progressive selon une trajectoire
rectiligne ou non.
 La mobilité non progressive (NP) : ou type « c » : oscillations sur place des
spermatozoïdes, sans aucun déplacement (< 2 x la longueur de la tête/s)
 La mobilité totale (PR+NP)
 Les immobiles ou type « d ».

7
 Figure 4 : Trajectoire des spermatozoïdes dans un champ microscopique après un
intervalle de temps ∆t.

3.3.4. Evaluation de la vitalité

La vitalité des spermatozoïdes peut être évaluée par 2 tests : le Test à l'éosine
Négrosine ou le Test Hypo-osmotique.
 Test à l'éosine nigrosine

Il est basé sur l'exclusion d'un colorant vital par les spermatozoïdes vivants qui sont
caractérisés par l’intégrité de leur membrane cytoplasmique, et qui seront donc non
colorés. Au contraire, le colorant pénètre les spermatozoïdes morts ou moribonds dont
les têtes seront donc colorés en rose (Figure 5).

Figure 5 : Aspect des spermatozoïdes sur frottis après coloration à l‘éosine nigrosine
(A) Spermatozoïde non coloré = compté vivant ; (B) spermatozoïde coloré en rose au niveau de la tête
= spermatozoïde mort ; (C) spermatozoïde faiblement ou partiellement coloré en rose = spermatozoïde
mort

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  Test Hypo-osmotique ou HOS test

Le test Hypo-osmotique ou HOS test est basé sur la semi-perméabilité de la

membrane des spermatozoïdes intacts. En milieu hypo-osmotique, il se produit donc
un influx d'eau ce qui entraîne un gonflement du spermatozoïde et par conséquent un
enroulement de l’extrémité de son flagelle. Par contre les spermatozoïdes morts ne
montrent aucun enroulement de leur flagelle (Figure 6).

Figure 6 : Aspect des spermatozoïdes après un test hypo-osmotique.

3.3.5. Mesure de la concentration des spermatozoïdes

La mesure de la numération des spermatozoïdes se fait par comptage à l'aide d'un

hémocytomètre, après dilution appropriée du sperme dans une solution formolée.
L’OMS recommande la cellule de Neubauer modifiée (Figure 7). La cellule de
Malassez peut être également utilisée. La concentration est exprimée en x 106/mL.

Figure 7 : Cellule de Neubauer modifiée.

9
 3.3.6. Mesure de la concentration des cellules rondes

Les cellules rondes sont les cellules épithéliales du tractus génital, les cellules
germinales immatures et les leucocytes.
Le comptage se fait au même temps que celui des spermatozoïdes, avec le même
principe de comptage et de calcul. La concentration est exprimée en 10 6/mL.
Le typage de ces cellules se fait sur un frottis coloré. La numération des leucocytes se
fait grâce à la révélation de la peroxydase des polynucléaires neutrophiles (PNN) par
la réaction à la benzidine-cyanosine, ce qui confère une coloration brune aux
leucocytes (Figure 8).

Figure 8 : Coloration à la peroxydase des polynucléaires neutrophiles non

dégranulés.

3.3.7. Évaluation de la morphologie= Spermocytogramme

C'est l'évaluation du pourcentage des spermatozoïdes morphologiquement typiques

ainsi que l'incidence des différents types d'anomalies.
C'est un paramètre qualitatif de la spermatogénèse, prédictif du pouvoir fécondant des
spermatozoïdes et disposant d'une valeur pronostique in vivo et in vitro.
Le spermocytogramme se fait sur un frottis de sperme fixé et coloré (Figure 9).
Différentes types de colorations ont été être proposées. L’OMS recommande la
coloration de Papanicolaou modifiée comme méthode de référence. La coloration de
Shorr constitue une bonne alternative. Il existe d’autres techniques de coloration
rapide, tel que Diff-Quik.

Figure 9 : Aspect microscopique des spermatozoïdes sur un frottis coloré.

10
L'examen se fait à fort grossissement x 100 à immersion et le pourcentage est calculé
sur au moins 200 spermatozoïdes.
La normalité morphologique des spermatozoïdes doit être évaluée par une méthode
de classification basée sur des critères stricts.

Différents systèmes de classifications ont été développés :

- Kruger
- David modifiée
- OMS 2010 (inspiré de kruger) VN ≥ 4%

 La classification de David modifiée

C’est la plus utilisée en France et en Tunisie. La valeur limite de référence est non
établie par l’OMS 2010 et 2021 (≥ 30% OMS 1999)
Il s'agit d'une évaluation multi-paramétrique prenant en considération toutes les
anomalies observées pour un même spermatozoïde. On distingue 15 anomalies
morphologiques (Figure 10) sous forme de grille à entrées multiples :
- 7 anomalies de la tête
- 3 anomalies de la pièce intermédiaire
- 5 anomalies de la pièce principale ou flagelle
Un Index d'anomalies multiples ou IAM peut être calculé. C’est in indicateur du nombre
moyen d’anomalies associées par spermatozoïde anormal.

IAM= Nombre total d'atypies recensées / Nombre total de spermatozoïdes

atypiques
La valeur normale de l’IAM < 1,6.

11
 (A) Anomalies de la tête

(B) Anomalies de la pièce intermédiaire (C) Anomalies du flagelle

Figure 10 : Classification des anomalies morphologiques des spermatozoïdes selon

David modifié.

12
 3.4. Résultats et interprétation
L’interprétation des paramètres spermatiques se base sur les valeurs de référence
disponibles dans le manuel de l’OMS pour l'examen du sperme humain dont la version
la plus récente est celle de 2021 (Tableau 1). Toutefois, il faut accorder une certaine
relativité aux seuils proposés et interpréter de façon globale l'ensemble des
caractéristiques du sperme (Nbr total des spz mobiles et normaux) en soulignant les
défauts fonctionnels (vitalité, acrosome, mobilité,...).
Tableau I : Les valeurs seuil de référence des paramètres spermatiques selon les
normes de l’OMS 2010 et 2021.
Paramètres OMS 2010 OMS 2021
spermatiques

Volume ≥ 1,5 mL (6 mL) ≥ 1,4 mL

pH ≥ 7,2 ≥ 7,2

Concentration ≥ 15. 106 spzs/mL ≥ 16. 106 spzs/mL

Numération totale ≥ 39. 106 spzs/éjac ≥ 39. 106 spzs/éjac

Mobilité totale ≥ 40 % ≥ 42 %

Mobilité progressive ≥ 32 % ≥ 30 %

Vitalité ≥ 58 % ≥ 54 %

Formes typiques ≥4% ≥4%

Leucocytes < 1. 106 leucocytes/mL < 1. 106 leucocytes/mL

Les différentes anomalies spermatiques sont définies dans le tableau 2 ci- dessous :

Tableau II : Nomenclature des anomalies spermatiques.

Aspermie Absence de sperme ou un volume de l’éjaculat < 0,5 mL
Hypospermie Diminution du volume de l’éjaculat < 1,5 mL

Hyperspermie Augmentation du volume de l’éjaculat > 6 mL

Azoospermie Absence totale des spermatozoïdes à l'examen directe et

dans le culot après centrifugation (à 3000 g pendant 15 min)
examiné à fort grossissement et confirmée sur au moins 2
spermogramme à 3 mois d’intervalle

13
Cryptozoospermie Absence de spermatozoïdes à l’examen direct et présence
de quelques spermatozoïdes dans le culot après
centrifugation (à 3000 g pendant 15 min) examiné à fort
grossissement (concentration spermatique < 100 000
spz/ml)
Oligozoospermie Diminution du nombre des spermatozoïdes < 39 millions/
éjaculat.
Asthénozoospermie Diminution de la mobilité progressive < 32% ou totale < 40%.
Primaire : si diminution de la mobilité initiale évaluée à la 1ère
heure.
Secondaire : si diminution de la mobilité à la 4ème heure de
plus de 50% par rapport à la mobilité initiale.
Akinétozoospermie Absence totale de spermatozoïdes mobiles (100%
immobiles)
Nécrozoopermie Diminution du pourcentage des spermatozoïdes vivants <
58%
Tératozoospermie* Diminution du % de spermatozoïdes morphologiquement
typiques < 4% selon la classification stricte de L’OMS 2010.
Leucospermie Augmentation de la concentration de leucocytes ≥ 1
million/mL

* Il existe deux types de tératozoospermie : monomorphe et polymorphe.

 Tératozoospermie polymorphe
Elle inclue des anomalies morphologiques diverses touchant à la fois la tête, la
pièce intermédiaire et le flagelle des spermatozoïdes.
 Tératozoospermie monomorphe
Il s’agit d’une anomalie morphologique homogène intéressant une partie précise
des spermatozoïdes et touchant la totalité ou la majorité des spzs. Elle est de plus
mauvais pronostic et souvent d’origine génétique nécessitant une exploration
spécifique.
Exemples : - La globozoospermie,
- Le syndrome des spermatozoïdes macrocéphales,
- Le syndrome MMAF (Multiple Morphological Abnormalities of the
sperm Flagella),
- La dyskinésie ciliaire primitive ou syndrome de Kartagener,

14
Attention : Devant toute altération des paramètres du sperme, il faut vérifier le délai
d'abstinence sexuelle et les conditions de recueil pouvant affecter certains paramètres
spermatiques ; et il faut impérativement contrôler sur un deuxième spermogramme
après 3 mois d’intervalle pour confirmer les anomalies détectées au premier examen
à cause de la modulation environnementale et de la grande variabilité intra-
individuelle. En effet, il ne faut jamais poser le diagnostic d’infertilité masculine sur les
résultats d’un seul spermogramme mais plutôt sur des spermogrammes.

4. Examens complémentaires
En cas d’anomalie détectée au cours de l’évaluation initiale de l’homme infertile
(interrogatoire, examen clinique, spermogramme) on doit réaliser un bilan
complémentaire qui sera fonction du tableau du patient.

4.1. Echographie des voies génitales

Echographie scrotale : elle est fortement recommandée voir systématique chez
l’homme infertile en raison du lien étroit entre infertilité masculine et cancer du
testicule. Elle permet l’exploration testiculaire (mesurer le volume de chaque testicule,
rechercher des nodules ou une varicocèle infra-clinique) et épididymo-déférentielle (à
la recherche d’une pathologie obstructive)

Echographie endorectale : elle est indiquée chez les patients azoospermes chez
lesquels on suspecte une cause obstructive.

Echographhie abdominale : Examen des deux reins, de la vessie et du pelvis à la

recherche d’une anomalie rénale (malformation, agénésie) ou pour localiser un
testicule ectopique.

4.2. Bilan hormonal

Le bilan hormonal de première intention comporte un dosage sérique de la FSH et de
la testostérone totale. En cas d’anomalie, un bilan de deuxième intention s’impose.
Une élévation de la FSH témoigne d’une altération de la spermatogenèse, mais
inversement le fait que la FSH soit dans les limites de la normale n’exclut pas une
altération de la spermatogenèse. L'inhibine B peut être prescrit en complément de la
FSH (Figure 11). En cas d'anomalie du dosage de la testostérone totale, il est conseillé
de redoser la testostérone totale et la testostérone biodisponible (ou la SHBG). En cas
de testostérone abaissée, le bilan étiologique de l'hypogonadisme doit être réalisé
avec dosage de la LH et de la prolactine.

Une évaluation endocrinienne est particulièrement justifiée en cas de :

 symptômes et/ou examen clinique suggérant un hypogonadisme, des caractères
sexuels anormaux, une hypotrophie/atrophie testiculaire

15
  spermogramme anormal, principalement une altération majeure de la numération
des spermatozoïdes (azoospermie ou oligospermie sévère) et/ou une
hypospermie.
 troubles sexuels (baisse de la libido, dysfonction érectile).

Il existe deux grands types d’azoospermie selon les résultats du dosage de la FSH :
 Azoospermie obstructive : normo-gonadotrope (FSH normale) due à une
obstruction des 2 voies séminales (origine post-testiculaire).
 Azoospermie non obstructive : sans obstruction des voies séminales. Elle peut
être soit :
- Hyper-gonadotrope (FSH élevée) : insuffisance testiculaire primaire ou
périphérique (origine testiculaire)
- Hypogonadotrope (FSH diminuée) insuffisance testiculaire secondaire ou
centrale (origine pré-testiculaire)

Figure 11 : Axe gonadotrope masculin.

16
 4.3. Autres examens spermiologiques
4.3.1. Spermoculture
Elle est indiquée devant une symptomatologie évocatrice d'infection génitale
masculine, en cas d'antécédents infectieux génito-urinaires et devant certaines
anomalies du spermogramme (leucospermie, nécrospermie, asthénospermie, % élevé
de flagelles enroulés). Elle est également demandée avant toute tentative d’assistance
médicale à la procréation (AMP).

4.3.2. Biochimie séminale

C’est le dosage des marqueurs biochimiques séminaux secrétés par l’épididyme et les
glandes annexes (la prostate et les vésicules séminales) dans le plasma séminal. Elle
informe ainsi sur la présence de phénomènes obstructifs et/ou inflammatoires
(dysfonction) des glandes et voies génitales profondes.
Différents composants du plasma séminal sont utilisés comme marqueurs des
différentes secrétions :
- Pour la prostate : le zinc (VN≥ 2,4 µmol/éjaculat), l’acide citrique, phosphatase acide
- Pour l’épididyme : « α-glucosidase neutre » (VN≥ 20 mU/éjaculat), la carnitine libre
- Pour les vésicules séminales : le fructose (VN ≥13 µmol/éjaculat selon l’OMS)
L’intérêt du dosage de ces marqueurs repose principalement sur le fait que leur origine
est suffisamment spécifique d’une portion précise du tractus génital. Il est ainsi
possible de localiser une atteinte (obstruction ou inflammation) au niveau du tractus
en fonction de la diminution de tel ou tel marqueur.

4.3.3. Exploration immunologique

Cette exploration est entreprise lorsqu’on suspecte une immunisation anti-
spermatozoïdes, évoquée devant la présence d’agglutinats dans l’éjaculat, des
antécédents évocateurs ou l’incapacité des spermatozoïdes à pénétrer le mucus
cervical. Elle est basée sur la recherche d’ACAS soit :
 Recherche directe des anticorps fixés sur les spermatozoïdes éjaculés : pour
cela, deux techniques sont couramment utilisées
Le MAR-test (réaction d’agglutination mixte anti-immunoglobuIines), Positivité ≥
20% VN < 50% (OMS 2010)
Le test aux immunobilles : permet de détecter spécifiquement les différentes classes
d’ACAS (IgG ou IgA). Positivité ≥ 20% ; VN < 50% (OMS 2010)

 Recherche des ACAS dans les liquides biologiques (sang, liquide séminal) en
utilisant le test indirect aux immunobilles.

4.3.4. Recherche d’une éjaculation rétrograde

L’éjaculation rétrograde est la conséquence de la fermeture incomplète du col vésicale
au cours du processus éjaculatoire. Tout ou une partie du sperme est alors expulsé
vers la vessie plutôt que vers l’urètre pénien et l’extérieur. Elle est suspectée devant

17
une absence d'éjaculation (aspermie) avec orgasme ou une hypospermie surtout
lorsqu’il y a des antécédents évocateurs (neuropathie diabétique, chirurgie du col
vésical…). Le diagnostic est simple. Il suffit d’analyser les urines recueillis après une
masturbation à la recherche des spermatozoïdes dans le culot de centrifugation
(surtout de la première fraction des urines).

4.4. Explorations génétiques

Trois examens génétiques sont de pratique courante chez l'homme infertile :
• le caryotype ;
• la recherche des microdélétions du chromosome Y ;
• l'analyse des mutations du gène CFTR (Cystic fibrosis transmembrane conductance
regulator).
Leur prescription répond à des indications strictes.

4.4.1. Caryotype
Les anomalies chromosomiques (de nombre ou de structure) sont présentes chez
environ 7 % des hommes infertiles. La fréquence des anomalies du caryotype est
inversement proportionnelle au nombre de spermatozoïdes.
Les anomalies des chromosomes sexuels (dont le plus fréquent le syndrome de
Klinefelter XXY) représentent environ deux tiers des anomalies chromosomiques
observées chez l'homme infertile (en particulier en cas d'azoospermie). L'étude du
caryotype doit être proposée aux hommes qui ont :
 une azoospermie non obstructive ;
 une oligospermie inférieure à 10 millions de spermatozoïdes/ml
 en cas d'histoire familiale d'avortement à répétition, de malformations, de retards
mentaux, un caryotype devrait être réalisé quelle que soit la concentration de
spermatozoïdes, voire en cas d'infertilité inexpliquée.

4.4.2. Recherche de microdélétions du chromosome Y

Environ 10% à 15% des hommes avec azoospermie ou oligozoospermie extrême
sécrétoire sont porteurs d’une microdélétion moléculaire (le plus souvent invisible au
caryotype) du bras long du chromosome Y, entrainant la perte de gènes constituant le
facteur AZF (Azoospermia Factor). On distingue trois loci AZF sur le bras long du
Y (Figure 12) : la région AZFa (proximale), AZFb (centrale) et AZFc (distale).
Les microdélétions des régions AZFa et b sont constamment associées à une
azoospermie et l'extraction chirurgicale de spermatozoïdes testiculaires n'est pas
indiquée, car les chances de retrouver des spermatozoïdes sont quasi-nulles. La
microdélétion AZFc est la plus fréquente et la moins sévère (possibilité d'oligospermie,
et 50% de chance de retrouver des spermatozoïdes par biopsie testiculaire). En cas
d'une injection intra-cytoplasmique de spermatozoïdes (ICSI), le couple doit être
informé que la microdélétion sera transmise à la progéniture masculine.
Les microdélétions du chromosome Y doivent être recherchées en cas d'azoospermie
non obstructive et d'oligospermie sévère (< 5 M/ml).
18
 Figure 12 : Structure du chromosome Y humain.

4.4.3. Recherche de mutations du gène CFTR

Tout homme ayant une absence bilatérale congénitale des canaux déférents (ABCD)
ou des symptômes de mucoviscidose doit être informé de la forte association entre
l'absence vésiculo-déférentielle et la présence de mutation du gène de la
mucoviscidose (gène CFTR). Le couple doit bénéficier d'une consultation de conseil
génétique qui permettra de rechercher les principales mutations du gène CFTR.

5. Test de migration et de survie des spermatozoïdes

Il s'agit d'un examen d'orientation fondamental dans l'algorithme décisionnel en AMP.
Ce test permet d'évaluer la quantité de spermatozoïdes mobiles fécondants d'un
éjaculat en les sélectionnant par gradient de densité (ou autre technique).

5.1. Principe
Le TMS est basé sur une séparation des spermatozoïdes à partir du liquide séminal,
accompagnée d'une sélection d'une sous population constituée en majorité de
spermatozoïdes matures, mobiles, capacités et de morphologie normale, sans
toutefois entrainer des altérations de la membrane spermatique, avec élimination des
spermatozoïdes morts, des cellules rondes, des bactéries et des débris cellulaires.

5.2. Technique
Différentes techniques peuvent être utilisées pour la préparation du sperme :

 Centrifugation sur gradient de densité

La technique consiste à centrifuger le sperme sur un gradient de densité discontinu à
deux couches (45% et 90 %) suivi d’un lavage-centrifugation du culot récupéré (Figure
13). Elle permet une séparation des spermatozoïdes en fonction de leur densité
nucléaire.
19
Figure 13 : Traitement du sperme par la technique de centrifugation sur gradient de
densité.

 Migration ascendante (Swim up)

Cette méthode repose sur la mobilité intrinsèque des spermatozoïdes. Elle consiste à
déposer au-dessus du sperme (ou culot spermatique) un milieu approprié et laisser
migrer les spermatozoïdes pendant 30 minutes à une heure à 37°C sous 5% de C02 ;
le tube étant incliné à 30-60° (Figure 14).

Figure 14 : Traitement du sperme par la technique de Swim up.

 Lavage-centrifugation
Cette technique est indiquée dans les oligo-asthénozoospermies très sévères. Elle
permet seulement d'éliminer le plasma séminal et consiste à diluer le sperme dans
un milieu adéquat et de le centrifuger pendant 10 minutes à 300 ou 400g.

20
 5.3. Résultats et interprétation
A la fin du traitement, le nombre total de spermatozoïdes mobiles (NTSM) en trajets
directs (TD) disponibles dans la totalité de l’éjaculat sera calculé.
Le nombre, la mobilité et la morphologie des spermatozoïdes récupérés et leur survie
sont des éléments importants pour le choix de la technique d'AMP à indiquer pour le
couple : insémination intra-utérine (IIU), FIV (fécondation in vitro) classique ou ICSI.

Tableau III : Indications des techniques d'AMP en fonction du résultat du TMS.

NTSM en TD Indication
≥ 106 et survie ≥ 50% IIU
0,5 .106 ≤ NTSM < 106 FIV en puits
0,2 .106 ≤ NTSM < 0,5 .106 FIV en microgouttes
< 0,2 .106 et/ou térato extrême ICSI

Conclusion
L’infertilité masculine contribue par 50% des cas d’infertilité. L’exploration de l’homme
infertile nécessite une stratégie complète et structurée en commençant par les
examens de première intention.
Le spermogramme reste à l’heure actuelle l’élément clé dans l’évaluation de la fertilité
masculine. Il doit être interprété avec prudence et une certaine relativité.
Du résultat de l’analyse spermiologique dépend le choix de la technique d’AMP à
utiliser pour le couple infertile, quel que soit l’origine de l’infertilité.

Messages pédagogiques
1- Le spermogramme est l’examen clé de première intention à demander lors de
l'exploration de l’infertilité masculine après l’interrogatoire et l’examen clinique.

2- L’interprétation des paramètres spermatiques se base sur les valeurs de référence

de l’OMS. Et en cas d’anomalies, il est nécessaire de vérifier les conditions de recueil
de sperme.

3- Devant toute altération des paramètres spermatiques au premier spermogramme, il

est nécessaire de réaliser un spermogramme de contrôle après 3 mois d'intervalle.
4- Les anomalies du spermogramme permettent d’orienter le choix des examens
complémentaires nécessaire au diagnostic étiologique.
5- Devant toute azoospermie (ou oligospermie sévère) non obstructive d’origine
périphérique, le caryotype et l'analyse du chromosome Y s’imposent.
6- L’orientation thérapeutique en AMP dépend du résultat du TMS (nombre, mobilité,
morphologie et survie des spermatozoïdes récupérés).
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 Références bibliographiques

1- Cahier de Formation Biologie Médicale. Exploration de la fonction de reproduction

versant masculin. Bioforma N°42 Paris : 2009.

2- WHO laboratory manual for the examination and processing of human semen. Fifth
edition. WHO 2010.

3- WHO laboratory manual for the examination and processing of human semen. Sixth
edition. WHO 2021.

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