DETERMINACIN DE PROTEINAS INTRODUCCIN El termino protena fue utilizado por primera vez por el qumico alemn Gerardus Mulder,

en 1838 , tomo este nombre del vocablo griego PROTERIOS , que significa primordial nivel primario . Las protenas son un grupo de biopolmeros constituidos de aminocidos que exhiben una amplia gama de estructuras y funciones . Las protenas como un grupo de biomoleculas , desempean una gran variedad de funciones , algunas participan en la contraccin muscular y sirven para dar soporte estructural, otras trasportan y almacenan molculas pequeas. Los anticuerpos (molculas que sirven para como proteccin inmunolgica ) son protenas al igual que las enzimas (catalizadores biolgicos) y algunas hormonas. Las protenas pueden llevar a cavo funciones tan diversas por la enorme posibilidad de combinaciones en la composicin y secuencia de aminocidos. Las protenas tambin se clasifican segn su composicin , las que se forman solo de residuos de aminocidos y no tienen otras biomoleculas son PROTENAS SIMPLES; no odas las protenas son solubles en agua , de hecho las protenas insolubles son esenciales para dar soporte y mantener la integridad estructural de las clulas y organismos. DESARROLLO METODO DE BIURET Material por equipo

1 proveta de 50ml. 2 gradillas 2 pipetas de 10ml 3 pipetas de 5ml 1 pipeta de1ml tuvos de15x100-12 piezas 1 vaso de presipitados de 100 ml 12 tubos de 16x150 1 balanza granataria papel parafilm para 10 tubos papel embudo y un filtro

REACTIVOS POR EQUIPO

Agua destilada Solucion de acido acetico 0.1 N Solucion de Acetato de sodio 0.1 N Solucion de caseina (contenido 4 mg/ml) Reactivo de Biyret 50ml

MATERIAL TRAIDO POR EQUIPO:

6 gramos aprox. De leche en polvo descremada 1 plumon indeleble masking tape javon y franela para limpiar

DETERMINACIN DEL PUNTO ISOELECTRICO En la preparacin de tubos con solucion amortiguadora de acetatos en la grailla se colocaron 6 tubos de 15x100 rotulados con numeros consecutivos , se adiciono a caadad tubo las soluciones de acido acetico y acetato de sodio con el siguiente orden :

TUBO SOLUCION DE ACIDO SOLUCION ACETATO DE ACETICO 10.1 N SODIO 0.1N 1 5ml 2 4 ml 1 ml 3 3ml 2ml 4 2ml 3ml 5 1ml 4ml 6 - 5ml
el volumen de cada tubo deber de ser de 5 ml 1:30 PREPARACIN DE LA LECHE En un vaso de precipitados de 100 ml se disolvieron 6 gr de leche en polvo descremada con 50 ml de agua destilada incorporndola poco a poco para que no se formaran grumos . En un tuvo de ensaye de 16x150 mm se midio 2ml de leche reidratada y aadimos 8ml de agua destilada agitando cuidadosamente por inversin. 1:5 PUNTO ISOELECTRICO

Aadimos 1 ml de leche diluida (1:5) a cada tubo de la solucin amortiguadora , despus mezclamos cuidadosamente todos los tubos y dejamos reposar por 10 minutos . En el tubo 1 donde observamos los grumos de leche suspendidos en la solucin se solubilizaron las protenas de leche TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3 TUBO 4 TUBO5 TUBO 6 TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3 TUBO 4 TUBO5 TUBO 6 Despus se separo el sobrante y se transfiri a los tubos limpios de 15x100 rotulados con el numero de tubo que le correspondia.

Tubo 1: CLARO Tubo 2 : CLARO CON SOBRENADANTE Tubo 3: CLARO CON SOBRENADANTE Tubo 4: CLARO CON SOBRENADANTE Tubo 5: TURBIO Tubo 6: TURBIO

DETERMINACIN DE PROTEINAS CON EL METODO DE BIURET Se colocaron en una gradilla 11 tubos de 16x150 mm, rotulando a un tubo con el numero cero el cual llevo los reactivos para calibrar el espectrofotometro , los siguientes 4 tubos los rotulamos de I al IV , y los restante los rotulamos de 1 al 6. Se aadio a cada tubo de reactivos para determinar las proteinas en la curva de calibracin (I IV) y los sobrenadantes en los tubos del 1 al 6 . Mezclamos cuidadosamente cadad reactivo y los dejamos en reposo por 30minutos para favorecer el color . TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3 TUBO 4 TUBO5 TUBO 6 AZUL AZUL Y MORADO AZUL AZUL AZUL AZUL TUBO I TUBO II TUBO III TUBO IV TUBO V TUBO VI AZUL CLARO INTERMEDIO MORADO MORADO MORADO MORADO RESULTADOS En la siguente tabla estan los resultados que obtuvimos de absorvancia o densidad optica.

TU I II III IV V 1 2 3 4 5 6 BO D.O 0. 0. 0.0 0.1 0.1 0. 0.0 0.0 0.0 0. 0.

32 60 93 27 52 17 20 08 08 19 23

MG. DE 0. 1. 2. 3. 0. 0.0 0.0 0. 40 PROT 8 6 4 2 12 37 76 12 EINA

Calcula el contenido proteico de los tubos I al IV deacuerdo al volumen empleado de la solucion en estandar de caseina y colocalos en el eje x. Coloca los valores O.D obtenidos para cada uno de estos tubos en el eje y y traza la curva correspondiente. Interpola los valores de O.D de los tubos 1-6 , calcula la cantdad de proteina precente en cada sobre nadante

TABLA DE RESULTADOS.

PROTEINA Sobrenadante1 Sobrenadante2 Sobrenadante3 Sobrenadante4 Sobrenadante5 Sobrenadante6

Mg/ ml 5.1 0.6 0.24 0.24 0.57 6.9

Mg/ 100 ml 510 60 24 24 57 690

haciendo uso de la ecuacin de HEENDERSON HASELBACH calcula el pH del tubo de donde observaste la mayor precipitacin de casena.

0.4 mg proteina x 5x6x2 =24 mg proteina/ml 6g 1000 ml =120 g leche 30 ml 1 L L 2 ml + 8 ag 1 ml +5 = 6 ml 0.5+0.5 = 1 ml 24 g proteina L = 0.2 g proteina 120 g leche g de leche L

Describa brevemente la ley de lambert y beer y cuales son sus limitaciones.

BIBLIOGRAFA

Conceptos de bioqumica de Rodney Boyer

CONCLUSIN Con el metodo de Biuret se le quitaron a la leche muchas de sus propiedades y al meter os resultados al centrifugado la leche salio muy clarita cambiando su aspecto natural , cumplindose el objetivo pudimos sacar el punto isoelectrico exacto