I- Introduction : De la dcouverte de lADN au dcodage du gnome humain II- Constituants des acides nucliques 2005-2006 1. Les acides nucliques : ADN et ARN 2. Les bases azotes et leurs proprits 3. Les nuclosides Les Acides Nucliques 4. Les nuclotides III- Structure des acides nucliques: Pr. Saad AMZAZI 1. Structure primaire et polymrisation des nuclotides 2. Structure secondaire a- LADN . Appariement spcifique des bases . La doubles hlice: modle de Watson et Crick . Principales caractristiques des chanes d'ADN . Les variants conformationnels de la double hlice b- LARN 3. Structure tertiaire de lADN a- Rle des histones dans la structure de lADN des eucaryotes b- Du nuclosome au chromosome IV- Caractristiques physicochimiques et fonctionnelles de lADN 1. Proprits physicochimiques de l'ADN a- Nature fibreuse et taille b- Dnaturation et renaturation thermique c- Densit, charge et proprits spectrales 2. Mthodes dtudes de lADN a- Purification et extraction b- Hydrolyse chimique et enzymatique c- Action dautres enzymes d- Techniques danalyses de lADN: Southern blot, PCR et squenage 3. Conservation de linformation gntique: Rplication semi-conservative de lADN V- Types et caractristiques des ARN 1. Diffrents types dARN 2. Fonctions et rles des ARN 3. Aperu sur la transcription et la traduction : Notion de code gntique
DEPARTEMENT DE BIOLOGIE Filire Sciences de la Vie (SVI) Module de Biochimie (M 11) Elment : Biochimie structurale - Semestre 3 -
Objectifs
- Mettre en vidence les caractristiques structurales des acides nucliques afin de faciliter la comprhension de leur nomenclature et de leur classification. - Montrer l'importance de l'intgrit de la conformation spatiale des acides nucliques pour leur activit biologique . - Donner les bases biochimiques de la gntique et de la biologie molculaire notamment celles relatives la conservation et l'expression du matriel gntique. - Dgager les principes des technologies biochimiques ncessaires la prparation et l'analyse des acides nucliques.
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Historique de la dcouverte des Acides nucliques
Date 1869 1927 1928 1944 1950 1952 1952 1953 2001
Auteurs Friedrich Miecher Kossel & Levene Frederick Grigffith Avery, Mc Leod et Mc Carty Chargaff Hershey & Chase Rosalind Franklin & Maurice Wilkins Watson & Crick USA, GB, France, Allemagne, Japon
Dcouverte Nucline partir des noyaux de globules blancs Nucline= ADN ; dsoxyribose constituant de lADN Transformation bactrienne Nature du matriel transformant = ADN Caractrisation de lADN Confirmation que lADN est le matriel transformant Diffraction aux rayons X dADN cristallis Structure en double hlice de lADN
Squenage complet du gnome humain
Cest en 1869 quun suisse, Friedrich Miescher isola un prcipit issu de noyaux de globules blancs en lavant des bandages purulents (pus). Ce prcipit aprs analyse contenait du C, H, O, N et du P. Il le baptisa nucline (noyau) Kossel et Levene dmontrrent que la nucline tait principalement constitu dAcide DsoxyriboNuclique
Exprience de Griffith, 1928
Avery, 1944
Si on spare une molcule d'ADN en nuclotides, on obtient toujours:
Erwinn Chargaff (1950)
Equimolarit entre bases
Il peut y avoir plus de AT que de CG ou l'inverse (a varie selon les espces), mais il y a toujours autant de A que de T et de C que de G.
Exprience de Herchey et Chase, 1952
Dmonstration de manire irrfutable que lADN est bien le support de lhrdit
Watson, Crick & Wilkins Prix Nobel en 1962
Ont dispos des donnes suivantes: - Composition chimique de lADN est sucre, base et phosphate - Clichs de diffraction X en croix caractrisant la structure en hlice - Travaux de chargaff sur le contenu en bases (A=T et G=C) Structure en double hlice de lADN
Rosalind Franklin: diffraction aux rayons X de lADN
- Travaux en microscopie lectronique montrant que le diamtre de lADN est de 20 A suggrant que cette molcule comportait 2 chanes sucre-P
Retombes Scientifiques, Mdicales, Industrielles et Sociales de la dcouverte des Acides nucliques
La molcule d'ADN est au cur de nos cellules mais aussi au cur de l'actualit. Pas une semaine ne se passe sans que les mdias se fassent l'cho d'informations concernant l'ADN (squenage du gnome humain, clonage, empreinte gntique, thrapie gnique, OGM).
Squenage du Gnome Humain
Gnome humain (toute l'information contenue dans un humain) : 30 000 40 000 gnes
Diagnostic molculaire des maladies
Recherche de pathognes: Amplification gnique (PCR) Recherche de mutation: squenage de lADN Anomalies chromosomiques: techniques de gntique molculaire
Thrapie Gnique
- Utiliser un gne comme mdicament . Faire exprimer une protine dficiente . Dclencher un signal donn (mort cellulaire) - ARN interfrents
Biotechnologie: O G M
Systmatique Molculaire
-tudier lorigine et la biodiversit des espces -Dterminer la taxonomie - Dterminer les mcanismes de lvolution des espces
Identification humaine par empreintes gntiques
- Dbusquer un criminel et innocenter un suspect - Identifier un cadavre - Dterminer la filiation entre individus
Les acides nucliques
Les AN sont des macromolcules fournissant les informations ncessaires au dveloppement de la vie. Ils sont responsables de la transmission du patrimoine gntique de gnration gnration et contrlent la fabrication des protines ncessaires la vie.
2 Types:
LADN LADN est le support de linformation gntique dont il garantit lintgrit. Sur le plan structural comment se prsente cette molcule qui joue un rle primordial au maintien de la vie??
LARN L'Information Gntique est vhicule et exprime par l'intermdiaire de molcules polymres nommes Acides RiboNucliques. On distingue 3 classes d'ARN qui diffrent suivant leur taille, localisation et fonction: Les ARN messager (ARNm) Les ARN Ribosomaux (ARNr) et les ARN de Transfert (ARNt)
Les Bases Azotes Majeures
(uracile mthyle)
Les Tautomres
Lactame
Lactime
Les Bases modifies
Les Drivs dintrt biologique
Acide Urique
Thophylline
Les analogues synthtiques des bases
Anticancreux
Antiviral driv de la guanine
Transformation de bases Dsamination lente par lacide nitreux Irradiation par les UV
cytosine
adnine
(Pentose)
Sucre
Les Nuclosides
La liaison N-Osidique des nuclosides
Exemple de base Pyrimidique Exemple de base Purique
