UNIVERSIDAD MILITAR NUEVA GRANADA FACULTAD DE MEDICINA Biomdica I (Lab.

Bioqumica)

Pruebas colorimtricas de aminocidos

Andrs Felipe Dussn Orejarena Cd.: 0401334 Grupo: A

Dra. Beatriz Pescador Docente de Biomdica I

4 de Abril de 2011; Bogot, D.C.

1. Introduccin

La colorimetra es un procedimiento de anlisis qumico basado en la intensidad de color de las disoluciones. En las disoluciones la saturacin de un color es su grado de pureza. Un color est ms saturado cuanto menor sea su contenido de grises o de blancos. Los colores de la naturaleza siempre son ms o menos saturados. La intensidad, o luminosidad de un color, es la caracterstica que hace que este aparezca ms claro, independientemente de su saturacin.

2. Objetivos

Determinar la absorcin de luz visible por una muestra, que puede ser una sustancia pura o bien una mezcla o disolucin. Poder identificar como responde un compuesto con varios reactivos de propiedades distintas. Sabes utilizar esta tcnica para despus poder darle un uso clnico, con respecto al encontrar protenas.

3. Marco terico Se usa en los anlisis clnicos, por ejemplo para determinar protenas hay una reaccin en donde al poner la muestra de suero con el reactivo e incubarla te da una coloracin comparada luego con un patrn y se determina cuantas protenas tiene el paciente. Durante la prctica se utilizaron los siguientes compuestos y reactivos:

Tirosina: Se clasifica como un aminocido no esencial en los mamferos ya que su sntesis se produce a partir de la hidroxilacin de otro aminocido: la fenilalanina. Esto se considera as siempre y cuando la dieta de los mamferos contenga un aporte adecuado de fenilalanina.

Triptfano: es un aminocido esencial en la nutricinhumana. Es uno de los 20 aminocidos incluidos en el cdigo gentico (codnUGG). Se clasifica entre los aminocidos apolares, tambin llamados hidrfobos. Es esencial para promover la liberacin del neurotransmisor serotonina, involucrado en la regulacin del sueo y el placer. Su punto isoelctrico se ubica a pH=5.89. La ansiedad, el insomnio y el estrs se benefician de un mejor equilibrio gracias al triptfano. Cistena: Se trata de un aminocido no esencial. Los codones que codifican a la cistena son UGU y UGC. La parte de la cadena donde se encuentra la cistena es el tiol que es no polar y por esto la cistena se clasifica normalmente como un aminocido hidrofbico. La parte tiol de la cadena suele participar en reacciones enzimticas, actuando como nuclefilo.

Metionina: s uno de los dos aminocidos proteinognicos que contienen azufre. Este deriva del adenosil metionina (SAM) sirviendo como donante de metiles. La metionina es un intermediario en la biosntesis de la cistena, la carnitina, la taurina, la lecitina, la fosfatidilcolina y otros fosfolpidos. Fallos en la conversin de metionina pueden desembocar en arterioesclerosis.

Histidina: es un aminocido esencial. Es uno de los 22 aminocidos que forman parte de las protenas codificadas genticamente. Se abrevia como His o H. Su grupo funcional es un imidazol cargado positivamente. Los productos lcteos, la carne, el pollo y el pescado son ricos en histidina. La histidina es un precursor de la histamina, en la que se transforma mediante una descarboxilacin. Reaccin de ninhidrina: es un poderoso agente reactivo comn para visualizar las bandas de separacin de aminocidos por cromatografa o electroforesis. Reacciona con todos los aminocidos alfa cuyo pH se encuentra entre 4 y 8, dando una coloracin que vara de azul a violeta intenso. Este producto colorido (llamado prpura de Ruhemann) se estabiliza por resonancia, la coloracin producida por la ninhidrina es independiente de la coloracin original del aminocido.

Reaccin xantoproteica: es un mtodo que se puede utilizar para determinar la cantidad de protena soluble en una solucin, empleando

cido ntrico concentrado. La prueba da resultado positivo en aquellas protenas con aminocidos portadores de grupos aromticos, especialmente en presencia de tirosina. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un lcali, se torna color amarillo oscuro. Segn las guas qumicas es una reaccin cualitativa, mas no cuantitativa. Por ende determina la presencia o no de protenas. Para cuantificar se usa otra reacccin, como la de Biuret, y se hace un anlisis espectro fotomtrico. Reaccin de millon: sirve para saber si existe tirosina en la solucin, si esto es as se genera un cogulo blanco que por calentamiento pasa al rojo carne. El reactivo de Millon se prepara disolviendo una parte de mercurio (Hg) en una parte de cido ntrico (HNO3). De esta forma, la presencia de cantidades relativamente altas de mercurio conduce a la formacin de Nitrato de mercurio (I) Hg2(NO3)2 el cual en medio fuertemente cido reacciona con el grupo -OH de la tirosina produciendo una coloracin roja caracterstica. Reaccin del acido glioxlico: el grupo indlico del triptfano reacciona con este acido concentrado dando un color purpura. El c. Actico glacial que ha sido expuesto a la luz contiene c. Glioxlico. Reaccin de Pauly: el c. Sulfanlico diazotizado se une con las aminas, fenoles e imidazoles para dar compuestos azo fuertemente coloreados. Los compuestos de diazonio se forman nicamente con frio. Por lo tanto las soluciones deben enfriarse en hielo antes de la diazotizacin. Reactivo de Ehrlish: reacciona con un buen nmero de compuestos orgnicos tales como ndoles del triptfano, aminas aromticas y compuestos ureicos para dar compuestos coloreados. Prueba de nitroprusiato: el grupo tiol presente en la cistena, reacciona con esta prueba en presencia de amoniaco para dar un color rojo.

4. Aplicaciones clnicas

Anlisis clnicos, de muestras lquidas Determinar el grupo amino presente en una muestra

Determinacin de parmetros bioqumicos sanguneos Prueba de azucares reductores en orina Identificacin de drogas o frmacos

5. Resultados

Prueba Ninhidrina Xantoproteica Millon Acido glioxilico Pauly Erlish Nitroprusiato

Tir + + + + -

His + + -

Trp + + + + -

Cys + +

Met + -

M. P. + +

6. Conclusiones

Al final de la prctica pude observas que mi muestra problema tuvo los mismos resultados en comparacin a la cistena, as que esta era mi muestra incgnita. Se puede ver que hay pruebas que descartan de una vez la posibilidad de que la muestra problema fuera algn aminocido diferente al correcto. Con la prctica pudimos diferenciar los resultados y los pasos de cada prueba con respecto a la prctica de carbohidratos, aldehdos y cetonas.

Todos los compuestos con la prueba de ninhidrina dieron un resultado positivo.

7. Bibliografa

http://www.todoexpertos.com/categorias/ciencias-eingenieria/bioquimica/respuestas/1015523/bioquimica http://www.doschivos.com/display.asp?ID=88&f=13547 http://www.finlay.sld.cu/publicaciones/vaccimonitor/vm2002/a9.pdf www.wikipedia.com Gua entregada en laboratorio