—~= DINU IOANA MADALINA GRUPA 1415 Biochimie-Facultatea de Inginerie medical 2021-2022 Luerarea nr. 4 Analiza calitativa a aminoacizilor si proteinelor 1. Introducere Aminoacizii reprezinta unitatle structurale nehidrolizabile ale poliprotidelor. Desi in natura se cunosc aproximativ 200 de aminoacizi, doar 20-22 sunt utilizati pentru biosinteza protidelor si sunt codificati de codul genetic, flind denumiti $1 aminoacizi proteinogeni (ordinan). Dintre toate organismele vii, cele vegetale pot sintetiza si deci contine numarul cel mai mare de aminoacizi, raspanditi mai ales in semintele fructelor. plante radacinoase, conifere, etc. Aminoaciaii: valina, leucina, izoleucind, treonina, metionina, lisina, fenilalanina, triptofan pot fi sintetizaty numai de plante gi se numesc aminoacizi esentiali. Lipsa lor in alimentaje provoaca grave tulburari ale metabolismului (boli carentiale). Aminoacizii care pot fi sintetizati $i de organismul uman gi animal se numesc aminoacizi neesentiali si sunt reprezentati de: glicocol, alanina, serina, cisteina, acid aspartic, glicina, arginina, tirozina, prolina, hidroxipriolina, histidina ‘Aminoacizii sunt compusi organici difunctionali, care contin grupele functionale amino (-NH2) si carboxil (COOH). Caracteristica acestei structuri este grefarea ambelor grupe functionale pe acelasi atom de carbon (pozitia a) in cazul aminoacizilor din structura proteidelor (a-aminoacizi). Legat de atomul de carbon a. in afara de grupa functionalé -NH2, apare si un rest hidrocarbonat, care poate fi un rest hidrocarbonat alifatic sau aromatic, sau grupe functionale. C cit;~coont wa —cu—coon cic —coon 1 ae 4 7 NH My a ML. Gtcina Trezina Taiptotan Golatina ‘Albumin 2. Analiza calitativa a aminoacizilor si proteinelor Materiale necesare: Solutie triptofan 0.1% Solutie glicina 0.1% Solutie tirozina 0.1% Solute gelatina 0.1% Solutie albumina 0.1% Pipete Cilindri gradati Eprubetemina ia Md ll i chin ai as ia i a Mi Grupele functionale din aminoacizi pot reactiona cu diversi reactivi pentru a da produse colorate concttrad e pentensitatea culort obtinute este in stransa legatura cu numarul grupelor Ge pot reactions, constituind 0 posibilitate de apreciere @ ponderii anumitor aminoacizi in consttutia unor proteine 2. 1 Testul cu ninhidrina Aminoacizi si proteinele care au o grupa amino libera reactioneaza cu ninhidrina dand un complex albastru-violet: ° ° ° on NH,-CH-COOH + 2 — N: + RCHO + CO; + 3H,0 I ‘OH R ° o ° Mod de tucru In S chrubete se introduc cate 2 mi solutie de triptofan 0.1%, solutie glicina 0.1%, solutie tirozina 0.1%, Solutie gelatina 0.1%, solutie albumina 0.1%, In fiecare eprubeta se adauga 5 picaturi de solutie do ninhidrina si se incalzeste la fierbere cu atentie timp de 15 min pe baie de apa. Se agita bine si se noteaza rezultatul Obs. 1. Solutia de ninhidrina contine etanol. Atentie la incalzire. 2. Ninhidrina reactioneaza si cu proteinele din piele, dand compusi colorati, care se indeparteaza greu. Feriti contactul pielli cu solutia de ninhidrina, Eprubeta nr, T Continut | __Ciloare proba finala Observatil 1 2 Fy S01 de TIFT a chin Pent z ami coe I iat youl 3 rm sa de cal ited eit a 2m sok de a a Sramapete See 3 [em Solutie de albumina [eno deschis Tenn 2.2, Testul xantoproteic Este 0 reactie caracteristica proteinelor care contin aminoacizi cu ine! benzenic (triptofan, fenilalanina, tirozina, etc.). Acidul azotic concentrat reactioneaza cu inelul benzenic conducand la nitroderivati de culoare galbena, NH, NH cH—CH—coon cH—CH—COOH On, S +HNO; | ——» S wif nif Triptofan In 5 eprubete se introduc cate 2 ml solutie de triptofan 0.1%, solutie glicina 0.1%, 2 mi solutie de tirozina 0.1%, solutie gelatina 0.1%, solutie albumina 0.1%, se adauga 0.1m acid azotic concentrat si se incalzeste/ iochimie-Facultatea de Inginerie medical 2021-2022 [a ferbere cu atentie timp de 5 min pe baie de apa. Se raceste si se adauga apoi § picaturi de solutie NaOH 40%. Se agita bine si se noteaza rezuttatul Epnta ; Continut ‘Culoare proba finala Observatii ml solutie de triptofan aA . ye 0.1% Mio Owes peat 2 2 mi solutie de glicina 0.1% Woagporsth enegortins 3 reece 4 N ioe poxthin: 2 a Solutie de gelatina fonlaee qoxitinn 3 2m solite de abumina |, gba Ppenking Obs. Acidul azotic este puternic coroziv. Adaugarea sa in eprubete se face cu atentie si numal la nisa. 2.3 Testul biuretului Este unul din cele mai importante teste pentru proteine. Cand 0 proteina reac ‘cupru(t) testul pozitiv este dat de formarea unui complex de cupru care are culoarea violet. tioneaza cu sulfatul de H H0 oO ' ‘N I : s (—C—NH—). + Cu%* ——+ , oN ou Testul este pozitv pentru ericeprotena ce contine dou <2 + matoarele grupe Mod de tucru in 5 eprubete se introduc cate 2 mi solutie de triptofan 0.1%, solute glcina 0.1%, solute tiozina 0.1%, solute gelatina 0.1%, solutie albumina 0.1%, In fiecare eprubeta se adauga § picaturi de solutie NaOH 10% si 2 picaturi de solute 5% CuSO«(in aceasta ordine). Se agita bine si se noteaza rezultatul Eprubeia nz Continat—_ | —_Culoare proba finala Observati_ 1 zai solute de triptofan [SI Agus dlesctus magi Bmisouiedeaiere | tectum dusky | prigetvin 5 Soe wT : ame WORE T Sedu dashes eregohinn a “[2 mi solute de getatina 0.1% = ney. qatinsfA jhe atin 2021-2022 agcotaten de Inginenie medical Pini solute de atbumina [4] "peaitie 1 0.1% naturarea proteinelor tiunea caldurii sau a diferitlor agenti chimict ‘omen cunoscut sub numele de denaturare. Acest proces este des insot teinelor, fapt detectabil prin cresterea opalescentei solutiei de proteina are loc modificarea structurii supramoleculare a 2.4 Der tit de coagularea sau Sub act proteinelor, fen precipitarea prot Mod de lucru a. Denaturarea prin incalzire Intr-o eprubeta se introduc 10 usor pe baie de apa. Se noteaza temperatura la care solutia | solutie albumina. Se introduce termometrul in eprubeta si se incalzeste devine opalescenta : Temperatura de denaturare (°C) EB°C ici ‘de albumina (albus de ou). Se adauga apoi in eprubete ita bine si apoi se observa transformarile, [ Compus. Albumina b. Denaturare sub actiunea agentilor chi In 5 eprubete se introduc cate 10 mi solutie ingrediente conform tabelului de mai jos. Eprubetele se agi | Tpaibeta ne icons een eA Obsenail 1 O.ig NaCl kn eal 2 6 picatun solutie acevat de Sas eed de dorabireg 3 [0.1g NaHCO fect ole doralinn 4 05 miHCI36.5% donde 5 70 picaturi solutie NaOH ole foe _ ae “e Intrebari 4. Care din urmatorii amin triptofanul? joacizi contin nucle aromatic: Care din urmatorii aminoacizi contine sulf: alanina, gicina, proina, acidul glutamic, cisteina, metionina, fenilalanina? Desenati formulele structurale pentru urmatorii aminoacizi: alanina, glicina, tirozina. 4. Scrieti structurile predominante majoritar. ‘a. pentru cisteina (pKa coow=1.26, PKa b. pentru prolina (PKs coov=1.99. PKs nw cc. pentru tirozina (pK, coox=2.20, PKannz= 9.11, PKa on x 5. Avand la dispozitie glicina, alanina sit 7 Avandia $i triptofan serie structurite chimice ale tuturortripeptidelor ce se Ne Arminsocds cone cenkin crueten angrraitice pints Dnerimra ox Hrdipteforrad aL Remimendadt cane cortin el punt 2 disttima, a mmrekisnima,a . CH. OH -CooH + CH OH CH, —CooH an oe i Liege Wry es NAL gis tae Ringside, YW, eppertan cuktima ¢ nag! > =8/ Kea-o4 40,28 Bo pat wahes , pHs ee 228} PK aia, = 848 PKs 2028) AS OH, — CH Coon => BS CHe- CHO” Ss Nene = 28 tw? a6 tug 4 ae wat Ua ged (Bap =5) = — Ze Screen -c00 ay (Qo p= t2> ae pretims PK qcoon “2% SPKpi,Zt096) la gh=3, =O yPUaiz. coon 10. ae COO” OS CoO Qa Neer 1 e4 . \ big (Ba PA=%) (la p=6) (lo pA=t2) eye dnneauma (PK aceon 2,20 PK wetz2 2"! 5 PR pon OO) Bo => PRE; PH= le me i tony oa -cncey 2 SS +> Dy Cl, CHO” > Ho tag + HHT a A ant ‘get Ge pth = > “Se renee P (% p=) Qo pH= 8) B. Bin oficind , oSlomin® a Duipiefam at alitin sont Chy- c c “RACH -c-NH ACA-COOM u y \ Cy-Re-trp ) ° a ° Wee, a en, y ceniii it iB A GAL tt g Chy=c - -C -NH-CH- : | i ane NA-CH-C “NH-CH-(OOH Ey np Po Na oo dng, chy S be Aa Upsperers HHACHeC-WH=CR-COOH “Tap Cy -Ala. Na dS 3 cae €> “lap- Moa-G \ Popes pene ping mene tap- Ako ey ‘aw nn, Ce © CH, -C HC - =H ye ERA CH 00H RRo-O6y =Tnp ) a uw HH, 0 3 cH, Be V7 CR “CHC BR -CH=G= HH CHe COOH Po. “Tap- Gey. \ RAY a CH2 ? N He