Caminhando Pela Bioquímica

CAMINHANDO PELA BIOQU MICA...
Uma viso objetiva e acad mica
RAQUEL DA SILVEI RA NOGUEIRA LIMA

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CAMINHANDO PELA BIOQU MICA...

Uma viso objetiva e acadmica
RAQUEL DA SILVEIRA NOGUEIRA LIMA
Minha vida povoada por contos, sonhos, fbulas... O que mais posso fazer, que no seja escrever e sonhar? Jorge Luis Borges
s pessoas que, de alguma forma, tenho aprendido a amar.
Este esboo de livro, se assim pode ser denominado, destina-se a todos os que se iniciam no estudo da Bioqumica. Por que Bioqumica? No estaria tal investigao associada crena ingnua que, com o auxlio de um repertrio de regras claramente definidas e universalmente aceitas, seria possvel ampliar nosso saber acerca da natureza biolgica? Talvez no... E por essa razo que, como professora desta disciplina das Cincias Biolgicas, em cujo caminho (um tanto rduo!) vamos tentar trilhar vias de acesso para o melhor entendimento dos mecanismos que mantm a fabulosa mquina que o ser vivo...
A elaborao da presente obra foi inspirada pelo desejo de aproximar o estudante iniciante das reas biolgicas em alguns dos principais questionamentos a respeito da lgica de organizao, manuteno, perpetuao bem como, das possveis interrelaes que podem ser estabelecidas entre os organismos vivos. Apoiada em dois eixos um predominantemente terico e outro de cunho mais prtico, mais voltado realidade do estudante a obra orienta o aluno (seja ele universitrio ou aspirante) no entendimento dos principais processos bioqumicos. Espero, desta forma, estar contribuindo, de alguma maneira, para o auxlio construo de uma nova forma de ver e pensar sobre a Bioqumica, atravs de um processo contnuo, vivo, dinmico e, por que no dizer, agradvel... Agradeo aqui a colaborao de todos os amigos, colegas de trabalho e alunos, que de alguma forma, fornecem estmulo incontestvel para a realizao deste e de outros trabalhos; assim como pela animao ao cumprimento deste projeto. A todos, o meu mais sincero agradecimento.
Raquel da Silveira Nogueira Lima Fortaleza, 2000
Sumrio
Captulo 1
Viso geral sobre os primeiros trabalhos em Bioqumica Os organismos vivos so organizados Como a matria viva composta? tomos, molculas e outros
bichos...
A menor unidade da matria viva

Captulo 2
Complexidade da Matria Viva Princpios da Lgica Molecular da Vida Evoluo Qumica: A Origem da Vida
Captulo 3
A Clula e Ciclo Celular Fenmenos de Transporte Transmembrana

Captulo 4
Informao Hereditria Como as Protenas so Formadas? Qual a Constituio das Protenas? Consideraes sobre as Protenas...
Captulo 5
Alimentos Hormnios
Caminhando pela Bioqumica...
Enzimas
Captulo 6
Lipdeos Digesto e Absoro de Lipdeos e Vitaminas L-Acetil-Carnitina

Captulo 7
Carboidratos Carboidratos: Vias Especiais

Captulo 8
Viso Geral do Metabolismo Metabolismo e Transportadores de Energia Metabolismo do Glicognio e Mecanismos da Degradao
Oxidativa de Carboidratos (Respirao Celular)
Captulo 9
Metabolismo Lipdico: Degradao e Biossntese Degradao Oxidativa de Protenas

Captulo 10
Metabolismo dos cidos Nuclicos Regulao da Expresso Gnica Importao e Secreo de Protenas
Captulo 11
Tecnologia do DNA Recombinante
ii
Anexo
Bioqumica da Respirao: Transporte de Gases e Equilbrio

cido-Base
Consideraes sobre a Contrao Muscular Acetil-Colina: Importncia Diabetes

Referncias Bibliogrficas
iii
Captulo 1
Viso Geral sobre os Primeiros Trabalhos em Bioqumica ...

Aristteles, 384-322 a.C., o mais influente dos filsofos gregos, aceitava a teoria dos quatro elementos (gua, terra, fogo e ar). No considerava, no entanto, que os elementos fossem as matrias com as quais o homem fosse feito. Aristteles concebia os elementos como combinaes pareadas de propriedades opostas: frio e calor, umidade e secura. As propriedades opostas no poderiam combinarse entre si. Assim, so formadas quatro combinaes diferentes possveis, cada uma das quais, levando formao de um elemento diferente: calor + secura = fogo calor + umidade = ar frio + secura = terra frio + umidade = gua
Conforme mencionado por Michael Behe, em sua primorosa obra Darwins black box: the biochemical challenge to evolution2 , o maior bilogo grego foi tambm seu maior filsofo, Aristteles. Nascido ao tempo em que Hipcrates3 ainda vivia, Aristteles compreendeu que o conhecimento da natureza requeria observao sistemtica. Mediante cuidadoso exame, reconheceu um volume espantoso de ordem no mundo vivo, o que constituiu um primeiro passo de importncia crucial. Foram poucos os investigadores biolgicos importantes no milnio que se segui a Aristteles. Um deles, Galeno, um mdico de Roma, viveu no sculo II d.C. Erroneamente, Galeno sups que o sangue era bombeado para irrigar os tecidos, e que o novo sangue era produzido de forma ininterrupta para reabastecer o corao. Foi somente no sculo XVII que um ingls, William Harvey, apresentou a teoria que o sangue flui sem cessar em uma direo, fazendo um circuito completo, e que volta ao corao.
1
Por bioqumica entende-se todo e qualquer tipo de cincia que estuda a vida no nvel molecular, mesmo que a cincia seja praticada em disciplinas com outros nomes, tais como biologia molecular, gentica ou embriologia. 2 A Caixa Preta de Darwin, 1997, Ed. Cincia e Cultura (vide referncias) 3 Cerca de 400 a.C., denominado o pai da medicina.
Na Idade Mdia, o ritmo de investigao cientfica acelerou. O exemplo dado por Aristteles foi seguido por nmeros crescentes de naturalistas. A biologia progrediu rapidamente nos sculos XVII e XVIII, medida que os cientistas fundiam os exemplos dados por Aristteles e Harvey, de observao atenta e raciocnio inteligentes. A primeira qumica mdica A primeira tentativa para reduzir os processos biolgicos a fenmenos materiais, consiste em interferir nas conexes de poca da alquimia ou de qumica e no estudo de suas vias. Esse sistema era denominado quimiatria ou iatroqumica, que etmologicamente significa qumica mdica. Geralmente se considera Paracelso como um dos precursores da quimiatria. Philip Theophrast Bombast von Hohenheim (1493-1451), mdico e alquimista suo adotou a forma latinizada de Philippus Aureolus Theophrastus Bombastus Paracelsus. Em sua obra, que se difundiu muito, feita atravs de uma certa incoerncia entre os pares: fisiologia/alquimia, magia/astrologia, tambm apresentando discordncias entre a medicina hipocrtica e galnica. Tambm foram relevantes os aportes fisiolgicos de mdico Jean Baptista Van Helmont (1577-1664), mdico, qumico e filsofo flamenco, o qual se entrega sucessivamente teologia, magia astrologia e medicina. Van Helmont desenvolveu uma teoria sobre a digesto dos alimentos, seus trabalhos representando febris indcios para o animismo e o futuro da revoluo qumica. Van Helmont aplica a medio a problemas de qumica e biologia, estudando aspectos de fisiologia vegetal. Na qumica, estuda vapores que a matria produz, inventando o nome de gs para as substncias liberadas ao ar. O iatromecanicismo, baseado na crena que um animal funciona segundo os princpios da mecnica, resulta incompatvel com o funcionamento harmnico dos seres vivos. Ao contrrio do iatromecanicismo, reage George Ernest Stahl (1660-1734), qumico e mdico alemo, professor da Universidade de Halle. A doutrina proposta por Stahl utiliza a anima para explicar o fundamento da vida e toda patologia humana. O nima o que se constitui o princpio da vida, que mantm reunidas ls partculas constituintes do organismo, que dirige o funcionamento dos rgos, sustenta a circulao e evita a putrefao. Stahl tambm fez contribuies no mbito da qumica. Formula, em 1702 a Teoria do Flogstico, a qual explica o fenmeno da combusto, reformulando, de modo cientfico, o antigo princpio do fogo, dos quatro elementos formadores da matria.
Cronologia dos primeiros trabalhos...

1773: Isolamento da Uria (G.F. Rouelle) 1789: Interpretao da respirao como sendo um processo oxidativo (A.L. Lavoisier) 1815: Esclarecimento da reao global da fermentao alcolica (Gay Lussac) 1828: Sntese da uria a partir do cianeto de amnia: primeira sntese de um composto orgnico prprio dos seres vivos (Friedrich Wohler) 1836-39: Esclarecimento da fermentao como sendo um processo cataltico (Berzelius, Liebig) 1857: Estabelecimento da teoria vitalista da fermentao: a fermentao devida atividade da clula viva (L. Pasteur) 1869: Isolamento dos cidos nuclicos (F. Miescher) 1890: Cristalizao da primeira protena: ovalbumina (Franz Hofmeister) 1897: Descobrimento da ao de extratos de levedura sobre a fermentao 1903: Isolamento do primeiro hormnio: a adrenalina (Jokichi Takamine) 1905: Estabelecimento da importnica do cido fosfrico na fermentao (A. Harden Young) 1912: Primeiro esquema da fermentao (Carl Neuberg) 1914: Isolamento da tiroxina da tireide (E C. Kendall) 1926: Isolamento da tiamina, a primeira vitamina (W.F. Donath, B.C.P. Sansen) 1926: Obteno da urease, primeira enzima cristalizada (J.B. Sumner)
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1929: Descobrimento do fosfato "lbil", adenosina trifosfato, ATP (K. Lohmann, Fiske & Subarrow) 1932: Descobrimento do ciclo da ornitina (Hans Adolf Krebs & Henseleit) 1935: Descoberta da treonina como aminocido essencial (W.C. Rose) 1935: Isolamento do primeiro vrus cristalizado: o vrus do mosaico do tabaco (TMV) (W.M. Stanley) 1937: Formulao do ciclo do cido ctrico (Hans Adolf Krebs, Knoop & Martius) 1939-44: Isolamento e esclarecimento da constituio do primeiro antibitico de aplicao teraputica, a penicilina (A. Fleming, H.W Florey & E.B. Chain) 1944: Isolamento dos fatores de transformao dos pneumococos e identificao do material vital (DNA) (G. Avery) 1948: Introduo da tcnica de centrifugao como um mtodo para o isolamento de componentes celulares (Scheider i Hoogeboom, Potter) 1950: Isolamento da cortisona (E.C. Kendall) 1952: Proposio do modelo helicoidal para as protenas (L. Pauling) 1953: Determinao da estrutura da insulina (F Sanger) 1953: Descobrimento do ciclo da pentose-fosfato para a degradao da glicose (Horecker & Dickens) 1953: Modelo Helicoidal do DNA (J.D. Watson & F.H. Crick) 1958: Demonstrao da infectividade de vrus puros (Alfred Gierer i Gerhard Schramm) 1961: Interpretao do cdigo de bases de cidos nuclicos (S. Ochoa & M. Nieremberg)
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1963: Proposio, pelo Instituto Pasteur, dos modelos das enzimas alostricas (F. Jacob, J. Monod Changeux) 1965: Primeira determinao da seqncia de um cido nuclico (Holley e colaboradores) 1965: Determinao da primeira estrutura tridimensional de uma enzima, a lisozima (Phillips e colaboradores) 1966: Sntese completa do hormnio insulina (Kung Jeuhting, Du Yu-cang & Wang Yu) 1966: Isolamento de uma molcula de repressor (Gilbert & Muller-Hill) 1968: Produo de ribossomas hbridos, Universidade de Wisconsin (Nomura & colaboradores) 1969: Isolamento de genes que constituem o operon "lac" de Escherichia coli (Beckenwith e colaboradores) 1969: Primeira sntese de uma enzima, a ribonuclease, obtida separaeamente por dois grupos distintos, um na Universidade Rockefeller (Merrifield & Gutte), e outro nos laboratrios Merck, Sharp & Dohme (Denkewalter & Hirschmann) 1970: Descrio de nove reaes da fase luminosa da fotossntese (Knaff & Arnon)
At o sculo XIX, a maioria das pessoas pensava que a vida era composta de um tipo diferente de material, diferente do observado na composio dos objetos inanimados. Em 1828, no entanto, Friedrich Whler aqueceu cianato de amnio e descobriu que o produto formado era uria, um produto biolgico. A partir desse sucesso, formulou a idia de metabolismo, atravs do qual o corpo compe e decompe substncias por meio de processos qumicos. Ernst Hoppe-Seyler cristalizou o material vermelho do sangue (a hemoglobina) e demonstrou que se ligava ao oxignio para transport-lo via sangue. Emil Fisher demonstrou que a grande classe de substncias denominadas de protenas era constituda, sem exceo, por apenas vinte tripos de blocos de cosntruo (aminocidos). Na primeira metade do sculo XX, a cristalografia de raios X era usada para determinar a estrutura de pequenas molculas. A cristalografia implica em lanar um feixe de raios X sobre o cristal de um elemento qumico; os rais so dispersos por um processo denominado difrao. Aplicar as armas da cristalografia de raios X s protenas lhes revelaria a estrutura. Uma nova tcnica veio a ser adotada
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para complementar e suplementar a cristalografia: a ressonncia nuclear magntica (RMN). Com o emprego da RMN, uma molcula pode ser estudada enquanto em soluo. Encerra, no entanto, limitaes que a tornam aplicvel apenas a uma parte das protenas conhecidas. Juntas, porm, a RMN e a cristalografia de raios X conseguiram esclarecer as estruturas de protenas em nmero suficiente para dar aos cientistas uma compreenso detalhada de como elas so (BEHE, 1997).
OS ORGANISMOS VIVOS SO ORGANIZADOS
A Matria Viva composta por molculas intrinsecamente inanimadas tal como a matria no-viva! Assim, de onde vem a incrvel diferena? A Bioqumica, portanto, procura responder a esta pergunta4 ! Todo organismo vivo extremamente complexo e organizado. Cada parte de um organismo vivo tem um propsito ou funo especfica, seja esta parte uma estrutura complexa como um rgo ou aparelho, estruturas submoleculares ou mesmo molculas individuais. Os organismos vivos so capazes de extrair e utilizar energia do seu ambiente seja na forma de nutrientes orgnicos, seja na forma de luz solar. Os organismos vivos so capazes de autoduplicar, gerando uma descendncia que perpetua o estado vital.
COMO A MATRIA VIVA COMPOSTA? TOMOS, MOLCULAS E OUTROS BICHOS...

Todo organismo vivo formado por MACROMOLCULAS ORGNICAS construdas de acordo com um plano comum. H uma simplicidade bsica na estrutura das macromolculas, apesar de serem, por exemplo, cerca de 1000000000000,0 os tipos de protenas existentes em 10 milhes de espcies de seres vivos. Todos os organismos vivos so formados pelas mesmas espcies de molculas fundamentais e, portanto, parecem ter um ancestral comum. Os organismos vivos trocam ENERGIA E
Vide Referncias: The Blind Watchmaker (O relojoeiro cego), de Richard Dawkins, 1985.
MATRIA com o meio ambiente e entre si. Os organismos vivos criam e mantm suas estruturas organizadas e complexas extraindo, transformando e utilizando energia do seu ambiente. As clulas vivas so mquinas qumicas muito complexas e organizadas, que funcionam a base de energia qumica.A energia de todo ser vivo vem, direta ou indiretamente, do Sol. Os organismos vivos fabricam substncias capazes de REGULAR todo o seu conjunto complexo de reaes qumicas. As ENZIMAS so capazes de realizar e controlar todos os processos bioqumicos que caracterizam um organismo vivo. Os processo metablicos so regulados para operar no princpio da economia mxima Os organismos vivos so capazes de se REPRODUZIR com incrvel preciso ao longo de milhares de geraes, atravs de um sistema de replicao auto-reparvel. Toda a informao necessria para a construo de um novo ser vivo est armazenada e codificada no DNA de todas as clulas que o compe. Esta informao cabe em 0,000000000006 g de DNA, para a clula do ser humano.
A MENOR UNIDADE DA MATRIA VIVA As primeiras formas de vida Surgiram h 3,5 a 4,0 bilhes de anos; A terra tem aproximadamente 4,7 bilhes de anos. A composio da matria viva marcadamente diferente da composio da crosta terrestre, o que indica uma origem em meio lquido. O fato de que todas as clulas vivas possurem molculas formadas a partir de algumas poucas unidades fundamentais em comum sugere um ANCESTRAL NICO. O surgimento da vida seguiu trs etapas: Evoluo Qumica - Ao acaso Organizao Molecular - Orientada Evoluo Biolgica Historicamente, a pesquisa da origem da vida: 1. Oparin - 1920 "Sopa Primordial" 2. S. Miller - 1953 Experimento clssico 3. Recentemente Descoberta de um RNA com atividade cataltica, chamado "Ribozima".
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Baseados nestas pesquisas pode-se listar os principais eventos relacionados ao surgimento das primeiras formas de vida como, provavelmente: 1. A formao das primeiras molculas orgnicas; 2. A organizao destas em molculas mais complexas, especialmente o RNA cataltico; 3. A utilizao deste RNA como molde para a sntese dos primeiros peptdeos, que assumem a funo de catlise; 4. O surgimento das membranas biolgicas; 5. A migrao do RNA para o DNA como molcula armazenadora da informao gentica, pois formado por uma fita dupla mais estvel, duplicvel e reparvel. O aumento da competio pelas substncias disponveis no meio extracelular levou a clula primitiva necessidade de "aprender" a sintetizar estas e outras substncias mais eficientes. Entre as vias metablicas mais antigas est provavelmente a GLICLISE ANAERBICA. H 1,5 bilhes de anos surgimento das primeiras clulas EUCARITICAS. As clulas eucariticas surgiram
provavelmente da simbiose entre clulas procariticas, que deram origem s mitocndrias e aos cloroplastos, duas organelas essenciais5 . Na seqncia da evoluo, clulas eucariticas se associaram para formar colnias de clulas especializadas e cooperativas, os primeiros seres multicelulares. A comparao de seqncias de nucleotdeos de RNA ribossomal permite o estabelecimento de um critrio evolucionrio muito preciso.
Vide Hiptese do Endossimbionte, sobre a origem de mitocndrias e cloroplastos em clulas eucariticas.
Captulo 2
COMPLEXIDADE DA MATRIA VIVA:
Todo organismo vivo extremamente complexo e organizado. Cada parte de um organismo vivo tem um propsito ou funo especfica, seja esta parte uma estrutura complexa como um rgo ou aparelho, estruturas submoleculares ou mesmo molculas individuais. Os organismos vivos so capazes de extrair e utilizar energia do seu ambiente seja na forma de nutrientes orgnicos, seja na forma de luz solar. Os organismos vivos so capazes de autoduplicar, gerando uma descendncia que perpetua o estado vital.
PRINCPIOS DA LGICA MOLECULAR DA VIDA

A evoluo de organismos multicelulares grandes dependeu da habilidade de clulas eucariticas em expressar sua informao hereditria de formas distintas e tambm da capacidade de funcionar por ccoperao como um coletivo. Toda e qualquer matria viva regida por dois princpios bsicos, que so denominados Princpios da Lgica Molecular dos Organismos Vivos. Tais princpios podem ser sumarizados como: Princpio da Entropia Mxima (ou tendncia ao Caos) e Princpio da Economia Mxima (ou economia das Partes e dos Processos, ou ainda, Princpio da Conservao Mxima de Matria e Energia6 ). Ambos os princpios voltaram a ser detalhados no decorrer deste livro. Apenas adiantando um pouco, pode-se perfeitamente dizer que, desde que o Universo foi criado, assim como o entendemos, todo o pool de matria e energia, exatamente o mesmo. Ou seja, no ocorre perda ou formao, seja de matria ou energia. O que se observa, no entanto, so transformaes, ou bioconverses, com a conseqente realizao de trabalho.
EVOLUO QUMICA - A ORIGEM DA VIDA

As primeiras formas de vida Surgiram h 3,5 a 4,0 bilhes de anos; A terra tem aproximadamente 4,7 bilhes de anos. A composio da matria viva marcadamente diferente da composio da crosta terrestre, o que indica uma origem em meio lquido.
Antoine L. Lavoisier, sculo XVII.
O fato de que todas as clulas vivas possurem molculas formadas a partir de algumas poucas unidades fundamentais em comum sugere um ANCESTRAL NICO. Baseados nestas pesquisas pode-se listar os principais eventos relacionados ao surgimento das primeiras formas de vida como, provavelmente:
A formao das primeiras molculas orgnicas; A organizao destas em molculas mais complexas, especialmente o RNA cataltico7 ; A utilizao deste RNA como molde para a sntese dos primeiros peptdeos, que assumem a funo de catlise; O surgimento das membranas biolgicas; A migrao do RNA para o DNA como molcula armazenadora da informao gentica, pois formado por uma fita dupla mais estvel, duplicvel e reparvel.
Ribozima (enzima ribossmica).
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Captulo 3
A CLULA E CICLO CELULAR

Clula: unidade mnima de um organismo, capaz de atuar de maneira autnoma. Alguns organismos microscpicos, como bactrias e protozorios, so clulas nicas, enquanto os animais e plantas so formados por muitos milhes de clulas organizadas em tecidos e rgos.
Caractersticas gerais das clulas: pode-se classific-las em clulas procariticas e eucariticas. As primeiras, que incluem bactrias e algas verde-azuladas, so clulas pequenas, de 1 a 5 m de dimetro, e de estrutura simples. O material gentico (DNA) no est rodeado por nenhuma membrana que o separe do resto da clula. As clulas eucariticas, que formam os demais organismos vivos, so muito maiores (medem entre 10 a 50 m de comprimento) e tm o material gentico envolto por uma membrana que forma um rgo esfrico importante chamado de ncleo. Apesar das muitas diferenas de aspecto e funo, todas as clulas esto envolvidas por uma membrana - chamada membrana plasmtica - que encerra uma substncia rica em gua, chamado citoplasma.
Quase todas as clulas bacterianas e vegetais esto tambm encapsuladas numa parede celular grossa e slida, composta de polissacardeos, externa membrana plasmtica. Todas as clulas contm informao hereditria codificada em molculas de cido desoxirribonuclico (DNA); esta informao dirige a atividade da clula e assegura a reproduo e a transmisso dos caracteres descendncia. Ncleo: o rgo mais importante em quase todas as clulas animais e vegetais; esfrico, mede cerca de 5 m de dimetro, e est rodeado por uma membrana dupla. A interao com o citoplasma acontece atravs de orifcios chamados de poros nucleares. Dentro do ncleo, as molculas de DNA e protenas esto organizadas em cromossomos, que costumam aparecer dispostos em pares idnticos. O ncleo controla a sntese de protenas no citoplasma. O RNA mensageiro (RNAm) sintetizado de acordo com as instrues contidas no DNA e deixa o ncleo atravs dos poros. J no citoplasma, o RNAm une-se a corpos pequenos chamados ribossomos e codifica a estrutura primria de uma protena especfica. Citoplasma: compreende todo o volume da clula, com exceo do ncleo. Engloba numerosas estruturas especializadas e organelas.
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Citoesqueleto: uma rede de filamentos proticos do citossol que se encarrega de manter a estrutura e a forma da clula. Tambm responsvel por muitos dos movimentos celulares8 .
Mitocndrias: uma das organelas mais importantes do citoplasma e encontrada em quase todas as clulas eucariticas. So as organelas produtoras de energia. Os cloroplastos so organelas ainda maiores, encontradas nas clulas de plantas e algas.
Outras organelas: a maior parte dos componentes da membrana celular forma-se numa rede tridimensional irregular de espaos, rodeada, por sua vez, por uma membrana e chamada de retculo endoplasmtico (RE), no qual formam-se tambm os materiais expulsos pela clula. O aparelho de Golgi formado por pilhas de sacos planos envoltos em membranas. Este aparelho recebe as molculas formadas no retculo endoplasmtico, transforma-as e dirige-as para diferentes lugares da clula. Os lisossomas so pequenas organelas que contm reservas de enzimas necessrias digesto celular de vrias molculas indesejveis. As membranas formam muitas outras vesculas pequenas, encarregadas de transportar materiais entre organelas. Diviso celular: todas as clulas de qualquer planta ou animal surgiram a partir de uma nica clula inicial - o vulo fecundado - por um processo de diviso. O vulo fecundado divide-se e forma duas clulas-filhas idnticas, cada uma das quais contm um jogo de cromossomos igual ao da clula parental. Depois, cada uma das clulas-filhas volta a se dividir, e assim continua o processo. Nesta diviso, chamada de mitose, duplica-se o nmero de cromossomos (ou seja, o DNA) e cada um dos jogos duplicados constituir a dotao cromossmica de cada uma das duas clulas-filhas em formao. Na formao dos gametas, acontece uma diviso celular especial das clulas germinais chamada de meiose, na qual se reduz metade sua dotao cromossmica; s se transmite a cada clula nova um cromossomo de cada um dos pares da clula original. Cada compartimento fabrica dentro de si um conjunto especfico de protena e enzimas que vo conferir a essa organela uma srie de propriedades especiais, ou seja, a compartimentalizao de protena e enzimas vai conferir a cada organela uma funo especial dentro da clula para que de uma maneira geral no seja exercida por outras organelas. Dentro dessas organelas existentes nos organismos eucariontes a maior delas e, talvez a mais importante, o ncleo celular que a primeira caracterstica que distingue esses organismos dos procariontes, onde o material gentico est solto no citoplasma.Entretanto, essa organela no tem s a funo de compartimentalizar o DNA, ou seja,
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Ciclose
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separar o material gentico do citoplasma. Alm disso, est relacionado com a fisiologia desse cido nuclico, pois alm de armazenar tambm contm dentro de si um conjunto de protena, um sistema enzimtico, responsvel pela replicao dessa informao gentica no processo de diviso celular: na mitose e na meiose.
Esse ncleo tambm replica ou duplica a informao gentica para ser passada em quantidades iguais para as clulas-filhas. Possui tambm um conjunto de protena responsvel por detectar alteraes na informao gnica, ou seja, na estrutura do cido desoxirribonucleico e uma vez detectadas alteraes essas enzimas conseguem reparar, retornando a informao ao estado original e evitando acumulo de mutaes no organismo. Entretanto, no abole completamente, pois qualquer processo biolgico tem uma taxa de erro inerente. tambm responsvel pelo processamento dessa informao porque de uma maneira geral no acessvel aos outros componentes celulares, ento, transformada em outro tipo de informao que possa ser compreendida por determinadas maquinarias da clula. E o modo como processada atravs da sntese de uma molcula complementar: RNA que pode ser transportador, ribossomal e mensageiro. Tem funes no processo de sntese protica, mas existem certos RNAs que podem funcionar como cofatores de atividade enzimtica telomerase.
Existe ainda a regulao da expresso gnica controlada pelo ncleo, quais os gens vo ser impedidos e quais vo ser sintetizados. Esse controle feito por um conjunto de protenas existentes no ncleo, chamadas de protenas regulatrias, integrando sinais recebidos por receptores da membrana citoplasmatica e transformam-nos em padro especfico para a expresso gnica para que a clula possa exercer bem suas funes fisiolgicas sob aquelas condies num determinado momento. A informao gnica armazenada num tipo de molcula que cido desoxirribonucleico, que se apresenta como fita dupla que seria duas cadeias lineares de bases nitrogenadas ordenadas numa determinada seqncia, dispostas numa orientao antiparalela e formando pareamento entre as bases nitrogenadas de uma fita com a outra. A forma mais comum de asssociao de DNA a -hlice encontrada na maioria dos organismos.
1) Vrus bateriofago que tem uma capsula com o genoma do vrus, o DNA circular; no organismo
eucarionte se apresenta como colar de contas, as estruturas esfricas no so o DNA e sim o nucleossoma, complexo proteico associado ao DNA e os filamentos fininhos que conectam um nucleossoma ao outro seria o DNA da clula eucarionte.
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2) Cada fita de DNA formada por uma sequncia de nucleotdeos, mleculas de fosfato e uma parte
de base nitrogenada (T, A, C, G), conferindo um cdigo gentico que pode ser lido por determinados componentes celulares. Em RNA ocorre a uracila em lugar da timina. Essa informao gentica vai ser transformada parte numa molcula que pode ser entendida pela clula que o RNA mensageiro e esse, junto com determinados grnulos proticos que so os ribossomas, vai ser primeiro traduzido numa sequncia linear de aminocido e esses aminocidos na presena de um meio de composio apropriada e com a ajuda de determinadas protenas citoplasmticas vo adquirir uma estrutura tridimensional (ativa) onde a protena vai ter funo biolgica maximizada que o produto final da informao do ncleo.
3) Exemplificao de uma das funes do ncleo que a duplicao do DNA na fase S do ciclo
celular, onde cada fita representa um molde para a produo da fita complementar.
4) Processo de transcrio gnica, a informao gentica contida na dupla fita de DNA processada
por complexos proteicos dentro do ncleo que so as RNAs polimerases que transcrevem varias sequncias de nucleotdeos , formando os RNA transportador (tRNA ou RNAt), mensageiro (mRNA ou RNAm) e ribossmico (rRNA ou RNAr).
Em relao transcrio, existe uma caracterstica que diferencia os organismos eucariontes dos procariontes: na dupla fita de DNA, existe uma regio do gen que funciona como um pacote de informao gnica especfica que ser transcrita para a celula atravs da RNA polimerase. Essa enzima sintetiza a fita complementar de cido ribonucleico e medida que ocorre a sntese ela j promove uma modificao no RNA em uma guanina ligada a uma extremidade 5 que uma modificao do RNAm que chamado de cap, ocorrendo em eucariontes e procariontes. E aps a sntese do RNAm , tem-se uma modificao na maior parte dos RNAs que a adio de uma cauda de poli-A e que serve para regular a meia vida dos RNAm dentro da clula. Logo aps a ao da RNA polimerase, tem-se a formao de um transcrito que chamado transcrito primrio ou RNA heterogneo que na clula eucarionte no vai estar pronto ainda para o processo de traduo, ou seja, no pode ser utilizado pelo ribossoma. Outra funo do ncleo processar esse transcrito primrio, fazendo o processamento do RNAm , retirada dos introns e soldagem dessas estruturas que codificam a sequncia primria das
protena que fica contnua e a sim estar pronta para ser mandada para o citoplasma para ser traduzida pelos ribossomas.
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Ainda nas clulas eucariontes, os RNAs so monocistrnicos, RNAm que codifica apenas um polipeptdeo, enquanto que nos procariontes o RNAm pode ser policistrnico, ou seja, a partir de uma mesma sequncia codifica polipepontodeos diferentes. Enquanto que nos organismos procariontes, a nica forma de regular a expresso da informao gnica a nivel transcricional, os eucariontes tm diversas formas de regulao como o descrito acima, controle do processamento de RNA, do transporte do RNAm para o citosol (90%fica no ncleo e degradado), o ribossoma pode ser inativado e alguns RNAs podem ser destrudos no citosol. E o que a cromatina? Refere-se associao de DNA e protena, essas ltimas tem como funes: coordenar o metabolismo de DNA (protenas no-histnicas) e organizao fsica do DNA dentro do ncleo (histonas9 ), as quais formam um conjunto bastante homogneo de protena. As histonas so divididas em nucleossomais (H2A, H2B, H3 e H4) e no-nucleossomais (H1). Tm baixo peso molecular e possuem grande nmero de aminocidos bsicos, ou seja, carregados positivamente, como a lisina e arginina. Essas cargas conferem s protenas a capacidade de se ligar ao DNA por interaes eletroestticas, interagindo com as cargas negativas do cido fosfrico no esqueleto do DNA. O nucleossoma um complexo octamrico formado pelas quatro histonas nucleossomais, onde cada histona apresentada em um conjunto duplo. Ento, a primeira forma de organizao d aproximadamente duas voltas sobre esse nucleossoma, diminuindo o comprimento da fita de DNA e ajudando a organiz-lo. O DNA enovelado ao redor dos nucleossomas se apresenta como um colar de contas com um dimetro de 10 nanmetros (10 x 10-9 metro). Nunca vai se encontrar numa clula eucarionte um DNA desnudo. Essa estruturao com 10 nanmetros corresponde primeira forma de compactao de DNA correspondendo forma eucromatina, estrutura menos compacta de DNA sendo transcricionalmente ativa, gen presente nessa regio est sendo transcrito na forma de RNA. Alm dessa forma de compactao do DNA, existe outra, que seria o enrolamento dessa estrutura em forma de um colar de contas sobre uma mola formando tipo uma fibra mais espessa com 30 nanmetros e uma forma mais compactada do DNA, correspondendo a estrutura da heterocromatina, que uma regio transcricionalmente inativa, ou seja o gen dali no esto sendo transcritos na forma de RNA. Duas diferenas entre eu e heterocromatina: a primeira morfolgica, que seria dada pelo tipo de enovelamento, eucromatina menos e a hetero mais enovelada; a segunda funcional, a eucromatina apresenta regio transcricionalmente ativa enquanto que a hetero inativa. E num determinado filamento de DNA, geralmente tm regies de eucromatina interespaadas com regies de hetero e elas podem intercambiar de forma, hetero se transforma em eucromatina e vice-versa, dependendo do
Protenas de carter bsico, constitudas, principalmente do aminocido bsico histidina.
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estado de expresso dos gens daquela regio. Se um determinado gen no est sendo transcrito fica na forma de heterocromatina...
Quando a clula comea a trancrever um gen, ela no procura fazer uma cpia de cada vez, comeando a trancrever o gen atravs da RNA polimerase, quando ela sai desse incio de transcrio, vem uma outra polimerase e se liga, ento se tem um mesmo gen transcrito ao mesmo tempo por vrias polimerases, porque a nica coisa que limita as polimerases o tamanho. Enquanto tiver espao elas entram. Depois que esses RNAm forem mandados para o citoplasma so traduzidos justamente de forma sequencial por ribossomas. Do mesmo modo, enquanto existir espao para os ribossomas se ligarem, eles o fazem. No processo de traduo, ele fica ligado at que seja mandada uma mensagem contrria ao ncleo, ou pelo aumento da concentrao de protena ou por uma alterao do processo fisiolgico onde h o desligamento da expresso daquele gene. / Resumo: A informao gnica armazenada sob a forma de DNA, essa dupla fita se estrutura ao redor dos nucleossomas podendo se estruturar na forma de eu ou heterocromatina e essa DNA + nucleossomas forma a cromtide ou cromossoma interfsico. Precisa de estruturas adicionais para se manter estvel dentro da clula e se manter estvel ao longo das geraes. No qualquer segmento de DNA ligado a histonas (protena cida que tem como funo empacotar o DNA) e no-histonas que caracteriza um cromossoma eucarionte! Ento, no filamento de DNA ativo deve haver nas duas extremidades (telmeros) e numa regio entre essas extremidades (centrmero), regies especializadas para caracteriz-lo como cromossoma. Alm disso, precisa possuir centenas de regies ao longo do cromossoma chamadas de Ori, onde comea a replicao de DNA. Os telmeros so sequncias de DNA especficas onde ao redor dessa seqncia so montadas estruturas proteicas, eles tm como funo evitar o ataque de nucleases, que destri DNA a partir de uma extremidade livre. Essa extremidade do telmero tambm importante para no haver fuso de cromossomas, mantendo o nmero constante. Por que existem essas nucleases? Para degradar DNA invasor (de vrus) e tambm pode existir as nucleases dos prprios vrus para atacar o DNA da clula. Normalmente dentro da clula quando tem duas extremidades livres, atravs do sistema de reparo, automaticamente liga-se uma ponta na outra, para manter constante tambm o nmero de cromossomas. E uma ltima funo seria promover a duplicao completa (corretamente) do DNA atravs da telomerase. O centrmero tambm uma seqncia especfica de DNA onde vai ser montada uma placa protica chamada cinetcoro onde as fibras do fuso se ligam na mitose ou meiose.
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8) Comossoma mittico, diferente do interfsico, pois j est duplicado (cpia fiel da molcula), tem
uma regio chamada de primria que contem a sequncia do centrmero e ao redor dessa regio do centrmero montada a placa proteica chamada de cinetcoro e ele se liga os filamentos e microtbulos para puxar o cromossoma para o plo da clula.
9) Alguns cromossomas eucariontes, alm de possuir todas essas sequncias, possui uma determinada
regio onde tem a repetio em sequncia de um mesmo tipo de conjunto de gens que codificam o RNAr. Ento, como o RNAr muito importante para a clula, no se satisfaz em ter apenas uma cpia de cada gen, deve ter centenas de cpias desse gen e no apenas em um tipo cromossoma, ela (clula) espalha essas cpias em vrios cromossomas diferentes. No caso humano, tem-se pelo menos seis tipos de cromossomas que contm essas regies de mltiplas cpias de RNAr chamadas de RON (regio organizadora de nuclolo) que se agregam numa regio distinta da clula, emparelham-se lado a lado as regies contendo as sequncias dos RNAr ou as RONs. E ao redor dessa regio de RONs montado uma estrutura proteica que forma a matriz do nuclolo. E de acordo com as tarefas que se realizam nessas regies do nuclolo cria-se uma diferenciao morfolgica que vai estar associada a uma funo especfica. Ento, na regio central que
fibrilar, tem-se a sntese e processamento do RNAr e na regio perifrica que granular, tem-se a montagem das subunidades ribossomais. Cada subunidade formada por tipo de protena diferentes produzidas por gens diferentes, nos eucariontes, na maior, tem-se 31 tipos de protena e dois tipos de RNAr e na menor 21 protenas e um tipo de RNAr. No caso dos eucariontes, tem-se a menor com 40 S (33 protenas e um tipo de RNAr) e a maior com 60 S (50 protena diferentes e trs tipos de RNAr). Nos procariontes, por ser mais simples o ribossoma consegue ser montado sem ajuda, j eucarionte precisa da ajuda de determinados componentes da regio fibrilar do nuclolo, Ento, na clula eucarionte, tem-se a transcrio dos RNAr que so enviados para o citoplasma, onde so traduzidos em protena ribossomais que so enviadas para ncleo e compartimentalizadas no nuclolo onde atravs da ao do molde de RNAr mais ajuda de protenas especficas do nuclolo, montam-se as subunidades menor e maior, que so enviadas
separadamente para o citoplasma onde vo ser montadas em um ribossoma ativo e serem engajadas na sntese proteica. Costuma-se chamar, de maneira imprpria, ncleo na clula em repouso. No entanto, nesse perodo a clula est em constante atividade para sua manuteno e do organismo, s no est se reproduzindo. A clula para atender funes especiais dentro do organismo ou para manter constante o nmero de clulas ou para gerar clulas que iro funcionar como gametas para poder atender s reprodues sexuadas, ela ir realizar dois processos distintos: mitose, onde a clula tem como funo gerar duas clulas-filha com informao gnica igual a da clula me e
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meiose, onde essas clulas geram quatro clulas-filha onde a informao gnica metade da clula-me original. O que iremos ver hoje so os processos de mitose e meiose, alm do ciclo celular para que a clula possa entrar em diviso (intrfase). O ncleo quando a clula entra em diviso celular sofre vrias modificaes que visam a atender o objetivo final que transmitir ou dividir a informao gentica para as clulas-filha. Para a clula entrar em diviso precisa antes passar por um processo preparatrio chamado intrfase. A intrfase mais a mitose formam o ciclo celular. Ciclo Celular
Programa Universal seguido por todas as clulas para se dividirem. Esse ciclo celular atribudo nica e exclusivamente para o processo de mitose e geralmente no usado para o processo de meiose. Esse programa universal significa que todas as clulas tanto de eucariontes como em procariontes possuem uma srie de sistemas regulatrios realizados por protenas regulatrias e dotadas de transmisso de sinais que iro integrar as mensagens recebidas tanto do meio externo (disponibilidade de nutrientes e sinais quimcos) quanto do interno (tamanho da clula) que ao chegar o momento propicio para a a clula se dividir ela dispara uma srie de eventos que ir levar a duplicao do DNA e a montagem do aparato protico necessrio para a separao desse DNA duplicado para cada plo que ir para clulasfilha, alm de fazer a ciso do citoplasma para formar duas clulas diferentes. Todo esse sistema de diviso celular regulado por uma srie de protenas e a ao integrada dessas protenas o chamado ciclo celular. Podemos dividir o ciclo celular em quatro fases distintas: G1, S, G2 e M.
1) Na fase G1, a clula que acabou de se reproduzir e gerou a clula filha e de modo geral tem um tamanho menor que a me, mas durante esse perodo ela sintetiza novos constituintes celulares, para atingir o tamanho de uma clula adulta e poder desenvolver seu potencial dentro do organismo. A partir da ela pode tomar dois caminhos distintos, um destes seria entrar em processo de diviso celular passando para a fase S onde h a duplicao do material gentico seguindo para a fase G2, e aps esse processo preparatrio ocorre ento a diviso do citoplasma e da membrana formando duas clulas, num processo chamado Mitose ou fase M. De uma maneira geral, os organismos unicelulares sofrem ciclos continuos de diviso celular, que quer dizer que se voc encontra uma soluo com nutrientes eles iro se duplicar at exaurir a quantidade de nutrientes do meio. A nica coisa que restringe o processo de diviso a quantidade de nutrientes do meio. No caso de organismos pluricelulares, os ciclos de diviso so regulados, ou seja, no bastam apenas nutrientes no meio de cultura para essas
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clulas se dividirem, pois se isso acontecesse estaramos constantemente crescendo. Alm dos nutrientes as clulas necessitam de determinados hormnios chamados de fatores de crescimento que esto no organismo em quantidades grandes estimulando cada um determinada regio do organismo. Assim pode-se regular o crescimento da populao de clulas e evitar que se tenha um crescimento exagerado de um determinado rgo em relao a outro. Retomando: o ciclo celular se divide em quatro fases distintas G1 (que se caracteriza pelo crescimento celular, ou seja, a clula sintetiza os componentes necessrios a sua funo no organismo). Ao fim dessa fase ela opta por dois caminhos: o mais comum ir para a fase G0 ou de no-crescimento onde a maior parte das clulas do nosso organismo est estacionada. Essa fase G0 pode ser temporria, como ocorre com os leuccitos que s comeam a se dividir na presena do antgeno, ou permanente, onde nessas clulas que optam por esse tipo, diferenciam-se e no mais voltam a se dividir como o caso das fibras musculares e dos neurnios. Os neurnios no podem ser repostos, ou seja, a quantidade de neurnios de um indivduo adulto a mesma de quando nasceu. Um outro caminho para a fase G1 seguir para a fase S (S de sntese de DNA) para se iniciar a diviso celular.
Para passar da fase G1 para a fase S a clula d receber um sinal regulatrio formado por um ponto eve chamado Start onde ocorre a regulao. Esta regulao feita por uma protena quinase e uma protena regulatria. A protena quinase a p34 encontrada sempre dentro da clula em qualquer fase da vida dessa, e ativada por uma protena regulatria chamada de ciclina. A fase S ser ativada o complexo p34-ciclina. A p34 sozinha inativa e ativada pela ciclina que sintetizada no final da fase G1 e aps 30 minutos ela completamente degradada. S que ainda a formao desse complexo no suficiente para ativar a fase S, ele pega diversas vias de sinalizao compostas por vrias protenas quinases e vrias fosfatases que iro ser estimulados pela presena de hormnios, nutrientes, tamanho da clula e assim sucetivamente ativando o complexo p34-ciclina que ir atuar na transcrio gnica e faz com que ela sintetize toda maquinaria necessria a duplicao de DNA. Entre as protenas sintetizadas temos a DNA polimerase que faz a sntese da fita complementar de DNA, protenas regulatrias, helicases, protenas ligadoras de fita... Retomando: no final da fase G1 num ponto chamado Start h formao de ciclina que ir juntar-se protena quinase p34 formando o complexo p34-ciclina que ir fosforilar protenas alvo nucleares que modulam a transcrio gnica induzindo a formao de, por exemplo: DNA polimerase (responsvel pela duplicao do DNA), a SSBP (protena ligadora de fitas simples do DNA), helicases, protenas
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ligadoras de origem de replicao e assim por diante. A DNA polimerase iria separar as fitas de DNA em duas fitas simples e assim a ssb promoveria a ligao dessas fitas simples com nucleotdeos formando duas fitas duplas. Alm dessas protenas regulatrias, h a induo da formao de protenas estruturais para a formao da lamina nuclear. Ainda no h o mapeamento de todas protenas que sinalizam esse estimlo da diviso do DNA. 2) Ento na fase S ocorre a duplicao da fita de DNA. A palavra cromossomo em Biologia utilizada para designar duas estruturas completamente diferentes: o interfsico e o mittico. O interfsico representado pelas duas fitas de DNA mais as protenas asssociadas, a fita simples seria a cromtide ou o cromossomo n. Ns humanos possumos 46 cromossomos n, 23 de origem paterna e 23 de origem materna. O cromossomo mittico formado por uma estrutura em forma de X, onde h duas fitas de DNA unidas pelo centrmero. Nesse caso temos 46 cromossomos e 92 cromtides. As duas fitas so exatamente iguais e herdadadas de um nico genitor. Durante esse breve perodo nossa clula fica tetraplide, ou seja, fica com quatro cpias de um mesmo tipo de cromossomo. Na mitose ser dividida em 46 cromossomos para cada clula. 3) Ao terminar a sntese de DNA, a clula entra automaticamente na fase chamada G2, uma fase de verificao para verificar se a clula atende a todos pr-requisitos para diviso. Se todos prrequisitos forem atendidos, novamente entra em ao o complexo p34-ciclina diferente do anterior que ir promover o processo de mitose que envolve dois processos distintos: separao dos cromossomos para plos opostos da clula e diviso da clula (citocinese). 4) A fase seguinte a fase M, com durao bastante curta em relao as outras etapas do ciclo celular e em alguns organismos pode demorar 30 min, e em outros 2 horas. Duas modificaes interessantes entre essa fase e a intrfase so: o citosqueleto, que na intrfase se espalha homogeneamente pela clula e na mitose reestruturado para formar o fuso mittico para poder mover os cromossomos para polos opostos da clula; outra modificao ser dentro do ncleo com a condensao dos cromossomos e dissoluo do ncleo com a formao de uma placa equatorial de cromossomos.
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FENMENOS DE TRANSPORTE TRANSMEMBRANA

A permeabilidade seletiva da membrana plasmtica resulta em um tipo especial de difuso denominado OSMOSE, o qual envolve o movimento de molculas do solvente (nesse caso a gua) atravs da membrana plasmtica. As molculas de gua passam livremente em ambas as direes, m as, como em todos os tipos de difuso, o movimento se d a favor de um gradiente de concentrao, ou seja, de onde as molculas esto mais concentradas para onde elas esto menos concentradas. A grande maioria das molculas que constitui os solutos de uma soluo no pode, no entanto, sofrer difuso. No caso da gua, dizemos que ela passa do meio HIPOTNICO (menos concentrado em soluto e mais concentrado em solvente) para o HIPERTNICO (mais concentrado em soluto e menos concentrado em solvente). A membrana celular ou biolgica que envolve completamente as clulas corporais, constituda quase que exclusivamente de protenas e lipdios. Essa membrana formada por dupla camada lipdica, com grandes nmeros de molculas de protenas flutuando na bicamada, e s vezes, atravessando toda a espessura da membrana. Os mecanismos que as substncias utilizam para deslocarem pela membrana e a estratgia que a membrana utiliza para normalizar essas concentraes recebem dois nomes: TRANSPORTE PASSIVO e TRANSPORTE ATIVO. TRANSPORTE PASSIVO ou DIFUSO Todas as molculas e ons dos lquidos corporais esto em movimento constante, no qual cada molcula possui seu movimento particular. denominado de difuso esse movimento contnuo das molculas entre si, nos lquidos e nos gases. A grande caracterstica da Difuso o sentido da direo do movimento das molculas, o movimento sempre ser do meio mais concentrado para o meio menos concentrado, isto , a difuso sempre favor do seu gradiente de concentrao, ou eletroqumico ou de presso. Sendo, portanto, SEM GASTO DE ENERGIA. Existem quatro tipos diferentes de difuso: simples, por carreadores, por canal protico e osmose. A. Difuso Simples Algumas substncias tm a capacidade de difundirem-se pela poro lipdica da membrana celular sem a necessidade de qualquer meio de transporte. Essas substncias simplesmente atravessam a camada lipdica, so elas: Oxignio (O2 ), dixido de Carbono (CO2 ), cidos graxos (gordura) e lcool. Assim sendo, essas substncias apresentam uma caracterstica importante: alta solubilidade em lipdios.
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B. Difuso Facilitada ou por Carreadores A difuso facilitada se faz por meio de uma protena carreadora que transporta as substncias glicose e aminocido. O mecanismo funciona da seguinte maneira: o carreador est situado na membrana celular e apresenta em sua estrutura um ponto de fixao (binding site) que possui afinidade ou a glicose ou Aminocido. Sendo assim, a molcula a ser transportada une-se no ponto de fixao, ao faz-lo, altera a estrutura do carreador que a desloca para dentro clula. Aps, esse transporte, a molcula transporta se solta, a alterao estrutural do carreador se desfaz e reinicia o processo. Vale ressaltar que, no h gasto de energia e tanto a glicose quanto os aminocidos so transportados sempre do meio mais concentrado para o menos. Um detalhe importante que o carreador da glicose no possui afinidade aos aminocidos e vice-versa, portanto, cada molcula possui seu prprio meio de transporte. C. Difuso pelos Canais Proticos Alm de formar carreadores, as protenas que constituem a membrana celular podem formar canais denominados de canais proticos. Esses canais so um conjunto de molculas de protenas que possibilitam um canal (um tnel) pela membrana, permitindo o transporte de determinadas molculas. Os canais possuem uma caracterstica importante, a permeabilidade seletiva. As prprias formas, dimetro e natureza das cargas eltricas ao longo da superfcie dos canais possibilitam esse fenmeno. O canal do sdio possui dimetro ideal para o on e a superfcie interna deste canal revestida de cargas eltricas negativas. Essa carga negativa atrai o on e juntamente com o seu dimetro, possibilita a difuso do mesmo. D. Osmose Osmose a difuso da molcula de gua pela membrana celular. A gua, por ser o solvente universal difunde pela membrana sem necessitar de qualquer canal ou carreador, e em uma velocidade muito alta. Assim denomina-se movimento efetivo, a diferena entre a difuso para o meio interno em relao ao meio externo. E. Fatores que influenciam a cintica da Difuso Alguns fatores podem alterar a cintica da difuso, tornando-a mais lenta ou acelerando-a. Para entender melhor, observe a frmula que se segue. A diferena de concentrao (ou simplesmente ouso
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de [ ]), a diferena na quantidade de qualquer substncia entre dois meios (podendo ser meio intra ou extra celulares). rea de seco reta, o espao pelo qual ocorrer a difuso (seria o tamanho "porta" pelo qual ocorrer a difuso). A difuso ser maior em ambientes quentes, locais com temperaturas elevadas aceleram o movimento das molculas.A distncia corresponde o percurso que a molcula ir percorrer para difundir, isto , a distncia entre os dois meios. E o peso molecular refere-se ao prprio peso da molcula, molculas pesadas dificultam os seus transportes. Assim sendo, a diferena de [ ], rea de seco reta e temperatura so diretamente
proporcionais, isto , esses fatores aumentando, aceleram a difuso. A demais, distncia e peso molecular so inversamente proporcionais, e, portanto, a diminuem. TRANSPORTE ATIVO Estudando difuso podemos concluir que no possvel uma molcula difundir contra o seu gradiente. No entanto, ocorrem determinadas situaes nos quais uma determinada substncia difunde-se contra seu gradiente, por exemplo: uma substncia em [ ] reduzida no lquido extracelular e mesmo assim, h necessidade de [ ] elevada no meio intracelular. Ou ainda, substncia que difunde para o meio intracelular e h necessidade de sua remoo, mesmo que apresente reduzida [ ] no meio intracelular em relao ao extracelular.Esse transporte de substncia contra seu gradiente denomina-se de TRANSPORTE ATIVO. Podemos caracteriz-lo como um transporte que GASTA ENERGIA e utiliza CARREADORES. Como ocorre na difuso facilitada, as protenas carreadoras se estendem por toda a espessura da membrana e nesse caso, transporte a substncia contra o gradiente com o uso de energia. A. Bomba de Sdio e Potssio As concentraes de Na+ e K+ so diferentes entre os meios, e assim sendo, tendem a difundir atravs dos canais proticos para dentro e fora da clula, respectivamente. Caso ocorra, a homeostase da clula se perde. Para que no ocorra essa perda da homeostase, a clula utiliza um transporte ativo denominado de bomba de Na+ e K+ . A intensidade dessa bomba suficiente para retornar as concentraes aos valores ideais.Sendo um meio de transporte, a bomba de Na+ e K+ possui duas protenas carreadoras, a menor sem funo conhecida e a maior, apresenta trs stios especficos. A parte voltada para o meio interno da clula possui um stio com afinidade a trs ons Na+, a parte voltada para o meio exterior da clula possui um stio com afinidade a dois ons K+ , a parte prxima ao stio de afinidade ao Na+ apresenta atividade energtica (ATPase).
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+ Quando na poro interna da protena fixarem trs ons Na+ e na poro externa dois ons K , esse ons
so transportados para o meio externo e meio interno, respectivamente. Aps o transporte, utiliza-se energia da molcula do ATP para ativar a protena para no transporte. B. Bomba de Clcio O on clcio muito importante para o mecanismo de contrao muscular, tanto esqueltica quanto miocrdica. No corao a [Ca++] no meio intracelular insuficiente para promover a contrao do corao, e elevada no meio externo. Assim sendo, o Ca++ difunde-se para o meio interno. Porm, ainda assim, insuficiente. Dentro do citoplasma da clula, existe uma organela denominada de retculo sarcoplasmtico que rico em Ca++, que tambm, permitir a difuso desse on para o citoplasma. Com o Ca++ do meio extracelular mais o Ca++ do retculo, a [ ] desse on suficiente para promover a contrao do corao.Aps a contrao, o on Ca ++ dever retorna aos seus respectivos locais de origem, entrando em o transporte ativo do Ca++. A bomba de Ca++ apresenta caractersticas importantes: 1. a bomba de Ca++ encontrada em dois locais, nas membranas celulares e nas membranas do retculo sarcoplasmtico (mitocndrias); 2. sua funo s transportar Ca++ do meio intra para dentro do retculo (e mitocndrias) e para o meio extra. TRANSPORTES ATIVOS SECUNDRIOS So denominados de transportes ativos secundrios, trs mecanismos que no apresentam as mesmas caractersticas das bombas e das difuses anteriores. A. Co-transporte de Sdio com Glicose ou Aminocidos Nas clulas intestinais, a glicose e os aminocidos, so absorvidos do bolo alimentar por meio de uma protena carreadora que utiliza o transporte do sdio. A energia para esse transporte no vem do ATP, mas sim da diferena do gradiente de concentrao desse on entre os meios. A protena transportadora est localizada na membrana da parede do intestino e apresenta dois stios de fixao. Sendo um deles para o Na+ e o segundo para a glicose ou para os aminocidos.
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B. Contra-transporte ou antiporte Esse transporte muito comum nos rins, onde o organismo necessita excretar hidrognio (H+) para formar a urina e no alterar o pH. O mecanismo desse transporte funciona da seguinte maneira, o movimento de uma substncia em uma direo fornece energia para o movimento acoplado de uma segunda na direo oposta. O contra-transporte muito comum, quando excretado o H+ e absorvido o Na+. C. Transporte Dependente Ocorre tambm nos rins, sem alterar as cargas eltricas, realizado quando os rins absorvem o Na+ junto com o cloro (Cl-).
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Captulo 4
INFORMAO HEREDITRIA
Os cidos Nuclicos so as molculas com a funo de armazenamento e expresso da informao gentica.
o
Existem basicamente dois tipos de cidos nuclicos: 1. O cido Desoxirribonuclico - DNA 2. O cido Ribonuclico - RNA
Os cidos nuclicos so macromolculas formadas pela ligao tipo fosfodister entre 5 nucleotdeos diferentes, suas unidades fundamentais.
Os Nucleotdeos:
o
So as unidades fundamentais dos cidos nuclicos. Ligam-se uns aos outros atravs de ligaes fosfodister, formando cadeias muito longas com milhes de resduos de comprimento. Alm de participarem da estrutura dos cidos nuclicos, os nucleotdeos atuam tambm como
componentes na estrutura de coenzimas importantes no metabolismo oxidativo da clula, e como forma de energia qumica - ATP, por exemplo. Atuam ainda como ativadores e inibidores importantes em vrias vias do metabolismo intermedirio da clula. Os nucleotdeos so molculas formadas por: Uma pentose, Uma base nitrogenada e Um ou mais radicais fosfato. As Bases Nitrogenadas: Pertencem a duas famlias e compostos, e so cinco no total: 1. Bases Pricas, ou Purinas: Adenina e Guanina 2. Bases Pirimdicas, ou Pirimidinas: Citosina, Timina e Uracila
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Tanto o DNA como o RNA, possuem as mesmas bases pricas, e a citosina como base pirimdica. A timina existe apenas no DNA, e no RNA, substituda pela uracila - que possui um grupo metil a menos. Em alguns tipos de DNA virais e no RNA de transferncia podem aparecer bases incomuns As Pentoses:
A adio de uma pentose a uma base nitrogenada produz um nucleosdeo. Os nucleosdeos de A, C, G, T e U so denominados, respectivamente, Adenosina, Citosina, Guanosina, Timidina e Uridina. Se o acar em questo a RIBOSE, temos um ribonucleosdeo, caracterstico do RNA. Se o acar a desoxirribose - uma hidroxila a menos em C2 - temos um desoxirribonucleosdeo, caracterstico do DNA. A ligao com a base nitrogenada ocorre sempre atravs da hidroxila do carbono anomrico da pentose.
O Fosfato:
A adio de um ou mais radicais fosfato pentose, atravs de ligao tipo ster com a hidroxila do carbono 5 da mesma, d origem aos Nucleotdeos. Os grupos fosfato so responsveis pelas cargas negativas dos nucleotdeos e dos cidos nuclicos. A adio do segundo ou terceiro grupo fosfato ocorre em seqncia, dando origem aos nucleotdeos di e trifosfatados.
O DNA:
Est presente no ncleo das clulas eucariticas, nas mitocndrias e nos cloroplastos, e no citosol das clulas procariticas. Nas clulas germinativas e no ovo fertilizado, dirige todo o desenvolvimento do organismo, a partir da informao contida em sua estrutura. duplicado cada vez que a clula somtica se divide.
O RNA:
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Atua como uma espcie de "cpia de trabalho", criada a partir do molde de DNA e utilizada na expresso da informao gentica. A sntese de uma molcula de RNA a partir de um molde de DNA chama-se "TRANSCRIO". Nesta transcrio, modificaes podem ocorrer sobre a molcula de RNA transcrita, convertendo-a de uma cpia fiel em uma cpia funcional do DNA.
COMO AS PROTENAS SO FORMADAS? A biossntese protica resultado do processo de traduo da informao contida no material gentico da clula; as protenas so, portanto, a expresso da informao gentica. Esta informao flui do DNA para o RNA (linguagem de quatro "letras") e deste para uma cadeia polipeptdica (linguagem de 20 "letras"), no considerado "dogma central" da bioqumica. O processo de traduo requer um CDIGO GENTICO, atravs do qual a informao contida em uma seqncia de nucleotdeos de um cido nuclico expressa na forma de uma seqncia especfica de aminocidos de um peptdeo. Uma alterao na seqncia original de nucleotdeos leva a uma alterao na seqncia de aminocidos, potencialmente causando uma doena - s vezes letal ao organismo. Estas "palavras" de trs letras so denominadas CDONS, e so possveis 64 tipos diferentes de cdons. Os cdons so expressos na linguagem do RNA Mensageiro, sempre no sentido 5 - 3, e cada cdon pode ser traduzido em um aminocido especfico. Trs cdons sinalizam o trmino da seqncia polipeptdica, e so ditos de encerramento: UGA , AUG e UAA. O cdon AUG codifica a metionina e, em certas condies, a iniciao de uma cadeia polipeptdica, com a metionina como aminocido amino-terninal.
Componentes Necessrios para a Traduo

o
So vrios, entre eles: Os Aminocidos: Devem estar presentes todos os 20 aminocidos no momento da sntese, inclusive os essenciais;
O RNA de Transferncia: So as molculas "bilnges" do processo, e esto ligadas de forma especfica aos aminocidos nas suas extremidades 3. Possuem o "ANTICDON", ou a seqncia bases complementar e antiparalela ao cdon do RNAm. Cada aminocido pode ser transportado
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por mais de uma molcula de RNAt. So em nmero de cerca de 50 RNAt no ser humano, para 61 cdons diferentes;
A hiptese "wobble", ou de oscilao, tenta explicar como um RNAt pode reconhecer mais de um cdon; nesta hiptese, o pareamento da primeira base do anticdon (5) no necessariamente feita do modo tradicional. Assim, nesta posio, G pode parear com C ou U, e U com A ou G, por exemplo;
O RNA Mensageiro: Produzido a partir de um molde de DNA no ncleo da clula, vai ao citosol para ser traduzido em uma seqncia polipeptdica;
Ribossomos: So organelas formadas por uma complexa associao entre protenas e RNA ribossmico, localizadas no citosol na forma livre ou associadas ao retculo endoplasmtico, quando sintetizam protenas que sero "exportadas" da clula. So formados por duas subunidades, uma maior e outra menor, cujas caractersticas so expressas em termos de coeficientes de sedimentao, ou "S" (de Svedberg). O ribossomo eucaritico formado por uma subunidade 60S e outra 40S; o procaritico, por uma subunidade 50S e outra 30S.

Compem um ribossomo: RNAr 3 molculas no procaritico, 4 molculas no eucaritico Protenas ribossmicas Desempenham vrias funes na traduo Stios "A" e "P" So stios de ligao para as molculas de RNAt, e estendem-se por ambas as subunidades:
Os stios "A" e "P" cobrem juntos dois cdons vizinhos
Na traduo, o stio "A" - de aminoacil - ocupado pelo aminoacil-RNAt correspondente ao cdon posicionado, e especifica o prximo aminocido a ser adicionado cadeia peptdica em formao. O stio "P" - de peptidil - ocupado pelo peptidil-RNAt, ligado cadeia peptdica que est sendo sintetizada.
Fatores Proticos:
So fatores de iniciao, elongamento e liberao da cadeia polipeptdica que est sendo sintetizada.
Fontes de Energia
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A adio de cada aminocido cadeia polipeptdica que est sendo sintetizada utiliza 2 molculas de ATP e 2 de GTP como fonte de energia. Outras molculas de ATP e GTP so necessrias nos processos de iniciao e liberao da cadeia sintetizada
Etapas da Biossntese Protica: Ativao dos Aminocidos: Refere-se ligao dos aminocidos ao(s) seu(s) RNAt especfico(s). Esta ligao catalisada pelas AMINOACIL-RNAt-SINTETASES, enzimas que reconhecem os
aminocidos e seus RNAt especficos com grande especificidade. A reao ocorre em 2 etapas, e dependente de energia. Na primeira etapa, o aminocido liga-se ao AMP, obtido a partir da hidrlise do ATP e com liberao de Ppi. Na segunda etapa, o AMINOCIDO-AMP liga-se extremidade 3 do RNAt, liberando o AMP e energia.
Iniciao da Cadeia: Depende da presena da subunidade ribossomal 40S, do RNAm, do RNAt com o anticdon de iniciao AUG (metionina), e de uma srie de protenas denominadas "fatores de iniciao", ou eIF, em nmero de nove, no mnimo, nos eucariontes.
o
Em etapas:
O eIF-2 liga-se especificamente com uma molcula de GTP e com o Met-tRNAi A subunidade ribossomal 40S liga-se ao eIF-3, que a separa e a mantm separada da subunidade 60S, que por sua vez se liga ao eIF-6, com o mesmo propsito O complexo formado em (a) liga-se ao complexo 40S formado em (b), com a ajuda de vrios outros fatores de iniciao, e este novo complexo associa-se ao RNAm (complexo de pr-iniciao). A associao do complexo de pr-iniciao com o fator de iniciao eIF-5 e com a subunidade 60S do ribossomo d origem ao complexo de iniciao propriamente dito. O GTP hidrolisado e os outros fatores de iniciao so liberados. O complexo de iniciao , portanto, formado por um ribossomo 80S associado aos eIF-5 e eIF4, ao RNAm corretamente posicionado, e ao RNAt de iniciao tambm posicionado no stio "P", com o stio "A" vazio.
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Elongamento da Cadeia: Depende dos "fatores de elongamento" e do complexo de iniciao

o
Em etapas:
O Fator de Elongamento eEF-1 dirige a seleo do RNAt correto para o posicionamento no stio "A" do complexo de iniciao. Este posicionamento depende ainda da hidrlise de um GTP e ocorre com posterior liberao do eEF1. H a formao da ligao peptdica entre os dois aminocidos adjacentes. A enzima
peptidiltransferase, componente da subunidade ribossmica 60S, faz a transferncia da metionina inicial do stio "P" para o aminocido do stio "A", formando um dipeptidil-RNAt. O ribossomo movese - s custas do GTP - na direo 5-3 em uma distncia de 3 nucleotdeos, com a ajuda do eEF-2, ou "translocase", posicionando o peptdeo no stio "P" e liberando o stio "A" para o posicionamento de um novo aminocido. O RNAt livre liberado, e o processo se repete at a traduo completa do RNAt. Liberao da Cadeia Polipeptdica: O surgimento de um cdon de trmino - UAG, UGA ou UAMINOCIDO - determina a ligao de um "Fator de Liberao", ou eRF, associado ao GTP. Este fator de liberao determina o rompimento da ligao entre o ltimo aminocido e seu RNAt. A dissociao do eRF do ribossomo depende da hidrlise do GTP.
Modificaes Ps-Traducionais Vrias modificaes podem ser impostas cadeia polipeptdica aps a sua biossntese. As principais modificaes so: Reduo do Tamanho = Converso de protenas inativas e zimognios nas suas formas ativas, por remoo de seqncias de aminocidos catalisadas por endoproteases especficas. Alteraes Covalentes = Fosforilao, glicosilao, hidroxilao, etc. Algumas protenas so ainda endereadas a organelas especficas da clula ou mesmo ao meio extracelular.
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QUAL A CONSTITUIO DAS PROTENAS?
Caractersticas Gerais dos Aminocidos:

o o o
So as unidades fundamentais das PROTENAS. Todas as protenas so formadas a partir da ligao em seqncia de apenas 20 aminocidos. Existem, alm destes 20 aminocidos principais, alguns aminocidos especiais, que s
aparecem em alguns tipos de protenas.
Estrutura Qumica Geral
A presena de um carbono central alfa, quase sempre assimtrico; nas protenas encontramos apenas "L" aminocidos. Ligados a este carbono central, h um grupamento CARBOXILA, um grupamento AMINA e um tomo de hidrognio. O quarto ligante um radical chamado genericamente de "R", responsvel pela diferenciao entre os 20 AMINOCIDOS. a cadeia lateral dos aminocidos. o radical "R" quem define uma srie de caractersticas dos aminocidos, tais como polaridade e grau de ionizao em soluo aquosa. a polaridade do radical "R" que permite a classificao dos aminocidos em trs classes: Classificao dos Aminocidos
Aminocidos com Radical "R" Apolar: Possuem radical "R" geralmente formado exclusivamente por carbono e hidrognio - grupamentos alquila. So hidrofbicos e em nmero de 8:
Alanina, Valina, Leucina, Isoleucina, Prolina - Forma anel imina, Fenilalanina, Triptofano, Metionina - "R" contm enxofre. Aminocidos com Radical "R" Polar No-Carregado:
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So aminocidos com radicais "R" contendo hidroxilas, sulfidrilas e grupamentos amida; So hidroflicos e em nmero de 7: Glicina - o mais simples dos aminocidos, Serina - "R" com funo
alcolica, Treonina - "R" com funo alcolica, Cistena - possui um radical sulfidrila, Tirosina - "R" com grupamento fenol, Asparagina - "R" com funo amida, Glutamina - "R" com funo amida
Aminocidos com Radical "R" Polar Carregado: "R" Carregado Positivamente: So aminocidos diamino e monocarboxlicos, em nmero de trs: Lisina, Arginina, Histidina. "R" Carregado Negativamente: So aminocidos monoamino e dicarboxlicos, em nmero de 2: cido Asprtico, cido Glutmico.
Aminocidos em Soluo Aquosa: Propriedades Qumicas e Eltricas Os aminocidos so ANFTEROS, pois, em soluo aquosa, comportam-se como cido E como base, formando ONS DIPOLARES, a saber: O grupamento carboxila ioniza-se em soluo aquosa liberando prton, e adquirindo carga negativa; O grupamento amina ioniza-se em soluo aquosa aceitando prton e adquirindo carga positiva. Este comportamento depende do pH do meio aquoso em que o aminocido se encontra. Em meio cido, os aminocidos tendem a aceitar prtons, comportandose como base e adquirindo carga positiva - ionizam em seus radicais amina. Em meio bsico, os aminocidos tendem a doar prtons, comportando-se como cidos e adquirindo carga negativa ionizam-se em seus radicais carboxila. O valor de pH onde as cargas eltricas do aminocido se igualam e se anulam chama-se PONTO ISOELTRICO, ou pH ISOELTRICO.
CONSIDERAES SOBRE AS PROTENAS...

So as macromolculas mais importantes que possuem as estruturas mais complexas e desempenham inmeras funes. Pertencem classe dos PEPTDEOS, pois so formadas por aminocidos ligados entre si por LIGAES PEPTDICAS. Entre os peptdeos, formam a sub-classe dos
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POLIPEPTDEOS, pois so macromolculas, formadas por seqncias de 200 ou mais resduos de
aminocidos. As protenas exercem na clula uma grande variedade de funes, que podem ser divididas em dois grupos: Dinmicas Transporte, defesa, catlise de reaes, controle do metabolismo e contrao, por exemplo. Estruturais Protenas como o colgeno e elastina, por exemplo, que promovem a sustentao estrutural da clula e dos tecidos.
A Ligao Peptdica
Ocorre entre os grupamentos amina e carboxila ligados ao carbono alfa dos aminocidos, com a sada de uma molcula de gua. As ligaes peptdicas possuem propriedades especiais, tais como um carter de dupla ligao parcial, rgida e planar, e configurao quase sempre "TRANS". Apesar disso, o peptdeo tem grande mobilidade rotacional, pois as ligaes entre o carbono alfa dos resduos do aminocido e seus radicais carboxila e amina possuem giro livre sobre seus eixos: Ligao y (psi) Entre o carbono alfa e o carbono da carbonila Ligao f (phi) Entre o carbono alfa e o nitrognio do grupamento amina Quanto Composio: Protenas Simples Por hidrlise liberam apenas aminocidos. Protenas Conjugadas Por hidrlise liberam aminocidos mais um radical no peptdico, denominado GRUPO PROSTTICO. Ex: metaloprotenas, hemeprotenas, lipoprotenas,
glicoprotenas, etc. Quanto ao Nmero de Cadeias Polipeptdicas: Protenas Monomricas Formadas por apenas uma cadeia polipeptdica Protenas Oligomricas Formadas por mais de uma cadeia polipeptdica; so as protenas de estrutura e funo mais complexas
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Quanto Forma: Protenas Fibrosas De estrutura espacial mais simples Protenas Globulares De estrutura espacial mais complexa
Protenas Homlogas: So protenas que desempenham a mesma funo em tecidos ou em espcies diferentes. Estas protenas possuem pequenas diferenas estruturais, reconhecveis imunologicamente. Os segmentos com seqncias diferentes de aminocidos em protenas homlogas so chamados "SEGMENTOS VARIVEIS", e geralmente no participam diretamente da atividade da protena. Os segmentos idnticos das protenas homlogas so chamados "SEGMENTOS FIXOS", e so fundamentais para o funcionamento bioqumico da protena. As protenas possuem complexas estruturas espaciais, que podem ser organizadas em quatro nveis, crescentes em complexidade: Estrutura Primria: Dada pela SEQNCIA DE AMINICIDOS E LIGAES PEPTDICAS da molcula (esqueleto covalente da molcula, dele deriva todo o arranjo espacial da molcula). Pode variar em trs aspectos, definidos pela informao gentica da clula: nmero de aminocidos; seqncia de aminocidos e natureza dos aminocidos. A estrutura primria da protena resulta em uma longa cadeia de AMINOCIDO semelhante a um "colar de contas", com uma extremidade AMINO TERMINAL" e uma extremidade "CARBOXI TERMINAL". A estrutura primria de uma protena destruda por HIDRLISE qumica ou enzimtica das ligaes peptdicas, com liberao de peptdeos menores e aminocidos livres. Estrutura Secundria: dada pelo arranjo espacial de aminocidos prximos entre si na seqncia primria da protena. o ltimo nvel de organizao das protenas fibrosas, mais simples estruturalmente. Ocorre graas possibilidade de rotao das ligaes entre os carbonos a dos aminocidos e seus grupamentos amina e carboxila. O arranjo secundrio de um polipeptdeo pode ocorrer de forma regular; isso acontece quando os ngulos das ligaes entre carbonos a e seus ligantes so iguais e se repetem ao longo de um segmento da molcula. So dois os tipos principais de arranjo secundrio regular: alfa-Hlice: a forma mais comum de estrutura secundria regular. Caracteriza-se por uma hlice em espiral formada por 3,6 resduos de aminocidos por volta. As cadeias laterais dos aminocidos se
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distribuem para fora da hlice. A principal fora de estabilizao da alfa-Hlice a ponte de hidrognio. Folha-beta : Ou folha pregueada, ou ainda estrutura beta. Ao contrrio da alfa-hlice, a folha-beta envolve dois ou mais segmentos polipeptdicos da mesma molcula ou de molculas diferentes, arranjados em paralelo ou no sentido anti-paralelo. Os segmentos em folha-beta da protena adquirem um aspecto de uma folha de papel dobrada em pregas. As pontes de hidrognio mais uma vez so a fora de estabilizao principal desta estrutura.
Estrutura Secundria No Repetitiva: Em mdia cerca de 50% da estrutura de uma protena globular est em a - hlice ou em folhabeta. O restante da molcula assume uma estrutura secundria no repetitiva, menos regular que as acima citadas. Estruturas Supersecundrias: Estruturas que resultam da combinao de segmentos com arranjo secundrio em "MOTIVOS", longos padres que se repetem ao longo de uma protena. Estrutura Terciria: Dada pelo arranjo espacial de aminocidos distantes entre si na seqncia polipeptdica. a forma tridimensional como a protena se "enrola". Ocorre nas protenas globulares, mais complexas. A estrutura terciria de uma protena determinada e estabilizada por fatores primrios como: Resduos de prolina Interrompem estruturas secundrias regulares, causando dobras na molcula. Impedimento estrico cadeias laterais muito grandes que precisam se "acomodar" no espao. Pontes dissulfeto Ligaes covalentes entre radicais sulfidrila de resduos de cistena, formando um resduo de CISTINA.
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Pontes de hidrognio Interaes hidrofbicas Tendncia dos aminocidos com radical "R" apolar de se acomodar no interior de uma estrutura dobrada, "fugindo" do contato com a gua. Interaes Inicas Foras de atrao entre aminocidos com radicais "R" carregados com cargas opostas. Cadeias polipeptdicas muito longas podem se organizar em DOMNIOS, regies com estruturas tercirias semi-independentes ligadas entre si por segmentos lineares da cadeia polipeptdica. Os domnios so considerados as unidades funcionais e de estrutura tridimensional de uma protena.
Estrutura Quaternria: Surge apenas nas protenas oligomricas. Dada pela distribuio espacial de mais de uma cadeia polipeptdica no espao, as subunidades da molcula. Estas subunidades mantm-se unidas por foras covalentes, como pontes dissulfeto, e ligaes no covalentes, como pontes de hidrognio, interaes hidrofbicas, etc. As subunidades podem atuar de forma independente ou cooperativamente no desempenho da funo bioqumica da protena. Processo de Enovelamento das Protenas: Como dirigido o processo de novelamento da cadeia polipeptdica? Por muito tempo aceitou-se a explicao de que a estrutura tridimensional das molculas proticas dependia exclusivamente das suas estruturas primrias. O enovelamento das protenas um processo que depende da participao de outras protenas muito especializadas: Cis-Trans-Prolil Isomerases Enzimas que catalisam a converso entre ligaes cis e trans de resduos de prolina, buscando uma configurao adequada destas ligaes. Protena-Dissulfeto Isomerases Facilitam o arranjo ideal das ligaes dissulfeto, estabilizando-as. Chaperonas protenas que participam do processo de enovelamento das cadeias polipeptdicas logo aps a sua biossntese no ribossomo. O resultado da atuao destas protenas e das foras de estabilizao de estrutura tercirio garante a formao de estruturas espaciais estveis mais dinmico.
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Captulo 5
ALIMENTOS
A evoluo das espcies se apia em novas maneiras de se obter energia das mais variadas fontes para assim melhor aproveitar as matrias-primas que a natureza oferece aos seres vivos. Seres mais eficazes na forma de obter energia tm-se mostrado mais adaptados e seus descendentes impem-se na pirmide evolutiva. Um grupo numeroso de seres vivos especializou-se em obter energia a partir da luz e mais uma srie de compostos qumicos que extrai da terra e do ar: so os auttrofos (fotossintetizantes, como os as plantas e o plancton), capazes de sintetizar suas prprias fontes energticas. Acontece que esses compostos so sintetizados em tamanha quantidade que dificilmente utilizado totalmente pelo auttrofo, sendo necessrio armazen-lo em grandes quantidades (p. ex. o amido e os leos das sementes) ou excret-lo, como o caso do oxignio. Aproveitando-se desse "excesso" de alimentos, um outro grupo de seres vivos, os hetertrofos, especializou-se em obter a energia necessria para suas reaes orgnicas alimentando-se dos seres auttrofos ou de seus dejetos (os decompositores). Existem, tambm, algumas molculas
indispensveis para o funcionamento das clulas vivas que s so sintetizadas pelos auttrofos, como alguns aminocidos e as vitaminas. Os auttrofos, por sua vez, tambm necessitam de matria prima derivada dos hetertrofos como o gs carbnico e os produtos da decomposio de seus tecidos. De qualquer forma, esta relao, que nasce da tentativa desesperada das espcies em se autopreservarem, forma um elo indissolvel entre os produtores (auttrofos), consumidores
(hetertrofos) e os decompositores, construindo uma complexa teia alimentar que faz com que a Terra funcione como um gigantesco ser vivo e prossiga, lentamente, seus passos evolutivos. A relao entre os consumidores (um herbvoro), os decompositores (bactrias e fungos) e os produtores (plantas). O ato de obter substratos para as reaes orgnicas bsicas que ocorrem no interior das clulas dos seres vivos, em suma, constitui a alimentao. Apesar de as relaes bioenergticas entre as biomolculas serem fundamentais para a biologia celular, biomolculas que no produzem energia de forma direta possuem funes chaves neste processo. Basicamente, os nutrientes de origem alimentar
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so fornecidos pelos carboidratos (acares), lipdios (gorduras) e protenas que possuem funo primordial a produo de energia a nvel celular. Outros nutrientes fundamentais vida so as vitaminas, os minerais e as fibras. A gua corresponde ao elemento qumico em maior quantidade nos seres vivos (cerca de 70% do peso total) e o solvente dos demais compostos qumicos celulares. , portanto, indispensvel na alimentao. CLASSIFICAO DOS ALIMENTOS: pode-se classificar os alimentos de vrias formas, de acordo com o ponto de vista (composio, consistncia, modo de preparo etc.). Do ponto de vista bioqumico, a melhor classificao diz respeito s suas propriedades biolgicas: Energticos: fornecem substratos para a manuteno da temperatura corprea a nvel celular, liberando energia para as reaes bioqumicas. So os carboidratos, lipdios e protenas. Os carboidratos so os alimentos energticos por excelncia (4,1 kcal/g), pois so diretamente sintetizados na fotossntese dos auttrofos e todos os seres vivos possuem as enzimas necessrias para sua degradao. Os lipdios e as protenas, apesar de possurem poder energtico igual ou superior mesmo aos carboidratos, tm funes outras no organismo e so absorvidos aps a absoro dos carboidratos, sendo utilizados, secundariamente, como produtores de energia, apesar do alto poder calrico (9,3 kcal/g dos lipdios e 4,1 kcal das protenas). Os lipdios so os principais elementos de reserva energtica uma vez que so primariamente armazenados nos adipcitos antes da metabolizao heptica. Estruturais: atuam no crescimento, desenvolvimento e reparao de tecidos lesados, mantendo a forma ou protegendo o corpo. So as protenas, minerais, lipdios e gua. Reguladores: aceleram os processos orgnicos, sendo indispensveis ao ser humano: so as vitaminas, aminocidos e lipdios essenciais, minerais e fibras. NECESSIDADE DOS ALIMENTOS: em condies normais, diariamente a energia absorvida deve ser igual energia gasta pelo indivduo, com a alimentao devendo conter uma quantidade tal de alimentos das trs classes (energticos, estruturais e reguladores) que possibilitem as atividades metablicas bsicas do organismo sem carncias ou excessos calricos. O gasto de energia varia de acordo com o ambiente, com tipo de alimentao e a taxa basal metablica (quantidade de energia necessria para a manuteno das funes fisiolgicas bsicas) que proporcional ao peso corpreo, rea corporal e ao sexo (nos homens e nos jovens maior que nas mulheres e idosos em virtude de suas atividades metablicas serem diferentes). Pode-se medir a taxa
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basal metablica de um indivduo colocando-o em uma cmara isolada para medir perdas de calor e produtos excretados em relao alimentao e o consumo de oxignio. Normalmente, um litro de oxignio consumido equivale a, aproximadamente, 4,83 kcal de energia gasta. Naturalmente no possvel realizar este teste para cada um de ns, porm conhecendo-se a necessidade mdia por grupo etrio, sexo e atividade fsica, pode-se sugerir as necessidades calricas mnimas. Deve-se levar em considerao o efeito termognico dos alimentos, onde uma taxa de cerca de 5 a 10% da energia total que pode ser fornecida pelo alimento, gasta para ser digerida. Esta taxa varia de acordo com o alimento, dependendo de sua digestibilidade. Absoro de energia recomendada para homens e mulheres. Categoria Idade (anos) Peso (Kg) Energia Necessria (kcal) Homens Mulheres Grvidas Lactentes 23 - 50 23 - 50 70 55 2.300 - 3.100 1.600 - 2.400 + 300 + 500
HORMNIOS
Para
acompanhar
importncia
do
estudo
sobre
hormnios,
bastaria
acompanharmos
desenvolvimento de um recm-nascido, o desenvolvimento e a complexao do sistema nervoso nele e do sistema endcrino. A observao simplria que podemos fazer, acompanhando essa evoluo que o desenvolvimento desses dois sistemas se d paralelamente e de forma integrada. O sistema endcrino fundamental para a manuteno da homeostasia, do nosso equilbrio em funo das variaes externas e internas. Os hormnios so fundamentais para isso. E por que o seu desenvolvimento deve se d paralelamente ao sistema nervoso? Porque so os receptores do SNC que detectam essas variaes do meio ambiente ou do meio interno e enviam as mensagens, os sinais para o endcrino que vai sintetizar as substncias que vo modificar a atividade de determinados rgos, tecidos, clulas... Ao modifica-la, haver manuteno do equilbrio.
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Como que o Sistema Nervoso pode detectar variaes fazendo com que o Sistema Endcrino se responsabilize pelas reaes metablicas que vo se contrapor as essas variaes? Para isso, sero dados dois exemplos. A variao de temperatura do meio externo a 14o C e nossa temperatura corporal em torno de 37o C, no h variao da nossa temperatura, porque ela foi detectada por recepontoores do nosso SNC que enviaram mensagem ao SE, depois de estimular o hipotlamo - centro controlador da temperatura que sinaliza paraminocidodeno-hipfise que preciso liberar hormnio estimulante da tireide, com o objetivo de modificar a atividade dessa para se contrapor quela variao. Esses
hormnios vo estimular a tireide a produzir hormnios tireoidianos que em altas concentraes so desacopladores da fosforilao oxidativa. Diminuindo a quantidade de formao de ATP, para A variao da glicemia outro
aumentar a quantidade de energia livre para trocar com o ambiente.
exemplo clssico. Mas como pode o SN estar envolvido com essa variao se a insulina que no um hormnio hipofisrio?
Na medida que se libera hormnios tiroidianos na circulao, esses reprimem a sntese da fosfodiesterase. Qual a significado metablico disso? Preserva-se AMPc (AMP cclico), ou seja, a resposta fisiolgica a hiperglicemia, fundamental para liberao de insulina. (depende do SE diretamente e do SN indiretamente). Ento, o SE fundamental para o equilbrio fisiolgico e metablico em funo das variaes do meio interno e externo. Um ltimo exemplo, se algum chega e te d uma notcia ruim, voc libera o hormnio de emergncia que a adrenalina, sofre-se um estresse agudo e imediatamente voc contrai toda a musculatura. Para ficar tenso, necessria energia extra para tentar se adaptar psicologicamente, mas o SE no tem a capacidade de interferir no psicolgico, diretamente uma adaptao orgnica, s que claro que uma inadapontoao orgnica pode levar a uma psicolgica. E quando se tem esse estresse, ocorre o que chamamos de frio na barriga, a descarga de adrenalina.O significado metablico disso degradar glicognio,
principalmente nas clulas da musculatura esqueltica e inundar a clula muscular de Glicose-6-fosfato para a contrao muscular extra.
Esquema: O SN com as variaes do meio ambiente. Essas so detectadas por recepontoores do SNC que sinalizam atravs de impulsos nervosos estimulam o hipotlamo, que quando estimulado, sintetiza e libera os neuro-hormnios, mas a maioria dos livros chama de fatores de liberao, que estimulam a adeno-hipfise (mais precisamente as suas clulas secretoras) a sintetizar os seus hormnios que atuam em rgos especficos e hormnios de ao inespecfica. O fator de liberao correspondente ao TSH
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o TRH que estimula adeno-hipfise a sintetizar e liberar TSH na circulao que tem dois nveis de atuao: em rgo alvo (glndula tireide) a produzir T3 e T4 e pode ter uma ao inespecfica, como a ao lipoltica, em clulas adiposas. Os glicocorticides tm sua sntese e liberao estimulada pela ao do ACTH, hormnio adreno corticotrfico que tem como neuro-hormnio correspondente o CRH que quando liberado estimula a produo de glicorticides pelo crtex das supra-renais, mas esse ACTH tambm tem ao inespecfica, ou seja, ao lipoltica, as clulas adiposas tambm tm recepontoores para ACTH. E que tipo de estmulo ocorre para a liberao de CRH e ACTH na adenohipfise? Os nveis de glicocorticides na circulao. o controle por feedback. O mesmo ocorre com TRH e TSH.
Somente a partir do incio do sculo com o estudo de dois pesquisadores Bayliss e Starling pode se definir com exatido hormnios que at ento, desde o sculo XVI, eram confundidos com vitaminas que no fazem parte de nenhum componente estrutural, mas eles tambm no o so. Eles tm uma
vida mdia curta e para desempenhar as suas funes fisiolgicas so exigidos em pequenas concentraes assim como as vitaminas. Ento, confundia-se hormnio com substncia nutritiva. S
em 1904 com o trabalho desses pesquisadores que se chegou a uma definio do conceito atravs de uma experincia: eles fizeram um extrato da mucosa duodenal, diluram em HCl e injetaram
(endovenosa) em rato e o que eles perceberam? Que havia estmulo da liberao de suco pancretico. Esse extrato deveria conter uma substncia que excitava acordava) o pncreas para liberar o suco e essa subst. era a secretina, primeiro hormnio descoberto. O conceito : so substncias de ao sistmica produzidas em clulas especializadas que, quando liberadas, na circulao tem ao endcrina, modificam a atividade metablica das clulas que contm receptores (contribuindo para o desenvolvimento do organismo). Observao: As prostaglandinas so colocadas como hormnios por alguns autores, entretanto, no tem ao sistmica, no tem ao endgena e no so liberadas na circulao. Por isso, duvidosa a afirmao. De que maneira atuam os hormnios? Os hormnios que no entram nas clulas, necessitam de segundos mensageiros para fazer o seu papel dentro delas, ou seja, com exceo dos hormnios tiroidianos e esterides, os outros precisam de segundos mensageiros. Os tiroidianos entram diretamente nas clulas e se ligam a receptores proticos da cromatina nuclear com o objetivo de induzir e inibir a sntese de protena. Por exemplo, a sntese do hormnio do crescimento s feita na presena deles. Enquanto que os esterides se ligam a recepontoores especficos citoplsmaticos que se dirigem ao ncleo para induzir ou reprimir a sntese de protena. Os glicocorticides vo induzir a sntese de enzimas da gliconeognese: piruvato
carboxilase, glicose-6-fosfatase.
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A adrenalina (derivada de aminocido) micromolcula e no entra na clula, enquanto que o glucagon um peptdeo, quase uma macromolcula e tambm no entra na clula. Ambos utilizam o AMPc como segundo mensageiro. Formao dele: a protena G, subunidade estimulatria ligada ao GTP que estimula a adenilil ciclase. No indefinida a produo porque a prpria subunidade tem
atividade GTPsica, que ao mesmo tempo que estimula a adenilil ciclase, est hidrolisando o GTP em GDP e torna a subunidade G inativa que vai se ligar as outras subunidades e , formando a protena Ginativa ligada ao GDP. Como a toxina do vibrio colrico provoca grande perda de gua em poucas horas? A toxina inibe a atividade GTPsica, atravs da ADPribosilao, modificao covalente na protena Gs , que faz com que o AMPc fique elevado indefinidamente e por que perde-se lquido, porque o AMPc elevado provoca um estmulo permanente de transporte ativo, principalmente de sdio nas clulas intestinais. Perda de sdio e gua e se no for corrigido em pouco tempo pode levar a morte. O inositol 3P e DAG so obtidos a partir de fosfatidil inositol bifosfato (PIP2 ) O cido fosfatdico que o glicerol esterificado (geralmente a esterificao de extremidade feita por cido esterico, a hidroxila esterificada pelo cido araquidnico geralmente e a terceira hidroxila fosforilada. Qual a importncia fisiolgica desse fato? A partir do PIP2, obtm-se o IP3 e DAG, que tem vida mdia curtssima, de poucos segundos. O DAG quando metabolizado libera glicerol, cido esterico e araquidnico, ou seja, d origem s prostaglandinas que so obtidas a partir do araquidonato.
Metabolizar liberar para reaproveitar os produtos. Como se obtm a partir desse cido fosfatdico o PIP2? Primeiro combina o cido com inositol (lcool cclico - 6 C, 6 OH), formando fosfatidil inositol (PI), depois s fosforilar e formar o fosfatidil inositol 4, 5 fosfato.
Qual o mecanismo fisiolgico que leva a formao dos segundos mensageiros IP3 e DAG? O hormnio se liga a recepontoores de membrana que estimulam a enzima fosfolipase C que catalisa a transformao de DAG em fosfatidil 1,4,5 trifosfato. Qual a impotncia fisiolgica do IP3? Aumentar a [Ca+2 ] citoplasmtico para isso precisa mobiliz-lo de suas reservas (REL10 e mitocndria so as principais), inclusive aumentando a permeabilidade de clcio (sinalizador celular-contrao muscular, exocitose de hormnios e coagulao sangunea) na membrana. Mas no citoplasma das clulas no
tem fosfato? Pi + ADP no igual a ATP? Se aumentar [clcio] citoplasmtica, e tem-se fosfato disponvel, forma-se fosfato de clcio que insolvel.
10
Qual a soluo para evitar a formao desses
Retculo Endoplasmtico Liso
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sais insolveis? A calmodulina acepontoora de clcio para impedir isso. Ento se forma a Ca+2 calmodulina, que estimula a glicogenlise. Como o IP3 pode estimular a glicogenlise? O clcio se liga a calmodulina, e esse composto formado uma das subunidades da fosforilase quinase, atua fosforilando a glicognio fosforilase (fica ativa). Como a Ca+2 uma subunidade da fosforilase
quinase, com o aumento de clcio para a contrao muscular, a fosforilase quinase fica parcialmente ativa porque a Ca+2 calmodulina que uma das suas subunidades aceita Ca+2, ficando ativa parcialmente. Qual o papel metablico do DAG (triglicerdeo)? Papel sinrgico ao do IP3, ou seja, potencializador do IP3. Aumentar a afinidade do Ca+2 pela protena quinase C. E por que sinrgico? O IP3 no estimula a glicogenlise?
Pois bem, a PKC fosforila a glicognio sintetase, reforando atravs da inibio da sntese de glicognio. O IP3 e DAG tem vidas mdias curtas, mas como se metaboliza IP3? Pela ao sucessiva de fosfatases, obtendo inositol. O ltio inibe a reciclagem do inositol, ele defosforilado uma vez, duas vezes, a terceira fosfatase inibida pelo ltio e deixa-se de obter inositol e impede-se ou pelo menos diminui, a formao de IP3 por algum tempo. No formando IP3, diminuio da atividade neuronal. Por que? Dessensibiliza as clulas do SN responsveis pela formao de IP3, diminuindo a circulao de neurotransmissores.
A tirosina quinase uma protena de membrana. Quando a insulina ou qualquer fator de crescimento se liga a esse receptor proteico inativo, passa a ter a capacidade cataltica de se auto-fosforilar. Mas qual a importncia da fosforilao dos resduos de tirosina no lado citoslico? Catalisa a fosforilao de algumas protenas alfa, como por exemplo, a protena fosfatase- estimulada pela insulina, ficando fosfoprotena fosfatase que precisa estar fosforilada para estar ativa, ou seja a insulina se liga a tirosina quinase que se autofosforila e fica capaz de fosforilar protena alfa do tipo fosfoprotena fosfatase 1. Propriedades Fisiolgicas de hormnios
So fundamentais para desencadear as reaes metablicas e fisiolgicas de determinados rgos. Vida mdia curtssima, ou entram na clula diretamente ou atravs de segundos mensageiros desempenham o seu papel. Esses hormnios para fazer suas funes so necessrios em pequenssimas concentraes. Por exemplo, os tiroidianos existem a 5x10-8 M.
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Funes
1) Funo permissiva: para que as catecolaminas exeram as funes fisiolgicas, fundamental a
presena dos tiroidianos que potencializam a ao daquelas. Hoje se sabe como essa funo do T3 e T4. Reprimindo a sntese de fosfodiesterase, aumenta a [AMPc] , ento no potencializa a ao apenas da adrenalina que o usa com segundo mensageiro, potencializa a ao de todos os hormnios que utilizam o AMPc como tal, desde que celulas que utilizam o AMPc como segundo mensageiro, respondam aos hormnios tiroidianos. Reprime a sntese de fosfodiesterase induo da sntese de hormnio do crescimento (GH).
2) Homeosttica (talvez a principal): a ao de um ou vrios hormnios correspondem ao
rigorosamente antagnica de um ou mais hormnios em qualquer situao. Ex. paratormnio antagnico a tireocalcitonina que hipocalcmico. A insulina tem que ter uma fora muito grande para agir contra vrios hormnios hiperglicimiante.
3) Morfogentica: envolve crescimento e diferenciao celular. O GH em diversos estgios de
desenvolvimento. Ex. O barbeiro tem cinco estgios antes de chegar fase adulta e o hormnio para isso o juvenil, que diminui da hemolinfa na medida que se aproxima da fase adulta. Entretanto, no nosso organismo o GH fundamental juntamente com os tiroidianos, ele no desaparece na fase adulta e desempenha diversas funes nesse caso.
4) Integradora: Relao estreita entre Sistema Nervoso (SN) e Sistema Endcrino (SE).
Classificao
Os proteicos e esterides (glicocorticoides e mineralocorticoides produzidos pelo crtex das suprarenais e os sexuais). Ainda tem os derivados de aminocido, como de tirosina que so as catecolaminas e os tiroidianos; e os icosanides que so as prostaglandinas derivadas do araquidonato.
Neuro-hipfise
1) Vasopressina ou anti-diurtico ou ADH: a presso osmtica deve ter um controle extremamente
refinado (controla a vida). Deve haver hormnio ADH para inibir a liberao de gua pela urina
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contendo a variao da presso osmtica. Ao mesmo tempo em que se libera o ADH, estimula-se o centro da sede, a necessidade de ingesto de gua para diluir o sal que foi ingerido em excesso, controlando a presso osmtica.
2) Os dois hormnios hipofisrios: ADH e oxitocina (so oligopepontodeos de aminocido, variando
a estrutura apenas em dois aminocido) no so produzidos na neuro-hipfise, sintetizados no hipotlamo, mais especificamente nos ncleos supra-ticos e para-ventriculares, alm de
sintetizares as protena que se ligam no-covalentemente a esses hormnios (neurofisina 1 e 2 - PM 10000 Da ), que os transportaram atravs do axnio para que eles sob a forma de vesculas fiquem acumulados na neuro-hipfise. Liberados na presena do segundo mensageiro: IP3.
3) O segundo efeito do ADH elevar a presso arterial, vasopressora. Estimula a contrao da
musculatura lisa dos vasos sanguneos, exigindo como 2o mensageiro o IP3. A partir da dcada de 90, vrios trabalhos mostram que no necessidade de concentraes muita elevadas para o efeito vasopressor como era dito at a dcada passada. O outro efeito em nvel de ductos renais, usando AMPc como segundos mensageiros que ativam enzimas que catalisam reaes de fosforilao e essa fosforilao de protena de membrana vai aumentar a permeabilidade da gua, ou seja, s h reabsoro dela quando certas protena de membrana esto fosforiladas.
Qual o estmulo para a liberao desse hormnio? A variao da presso osmtica pela ingesto de sal a mais, por exemplo. Essa hipertonicidade do meio provocou o estimulo, atravs dos
osmorrecepontoores que ficam prximos dos ncleos hipotalmicos, formando o ADH quando os osmorrecepontoores (so receptores do SNC) so ativados. A nusea estimula o centro do vmito que fica no hipotlamo, nas proximidades dos ncleos hipotalmicos fazendo com que haja a liberao do ADH. A nusea uma possvel preliminar para perda de lquido atravs do vmito. A nusea, nicotina e morfina que atuam no centro do vmito estimulam a liberao de ADH. A hemorragia e desidratao tambm estimulam enquanto que o lcool inibe a liberao do ADH. O estresse agudo (situao de emergncia) inibe a liberao de ADH, mas crnico estmulo a liberao. (por exemplo, exerccio fsico prolongado).
A oxitocina, semelhana do ADH, o hormnio que provoca a ejeo do leite e tem dois nveis de atuao: contrao das clulas mioepiteliais das glndulas mamrias. A prolactina produz o leite. Como explicar que a ejeo do leite sem o estmulo mecnico? o estimulo d SNC. O segundo efeito o fisiolgico a contrao da musculatura lisa uterina. So controles independentes. O que estimula e o
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que inibe a ao da oxitocina no tero? Estimula so os estrognios atravs da induo de sntese de protena recepontooras de oxitocina. No pr-parto, o nvel de progesterona cai porque ela inibe a
sntese desses recepontoores proteicos, portanto inibe a ao da oxitocina e cresce o nmero de estrognio para aumentar os recepontoores paraoxitocina, preparando a me para o futuro trabalho de parto, aumento da contrao da musculatura lisa do tero. GH, Insulina, Glucagon e Adrenalina
O hormnio do crescimento ou GH, um hormnio adeno-hipofisrio que tem como fator de liberao correspondente ou neurohormnio correspondente GRH. Este hormnio GH uma protena com peso molecular 21.500 aproximadamente e apresenta na sua estrutura 188 aminocidos. As aes metablicas do GH so de relativa complexidade. Assim, adotaremos o seguinte mtodo estudaremos separadamente o efeito desse hormnio sobre o metabolismo dos lipdios, glicdios e aminocidos e na medida do possvel integrar estes eventos.
Vamos comear pelos efeitos do hormnio do crescimento sobre o metabolismo dos lipdios. Na medida em que o hormnio de crescimento liberado na circulao vai ocorrendo quase que simultaneamente uma inibio da captao de glicose pelos tecidos perifricos como musculatura esqueltica e tecido adiposo, pois, estes so os grandes sugadores de glicose circulante. A conseqncia desta inibio a hiperglicemia, ento este hormnio considerado hiperglicemiante. No s o GH que inibe a capontoao de glicose pelos tecidos perifricos, a adrenalina e o glucagon tambm. Deve haver uma razo metablica e fisiolgica para que isso acontea e essa razo a necessidade de disponibilizar glicose para as clulas nervosas que utiliza 90% de glicose como combustvel e isso ocorre principalmente nos intervalos entre as refeies. Assim atendemos a necessidade de glicose do tecido nervoso. Mas uma questo metablica se coloca: voc inibir a capontoao de glicose pelos tecidos perifricos para ajudar o tecido nervoso e como que o tecido perifrico usar energia durante esse perodo? Eles no tero glicose disponvel e que combustvel ser utilizado neste perodo? cidos Graxos. O GH ter que mobilizar cido graxo para atender a demanda energtica de nosso organismo. A hiperglicemia no conseqncia apenas deste efeito conseqncia tambm do fato do GH estimular gliconeognese. A gliconeognese precisa que suas enzimas principais sejam ativadas o que deve ser realizado pelo GH. A ao de um hormnio corresponde a uma ao antagnica de outro hormnio. No cado da regulao da glicemia a ao de vrios hormnios hiperglicemiantes corresponde a ao de apenas um hipoglicemiante (a insulina).
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O que a insulina? um hormnio protico com 51 aminocidos em sua estrutura, duas cadeias polipepontoidcas uma com 30 aminocidos e outra com 21 aminocidos ligados entre si por duas pontes dissulfeto. Peso molecular de 5700. um hormnio que liberado quando os recepontoores proticos da membrana das clulas beta das ilhotas de Langerhans so ocupados pela glicose. Temos ento liberao de IP3 no meio que ir provocar exocitose das vesculas com insulina. A exocitose dependente do aumento intracelular de clcio. A insulina um hormnio hipoglicemiante seus efeitos sobre o metabolismo dos glicidios j forma citados anteriormente. Todo o metabolismo dos glicdios controlado pela insulina e seus antagnicos (glucagon, por exemplo). A insulina aumenta a absoro de glicose pela maioria dos tecidos, nem todos o tecido nervoso no depende de insulina, caso dependesse o diabtico ou a doena diabetes melitus seria de uma gravidade quase letal, pois assim teria grandes problemas param manter o sistema nervoso funcionando.
As clulas do fgado tambm no dependem tanto da insulina, mas as clulas da musculatura esqueltica e o tecido adiposo dependem muito de insulina por serem consideradas as principais clulas sugadoras de glicose. A insulina aumenta a disponibilidade metablica de glicose no meio intracelular, ao aumentar essa disponibilidade a glicose se dirige s vrias vias metablicas do tecido dependendo das circunstncias metablicas de cada tecido, circunstncias essas j discutidas. Ento ela hipoglicemiante porque, primeiramente, aumenta a disponibilidade de glicose no meio intracelular, atendida a essa preliminar, a glicose estimulada pela insulina se dirige as suas vrias vias metablicas de armazenamento ou de oxidao. Se ela hipoglicemiante e rigorosamente antagnica do GH a insulina inibiria a gliconeognese. Para comprovar que a insulina inibe a gliconeognese podemos seguir dois raciocnios, primeiro: se a insulina aumenta a disponibilidade de glicose no meio intracelular no necessitamos mais fazer glicose pela gliconeognese (formao de glicose a partir de substncias no glicidicas) j que a demanda j foi atendida; o segundo raciocnio o seguinte: a insulina reprime a sntese da piruvato carboxilase, da fosfoenolpiruvato carboxiquinase, da frutose-1,6bisfosfatase e da glicose-6-fosfatase, as trs primeiras enzimas so essenciais para a gliconeognese. Com a inibio da glicose-6-fosfatase, aprisionamos a glicose no meio intracelular.
Veremos agora a ao do GH no metabolismo dos lipdios. Os tecidos extrahepticos ou perifricos utilizaro cidos graxos como substrato energtico quando o GH ou outro hormnio hiperglicemiante for liberado. Assim as clulas adiposas devem conter recepontoores para GH. Essas clulas contem gordura na forma de tri-acil-glicerol, cuja hidrlise depende das lipases triglicerdicas hormnio sensveis (LTHS) que so ativas na forma fosforilada, ou seja, dependem do aumento da concentrao
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intracelular de AMPc, mas ateno, pois somente nas clulas adiposas temos o AMPc como segundo mensageiro do hormnio GH. Quem disser que estimula a glicogenlise estar completamente errado. As gorduras sero hidrolisadas em cidos graxos e gliecrol. Os cidos graxos iro para a circulao e da para os mais variados tecidos inclusive os tecidos perifricos cuja captao de glicose estar inibida momentaneamente (devido ao quase imediata da insulina). Os cidos graxos passaro a ser usados como substratos energticos no tecido heptico. O glicerol no pode ser reaproveitado pelas clulas adiposas, ele ir ento para o fgado onde sofrer a ao daglicerol quinase sendo transformado em glicerol fosfato que ser substrato para a gliconeognese se transformando em di hidroxi acetona fosfato que se transformar em gliceraldedo-3-fosfato seguindo o caminho da gliconeognese formando glicose 6 fosfato. A hiperglicemia provocada pelo GH assegurada pela ativao da gliconeognese.
A insulina o nico hormnio antagnico do GH no metabolismo dos lipdios. Na presena de GH h estmulo da liplise e na presena de insulina h um estmulo a lipognese. Para estimular a lipognese devemos antes inibir a liplise para preservar os lipdios que ainda existem, esta inibio da liplise ocorrer devido insulina estimular a fosfodiesterase. A fosfodiesterase diminui a concentrao de AMPc deixando as lipases na forma no-fosforilada inativando-as impedindo a degradao de gordura ou liplise. A insulina ativa ainda as protenas fosfatases defosforilando as lipases j fosforiladas. A insulina ir estimular a lipognese, ou seja, a sntese extra mitocondrial de cidos graxos, atravs das fosfatases que iro manter a ATP citrato liase e a acetil CoA carboxilase na forma ativa. A ATP citrato liase faz com que surja oxaloacetato (que no nos interessa no momento) e acetil CoA, agente iniciador da biossntese de cidos graxos e a acetil CoA carboxilase ir formar malonil CoA, o agente continuador da biossntese de cido graxo. Finalmente, falta ter disponvel glicerol. Como a insulina estimula a gliclise teremos di hidroxi acetona fosfato que dar origem ao glicerol fosfato. Retomando, a lipognese estar baseada nos seguintes fatos: estmulo a ATP citrato liase e a acetil CoA carboxilase pelas protenas fosfatases e o fim da liplise ter como pea principal a ao das fosfodiesterases na diminuio da concentrao de AMPc. A insulina ainda estimula a formao de glicerol fosfato estimulando a gliclise. Assim a formao dos tri-acil-glicerol baseada na insulina estar completa.
A insulina age sozinha contra vrios hormnios hiperglicemiantes. A adrenalina e noradrenalina, por exemplo, um hormnio derivado de aminocido tirosina ou da fenilalanina, no um hormnio protico, e produzido na medula da supra-renal. O glucagon um hormnio protico e tem 29 aminocidos em sua estrutura e peso molecular de 3.500, produzido nas clulas alfa das ilhotas
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pancreticas. Adrenalina e glucagon atuam no metabolismo dos lipdios da mesma maneira que o GH, todos esses so lipolticos. Em relao a glicemia, todos so hiperglicmios tambm. Mas nem em tudo eles so iguais, apenas nas conseqncias das aes que h semlhana entre eles. A questo da hiperglicemia , na verdade, um pouco mais refinada. O GH provoca uma hiperglicemia, impedindo a capontoao de glicose, nas clulas dos tecidos perifricos. J a adrenalina e o glucagon estimulam a glicogenlise heptica (na verdade dizer glicogenlise heptica uma redundncia j que a quebra de glicognio para a liberao de glicose ocorre basicamente no fgado) pela ao de AMPc. Por que todos os livros dizem ento que o glucagon o principal hormnio hiperglicemiante? Isso ocorre porque ele estimula a glicogenlise heptica e induz a ativao das enzimas da gliconeognese (as quatro reprimidas pela insulina). A adrenalina no considerada um importante agente
hiperglicemiante por existir no hepatcito enzimas que metabolisam em segundos a adrenalina. Essas enzimas so: mono amino oxidase e catecol orto metil transferase. Elas metabolisam rapidamente a adrenalina assim que se ligam aos recepontoores da membrana do hepatcito por isso sua ao no to eficaz comparada ao glucagon. Isso ocorre por uma razo temporal, de vida mdia, se inibssemos a atividade cataltica das duas enzimas que degradam a adrenalina ela teria a mesma importncia do glucagon. Nas clulas musculares, a adrenalina muito mais potente que o glucagon, j que nessas membranas no se notado a presena das enzimas que degradam a adrenalina, a lm disso, o nmero de receptores para o glucagon bem pequeno nessas clulas deixando seu efeito quase imperceptvel. Repetindo, glucagon e adrenalina so antagnicos insulina em relao ao metabolismo dos lipdios e glicdios. Adrenalina produzida na medula da supra renal e glucagon produzido nas clulas alfa das ilhotas pancreticas, ambos os hormnios liberados por exocitose, ou seja, dependentes de inostol trifosfato (IP 3). Ambos tm o mesmo efeito do GH no metabolismo dos lipdios. No metabolismo dos glicdios, adrenalina e glucagon teriam os mesmos efeitos, mas a adrenalina degradada por enzimas da membrana de hepatcitos assim que se liga a seus receptores. O glucagon ir estimular a glicogenlise heptica e induz a sntese de enzimas essenciais a gliconeognese o que o GH no faz, ele estimula a gliconeognese dando a ela seu substrato (glicerol) o que o glucagon tambm faz.
Sobre o metabolismo das protenas, o GH a semelhana do que faz a insulina com os glicdios aumenta a disponibilidade metablica dos aminocidos no espao intracelular. Ento, na presena de GH h um aumento no nmero de aminocidos intracelularmente. O destino destes aminocidos prioritariamente a formao de protenas e quando se tem uma concentrao mais elevada de aminocidos, superando as necessidades da clula de formar as suas protenas, o destino destes aminocidos ser, serem desaminados e servirem de substrato energtico ou para a gliconeognese. E, portanto, na presena de
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GH o balano nitrogenado ser positivo. A insulina que um hormnio antagnico do GH, glucagon e adrenalina no metabolismo dos lipdios e dos glicdios, no ser no metabolismo das protenas. Seu balano nitrogenado ser positivo tambm. Como se explica este fato? Na presena de insulina h inibio da gliconeognese, como a glicose est com a sua concentrao elevada no meio intracelular pela presena de insulina, no h razo de formao de mais glicose a partir de substncias noglicdicas (gliconeognese). Se, temos insulina a glicose est sendo aproveitada como substrato energtico, os aminocidos ento iro para a biossntese de protenas. Isso ocorre pelo fato de voc estar carregando a clula com glicose, no necessitando usar aminocidos como substrato energtico. Como se isso no bastasse a insulina ainda estimula a absoro de aminocidos principalmente pelas clulas musculares esquelticas.
Agora so os efeitos no diretamente metablicos. Na presena de GH h um estmulo a nvel heptico a sntese de determinados polipeptdeos que antigamente eram chamados de fatores de sulfatao, e que hoje so conhecidos como somatomedinas (isso porque o hormnio de crescimento era conhecido como hormnio somatotrfico). Estudaremos as somatomedinas com mais profundidade na
Morfologia. Estas substncias so essenciais no metabolismo da cartilagem ou no crescimento da cartilagem, j que para que haja crescimento da cartilagem fundamental a deposio de sulfato, na verdade fundamental para a cartilagem que se forme o cido condroitil slfurico ou condroitil sulfato que s formado na presena de somatomedinas. O GH tem ainda outro papel de fundamental importncia alm de aumentar a sntese de protenas, desenvolver o tecido cartilaginoso, ele aumenta ainda a matriz orgnica do osso. Cerca de 9 da matriz orgnica do osso formada de colgeno e o 0% GH estimula a sntese de colgeno. Como podemos ainda controlar a liberao do hormnio do crescimento? A circunstncia fisiolgica mais bvia que estimula a liberao do GH a hipoglicemia. E a hiperglicemia inibe a liberao de GH.
Antigamente, costumava-se dizer que um estresse ps-cirrgico pode levar a liberao de GH. No apenas uma ao sobre o sistema nervoso central, pois isso bastaria para estimular a adenohipfise, devido a relao estreita entre hipotlamo e adenohipfise, mas tambm a leso tecidual que ocorre em qualquer cirurgia. E para que haja cicatrizao da ferida fundamental que haja sntese de protenas e para tal necessita-se de GH por motivos j citados. Mas ser que isso bastaria na discusso do controle do GH? H 20 anos atrs, em 1976, dois pesquisadores publicaram um artigo que revolucionou o controle da liberao no apenas do GH como tambm da insulina e do glucagon. Eles isolaram uma substncia com 14 aminocidos, tetra-deca51
peptdeo, conhecido como somatostatina. Essa somatostatina principalmente e no unicamente formada no hipotlamo e nas clulas delta das ilhotas pancreticas, que so vizinhas das clulas alfa produtoras de glucagon e das clulas beta produtoras de insulina. Ao isolarem esta somatostatina eles verificaram que ela no era um hormnio na concepo da palavra, ou seja, no possua ao sistmica e sim, parcrina e atuava de forma a impedir o influxo e a mobilizao de clcio bloqueando os canais de clcio deixando as concentraes de clcio intracelular diminudas. Temos ento a diminuio do nmero de complexos clcio-calmodulina e consequente impedimento da exocitose. Foi verificado tambm que a somatostatina possui uma forma inativa de peso molecular 12.000 enquanto o peso molecular real de 1.700, que ativada quando h hiperglicemia, que ser ento o agente causador da transformao de pr-somatostatina em somatostatina. No entanto, a somatostatina no nenhum agente hipoglicemiante j que no liberado na circulao sangunea, pois de ao parcrina. Se ela produzida no hipotlamo ela vai impedir nvel de adeno hipfise a liberao de GH e TSH (hormnio estimulador da tireide) impedindo a entrada de clcio. Ao inibir a liberao de GH no temos nem hipoglicemia nem hiperglicemia. As clulas delta pancreticas so vizinhas das clulas-alfa produtoras de glucagon, que liberado por exocitose tendo sua liberao impedida. A hiperglicemia se mantm em nvel fisiolgico, mas seu crescimento impedido. Um outro artigo dois anos depois, argumentou que a somatostatina iria atuar tambm nas clulas beta produtora de insulina j que tambm so vizinhas das clulas-beta. Temos a estabilizao da hiperglicemia, mas a liberao de insulina estaria inibida. Mas eles estavam raciocinando com a somatostatina na forma inativa de alto peso moleculae e no levaram em considerao que a insulina na forma ativa tem apenas 14 aminocidos, de vida mdia muito curta. Assim o mecanismo fisiolgico fica assim: hiperglicemia chegando a um determinado patamar suficiente para ativar somatostatina, que atua de forma parcrina na inibio dos hormnios hiperglicemiantes (GH, glucagon) e ao inibir estes hormnios temos uma estabilizao da hiperglicemia e no uma hipoglicemia. Como tem 14 aminocidos a somatostatina rapidamente metabolisada tendo vida-mdia curtissma, nesse momento h uma hiperglicemia
estabilizada, com a somatostatina inibida temos ento uma volta da absoro de clcio pelas clulas que poder assim liberar insulina j que est havendo hiperglicemia, o principal fator de liberao da insulina.
Ento temos a entrada rpida da somatostatina nessa via com a funo de estabilizar a hiperglicemia e este um fato fisiolgico de extrema importncia j que representa um mecanismo poupador de insulina, ou seja, ao estabilizar a hiperglicemia por um perodo curtssimo em patamares fisiolgicos estamos economizando insulina. Caso no houvesse este controle ao longo de poucos anos teramos
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um quadro de diabetes. Esta a razo de pessoas obesas, com alimentao baseada em doces e amido, de vida sedentria e sem histria familiar de diabetes s adquirirem provavelmente esta doena aps os 50 anos devido a diminuio brutal da capacidade do pncreas de liberar insulina. Caso no houvesse este mecanismo de regulao pela somatostatina este mesmo caso poderia ser visto 15 ou 10 anos antes do previsto. Os hormnios sexuais (HS) so produzidos tanto nos ovrios como nos testculos, adrenais e tecido adiposo. As adrenais e o tecido adiposo representam a fonte hormonal da mulher na menopausa. O precursor dos HS o colesterol. Ele pode ser da reserva intracelular, vir de lipoprotenas plasmticas (basicamente LDL) e do acetilCoA. Ento, todos os HS produzidos nos locais acima tm como precursor o colesterol obtido das fontes descritas acima. O seu caminho na mitocndria e, para que ele possa entrar nesta organela, ser necessria a presena de calmodulina e clcio. Na mitocndria, o colesterol se transforma em pregnenolona, o qual deixa a mitocndria se dirigindo para o REL. Neste local, encerra-se o processo de produo dos HS, que vo, ento, para o Golgi e da so secretados. O caminho do HS , pois, passar primeiramente mitocndria, onde sintetizada a pregnenolona , a qual vai para o REL, no qual acaba a sntese do HS, que vai para o Golgi e secretado. No plasma, o HS estar sempre ligado a protenas transportadoras/ligadoras de hormnios sexuais. Este caminho vlido tanto para hormnios masculinos como femininos. Como este processo desencadeado? O hipotlamo, via sistema nervoso, elabora o fator de liberao de HS que vai agir na adenohipfise, a qual libera o hormnio luteinizante (LH) e o folculo estimulante (FSH), os quais atuaro no testculo e ovrio, onde so produzidos testosterona, e progesterona e estrgeno, nos ovrios. O hormnio luteinizante, a nvel testicular, atua nas clulas de Leydig, na produo de testosterona. Ela tem trs formas de ao. A primeira: circula ligada a protenas ligadoras de HS. Segundo, ela entra no citoplasma da clula de forma livre (dissociada da protena ligadora de HS), onde se liga aos seus receptores nucleares, induzindo a sntese de novas protenas. No caso da prstata, vescula seminal, epiddimo, pele e folculo piloso, a testosterona vai sofrer a ao da enzima redutase, produzindo diidrotestosterona, que a forma ativa da testosterona nestes tecidos. Uma terceira maneira da testosterona agira, no hipotlamo e hipfise, ser transformada em estrgeno. Desta forma, potencializa a atividade andrognica da testosterona: para o hormnio agir melhor, justamente em locais onde vai ser determinado efeito comportamental, caracterizao emocional e da personalidade, a testosterona ter seu efeito maior quando parte dela for transformada em estrgeno. Ento, temos trs maneiras da testosterona agir: ela entra na clula alvo, desligada da protena ligadora, e induz a sntese de novas protenas, ou transformada em
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diidrotestosterona, ou transformada em estrgeno para potencializar seu efeito andrognico. Dizem que a testosterona, na presena de estrgeno, far a androgenizao do crebro masculino. Alm disso, a testosterona faz a caracterizao sexual secundria na prstata e vescula seminal. Tambm atua na distribuio de plos e gordura no homem, implicando na diferena entre os biotipos masculino e feminino. Promove o aumento testicular e, em seguida, aumento peniano, que a primeira caracterizao secundria na puberdade do homem; o crescimento dos plos pubianos; crescimento linear (o adolescente produz testosterona a nveis ideais que permitem-no ter uma maior taxa de crescimento nesta fase; j as mulheres, quando comeam a produzir estrgenos, tem deposio e calcificao da epfise, interrompendo o crescimento, e o tamanho da mulher adulta basicamente o tamanho que tinha na primeira menstruao); crescimento da massa muscular; mudana do timbre da voz; reteno de nitrognio e fsforo; aumento do metabolismo anablico e das reservas de glicognio. Tudo isso produzido pela testosterona produzida nas clulas de Leydig sob a ao do LH. E o que faz o FSH? Nos testculos, atua nas clulas de Sertoli, que so responsveis pela nutrio das clulas germinativas (ou espermatognias). Alm disso, tambm produzem: as protenas ligadoras de HS, responsveis pelo transporte dos HS pela circulao, e inibina. O FSH age na clula de Sertoli, que produz espermatozides. Mas, para isto, a testosterona tem que agir na clula de Sertoli, para que a produo de espermatozides se faa. A inibina capaz de inibir a produo de testosterona. Ento a produo de testosterona no contnua no homem, porque medida que spontoz e inibina so produzidos nas clulas de Sertoli via FSH, esta inibina capaz de inibir a produo de testosterona, chamada de produo pulstil. Alm disto, esta testosterona tambm vai inibir FSH e LH e ao hipotlamo. Temos, ento, trs mecanismos de feedback negativo: a inibina sobre a testosterona nas clulas de Leydig (inibio local); a testosterona circulante ligada s protenas, no nvel mximo (mxima: 800 ng/dl testosterona), inibindo a hipfise e o hipotlamo. Isto significa que, sendo a produo de testosterona pulstil, a produo de spontoz no contnua. Hoje, diz-se inclusive em ciclos de testosterona e ciclos de produo de espermatozides (antes se acreditava na ocorrncia contnua destas produes). Existe uma doena gentica chamada sndrome de feminilizao testicular, que pode ocorrer porque, no cromossoma Y tem-se o gene que determina a produo de hormnios andrgenos (testosterona e diidrotestosterona); em X, tem-se o gen que determina a formao de recepontoores para estes hormnios nos rgos-alvos. Nesta doena, no cromossoma X no est
codificando os gens para a produo destes receptores para hormnios andrgenos. Com isso, o homem produz estes andrgenos, mas no tem recepontoores e eles no podem agir. Os hormnios sexuais femininos so derivados dos hormnios sexuais masculinos. Com isto, os seus precursores biossintticos so os andrgenos. Ento, forma-se a testosterona e, a partir dela, o estrognio e a
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progesterona. Da mesma forma que no homem, LH e FSH vo ter locais determinados para atuar. O LH atua nos ovrios nas clulas da teca interna, ou seja, a camada mais central do folculo. J o FSH atua nas clulas da granulosa, que a parte mais interna do folculo. O LH vai promover a sntese de precursores andrgenos, nas clulas da teca interna, que vo para as clulas granulosas, onde haver, portanto, produo de estrgeno. Na mulher, ento, temos j um fato controlado: somente os precursores que chegarem nas clulas da granulosa sero transformados em estrgenos.
Em presena de estrgeno, o FSH vai fazer a maturao do folculo ovariano. Tem tambm outros efeitos: crescimento/diferenciao/manuteno das clulas ciliadas e da atividade motora da Trompa de Falpio (toda parte de nidao do ovo fecundado ou do percurso feito pelo vulo para ser fecundado controlado pelo FSH); crescimento do endomtrio - que varia durante o ciclo menstrual e miomtrio (ele vai atuar aumentando a atividade da via glicoltica, sintetizando ATP; ativa a fosforilase, levando quebra do glicognio, produzindo glicose, que usada tanto para a produo do ATP e para a diferenciao da clula do endomtrio, como tambm serve de substrato para o crescimento dos bacilos do Toterham, que mantm o pH de toda a cavidade vaginal e uterina ideal (cido, pela quebra da glicose em cido lctico) para impedir o crescimento de outros fungos e/ou bactrias e, com isso, mulheres com deficincia deste hormnio ficaro mais suscetveis a infeces nestas cavidades. A ativao da deposio de clcio e ossificao das epfises nas mulheres precocemente), interrompem seu crescimento (ento, quanto mais retardo houver na chegada da menstruao, mais a mulher poder crescer, porm no tendo sua caracterizao secundria); aumenta tnus vascular; diminui colesterol plasmtico, enviando-o para as reservas para a sntese de hormnios, por exemplo.
Ciclo Menstrual: LH e FSH no primeiro dia comeam a ser produzidos, j que a menstruao foi originada porque no houve nidao do ovo e o corpo lteo regrediu, hormnios (estrgeno e progesterona) descem da circulao, a preparao para a nidao deixa de existir e a mulher menstrua. Eles (LH e FSH) atuaro na teca interna e na granulosa. Por volta do 14 dia tem-se a subida do FSH e do estrgeno. Logo depois, comeam a cair, com o estrgeno permanecendo um pouco mais do que o FSH. A partir do 14 dia, em funo de muito estrgeno circulante no plasma, teremos feedback negativo para o FSH e hipotlamo. O LH se mantm mais ou menos constante, j que sua produo em baixas quantidades (menos que o FSH). Quando o estrgeno atinge a quantidade mxima h, literalmente, um surto de LH, por volta do 14 dia. Geralmente, cerca de 16 horas aps este surto de LH ocorre a ovulao, que, portanto, coincide com o pico de estrgeno e o surto de LH. Aps a
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ovulao, o corpo lteo passa a produzir estrgeno e progesterona. Ento, o estrgeno essencial para que ocorra a ovulao e a progesterona fundamental para a manuteno do ovo fecundado (nidao e desenvolvimento). Neste surto de LH, costuma ter-se aumento de temperatura corporal. Em caso de gravidez, a placenta se encarregar de produzir os hormnios para a manuteno do feto e no mais o corpo lteo. Aps a menopausa, o ovrio no mais produz hormnios femininos, restringindo tal produo s adrenais e ao tecido adiposo. Porm estes locais produzem muito pouco e, aps a menopausa, aconselha-se s mulheres a fazerem uso de tratamento hormonal, para evitar problemas, como a osteoporose, principal problema da mulher aps a menopausa.
O crtex da adrenal utiliza colesterol livre (circulante no plasma) para sintetizar glico e mineralocorticides. A sntese desses hormnios acontece em dois locais: na mitocndria e no REL. A primeira reao ocorre a nvel mitocondrial, onde existe um complexo enzimtico chamado de desmolase que influenciado positivamente pelo ACTH que hormnio da adeno-hipfise que vai agir no crtex da adrenal para a sntese de glico e mineralocorticoides. O complexo enzimtico est encarregado basicamente de hidroxilaes no colesterol para formar os hormnios. A fonte para a sntese desses e as hidroxilaes o NADPH da via das pentoses mas ocorre tambm a participao do citocromo P450 que citoplasmtico ou mitocondrial. No caso da sntese de hormnios do crtex da adrenal, a partir do colesterol livre no plasma, o citocromo mitocondrial, mas tambm existe a nvel citoplasmtico; e no citoplasma, principalmente nos hepatcitos , atua junto s mono e dioxigenases para detoxificao de metais pesados, aromticos, pesticidas. o agente detoxificador no fgado dos compostos txicos que o homem tem acesso, sobretudo pela dieta.
A desmolase vai formar a nvel mitocondrial a pregnenolona. At esse passo tudo igual tanto para hormnio do crtex adrenal, quanto para os hormnios esterides sexuais. Formada a pregnenolona, vai ao retculoendoplasmtico liso (REL), onde vai ser formado o desoxicortisol que volta para a mitocndria, onde vai ser formado o cortisol, e esse vai ao plasma. O cortisol o hormnio mais importante dos glicocorticides. A partir da pregnenolona tambm pode ser formada a aldosterona que o mais importante mineralocorticide. Ento a via de sntese a mesma. Se a partir da pregnenolona pode ser formado tento o cortisol como a aldosterona, quem que vai direcionar essa via? A presena de ACTH vai fazer com que haja a sntese dos dois, mas a aldosterona precisa de outros fatores alm do ACTH. A aldosterona tambm vai para a circulao. Tanto um como o outro, circulando no plasma vo estar ligados a transcortina (protena plasmtica especfica para o transporte de cortisol e aldosterona) e a albumina (protena plasmtica que transporta desde hormnios sexuais como do
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crtex adrenal, como tambm remdios, produtos txicos para serem eliminados por filtrao renal, ento o transportador-mor do sangue.
Cerca de 90% do cortisol est ligado a essas protenas transportadoras e 10% esto livres, ento somente 10% do hormnio est sob a forma ativa. Esses 90% so reserva, medida que os 10% forem consumidos, outros sairo, se desligaro da albumina ou transcortina, passaro ao estado livre e efetuaro os seus efeitos a nvel tecidual. Apesar de 90% do cortisol estar ligado s protenas plasmticas, a sua vida mdia na circulao de 70 minutos. Ento desde que liberado pelo crtex da adrenal, ele tem que resistir dentro ou fora da clula, uma mdia de 70 min. Por o efeito dos glicocorticoides ser extremamente sistmico e intenso uma garantia que ele tenha a ao apenas de 70 minutos. J a aldosterona tem 50% ligado transcortina e albumina, s que a ligao muito fraca fazendo com que a meia vida da aldosterona seja menor do que 70minutos. O ACTH, a partir da formao do cortisol e aldosterona, o cortisol age via AMPc e a aldosterona via AMPc, IP3, DAG e aumento de clcio intracelular. A aldosterona precisa do influxo de clcio para poder agir porque mexe com as concentraes inicas. Ao dos glicocorticides:
So poupadores de glicose (principal fonte de energia, caminho mais rpido para obteno de ATP) porque inibe a sntese de protena e, ao mesmo tempo, promove-se a protelise, as peptidases comeam agir, liberando aminocido. Ento, acontece uma mobilizao de aminocido, a partir da quebra de protena. O destino desses aminocidos: produzir ATP e gliconeognese. Os aminocidos, quando desaminados, viram cetocidos que um intermedirio do C.K. Poupando glicose, tem-se que reverter o processo a partir de outras substncias, nesse caso os aminocidos. A outra via a gliconeognese, que necessita de enzimas (constitutivas) especficas, que sero ativadas: piruvato carboxilase, fosfoenol piruvato carboxi quinase, frutose 1,6di-fosfatase, glicognio-6-fosfatase. Quando o glicocorticide ativa a sintetase, age como a insulina, mas contraditrio. Quando mobiliza aminocido, age contrariamente, pois aumentando a protelise, anti-insulina. Tambm favorece a liplise, sendo anti-insulina nesse caso. Quando a pessoa faz regime, est em jejum para fazer determinado exame, no consegue comer por estresse... Como a pessoa sobrevive? Via
glicocorticides, s que em jejuns prolongados gerais, h a perda de massa muscular, da se explica, por exemplo, porque uma pessoa fica flcida quando emagrece, porque os glicocorticoides
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transformam protena em aminocido e transforma-os em glicose na sntese de ATP. O glicocorticoide essencial, mas o seu excesso produz um desequilbrio no metabolismo.
O glicocorticide tem um ritmo circadiano, tem um pico mximo pela manh; e ao anoitecer, o glicocorticide circulante no sangue prximo de zero. Ento, voc acorda, todas as suas funes vitais so retomadas at os alimentos entrem nas clulas, voc, entre o despertar e a primeira refeio, tem um pico de glicocorticides. Quando se levanta, no se deve fazer exerccios porque o corpo est liberando glicocorticides, tendo protelise, sntese de glicose, produo de ATP, ou seja, ele est reestabelecendo um equilbrio para que se possa viver aquele dia. O excesso de produo de cortisol (por exemplo, quando se toma cortisona) vai favorecer a deposio de gordura no pescoo e no tronco, aparecendo a Doena de Cushing . Na falta total de cortisol, aparece a Doena de Addison, na qual ocorre diminuio da acuidade auditiva, olfativa e gustativa, aparece insnia, diminuio da capacidade de concentrao. No plasma, existe circulando uma substncia chamada de
angiotensinognio que vai ser trabalhada por uma enzima chamada renina (produzida nas clulas justaglomerulares dos rins) formando a angiotensina 1 que vai circular no plasma e vai sofrer a ao da enzima conversora (produzida no pulmo), transformando a angiotensina 1 em 2. A angiotensina 2 vai produzir no crtex adrenal a aldosterona e fazer o feedback negativo para a enzima renina.O que
+ acontece ento? Reabsoro de Na+; secreo de K e ons hidretos; reabsoro de gua, por causa da
reabsoro de Na+; liberao de ADH. Conseqncias: Aumento do volume lquido extra; aumento da osmolaridade; aumento do volume sanguneo; aumento do dbito cardaco e aumento da presso arterial que inconveniente.
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ENZIMAS
Enzimas so em sua maioria, protenas com atividade cataltica. Praticamente todas as reaes que caracterizam o metabolismo celular so catalisadas por enzimas. Como catalisadores celulares extremamente poderosos, as enzimas aceleram a velocidade de uma reao, sem, no entanto participar dela como reagente ou produto. As enzimas atuam ainda como reguladoras deste conjunto complexo de reaes. As enzimas so, portanto, consideradas as unidades funcionais do metabolismo celular Existem 3 mtodos para nomenclatura enzimtica: Nome Recomendado: Mais curto e utilizado no dia a dia de quem trabalha com enzimas; Utiliza o sufixo "ase" para caracterizar a enzima. Exs: Urease, Hexoquinase, Peptidase, etc. Nome Sistemtico: Mais complexo, nos d informaes precisas sobre a funo metablica da enzima. Ex: ATP-Glicose-Fosfo-Transferase Nome Usual: Consagrados pelo uso. Exemplos: Tripsina, Pepsina, Ptialina. As enzimas podem ser classificadas de acordo com vrios critrios. O mais importante foi estabelecido pela Unio Internacional de Bioqumica (IUB), e estabelece 6 classes:
1. Oxidorredutases: So enzimas que catalisam reaes de transferncia de eltrons, ou seja: reaes de oxi-reduo. So as Desidrogenases e as Oxidases 2. Transferases: Enzimas que catalisam reaes de transferncia de grupamentos funcionais como grupos amina, fosfato, acil, carboxil, etc. Como exemplo temos as Quinases e as Transaminases 3. Hidrolases: Catalisam reaes de hidrlise de ligao covalente. Ex: As peptidades 4. Liases Catalisam a quebra de ligaes covalentes e a remoo de molculas de gua, amnia e gs carbnico. As Dehidratases e as Descarboxilases so bons exemplos
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5. Isomerases Catalisam reaes de interconverso entre ismeros pticos ou geomtricos. As Epimerases so exemplos. 6. Ligases Catalisam reaes de formao e novas molculas a partir da ligao entre duas j existentes, sempre s custas de energia (ATP). So as Sintetases. So catalisadores biolgicos extremamente eficientes Aceleram em mdia 109 a 1012 vezes a velocidade da reao, transformando de 100 a 1000 molculas de substrato em produto por minuto de reao. Atuam em concentraes muito baixas. Atuam em condies suaves de temperatura e pH. Possuem todas as caractersticas das protenas. Podem ter sua atividade regulada. Esto quase sempre dentro da clula, e compartimentalizadas. Cofatores Enzimticos: Cofatores so pequenas molculas orgnicas ou inorgnicas que podem ser necessrias para a funo de uma enzima. Estes cofatores no esto ligados permanentemente molcula da enzima, na ausncia deles, a enzima inativa. A frao protica de uma enzima, na ausncia do seu cofator, chamada de APOENZIMA. Enzima + Cofator,chamamos de HOLOENZIMA. Coenzimas So compostos orgnicos, quase sempre derivados de vitaminas, que atuam em conjunto com as enzimas. Podem atuar segundo 3 modelos: Ligando-se enzima com afinidade semelhante do substrato Ligando-se covalentemente em local prximo ou no prprio stio cataltico da apoenzima Atuando de maneira intermediria aos dois extremos acima citados. As enzimas so muito especficas para os seus substratos. Esta especificidade pode ser relativa a apenas um substrato ou a vrios substratos ao mesmo tempo; deve-se existncia, na superfcie da enzima de um local denominado: STIO DE LIGAO DO SUBSTRATO. O stio de ligao do substrato de uma enzima dado por um arranjo tridimensional especial dos aminocidos de uma determinada regio da molcula, geralmente complementar molcula do substrato, e ideal espacial e eletricamente para a ligao do mesmo.
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O stio de ligao do substrato capaz de reconhecer inclusive ismeros ticos "D" e "L" de um mesmo composto. Este stio pode conter um segundo stio, chamado STIO CATALTICO ou STIO ATIVO, ou estar prximo dele; neste stio ativo que ocorre a reao enzimtica. Alguns modelos procuram explicar a especificidade substrato/enzima: Modelo Chave/Fechadura Prev um encaixe perfeito do substrato no stio de ligao, que seria rgido como uma fechadura. Modelo do Ajuste Induzido Prev um stio de ligao no totalmente pr-formado, nas sim moldvel molcula do substrato; a enzima se ajustaria molcula do substrato na sua presena. Evidncias experimentais sugerem um terceiro modelo que combina o ajuste induzido a uma "toro" da molcula do substrato, que o "ativaria" e o prepararia para a sua transformao em produto. As enzimas aceleram a velocidade de uma reao por diminuir a ENERGIA LIVRE DE ATIVAO da mesma, sem alterar a termodinmica da reao, ou seja: A energia dos reagentes e produtos da reao enzimtica e de sua equivalente no-enzimtica so idnticas. Para se superar a energia de ativao de uma reao, passa-se pela formao de um estado intermedirio chamado "Estado de Transio", sempre um composto instvel e de alta energia, representado por "Ts", ligado com altssima afinidade ao stio cataltico. Nas reaes enzimticas, este composto de transio "Ts" no pode ser isolado ou mesmo considerado um intermedirio, uma vez que no liberado para o meio de reao; sua formao ocorre NO STIO CATALTICO da enzima! Como a afinidade do "Ts" ao stio cataltico muito maior que a afinidade do substrato com o mesmo, a pequena quantidade de molculas em "Ts" ser rapidamente convertida em produto. Assim, todo o fator que leva a um aumento do nmero de molculas em "Ts" aumenta a velocidade da reao. So 04 os mecanismos principais atravs dos quais as enzimas aceleram uma reao, aumentando a formao de molculas de substrato em "Ts":
1. Catlise cido-Base Ocorre com a participao de AMINOCIDO com cadeias laterais ionizveis, capazes de doar ou liberar prtons
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durante a catlise. A histidina, a cistena, a tirosina e os AMINOCIDO cidos so importantes aminocidos nestes processos. 2. Toro de Substrato Depende da toro do substrato induzida pela ligao do mesmo com o stio de ligao da enzima, alcanando o estado de transio e estimulando sua converso em produto. 3. Catlise Covalente Resulta do ataque nucleoflico ou eletroflico de um radical do stio cataltico sobre o substrato, ligando-o covalentemente enzima e induzindo a sua transformao em produto. Envolve com freqncia a participao de coenzimas. 4. Efeito de Diminuio da Entropia As enzimas ajudam no
posicionamento e na definio da estequiometria correta da reao, facilitando os mecanismos anteriores. Cintica Enzimtica:
a parte da enzimologia que estuda a velocidade das reaes enzimticas, e os atores que influenciam nesta velocidade. Uma reao enzimtica pode ser expressa pela seguinte equao: E + S [ES] E + P O complexo enzima/substrato (ES) tem uma energia de ativao ligeiramente menor que a do substrato isolado, e a sua formao leva ao aparecimento do estado de transio "Ts". A formao de "P" a partir de ES a etapa limitante da velocidade da reao. A velocidade de uma reao enzimtica depende das concentraes de ENZIMA e de SUBSTRATO. Equao de Michaelis-Menten: Michaelis e Menten foram duas pesquisadoras que propuseram o modelo acima citado como modelo de reao enzimtica para apenas um substrato. A partir deste modelo, estas pesquisadoras criaram uma equao, que nos permite demonstrar como a velocidade de uma reao varia com a variao da concentrao do substrato. Esta equao pode ser expressa graficamente, e representa o efeito da concentrao de substrato sobre a velocidade de reao
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enzimtica. O KM de um substrato para uma enzima especfica caracterstico, e nos fornece um parmetro de especificidade deste substrato em relao enzima. Quanto menor o Km, maior a especificidade, e vice-versa Fatores Externos que Influenciam na Velocidade de uma Reao Enzimtica:
1. Temperatura Quanto maior a temperatura, maior a velocidade da reao, at se atingir a TEMPERATURA TIMA; a partir dela, a atividade volta a diminuir, por desnaturao da molcula. 2. pH Idem temperatura; existe um pH TIMO, onde a distribuio de cargas eltricas da molcula da enzima e, em especial do stio cataltico, ideal para a catlise. Inibio Enzimtica: Os inibidores enzimticos so compostos que podem diminuir a atividade de uma enzima. A inibio enzimtica pode ser reversvel ou irreversvel. Existem 2 tipos de inibio enzimtica reversvel: Inibio Enzimtica Reversvel Competitiva: Quando o inibidor se liga
reversivelmente ao mesmo stio de ligao do substrato. O efeito revertido aumentando-se a concentrao de substrato. Este tipo de inibio depende das concentraes de substrato e de inibidor. Inibio Enzimtica Reversvel No-Competitiva: Quando o inibidor liga-se
reversivelmente enzima em um stio prprio de ligao, podendo estar ligado mesma ao mesmo tempo em que o substrato. Este tipo de inibio depende apenas da concentrao do inibidor. Na inibio enzimtica irreversvel, h modificao covalente e definitiva no stio de ligao ou no stio cataltico da enzima. Regulao Enzimtica:
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Algumas enzimas podem ter suas atividades reguladas, atuando assim como moduladoras do metabolismo celular. Esta modulao essencial na coordenao dos inmeros processos metablicos pela clula. Modulao Alostrica Ocorre nas enzimas que possuem um STIO DE MODULAO, ou ALOSTRICO, onde se liga de forma no-covalente um modulador alostrico que pode ser positivo (ativa a enzima) ou negativo (inibe a enzima). A ligao do modulador induz a modificaes conformacionais na estrutura espacial da enzima, modificando a afinidade desta para com os seus substratos. Um modelo muito comum de regulao alostrica a inibio por "FEED-BACk", onde o prprio produto da reao atua como modulador da enzima que a catalisa. Modulao Covalente: Ocorre quando h modificao covalente da molcula da enzima, com converso entre formas ativa/inativa. O processo ocorre principalmente por adio/remoo de grupamentos fosfato de resduos especficos de serina. Enzimas na Clnica: As enzimas podem ser utilizadas nas Anlises Clnicas de 2 formas principais: Como reagentes altamente especficos e sensveis em reaes colorimtricas quantitativas. Como indicadoras de leso celular e tecidual O extravasamento de enzimas do meio intra para o meio extracelular leva a um aumento da atividade destas no sangue; Esta atividade pode ser medida e fornece importante informao diagnstica e de evoluo de um quadro clnico. A distribuio rgo-especfica de algumas destas enzimas permite a localizao da leso com bastante preciso. Exemplos de doenas que podem ser diagnosticadas e acompanhadas enzimaticamente so:

O Infarto Agudo do Miocrdio As Hepatites Pancreatite Doenas sseas

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Enzimas so catalisadores biolgicos de natureza protica, que aceleram as reaes metablicas espontneas nas clulas vivas e cuja propriedade mais notvel a especificidade. Entendimento deste conceito:
1) Enzimas so catalisadores biolgicos de natureza protica: praticamente todas as enzimas so protenas. Mas h excees, descobertas h 6 ou 7 anos, que foram comprovadas por experincias e que demonstram que determinados tipos de RNAm possuem atividade cataltica, ou seja, desempenham um papel de enzimas. Mas nenhuma reao metablica tradicional catalisada por RNAm como enzima. Nem todas as protenas so enzimas, citando como exemplo a albumina (protena plasmtica), a insulina (hormnio), glucagon (hormnio), etc...
2) Aceleram as reaes metablicas espontneas nas clulas vivas: as reaes estudadas, mesmo sendo espontneas, precisam da presena de enzimas para ocorrer de modo rpido. Temos, como exemplo, a urease: seu papel cataltico est envolvido no metabolismo da uria e sua ausncia faria com que a reao da qual faz parte levasse d 500 a 800 mil anos para completar-se; com a enzima, e leva-se um milissegundo. Outro exemplo o Ciclo de Krebs. Enzimas no retardam nenhuma reao; apenas aceleram. Mas o que acelerar uma reao? Sabemos que para uma molcula A se transformar em uma molcula B ela precisa adquirir energia suficiente para vencer a barreira energtica desta transformao. Imaginem se colocssemos um corante hidroflico numa bacia com gua. Ocorreria a difuso dele em funo de um movimento browniano de choque entre as molculas (teoria da coliso) que faria com que elas adquirissem energia suficiente para romper a barreira energtica deste fenmeno, permitindo sua realizao. Uma prova para isto que se a bacia fosse aquecida, doaramos energia ao sistema e o fenmeno (difuso) se processaria mais rpido. como uma energia de ativao. No precisaramos esperar que as molculas se chocassem para adquirir energia e posteriormente se movimentassem. Entretanto, no podemos viver permanentemente num caldeiro fervente, at mesmo porque nossas enzimas so predominantemente protenas e, como tais, desnaturariam, ou seja, perderiam sua atividade biolgica, fisiolgica, bioqumica. A explicao para a acelerao ser parcial: qual o papel da enzima? Uma enzima diminui o acaso, ou seja, para uma substncia A se transformar em B rapidamente indispensvel que A e a enzima se liguem havendo consequente mudana para B. Quando adicionamos enzimas em concentrao ideal ao meio estamos conferindo maior grau de organizao ao sistema (as molculas no esto se movendo ao acaso at adquirir energia para virar B), ou seja, diminumos a entropia deste sistema. Entropia: medida do grau de desorganizao de um
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sistema. Um sistema organizado (com a enzima atraindo e se ligando a A) requer menor energia de ativao. Ento, na presena da enzima a reao ocorre mais rapidamente, em funo de uma diminuio da entropia com o maior grau de organizao ao sistema.
3) Cuja propriedade mais notvel a sua especificidade: h centenas de exemplos de especificidade. Tomaremos, porm, apenas dois. A especificidade as enzimas essencial: como as enzimas so protenas, so catalisadores orgnicos que, ao contrrio dos inorgnicos, como os metais, H+, OH-, os quais catalisam inmeros tipos de reaes, possuem esta especificidade, catalisando uma ou, no mximo, duas reaes. No ltimo caso, temos, na verdade, uma nica reao que , porm, reversvel pela mesma enzima. Os exemplos so a especificidade tica e a de grupo. H trs grandes grupos de alimentos ingeridos diariamente: protenas, carboidratos e lipdios, cujas hidrlises so catalisadas por enzimas de especificidade de grupo, como as amilases, lipases, proteases, etc... No existe uma protease que catalize quebra de lipdio, nem lipase para carboidratos: da surge esta relao especfica enzima-substrato. H diferenas entre as enzimas de um mesmo grupo. Na especificidade tica, temos como exemplo a glicose que normalmente um polialcoolaldedo mas no nosso organismo encontra-se na forma M-acetlica cclica, obtida pela migrao do H do carbono 5 para o 1. Com isso h saturao da dupla ligao e haver, atravs da criao de valncias livres, ponte de H entre tais carbonos. Entretanto, a hidroxila do C1 pode estar direta, sendo chamada ismero alfa, ou esquerda, o ismero beta. A conhecida ptialina , na verdade, a alfa-1,4amilase-salivar, tamanha a sua especificidade, e a amilase-pancretica tambm uma alfa-amilase, havendo em nosso aparelho digestivo apenas alfa-amilases. Isto quer dizer que apenas as ligaes entre ismeros de glicose alfa sero hidrolisadas. Por que se recomendam alimentos ricos em fibras, ou seja, ricos em celulose, para pessoas com problema crnico de priso-de-ventre? Poderamos pensar que a celulose igual ao amido e ao glicognio por ser formada de n-molculas de glicose. Porm, a celulose, sem exceo, no digerida por ns porque as ligaes so estabelecidas entre ismeros beta e no nosso aparelho digestivo s h enzimas para ismeros alfa. Desta maneira, sua estrutura mantm-se ntegra, dando uma forma mais rgida ao bolo alimentar, que normalmente fluido, acelerando o peristaltismo. Da a recomendao das fibras vegetarianas, visto que a celulose no ser digerida devido especificidade das nossas enzimas, c apazes de romper apenas ligaes entre molculas ismeros alfa de glicose.
Tem-se agora um exemplo prtico de reao geral enzimtica, no caso, do processo de gliclise na clula. O cido pirvico pode transformar-se, numa reao reversvel, em cido ltico. Iremos analisar
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esta reao a partir da transformao do cido pirvico (A) em lctico (B), ou seja, na direo de formao de cido lctico. Ento, temos que o cido pirvico o substrato S da reao e o cido ltico o produto P da mesma e, logicamente, A substrato e B, produto. A enzima que cataliza-a em ambos os sentidos a LDH (lactatodesidrogenase). A equao correspondente : E + S com formao OBRIGATRIA do complexo ES, ou seja, da ligao enzima-substrato, para que haja transformao do substrato em produto e forme em E + P. Esta equao importante para salientar que a enzima, ao final do processo, SEMPRE liberada na sua forma ntegra sob o ponto de vista estrutural, ou seja, no sofreu alteraes e est pronta para catalisar novamente esta reao. Porm, como explicar que a carbonila do cido pirvico foi reduzida por dois tomos de hidrognio se a enzima no sofreu alterao estrutural? fcil: aquele que doou esses tomos foi um auxiliar da enzima, chamado de coenzima e pode-se concluir que sem este, ou seja, apenas na presena da enzima LDH no ocorreria reao, pois no haveria quem doasse tomos de H para reduzir a carbonila do cido pirvico. Ento, muitas (mas no todas) reaes metablicas precisam, alm da enzima, do colaborador denominado coenzima (co=colaborador). Outras reaes no Ciclo de Krebs tambm so bons exemplos da presena de coenzimas. Verifica-se, tambm, que para reaes de oxi-reduo a presena da coenzima sempre indispensvel, e a enzima envolvida neste processo classificada como oxi-redutase. O que coenzima? No uma macromolcula como a enzima, mas sim uma substncia dialisvel, ou seja, uma substncia de pequeno peso molecular, que pode se ligar enzima durante a reao ou estar permanentemente ligado a ela. A maioria das coenzimas alguma vitamina do complexo B. No caso especfico da reao que vem sendo estudada o NAD reduzido (o NAD uma vitamina do complexo B, a niacina). Ele, ento, doa seus hidrognios ao cido pirvico e torna-se oxidado. Se a circunstncia metablica favorecesse a transformao do lactato em piruvato teramos o LDH como enzima e o NAD oxidado como coenzima (que durante a reao viraria NAD reduzido). / Conceitos: holoenzima = apoenzima + coenzima. A LDH uma holoenzima. A holoenzima toda enzima que, para seu perfeito funcionamento, precisa da colaborao, da presena da coenzima. E apoenzima a prpria enzima.
Observao: somente havendo a ligao entre o piruvato e a LDH que o NAD reduzido pode agir.
O local da enzima no qual se ligar o substrato o centro ativo, tambm conhecido como centro do substrato ou centro cataltico. Mas o que centro ativo? Centro ativo a regio da enzima qual se liga ao substrato para que haja formao do produto. Mas como isto acontece? Dois pesquisadores
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alemes tentaram explicar. O primeiro, Fischer, elaborou a teoria da chave-fechadura, s modificada por outro pesquisador na dcada de 70 para a teoria do encaixe-induzido. A primeira teoria, excelente par entender especificidade, alegava que a enzima (a protena), ao ser sintetizada, j vinha com o local de ligao (a fechadura) pr-formada e ao qual s se liga uma chave. Entretanto, com o entendimento de como as protenas eram sintetizadas viu-se que eram enoveladas ao acaso, ou seja, a maioria das protenas que desempenham funes globular, isto , so novelos, possuindo, no mnimo, uma estrutura terciria e tridimensional, podendo, ento, ser movimentada (enzimas, hormnios devem ser solveis em gua para terem acesso a todas as regies). O que muda a forma, o modo como estes novelos so enrolados. Ento, uma protena, durante sua sntese, no poderia ter a fechadura pr-formada. E como fazer a ligao sem esta estrutura estar pr-moldada? Na verdade, esta regio do centro ativo formada e aparece na medida em que aumenta-se a concentrao de substrato. O centro ativo deve ter ao menos dois tipos de aminocidos: os de ligao e os catalticos. O papel dos de ligao , em funo da carga das protenas, exercer a atrao eletrosttica do substrato (princpio das cargas opostas se atraem) - a regio mais positiva do LDH atrairia o piruvato. Porm a ligao eletrosttica fraca demais para o processo se desenvolver. necessria uma ligao mais forte para fixar o substrato. Ento, medida que o substrato atrado pelos aminocidos de ligao, a enzima sofre uma alterao na sua forma (vale salientar que estrutura NO o mesmo que forma), provocando um movimento de rotao em torno dos laos covalentes (que so as ligaes peptdicas) como, analogamente, um barbante pode ser enrolado de vrias formas sendo, porm, sempre a mesma estrutura: barbante. Uma determinada regio pode assumir vrias formas sem alterar sua estrutura. Com esta mudana conformacional, h aproximao do substrato aos aminocidos catalticos, entre os quais se firmar uma ligao covalente (ligao forte), para fix-lo enzima. Exemplos de aminocido catalticos: a serina, um aminocido hidroxilado, a cistena, um aminocido sulfurado (com -SH) - a partir destes -OH e -SH que se formam as ligaes covalentes. esta teoria que chamada de encaixe-induzido. Fatores que influenciam a velocidade de uma reao enzimtica:
Concentrao do substrato, temperatura, pH (altera carga da protena, afetando a atrao eletrosttica), tempo e concentrao enzimtica so os mais importantes, mas no os nicos. A concentrao de coenzima obedece ao mesmo raciocnio da enzima, visto que toda holoenzima s ser uma verdadeira enzima funcional se houver coenzima (sem ela, como se no houvesse nenhuma enzima para este caso).
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1) Concentrao do Substrato: Este um sistema de duas variveis: mudando (S) muda-se V. Com isso, admiti-se que todos os demais fatores esto ideais para a reao. Comearemos pela adio de substrato ao meio, levando ao aumento linear da velocidade (o aumento proporcional adio). Esta reta tem um limite, porque vai se formando uma hiprbole at se tornar paralelo as abcissas, tendo, pois, V constante. Este limite ocorre porque, como a concentrao de enzimas fixa, a partir de uma determinada concentrao de substrato, encontraramos toda a enzima na sua forma combinada. como se toda enzima estivesse na sua forma combinada, ou seja, no existiriam enzimas livres no meio, havendo aps esta determinada concentrao saturao da enzima pelo excesso de substrato. O perfil hiperblico demonstra a saturao da enzima pelo excesso de substrato (a saturao corresponde ausncia de enzimas livres no meio, ou seja, todas se encontram como o c omplexo ES). Caso o grfico volte a subir (tendo uma nova reta) porque se colocou a concentrao de enzimas num nvel no saturvel para aquela concentrao de substrato. medida que a concentrao de substrato aumenta, conseguiremos saturar esta nova concentrao enzimtica, havendo novo perfil hiperblico no grfico. Com isso, podemos concluir que a velocidade medida quando a enzima est saturada pelo excesso de substrato (no devemos pensar que a enzima no atua mais, mas sim que ela atua na sua capacidade mxima), chamada de velocidade mxima da reao, constante para uma determinada concentrao de enzima - se mudarmos (E), mudamos Vmx. Normalmente, as enzimas atuam em nossas clulas em cintica de ordem zero, ou seja, com excesso de substrato. Constante de Michaelis-Mentem: kM -- uma constante absoluta, isto , independe de quaisquer outros fatores. Tem como exemplo na prtica mdica sua importncia para os diabticos no compensados (que no tomam insulina ou o faz irregularmente). Define-se como sendo a concentrao de substrato que nos fornece a metade da velocidade mxima de uma reao (no confundir como sendo a metade de Vmx). Sua importncia provm de outro conceito: existe uma reao em todas as clulas de todos os tecidos, sem exceo, que a fosforilao da glicose, essencial para que a glicose possa participar das vias metablicas (fosforilar - adicionar o radical do cido fosfrico glicose sinnimo de aprision-la no meio intracelular, atravs de uma ligao ster entre as hidroxilas do cido e da glicose). Esta glicose na presena de ATP (que doar este grupamento de cido fosfrico) e magnsio (que tem carga positiva e serve para facilitar a atrao enzimtica, funcionando como reforo de carga) dar origem glicose-6-fosfato. Esta reao, em todos os tecidos, catalisada pela hexoquinase (hexo: a glicose uma hexose - possui seis carbonos; quinase: terminao de qualquer enzima que catalise uma fosforilao) que tem Km = 0,1 mM, ou seja, esta a concentrao de
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substrato que nos fornecer a metade da Vmx. No fgado, rgo considerado o centro do nosso metabolismo por todas as reaes metablicas importantes serem realizadas nele - da o perigo de doenas como a hepatite, h a maior concentrao relativa de glicognio (em termos absolutos no tecido muscular), que a nossa reserva de glicose, e h outra enzima para esta reao, a glicoquinase. Porm, a glicoquinase quando catalisa esta reao tem KM = 10 mM, ou seja, precisa de uma concentrao 100 vezes maior de glicose para atingir a metade de Vmx. A hexoquinase tem preferncia metablica porque em funo de um menor valor de KM capaz de atingir a cintica de ordem zero em menores concentraes de substrato (glicose). Mas a glicoquinase assumir a preferncia quando houver um excesso de glicose circulante, para no haver hiperglicemia, aprisionando no meio intracelular a glicose (depois, veremos que ela distribui equalitativamente esta glicose - um papel filantrpico do fgado). De tudo isso, temos uma outra definio para Km, como sendo uma medida do grau de afinidade entre a enzima e o seu respectivo substrato. Quanto menor o KM, maior a afinidade e vice-versa, porque com baixas concentraes de substrato atinge-se a metade de Vmx. A insulina um hormnio hipoglicmico e entre vrias enzimas que ela induz a sntese de DNA, temos a glicoquinase. Num diabtico no compensado o nvel de insulina circulante pouco ou quase nenhum e a glicoquinase no tem sua sntese estimulada, restando apenas a hexoquinase, que se saturaria pelo excesso de glicose entrando na clula. A glicose que no for fosforilada retorna corrente sangunea, levando a um quadro de hiperglicemia e glicosria (excesso de glicose sai pela urina). Foi a partir deste estudo que se pode o que era e como aparecia a hiperglicemia e, conseqentemente, a glicosria. Inibio enzimtica: competitiva e no-competitiva
1) Inibio competitiva:
Vamos pegar uma reao do ciclo de Krebs: a transformao do succinato ou cido succnico em fumarato ou cido fumrico, a reao reversvel e a enzima que cataliza essa reao nos dois sentidos a succinato desidrogenase. Essa uma holoenzima (enzima que precisa de coenzima), pois necessita do FAD (um dos estados ativos da riboflavina B2) que se transforma em FAD reduzido. Nas mitocndrias ocorre uma substncia conhecida como cido malnico ou malonato que muito semelhante ao cido succnico (difere apenas num CH2) com isso ocorre a enzima enganada pelo malonato. Ento na verdade se ligar a enzima o anlogo estrutural que estiver em maior concentrao. Por exemplo, imaginemos que tenhamos colocado uma concentrao maior do inibidor competitivo do
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que do verdadeiro substrato ento a enzima ter maior chance de se ligar ao falso substrato. Essa situao pode ser revertida basta que se acrescente maior quantidade de verdadeiro substrato.
Caracteristicas da inibio competitiva: S ocorre na presena de analogos estruturais do verdadeiro substrato; Ocorre apenas no centro ativo; reversvel pelo aumento da concentrao do verdadeiro substrato; H uma diminuio da afinidade entre enzima e substrato e conseqente aumento do KM; Velcoidade mxima ser igual a falta do inibidor competitivo contanto que a quantidade do substrato verdadeiro for muito maior do que a de inibidor competitivo. Aplicao clnica: Exemplo: Bactrim um quimoterpico base de sulfonamidas que pode debelar infeces respiratrias. A sulfanoamida um anlogo do cido para-amino-benzico, substrato essencial para sntese de cido flico pelas bactrias fundamental para sua biossntese de protenas (ns seres humanos s conseguimos produzir um tipo de vitamina - o hormnio D3 - o resto adquirido por alimentao ou por simbiose com nossa flora intestinal). Por isso, diz-se para tomar o remdio de 12 em 12 horas, assim consegue-se manter sempre uma concentrao alta desse inibidor competitivo no organismo, matando as bactrias. No grfico de Michaelis Menten a Vmx ser igual. No dos inversos (grfico duplo-recproco), a reta do inibidor competitivo ser mais inclinada, pois quanto maior o Km menor a afinidade, assim o 1/ KM ser mais prximo do eixo das ordenadas.
2) Inibio no-competitiva:
Como exemplo de inibidores no-competitivos, temos os metais pesados como mercrio, chumbo, prata... Eles no so anlogos estruturais de qualquer substrato. Ele pode inibir as enzimas fora e dentro do centro ativo. Esses metais pesados tm a capacidade de se ligar a grupamento sulfidrilas da cistena, um aminocido cataltico presente no centro ativo, indispensvel para fixao do substrato por ligao covalente. E a cistena no existe s dentro do centro ativo, por isso se diz que esse tipo de inibio ocorre no e fora do centro ativo. Se o substrato se ligar a enzima inibida por metal pesado, no haver formao de produto porque a cistena estar bloqueada, inibindo a atividade da enzima. O grupamento SH fundamental para as estruturas secundrias e tercirias, com isso o metal pesado pode funcionar ainda como agente desnaturante.
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H tambm inibidores no competitivos que bloqueiam grupamentos hidroxilas da serina ou treonina, outros aminocidos catalticos. O principal exemplo desse tipo de inibidor o DFP di-iso-propilfluorofosfato. Um exemplo disso foi o gs liberado por um terrorista no metro de Tkio que matou muita gente que estava prxima. Um outro exemplo o Napalm. Imaginava-se que os bloqueios dos grupamentos OH e SH eram irreversveis, mas s so irreversveis pelo aumento da concentrao de substrato, mas so reversveis pelo aumento da concentrao de enzimas e no caso do bloqueio dos grupamentos OH da serina pode-se reverter pelo uso da pralidoxina, substncia descoberta durante a guerra do Vietn. Caracteristicas do inibidor no competitivo: No h alterao do KM porque bloqueia os aminocidos catalticos mas, deixa livre os de ligao, no interferindo na afinidade. Ocorre no centro ativo pela ligao com os aminocidos cataliticos e fora dele ocorre a destruio das pontes de hidrognio e dissulfeto desnaturando as enzimas H diminuio da velocidade mxima porque h uma diminuio das enzimas
fisiologicamente ativas ocorrendo saturao mais rpida do substrato. reversvel pelo aumento da concentrao de enzimas e pelo uso de pralidoxina no c de aso bloqueio dos grupamentos OH.
Alosteria nome que se d aos estudos da cintica das enzimas alostricas. Essas enzimas ocorrem em nmero bem menor do que as enzimas normais. So chamadas de enzimas regulatrias ou de marca-passo, controlando a velocidade de vias metablicas. Elas possuem alm do centro ativo, um centro alostrico onde se ligam moduladores da atividade enzimtica. Quando o modulador positivo temos os ativadores alostricos e quando negativos temos os inibidores alostricos. O ciclo de Krebs, por exemplo, das 7 ou 8 enzimas que participam desse ciclo s 3 so alostricas. Elas controlam a velocidade do ciclo de Krebs e consequentemente a cadeia respiratria. Quando a quantidade necessria de ATP for produzida, o excesso de ATP se ligar aos centros alostricos dessas enzimas diminuindo a velocidade do ciclo de Krebs, diminuindo a formao de ATP. Quando se diminui a formao de ATP, o excesso hidrolisado em ADP + Pi. Assim a quantidade de ATP vai baixando e a de ADP subindo, o ADP se ligar ento aos centros alostricos acelerando o cilco de Krebs e consequentemente aumenta a produo de ATP. O modulador positivo, nesse caso, ser o excesso de ADP e o negativo ser o excesso de ATP. Esta regulao ocorre em milissegundos e funciona como
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uma inibio por feedback ou retroalimentao. Ento, essas enzimas so muito importantes na regulao das vias metablicas de um modo geral.
Essas enzimas so muito mais complexas do que as enzimas normais tendo que ter no mnimo 2 subunidades proteicas para serem ativas. Exemplo: fosforilase (4 subunidades proticas). Assim, por ser mais complexa, os primeiros substratos que se ligam tero que desbravar o caminho, ou seja, alterar a conformao do centro ativo realizando rotaes das ligaes covalentes para facilitar a ligao dos prximos substratos. Ento, na presena dos ativadores h um aumento da afinidade (expondo o seu centro ativo) e dos inibidores (dificultando o acesso ao centro ativo) h uma diminuio da afinidade.
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Captulo 6
LIPDEOS
LIPDIOS so biomolculas insolveis em gua, e solveis em solventes orgnicos. Desempenham vrias funes no organismo, entre elas: 1. Reserva de energia 2. Combustvel celular 3. Componente estrutural das membranas biolgicas 4. Isolamento e proteo de rgos A maioria dos lipdios derivada ou possui na sua estrutura, CIDOS GRAXOS. So cidos orgnicos, a maioria de cadeia alquil longa, com mais de 12 carbonos. Esta cadeia alquil pode ser saturada ou insaturada. cidos graxos saturados No possuem duplas ligaes. So geralmente slidos temperatura ambiente. Gorduras de origem animal so geralmente ricas em cidos graxos saturados cidos graxos insaturados Possuem uma ou mais duplas ligaes so mono ou poliinsaturados. So geralmente lquidos temperatura ambiente. A dupla ligao, quando ocorre em um AG natural, sempre do tipo "cis". Os leos de origem vegetal so ricos em AG insaturados. Quando existem mais de uma dupla ligao, estas so sempre separadas por pelo menos 3 carbonos, nunca so adjacentes nem conjugadas. Nomenclatura de cidos Graxos: O nome sistemtico do cido graxo vem do hidrocarboneto correspondente. cidos Graxos Essenciais: O homem capaz de sintetizar muitos tipos de cidos graxos, incluindo os saturados e os monoinsaturados. Os AG poliinsaturados, devem ser obtidos da dieta, pois so sintetizados apenas por
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vegetais. Estes cidos graxos participam como precursores de biomolculas importantes como as PROSTAGLANDINAS, derivadas do cido linoleico e com inmeras funes sobre contratibilidade de msculo liso e modulao de recepo de sinal hormonal. Triacilglieris: Os triacilgliceris so lipdios formados pela ligao de 3 molculas de cidos graxos com o glicerol, um trilcool de 3 carbonos, atravs de ligaes do tipo ster. So tambm chamados de "Gorduras Neutras", ou triglicerdeos. Os cidos graxos que participam da estrutura de um triacilglicerol so geralmente diferentes entre si. A principal funo dos triacilgliceris a de reserva de energia, e so armazenados nas clulas do tecido adiposo, principalmente. So armazenados em uma forma desidratada quase pura. Fornecem por grama aproximadamente o dobro da energia fornecida por carboidratos. Existem ainda os mono e diacilgliceris, derivados do glicerol com um ou dois AG esterificados, respectivamente. Fosfolipdios: Ou "Lipdios Polares", so lipdios que contm fosfato na sua estrutura. Os mais importantes so tambm derivados do glicerol - fosfoglicerdeos - o qual est ligado por uma ponte tipo fosfodister geralmente a uma base nitrogenada, como por exemplo:

Colina Fosfatidilcolina, ou Lecitina Serina Fosfatidilserina Etanolamina Fosfatidiletanolamina
As outras hidroxilas do glicerol esto esterificadas a AG Os fosfoglicerdeos desempenham importante funo na estrutura e funo das membranas biolgicas, pois so claramente anfipticos. Esfingolipdios: So lipdios importantes tambm na estrutura das membranas biolgicas. Formados por uma molcula de cido graxo de cadeia longa, a esfingosina - um aminolcool de cadeia longa - ou um de seus derivados, e uma cabea polar alcolica. Existem 3 subclasses de esfingolipdios: As Esfingomielinas = Possuem a fosfocolina ou a fosfoetanolamina como cabea polar alcolica.
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Os Cerebrosdeos = No possuem fosfato, e sim, um acar simples como lcool polar - so glicoesfingolipdios, ou glicolipdios. Os Gngliosdeos = Possuem estrutura complexa, com cabeas polares muito grandes formadas por vrias unidades de acar como, por exemplo, o cido silico. Esterides: So lipdios que no possuem cidos graxos em sua estrutura. Derivam do anel orgnico Ciclopentanoperidrofenantreno Os esteris - esterides com funo alcolica - so a principal subclasse dos esterides. Destes, o principal exemplo o Colesterol. O colesterol um esteride importante na estrutura das membranas biolgicas, e atua como precursor na biossntese dos esterides biologicamente ativos, como os hormnios esterides e os cidos e sais biliares. O excesso de colesterol no sangue um dos principais fatores de risco para o desenvolvimento de doenas arteriais coronarianas, principalmente o infarto agudo do miocrdio.
Lipoprotenas: So associaes entre protenas e lipdios encontradas na corrente sangunea, e que tem como funo transportar e regular o metabolismo dos lipdios no plasma. A frao protica das lipoprotenas denomina-se Apoprotena, e se divide em 5 classes principais - Apo A, B, C, D e E - e vrias
subclasses. A frao lipdica das lipoprotenas muito varivel, e permite a classificao das mesmas em 5 grupos, de acordo com suas densidades e mobilidade eletrofortica: Quilomcron = a lipoprotena menos densa, transportadora de triacilglicerol exgeno na corrente sangunea. VLDL = "Lipoprotena de Densidade Muito Baixa", transporta triacilglicerol endgeno. IDL = "Lipoprotena de Densidade Intermediria", formada na transformao de VLDL em LDL.
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LDL = "Lipoprotena de Densidade Baixa", a principal transportadora de colesterol; seus nveis aumentados no sangue aumentam o risco de infarto agudo do miocrdio. HDL = "Lipoprotena de Densidade Alta"; atua retirando o colesterol da circulao. Seus nveis aumentados no sangue esto associados a uma diminuio do risco de infarto agudo do miocrdio.
DIGESTO E ABSORO DE LIPDEOS E VITAMINAS

Existem enzimas que s funcionam na presena das vitaminas. Elas funcionam como suas ajudantes, sendo, portanto, essenciais para a realizao das nossas reaes qumicas. Outras vitaminas participam da sntese de macromolculas como, por exemplo, acetilcolina e serotonina, sem as quais no haveria neurotransmissores e as sinapses no ocorreriam, no propagando o impulso nervoso causando a ausncia de resposta a qualquer estmulo (do ambiente ou do prprio organismo). Algumas vitaminas tm um papel importante na coagulao do sangue; outras, como anti-oxidantes ou at mesmo hormnios: desempenham um papel fundamental no nosso organismo. Ainda bem que a concentrao exigida da ordem dos microgramas. As vitaminas tm duas caractersticas: so ou hidrossolveis ou lipossolveis. As lipossolveis (A, D, E e K) so armazenadas no fgado. As hidrossolveis no so armazenadas e, por isso, o excesso eliminado pela urina; ento, tomar 6, 8 ou 10 gramas de vitamina C, por exemplo, seria um desperdcio... Voc ir absorver alguns microgramas e o excesso sair na urina (s em casos patolgicos onde h uso de antibiticos haver carncia de outras vitaminas hidrossolveis, havendo grande uso de vitamina C nas reaes de oxi-reduo). Tiamina: Atua como tiamina pirofosfato nas reaes de oxi-reduo. essencial para a sntese de acetilcolina. Niacina: Atua como NAD ou NADP nas reaes de oxi-reduo. Quando ingerimos um substrato temos como objetivo inicial oxid-lo: Um substrato reduzido torna-se oxidado quando perder hidrognio, que potencial destruidor de membranas celulares e, por isso, no pode ficar livre. H, ento, carreadores para captur-lo. S + E-NAD (a estrutura qumica do NAD impede que ele transporte H2 , por isso, captura um H e o outro vai para o meio aquoso). A vitamina, num ciclo, liga-se enzima,
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recebe seu equipamento de reduo, entrega-o cadeia respiratria, reoxida -se e volta ao incio do ciclo. NAD participa, por exemplo, da gliclise, ciclo de Krebs e o primeiro elemento da cadeia respiratria. Tambm participa da quebra de lipdios para a sntese de ATP. As reaes de oxi-reduo podem ser comandadas pelo NAD. H ainda o NADP, que se liga enzima quando oxidado. Ele usado para a sntese redutora. Exemplos: carboidratos, lipdios, frutose-6-fosfato. Riboflavina: Atua nas formas FAD e FMN nas reaes de oxi-reduo O FAD, que a forma atuante no metabolismo, estar sempre ligado enzima, ao contrrio do NAD e NADP que se separam da enzima no processo. quase um componente eterno da enzima. Sua estrutura fixa permite que ele carreie a molcula de hidrognio (H2 ), sempre ligado enzima, levando-a para seu destino: a cadeia respiratria. Participa do Ciclo de Krebs, da oxidao/quebra dos cidos graxos, do metabolismo dos aminocidos. Com isso, temos vrias fontes de hidrognio para a cadeia respiratria. J a FMN um dos componentes da cadeia respiratria. Piridoxina: Atua como piridoxal fosfato no metabolismo dos aminocido, sntese da serotonina (neurotransmissor) e sntese do heme da hemoglobina. Cobalamina (B12): Atua na sntese da mielina. cido Pantotnico: um dos componentes da coenzima A. Qualquer substrato, para entrar numa via metablica (de oxidao ou de sntese), tem de ser ativado para atingir um patamar energtico superior ao patamar anterior e serem reconhecidas pelas enzimas dessa via metablica. Uma das maneiras unir esta molcula nucleotdeos (ATP, GTP) ou coenzima A, que , portanto, responsvel pelo patamar mais alto de energia de uma molcula que vai participar de uma via metablica. O fosfato tambm ativa molculas. cido Ascrbico: Em excesso, retira Ca+2 dos reservatrios intracelulares, o que pode elevar em excesso os nveis de Ca+2 no sangue, que se acumularia nos rins, levando formao do clculo renal. Efeito semelhante tem o stress sobre o paratormnio. As vitaminas hidrossolveis so obtidas principalmente das bactrias intestinais. Da a importncia de quando houver ingesto de antibiticos, haver reposio artificial de vitaminas, exceo do cido ascrbico. So outras fontes vitamnicas: legumes, frutas, cereais integrais, leite, ovos, peixe, carnes em geral: dieta equilibrada.
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Vitamina K: Pr-pro-trombina tem vrios aminocido na composio mas o cido glutmico o que nos interessa porque, quando ela reage com bicarbonato e vitamina porque o cido glutmico K, se transforma em protrombina
ganhou mais uma molcula de CO2 , virando cido gamacarboxiglutmico.
A importncia da transformao desse aminocido que o carboxiglutmico. capaz de quelar (seqestrar, guardar, unir) o clcio, fundamental para a coagulao. Vitamina E: Famlia dos tocoferis: funciona como antioxidante. Exemplo: Em todas as nossa membranas temos lipdios insaturados, ou seja, com duplas ligaes que interagem com o oxignio e radicais livres, os quais as quebram, tornando estes lipdios saturados. Se o lipdio exercia uma funo, tendo como caracterstica a dupla ligao, agora sendo saturado ele no a exercer mais. A caracterstica de pessoas mais velhas que no cuidam da sade ter na pele muitas manchas marrons, que so, na verdade, lipdios que mudaram sua estrutura pela ao do oxignio e radicais livres. Em linguagem cientfica, o mesmo que ocorre com a manteiga que, se exposta ao ar livre por muito tempo, ransifica-se, ou seja, entra em contato com o oxignio, perde as duplas ligaes, tornando-se saturada e muda de forma (mais mole), funo e gosto. A vitamina E cobre estas estruturas lipdicas e, quando o oxignio e radicais livres chegam, interagem com a vitamina E, mantendo intacto os lipdios de membrana, lipoprotenas e todas as outras estruturas que, por ventura, tenham cidos graxos. A vitamina E , ento, protetora dessas macromolculas. Encontra-se nos leos vegetais (milho e, principalmente, girassol), azeite de oliva e gros integrais. Vitamina D: Na nossa derme h colesterol que automaticamente torna-se mais estvel hidratando-se e formando deidrocolesterol, o qual recebe radiao UV virando colecalciferol. Pensava-se que esta forma fosse a vitamina D ativa, mas observou-se que apenas 72h aps formao dele observava-se vitamina D formada, concluindo-se que nesse prazo, o colecalciferol deveria passar por uma srie de reaes para se tornar vitamina D ativa. A radiao UV no atravessa vidro, ento, receber sol diante da janela fechada no saudvel sob o aspecto da formao de vitamina D. O colecalciferol formado na derme vai ao fgado pela circulao. L h uma enzima, a hidroxilase, a qual ir por uma hidroxila no colecalciferol no carbono 25, tornando-o 25-hidroxi-colecalciferol. Este ir se dirigir ao rim, onde outra hidroxilase acrescentar uma nova hidroxila ao carbono 1, chamando-se 1,25-dihidroxicolecalciferol, que a vitamina D ATIVA!
Quando uma substncia qumica capaz de alterar a atividade, o metabolismo de uma clula, induzindo-a sntese de novas protenas, esta substncia um hormnio. Estas protenas so protenas
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transportadoras e ligadoras de clcio. nvel intestinal, estas protena aumentam a absoro de clcio para a clula e, no osso, haver sada do clcio (chamado de desmineralizao) do osso. Isto acarretar um aumento do nvel de clcio no sangue. O paratormnio, PTH, auxilia a vitamina D nesta atividade, impedindo a sada de clcio via renal. A vitamina D atua mantendo a constante. Se h pouco clcio na dieta alimentar, este sair dos ossos. A calcitonina tem ao oposta, ativando a excreo do clcio e o seu depsito nos ossos. Quando se toma vitamina D para evitar que reaes dependentes do clcio, como a coagulao do sangue e Ca como segundo mensageiro, se interrompam devido a um baixo nvel de Ca no sangue. A participao do Ca nos osso funo mnima. Osteoporose - perda da matriz ssea; osteomalsia - m formao ssea, desintegrao dos ossos por falta de vitamina D, ocorrendo, por exemplo, com mulheres islmicas que esto sempre vestidas no corpo inteiro. Vitamina A: A forma de vitamina A encontrada em todos os vegetais de cor amarela ou laranja o betacaroteno, utilizado como maior anti-oxidante que se tenha conhecimento, inclusive sendo utilizado com auxiliar na preveno de cncer intestinal, provocado pela ao de radicais livres produzidos. Na mucosa intestinal h uma enzima, a oxigenase, que, em presena de ferro e oxignio, quebra o betacaroteno em duas molculas de retinol. O retinol um lcool e pode seguir vrios caminhos: O retinol origina retinil palmitato, que um cido graxo (lipdio), sendo estocado no fgado. O retinol pode receber um grupamento fosfato, virando retinil-fosfato. O retinol ainda pode ser oxidado, via NAD, transformando-se em retinal que poder virar cido retinico. Vitamina A polivalente porque ativa sob 4 formas: cido retinico, retinil fosfato, betacaroteno e retinol. Retinol e o cido retinico so hormnios que atuam ligando-se ao DNA das clulas epiteliais e gonadais, induzindo o crescimento e diferenciao celular destes tecidos. Antigamente, atribuia-se isto vitamina E, mas hoje se sabe que no. Retinil-fosfato serve para a sntese de mucopolissacardeos, cuja base qumica so as glicoprotenas. Este mucopolissacardeo um dos componentes da mucosa, hidratando-a. Sua carncia leva pele spera, propensa a rachaduras, que pode ocasionar infeco bacteriana ou virtica. Isto extende-se a outras mucosas, com boca e olhos, onde o ressecamento com subsequente queratinizao e infeco levam cegueira noturna ou at mesmo total. O retinal se junta a opsina para formao do nosso pigmento fotossensvel, a rodopsina. Quando um fton de luz incide sobre a rodopsina, h separao da parte vitamnica da parte protica, modificando o potencial, liberando clcio e transmitindo um impulso nervoso que no centro ptico leva formao da imagem. A falta de retinal leva cegueira noturna (nictalopia). Apesar da identificao de uma
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lipase lingual secretada pelas clulas da base da lngua, no h a digesto salivar dos lipdios devido a no haver um refluxo para a boca. Dessa forma, a identificao de uma lipase gstrica provavelmente corresponde quela secretada pela lngua. Porm, o pH extremamente cido do estmago no possibilita a ao integral desta lipase gstrica, diminuindo a velocidade de sua ao enzimtica, havendo apenas a quebra de algumas ligaes de steres de cidos graxos de cadeia curta. Em crianas lactentes, entretanto, o pH gstrico aproxima-se bastante da neutralidade o que indica que a lipase gstrica pode ter ao na digesto das gorduras do leite. Mesmo assim, esta digesto no eficiente devido s gorduras no estarem emulsificadas, o que dificulta a ao desta enzima hidroltica. A ao gstrica na digesto dos lipdios, portanto, est relacionada com os movimentos peristlticos do estmago, produzindo uma emulsificao dos lipdios, dispersando-os de maneira equivalente pelo bolo alimentar. A chegada do bolo alimentar acidificado no duodeno induz a liberao hormnio digestivo colecistocinina (um peptdeo de 33 aminocidos, tambm denominado pancreozimina) que, por sua vez, promove a contrao da vescula biliar, liberando a bile para o duodeno. Os cidos biliares so derivados do colesterol e sintetizados no fgado. So denominados primrios (cido clico, tauroclico, glicoclico, quenodesoxiclico e seus derivados) quando excretados no duodeno, sendo convertidos em secundrios (desoxiclico e litoclico) por ao das bactrias intestinais. A bile, ainda, excreta o colesterol sanguneo em excesso, juntamente com a bilirrubina (produto final da degradao da hemoglobina). A colecistocinina possui, ainda, funo de estmulo do pncreas para a liberao do suco pancretico, juntamente com outro hormnio liberado pelo duodeno, a secretina. O suco pancretico possui vrias enzimas digestivas (principalmente proteases e carboidratases) sendo a lipase pancretica a
responsvel pela hidrlise das ligaes steres dos lipdios liberando grande quantidades de colesterol, cidos graxos, glicerol e algumas molculas de mono-acil-gliceris. Os lipdios livres so, ento, emulsificados pelos sais biliares em micelas e absorvidos pela mucosa intestinal que promove a liberao da poro polar hidrfila (sais biliares) para a circulao porta heptica e um processo de ressntese dos lipdios absorvidos com a formao de novas molculas de tri-acil-gliceris e steres de colesterol, que so adicionados de uma protena (apo-protena 48, ou apo-48) formando a lipoprotena quilimocron, que absorvida pelo ducto linftico abdominal, seguindo para o duto linftico torcico e liberada na circulao sangnea ao nvel da veia jugular.
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VITAMINAS
FUNO VITAMINAS B1 TIAMINA FORMA ATIVA Tiamina-Pirofosfato (TPP) BIOQUMICA Coenzima na descarboxilao oxidativa de alfacetocidos B2 RIBOFLAVINA Componente de FAD e FMN Coenzima de transferncia de hidrognio B3 NICOTINAMIDA Componente do NAD e NADP Coenzima de transferncia de Hidrognio B5 CIDO PANTOTNICO B6 PIRIDOXINA Piridoxal Fosfato (PALP) Transaminao descarboxilao de aminocidos B12 CIANOCOBALAMINA BIOTINA (H) Coenzima B12 (desoxiadenosilcobalamida) Biocitina ou Biotinilisina Cofator de reaes de metilao Transporte de grupos CO2 cido tetrahidroflico Transferncia de grupos Componente da Co-A Transferncia de grupos acil e acetil
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CIDO FLICO
(THF)
formil (sntese nucleotdica)
VITAMINA C CIDO ASCRBICO VITAMINA A RETINOL VITAMINA D COLECALCIFEROL VITAMINA E alfa -TOCOFEROL
No precisa ser ativado para exercer sua funo 11-cis-retinal
Cofator em reaes de hidroxilao Regula ciclo visual
1,25 diidroxi-colecalciferol
Regula Ca2+ plasmtico
No precisa ser ativado
Antioxidante (lipdios insaturados)
VITAMINA K 2-metil-1,4naftoquinoina
No precisa ser ativado para exercer sua funo
Sntese heptica da protrombina e fatores da coagulao sangnea
L-ACETIL-CARNINTINA
L-Acetil-Carnitina
uma
substncia
que
ocorre
naturalmente
no
organismo,
produzida
principalmente no processo de queima de gordura. As triglicrides (reservas de gordura dentro das clulas adiposas) so hidrolisadas a cidos graxos e liberados para a corrente sangunea, da entram na matriz mitocondrial coma ajuda da L-Acetil-Carnitina para serem oxidados. Na beta-oxidao ocorre formao de radicais acetil e, para efeito de regulamento do balano Acetil-CoA/CoA, o seu excesso tamponado com a L-Carnitina (carregador), formando a L-Acetil-Carnitina. Efeitos da L-Acetil-Carnitina: Melhora o desempenho fsico: a L-Acetil-Carnitina um agente colinomimtico, sendo ento capaz de se ligar ao receptor da acetilcolina. A acetilcolina um neuro-transmissor envolvido principalmente na conduo de estmulo da contrao muscular. Com a administrao da L-Acetil-Carnitina, teremos
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uma melhora na conduo do impulso nervoso nas sinapses de caracterstica colinrgica, como pr exemplo na conduo do estmulo para a contrao muscular.
Doena de Alzheimer: uma das causas da doena um distrbio no sistema colinrgico cerebral. Pelo fato da L-Acetil-Carnitina ser colinomimtica, ela repara parcialmente esse distrbio dando uma melhora nos sintomas da doena, como demncia, inteligncia lgica, habilidade crtica verbal(senso crtico), memrias verbais de longo termo, ateno seletiva.
Reinervao muscular: regenerao de nervos lesionados e a remodelagem da juno neuro-muscular distrofia muscular progressiva e esclerose mltipla.
Efeito anti-depressivo: quanto maior o sintoma clnico da depresso, melhor ser o efeito da L-AcetilCarnitina. No estado depressivo, ocorre uma somatizao em relao ao sistema cardio-vascular, que eliminada ou diminuda coma L-Acetil-Carnitina.
Isquemia cerebral: numa condio de isquemia cerebral, a protena oxidada como fonte de energia. Com a administrao da L-Acetil-Carnitina, ocorre melhora do metabolismo energtico cerebral, sendo a L-Acetil-Carnitina utilizada no suprimento de energia, poupando as protenas.
Fluxo sanguneo cerebral: melhora o fluxo sanguneo cerebral em pacientes com infarto cerebral crnico.
Anti-radicais: ao anti-radicais livres, indireta, por inibir a peroxidao lipdica.
Envelhecimento: o envelhecimento est associado coma reduo da populao de stios de ligao de glutamato-N-metil-d-aspartato sensveis no hipocampo (regio do crebro); diminuindo essa populao, acelera-se o processo de envelhecimento. A L-Acetil-Carnitina bloqueia essa diminuio em idosos. Diabetes: ameniza os efeitos da neuropatia autonmica e melhora a acuidade visual afetada pelo diabetes.
A L-Acetil-Carnitina melhora o humor, a disposio, o condicionamento crdio-vascular, a astenia. Durante o exerccio fsico, ocorre maior oxidao de gordura e conseqentemente maior produo de
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L-Acetil-Carnitina, que como resultado temos essas melhoras. Usando a L-Acetil-Carnitina, temos esses resultados sem fazer o exerccio.
Dosagem: a dose usual 1,5g/dia. Sugere-se o uso de cpsulas de 500mg 3 vezes ao dia. A dosagem pode variar conforme a indicao. Nas dosagens teraputicas no existem efeitos colaterais.
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Captulo 7
CARBOIDRATOS
Os carboidratos so as biomolculas mais abundantes na natureza. Para muitos carboidratos, a frmula geral : [C(H2 O)]n , da o nome "carboidrato", ou "hidratos de carbono". So molculas que desempenham uma ampla variedade de funes, entre elas: Fonte de energia Reserva de energia Estrutural Matria prima para a biossntese de outras biomolculas
Monossacardeos: So os carboidratos mais simples, dos quais derivam todas as outras classes. Quimicamente So polihidroxialdedos (ou aldoses) - ou polihidroxicetonas (ou cetoses), sendo os mais simples monossacardeos compostos com no mnimo trs carbonos: O Gliceraldedo e a Dihidroxicetona. Feita exceo dihidroxicetona, todos os outros monossacardeos - e por extenso, todos os outros carboidratos - possuem centros de assimetria (ou quirais), e fazem isomeria ptica. A classificao dos monossacardeos tambm pode ser baseada no nmero de carbonos de suas molculas; assim sendo, as TRIOSES so os mais simples, seguidos das TETROSES, PENTOSES, HEXOSES, HEPTOSES. Destes, os mais importantes so as Pentoses e as Hexoses. As pentoses mais importantes so:
Ribose Arabinose Xilose

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As hexoses mais importantes so:

Glicose Galactose Manose Frutose
Monossacardeos em Soluo Aquosa: Os monossacardeos em soluo aquosa esto presentes na sua forma aberta em uma proporo de apenas 0,02%. O restante das molculas est ciclizada na forma de um anel hemiacetal de 5 ou de 6 vrtices. O anel de cinco vrtices chamado de anel furanosdico. O anel de 6 vrtices chamado de anel piranosdico. Na estrutura do anel, o carbono onde ocorre a formao do hemiacetal denominado "Carbono Anomrico", e sua hidroxila pode assumir duas formas: Alfa Quando ela fica para baixo do plano do anel Beta Quando ela fica para cima do plano do anel A interconverso entre estas formas dinmica e denomina-se Mutarrotao. Exemplo: Para a molcula da glicose, em soluo aquosa, temos as seguintes propores: beta - D - Glicopiranose: 62% alfa - D - Glicopiranose: 38% alfa - D - Glicofuranose: menos de 0,5% beta - D - Glicofuranose: menos de 0,5% Forma aberta: menos de 0,02% Monossacardeos Epmeros So monossacardeos que diferem entre si na posio de apenas uma hidroxila. Exemplos: Glicose e Galactose so epmeros em C4
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Glicose e Manose so epmeros em C2
Dissacardeos: So carboidratos ditos Glicosdeos, pois so formados a partir da ligao de dois monossacardeos atravs de ligaes especiais denominadas "Ligaes Glicosdicas". A Ligao Glicosdica Ocorre entre o carbono anomrico de um monossacardeo e qualquer outro carbono do monossacardeo seguinte, atravs de suas hidroxilas e com a sada de uma molcula de gua. Os glicosdeos podem ser formados tambm pela ligao de um carboidrato a uma estrutura nocarboidrato, como uma protena, por exemplo. O tipo de ligao glicosdica definido pelos carbonos envolvidos e pelas configuraes de suas hidroxilas. Exemplos: Na Maltose Gli alfa (1,4)-Gli Sacarose Gli alfa (1,2)-beta Fru e Lactose Gal beta (1,4)-Gli Polissacardeos: So os carboidratos complexos, macromolculas formadas por milhares de unidades monossacardicas ligadas entre si por ligaes glicosdicas. Os polissacardeos mais importantes: O Amido: o polissacardeo de reserva da clula vegetal. Formado por molculas de glicose ligadas entre si atravs de numerosas ligaes alfa (1,4) e poucas ligaes alfa (1,6), ou "pontos de ramificao" da cadeia. Sua molcula muito linear, e forma hlice em soluo aquosa. O Glicognio: o polissacardeo de reserva da clula animal. Muito semelhante ao amido, possui um nmero bem maior de ligaes alfa (1,6), o que confere um alto grau de ramificao a sua molcula. Os vrios pontos de ramificao constituem um importante impedimento formao de uma estrutura em hlice. A Celulose:
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o carboidrato mais abundante na natureza. Possui funo estrutural na clula vegetal, como um componente importante da parede celular. Semelhante ao amido e ao glicognio em composio, a celulose tambm um polmero de glicose, mas formada por ligaes tipo beta (1,4). Este tipo de ligao glicosdica confere molcula uma estrutura espacial muito linear, que forma fibras insolveis em gua e no digerveis pelo ser humano. Os carboidratos mais simples so denominados monossacardeos, possuindo pelo menos um tomo de carbono assimtrico que caracteriza a regio denominada centro quiral, pois fornece ismeros pticos. Possuem de 3 a 8 carbonos, sendo denominados, respectivamente, trioses, tetroses, pentoses, hexoses, heptoses e octoses. Os monossacardeos de ocorrncia natural mais comum, como a ribose (5C), glicose (6C), frutose (6C) e manose (6C), existem como hemiacetais de cadeia cclica (e no na forma linear), quer na formas de furanose (um anel de 5 elementos, menos estvel) ou de piranose (um anel de 6 elementos, mais estvel). Esta forma cclica (hemiacetal), resulta da reao intramolecular entre o grupamento funcional (C1 nas aldoses e C2 nas cetoses) e um dos carbonos hidroxilados do restante da molcula (C4 na furanose e C5 na piranose), ocorrendo nas formas isomricas a e b (cis ou trans), conforme a posio da hidroxila do C2 em relao hidroxila do C1. Tais formas so interconvertidas atravs do fenmeno da mutarrotao.
CARBOIDRATOS: VIAS ESPECIAIS
Alm das vias clssicas de produo de energia, existem vrios outros processos metablicos envolvendo carboidratos, e com diferentes objetivos: A Via das Pentoses Fosfato Produz NADP reduzido e pentoses para serem utilizadas pela clula em vias de biossntese, por exemplo. As vias de interconverso entre acares So numerosas vias de produo de
monossacardeos a partir principalmente da glicose.
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metabolismo
de
carboidratos
complexos
de
macromolculas
Polissacardeos,
Glicoprotenas e as Proteoglicanas, por exemplo. A Via das Pentoses Fosfato: Via em duas etapas que garante a produo de equivalentes redutores na forma de NADPH2 , e a produo de pentoses a partir da glicose. Primeira Etapa: Oxidao da Glicose-6-Fosfato: Ocorre no citossol, sendo, portanto, independente da mitocndria e das enzimas do Ciclo de Krebs. Tem como objetivo a produo de equivalentes redutores para as vias anablicas de biossntese. Glicose-6-Fosfato 6-Fosfogluconolactona 6-Fosfogluconato Ribulose-6-Fosfato + CO2 Ribose-6-Fosfato
A Glicose-6-Fosfato Desidrogenase, ou G-6-P dsd, a enzima chave do processo, e reguladora da via. Sua deficincia est relacionada a um severo tipo de anemia hemoltica. Em certas condies metablicas, a via termina neste ponto, com produo de NADH reduzido e Ribose-5-Fosfato para a sntese de nucleotdeos. Segunda Etapa: Interconverso de Pentoses-Fosfato:
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Em algumas clulas, mais NADP reduzido necessrio do que Ribose-5-Fosfato. Nestes casos, um sistema de rearranjo entre acares ativado. Este sistema permite a sntese de trioses, pentoses, hexoses, heptoses, todos processos interligados, alm de servir como um "link" reversvel entre a via das pentoses fosfato e a cadeia glicoltica. Assim, um possvel excesso de ribose-5-fosfato pode ser convertido em intermedirios da cadeia glicolticafrutose-6-fosfato e gliceraldedo-3-fosfato, e ser utilizado para a produo de ATP. O processo pode repetir-se ciclicamente, envolvendo seis molculas de glicose-6-fosfato, com liberao de 12 NADPH2 , e resultando em um balano lquido de oxidao total da glicose e liberao de 6 CO2 . O NADPH2 produzido: Como no pode ser reoxidado na Cadeia Respiratria, o NADPH2 produzido nesta via utilizado como transportador principal de eltrons para as vias anablicas que os utilizam em reaes de reduo. A manuteno da integridade das membranas dos eritrcitos, a biossntese de cidos graxos e de esterides so exemplos de vias anablicas que dependem do NADPH2 . A Interconverso entre Acares e a Formao de Nucleotdeos: A maioria dos monossacardeos encontrados na clula pode ser sintetizada a partir da glicose, atravs de uma srie complexa de reaes bioqumicas. Estas reaes muitas vezes envolvem a formao de nucleotdeos associados a carboidratos - tais como a UDP-Gli, UDP-Gal, GDP-Man. As reaes mais comuns so: Isomerizao e Fosforilao: Permitem a formao de monossacardeos a partir da glicose de maneira direta. Como exemplos temos a converso de Gli-6-P em Fru-6-P, a converso de Fru-6-P em Man-6-P e a modificao da posio do fosfato na mesma molcula, como na converso da Gli-1-P em Gli-6-P. Epimerizao: um tipo muito comum de reao de converso entre carboidratos. Depende da formao de um intermedirio ligado a um nucleotdeo, como por exemplo, a UDP-Gli e a UDP-Gal. A converso mais comum envolve estes dois monossacardeos-nucleotdeos: UDP-Gli + Gal-1-P UDP-Gal + Gli-1-P
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A enzima catalizadora desta reao a Galactose-1-P Uridil Transferase, e est ausente nos pacientes com Galactosemia Clssica, uma doena gentica que leva ao surgimento de catarata, de leses neurolgicas e falncia heptica. Oxidao: A oxidao da UDP-Gli leva formao do Glicurnico, um precursor do Ascrbico em animais que sintetizam esta vitamina, e da L-Xilose, por descarboxilao. UDP-Gli + 2 NAD+ UDP-c. Glic. + 2 NADH + 2 H+ O homem, assim como outros primatas e a cobaia no possuem uma das enzimas que converte o cido glicurnico em cido ascrbico, e necessita desta vitamina na dieta. Descarboxilao e Transaminao: A nica via de descarboxilao conhecida de um acar-nucleotdeo a de formao de UDP-Xilose a partir do UDP-cido. Glicurnico. A UDP-Xilose necessria sntese de proteoglicanas. Reaes de transaminao com formao de aminoacares so importantes pois, estes so precursores da sntese de muitos oligo e polissacardeos. Exemplos: A formao de Glicosamina-6-P pela reao entre a Fru6-P com a Glutamina: Fru-6-P + Glutamina Glutamato + Glicosamina-6-P A reao catalisada por uma transamidase. Um outro produto da converso da N-Acetilglicosamina o cido Acetilneuramnico, um acar de 9 carbonos da famlia dos cidos Silicos. Biossntese de Carboidratos Complexos: Carboidratos complexos so oligo ou polissacardeos formados sempre a partir de um mecanismo em comum. Neste mecaninsmo, a ligao glicosdica formada pela doao do resduo glicosil de um acar-nucleotdeo para um acar aceptor. Exemplo (onde NDP um nucleosdeo difosfato): NDP-Gli + Gli Glicosil-O-Glicose + NDP A reao catalisada por uma glicosiltransferase especfica. Existem pelo menos 55 tipos diferentes de ligao glicosdica, o que sugere uma grande variedade de compostos possveis e uma possvel funo
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informacional para estas molculas. Sabe-se, por exemplo que a especificidade de muitas biomolculas se deve ao seu contedo em carboidratos. A especificidade imunohematolgica, por exemplo, se deve a acares. N-Acetilglicosamina o acar determinante do tipo sanguneo "A", e Galactose, do tipo "B"; A remoo destes resduos da membrana dos eritrcitos os converte em tipo "O". Glicoprotenas: So macromolculas formadas por uma frao predominante protica cujo grupo prosttico um ou mais carboidratos. A porcentagem de carboidrato nas glicoprotenas muito varivel, indo de 4 a 80 %. Estes carboidratos podem estar distribudos ao longo de toda a protena, ou concentrados em algumas regies da molcula. Em diferentes espcies, muitas vezes protenas homlogas possuem idnticas estruturas proticas primrias, mas diferem entre si na composio em carboidratos. As glicoprotenas exercem variadas e importantes funes na clula humana, como protenas de membrana, protenas de exportao ao meio extracelular, hormnios, etc. A ligao entre carboidratos e protenas se d por ligaes N-glicosil ou O-glicosil, ligaes covalentes de 3 tipos principais: Ligao N-glicosil com a Asparagina Ligao O-glicosil com a Serina ou Treonina Ligao O-glicosil com a Hidroxilisina Proteoglicanas: Antigamente chamadas de Mucopolissacardeos, so macromolculas que diferem das glicoprotenas por conterem 95% ou mais de carboidratos em relao a protenas em suas estruturas. Estas molculas possuem, portanto propriedades mais prximas dos polissacardeos do que das protenas. A frao carboidrato destas molculas chamada Glicosaminoglicanas As proteoglicanas so polinions formados por um ncleo protico ao qual se ligam muitas glicosaminoglicanas diferentes. Estas glicosaminoglicanas so formadas sempre por longas cadeias no ramificadas de unidades repetitivas de dissacardeos, geralmente uma hexosamina e um cido urnico, e so freqentemente sulfatadas. Entre as funes das proteoglicanas esto a lubrificao e sustentao de tecido conjuntivo e seus elementos celulares, receptores celulares para fatores de
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crescimento, protenas transportadoras e vrus, e efeito anticoagulante, no caso da heparina. Principais tipos: O Hialuronato Estrutura mais simples Os Condroitin Sulfatos Mais abundantes Os Dermatan Sulfatos Tm efeito antitromboltico A Heparina um potente anticoagulante natural O Heparan Sulfato O Queratan Sulfato A biossntese das proteoglicanas depende da sntese do ncleo protico, seguida da adio da frao carboidrato. A degradao depende da atividade de glicosidases e proteases. Defeitos nesta degradao leva a um quadro de Mucopolissacaridose, geneticamente caracterizada por um acmulo de oligossacardeos de proteoglicanas.
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Captulo 8
VISO GERAL DO METABOLISMO

Metabolismo: conjunto de reaes qumicas que acontecem dentro das clulas dos organismos vivos, para que estes transformem energia, conservem sua identidade e se reproduzam. Todas as formas de vida, desde as algas unicelulares at os mamferos, dependem da realizao simultnea de centenas de reaes metablicas, reguladas com absoluta preciso, desde o nascimento e a maturao at a morte. Anabolismo e catabolismo: existem dois grandes processos metablicos: anabolismo ou biossntese e catabolismo. Chama-se anabolismo, ou metabolismo construtivo, o conjunto das reaes de sntese necessrias para o crescimento de novas clulas e a manuteno de todos os tecidos. O catabolismo, ou metabolismo destrutivo um processo contnuo, centrado na produo da energia necessria para a realizao de todas as atividades fsicas externas e internas.
O catabolismo engloba tambm a manuteno da temperatura corporal e implica a quebra das molculas qumicas complexas em substncias mais simples, que constituem os produtos excretados pelo corpo, atravs dos rins, do intestino, dos pulmes e da pele. Fontes de energia metablica: os carboidratos, gorduras e protenas so produtos de alto contedo energtico ingerido pelos animais, para os quais constituem a nica fonte energtica e de compostos qumicos para a construo de clulas. Estes compostos seguem rotas metablicas diferentes, que tm como finalidade produzir compostos finais especficos e essenciais para a vida.
METABOLISMO E TRANSPORTADORES DE ENERGIA

Princpio Geral do Metabolismo Energtico: "O catabolismo libera a energia que ser utilizada no anabolismo"
Como Ocorre o Transporte de Energia?
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o o
A energia utilizada pela clula Energia Qumica Esta energia qumica pode se apresentar de duas formas:

Na forma de pares de eltrons do tomo de hidrognio Na forma de compostos fosfatados
Transportadores de Eltrons: Em termos energticos, eltron equivale energia para a clula. Logo, reaes de oxidao que liberam eltrons so catablicas, pois liberam energia, e reaes de reduo so anablicas, pois utilizam eltrons/energia. Os principais transportadores de eltrons na clula so trs, e funcionam de maneira muito parecida: Nicotinamida Adenina Dinucleotdeo NAD: Coenzima formada por um dinucleotdeo contendo adenina, capaz de aceitar um par de eltrons do tomo de hidrognio no catabolismo, e liberar este par de eltrons para ser utilizado no anabolismo. A reao de oxi-reduo do NAD: NAD+ + 2 e- + 2 H+ NADH+H+ Forma Oxidada Forma Reduzida
Flavina-Adenina-Dinucleotdeo FAD Nucleotdeo de adenina como o NAD, atua de maneira idntica, reduzindo-se no catabolismo e oxidando no anabolismo. Reao de oxi-reduo do FAD: FAD + 2 e- + 2 H+ FADH2
Nicotinamida Adenina Dinucleotdeo Fosfato NADP: Muito semelhante ao NAD, possui um fosfato a mais na sua estrutura; atua de forma idntica ao NAD. Sua reao de oxi-reduo : NADP + 2 e- + 2 H+ NADPH2
Transportadores Fosfatados de Alta Energia:

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O principal composto fosfatado de alta energia presente na clula, e que tambm o principal transportador de energia, a ADENOSINA TRIFOSFATO ou ATP. Alm deste, a Fosfocreatina tambm desempenha papel importante no metabolismo energtico. Adenosina Trifosfato: ATP: um mononucleotdeo de adenina trifosfatado, que por hidrlise, libera grande quantidade de energia para a clula. Termodinamicamente: ATP ADP + Pi G = - 7,3 Kcal/Mol
O ATP pode ser hidrolisado, em determinadas condies, a AMP + PPi, mas a energia liberada no processo quase na mesma quantidade que a hidrlise acima!! A energia liberada pelo catabolismo utilizada na sntese do ATP, que a transporta ao anabolismo, onde esta liberada pela hidrlise do ATP a ADP + Pi. Fosfocreatina: Presente no msculo estriado e no tecido nervoso, principalmente, este composto fosfatado de alta energia atua como uma reserva de grupos fosfato, na regenerao rpida do ATP: A Reao: Fosfocreatina + ADP Creatina + ATP
A enzima que catalisa a reao a Creatino-Fosfotransferase, ou Creatinoquinase CPK ou CICLO DE KREBS.
Outros Nucleotdeos Trifosfatados: Os nucleotdeos GTP, CTP, UTP e TTP tambm podem atuar como transportadores de energia, de forma idntica ao ATP, mas com muito menos freqncia.
O Metabolismo Celular um conjunto altamente organizado e complexo de reaes bioqumicas, catalisadas e reguladas por enzimas. Estas reaes se organizam em seqncias enzimticas denominadas VIAS METABLICAS O metabolismo celular, apesar de ser muito complexo, possui vias metablicas centrais.
Esquematicamente:
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E1
E2
E3
E4
E5
ABCDEP
As vias metablicas podem ser didaticamente divididas em duas classes: 1. Vias Anablicas 2. Vias Catablicas 1. Vias Anablicas: So biossintetizantes e divergentes Ocorrem com utilizao de energia (so no-espontneas) Seguem trs etapas: a) Compostos simples Precursores b) Precursores Unidades Fundamentais c) Unidades Fundamentais Macromolculas Vias Catablicas: Trs caractersticas bsicas: So degradativas e convergentes Ocorrem com liberao de energia (so espontneas) Seguem trs etapas: a) Macromolculas Unidades Fundamentais b) Unidades Fundamentais Produtos Comuns c) Produtos Comuns Produtos Finais
Vias Anablicas e Catablicas Correspondentes:
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Existem na clula vias anablicas e catablicas correspondentes, muito parecidas entre si, mas com as etapas enzimticas com o sentido da reao trocado. No entanto, sempre existem diferenas em pelo menos uma destas etapas. Compartimentalizao Celular Viabilidade Energtica: Muita vezes, a simples inverso do sentido da reao no possvel por ser a reao no, sentido do anabolismo, energeticamente invivel para a clula.
METABOLISMO DEGRADAO
DO
GLICOGNIO
E DE
MECANISMOS
DA
OXIDATIVA
CARBOIDRATOS
(RESPIRAO CELULAR)
Metabolismo do glicognio
Por que estudar a sntese e degradao do glicognio? Por ser a principal forma de reserva de glicose dos animais. Pode ser sintetizado na maioria dos tecidos apesar de quantitativamente, ter importncia em dois basicamente: o tecido estriado esqueltico e o heptico. Outros tecidos que tenham a capacidade de armazenar glicose sob forma de glicognio, se o fazem, em quantidade desprezvel para a prpria clula e para o organismo. Mesmo sendo os tecidos heptico e muscular capazes de armazenar glicognio, sob o ponto de vista qualitativo e fisiolgico mais importante faz-lo no fgado do que nas clulas musculares. Nominalmente, a quantidade de glicognio do fgado muito maior do que das clulas musculares, mas tambm preciso levar-se em conta que a massa de tecido muscular muito maior. Relativamente s clulas do fgado armazenam muito mais. Sob o aspecto fisiolgico, o fgado o rgo nobre do metabolismo celular, o centro nervoso do metabolismo celular, de forma que armazenar glicose sob forma de glicognio no fgado extremamente importante porque neste h uma enzima a glicose-6-fosfatase (que tambm existe nas clulas renais e intestinais)
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capaz de catalisar a reao de transformao de glicose-6-fosfato em glicose livre que a aprisiona no meio intracelular11 .
O fgado, ento, capaz de armazenar glicose sob a forma de glicognio para uma posterior utilizao quando, degradando os seus depsitos de glicognio e utilizando-se da enzima glicose-6-fosfatase pode liber-la no meio extracelular, sustentar os outros tecidos, mantendo o equilbrio hiperglicemia e hipoglicemia. O fgado tem esse papel por que consegue armazenar maior quantidade relativa e porque possua enzima que libera a glicose para a circulao. Ao contrrio, a musculatura esqueltica capaz de armazenar uma quantidade bruta de glicose, maior do que o fgado, no entanto, essa no possui glicose-6-fosfatase. O msculo precisa muito da glicose, de forma que no pode armazen-la. Ela o seu combustvel mais facilmente mobilizvel. Por que, ento estudar o metabolismo do glicognio? Por que a principal forma de reserva de glicose nos animais. Por que principalmente depositrio da glicose nas clulas musculares e no fgado. Por que fgado por sintetizar a maior quantidade do glicognio e por conter a enzima que catalisa a transformao da glicose-6 em glicose livre, alimenta de glicose os tecidos entre as refeies. Armazena na hiperglicemia e libera na hipoglicemia.
O msculo no faz isso, por que ele armazena para a sua prpria utilizao. A glicose que entra na clula muscular ser obrigatoriamente oxidada. Na clula renal h a tal enzima, mas essa no tem importncia na manuteno da glicemia A cl do intestino interfere na glicemia, pois possui a enzima depois que h a absoro dos nutrientes ela precisa utiliz-la para liberao da glicose na circulao. Degradao do glicognio ou glicogenlise
Ns ingerimos na alimentao vrias formas de glicdios, principalmente o amido que degradado em glicose e entra na clula intestinal, sofre a ao da glicoquinase e da hexoquinase12 que a transforma em glicose-6-fosfato, que sob a ao d outra enzima, glicose 6 fosfato, sai da clula e cai na corrente. No fgado, sob a presena de hexoquinase e glicoquinase a se acumula at atingir o excesso quando passa a se produzir glicognio, que um depositrio momentneo podendo ser degradado. Outra via a gliclise, sua oxidao. Por ltimo tm-se uma via alternativa de oxidao no to importante quanto a gliclise: via das pentoses.
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Como as clulas nervosas, que vivem essencialmente do metabolismo da glicose, viveriam no intervalo entre as refeies? Vale uma discusso... 12 Enzimas dependentes do on magnsio (Mg ++)
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A gliclise tem a utilidade de produzir ATP, principal forma de conservao de energia no meio intracelular de forma que, degradar o glicognio, significa aumentar os nveis de ATP intracelular. Altas concentraes de ATP significam tendncia a polimerizao da glicose para posterior utilizao. Parte qumica e regulao hormonal
1) Glicogenlise
O glicognio formado basicamente por ligaes glicosdicas do tipo alfa-1,4.
Ligao glicosdica a s ada de uma molcula de gua e a formao de uma ponte de oxignio entre os carbonos 1 e 4. Alfa porque a hidroxila (estrutura M acetlica) est direita. E as ramificaes so iniciadas com um carbono alfa 1, 6 seguido de ligaes alfa 1, 4. Assim, as enzimas que devem estar presentes para a degradao do glicognio devem atuar basicamente nas ligaes alfa 1,6 e alfa 1,4. Por outro lado, para a polimerizao do glicognio a mesma especificidade de enzimas sero necessrias (para alfa 1,4 e alfa 1,6). A principal enzima para a degradao do glicognio para as
ligaes alfa 1,4, alfa glicognio fosforilase ou somente fosforilase, mas essa enzima possui uma especificidade refinada, de forma que s atua nas ligaes alfa 1,4 que estejam at quatro unidades de glicose do ponto de ramificao. uma enzima que catalisa a hidrlise (fosforlise) do polissacardeo (nas ligaes alfa 1,4) com a introduo de um cido fosfrico (H3 PO4 ) ou fosfato inorgnico P tendo i como produto a glicose 1 fosfato cujo caminho metablico ser se transformar em glicose 6 fosfato pela fosfoglicomutase que um enzima dependente do magnsio (Mg++). Agora, no fgado, a molcula de glicose-6-fosfato pode ser transformada em glicose livre pela glicose6-fosfatase. Mas temos ainda uma cadeia de glicose com as ramificaes e quatro subunidades de glicose ao lado de cada molcula de glicose alfa 1,6, porm a enzima que catalisa a fosforlise da molcula alfa 1,6 s atua quando as molculas envolvidas no esto ligadas a outras subunidades. Para solucionar esse problema, temos uma enzima que faz a transferncia das molculas de glicose ligadas em alfa 1,6 para outras cadeias. Esta enzima uma transferase ou enzima desramificante. Esta uma enzima multifuncional, possuindo dois centros ativos em uma nica cadeia polipepontodica
(subunidade protica) sem que se trate de uma enzima alostrica. Um centro ativo responsvel pela transferncia das trs subunidades de glicose ao lado da ligao alfa 1,6 para a estrutura linear ou qualquer outra ramificao de forma que seja catalisada a fosforlise dessa ligao pelo outro centro ativo quando a enzima assume o nome de alfa 1,6-glicosidase.
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/ Resumindo: com a ao da fosforilase tivemos a obteno de glicose-1-fosfato e uma molcula de glicognio reduzida com vrias ramificaes do tipo alfa 1,6 ligadas a trs monmeros de glicose. Para que atue a alfa 1,6 glicosidase necessria a transferncia das sub unidades de trs carbonos para qualquer outra cadeia pela transferase (enzima desramificante) quando, ento a alfa 1,6 glicosidase pode agir. Todo esse processo de catlise realizado por uma mesma enzima que possui dois centros ativos. O controle fino do metabolismo do glicognio a glicemia: hipoglicemia e hiperglicemia que no necessariamente representam doena,podendo ser apenas fisiolgico13 .
2) Glicognese ou Sntese do Glicognio
O excesso de glicose tende a ser armazenado sob a forma de glicognio para isso, a glicose intracelular (glicose-6-fosfato) deve ser transformada em glicose-1-fosfato, que o monmero do glicognio pela ao da fosfoglicomutase, na presena de Mg++, porm notou-se que a presena de glicose-1-fosfato no era o suficiente para a formao do glicognio, o UTP (uridina tri fosfato) era fundamental nesse processo, sem a qual o processo no ocorre. O seu papel se ligar com a glicose, formando o UDPG, e ser seu carreador, um intermedirio que vai liberar a glicose quando for formar o glicognio. Da reao entre a glicose-1-fosfato e o UTP catalisada pela UDPG pirofosforilase temos como subprodutos o UDPG e PPi , o pirofosfato, que ira se quebrar em dois P i
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. A principal enzima
na sntese do glicognio a glicognio sintetase porque ela quem forma as ligaes glicosdicas do tipo alfa 1,4. Do mesmo modo tem de se ter pelo menos mais uma enzima para a formao dos pontos de ramificao. Mas a montagem do glicognio no toda linear de forma que ao se chegar na 11 unidade de glicose entra a enzima ramificante que pega um grupo de, em mdia, sete unidades de glicose de uma cadeia qualquer e faz uma ramificao que dista obrigatoriamente no mnimo quatro unidades de glicose de uma outra.
3) Primer
A molcula de glicognio precisa de um molde para ser sintetizada. Esse molde chamado de primer. S a partir dele que o glicognio se forma. O primer formado de uma protena, a glicogenina que tem atividade cataltica ( uma enzima), e tem em uma das extremidades um resduo de tirosina que um aminocido hidroxilado e o fato de ela ter uma hidroxila fenlica, favorece a ligao com a molcula de glicose (que um aldedo polialcolico) cedida pelo UDPG15 . Quando
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A hipoglicemia exagerada causa o desmaio, pois um recurso de emergncia para a economia de glicose.. impedindo uma pane metablica irreversvel. 14 Esse fosfato inorgnico fundamental na formao do ATP. 15 Ligao ster
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tiverem no mnimo oito molculas de glicose ligadas, a glicognio sintetase passa a atuar. O primer nunca se desliga do glicognio. Degradao do glicognio
A principal enzima que catalisa a degradao do glicognio a glicognio fosforilase. Esta pode se apresentar no citoplasma de duas formas: ativa (a) e inativa (b). A primeira possui um radical fosfato (cido fosfrico no radical16 serina17 do seu centro ativo) e a segunda no18 . Assim, para haver a fosforilao gasta-se ATP e a reao catalisada por uma quinase, a fosforilase quinase que, por sua vez, tambm existe no citoplasma sob duas formas: inativa (b) e ativa (a), fosfatada. Para que haja a degradao do glicognio, fundamental que a glicognio fosforilase esteja ativa e para que ela esteja ativa, e necessrio ativar tambm a fosforilase quinase gastando, nesse processo duas molculas de ATP. A fosforilase quinase ativada por uma quinase (protena quinase A) estimulada alostericamente pelo AMPc
.
Por que, ento, a elevao da concentrao citoplasmtica de AMPC causa a elevao dos ativa alostericamente a
nveis de glicemia, mesmo que fisiolgica? Por que a elevao do AMPc
protena quinase A que, com o consumo de um ATP ativa (fosforilando) a fosforilase quinase que, por sua vez, fosforila a glicognio fosforilase com o consumo de mais um ATP. Desta forma a glicognio fosforilase ativa degrada o glicognio em glicose-1-fosfato que se transforma em glicose 6 fosfato que na presena da glicose 6 fosfatase a transforma em glicose livre elevando a glicemia. A adrenalina e o glucagon so hormnios glicemiantes por que aumentam a [AMPc] citoplasmtica que desencadeia todo o processo anterior. Gliclise
1) Ciclo de Cori
Mais precisamente Ciclo de Cori and Cori. A primeira dvida que paira com relao j vista gliclise : em anaerobiose o piruvato transforma-se em lactato que em altas concentraes nas clulas musculares ir voltar a se transformar em piruvato na presena de uma holoenzima (lactato desidrogenase + NAD reduzido (no sentido do lactato) ou NAD oxidado (no sentido do piruvato). Mas nos msculos h uma situao de anaerobiose portanto, a transformao do lactato em piruvato invivel. Ento, sendo o lactato uma molcula pequena (de apenas trs carbonos) e por meio do
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Resduo Aminocido cataltico 18 Serina um aminocido cataltico que s se liga ao seu substrato estando fosforilada
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gradiente de concentrao esse lactato em excesso ir para circulao. Quando se inunda a circulao com lactato ocorre queda do pH sanguneo, por isso ele vai rapidamente para o fgado, clula heptica onde este lactato em meio aerbico vai ser transformado em piruvato. Este piruvato foramado ser extra e no ser necessrio ao metabolismo da clula heptica, pois derivado de uma lactato de uma outra clula, no caso a muscular fazendo falta nesta clula. O fgado possui uma forma alternativa de formao de glicose ou glicognio atravs de substncias no-glicidicas - a gliconeognese. Por exemplo, o piruvato no um glicdio e sim um cetocido. Esta cota extra de piruvato pode ento formar por gliconeognese glicose-6-fosfato que pela ao da glicose-6-fosfatase (uma enzima de membrana) ir formar glicose livre que ir para a clula muscular. L, pela ao da hexoquinase na presena de Mg++ teremos a glicose-6-fosfato. Ou seja, o casal Cori descobriu, ento que o lactato extra da clula muscular acolhido pelo fgado onde por algumas reaes transformado em glicose livre que retorna a clula muscular onde transformado em ATP.
Lembrando: so produzidos quatro ATP em anaerobiose e gastos dois ATP com um saldo positivo de dois ATP. Ou seja, em anaerobiose a formao de ATP mnima. Por isso a necessidade de muito glicogenio armazenando glicose e do ciclo de Cori alimentando a clula muscular.
2) Reoxidao do NAD reduzido
O que fazer com o NAD reduzido j que a via glicolitica para funcionar precisa do NAD oxidado? O NAD red precisa ser reoxidado ento. E ele assim ser de duas formas: uma em aerobiose e outra em anaerobiose. O NAD uma vitamina hidrossolvel que no pode ser armazenado por isso necessrio reutiliz-lo. Assim o NAD ser reoxidado na transformao do piruvato em lactato. O NAD oxidado voltar, ento, a ser usado na via glicoltica. Via das Pentoses
uma via alternativa da oxidao da glicose-6-fosfato que ao contrrio da via glicolitica no tem finalidade de obter ATP, alm de ser essencialmente citoplasmtica. No ocorrem em todos os tecidos, apenas no fgado, nas hemcias, crtex das adrenais, tireide, tecido adiposo e glndulas mamrias em lactao. Mesmo nesses tecidos, essa via no mais importante que a via glicolitica. S 30% da glicose nesses tecidos oxidada pela via das pentoses.
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Objetivos dessa via:
Formao de NADP red, que um agente redutor de muitas vias biossintticas como a sntese de cidos graxos, esterides (hormnios do crtex das suprarrenais e vitamina D) e aminocidos noessenciais.
Formao de ribose e a partir desta a desoxirribose, essenciais para formar nucleotdeos (pentose + fosfato + base nitrogenada, os cidos nucleicos so polinucleotideos). No entanto, nem toda a ribose e desoxirribose provm desta via, boa parte sim, o restante obtido pela dieta.
Formao de intermedirios da via glicoltica, caracterizando a integrao do metabolismo, ou seja, vrias vias correm paralelas e se cruzam em determinados pontos como estes. Esses intermedirios sero a frutose-6-fosfato e gliceraldedo-3-fosfato.
Ao contrrio da via glicolitica, no h uma outra forma de se estudar a via das pentoses, seno por frmulas que devero servir apenas como instrumento de entendimento e no devem ser memorizadas. Deve ser usado o raciocnio, sobretudo. Por exemplo, se iremos obter pentoses a partir de uma hexose (glicose-6-fosfato) deveremos ter uma descarboxilao.
1) Fase Oxidativa
Glicose-6-fosfato possui ponte de oxigenio entre os carbonos 1 e 5. Para se transformar em pentose deve-se transformar o carbono 1 em carboxila (-COOH) com a desidrogenao do carbono 1 realizada pelo NADP que acolhendo os dois tomos de hidrognio se transforma em NADP reduzido. Assim posteriormente pode haver a descarboxilao. O NADP red formado usado no citoplasma para sntese de aminocidos no-essenciais, cidos graxos e esterides. Forma-se ento a 6-fosfoglicono lactona e a enzima que cataliza a reao talvez a enzima mais importante dessa via: a glicose-6fosfato desidrogenase. Esta enzima tem uma importncia clinica extraordinria: ela induzida pela insulina, ou seja, ela estimula a oxidao da glicose por esta via. O diabtico no compensado, aquele que no toma regularmente insulina, tem deficincia de glicose-6-fosfato desidrogenase tendo maior fragilidade nas hemcias com tendencia a anemia hemolitica (qualquer choque ir promover hemlise) j que o NADP reduzido tem papel fundamental na manuteno da integridade das membranas das hemcias. A manuteno das hemcias importante, pois, ns formamos muitos perxidos, principalmente gua oxigenada no metabolismo dos aminocidos, produtos danosos membrana das hemcias. O NADP reduzido ir captar seus dois H+ e reagir com a gua xigenada formando duas molculas de gua.
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Ilustrao cultural - na dcada de 20 descobriu-se um anti-malrico chamado de primaquina e comeou-se a usar este remdio como agente profiltico. S que muitos pacientes morreram. Descobriu-se, ento, que pessoas com deficincia de glicose-6-fosfato desidrogenase so sensveis a primaquina e podem morrer. Cerca de 11 a 15% dos negros americanos tm deficincia dessa enzima, isso levaria a uma possibilidade maior dessas pessoas contrarem malria? No. S que essas pessoas por seleo natural so imunes malria, pois o Plasmodium (vetor da malria) necessita de NADP reduzido para sobreviver, o que no ocorre em grande quantidade nas pessoas com deficincia dessa enzima. A primaquina faz com que haja grande quantidade de perxido no organismo, letal a membrana das hemcias de pessoas carentes de NADP reduzido provocando hemlise dessas clulas e consequente anemia hemoltica.
Com a 6-fosfoglicona lactona para formarmos de vez a carboxila, devemos adicionar gua na presena de lactonase formando o 6-fosfogliconato, um cido, j com a carboxila no carbono 1. Agora haver perda de CO2 do carbono 1 numa reao de desidrogenao com descarboxilao na presena da enzima 6-fosfatogliconato desidrogenase, tambm induzida pela insulina. A desidrogenao ocorrer com a transformao do NADP em NADP reduzido.
Formar-se- ento um ismero da ribose: a ribulose que ir se transformar na presena de uma enzima chamada fosfopentose isomerase teremos a formao da ribose-5-fosfato aproveitada para formao de nucleotdeos, substrato para a fase no oxidaditiva da via das pentoses e forma a desoxirribose. Um outro substrato para a fase no oxidativa da glicose obtido pela fosfopentose epimerase ( epimero = so ismeros que variam em apenas um carbono que no seja o funcional) agindo sobre a ribulose-5fosfato formando a xilulose-5-fosfato. Nessa fase obteve-se duas molculas de NADP reduzido por glicose-6-fosfato oxidada. A insulina foi fundamental nessa fase.
2) Fase No-Oxidativa
Os intermedirios da via glicolitica sero obtidos nessa fase como a frutose-6 fosfato e o gliceraldedo3-fosfato. A unio da xilulose-5-fosfato mais ribose-5-fosfato catalisada pela transcetolase na presena de Mg++ e tem como coenzima vitamina B1, a TPP (pirofosfato de tiamina), ou seja, a transcetolase uma holoenzima, que catalisa a transferncia de um radical de dois carbonos que contivesse um grupamento cetona, obtendo gliceraldedo-3-fosfato e sectohepontoulose 7 fosfato. Uma parte desse gliceraldedo-3-fosfato formado, segue a via glicolitica e outra parte continua na fase nooxidativa da via das pentoses, para formar o outro intermedirio: a frutrose 6 fosfato. Para isso, o
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gliceraldedo reagir com a sectoheptulose-7-fosfato na presena da transaldolase, enzima que cataliza a transferncia de trs carbonos para uma molcula que contenha o aldedo no caso da sectoheptulose7-fosfato para o gliceraldedo-3-fosfato formando eritrose-4-fosfato e frutrose-6-fosfato. A Eritrose 4 fosfato pode reagir ainda com a xilulose 5P e formar frutrose 6P e gliceraldedo-3-fosfato pela ao da enzima transcetolase. Para o organismo manter o seu metabolismo, necessita extrair energia do ambiente e com essa, extrair matria-prima para transform-la em prprios constituintes das macromolculas. Tomando os
organismos multicelulares como exemplo, tm-se dois grandes grupos de seres vivos que utilizam diferentes estratgias para obter essa energia do ambiente. As plantas, que possuem uma determinada organela que contm um conjunto de enzimas e protena responsveis por captar a energia proveniente do sol sob a forma de ftons de energia luminosa e transform-la em compostos qumicos que depois so transformados em ATP que pode ser utilizado para sntese de macromolculas como a sacarose. Caso a planta necessite de energia, a sacarose utilizada pelas mitocndrias das plantas para ser transformada novamente em ATP e fornecer a tal energia para sobrevivncia da clula. Os animais que dependem nica e exclusivamente da transformao de energia qumica armazenada nas
macromolculas ou nas molculas sintetizadas pelas plantas para poder extrair energia delas e transformar essa energia em ATP que vai poder ser utilizado pelas enzimas das clulas que necessitam de energia para realizar suas funes. A organela especializada em transformar a energia qumica armazenada em molculas orgnicas em ATP a mitocndria. Como estruturada?
Como exemplo, um fibroblasto em cultura, onde se encontra dezenas de mitocndrias espalhadas pelo citoplasma que so distribudas sobre a rede de microtbulos da clula, que d sustentao mecnica a elas e responsvel atravs de protena motoras pelo transporte dessas mitocndrias e localizao em um determinado local do citoplasma onde h uma maior demanda de energia, ou seja, tm uma
tendncia a se concentrarem nos locais que precisam mais de ATP, como nas clulas musculares. Essas mitocndrias tm uma caracterstica peculiar que se repete em todos os organismos eucariontes com algumas excees. Possui um sistema duplo de membrana que so as membranas mitocondriais externa e interna, formando dois compartimentos mitocondriais distintos, ou seja, o espao intermembranar e a matriz mitocondrial. Alm disso, a membrana mitocndria interna forma projees para o interior da matriz, formando as cristas mitocondriais. A morfologia e o tamanho mitocondrial so variveis, dependendo da sua fase de vida.
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Podem ser encontradas, na matriz mitocondrial, estruturas eletrodensas, os grnulos mitocondriais que so deposies de um tipo de sal chamado fosfato de clcio, devido fisiologia da mitocndria que armazena grande quantidade de fosfato para produo de ATP e de clcio por causa da funo de retir-lo do citoplasma. As bactrias Gran negativas como a E. coli apresentam tambm um sistema duplo de membrana como a mitocndria, alm do fato de ambas: a membrana mitocndria externa e a externa da bactria apresentarem pouca seletividade, devido existncia de uma protena integral de membrana chamada porina que forma canais hidroflicos que selecionam a passagem somente pelo tamanho das molculas. (substncias < 10000 Da conseguem passar, enquanto que macromolculas como protenas e RNA ficam retidas). Para as substncias passarem do espao intermembranar para a matriz existem transportadores especficos. As bactrias Gran positivas s tm uma membrana. O espao intermembranar se caracteriza por possuir baixas concentraes de protena, refletida pela presena de poucos tipos de protena que tenham alguma funo nessa regio. Exemplos, o citocromo c, que protena solvel e a enzima dinucleotdeo quinase, que realiza a reao ATP+NDP ADP+NTP, que serve para ser utilizado em reaes cujas enzimas envolvidas preferem outro nucletdeo diferente do ATP. A composio desse espao bem mais fluida do que a matriz e citoplasma devido a essa baixa concentrao de protena.
A membrana mitocondrial interna tem como caracterstica a seletividade, parte dessa seletividade se deve a presena de um lipdio especial cardiolipina que serve para aumentar a impermeabilidade da
passagem de ons e substncias hidroflicas. Ento, tendo uma membrana altamente seletiva e impermevel, precisa-se de transportadores especficos para promover a passagem de substncias necessrias ao metabolismo da mitocndria. A presena de grandes quantidades de transportadores, que vo controlar a passagem de substncias da matriz para o espao intermembranar, a outra caracterstica. Tem-se tambm a presena das protena da cadeia respiratria??? Como?? A prtonATPase que fica mais concentrada nas cristas mitocondriais. A H+ATPase sintetiza ATP e protena da cadeia respiratria transporta eltrons. A mitocndria se difere das outras organelas no que se refere ao sistema duplo de membrana como j foi dito e ao sistema gentico muito complexo, tendo um genoma na forma de um DNA
circular similar ao dos organismos procariontes, alm de possuir RNA e DNA polimerases e ribossomas do tipo 70S19 que traduzem a informao gentica sob a forma de protena dentro da matriz mitocondrial. Essas caractersticas mostram a semelhana entre bactrias e mitocndrias. Por isso,
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Svedberg, coeficiente de sedimentao.
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prope-se que a mitocndria se originou a partir de um organismo procarionte que inicialmente passou a viver simbioticamente dentro das clulas eucariontes primitivas e que depois de algum tempo foi perdendo a capacidade de viver independentemente, ou seja, perdendo parte do genoma e ficando dependente do genoma nuclear para sobreviver. A membrana externa da bactria tem a funo de proteo contra anticorpos, agentes nocivos, enquanto que a mitocndria, protegida dentro do meio intracelular, no teria necessidade de tal membrana Entretanto, nunca foi testado um mutante mitocondrial para ver se a membrana til ou no a fisiologia da clula. Na matriz mitocondrial, temse a presena de uma srie de protena que participam de vias metablicas importantes para a fisiologia da clula como o Ciclo de Krebs e as enzimas que participam da -oxidao dos cidos graxos que vo ter funo especfica na produo de energia, h outras enzimas que participam da sntese de outras macromolculas e o sistema gentico que consta de vrias cpias do DNA circular contendo parte do genoma necessrio para a fisiologia da clula e enzimas necessrias a transcrio e traduo da informao gentica (RNA polimerase que sintetiza os RNAm e RNAt; os ribossomas que sintetizam as protena a partir informao contida na fita de RNAm e as protena necessrias a duplicao desse DNA circular para que ao longo da diviso das mitocndrias a informao gentica no seja perdida). Biognese
Em tempos de diviso celular, as mitocndrias sempre se originam do crescimento e fragmentao das j pr-existentes e parte dos componentes lipdicos da membrana so sintetizados pela prpria mitocndria e a outra parte pelo REL e transportada atravs de protena especficas para a membrana mitocondrial. Dependendo do tipo do organismo, o genoma mitocondrial capaz de codificar apenas entre 9 e 15 peptdeos diferentes, 5% das protenas necessrias ao funcionamento da mitocndria. Os 95% restantes das protenas mitocondriais so codificadas pelo genoma nuclear, transcrito em RNAm e esse traduzido pelos ribossomas citoplasmticos formando as protena que devem ser reconhecidas e transportadas por um mecanismo chamado de ps-transcricional para o interior da mitocndria. O primeiro problema reconhecer no citoplasma quais so as protena que sero transportadas; o segundo que a mitocndria tem quatro compartimentos com composio proteica distinta, ento tem que ser capaz de distinguir os locais de cada protena. Como ser que faz isso?
Existe na membrana externa um receptor e um transportador proteico. Por exemplo, uma protena mitocondrial e uma nuclear, como reconhecer? Pela seqncia, mas no existe uma para cada protena, na realidade uma seqncia especfica que funciona como sinalizador para indicar que a protena
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deve ser enviada para o interior da mitocndria. Mais comumente, tem-se nessas protenas uma seqncia N-terminal, como ocorre nas protena que vo ser importadas para o RER, que vai compor um sinal de importe mitocondrial. Algumas protenas podem t-lo (o sinal) em seu meio e outras no o apresentam, devendo usar outro mecanismo ainda desconhecido. Quando as protenas se formam (esto no seu estado biolgico funcional) no citoplasma, primeiro, so desenoveladas por uma protena citoplasmtica que a Hsc 70, que permanece a elas ligadas at serem transportadas atravs da
membrana por um sistema de transportador que envolve uma protena de membr que abre uma passagem com dimetro fixo, determinando o tamanho das molculas que iro passar. A protena
enovelada (ativa) no consegue, por isso necessrio desenovel-la para que, na forma linear, seja bombeada atravs dessa passagem. A protena da membrana formada por um receptor e um transportador, que estosempre juntos, o sinal reconhecido pelo receptor e, aps isso, esse receptor vai bombear a protena atravs da membrana e, medida que atravessa, solta a Hsc 70. Esse mecanismo dependente de ATP. Na membrana interna, existe tambm um segundo receptor que capaz, se necessrio, de pegar esse peptdeo sinal e continuar o transporte da protena para a matriz ou membrana mitocndria interna. De uma maneira geral, nessa regio da mitocndria onde tem o transporte de protena, encontra-se atravs do M.E.20 uma regio de contato entre membrana da mitocndria externa e interna. Pode acontecer duas coisas, a protena ter um sinal de integrao na MME, quando entra na membrana atravs desse transportador que abre uma passagem para a membrana mitocndria externa e ela no atravessa a membrana toda, mas fica atravessada na membr mitocndria externa ou segundo sinal de liberao da protena no espao intermembranar. Se no tiver algum desses, captada pelo segundo receptor que comea a bombear a protena atravs da MEMBRANA MITOCONDRIAL INTERNA e a pode ter um sinal que indique a integrao na MEMBRANA MITOCONDRIAL INTERNA e se no tiver sinal algum, passa direto para a matriz.
Como acontece a sntese de ATP? Como foi visto antes, a mitocndria tem como uma das suas funes transformar a energia qumica armazenada nas ligaes qumicas do tipo carbono-carbono das molculas orgnicas em um tipo de energia qumica que possa ser acessvel a toda clula e nesse caso a ligao fosfato-fosfato que existe
20
Microscpio Eletrnico
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no ATP. Mas para fazer isso, ela primeiro extrai energia da ligao qumica e armazena na forma de eltrons numa molcula energtica que o NADH. De uma maneira geral, os compostos orgnicos oxidados parcialmente, tanto no citoplasma quanto na mitocndria, so transformados numa molcula de Acetil-CoA, que entra no Ciclo de Krebs oxidado e a energia armazenada nas ligaes qumicas do acetato ligado Acetil-CoA vai ser armazenada sob a forma de uma molcula com poder redutor que o NADH. So produzidas poucas molculas de ATP e energia armazenada sob a forma de NADH, que vai fornecer indiretamente a energia necessria para a sntese de ATP. De que forma? Essa energia do NADH vai ser utilizada por um complexo de citocromos na MEMBRANA MITOCONDRIAL INTERNA e por dois outros transportadores (ubiquinona, presente dentro da membrana, e citocromo c, protena solvel dentro do espao intermembranar) que levam o eltron de um citocromo para o outro. Inicialmente o que esse NADH faz doar os eltron dele para o primeiro complexo citocromo que o NAD.H redutase, que utiliza a energia desse eltron para transportar prtons do interior da matriz para o espao intermembranar, o eltron doado a ubiquinona que transfere para o complexo 2, chamado de citocromo c redutase e a energia adquirida desse eltron ser utilizada da mesma forma, depois o eltron transferido para o citocromo c que transfere para o complexo 3 que vai utilizar para transportar mais prtons de dentro da matriz para o espao. E a vai ser transferido para um aceptoor final que o oxignio, formando gua. (quatro prtrons mais uma molcula de oxignio = 2 gua).
A clula no tem um jeito eficiente de transformar a energia do NADH em ATP ento, ela cria um gradiente de prtons que tem dois componentes: eltrico e qumico (eletrotnico) atravs da MEMBRANA MITOCONDRIAL INTERNA.
Cria-se uma diferena de concentrao muito grande de prtons entre o espao e a matriz, a energia armazenada nesse gradiente vai ser utilizada para sntese de ATP atravs de uma protena especial presente nessa membrana interna que a prton ATPase. O que ela faz? Composta por duas pores, a primeira poro transmembranar chamada de FO (zero) e a segunda globular de F1. FO compe um canal de prtons e F1 uma regio cataltica que promove a converso de ADP em ATP. A passagem de prtons pelo canal de prton ATPase que fornece energia para a formao e liberao de ATP dentro da matriz. E grande parte dessa energia deve ser enviada para o citoplasma, atravs do antiporte do ATP-ADP para continuar o ciclo de sntese. Aproximadamente 85% da energia armazenada na ligao entre os fosfatos e do ATP e os outros 15% so dissipados sob a forma de calor. Ento, a prpria mitocndria, em estado fisiolgico normal,
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capaz de gerar calor e controlar a temperatura do corpo. Existem tambm mitocndrias que tem a finalidade de gerar calor que se localizam no tecido adiposo marrom, mas para isso precisa ter uma protena especial na MEMBRANA MITOCONDRIAL INTERNA chamada de termogenina que um canal de prtons que permite a dissipao do gradiente de prtons gerado pela cadeia transportadora de eltrons sem que essa energia armazenada seja utilizada para realizar algum tipo de trabalho. Como no acoplada a nenhuma reao qumica, a energia perdida sob a forma de calor. E como o tecido marrom altamente vascularizado, o calor produzido naquela regio captado pelo fluxo sanguneo que passa por aquele tecido e transferido para o resto do organismo, ajudando em muitos animais terminais e recm natos a manter a temperatura corporal constante.
Respirao celular Estudaremos no seu sentido intracelular, ou seja, sem englobar as trocas gasosas no pulmo21 . A formao de CO2 e o consumo de O2 para a oxidao da glicose principalmente nas mitocndrias. Ciclo de Krebs No citoplasma a glicose-6-fosfato forma piruvato que, em aerobiose, transportado por protenas carreadoras da membrana interna da mitocndria para o interior da mesma onde se transforma em acetil-CoA. Esta reao no pertence ao Ciclo de Krebs, mas responsvel pela sua regulao. O complexo multienzimtico que catalisa essa reao controlado alostericamente e por modificao covalente (fosforilar e defosforilar). O acetil-CoA intermedirio do ciclo de Krebs. A glicose-6fosfato obtida no meio intracelular a pela ingesto de amido, glicognio e partir da glicose circulante que, em ltima anlise, foi obtida outros polissacardeos e gorduras22 da nossa alimentao. O
catabolismo aerbico implica necessariamente na formao da acetil-CoA23 . Durante o ciclo de Krebs h grande formao de coenzimas reduzidas ( AD e FAD - ambas vitaminas do complexo B, hidrossolveis). Para isso, necessria a disposio de coenzimas oxidadas por esse motivo o CICLO DE KREBS est to integrado Cadeia Respiratria 24 que responsvel por esse processo, caso contrrio o CICLO DE KREBS ficaria momentaneamente paralizado. Transformao do priruvato em acetil-CoA
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Apresentadas no Anexo. O fgado, por ser o rgo responsvel por controlar a glicemia, utiliza principalmente as gorduras no seu metabolismo. 23 Mesmo quando temos a oxidao de protenas pois alguns aminocidos geram diretamente acetil Co.A, outros geram piruvato que gera acetil Co.A, ou ainda outros intermedirios do ciclo de Krebs atribuindo ao mesmo o titulo de ponto de convergncia do catabolismo aerbico. 24 Esse fato faz da cadeia respiratria o principal formador de ATP da respirao apesar de sus funo prima no ser esse.
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O piruvato transformado em acetil-CoA25
por uma descarboxilao oxidativa (liberando a primeira
molcula de CO2 ). Os hidrognios da coenzima A e do piruvato vo reduzir o NAD (reao que ocorre exclusivamente nas mitocndrias), NAD vai para a cadeia respiratria para ser reoxidado e o acetilCoA vai para o CICLO DE KREBS. A piruvato desidrogenase um complexo multienzimtico que contm trs enzimas e cinco coenzimas e pode ser controlado alostericamente e por modificao covalente. O excesso de NAD reduzido, ATP e acetil-CoA so seus moduladores negativos enquanto que o excesso de ADP, NAD oxidado e positivos. baixas concentraes de acetil-CoA so seus moduladores
Na presena de glucagon a piruvato desidrogenase fica inativa por que seu segundo mensageiro o AMPc que estimula protenas quinases que so enzimas que catalisam reaes de fosforilao. Ento a PDH inativa na sua forma defosforilada. Preservar o piruvato significa preservar a glicose-6-fosfato para que ela possa ir para a circulao. A insulina por ser hopoglicemiante deve aprisionar a glicose dentro da clula, estimulando a via das pentoses, a sntese de glicognio e a gliclise, assim, estimula o ciclo de Krebs. Ela estimula protena fosfatase que catalisa reao de retirada de radical fosfato, a PDH fica ativa transformando piruvato em acetil-CoA.
1) Primeira reao do Ciclo de Krebs
Uma substncia orgnica ao ser oxidada, fornece obrigatoriamente o nmero de molculas de CO2 ao seu nmero de carbonos (um cido graxo de 18C fornecer 18 molculas de CO2 ). Dessa forma, a glicose, ao ser oxidada integralmente at CO2 e H2 O fornecer seis CO2 . As duas primeiras na reao de piruvato26 at acetil-CoA. Acetil CoA, o representante das demais substncias27 a serem oxidadas, se combina sempre com oxaloacetato formando citrato28 (da chamar o CICLO DE KREBS e de cidos tricarboxlicos) liberando CoA. O fato mais importante da reao que nela est o primeiro dos trs marcapassos do CICLO DE KREBS, ou seja, primeira das trs enzimas alostricas que controlam a velocidade do CICLO DE KREBS. A citrato sintetase, que catalisa a transformao do acetil-CoA somado ao oxaloacetato em citrato, alostrica que pode ser modulada negativamente pelo excesso de NADred,
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Obtida a partir do cido.pantotnico. Uma molcula de glicose-6-fosfato fornece duas de piruvato, que por sua vez se transformam em 2 de acetil Co.A, liberando duas de CO2. 27 Seja de glicose-6-fosfato, cido graxo ou aminocido. 28 O citrato um c tricarboxlico com 3 C.
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e citrato. Por outro lado, altas concentraes de NAD oxidado, ADP e baixas concentraes de citrato so seus moduladores negativos29 .
2) Segunda e terceira reaes
A segunda e a terceira reaes do CICLO DE KREBS so, respectivamente a transformao do citrato (6C) em cis-aconitato (6C) e sua quase instantnea transformao em isocitrato (6C).
3) Quarta reao
Nesta etapa o isocitrato (6C) se transforma em a ceto glutarato (5C), onde h liberao de mais uma molcula de CO2 , portanto, a reduo de uma molcula de NAD oxidado (este vai para a Cadeia Respiratria para ser reoxidado). A enzima que catalisa essa reao a isocitrato desidrogenase, uma enzima alostrica modulada positivamente por altas de ADP e negativamente por altas de ATP30 .
4) Quinta reao do ciclo de Krebs
Agora o a ceto glutarato (5C) se transforma em Succinil-CoA (4C).Temos novamente e pela ltima vez a liberao de CO2 31 . Aqui temos tambm a formao de coenzimas reduzidas que vai para o CICLO DE KREBS. A enzima que catalisa essa reao a alfa ceto glutarato32 desidrogenase a ltima enzima alostrica do CICLO DE KREBS que modulada negativamente por altas concentraes de NAD reduzido (ATP) e succinil-CoA e negativamente por altas concentraes de NADox (ADP) e baixas concentraes de succinilCoA .
5) Sexta reao
Depois da quinta reao, j obtivemos as trs enzimas alostricas, coenzimas reduzidas e as duas molculas de CO2 que deveramos produzir no CICLO DE KREBS. A partir de agora o CICLO DE KREBS continua com o objetivo de regenerar o oxaloacetato. Como a acetil-CoA pode ser obtida a
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Alguns autores mencionam a possibilidade de que o excesso de succinil-Co.A (intermedirio do CK) inibe competitivamente a citrato sintetase por ser um anlogo estrutural do acetil Co.A. Para que ocorra essa inibio so necessrias altssimas concentraes de succinil Co.A no meio. 30 Alguns autores consideram o excesso de NAD oxidado e NAD reduzido como moduladores positivos e negativos, respectivamente, da isocitrato desidrogenase. 31 O cido palmtico uma cido graxo de 16C e, quantitativamente o principal c graxo do nosso organismo. O nico produto final da oxidao dos cidos graxos o acetil Co.A . O c palmtico, ento libera 8 molculas de acetil Co.A, logo 16 molculas de CO2. 32 um complexo multienzimtico muito semelhante piruvato desidrogenase (vrias enzimas e vrias coenzimas).
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partir de vrias substncias a quantidade dessa molcula muito grande enquanto que so poucas as maneiras de se obter o oxaloacetato. Se o CICLO DE KREBS no fosse uma via metablica fechada poderia ser paralisada por falta de oxaloacetato ento a partir da sexta reao o nico motivo de existir do CICLO DE KREBS a regenerao do oxaloacetato.
O succinil-CoA (4C) vai se transformar em cido succnico - 4C (succinato) pela ao da succinil CoA sintetase. Na formao do acetil CoA a partir do piruvato, retirado o CO2 e formada uma ligao tioster, caso contrrio teramos a formao de cido actico. Apesar de se tratar de uma reao de alta energia, no h gasto de ATP porque o ambiente mitocondrial rico em energia. Ao se transformar o succinil-CoA em succinato h quebra dessa ligao de alta energia liberando-a. Parte dessa energia captada pelo GDP, transformando o em GTP que por sua vez promove a formao de um ATP a partir de um ADP. A formao do GTP no ciclo de Krebs equivale formao de um ATP. Muitos autores destacam a importante formao de ATP no CICLO DE KREBS que no verdade, formada apenas uma molcula de ATP por volta.
6) Stima reao
Transforma-se o succinato (4C) em fumarato (4C) na presena de succinato desidrogenase. Essa reao importante porque essa enzima pode ser controlada competitivamente por altas concentraes de malonato33 . Tambm nessa reao forma-se a nica reao com formao de FAD.
7) Oitava reao
O fumarato (4C) transforma em malato (4C) por ao da fumarase.

8) Nona (e ltima) reao
O malato, agora, se transforma em oxaloacetato por ao da malato desidrogenase com a reduo de um NAD . / Resumindo: Temos no ciclo de Krebs trs enzimas alostericas (citrato sintetase, a ceto glutarato desidrogenase e isocitrato desidrogenase); so formadas 2 molculas de CO2 por volta completa no ciclo de Krebs; so formadas 4 coenzimas reduzidas (3 NAD e 1 FAD); o CICLO DE KREBS controlado grosseiramente por alta e baixa de ATP; formada uma molcula de GTP que corresponde
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Mecanismo de retro-inibio. Vide captulo de Enzimas.
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a uma de ATP; o CICLO DE KREBS no uma via metablica aberta porque fundamental a regenerao do oxaloacetato. Papel anfiblico (duplo papel metablico) do Ciclo de Krebs Ter papel anfiblico significa ter papel catablico e anablico34 . A grande maioria das reaes reversvel e, assim, o controle alostrico se torna extremamente importante. O papel de contribuir com o anabolismo se d em circunstncias de alta de ATP. Quando isso acontece observa-se altas concentraes de intermedirios do CICLO DE KREBS pela diminuio da velocidade da via. Alguns intermedirios nessas condies contribuem para o anabolismo. O oxaloacetato em altas concentraes sofre transaminao e se transforma em aspartato (aminocido). Do mesmo modo o a ceto glutarato da origem ao glutamato (aminocido). Por sua vez o piruvato por ao da piruvatocarboxilase se transforma em oxaloacetato. Essa enzima modulada alostericamente por altas concentraes de acetil-CoA. Essas reaes so chamadas de reaes de preenchimento ou reaes anaplerticas.
Gliconeognese e Cadeia Respiratria Gliconeognese
Ao final do assunto anterior, estudvamos o segundo papel metablico do CICLO DE KREBS que ocorria em casos excesso de ATP, NAD reduzido e acetil-CoA, assim, teramos uma menor velocidade da via e, conseqentemente, maior concentrao dos intermedirios que no so mais utilizados no sentido do metabolismo aerbico mas sim de vias biossintticas como o da formao de aminocidos no essenciais para a formao de protenas; a formao de acetil-CoA no citoplasma (excesso de citrato na mitocndria vai para o citoplasma onde oxidado em acetil-CoA e oxaloacetato) que vai ser substrato para a biossntese de lipdios; o oxaloacetato que vai servir de substrato para a formao de glicose6P no citoplasma, gliconeognese. A gliconeognese a formao de glicose-6-fosfato a partir de substncias no glicdicas como oxaloacetato que um cetocido dicarboxlico. Na presena de GTP o oxaloacetato se transforma em fosfoenol piruvato pela ao da fosfoenol piruvato carboxiquinase com a sada de CO2 . O fosfoenol
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O Ciclo de Krebs, alm de ser uma via anfiblica, tambm uma via anaplertica, ou seja de preenchimento, fornecendo intermedirios metablicos para outras vias.
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piruvato um intermedirio da gliclise obtido a partir do 2-fosfoglicerato que, na presena da enolase, se transformou em fosfoenolpiruvato e que deu origem ao enol piruvato e depois piruvato (forma enlica instvel), reao catalisada pela piruvato quinase. Essa a nica reao absolutamente irreversvel da gliclise. Quando h excesso de acetil-CoA temos o estmulo da piruvato carboxilase onde temos a transformao de piruvato em oxalocetato. necessrio, ento, que se disponha de uma alta concentrao de piruvato, para isso, inibe-se a piruvato desidrogenase, impedindo que ele se transforme em acetil-CoA. Se a transformao de oxaloacetato em fosfoenol piruvato no fosse irreversvel, no precisaria desse by pass35 para se obter novamente glicse. Por que com a inibio da piruvato desidrogenase ocorre gliconeognese? Porque o piruvato no transformado em acetil-CoA, acumulando piruvato que faz com que ele se transforme em oxloacetato nas mitocndrias, o que implica na formao de citrato que vai para o citoplasma onde clivado em acetilCoA e oxalocetato. Existe ainda uma maneira mais fcil de se obter oxaloacetato no citoplasma: a via do malato que vai para o citoplasma onde se transforma em oxaloacetato pale ao da malato desidrogenase do citoplasma.
O oxaloacetato precisa ser obtido no citoplasma, via citrato ou via malato porque a membrana mitocondrial interna absolutamente impermevel ao oxaloacetato. Depois desse by pass o caminho do fosfoenol piruvato retornar os caminhos da gliclise. / Resumindo: A gliconeognese ocorre em casos de excesso de NAD reduzido, acetil-CoA e ATP, quando os intermedirios esto em alta e so utilizados para a sntese de aminocidos no essenciais um deles usado para fornecer, no citoplasma, substrato para a biossntese de cidos graxos (citrato). Quando o citrato clivado, no s fornece acetil-CoA mas tambm oxaloacetato. Transformando o oxaloacetato em fosfoenol piruvato pode-se obter glicose6P. Existe ainda uma outra forma de se obter oxaloacetato no citoplasma: a transformao do oxaloacetato em malato. Para que esse oxaloacetato aparea no citoplasma, necessrio que aumente a sua concentrao na mitocndria isso ocorre atravs da inibio da piruvato desidrogenase e o estmulo simultneo da piruvato carboxilase, ambas pela modulao da acetil-CoA. O substrato da ao da piruvato carboxilase o piruvato que no foi mais transformado em acetil-CoA . Cadeia Respiratria
35
Derivao.
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A importncia da Cadeia Respiratria a reoxidao das coenzimas reduzidas porque so vitaminas hidrossolveis no armazenveis. Durante esse processo, haver a formao da ATP. Trs enzimas do ciclo de Krebs, a cetoglutarato desidrogenase, isocitrato desidrogenase e malato desidrogenase exigem
a formao de NADred, ainda uma das reaes da b oxidao forma NAD reduzido, na via do malato e na principal enzima do metabolismo dos aminocidos. O FAD produzido em uma reao do Ciclo de Krebs, uma da b oxidao e uma na via do glicerol-fosfato. O aceptor final dos tomos de hidrognio na cadeia respiratria sempre o oxignio, tanto que a microrespirao celular se resume no consumo de oxignio com formao de CO2 . Haver, ento, a formao de gua metablica para cada transporte de dois pares de hidrognio. A primeira etapa da Cadeia Respiratria catalisada por um complexo: NADH- desidrogenase36 Esse complexo multienzimtico tem como radical prosttico37 a FMN38 (flavina mono nucleotdeo) e recebe os tomos de hidrognio do NAD se tornando FMN reduzido.Nesse complexo multienzimtico existem as protenas ferro39 -enxofre de forma que, diferente do NAD reduzido para o FMN onde so passados apenas os tomos de hidrognio, do FMN para a Co.Q (ubiquinona40 ) so transportados apenas os eltrons transformando-a em ubiquinol41 (cetona-lcool).
Chegamos ao ponto central da Cadeia Respiratria, pois a ubiquinona receptora de eltrons do NAD e do FAD. Pela diferente entrada na cadeia respiratria, vai haver diferena na quantidade de ATP produzidos entre o FAD e o NAD, respectivamente dois e trs molculas ATP. A partir desse momento, os H+ so liberados no meio e apenas os pares de eltrons sero carregados de forma que os inibidores da Cadeia Respiratria causam morte celular no por falta de ATP, mas por acidose como o caso do CO e do CN-. O O2 no pode ser reduzido para formar gua. Os citocromos so protenas hemnicas (como a hemoglobina) contm grupamento M42 no radical prosttico. O cyt a3, alm do ferro tem cobre.
Temos trs principais complexos multienzimticos na cadeia: NADH desidrogenase, citocromo C redutase (do cyt.b para cyt c) e citocromo oxidase (do cyt a3 ao oxignio).
1) Potencial de redox
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Possui 34 sub-unidades proticas e de peso molecular igual a 880mil . Coenzima fixa enzima 38 Outro estado ativo da riboflavina (vit B2) bem como o FAD 39 O Fe pode ser ferroso (+2) ou frrico (+3), ou seja, pode oxidar e reduzir. 40 Ter o dom da ubiqidade significa poder estar em dois lugares ao mesmo tempo ou estar em todos os lugares. 41 Fazem parte do seu complexo multienzimtico pontons ferro-enchofre que seriam reduzidas pelos prtons e eltrons do meio. A vitamina K uma quinona e pode participar da Cadeia Respiratria. 42 Ferro, diferente das protenas ferro-enchofre no radical prostrtico que se oxidado pode se transformar em on cprico, podendo receber, ento, 2 pares de eltrons que vo impedir a formao de perxidos que causaria anemia hemoltica.
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Capacidade em volts da substncia se oxidar e reduzir. Da energia liberada no transporte do par de eltrons, parte conservada na forma de ATP, ou seja, na fosforilao oxidativa na presena de um complexo multienzimtico: atp sintetase. A quantidade de energia necessria , em mdia, 7500 calorias. Se cada par de eltrons pode liberar 56.000 cal e sabe-se que cada par produz apenas cinco ATP, pode-se concluir que 60% da energia liberada em forma de calor e utilizada para outras reaes qumicas como a ligao tioster na transformao de piruvato em acetil-CoA.
ADP + Pi = ATP NAD/NADH = -0,32 v O2 = +0,82 v G = nF E
Quanto mais negativo o seu potencial de oxireduo, maior sua capacidade de ceder eltrons, ou seja, se oxidar. Assim, o potencial redoxi do citocromo C, por exemplo, mais positivo que o do citocromo B. Fazendo que a ordem da Cadeia Respiratria seja vigorosa j que depende dos potenciais redoxi.
2) Desacopladores da fosforilao oxidativa43
A formao de ATP na mitocndria fundamental Cadeia Respiratria uma vez que o fluxo de eltrons na cadeia libera a energia necessria para a formao de eltrons em um processo conhecido como fosforilao oxidativa. Desacoplar a fosforilao oxidativa significa impedir que a energia liberada no seja utilizada na formao de ATP. T3 e T4 so desacopladores da fosforilao oxidativa e, por isso, sente-se muita fome em ambientes frios, pois para compensar a grande parte da energia liberada em forma de calor (para manter a temperatura corporal) sem prejudicar a produo de ATP necessrio excedente calrico. Um outro desacoplador, esse sinttico, o NITROFENOL.
3) Inibidores da Cadeia Respiratria
So substncias que impedem o fluxo de eltrons. A inibio de um stio inibe todo o fluxo. Isso impede a formao de gua metablica, que causa morte por acidose. No stio 3 os principais inibidores so o CO, o H2 S e o CN-. No stio 2 a antinicina que um antibitico e no stio 1 a rotenona
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Formao de ATP na cadeia respiratria.
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(cetona usada pelos ndios para pescar. Algumas plantas continham essa substncia que matava o peixe pela inibio da cr) e os barbitricos (como o fenobarbital).
4) Como o NAD reoxidado em anaerobiose
Relembrando a gliclise, na reao catalisada pela aldolase (ciso da frutose 1,6-bifosfato, tendo como produto o aldedo 3-fosfoglicrico e dihidroxicetona fosfato) obtinha-se muito mais quantidade de
diidroxicetona-fosfato, gerando uma dvida: por que formar mais dela se seria transformada em aldedo fosfoglicrico para dar continuidade gliclise? Um dos motivos jus tamente a reoxidao do NAD em aerobiose. Isso se d atravs da enzima glicerol-fosfato desidrogenase (citoplasmtica) onde o grupamento cetona da DHAP reduzido produzindo NAD oxidado e DHA reduzida at glicerolfosfato44 .
Por que no reoxidar esse NAD na mitocndria? Por que a membrana mitocondrial impermevel ao NAD, mas para gerar mais ATP, esse NAD produzido na glicolise se utiliza de uma lanadeira para que os tomos de hidrognio vo para a cadeia respiratria. Assim o glicerol-fosfato vai para a mitocndria onde o FAD reduzido a partir dos hidrognios que o glicerolP captou do NAD citoplasmtico e vai para a Cadeia Respiratria. Depois o glicerol-fosfato volta para o citoplasma. Essa a via do glicerol-P.
H ainda uma segunda lanadeira que usa o malato como transportador. Esse malato obtido a partir do oxaloacetato. Esse possui um grupamento cetona que pela malato desidrogenase recebe os hidrognios do NAD, oxidando-o. O malato vai para a mitocndria onde oxidado por uma NAD mitocondrial que vai para Cadeia Respiratria onde produz trs ATPs e o oxaloacetato, por sua vez, vai para o CICLO DE KREBS.
5) Saldo energtico da oxidao completa da glicose
Da transformao da glicose at piruvato no citoplasma, temos um total de dois ATP e a formao de dois NAD reduzidos que se for reoxidado pela via do malato, da origem a seis ATPs e se for reoxidado pela via do glicerol-fosfato gera dois ATP. Na mitocndria, a transformao das duas molcula de piruvato em duas de acetil-CoA. Temos a formao de dois NAD reduzidos que gera 6 ATP na Cadeia
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A ingesto excessiva de acares engorda j que no se pode armazenar toda a glicose ingerida sob a forma de glicognio que, por ter uma gde camada de solvatao, ocupa muito espao, j que o glicerol P um importante substrato pra a formao de gorduras.
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Respiratria. Por ltimo as duas molculas de acetil-CoA vai para o Ciclo de Krebs onde d uma volta cada um onde temos a formao de 1 GTP, correspondente a um ATP; trs NAD reduzidos, equivalendo a 6 ATP e 1 F reduzido (2ATP), ou seja 12 ATP por volta no Ciclo de Krebs (24 ATP AD j que so duas de CoA). Dependendo, ento, da via de reoxidao dos NAD citoplasmticos, formaremos 36 ou 38 ATP no total.
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Captulo 9
METABOLISMO LIPDICO: DEGRADAO E BIOSSNTESE

A oxidao de cidos graxos de nmero mpar de carbono praticamente inexistente no organismo. Este clculo energtico serve muito mais como um trabalho de integrao do que a realidade que ocorre no nosso organismo. Fornece sempre molculas de acetil CoA e uma molcula de uma substncia de 3C (propionil-CoA). Com a -oxidao de um cido orgnico de 17C, no final, seria obtido uma molcula de propionil e 7 molculas de acetil-CoA. Para obteno das sete molculas de acetil CoA mais uma de propionil preciso fazer sete vezes a -oxidao.
Cada molcula de acetil-CoA se dirigindo ao Ciclo de Krebs e movimentando a CADEIA RESPIRATRIA, produz 12 ATP. Como so sete acetil-CoA, multiplica-se por 12, que dar um total de 84 ATP. A -oxidao produz cinco ATP (formados por um NAD e um FAD reduzidos), como so sete vezes, mutiplica-se sete por cinco, achando-se 35 ATP. Somando-se esses ATP, encontra-se um total de 119, mas como so gastos dois, tm-se 117 ATP. Mas ainda falta a oxidao do propionilCoA, que deve ser transformar em um intermedirio do Ciclo de Krebs, para ser oxidado at CO2 e H2 O. Essa molcula carboxilada, na presena de ATP e da enzima propionil carboxilase, e essa como qualquer carboxilase usa como coezima a biotina uma vitamina do complexo B, transformando-se em succinil-CoA, que vai movimentar o Ciclo de Krebs. Foram gastos dois ATP para sua formao, a oxidao completa de succinil-CoA (4C) vai produzir 24 ATP, pois sero dadas duas voltas no Ciclo de Krebs (liberao de 4 CO2 e formao de 6 NAD reduzidos, 2 FAD reduzidos e 2 GTP) , d um total de 22 ATP. Finalizando 117+22= 139 ATP. Outro exemplo, um cido graxo de 9C, vai dar trs acetil CoA mais um propionil (22 ATP). Como foram feitas trs -oxidaes para se obter trs acetil CoA (36 ATP) e um propionil, produziu-se 15 ATP. No total, tm-se 36 +15 - 2 (gastos na ativao) =49 + 22 = 71 ATP. Biossntese extramitocondrial de cidos graxos No uma mera reverso da -oxidao, na dcada de 40, descobriu-se que essa sntese extramitoconrial e, ento, surgiu um problema, pois o nico substrato dessas molculas acetil CoA. De que maneira ela aparecia no citoplasma para servir de substrato? Quando estudamos o segundo
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papel do Ciclo de Krebs, vimos isso, quando temos excesso de ATP, de NAD reduzido, de acetil-CoA, significa que o Ciclo de Krebs vai diminuir de velocidade e os seus intermedirios estaro em altas concentraes. Entre eles, o que nos interessa para estudo da biossntese dos cidos graxos, o citrato que foi formado na mitocndria pela reao do oxaloacetato (4C) com acetil CoA na presena de uma enzima alostrica: citrato sintetase. Para que o citrato fornea molcula de acetil-CoA para o citoplasma e l ocorra a biossntese, a circunstncia metablica preferencial deve ser o estmulo ao anabolismo, ou seja, preciso ter um excesso de ATP.
Ento, o excesso de citrato vai para o citoplasma atravs do transporte de protena tricarboxlicas. Este citrato ser oxidado, na presena de CoA e da enzima ATPcitrato liase, transformar-se- em acetil CoA e oxaloacetato. A ATPcitrato liase uma enzima que pode ser controlada por modificao covalente,ou seja, por fosforilao. Est ativa quando no-fosforilada. O glucagon inibe a ATPcitrato
liase por que o seu segundo mensageiro (AMPc) estimula quinases que fosforilam. Se estivssemos discutindo a sntese de cidos graxos nas clulas adiposas, onde no ocorre a gliconeognese, o destino do oxaloacetato no poderia ser substrato para glicose-6-fosfato, ento se transforma em malato pela via do malato. Essa reao no ocorrer em alta velocidade, pois a fosfofrutoquinase 1 inibida pelas altas concentraes de citrato, ou seja, o seu modulador negativo. Desse modo, forma-se menos NAD reduzido na gliclise e assim menos NAD reduzido para ser reoxidado na via do malato.
Quando a biossntese dos cidos graxos est ocorrendo vai haver a transformao do oxaloacetato em malato s que numa velocidade muito baixa por que fundamental que haja a participao do NAD reduzido que se transforma em oxidado, mas ele vem gliclise, que est produzindo pouco NAD reduzido por causa do citrato que o modulador negativo da PFK1. A principal fonte de NAD reduzido para a biossntese de cidos graxos (via das pentoses - fato que justifica o seu estudo: formao de NADred para a biossntese...) no a via das pentoses e sim o proveniente da ao de uma tal enzima mlica.
Quem ela? a enzima que catalisa a transformao do malato (4C) em piruvato (3C), quando h a formao de um NAD reduzido. No h sada para o oxaloacetato na cel. adiposa. ou ele forma aminocido por transaminao ou se transforma em malato na presena de NAD reduzido e da enzima mlica. Vamos considerar que a principal fonte de NAD reduzido para a biossntese (ocorre em alta velocidade) proveniente da via das pentoses tendo em vista que outra via tem velocidade muito
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diminuda pela presena de citrato. O destino do piruvato a mitocndria, onde vai se transformar em acetil CoA que vai se ligar ao oxaloacetato, formando mais citrato.
A acetil-CoA o agente iniciador da biossntese de cidos graxos. No citoplasma, carboxilada na presena de ATP e da acetil-CoA carboxilase, obtendo-se uma substncia conhecida como malonilCoA, agente continuador da biossntese... Da, podemos continuar afirmando que a acetil-CoA o nico substrato para essa via, porque mesmo o motivador para que haja a formao de cidos graxo precisa da presena da acetil-CoA.
Observao 1.: A CAT1 (catalisar a unio do cido graxo ativado com o seu transportador: a carnitina, a nvel de superfcie externa da MEMBRANA MITOCONDRIAL INTERNA.) inibida alostericamente por altas concentraes de malonil CoA, ou seja, quando a biosstese est ocorrendo intensamente (muito citrato no citoplasma, a acetil-CoA se transforma em malonilCoA), a -oxidao estar sendo inibida, porque se no interrompe a biossntese (aquelas 4 reaes), inibe o transporte do cidos graxo ativado do citoplasma para a mit, ou seja, chega muito menos cidos graxo s mitocndrias para ser -oxidado, j que o excesso de malonil-CoA inibe a CAT1.
Observao 2.: A acetil-CoA carboxilase uma enzima alostrica e pode ser controlada tambm por modificao covalente. Primeiramente, quanto ao aspecto de modificao covalente: a insulina estimularia a acetil-CoA carboxilase que ativa (defosforilada), o glucagon inativa-a. O principal modulador positivo dessa enzima o citrato e o nico modulador negativo o cidos palmtico (16C).
Agora, teremos que estudar a juno dessas duas substncias. Quando se pensou nisso, verificou-se a presena de um problema: acetil-CoA e malonil-CoA no reagem entre si, ou seja, o malonil (radical do cidos malnico) quando transportado pela CoA no podia reagir com o radical acil, acetil. Sabendo-se que essa reao acontece, ento, s restava uma sada, trocar de carreador. Essa outra substncia carreadora de radicais acil chamada de ACP-SH (protena carreadora de radicais acil), tem uma sufidrila no seu radical prosttico fosfopantetena (o peso molecular de 9000). No lugar da CoA entra ACP45 , ficando acetil-S-ACP (verdadeiro cido graxo iniciador) e malonil~SACP(verdadeiro ag. continuador), e h a liberao de CoA-SH. A sntese de cido graxo no
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Protena Carreadora de Acil (Acyl Carrier Protein)
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citoplasma feita pelo sistema cido graxo sintetase (P.M.=400.000). Esse sistema composto por sete protenas, uma delas no tem atividade cataltica (ACP-SH) e as outras seis so enzimas, duas foram utilizadas acetil ACP transacilase e malonil ACP transacilase.
A prxima etapa reagir o acetil ACP c malonil ACP. Para se construir um cido graxo de nmero om par de carbonos, usa-se uma molcula de acetil e todas as outras estaro sob a forma de malonil. Mas toda vez que o malonil entrar p/ alongar um cidograxo, haver a liberao de um CO2 . Ento, tem um acetil, entra um malonil, sai sempre um CO2 , ficando uma molcula de 4C... Isso acontece at a formao do cido graxo desejado. Para a formao do cido palmtico, por exemplo, tem-se uma molcula de acetil e sete de malonil (doador de 2C para a sntese).
A formao de uma molcula de 4C a partir de acetil e malonil:

1) Na primeira reao, sai o gs carbnico e ACP-SH e forma acetoacetil SACP, na presena da ceto
acil-ACP sintetase (terceira enzima do complexo cido graxo sintetase); as prximas reaes tem objetivo de retirar grupamento cetona, da seguinte maneira: hidrogenao, desidratao, e finalmente a hidrogenao (o inverso da -oxidao quando se queria a formao de um grupamento cetona).
2) Na segunda reao, reduo do grupamento cetona atravs do NADP reduzido (via das pentoses e
via enzima mlica), forma -hidroxiacil SACP na presena de cetoacil ACP redutase;
3) Na terceira reao, desidratao (liberao de gua estabelecendo uma dupla ligao entre os
carbonos e ), forma enoil ACP na presena da - hidroxiacil-ACP desidratase;

4) Na quarta e ltima reao, hidrogenao saturando a ligao entre os carbonos e , atravs do
NADP reduzido, na presena da enoil ACP redutase, forma um composto de 4C que vai se juntar com malonil... formar um cido graxo de 6C... at formar, o cido palmtico na maioria das vezes, por que ele mesmo controla toda a sntese de ac graxos modulando negativamente a acetil-CoA carboxilase. No citoplasmtico, no se dispe mais do malonil por que o cido palmtico formado est inibindo a formao de malonil-CoA. Quantas molculas de NADP reduzido foram utilizadas para a formao do cido palmtico? Quatorze. Por que para cada entrada de malonil utiliza-se dois NADP reduzidos, como so sete de malonil... No final, obtm-se o palmitoil-SACP. Para transform-lo, em palmitato,
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preciso retirar a ligao tio-ester, para deslig-lo da protena carreadora e para isso, reage na presena de gua com a ao de enzimas desacilases que retiram o ACP e recompem a carboxila. O alongamento da cadeia de cidos graxos
A sntese extramitocondrial de cidos graxos tinha uma limitao no especfica do sistema cido graxo sintetase, mas, da acetil-CoA carboxilase (enzima que catalisa a transformao do agente continuador desta sntese-malonil CoA). A acetil-CoA carboxilase inibida por altas concentraes de cido palmtico. Metabolicamente, isto significa que na medida em que for formando o cido graxo de 16 carbonos comea a inviabilizar, ao menos diminuir a formao de malonil-CoA, diminuindo a velocidade de biossntese. Isso poderia criar um paradoxo metablico. Daremos o exemplo apenas da obteno de cido esterico de 18C46 . Existem dois sistemas de alongamento classicamente conhecidos nos livros textos e nos artigos cientficos: um ocorre no REL e outro na mitocndria. O primeiro muito ativo e o segundo praticamente inativo porque como os cidos graxos de at 16C so formados no citoplasma, para que ocorresse o alongamento mitocondrial eles teriam que ser ativados, ligados ao complexo acil carnitina e atravs da translocase serem transportados para o interior da mitocndria onde seria cindido para ento poder ser alongado pelo acetil-CoA. Para que o cido palmtico seja sitetisado as vias de biossntese precisam estar ativadas existindo grande disponibilidade de malonil-CoA no citoplasma que representam o nico modulador alostrico negativo da CAT I.
As reaes de alongamento a partir do cido palmtico so bem semelhantes quelas vistas anteriormente. A diferena bsica o uso malonil-CoA (2C) e no malonil ACP. Para montar um cido graxo de 22C, esse seria montado no citoplasma at 16C pela enzima acetil-CoA carboxilase que inibida alostericamente por cido de 16C que seriam alongados por trs molculas de malonil-CoA no REL. Formao de cidos graxos insaturados
A aspirina uma substncia que inibe a formao tromboxanas e de prostaglandinas. As primeiras esto envolvidas no processo de coagulao sangnea enquanto as prostaglandinas tm inmeras
funes, dentre elas a de citoproteo das mucosas como por exemplo o ataque do cido colordrico no
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No organismo no sero encontrados cidos graxos com um nmero mpar de carbonos.
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estmago. A ingesto demasiada de AAS47 e aspirina pode, ento causar danos mucosa estomacal e intestinal. As estruturas mencionadas so originrias do cido aracdnico, cido esse que tem 20C e 4 duplas ligaes duplas (=). Estudar a formao de cidos graxos insaturados no uma mera elocubrao terica, mas saber a formao do cido graxo fundamental para a formao de prostaglandinas, tromboxanas e o cido graxo fundamental na estrutura do diacil gliceerol, segundo mensageiro (cido araquidnico48 e cido esterico). Ento a questo : o cido aracdnico excencial, ou seja, obtido a partir da dieta? No, ele sintetizado no nosso organismo apesar da sua complexidade. Por sinal, nossas clulas s so capazes de sintetizar um cido graxo com mais de uma insaturao que o cido araquidnico. Os demais cidos graxos possuem apenas uma insaturao. Como fazer essa insaturao? Tomemos por exemplo o cido olico49 que possui 18 carbonos e uma dupla entre C9 e C10 . Para formar essa insaturao foi necessrio a retirada de dois hidrognios, um de cada carbono (9 e 10) pela ao de enzimas conhecidas como oxidases e que usam o NADP reduzido como coenzima formando duas molculas de gua. cidos graxos com duas ou trs insaturaes so essenciais como o linolico e o palmitolico. O cido araquidnico, portanto, no essencial, obtido a partir do linolnico com o uso do malonil-CoA . Formao de triacil gliceris (TAGs) e fosfolipdeos
O glicerol vai se combinar com novas molculas de cidos graxos para formar molculas de gordura. No entanto, o substrato para a formao de novas molculas de gorduras (TAG)50 so respectivamente: cidos graxos + glicerol fosfato. Isto significa que os cidos graxos no representam uma forma de armazenamento. Quando muito, representam uma forma de armazenamento de acetil CoA j que esse seu nico substrato. O glicerol obtido a partir da hidrlise de gorduras nas clulas adiposas, deve ser fosforilado em uma reao catalisada por uma enzima conhecida como glicerolquinase (a glicero quinase). O problema que essa enzima praticamente inexistente nas clulas adiposas, sendo
encontrada em alta atividade em outros tecidos, principalmente no heptico.
Assim, por gradiente de concentrao, vai para a circulao de onde vai para o fgado. L ele vai transformar-se em glicerol-fosfato que, por sua vez pode seguir os seguintes caminhos metablicos:
47 48
cido Acetil Saliclico Insaturado (20:3) 49 Olico (18:1); Linolico (18:2); Linolnico (18:3) 50 Triacilgliceris
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fosfolipdeos de membrana, ser substrato para gliconeognese (se o glicerol-fosfato for transformado em diidroxi-cetona-fosfato e da a gliceraldedo-3-fosfato ou ser transformado em cido pirvico), substrato para formao de molculas de gordura no fgado, servir de substrato para a via do glicerol fosfato (reoxidao do NADred formado na gliclise). O diabtico no compensado, por exemplo, tem deficincia grave com o aproveitamento de glicose porque a insulina estimula a absoro de glicose na clula. Sem mobilizao de glicose, a clula utiliza cidos graxos como fonte principal de energia. A deficincia de carnitina pode gerar o fgado gordo porque o cido graxo no vai ser oxidado, acumulando no citoplasma. Os cidos graxos transportados para o citoplasma para serem fosforilados ao encontrarem cidos graxos em abundncia formaro muita gordura. A glicose se transforma em glicose-6-fosfato que forma gliceraldedo-3-fosfato e diidroxicetona-fosfato que, na presena de glicerol-fosfato desidrogenase e NAD reduzido, saturam a dupla ligao formando o glicerol-fosfato. As hidroxilas 1 e 2 so esterificadas por, principalmente cido palmtico e cido esterico formando o cido fosfatdico de onde obtemos tanto as gorduras como os fosfolipdeos. Quando esse cido
fosfatdico se une a uma base nitrogenada como a colina, forma uma fosfolipdeo muito importante, a LECITINA. Quando o cido se liga a serina ou etanolamina, formando a CEFALINA. Esses so dois dos principais fosfolipdeos de membrana. J os TAG, so formados na presena de uma fosfatase obtendo um DAG que, com a entrada de outro cido graxo, esterificado na sua ltima hidroxila, formando o TAG. Formao e utilizao de corpos cetnicos
O nico local onde isso ocorre nas mitocndrias das clulas hepticas. Dois deles so cidos fortes: acetoacetato (4C) e beta-hidroxibutrato (4C) e o outro a propanona-3C (acetona). So formadas a partir de um nico substrato: acetil-CoA. Quando h, momentneamente, uma excesso de acetil-CoA em relao ao oxaloacetato. Como o fgado obrigado a manter a glicemia se utiliza mais de cido graxo como principal substrato energtico o que gera um excedente grande de acetil-CoA, que forma corpos cetnicos ao invs de fgado gordo. A membrana mitocondrial interna permevel a esses compostos indo para a circulao. L o acetoacetato e o beta-hidroxibutirato iro para as clulas dos tecidos extra-hepticos.
O jejum prolongado leva as clulas nervosas a utilizarem corpos cetnicos com substrato energtico aps voltarem a se transformar em acetil-CoA nas mitocndrias dessas clulas. O primeiro corpo cetnico o acetoacetato. A partir da juno de duas molculas de acetil-CoA com a retirada de uma
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molcula de CoA, reao catalisada pela tiolase, forma-se o acetoacetol CoA. Esse ser hidratado pela ao da desacilase, perdendo tambm a outra molcula de CoA. A acetona a descarboxilao do acetoacetato. Essa descarboxilao pode ser espontnea e muito lenta ou catalisada pela acetoacetato descarboxilase, vitamina B6 dependente.
O beta-hidroxibutirato formado pela hidrogenao do grupamento cetona do carbono b com a oxidao de um NAD reduzido, reao reversvel que catalisada pela beta-hidroxibutirato desidrogenase. Cerca de 25% do acetoacetato so transformados em acetona e 75% em betahidroxibutirato, j que o ltimo rende mais energia a clula, pois a sua transformao em acetoacetato rende um NAD reduzido. Nas mitocndrias de clulas de tecidos extra-hepticos o beta-hidroxibutirato deve ser transformado novamente me acetoacetato usamos uma molcula de NAD oxidado. O acetoacetato deve se transformar em acetil-CoA pela ao da tioquinase actica pois esse precisa ser ativado. Essa enzima no h no fgado e por isso os corpos cetnicos no so utilizados no fgado. Existe uma outra forma de se obter acetoacetil-CoA a partir do acetoacetato, a sua combinao com o succinil CoA numa reo de dupla troca. Esse doa CoA para o acetoacetato que se transforma em acetoacetol-CoA e o succinil-CoA transforma-se em succinato pela ao da tioforase, que tambm no existe no fgado. Patologias
A utilizao excessiva de cidos graxos como substrato metablico gera um excedente brutal de acetilCoA o que tambm eleva a produo de corpos cetnicos, que vo para circulao. A acetona, por ser voltil, gera o conhecido hlito de ma, pois a no ingesto prolongada de glicose gera o aumento do consumo de gordura. O jejum prolongado causa ento a acidose (cetoacidose) por serem o betahidroxibutirato e cetoacetato cidos fortes. lem disso, as clulas de tecidos extra-hepticos, que no necessitam desse excedente de corpos cetnicos, ficam saturadas liberando esse excedente pela urina, s que esses cido vo ser eliminados na urina sob a forma de sal de sdio b hidroxi butirato de sdio e aceto acetato de sdio. A sada excessiva de sais pela urina inibe os antidiurticos para diluir os sais, o que causa a desidratao.
Por que os corpos cetnicos no so aproveitados como fonte de energia no fgado? Nem todo o excesso de glicose armazenado em forma de glicognio, por isso quando se quer emagrecer diminuem-se os acares e no as gorduras. Para as clulas adiposas a nica fonte de
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glicerol fosfato a glicose por que a glicose vai para a gliclise se transforma em gliceraldedo-3fosfato, diidroxicetona-fosfato que transformada em glicerol-fosfato. Pois isso mais de 95% do produto da ao da aldolase a diidroxicetona-fosfato. Ativao Dos cidos Graxos A ativao dos cidos graxos consiste na entrada destes na mitocndria, na forma de acil-CoA. O processo depende: 1. Da ligao do cido graxo com a Coenzima A, formando o acil-CoA no citosol. A reao catalisada pela enzima Acil-CoA Sintetase, localizada na membrana mitocondrial externa:
CH3 -(CH2 )n-COOH + ATP + CoA-SHCH3 -(CH2 )n-CO-S-CoA + AMP + PPi 2. Do transporte do radical acila atravs da MMI, do citosol para a matriz, mediado pelo carreador especfico Carnitina. A transferncia do radical acila da CoA para a carnitina catalisada pela enzima Carnitina-Acil-Transferase I:
Acil-S-CoA + Carnitina Acil-Carnitina + CoA-SH
3. Do lado da matriz mitocondrial, a carnitina doa novamente o radical acila para a CoA, regenerando o acil-CoA no interior da mitocndria. A reao catalisada pela Carnitina-AcilTransferase II, localizada na face interna da MMI, e exatamente o inverso da descrita acima.
Beta - Oxidao do cido Graxo:
Consiste na quebra por oxidao do cido graxo sempre em seu carbono beta, convertendo-o na nova carbonila de um cido graxo agora dois carbonos mais curto. O processo repetitivo, e libera a cada quebra:
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1 NADH+H+ 1 FADH2 1 Acetil CoA So 4 as enzimas envolvidas em cada etapa de oxidao da via. Exemplo: CH3 -CH2 -CH2 -CH2 -CH2 -CH2 -CH2 -CH2 -CH2 -CO-S-CoA+CoA-SH CH3 -CH2 -CH2 -CH2 -CH2 -CH2 -CH2 -CO-S-CoA + Acetil-CoA CH3 -CH2 -CH2 -CH2 -CH2 -CO-S-CoA + Acetil-CoA CH3 -CH2 -CH2 -CO-S-CoA + Acetil-CoA Acetil-CoA + Acetil-CoA
Respirao Celular: A sntese de ATP acoplada beta - Oxidao vem: Do transporte de eltrons do NADH e do FADH2 formados no processo pela cadeia respiratria. Da oxidao dos radicais acetil dos acetil-CoA no ciclo de Krebs. Exemplo: A oxidao de um cido graxo com 16 carbonos rende para a clula, em ATP: 8 Acetil-CoA 96 ATPs 7 NADH+H+ 21 ATPs 7 FADH2 14 ATPs Total 131 ATPs
Regulao da beta-Oxidao:
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A regulao da via feita pela enzima reguladora Carnitina-Acil-Transferase I, que regula a velocidade de entrada do cido graxo na mitocndria, desta forma, a velocidade de sua degradao. Esta enzima inibida por MALONIL-CoA, um intermedirio cuja concentrao aumenta na clula quando esta tem carboidrato disponvel, e que funciona como precursor na biossntese de cido graxo. Oxidao de cidos Graxos Insaturados: Se o cido graxo a ser oxidado for insaturado, o processo tem dois passos enzimticos adicionais: A converso do ismero "cis" em "trans"; A saturao da dupla ligao pela adio de gua.
Uma vez o cido graxo saturado, ele pode seguir com o processo normal de oxidao. Oxidao de cidos Graxos com Nmero mpar de Carbonos: A oxidao de um cido graxo com nmero de carbonos mpar leva formao de um resduo de PROPIONOL-CoA, que atravs de uma seqncia de reaes enzimticas e com gasto de energia (1 ATP hidrolisado para cada propionil-CoA convertido), convertido em SUCCINIL-CoA, que entra no ciclo de Krebs para ser oxidado. Corpos Cetnicos: A oxidao dos cidos graxos no fgado leva formao de grande quantidade de Acetil-CoA, que pode ser oxidado no prprio fgado, ou convertido nos CORPOS CETNICOS. So trs os corpos cetnicos formados a partir do Acetil-CoA: Acetoacetato, beta Hidroxibutirato e Acetona. O objetivo da formao dos corpos cetnicos permitir o transporte da energia obtida pela oxidao dos cidos graxos aos tecido perifricos, para l serem utilizados na sntese de ATP. A formao de corpos cetnicos uma via de "superabundncia" atravs da qual o fgado distribui energia a todo o organismo. Nos tecidos perifricos os corpos cetnicos regeneram o acetil-CoA, que entra no ciclo de Krebs para produo de energia. Normalmente a quantidade de corpos cetnicos no sangue baixa, mas em situaes como o jejum prolongado ou o "diabetes mellitus", suas concentraes sricas podem aumentar muito, levando o indivduo a um estado de CETOSE, caracterizada por uma ACIDOSE METABLICA, que pode ser fatal.
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DEGRADAO OXIDATIVA DE PROTENAS

O titulo de metabolismo das protenas no muito adequado porque quando estudamos o primeiro grupo de substncias orgnicas, os glicidios, estudamos o seu metabolismo, tanto o catabolismo como seu armazenamento; o mesmo ocorrendo com os lipidios, mas no caso das protenas mais interessante estudar em separado o catabolismo e anabolismo. Isso devido ao fato das protenas no representarem uma forma de armazenamento de aminocidos como o glicogenio e as gorduras, elas exercem funes claras como na estrutura de hormnios e enzimas. Elas no dependem das altas e baixas de ATP como as gorduras e glicdios.
Outro motivo de estudarmos em separado a parte de anabolismo ser a sua constante atualizao devido aos progressos nesta rea. Mas sero os aminocidos to importantes quanto os cidos graxos e glicose na obteno de energia? Podemos dizer que no, j que cerca de 90% da energia requerida para funcionamento do nosso organismo vem da oxidao de cidos graxos e glicose e s 10% ou 15% vem da oxidao de aminocidos. evidente que isso tem excesses. Uma dieta rica em protenas ir provocar um execesso de aminocidos no tecido, os aminocidos tm um caminho prioritrio que formar protenas intracelulares no dependendo de altas e baixas de ATP para isso, nesses casos de excesso haver um maior uso de aminocidos como fonte de energia. Em que condies ns utilizamos aminocidos como fonte enegtica? S h trs condies: 1o ) quando os aminocidos aparecem no meio intracelular provenientes da taxa de renovao de nossas protenas intracelulares (turn over) (exemplo: paratormnio: vida-mdia 18 minutos e tirocalcitonina: vida mdia 11 minutos). As protenas so hidrolisadas pelas proteases lisossomiais. 2o ) quando h um excedente de aminocidos em relao a necessidade de formao de nossas protenas intracelulares. Quando, por exemplo, nas clulas betas do pncreas quando a aminocidos suficientes para formao de insulina e ainda sobra, esse excesso ir ser usado na formao de energia. 3o ) condio em estado anormal - desnutrio, jejum prolongado, diabetes no controlado (compensado), ou seja, utiliza pouca glicose e cido graxo e passa a utilizar aminocidos. Mesmo um jejum de 12 horas, j que h um esgotamento de glicognio nesse meio tempo com apenas as atividades cotidianas sem contar atividades fisicas. As gorduras podem durar at dois meses, mesmo assim h utilizao de aminocidos como complementao da obteno de energia.
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O que oxidar aminocidos? transform-los em CO2 e H2 O com a retirada de seu grupamento amina que sair na forma de amonia (NH3 ), substncia txica ao nosso organismo e que no necessariamente deve ser eliminada, s em caso de excesso, caso contrrio pode ser usada para construo de substncias fisiologicamentes ativas. Caso a amnia no fosse aproveitada em nosso organismo todos os aminocidos seriam essenciais, j que no poderamos formas grupamentos aminocidos nos esqueletos de carbono. Substncias obtidas pela amnia: nucleotdeos (base nitrogenada dessa substncia), aminocidos no-essenciais e outras aminas importantes. A amnia em grande quantidade excretada na forma de uria.
Os aminocidos ao perderem o grupamento amina formam cetocidos que alimentam o ciclo de Krebs. So obtidos vrios intermedirios do ciclo de Krebs pela desaminao dos aminocidos, que iro movimentar tambm a cadeia respiratria para formar ATP, ou tambm iro realizar a gliconeognese.
Reaes caracteristicas do catabolismo dos aminocidos: 1- Desaminao (oxidativa e no-oxidativa) 2- Transaminao 3- Transdesaminao 4- Descarboxilao Desaminao oxidativa Usaremos a alanina como exemplo:
H | CH3 - C - COOH | H -N -H Na presena de sua L-aminoxidase correspondente e tendo o FMN como coenzima que ser reduzida formando FMN reduzido. Haver perda de dois hidrognios formando um iminocido correspondente a alanina. Esse fenmeno ir ocorrer principalmente, no unicamente, no citoplasma de clulas hepticas e renais. O iminocido, uma substncia instvel, com a adio de gua sem necessidade de qualquer enzima ir liberar amnia entrando no lugar do grupamento amina um grupamento cetona. Ser formado ento o cetocido correspondente a alanina: o cido pirvico cujo destino j sabido. A
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FMN reduzido no vai para mitocndria ser reoxidada na cadeia respiratria, ela se combinar com xignio molecular e formao de perxido de hidrognio (H2 O2 - gua oxigenada) e para que esses perxidos formados no sejam prejudiciais as clulas eles sero transformados em gua e oxignio pela ao das catalases (tecido renal e heptico so ricos em catalases). Assim a FMN reoxidada.
Outro exemplo com o cido spartico (ou aspartato):
COOH - CH2 - CH - COOH | NH2
O aspartato na presena da L-aminoxidase corresponde e de sua coenzima FMN ir formar seu iminocido correspondente formando oxaloacetato. Agora sem enzima haver entrada de gua, liberao de amnia e formao do cetocido correspondente ao aspartato: o oxaloacetato, no apenas intermedirio do ciclo de Krebs como tambm o principal substrato para a gliconeognese. O FAD s ir atuar como coenzima de retirada de grupamento amina quando ns estivermos fazendo a desaminao de D aminocidos e no de L-aminocidos. Desaminao no oxidativa:
A desaminao no-oxidativa ocorre principalmente em dois tipos de aminocidos: os hidroxilados (exemplo: serina) e sulfurados (exemplo: cistena).
SERINA
CISTEINA
OH H | |
SH |
H |
CH2 - C - COOH | NH2
CH2 - C - COOH | NH2
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A serina ento pela sua L-amino-acil desidratase perde uma molcula de gua e a cistena perde uma molcula de H2S pela sua L-amino-acil desidratase. A partir da as vias de desaminao se igualam para os dois aminocidos. O iminocido formado pela perda do grupamento hidroxila, no caso da serina e o grupamento sulfidrila, no caso da cistena. Assim esse iminocido, recebe uma molcula de gua e perde o grupamento amina, formando cetocido: no caso desses dois aminocidos o cetocido formado o cido piruvico. Transaminao
Podemos dividir os aminocidos em dois tipos. Aminocidos glicognicos e cetognicos. Os aminocidos glicognicos so os aminocidos que quando perdem o seu grupamento amina formando cetocidos que sero usados na gliconeognese, por exemplo, o aspartato que essencialmente glicognico pois, ao ser desaminado forma oxaloacetato que o principal substrato da gliconeognese. Os aminocidos cetognicos so aqueles que quando perdem seus grupamentos aminas formam cetocidos que quando metabolisados contribuem direta ou indiretamente para formao de corpos cetnicos. A alanina ir formar piruvato que pode tanto ser indiretamente substrato para a gliconeognese como tambm substrato indireto para a formao de corpos cetnicos, podendo ser classificada como aminocido glicognico ou como cetognico. No entanto a aminocidos como a lisina que quando desamindos fornecem diretamente aceto acetil-CoA que ir formar aceto acetato, a lisina ento essencialmente cetognico.
Antes de comear a transaminao, devemos alertar que as L-amino oxidases so enzimas que se apresentam em baixissimas concentraes mesmo nos tecidos heptico e renais. Qual ento a principal forma de retirada do grupamento amina para formao de cetocido? a transaminao que a transferncia do radical amina de um aminocido para um cetocido que em mais de 90% das situaes o alfa ceto glutarato, que recebe o grupamento amina transformando-se em glutamato (aminocido) e o aminocido quando perde seu grupamento amina se transforma no seu cetocido correspondente. O que acontecer ento com o ciclo de Krebs que ficaria na falta do alfa ceto glutarato que seria usado na transaminao de quase todo aminocido? Haveria uma paralizao do ciclo por falta de alfa ceto glutarato logo deve haver uma sada.
A transaminao reversvel e so catalisadas por aminotransferases (ou transaminases) que so sempre dependentes do estado ativo da vitamina B6: o fosfato piridoxal. Os dois exemplos clssicos
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so as transamines da alanina e do aspartato, transamines essas de importncia mdica. A alanina, catalisada pela transaminase glutmica piruvica (TGP), dependente de fosfato piridoxal, transferindo seu grupamento amina para o alfa ceto glutarato que transformado em glutamato. A alanina ir formar cido pirvico com a perda de seu grupamento amina. No caso do aspartato haver transferncia de grupamento amina para o alfa ceto glutarato que dar origem ao glutamato. Essa reao catalisada pela enzima transaminase glutmica oxaloactica (TGO), tambm dependente da forma ativa da vitamina B6 (o fosfato piridoxal). O aspartato perdendo o grupamento amina formar oxaloacetato.
Importncia mdica da Transaminao: essas duas transaminases (TGO e TGP) so muito usadas no diagnstico de doenas. A TGO uma enzima que existe em maior quantidade (no apenas) na mitocndria, ao contrrio da TGP que existe em maior quantidade (no apenas) no citoplasma. No infarto algumas enzimas so liberadas na circulao em funo da leso tecidual, a segunda enzima em maior quantidade (a primeira sem importncia no momento a creatina fosfo quinase) a TGO j que o tecido cardco rico em mitocndrias. A leso poder ser medida pela quantidade de enzimas na circulao, quanto maior a quantidade maior a leso assim podemos diagnosticar enfartamento assimtomticos atravs da medida da leso tecidual. J em leses em tecido heptico como em hepatite, cirrose e ictiercia h o controle da cicatrizao heptica pelo nvel de transaminases sendo que a primeira que sai a TGP.
Outro exemplo o caso de operrios que se intoxicam em indstrias quimcas principalmente as que usam solventes orgnicos como tetra cloreto de carbono como clorofrmio. Tais solventes orgnicos provocam a degenerao do tecido heptico, assim poderamos acompanhar o nvel de leso pela dosagem de transaminase.
Regenerao do alfa ceto glutarato: para evitar que ocorra paralisao do ciclo de Krebs por falta de alfa ceto glutarato, preciso regenerar o alfa ceto glutarato. A oxidao dos aminocidos sempre ocorre com liberao de amnia, no entanto na transaminao no ocorreu at agora essa liberao. Essa regenerao se d exclusivamente nas mitocndrias devido presena de elevadas concentraes da enzima L glutamato desidrogenase (LGDH) que uma protena complexa com seis sub-unidades proteicas com peso molecular de aproximadamente 330.000 e controlada alostericamente. Essa enzima ir retirar o grupamento amina do glutamato, ou seja, que enquanto a enzima que retira o
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grupamento amina da alanina, do aspartato, da cisteina e da serina est em baixa quantidade, essa enzima est em alta quantidade nas mitocndrias das clulas.
O glutamato obtido no citoplasma (em maior quantidade pela TGP e em menor pela TGO) passa pela membrana mitocondrial interna por uma protena transportadora de glutamato. No interior da mitocndria haver formao de alfaceto glutarato e amnia na presena de LGDH que tem como coenzima o NAD que se transforma em NAD reduzido que ir ser reoxidado na cadeia respiratria com formao de cadeia respiratria. O controle alostrico dessa enzima realizado tendo como moduladores positivos (alta de ADP e GDP) e como moduladores negativos (alta de ATP e GTP). A reao reversa da LGDH usar como coenzima o NADP reduzido que se transformar em NADP oxidado. Transdesaminao
o mesmo que transaminao mais a regenerao do alfa ceto glutarato. Balano Nitrogenado
Balano nitrogenado a medida da quantidade de nitrognio fixado aos tecidos (na sntese de protenas) em relao ao nitrognio excretado (amnia na forma de uria). medida ao longo de 24 horas tirando-se uma mdia dos balanos nitrogenados positivos e negativos de um indivduo ao longo dessas 24 horas. Essa medida em pessoas normais deve dar como resultado um equilbrio, ou seja, excreo igual fixao do nitrognio. O balano positivo quando h maior fixao do que excreo, como por exemplo, no caso de fase de crescimento, gravidez, ps-operatrio e ps-infeco aguda so casos em que deve haver um balano nitrogenado positivo. O negativo ocorre em situaes de fome, desnutrio, diabtico no-controlado e jejum prolongado quando a excreo supera a fixao de nitrognio. Como as reaes do catabolismo de aminocidos so todas reversveis, no balano nitrogenado positivo as reaes ocorreram no sentido de sntese de protenas, formao de aminocidos no-essenciais e formao de amnia, ou seja, balano nitrogenado positivo sinnimo de alta de ATP e GTP. J no caso de balano nitrogenado negativo, as reaes ocorrem no sentido de expulso de amnia, sendo sinnimo de altas de ADP e GDP.
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Captulo 10
METABOLISMO DOS CIDOS NUCLICOS
Existem diferenas marcantes entre o metabolismo de RNA e DNA.

1) O de RNA bastante seletivo (apenas uma das fitas de DNA ser transcrita na forma de RNA), ao
passo que a replicao de DNA tem que ser fiel e dar origem a uma cpia idntica ao DNA pariental, a sntese de RNA altamente seletiva, ou seja, a famlia de RNAm de uma clula diferente da de outra clula, que caracteriza o teor de protena daquela determinada clula.
OBSERVAO: cidosribonucleicos.
Transcrio
passar
informao
gentica
para
linguagem
dos
2) Durante a sntese de RNA, no h a necessidade da presena de um primer, ou seja, a principal
enzima da sntese de RNA capaz de comear a replicao sem precisar de um pedao j iniciado, uma ncora.
3) Quimicamente, o DNA e RNA diferenciam-se pela presena da uracila (base nitrogenada) e a
ribose, que a presena da hidroxila no carbono 2, no RNA.
A principal enzima que atua na transcrio gnica a RNA polimerase DNA dependente. Nos procariontes, existe apenas uma enquanto que nos eucariontes existem trs RNA polimerases. A equao geral de biossntese de RNA a adio de nucleotideos trifosfato (NTP) mais nucletideo mono-fosfato (NMP) crescente na presena da RNA pol, vai dar origem a uma cadeia de RNA alongada mais pirofosfato que dever ser posteriormente clivado, garantindo a irreversibilidade e a proteo do processo. Caractersticas gerais dessa enzima: multi-subunitria, ou seja, tem muitas subunidades e seu peso molecular gira em torno de 500 quilodalton (alto peso). As subunidades so: 2 , (responsvel pela ligao fosfodiester), (reconhece o molde de DNA) e (essas subunidades so a parte cataltica) que fazem parte do cerne da enzima. Mas para se tornar uma holoenzima biogicamente ativa, tem a necessidade de se unir a outras subunidades reguladoras chamadas (sigma) e (rh).
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Cada subunidade faz um papel especfico dentro do processo de sntese de RNA. As protenas reguladoras no fazem parte do cerne da enzima. Durante a polimerizao do RNA, as subunidades reguladoras devem reconhecer o incio da sntese. A RNA polimerase, diferente da DNA pol, capaz de se ligar ao molde de DNA em - helice e escane-lo at achar um stio de iniciao e a subunidade que ajuda a fazer essa associao. Protena de hit shock ou choque trmico refere-se ao fato de, quando uma clula submetida a uma alta temperatura, ela responde a essa variao sintetizando as protena de choque trmico, so altamente conservadas do ponto de vista evolutivo. Se comparar um animal inferior com um superior, so as
mesmas protenas sintetizadas quando submetidas alta temperatura. Elas so ditas de proteo da clula. Ns, de certa forma interferimos na produo dessas protenas na medida em que quando desenvolvemos uma febre, antes at de chegar um limite para comear a entrar com um antitrmico, de um modo geral, j se d logo o antitrmico. Acontece que o nosso organismo tem esse mecanismo de proteo prprio que a protena de choque trmico na medida em que ele invadido p um agressor or (microrganismo) e para se proteger, eleva a temperatura do corpo, na medida que faz isso, muda o padro de sntese de protena, sintetizando as de hit shock: protena que defendem a clula de uma possvel desnaturao proteica posterior. A famlia mais importante at agora pesquisada a HSP 70. O choque trmico tem sido muito utilizado em agricultura e medicina. A diferena das outras protenas para as de choque trmico est na subunidade , nas protenas normais, protena 70 (protena cujo peso molecular 70 quilodalton) e a de choque trmico tem 32 de peso molecular. Ento, quando submetida a altas temperaturas, a subunidade 32 compete com a 70 e se associa a RNA pol e um grupo de protenas especiais ser selecionado porque um essa subunidade que seleciona o stio de iniciao. Ento, se houve a troca dessa subunidade sigma significa dizer que a sntese de RNA comear em local diferente do usual. a subunidade que determina o lugar que iniciar a transcrio, seleciona o stio de sntese de RNA. O processo de sntese de RNA pode ser dividido em iniciao, alongamento e terminao. A iniciao do processo pode ser definida como o reconhecimento e identificao de uma regio chamada promotora. Quem ela? a regio de ligao da RNA polimerase no DNA. Tem como caracterstica regies de consenso, seqncias comuns a essas regies. Quando vai determinar o stio de inicio da sntese de RNA, o primeiro nucleotideo que vai determinar um aminocido chamado de +1 dentro do mapeamento do DNA e a medida em que voc afasta desse stio, h nmeros negativos para a esquerda -1, -10, -35, (promotora) ,+1, +2 (estrutural), ou seja , dentro do DNA podemos mape-lo a partir do incio da mensagem que dar origem a um aminocido e finalmente a uma protena. Costuma-se
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representar a parte que vai codificar uma protena como positiva e a negativa, a regio reguladora ou moduladora que vai ligar a RNA pol, chamada tambm de promotora. Essa regio adjacente a que dar origem a uma protena compreende a r egio promotora (tem sempre uma seqncia pppG ou pppA) a reguladora que a negativa. O que h de consenso nessa regio promotora nos vrios promotores analisados em funo da sntese de RNA? Existe uma regio consenso na posio -10 e -35 do DNA que caracteriza a regio promotora , que apresenta seqncias comuns chamadas de catablicas.
Da comea o alongamento da cadeia que compreende a adio sucessiva de vrios ribonucleotdeos. Ento a subunidade auxilia a achar o stio de identificao e fica ligada at aproximadamente a ligao de 10 nucleotdeos e aps o incio do alongamento se dissocia da enzima de tal forma que a enzima continua alongando sozinha a molcula de RNA, adicionando unidades sucessivas de ribonucletdeos. Temporariamente, tem-se a formao de um hbrido DNA-RNA. Para terminar a sntese de RNA, a RNA pol se associa a sub-unidade , que vai ajud-la a identificar o stio de terminao que tem como caractersticas uma seqncia muito grande de poli-U e uma seqncia de AG que palndrome (imagem especular), por exemplo, a palavra NIS/SIN. Ao observar-se a regio do trmino, constatou-se uma seqncia terminal AGAGAG que no final forma um grampo pareado na regio que tem uma haste e uma regio redonda que desestabiliza a molcula de RNA. Na medida em que a enzima est fazendo a leitura no RNAm e fazendo o RNA correspondente, esse RNA tem a regio palndrome que permite o pareamento intra-cadeia. Na medida em que a haste faz esse pareamento ele desestabiliza a molcula de RNA fazendo com que ela se solte do molde de DNA. No caso de procariontes, na medida em que a RNA pol vai fazendo a leitura do DNA e sintetizando o RNA, que vai se soltando e entrando na maquinaria responsvel pela traduo desse RNA. Portanto, os processamentos sofridos pela molcula de RNA que so sintetizados durante o processo de transcrio no caso de procariontes so poucos quando comparados com eucariontes que sofrem transformaes qumicas para dar origem ao RNA biologicamente ativos. Quais so os produtos da sntese de RNA? mRNA rRNA tRNA hnRNA (heterogneo nuclear) snRNA (baixo PM nuclear)
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Em potencial, cada vez que o processo de sntese ocorrer, haver todos esses produtos. Mas existe a regulao da expresso gnica que faz com que seja processado mais RNAm do RNAt por exemplo, havendo ento um sincronismo dependendo do estado metablico da clula. A clula eucaritica sofre maior regulao, uma vez que foi compartimentalizada, ou seja, guarda sua informao gnica dentro do ncleo. Formas de regulao: transporte do RNA do ncleo para o citoplasma e os vrios processamentos que os RNAs sofrem. Por exemplo, o RNA, em eucarionte, sintetizado com um nmero muito maior de base do que quando est ativo, sofre perda de pedaos, na medida em que ele quer modificar aquele gen, ele transmuta esses pedaos que tem. O tempo de transporte, nas clulas eucariticas j que compartimentalizada, enquanto que nos procariontes, quando o RNA acaba de ser sintetizado, j entra na maquinaria de sntese de protena. A meia-vida do RNA tambm um processo de regulao j que transportado para o citoplasma e existe um balano da sntese de RNAm em termos de necessidade metablica. Processamento de RNAs (eucariontes)
Retirada de introns, adio de cap (7-metil guanosina) no terminal 5, adio de uma cauda de poli-A no terminal 3. Para que serve o cap que o RNA recebeu? Acredita-se que essa estrutura tenha como funo o reconhecimento de ribossoma na traduo, auxiliando o RNAm no stio de sntese de protena no processo de traduo. Acredita-se que a cauda de poli-A tenha como funo a estabilizao do RNA como se ele proporcionasse ao RNA uma menor sucetibilidade a degradao enzimtica. Outro tipo de processamento o splicing que o corte ou perda de regies introns. Ao ser sintetizado no ncleo a molcula de RNAm chamada de RNAhn (precursor do RNAm). No ncleo, a forma do RNAm irregular devido aos introns, que intercalam os exons que so regies que codificam uma seqncia de aminocido.
Como so retiradas dos introns? Os RNAsn que medeiam essa retirada, aproximam extremidades dos exons, de tal forma que formam um lao e unem as extremidades dos introns , liberando-os. Exemplo de atividade cataltica de RNA a do snRNA51 , ou seja, une os dois exons mais prximos e cliva o intron. Uma vez perdendo essas regies de intron52 , sofre adio do capuz e da cauda de poli-A, pronto para deixar o ncleo. O codon de iniciao mais frequente o UAG e os de terminao so UAA, UAG, UGA, no codificam mensagem alguma. A funo do RNAm carrear a mensagem gentica para o citosol que o stio de
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Small Nuclear RNA Sada em lao.
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sntese de protena. No caso de procariontes carre-la at o stio de sntese de protena que so os ribossomas. O RNAt tem como funo carregar os aminocidos at o stio de sntese de protena. O RNAt apresenta na sua organizao estrutural um pareamento intra-cadeia, conferindo a ele a forma de um trevo, contendo braos, mas em M.E. no aparece bem dessa forma. Ao sofrer processamento,
ocorre o pareamento intracadeia, uma srie de regies que permitem a ele essa disposio espacial na forma de um trevo, que apresenta um brao cuja funo se ligar ao aminocido, esse brao recebe um processamento que a adio da seqncia CCA. O brao oposto o brao do anti-codon, a seqncia desse anti-codon que vai determinar que aminocido deve ser engajado no brao oposto. O RNAr tem como funo junto com determinadas protena fazer parte da estrutura do ribossoma. Tambm vai sofrer processamento, nesse caso, o precursor de 30S vai sofrer metilaes e clivagens, que dar origem a dois RNAs maduros, no caso de procarionte, 16 e 23S (unidade de sedimentao) que faro parte da estrutura do ribossoma. No caso de eucarionte, o precursor de 45S d origem a dois de 18 e 28S. Uma vez associados protena, do origem ao ribossoma, que formado pela unio das 2 subunidades graas a ao do magnsio, que vai dar origem ao ribossoma de 70 ou 80S (procarionte e eucarionte). At 1991, acreditava-se que o RNAr apresentava 2 stios: A (aminoacil), que recebe os aminocidos e P (peptidil), que mantm o peptdeo a ser sintetizado, hoje sabe-se da existncia de um terceiro chamado E (exit = sada), que posicionado o RNAt que no contm mais aminocido.
Inibidores da Transcrio:
Existem antibiticos que atuam na transcrio. A rifampicina capaz de se ligar subunidade da RNA pol, bloqueando (mais especficamente o estabelecimento da primeira ligao fosfodiester) a transcrio em procariontes. Ento, esses antibiticos que tem especificidade por enzimas so muito teis por que possvel fazer o tratamento com esse antibitico na medida em que no vai atingir o processo de transcrio nos eucariontes. Quando se usa a -amanitina, ele se liga a RNA polimerase 253 (mRNA) em eucarionte. A actinomicina D (AMD) bloqueia a traduo, mas que de forma conjunta tambm replicao, muito utilizada no tratamento de cncer. um acoplador que se insere entre as bases C e G do DNA, antibitico intercalante. Atualmente, alm da resistncia das bactrias, existe a tolerncia, dose necessria para matar uma bactria e inibir o crescimento dessa. A diferena de resistncia para tolerncia tem a ver com a dose para matar ou inibir a bactria. Quando se tem uma cepa resistente, ela tem o cnb= cni. No caso de tolerncia, ela adquiriu uma diferena numrica em termos de concentrao do cni para o cmb. Ela precisa de uma dose diferente para matar ou inibir o
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Pol II
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crescimento dela. Quem confere essa tolerncia a elas? J se sabe que os plasmdeos so elementos importantes para trocar gens de resistncia entre as bactrias. Os elementos genticos mveis, blocos de DNA, trocados de uma para outra, permitindo a uma molcula antes sensvel a um antibitico agora se torne resistente. O plamideo, que um DNA extracromossomial, DNA dupla-hlice que capaz de se replicar, independente do DNA da bactria. Ento, as bactrias que so sensveis a determinados antibiticos, se desenvolvem essa resistncia ou tolerncia. Uma vez sintetizados esses RNA, vo se agregar para formar as unidades de sntese de protena. Traduo o processo atravs do qual a mensagem gentica transformada na linguagem dos 20 aminocidos. Podemos dividi-la em etapas: 1 Ativao dos aminocidos 2 Iniciao da sntese de protena 3 Alongamento da cadeia polipeptdica 4 Terminao da cadeia polipeptdica 5 Processamento da protena
Ativar os aminocidos, significa lig-los aos tRNAs correspondentes. Essa etapa ocorre atravs da tRNA acilsintetase. O conjunto de tRNAs que existem dentro das clulas + aminocido+ ATP atravs da aminoacil tRNA sintetase, dando aminoacil tRNA + AMP+ PPi. Desmembrando a reao: aminocido + ATP, dando aminoacil adenilato + PPi. Primeiro, ento, o aminocido se liga ao AMP e numa segunda etapa, ocorre a transferncia, aminocido-AMP +t RNA que vai dar aminocido-tRNA + AMP, de tal forma que fica aminoacil t-RNA. Ento, a ligao dos aminocidos ao tRNA para formar o aminocido ativado, por definio aminocido ligado ao tRNA, ocorre em duas etapas.
Primeiro, o aminocido dentro do stio cataltico da aminoacil tRNA sintetase se liga ao AMP, clivado a partir do ATP, dando origem ao aminoacil adenilato e sai pirofosfato. Numa segunda etapa, o tRNA compete com o AMP e o desloca e liga-se ao aminocido, formando aminoacil tRNA + AMP. Dando origem a reao global e uma vez feito isso, a enzima fica livre para atuar de novo.
REGULAO DA EXPRESSO GNICA
A seguir teremos o processamento das protenas. A protena ao sair do ribossomo sai com sua estrutura primria que ir adquirir suas estruturas secundrias, tercirias e quartenrias por processamento. Atravs do radical R de cada aminocido poderemos estabelecer ligaes do tipo SS, pontes de
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hidrognio e fracas formando as outras estruturas. Os aminocidos hidrofbicos ficaro voltados para o interior da estrutura, expondo na sua estrutura mais externa os aminocidos ditos hidroflicos. Em soluo formaremos a camada de solvatao, quando alteramos essa camada precipitamos a protena por expormos os aminocidos hidrofbicos do seu interior. Temos como exemplo de precipitadores de protenas, o tricloro actico (TCA), quando se trata a protena com cido, suas estruturas secundrias, tercirias e quartenrias so desfeitas, sofrendo, portanto, desnaturao e precipitao. Podemos tambm adicionar sal para haver alterao da camada de solvatao e consequente precipitao. Contrariando o que acreditvamos antes podemos renaturar uma protena desnaturada com cido, s que um processo de extrema dificuldade.
A protena sofre ento processamento. Como exemplos de processamento pode-se citar a aquisio de sua estrutura formando uma estrutura final secundria, terciria ou quaternria; alm disso, se ela for uma lipoprotena ela adquirir um lipdio, se for uma glicoprotena receber um carboidrato, se a protena for uma enzima ela dever se dobrar para formar seu stio cataltico. Dependendo do papel biolgico que a protena v assumir dentro da clula, ela poder perder seu aminocido iniciador (Met) e caso seja uma protena de exportao ganha um pepontodeo sinalizador e se direciona para o reticlo endoplasmtico rugoso e da para o Golgi e de l para o exterior.
Regulao da Expresso Gnica
O teor de uma protena numa determinada clula vai depender do que chamamos de regulao gnica. As clulas so movidas por economia celular, ou seja, para que sintetizar uma determinada protena se ela no ser usada pela clula. Ento dependendo da necessidade uma determinada expresso dever ser traduzida ou no. Quem ir regular o teor da protena na clula ser o processo de transcrio do RNA e o processamento propriamente dito. No que diz respeito a procariontes,h maior controle da expresso gnica na traduo, j em eucariontes h tanto na transcrio como na traduo.
O controle da expresso gnica determinou o aparecimento de dois tipos de enzimas: as constitutivas e as induzveis. As constitutivas so enzimas que fazem parte de rotas metablicas importantes, so sintetizadas em concentraes constantes e independem do metabolismo celular. As enzimas induzveis so aquelas sintetizadas em concentraes variadas e dependem do metabolismo. Dois pesquisadores famosos Jacob e Monod propuseram em 1961 um modelo de controle da expresso
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gnica, ou seja, porque uma determinada protena sintetizada em maior quantidade em dado momento do metabolismo e em menor em outro momento. O que leva na estrutura do DNA a essa regulao? Os estudos foram feitos tomando como base o Operon da lactose, que chamamos de Operon Lac, assim foi feito o modelo da expresso gnica em procariontes. O modelo do Operon da Lactose tenta explicar a induo e represso gnica.
Para fazer esses estudos eles observaram as reaes de bactrias na ausncia ou presena de glicose. Assim eles propuseram que o DNA composto de regies reguladoras e regies que expressam o gen a ser codificado, de tal forma que temos o DNA formado de regies que determinam a expresso e regulao do cdigo gentico. As regies reguladoras estaro sempre adjacentes regio do gen estrutural a quem ela deve re___M _. Elas so formadas por trs regies. A regio i a chamada
inibidora ou repressora, a regio p chamada promotora que tem como funo ser o stio de ligao da RNA polimerase e a regio o ou operadora. Adjacente a esta regio temos a regio do gen estrutural que ir codificar a protena que no caso do Operon Lac se chamaro z, y e a. Cada gene estrutural temos regies reguladoras. Assim foi observado que medida que as bactrias (no caso E. coli) cresciam na presena de glicose o Operon Lac se encontrava reprimido. Na medida em que cresciam na ausncia de glicose o Operon Lac era induzido. Por que isso ocorreu? Se ela est crescendo na presena de glicose, principal ose utilizada como combustvel para produo de energia, ela a utilizar. Mas, se houver falta de glicose no meio uma nova fonte de energia deve ser utlizada que ser a lactose. Assim a lactose ser clivada por uma enzima chamada beta galactosidase formando glicose e galactose. Acontece que o Operon Lac do DNA correspondente para sntese de beta galactosidase se expressa em quantidades pequenas (cinco cpias), ela um exemplo clssico de enzima induzvel, mas quando transferimos a clula para uma situao de falta de glicose a clula passa a produzir 5000 cpias da beta galactosidase. Isso se explica pelo fato do operon da beta galactosidase estar reprimido na presena de glicose. Na regio chamada inibidora ou i haver sntese de um RNA pelo processo de transcrio que ser traduzido dando origem a uma protena que se chama protena R ou i de inibidora que se posicionar na regio o ou operadora do DNA. Assim a RNA polimerase que est localizada na regio p no consegue ultrapassar esta protena R para fazer a leitura dos gens estruturais e formar a enzima. Esse um exemplo de represso gnica.
O processo de induo gnica ocorrer na falta de glicose no caso do Operon Lac. Assim ser transcrito um gen pela regio o ou operadora que dar origem a uma protena chamada IPONTOG (isoproiltiobetagalactosidase) que se ligar protena R ou inibidora impedindo-a de se ligar a regio
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operadora. Assim uma protena chamada CAP (protena ativadora do catablito) ativada pelo AMPc, que ir estar em alta com a falta de glicose, ir se ligar a regio p ou promotora onde o RNA polimerase est, estimulando a participar da transcrio dos gens estruturais. A regio z dar origem a beta galactosidase, a regio y dar origem a beta galactosidase permease e finalmente a regio a dar origem protena a transacetilase, todas essas enzimas necessrias a sntese de glicose via lactose.
IMPORTAO E SECREO DE PROTENAS

1. Retculo: REL e RER 2. Aparelho de Golgi
No retculo endoplasmtico rugoso voc observa a presena de polissomas. Esses ribossomos se apresentam em rosetas e trabalham no processo de sntese de protenas, a qual sempre se inicia no citossol, tanto para protena de exportao quanto para protena de consumo prprio da clula. Como vimos, o processo se inicia com a montagem das subunidades na fita de RNAm e a partir deste ponto os caminhos comeam a ser delineados, de acordo com o mensageiro. Alguns RNAm tm seqncia de nucleotdeos, em torno de 20, funcionando como elementos de sinal: pepontodeos de sinalizao. Caso o ribossoma se ligue a RNAm portadores destes pepontodeos, ele ser direcionado ao local de destino, no caso, a parede do RER. Na ausncia de sinal, permanecem no citossol, onde se completa a sntese protica. Esta seqncia sinalizadora, ento, orienta o destino do ribossoma e,
consequentemente, da sntese protica. O ribossoma comea a fazer a traduo, a partir da qual chega seqncia sinalizadora, fazendo seu reconhecimento, para desencadear o processo de orientao e, neste caso, encaminhamento para a parede do RER. Este processo ainda no est todo elucidado, mas acredita-se que haja outros fatores orientadores alm do peptdeo de sinal, como molculas que ajudem a direcionar o ribossoma para a parede do RER.
Hoje, sabe-se que a parede do RER tem certas protenas que o REL no possui, as quais formam canais, sulcos, (aberturas, passagens) para a insero no lmen do RER das protenas que esto sendo sintetizadas, chamadas de porinas ou riboforinas. Tm-se as riboforinas I e II, ambas servindo de ponto de apoio, acoplamento, para que o ribossoma chegue ali, se ligue, atravs da subunidade maior, a elas e possa reiniciar a sntese traducional. Como sabemos, o ribossoma l no RNAm o peptdeo sinal e dirige-se ao RER, que deve possuir mecanismos de aprisionar, acoplar, este ribossoma nele; dentre
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estes mecanismos esto as riboforinas. Podemos ver isto pelo fato de que se o ribossoma caminha ao REL, ele no vai conseguir fazer tal aderncia. Agora, preciso algum mais para fazer a ligao complementar, para que o ribossoma se acople para injetar a protena. Este a poio e reconhecimento so feitos por receptores ribossmicos. H ainda outros elementos de orientao parede do retculo.
O ribossomo inicia a traduo invariavelmente no citoplasma, mesmo que estas protenas sejam para exportao. As molculas orientadoras mais importantes so as SRP (peptdeo reconhecedor de sinal), as quais reconhecem a protena ainda no incio da sua sntese (assim que surge o pepontodeo sinalizador). Atravs de uma poro, SRP se liga ao sinal e, por outra poro, far a aderncia com seus recepontoores, localizados prximos as riboforinas. Este SRP, alm de orientar, tambm interrompe a sntese protica: ela comea no citoplasma, SRP se liga, e h interrupo na traduo a fim de que o ribossoma se desloque do citossol para se fixar parede do RER. Esse SRP o mais importante elemento na translocao do ribossomo, funcionando como veiculador, orientador em direo ao ribossomo. Ento quando chega ao RER, os recepontoores de SRP ligam-se a ele (SRP) e os recepontoores ribossmicos subunidade maior. Este SRP, por sua vez, j est ligado extremidade da cadeia nascente de peptdeo e a protena nascente vai sendo injetada no lmen atravs dos canais/poros criados por protenas complexas denominadas riboforinas.
Como concluso, vemos que no basta a presena da seqncia sinalizadora no RNAm (que, em eucariotos, varia muito de tamanho); tambm preciso a participao de outras molculas, como as riboforinas, o SRP, os receptores. Quando o ribossoma estiver totalmente preso, haver deslocamento do SRP, que sair. Esta sada se faz necessria tambm porque o SRP interrompe a sntese protica quando presente. Com o ribossoma livre, ento, pode-se prosseguir com a sntese ribossomal. Como se pode entender, medida que a traduo ocorre, a protena vai sendo injetada no interior do RE. A cabea, o chamado peptdeo de sinal, vai, atravs da ao de enzimas presas face luminal da membrana do retculo (a membrana reticular tem duas faces: uma voltada ao meio externo, chamada face C, citosslica, e outra voltada ao meio interno, a face L, luminal - ambiente interno do retculo), chamadas pepontoidases de sinalizao, ser retirado, cortado: o peptdeo foi necessrio apenas para enderear a protena. A clula faz dois tipos de protenas: com e sem o pepontodeo de sinal. Uma vez concluda sua funo, o peptdeo retirado. A protena, ento, poder sair do RE, ir ao Golgi e tomar caminhos diferenciados, como, por exemplo, ir ao lisossoma (geralmente hidrolases, especializadas em quebras), ser inseridas em vesculas que posteriormente sero exocitadas e as protenas liberadas.
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H ainda casos em que a protena pode seguir inserida na membrana da vescula, no que, durante a exocitose, as membranas vesicular e citoplasmtica se fundem, e a protena no expulsa, ficando inserida na membrana. Esta protena uma transmembrana, integral, bi/tripartirte. Estas protenas, ao contrrio das demais, possue uma seqncia de sinal intermediria, localizada no meio da molcula, que mantm esta protena inserida na membrana, podendo, por exemplo, vir a fazer parte do glicoclix. diferente, por exemplo, da insulina, que uma molcula grande, que precisa ser processada. Ela possui, alm da regio pr (a regio sinalizadora da extremidade a chamda pr e a intermediria, pro), uma regio intermediria chamada pro. O primeiro, um sinal orientador e o segundo ativador e no de ligao como nas protenas transmembrana. Uma molcula poder conter at mltiplos sinais.
O ribossoma sintetiza uma protena, a qual ser processada no interior do retculo e depois encaminhada ao complexo de Golgi. Esta sntese inicia-se no citossol, identifica-se a regio de sinal, e o SRP se liga ao peptdeo sinal, interrompendo o processo e orientando a translocao em direo parede do retculo, onde temos os recepontoores (ribossmicos e SRP) e as riboforinas I e II. Com isto, o SRP j ter cumprido seu papel, e poder ser descartado, saindo. A sntese, ento, reinicia-se. Mais a frente, o sinal vai ser clivado por enzimas da face L do RE. Alm deste papel fundamental na
traduo, o RE tambm tem outras funes. O RE tem certa diferenciao quando vistos ao ME: o rugoso laminar e sacular (sacos achatados) e o liso canalicular ou tubular. O RER pode ter certa fragmentao na sua constituio. O RER caracteriza-se principalmente pela traduo, enquanto que o liso pela glicosilao. A maior parte das protenas sintetizadas para proveito prprio da clula, feitas por ribossomos livres, no tendo desenvolvido ainda grande capacidade de exportao, exceo, por exemplo, do movimento dos folhetos embrionrios durante o desenvolvimento54 , o qual orientado por protenas de exportao.
Normalmente o Golgi polarizado tanto na sua estrutura quanto na sua localizao, enquanto que a tendncia do retculo espalhar-se (exceto nos casos dos plasmcitos e clulas pancreticas). As membranas dos dois retculos podem ser estudadas pela fragmentao do retculo em vesculas menores, chamadas microssomas. Se houver ribossomas aderidos, chamado rugoso (onde se estuda boa parte da sntese protica). Os microssomos servem, por exemplo, para a anlise bioqumica da membrana. De acordo com a origem, tero constituio, principalmente protica, diferente.
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Vide processo de gastrulao e fenmenos subseqentes (embriologia).
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O retculo liso especializado no processo de desintoxicao celular, porque possui citocromos especiais. Eles so chamados de B5 e P450, que metabolisam medicamentos, que tm duas formas principais de metabolizao: no rim e no fgado. O principal o fgado. Neste caso, teremos a participao do corpsculo de Berg e do REL. Vamos, por exemplo, supor que um indivduo esteja tomando fenobarbital. Os nveis de citocromo P450, com o uso do medicamento, crescem. O fenobarbital estimulante da sntese de citocromos porque so estes que iro quebr-lo. Mas, quanto mais se injere fenobarbital, maior a produo de P450, que vai hipertrofiando. A partir da, o medicamento pode parar de surtir efeito: resistncia medicao, sendo necessrio alterao da medicao, que atinja outros complexos multienzimticos de metabolizao. Outras drogas que no s medicamentos tambm so metabolizadas pelo REL. O REL tem mais fosfolipdeo do que o RER. Isto est de acordo com sua funo: REL sintetiza muitos fosfolipdeos, principalmente lecitinas, mas tambm outros lipdios como colesterol e TAG. Alguns sero posteriormente inseridos na membrana via vesculas que brotam do retculo. Estes processos verificam-se em microssomos lisos (provenientes do REL). O REL tambm possui em seu lmen vrias enzimas relacionadas a processos diversos: glicose-6-fosfatase (distribui glicose livre), peptidases, hidrolases, transferases (chamadas protenas residentes: so aquelas que devem permanecer, dentro do retculo para que este execute suas prprias funes). As protenas residentes esto presentes em ambos os retculos e no Golgi.
O ribossoma aderido membrana reticular, sintetizando a protena e injetando-a no lmen, quando h clivagem do pepontodeo sinal, depois do que h desmontagem do ribossoma com finalizao do processo. H estudos que comprovaram a passagem da protena por poros proticos e no diretamente pela membrana. Os ons, quando est ocorrendo sntese protica, no conseguem atravessar estes poros (alm disto, no podem difundir pela bicamada lipdica), significando dizer que estes poros esto temporariamente bloqueados. O uso de puromicina mostrou que este bloqueio era devido injeo, atravs destes poros, da protena que estava sendo sintetizada: a puromicina se liga cadeia polipepontodica, desligando esta da protena da membrana reticular, e permitindo, ento, a passagem dos ons (desocupou-se o poro).
A protena ser encaminhada ao Golgi, para o que fundamental a dobra e empacotamento da mesma, a fim de que seja aceita pelo Golgi. O c omplexo de Golgi tem vrias funes dentro da clula. Ele formado de unidades chamadas dictiossomos (Golgi = soma, dictiossomas). Cada uma dessas unidades formada de vesculas achatadas e esfricas, de formao sacular. Os dictiossomas vo se localizar numa regio determinada da clula, prpria ao complexo de Golgi, chamada de zona de efuso
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citoplasmtica. Esta rea est normalmente prxima ao retculo e em associao com ele atravs do trnsito vesicular. O Golgi extremamente polarizado: cis trans, constituindo um sentido direcional ao trfego das protenas. Isto faz com que a cis fique bem prxima regio proximal do ncleo, carioteca. J a regio trans, fica voltada aos pontos de liberao das vesculas.
Funes do Golgi: secreo celular, na direo cis trans glicosilao de protenas e lipdios, fruto da ao de enzimas de glicosilao hidrlise de inibidores moleculares, principalmente nas hidrolases, que se locarizaro
posteriormente nos lisossomas.
Retomando: as protenas so sintetizadas no RER, encaminhadas regio cis do Golgi. Assim, ocorrer a fosforilao de oligossacardeos, reaes que envolvem grupos manose (remoes e adies), adicionar glicosaminas, galactoses, cido silico, formar proteoglicanos, entre outros, preparando, melhorando, a protena para que esta possa seguir ao seu destino final, a partir da regio trans, como, por exemplo, originando vesculas secretrias, lisossomas.
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Captulo 11
TECNOLOGIA DO DNA RECOMBINANTE

O DNA tem a capacidade de desnaturar em altas temperaturas, obtendo-se, pois, as fitas separadas (houve clivagem das pontes de hidrognio que mantinham-nas unidas). As protenas podem renaturarse, entretanto, um processo muito difcil, complicado, visto que ela precisar retomar toda aquela estrutura tridimensional que caracteriza sua atividade biolgica. J o DNA, devido a
complementariedade das suas bases, tem este processo facilitado, podendo, pois, renaturar-se com facilidade, religando suas fitas. Essa caracterstica da molcula de DNA a base do diagnstico molecular, no esquecendo que o oligonucleotdeo (pedao do DNA) marcado a sonda utilizada.
Recolhe-se o tecido a ser analisado. Por um tratamento especial retiram-se as protenas por uso de proteases, permitindo o acesso ao DNA. Pe-se, ento, o DNA extrado junto da sonda. Aquece-se para permitir a clivagem das pontes de hidrognio da fita de DNA. Diminuindo a temperatura, permite-se a renaturao e, possivelmente, a hibridizao: nesse caso, houve complementariedade entre os DNAs na anlise feita (j que pde observar-se as molculas devido marcao radioativa que sofreram), e conclui-se que h a infeco viral pesquisada. Caso no haja infeco, na anlise no obteremos a complementariedade entre as fitas. O resultado impressionado num filme para visualizao e antes deve ser feita uma lavagem para retirada de substncias inespecficas.
Qual o objetivo da tecnologia do DNA recombinante (TDR)? Na verdade um conjunto de tcnicas utilizadas para diagnstico ou amplificao de um gen (ou mesmo de uma regio do DNA). Por que a amplificao? Se, por exemplo, temos uma anlise de sangue com pequena amostra, pode-se amplificar o DNA daquele sangue. Voc pode amplificar uma regio, ou gen, jogando o DNA previamente purificado numa mquina, o PCR55 (termociclador ou reao de polimerizao em cadeia), ou pode coloc-lo num sistema biolgico. Seu objetivo amplificar o DNA j purificado, no precisando dispor de material em grande quantidade. Deve servir no apenas sntese protica
(insulina, GH, interferon, etc...), como tambm ao diagnstico clnico.
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Reao em Cadeia da Polimerase (incio em 1985; Polymerase Chain Reaction): amplificao de um segmento de DNA, utilizando-se uma polimerase termoestvel.
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Na tcnica de PCR tem-se a imitao da DNA polimerase em vitro. Lana-se mo do DNA purificado de uma enzima para a polimerizao. Termociclador: uso de temperaturas diferentes nos vrios estgios do processo (para desnaturar, inserir primer - j que para replicar o DNA precisamos de uma seqncia especfica de primer56 - etc...). Inicialmente, ento, insere-se o DNA purificado e aumenta-se a temperatura para causar desnaturao57 . Posteriormente adiciona-se o primer, cuja seqncia especfica, anelando-o e pe-se a taq-polimerase, que uma enzima de polimerizao resistente s altas temperaturas (nas primeiras experincias utilizaram DNA polimerase, mas era preciso adicionar uma nova enzima a cada ciclo, devido desnaturao).
A amplificao tambm pode ser feita por sistemas biolgicos, inserindo o DNA a ser amplificado em bactrias, leveduras e bacterifagos, entre outros. Nosso exemplo compreender o uso da E.coli, visto que sistemas bacterianos so mais baratos, de manuseio mais fcil e com alta velocidade no processo. Neste precisamos de um vetor, um veculo transportador, do DNA para o interior da clula, enquanto que no PCR bastava a insero dos materiais (enzima e DNA purificado), regulando diferentes temperaturas durante o processo. O primeiro passo purificar o DNA. O segundo, ligar esse DNA ao vetor, que podem ser plasmdeos, bacterifagos ou cosmdeos, de acordo com o objetivo. Os mais conhecidos so os plasmdeos, que so DNA extracromossmicos, circulares, de dupla fita e com duplicao autnoma. Podem ser comprados prontos, atendendo especificidade da demanda. Este plasmdeo tem vrios stios em que atuam enzimas de restrio, que so tesouras moleculares (picotam o DNA) responsveis tambm pelo corte do pedao do DNA a ser amplificado (visto que o DNA muito grande e no pode ser todo transportado para dentro da bactria de uma s vez). O DNA unido ao plasmdeo, primeiro se tratando com as enzimas de restrio. O plasmdeo comprado pode conter stios de resistncia se pedido (inclusive, muito da resistncia bacteriana a antibiticos provm de plasmdeos, que de fcil troca entre as bactrias), como, por exemplo, a ampicilina. Ento, une-se o plasmdeo com o DNA, formando o DNA recombinante (recombinando o DNA de origens distintas). Para unir necessrio cort-los com a enzima de restrio e lig-los atravs da DNA ligase. A prxima etapa fazer com que o veculo entre na clula hospedeira (bactria). O hospedeiro ideal aquele capaz de receber o vetor e amplific-lo: a bactria deve transcrever DNA RNA e, depois, RNA protena. Vamos supor que o DNA introduzido seja para a insulina. Quando o vetor inserido na bactria temos o seguinte quadro: ela tem o DNA normal e o DNA recombinante (referente ao plasmdeo).
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Segmento nucleotdico inicador. Promover desenovelamento da dupla fita, separando as fitas anteriormente pareadas.
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Esta a chamada etapa de transformao. A bactria rapidamente transcreve este DNA recombinante. Produzindo insulina, de modo rpido, fcil e barato, principalmente se compararmos ao mtodo antigo de isolamento do extrato do pncreas e subsequente obteno de insulina. No gel de eletroforese, verifica-se a presena da insulina. O problema que, ao colocar o vetor junto s clulas hospedeiras, nem todas vo incorpor-lo, receb-lo. Para o xito (comercial, por exemplo) do processo, deve-se ter apenas bactrias possuidoras do plasmdeo. A diferenciao entre quem recebeu ou no se faz do seguinte modo mais fcil: dispe-se a colnia de bactria a crescimento em contato com a ampicilina; como o plasmdeo possui um stio que torna a bactria resistente a este antibitico, as bactrias com este DNA recombinante sobrevivero; as demais, sem plasmdeo, morrero (antes de todo o processo, verifica-se se todos os plasmdeos a serem utilizados contm o DNA a ser amplificado).
Aps ser sintetizado a protena de interesse, pode-se fazer gel, por exemplo, de poliacrilamida. O que se v so bandas (tanto para protena como para DNA), revelando grupos de protenas. Na foto mostrado, utilizou-se eletroforese em protenas marcadas com aminocido radioativo. Mostra a importncia (as diferenas entre as situaes) deste mtodo para a anlise da infeco, ou no, da clula estudada. As observaes so feitas em filmes (se marcadas radioativamente), papel de filtro e papel celofane. Este processo , por exemplo, utilizado em testes para o HIV. H, tambm, identificao de vrus que paralisam a maquinaria celular, monopolizando-a para seu prprio benefcio e depois, matam-na. Atualmente, uma srie de novas tcnicas permite ao pesquisador a anlise detalhada da estrutura molecular do DNA e, por conseqncia, do material gentico de um ser vivo. Esta anlise permite, por sua vez, o isolamento e a amplificao de um segmento de DNA, o seu sequenciamento, identificao e manipulao58 . O Projeto Genoma, por exemplo, pretende, atravs destas tcnicas, identificar toda a seqncia de cerca de 3 bilhes de pares de bases do genoma humano - 50.000 a 100.000 genes! Esta abordagem permitir a identificao de genes relacionados a doenas genticas especficas, a abre a possibilidade de diagnstico e at tratamento estas doenas a nvel molecular.
Seqenciamento do DNA: Duas tcnicas, surgidas no final dos anos 70, so empregadas para o sequenciamento de fragmentos de nucleotdeos:
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Exemplos: Genoma de Xyllela fastidiosa (bactria do amarelinho em ctricos) e Projeto Genoma Humano.
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Mtodo Qumico ou de Maxam-Gilbert Mtodo Enzimtico ou de Singer
Em ambos os casos, possvel definir com preciso a seqncia exata de nucleotdeos de um segmento de DNA.
Amplificao de um Segmento de DNA: O enorme tamanho e a imensa variabilidade da molcula do DNA so os principais obstculos ao isolamento e sequenciamento de genes. Assim, tcnicas especiais so necessrias para a seleo e amplificao de partes da molcula do DNA, gerando fragmentos menores e mais facilmente analisveis. So duas as metodologias empregadas atualmente: A Reao em Cadeia da Polimerase - "Polimerase Chain Reaction", ou PCR.A Clonagem de Genes. "Polimerase Chain Reaction" - PCR:
Este mtodo - mais recente - de isolamento e amplificao de um segmento de DNA - envolve a produo "in vitro" de milhes de cpias do segmento em estudo. O processo exige a utilizao de "primers" que isolam o segmento a ser amplificado, da enzima DNA Polimerase, e ocorre em 3 etapas: A desnaturao da dupla fita do DNA, em alta temperatura - 90o C O pareamento dos "primers", baixa temperatura - 37o C A duplicao do segmento isolado atravs da reao da DNA polimerase O processo cclico e pode ser repetido "n" vezes, dependendo do grau de amplificao que se deseja. O "primer" pode ser sintetizado quimicamente, desde que se conhea a seqncia a ser amplificada e a partir desta, e sempre adicionado em excesso ao meio de reao. Se o segmento de DNA a ser amplificado no conhecido, ele pode ser clonado a um vetor cuja seqncia de DNA adjacente ao recombinante seja conhecida. A DNA Polimerase utilizada termoestvel, e isolada do microrganismo Termus aquaticus (Taq Polimerase). A tecnologia da PCR pode ser empregada nas anlises clnicas
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como um poderoso instrumento de diagnstico de viroses e infeces bacterianas, como a AIDS e a tuberculose, por exemplo, com enorme ganho em sensibilidade. Clonagem de Genes: um mtodo mais complexo de isolamento e amplificao de DNA que a PCR, mas muito til em certas situaes. Envolve a utilizao de endonucleases de restrio, a criao de mapas de restrio e a utilizao de vetores para a recombinao e clonagem do gene em estudo. Em etapas: As Endonucleases de Restrio:
Fazem a clivagem59 da molcula do DNA em seqncias especficas da molcula, geralmente palindrmicas. As endonucleases de restrio so batizadas a partir do nome do microrganismo do qual foram isoladas, com a indicao da seqncia de descoberta. Exemplos: TaqI - Termus aquaticus HaeIII - Haemofilus aegiptius Algumas endonucleases de restrio criam extremidades irregulares e, portanto, coesivas; outras geram extremidades "cegas". Exemplo: TaqI: 4 bases, extremidades adesivas: -TCGA- = -T... -AGCT-AGC. + .CGA...T-
HaeIII: 4 bases, extremidades cegas: -GGCC- = -CCGG-GG -CC + CCGG-
A Criao do DNA Recombinante:
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Corte
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Envolve a unio de um fragmento de DNA a uma molcula maior, utilizando-se uma endonuclease de restrio e a DNA ligase. A clivagem do DNA com a mesma enzima de restrio, cria extremidades complementares adesivas que so unidas pela ao da DNA ligase. Desta forma, um fragmento de DNA pode ser inserido em uma molcula maior, que passa a ser recombinante. Assim, um determinado gene do genoma humano pode ser inserido no genoma de uma bactria, por exemplo, e l ser amplificado ou mesmo, transcrito vrias vezes.
Os Vetores:
Um vetor uma molcula de DNA qual o fragmento de DNA a ser clonado est ligado. Os principais vetores utilizados so plasmdeos, e vrus de animais. Os plasmdeos so os mais utilizados para a clonagem de pequenos fragmentos de DNA; so geralmente obtidos a partir de clulas bacterianas, facilmente reintroduzidos nestas clulas e possuem capacidade autnoma de replicao. Um exemplo amplamente utilizado de plasmdeo o pBR322, que possui os genes de resistncia tetraciclina e ampicilina. Alguns tipos de vrus, como o bacterifago l, so utilizados na clonagem de fragmentos maiores de DNA. Os Cosmdeos so estruturas hbridas que possuem caractersticas do bacterifago associadas do plasmdeo pBR322, e so utilizadas para a clonagem dos maiores segmentos de DNA. Bibliotecas de DNA: Uma biblioteca de DNA uma coleo de fragmentos de DNA obtidos a partir da ao das endonucleases de restrio, ligados aos vetores apropriados e clonados. Quando a biblioteca inclui a totalidade do genoma de uma clula ou organismo, ela dita "Biblioteca Genmica". Quando a biblioteca inclui apenas moldes de cDNA, obtidos por ao de uma transcriptase reversa, esta biblioteca dita "Biblioteca de DNA Complementar". A deteco de um determinado segmento de DNA em uma biblioteca genmica feita com a utilizao de SONDAS de DNA. Sondas: As sondas de DNA so seqncias de fita nica de DNA que hibridizam - pareiam - com a seqncia de interesse, destacando-as do restante da biblioteca. Estas sondas podem ser marcadas com um istopo radioativo, um anticorpo, uma substncia fluorescente ou outro mtodo de deteco. A utilizao em conjunto das sondas e de enzimas de restrio permitiu o desenvolvimento de tcnicas de deteco de DNA muito precisas, como o "Southern Blot". No "Southern Blot", um determinado gene
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pode ser identificado entre milhes de fragmentos por separao eletrofortica em gel com posterior identificao dos fragmentos atravs de sondas especficas. Variaes deste mtodo permitem hoje a identificao de fragmentos de RNA - Northern Blot - e de protenas - Western Blot, este ltimo utilizando um anticorpo no lugar da sonda.
Aplicao da Manipulao do DNA: So enormes e promissoras as aplicaes desta tecnologia. Na identificao e tratamento de doenas condicionadas geneticamente; No diagnstico muito sensvel de doenas infecciosas; no diagnstico pr-natal; na manipulao teraputica de genes; na criao de organismos hbridos e transgnicos na medicina, agricultura e pecuria; na indstria farmacutica; em estudos evolutivos e de descendncia e na medicina legal.
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Anexo
TRANSPORTE DE GASES E EQUILBRIO CIDO-BASE

Transporte de Gases
No existe no transporte de gases, tanto do oxignio como de gs carbnico, transporte ativo, todo transporte de gases sempre se faz por difuso de onde est mais concentrado, para o local de menor concentrao. A lei de difuso dos gases obedece ordem de locais mais concentrados para locais menos concentrados. Por exemplo, se em nvel de tecidos temos uma alta de pCO2 e em nvel de sangue temos uma alta de pO2 por difuso teremos o CO2 que passa para o sangue e o oxignio que passa para os tecidos. Ao pulmo temos uma alta de pO2 e no sangue temos uma alta de pCO2 , o CO2 ir para o pulmo e o O2 para o sangue. A lei bsica ser ento do mais concentrado para o menos concentrado. Existem outros fatores que podem acelerar essa passagem de O2 para os tecidos e CO2 para o pulmo alm da simples difuso. Mas basicamente tudo acontece pelo processo de difuso.
A clula encarregada pelo transporte de gases na circulao o eritrcito, uma clula anucleada e bicncava. Como ele anucleado ele no ter sntese de protena e consequentemente uma meia vida muito curta. O eritrcito vive graas a gliclise e via das pentoses como fonte de ATP, alm disso ele guarda em seu interior uma alta concentrao de glicose. Quando essa glicose oxidada, um dos intermedirios que se forma 1,3-difosfoglicerato, no eritrcito esse produto ir formar 2,3difosfoglicerato que ser importante na manuteno da estrutura quaternria da hemoglobina. A estrutura que nos interessa dentro do eritrcito a hemoglobina. Quando se faz uma hidrlise cida ou alcalina na hemoglobina obteremos heme mais globina. Logo sua estrutura formada por grupamento heme mais uma parte protica a globina. Cada hemoglobina formada por quatro cadeias proticas, ou seja, para cada hemoglobina temos quatro globinas, alfa 1, alfa 2, beta 1 e beta 2. Cada globina possui um grupamento heme. Ento uma hemoglobina formada por quatro radicais heme e quatro radicais proticas chamadas globinas. Cada globina possui as estruturas primria, secundria e terciria e quando as quatro se renem formam uma estrutura quaternria. Para formar a estrutura quaternria da hemoglobina temos pontes salinas entre alfa 1 e alfa 2, alfa 1 e beta 1, alfa 2 e beta 2. Sendo que as cadeias beta esto ligadas entre si pelo 2,3-difosfoglicerato. Da a glicose em excesso dentro do
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eritrcito para que parte dessa glicose forme 2,3-difosfoglicerato para servir de ligao das cadeias beta da hemoglobina. Outro detalhe, no interior do grupamento heme, temos o ferro 2+, nessa caividade no interior do heme uma cavidadde hidrofbica formada por aminocidos hidrofbicos. Essa cavidade do heme deve ser hidrofbica porque se os aminocidos forem hidroflicos haver entrada de gua no interior e entrando gua forma-se superxido, e esse superxido impede que o grupamento heme transporte oxignio, alm de ser danoso para as membranas celulares.
Sendo a cavidade do heme uma rea hidrofbica, pensava-se que a combinao do heme com o oxignio se desse de maneira linear, ou seja, a medida que se aumentava a concentrao de oxignio aumentaria a saturao dos grupamentos heme. No entanto, quando montamos um grfico de concentrao de oxignio por saturao de hemoglobina temos uma curva sigmide idntica ao comportamento das enzimas alostricas. Se no temos uma reta, e sim uma curva sigmide, isso indica que existe uma ordem de entrada do oxignio na hemoglobina e que o efeito cooperativo, ou seja, a medida que a primeira globina oxigenada ela abre espao para a oxigenao da segunda que abre espao para a oxigenao da terceira e em seguida da quarta globina. Quando o primeiro oxignio se aproxima da globina alfa 1, as pontes salinas entre alfa 1 e alfa 2 se rompem, significando que alfa 1 est sendo oxigenada e alfa 2 est pronta para se oxigenar. Quando alfa 2 oxigenada, 2,3 difosfoglicerato sai, abrindo a possibilidade de oxigenao de beta 1 e beta 2. Isso est expresso na curva sigmide. Ento a oxigenao da hemoglobina cooperativa e ordenada. O ferro tem spin contrrio ao oxignio no mudando a sua valncia quando ligado a ele, assim, a ligao ferro-oxignio uma ligao eletromagntica, pois eles possuem spin contrrio. O gs mais abundante em nosso organismo o CO2 . Dentro do eritrcito o CO2 se rene com a gua e pela ao da enzima anidrase carbnica (presente dentro do eritrcito) formar cido carbnico que ir se dissociar via anidrase carbnica em bicarbonato (HCO3 -) e on hidreto (H+).
Dois problemas a serem resolvidos pelo eritrcito: o bicarbonato possui carga negativa e uma base, j o on hidreto tem carga positiva e tem o poder de baixar o pH. Quando ele est vindo do pulmo, o eritrcito est trazendo suas hemoglobinas combinadas com oxignio formando oxiemoglobinas, quando chega ao tecido todo o CO2 chega no eritrcito forma cido carbnico que se dissocia. O bicarbonato formado vai para o plasma, j o on hidreto ter outro destino. O eritrcito tem em abundncia o aminocido histidina que possui o grupamento imidazlico, os ons hidreto iro se combinar com esse grupamento. O CO2 pode ser transportado ento na forma de bicarbonato e sob a forma de cido carbnico formando o tampo bicarbonato, ou seja, todo CO2 produzido no ciclo de
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Krebs ir ser transportado na forma de tampo bicarbonato. Mas o que um tampo? a sua base e seu cido conjugado. Vamos supor que haja ingesto de cido, Coca-Cola, por exemplo, o organismo ir ter que manter o pH do sangue, simplesmente estes cidos que entrarem sero retirados por uma base, que sequestrar o cido correspondente, tirando-o de circulao, aumentando a quantidade de cidos carbnicos. Quando os ons hidreto surgem dentro do eritrcito, o pH abaixa e os oxignios presos aos grupamento heme iro sair para os tecidos. Ento, ao mesmo tempo que, temos a formao da hemoglobina reduzida pelo on hidreto do cido carbnico, temos a sada do oxignio para os tecidos. Essa reao to importante que 0,7 moles de H+ entram nos grupamentos imidazlicos da histidina por mol de oxignio que sai da hemoglobina. Com isso, o abaixamento de pH originado da alta de CO2 do eritrcito ir provocar a liberao do oxignio do eritrcito para as clulas, ao mesmo tempo como o hidreto sequestrado pela histidina o pH volta a ser normal. O sequestro de hidreto pela histidina recebe o nome de troca isodrica. Isodrica significa manuteno do pH constante e isso ocorre no tecido. A oxiemoglobina tem um pK de 6,17 e a desoxiemoglobina tem um pK por volta de 7,0. O cido mais forte ser a oxiemoglobina, ou seja, sua dissociao ser mais rpida do que a desoxiemoglobina, que a hemoglobina reduzida. Uma parte muito pequena de CO2 (0,5 milimol por litro de CO2 ) transportado tambm ligado a histidina formando a carbamiloemoglobina mas, a maioria transportada por tampo bicarbonato. Na desoxiemioglobina ou hemoglobina reduzida o ferro est livre.
Voltando curva sigmide. Para que a hemoglobina esteja saturada de oxignio a p CO 2 deve ser de 40mm de Hg que vai dar um pH de 7,4. O oxignio tem de estar entre 20 e 80 mm de Hg para se ter uma saturao completa da hemoglobina pelo oxignio. Isso significa que o sangue com 100% de saturao mostra, que ele acabou de sair do pulmo. No sangue da musculatura de um atleta, a pCO2 ir ser maior do que 40, ocasionando um recebimento de muito bicarbonato, muito cido carbnico e muito on hidreto ocasionando uma queda maior de pH, deixando a saturao da heme em 60 a 70%. No fgado, teremos o limite da anoxia, isso significa que teremos uma p CO2 maior do que 40 e um pH muito menor do que 7,4, a curva de saturao ir baixar ainda mais. Se fixarmos uma concentrao de oxignio, iremos ver que a curva de saturao caminhou para a direita, medida que ela foi passando para os tecidos (msculo e pulmo)a curva foi caindo para a direita. Quanto maior o deslocamento para a direita haver alta de CO2 , baixa de pH e maior oxigenao dos tecidos. Se a curva continuar saturada (100%) indica que no ir haver correta oxigenao dos tecidos, j que a curva caindo indica que os tecidos esto sendo oxigenados. Esse efeito se chama efeito Bohr. Na vida sedentria haver pouca alterao de pH, a hemoglobina ir e voltar oxigenada.
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Quanto mais o efeito Bohr for pronunciado, maior a oxigenao dos tecidos. A hemoglobina reduzida sair dos tecidos indo para o pulmo. Quando chegam nos pulmes, temos um ambiente oxidado, logo o pH ser alto. No sangue temos bicarbonato e no eritrcito temos a hemoglobina reduzida, no pulmo teremos pO2 alto. O on hidreto ir se reunir com o bicarbonato formando cido carbnico que ir se dissociar em gua e gs carbnico que sero expirados. O oxignio como houve sada de on hidreto, o pH aumenta e o oxignio se liga ao grupamento heme. A curva que chega, ento, ao pulmo est pouco saturada. A medida que os ferros da hemoglobina se combinam com o oxignio ela volta a taxa de saturao. Ento essa curva, ao invs de ir para a direita ir para a esquerda da curva-padro. Esse o efeito Haldane que ocorre a nvel pulmonar, j o efeito Bohr ocorre a nvel tecidual. Quanto mais acentuado para a direita, melhor a oxidao a nvel tecidual e quanto mais acentuada a curva para a direita melhor a oxidao das hemoglobinas no pulmo. Equilbrio cido-Base
Quando falamos em pH lembramos logo da famosa equao que pH = -log [H+]. Mas o nosso pH dos lquidos de nosso corpo no dado apenas pela concentrao de hidrognio, pois somos uma soluo de ctions, nions, sais, cidos e bases. O que mais temos sais, bases e cidos, mas todos eles bastante fracos. Mas apesar de todos nossos cidos e bases serem fracos, eles possuem uma gradao (qual mais forte que outro) dada pelo pK. O pK o pH da dissociao.
Por exemplo, a oxiemoglobina para ela se dissociar, ou seja, para ela perder seu oxignio ela deve ter um pH de 6,17 logo esse seu pK. J a desoxiemoglobina para se dissociar, ela precisa de um pH 7,71, logo esse o seu pK. O pH de nosso lquidos ser o pK mais logaritmo da concentrao do sal ou base sobre a conentrao do cido. Essa a equao de Henderson-Hasselbach. Ento para se dar o pH teremos que falar em ponto de dissociao do cido formando o sal ou a sua base. Quais as estruturas que mantm o nosso pH sanguneo a 7,4 que o ponto ideal de nosso pH? Primeiro, vimos que a histidina da hemoglobina do eritrcito ajuda a manter nosso pH constante. Isso ocorre tambm com todas as nossas protenas, principalmente as plasmticas. O prprio eritrcito, albumina, lipoprotena ir funcionar tanto como cido como base ajudando a manter o pH constante.
O tampo fosfato que existe no sangue mas tem uma importncia minma, j que o fosfato tem outras prioridades como participar da formao de cidos nucleicos como da fosforilao de protenas. O tampo mais disponvel de nosso organismo o bicarbonato. Nosso pH dado e nto pela relao entre
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bicarbonato sobre cido carbnico. O pK do cido carbnico 6,1. A concentrao de bicarbonato pelo cido carbnico de 24 mEg/l (miliequivalente por litro) sobre 1,2 mEg/l. O log dessa equao ser 1,3. Esse 1,3 ser somado ao pK do cido carbnico dando um pH de 7,4. Esse o pH ideal nem sempre conseguido.
O que ir acontecer a essa equao de Henderson-Hasselbach se adiconamos 6 mEg/l de on hidreto (H+). Ele chegar no sangue e ter que ser sequestrado pelo sistema tampo, j que ele no pode circular sozinho. Tnhamos 24 mEg/l de bicarbonato e 1,2 mEg/l de cido carbnico, se est entrando 6 mEg/l de cido ir haver um aumento do denominador (cido carbnico) j que o bicarbonato dever se unir ao on hidreto livre. Se tivermos 24 mEg/l perderemos 6 mEg/l ficaremos com 18 mEg/l e se tnhamos 1,2 de cido carbnico iremos ter agora 7,2 mEg/l j que foi adicionado mais 6 mEg/l dos ons hidreto. O log de 18 sobre 7,2 ser igual a 0,4 mais o 6,1 do pK do cido carbnico teremos como pH 6,5. A absoro de 6 mEg/l do cido fez com que o pH baixasse de 7,4 para 6,5. Isso tampo no sangue. Se tivermos aumento do denominador (cido carbnico), ele foi modificado no pulmo. Como esta concentrao foi alterada pela adio de 6,0 mEg/l precisamos restaurar este pH a nvel de pulmo. Fazemos isso com a relao ideal que de 20 para 1 que ser igual a relao de 18 para x. X ser o quanto de CO2 que o pulmo ter de eliminar por expirao. X ser igual a 0,9 mEg/l. Ou seja teremos que eliminar 6,3 mEg/l (7,2 que tnhamos menos 0,9 que tem de ficar para se obter a relao ideal de 20 para 1). Assim o pH a nvel pulmonar ser de 7,4 novamente j que obteremos o pelo log de 18 sobre 0,9 um resultado de 1,3 mais o pK do cido carbnico de 6,1 obtendo resultado final de 7,4. No rim, chegar o pH de 7,4 e uma concentrao de 18 por 0,9 como ideal. O sistema renal ir ento reestabelecer as concentraes ideais em 72 horas, por reabsoro e filtrao, de 24 sobre 1,2 mEg/l. O tampo sanguneo absorve o impacto, o pulmo restabelece o pH e o rim restabelece a concentrao ideal. A resposta do tampo imediata, a do pulmo rpida e a do rim extremamente lenta. Ento se o problema ocorre a nvel pulmonar, a soluo ser dada a nvel renal, e se o problema ocorre a nvel tecidual e de sangue a soluo ser dada a nvel pulmonar. No caso de diabete no compensado, haver metabolizao de cidos graxos preferencialmente. Esses cidos graxos deixaro na circulao, cidos orgnicos fazendo com que o pH sanguneo diminua.
Se o problema ocorreu na clula que passou para o sangue aumentando a concentrao de cido e diminuindo a de bicarbonato, a soluo quando o problema no denominador (cido carbnico) vir pelo pulmo que hiperventilar eliminando mais CO2 . Esse quadro ser uma acidose metablica. Esse problema ocorre tambm em pessoas com diarria e insuficincia renal e drogas a base de cido. Uma
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pessoa com bronquite, pneumonia ou uma infeco pulmonar no pode expirar grande quantidade de CO2 . A hemoglobina continuar reduzida, no haver efeito Bohr ou efeito Haldane. Temos ento um quadro de acidose respiratria, e se o pulmo no pode realizar o seu papel a soluo ser encontrada no rim. O rim trabalha com o numerador (bicarbonato), aumentando a absoro de bicarbonato. Vmito prolongado, obstruo intestinal e a ingesto excessiva de bicarbonato para se fazer a digesto teremos uma alcalose metablica. Ela provoca um aumento do numerador. O problema ocorre no sangue, logo o problema poder ser solucionado ao pulmo hipoventilando. Doenas do sistema nervoso central, histeria (que ocorre tanto em homens como em mulheres), envenenamento com salicilato iro provocar uma alcalose respiratria. A pessoa ir hiperventilar pelo pulmo que ser compensado nos rins pelo aumento da eliminao de bicarbonato.
CONSIDERAES SOBRE A CONTRAO MUSCULAR

A necessidade de energia deve-se a trs funes bsicas do organismo: PRODUO E TRANSPORTE DE MATERIAL BIOLGICO, MANTER A TEMPERATURA E CONTRAO MUSCULAR. A energia obtida atravs dos alimentos (glicose, gordura e protenas) que so ingeridas e que fazem parte da dieta normal. Mas, esta energia no pode ser obtida diretamente destes alimentos que so ingeridos. Assim h necessidade de se existir uma molcula energtica entre a energia contida nos alimentos e a utilizada pelas clulas. Nas clulas so encontradas estas molculas, que so denominadas de ATP ou TRIFOSFATO DE ADENOSINA. Molcula esta, descoberta no final da segunda dcada do sculo XX.
Trifosfato de adenosina ou ATP
Descoberto quase que simultaneamente por Karl Lohmann (Alemanha) e Cyrus Fiske e Yellapragada Subbarw (EUA) em 1929 quando estudavam extratos de msculos esquelticos. Inicialmente acreditava ser encontrado apenas ns msculos e estivesse relacionado na atividade muscular. Mas em 1941, Fritz Lipmann postulou o conceito unificador de ser o ATP o transportador de energia universal das clulas. Basicamente, o ATP constitudo por um nucleotdeo (a adenosina e uma ribose), formando a adenosina que se encontra ligada a trs molculas de fosfato (ligaes de alta energia).
Da o nome de fosfato de adenosina. Estudos recentes afirmam que o ATP est localizado no ncleo e em outras organelas clulas, e no somente no citoplasma celular.As ligaes entre os dois grupos
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terminais representam as denominadas ligaes de alta energia. Quando desfeita (degradao ou hidrlise) uma dessas ligaes de fosfato, isto , quando removida do restante da molcula, so liberadas 12 Kcal de energia. Aps esta liberao ocorre a formao de adenosina difosfato (ADP) mais fosfato inorgnico (Pi). Essa energia liberada durante a degradao ou hidrlise de ATP e representa a fonte imediata de energia que pode ser usada pela clula muscular para realizar o seu trabalho. Ainda possvel, em certas condies, uma segunda clivagem do ADP com formao do monofosfato de adenosina (AMP) e fosfato inorgnico e liberao de 7 a 12 Kcal de energia. A hidrlise do AMP, com formao de adenosina e fosfato inorgnico, a liberao de energia menor que nas ligaes anteriores (3,4Kcal).
Hidrlise ou degradao do ATP Degradao definida por ser converso de um composto orgnico complexo em um composto menor (mais simples). Isto , converso dos nutrientes (glicose, gordura e protenas) e ATP em um composto menor (retira-se energia). A degradao ocorre com a unio desta molcula com a gua num processo denominado de hidrlise, reao catalisada pela enzima TRIFOSFATASE DE ADENOSINA ou simplesmente ATPase.
A ligao de fosfato mais externa desfeita e libera-se energia e forma-se ADP. A energia liberada pela degradao ou hidrlise do ATP utilizada para a produo e transporte de material biolgico, manter a temperatura e contrao muscular. A hidrlise do ATP se processa com ou sem disponibilidade de oxignio. Essa uma reao imediata, ANAERBICA, e que libera energia. A capacidade da clula em hidrolisar o ATP permite gerar energia para uso imediato, isto no ocorreria se sempre fosse necessrio oxignio para o metabolismo energtico.
Ressntese do ATP
Ressntese definida por ser a formao de um composto completo atravs de elementos de um composto mais simples. Isto , a formao da molcula de ATP atravs da energia provinda dos nutrientes. As concentraes mdias de ATP dentro do organismo em qualquer momento so cerca de 85g no corpo todo. Assim sendo, durante o exerccio de um esforo muscular mximo, o aporte energtico suficiente por apenas poucos segundos de processo contrtil. A quantidade de ATP em atletas suficiente para manter a potncia muscular mxima por apenas 5 a 8 segundos. Estudos tm demostrado, no entanto, que mesmo em atividades musculares intensas, a reduo na concentrao de
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ATP intracelular discreta. Alm disto, o ATP no pode ser fornecido atravs do sangue nem a partir de outros tecidos. O que possibilita a degradao COMPLETA da glicose e seu uso em atividade fsica de BAIXA INTENSIDADE E LONGA DURAO? Repouso e exerccios.
A. Repouso
Durante repouso 2/3 dos nutrientes utilizados para a ressntese de ATP provm da gordura e o 1/3 restante pelos carboidratos. A contribuio das protenas muito pequena. Entre os processos, o aerbio o predominante. Isto comprovado porque nossos sistemas de captao e transporte de oxignio (sistema cardiorrespiratrio) so capazes de fornecer a cada clula oxignio suficiente. O motivo da produo de cido lctico se deve a presena da enzima desidrogenase lctica nas clulas. Esta enzima catalisa a reao de transformao do cido pirvico em cido lctico. Mas o nvel de cido lctico permanece constante e no se acumula.
B. Exerccio
Todos os trs processos contribuem com a ressntese do ATP, mas a predominncia depender dos seguintes fatores: tipo de exerccio realizado, estado ou nvel de treinamento e dieta do atleta.
B.1.Exerccios de curta durao
So exerccios realizados em curtos perodos de tempo, mas que exigem esforos mximos. Estes exerccios incluem: 100, 200, 400 e 800m ou qualquer exerccio que o tempo s possa ser mantido por dois ou trs minutos.O processo predominante o anaerbio. O principal nutriente a glicose. A gordura e protenas so participantes, mas sua participao negligencivel. Os nveis de creatina forsfato (CP) chegaro a valores baixos e continuaro baixos at o encerramento do exerccio. Mas, aps o trmino, cerca de 70% de toda a CP utilizada ser reposta em 30 segundo e 100% em cerca de 3 minutos. Com o predomnio do processo anaerbio, ocorre acmulo de cido lctico. Para que possa continuar o exerccio, haver necessidade de diminuir a intensidade do mesmo ou at par-lo. O nvel de cido lctico no sangue um importante indicador de qual processo predominante durante o exerccio.
B.2. Exerccios prolongados

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So exerccios que podem ser realizados por longos perodos de tempo, mas com uma intensidade baixa. Entende-se por perodos longos, acima de 3 minutos. Os nutrientes utilizados so: glicose, gordura e protenas. Mas o predomnio destes depender da durao. Em atividades fsicas com durao de 20 minutos, a glicose representar a fonte de nutriente dominante, enquanto a gordura desempenhar um papel secundrio. O nvel de cido lctico ser alto, porm no mximo. Para atividades fsicas com durao de uma hora, os depsitos de glicognio muscular comeam a mostrar redues e as gorduras passam a ser a principal fonte de ressntese do ATP. Esta proporo variar de atleta para atleta devido ou ao seu estado de treinamento, ou a proporo da fibra muscular ou ainda, reservas iniciais de glicognio. O principal fornecedor de energia para a ressntese do ATP o processo aerbio, os processos anaerbios s contribuem no inicio do exerccio. Os nveis de cido lctico so mantidos e no alcanam nveis muito altos durante o exerccio aerbio.
A fadiga muscular ocorrida pelos atletas devida a:
Baixo nvel de glicose sangnea;
Depleo das reservas de glicognio muscular (fadiga muscular localizada);
Perda de H2 O e eletrlitos (resultando aumento de temperatura corporal); enfado e abatimento fsico sofrido pelo corpo.
Bases Biolgicas e Fisiolgicas da Contrao Muscular
O msculo pode ser comparado a uma mquina que transforma energia qumica em trabalho, produzindo calor. Quando em atividade, pode alterar sua tenso e seu comprimento.
As propriedades fisiolgicas dos msculos so diferentes nos diferentes estados: relaxamento, incio da contrao, contrao propriamente dita e retorno ao relaxamento. A fora exercida pelo msculo na contrao medida pela unidade de tenso (P), que permite a correo para o tamanho do msculo (medida pela rea de maior seco transversal do msculo em questo). O tamanho do msculo expresso como uma frao do comprimento do msculo em que ele capaz de exercer maior tenso
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isomtrica (lo). Um msculo relaxado pode ser estendido at certo comprimento, quando ento oferece resistncia ao aumento do comprimento. Esta resistncia caracteriza a existncia de um componente elstico no msculo em repouso. No entanto, quando um msculo estimulado tetanicamente no se permitindo a mudana de comprimento (contrao isomtrica), observa-se a situao de tenso mxima. A tenso varia muito conforme o estado do msculo (relaxado, pouco contrado, muito contrado, contrao mxima).
No caso de um msculo contrado ao mximo, a velocidade de contrao zero [peso infinito]. Quando diminuimos o peso aplicado ao msculo, existir um peso no qual a velocidade de contrao pode ser observada (mas ainda mnima e constante).
Se o peso for diminudo gradativamente (diminuindo assim a tenso exercida pelo msculo), a velocidade de contrao ir aumentando proporcionalmente (peso prximo de zero implica em velocidade de contrao mxima).
Contrao isotnica: aquela em que a velocidade diferente de zero e a tenso constante. A produo de calor por um msculo em contrao isotnica proporcional mudana de comprimento do msculo e no depende da velocidade de contrao ou do peso que foi levantado. Nas contraes isomricas, onde no h alterao do comprimento do msculo, existe a liberao de calor de manuteno. Esta quantidade de calor proporcional ao tamanho do msculo e corresponde energia necessria para manter a tenso.Quando parte de um msculo est envolvido na manuteno da tenso, esta parte no estaria necessariamente impedida de participar na gerao de calor.
MSCULO RELAXADO: O ATP responsvel pelo fornecimento de energia para a contrao muscular. Miofibrilas isoladas podem ser contradas e observadas no microscpio comum na presena de ATP. Durante a contrao a banda I diminui de comprimento e a banda A permanece com aproximadamente o mesmo comprimento. As bandas Z se aproximam.Na ausncia de ATP, a actina e a miosina permanecem ligadas. Na presena de ATP ocorre hidrlise da juno [ponte] miosina/actina, a energia liberada por esta hidrlise faz com que um filamento se desloque sobre o outro. MSCULO RELAXADO: Este modelo, chamado "filamentos deslizantes", prope que o msculo se contraia atravs do deslizamento de dois filamentos um sobre o outro, sem que nenhum dos dois altere sua estrutura, composio qumica ou comprimento.
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Na contrao muscular isotnica observa-se uma diminuio no comprimento do sarcmero e os filamentos tendem a se encontrar no centro da banda H. Neste ponto, existe tenso mxima e no h como deslizar mais os filamentos, atingindo uma situao isomtrica. No caso da contrao isomtrica [tetnica], onde no observa diminuio do comprimento do msculo, a energia liberada pelo ATP no pode ser transformada em trabalho devido incapacidade de deslizar mais os filamentos sobre os outros e h produo de calor, mas, no de trabalho. A tenso seria ento determinada pelas pontes. A quantidade de ATP hidrolisada proporcional reciclagem das pontes. Quando a contrao realizada com alta velocidade e baixa tenso, a reciclagem de pontes alta e mais quantidade de ATP necessria. medida que a velocidade diminui, a reciclagem de pontes mais lenta e menos ATP consumido, mesmo que a tenso seja aumentada.
Miosina:
A miosina uma molcula longa com uma cauda e duas cabeas. As cabeas podem se mover em relao a si mesmas e em relao cauda. Miosina pode ser separada por enzimas proteolticas em dois pontos diferentes. Se tratada com tripsina, a miosina dividida em meromiosina pesada (fragmento que retm a atividade ATPsica) e meromiosina leve (que no possui atividade enzimtica). Meromiosina pesada solvel em baixas concentraes de sal enquanto o fragmento meromiosina leve s solvel em concentraes salinas bastante altas. Para estudo dos polipeptdeos que compem a estrutura quaternria da miosina, basta romper as pontes dissulfeto e proceder eletroforese para separao por peso molecular. Existem duas cadeias pesadas na cauda e dois ou trs pares de cadeias leves nas cabeas. As cadeias leves estariam relacionadas atividade ATPsica. O peso molecular e o nmero destas cadeias leves variam de acordo com o msculo estudado e o tipo de fibras (rpidas ou lentas).
Magnsio o nico ction, com efeito, acelerador da atividade ATPsica da miosina. O substrato realmente hidrolisado pela miosina parece ser Mg-ATP. A actina estimula de forma significativa a hidrlise de ATP, e in vivo, a interao destas duas protenas deve ser o fenmeno responsvel pela hidrlise do ATP durante uma contrao.
Actina: A actina uma protena globular com uma nica cadeia polipeptdica e peso molecular de 45KD. No estado monomrico (actina-G), possui uma molcula de ATP e uma de clcio incorporadas em sua
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estrutura. Em soluo de alta fora inica, a actina se polimerizar, ficando filamentosa com uma dupla fileira de monmeros enrolados sobre si mesmos. Na passagem da forma monomrica para a forma filamentosa, o ATP hidrolisado.
Actina/Miosina: se colocadas juntas numa soluo, com o passar do tempo a soluo se torna mais viscosa (formao de complexos actina/miosina) e h aumento de fosfato livre s custas da diminuio de ATP. O ADP formado estvel. A queda de ATP mantem as molculas de actina e miosina juntas e colocao de novo ATP na soluo diminui sua viscosidade. Durante a contrao e distenso de uma clula muscular no ocorre um deslizamento livre sobre os dois tipos de filamentos. No relaxamento, uma lenta hidrlise de ATP ocorre e mantem uma certa tenso entre os filamentos. Com a constante regenerao de ATP, no se observa um estado de inextensibilidade das fibras musculares, a no ser nos casos de rigor mortis, onde no existe novo influxo de ATP para o complexo. A concentrao de ATP se mantm constante devido regenerao a partir de ADP e fosfocreatina, reao catalisada pela creatinoquinase. Uma fibra em contrao isomtrica em um dado comprimento, responde com mudana de seu comprimento em alguns milisegundos, e se estabiliza na nova situao. A alterao por que passa a tenso nesse tempo chamada de um transiente. No transiente observa-se que a tenso varia de forma linear com a mudana de comprimento, at atingir um plat.
Regulao da contrao muscular: Em 1947 foi demonstrado que a injeo de pequenas quantidades de Ca++ numa fibra muscular desencadeava contrao no s no local, mas, propagada por grande parte da fibra. Devido ao curto tempo que se observa entre a despolarizao da membrana plasmtica e a contrao muscular, concluiu-se que no se tratava de um simples processo de despolarizao e difuso de ons pela membrana. A membrana plasmtica das fibras musculares composta por um tubo cercado por duas vesculas de retculo endoplasmtico liso e que circunda toda as miofibrilas. O estmulo eltrico levado ao interior da fibra muscular atravs dos tbulos e as bolsas de Ca++ encontradas no interior do retculo esto to prximas da unidade contrtil que o espao de tempo necessrio entre o estmulo e a contrao pode ser explicado desta forma. Terminada a onda de despolarizao, o clcio ativamente rebombeado para dentro do retculo e o msculo relaxa.
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transmisso sinptica gera despolarizao levada ao interior da fibra pelos tbulos em T; liberao de calcio armazenado no interior de vesculas; clcio + TN-C = alterao conformacional da troponina;
deslocamento da tropomiosina = libera os stios de ligao actina/miosina; bomba de clcio retorna o clcio para o retculo sarcoplasmtico (uso de ATP); TN-C perde o calcio = troponina e tropomiosina retornam ao estado anterior.
ACETIL-COLINA: IMPORTNCIA
A acetilcolina (ACh) um neurotransmissor que funciona como propagador do impulso nervoso nas fendas sinpticas. Os receptores neuronais de acetilcolina (nACHRs) esto distribudos no sistema nervosos central e perifrico onde funcionam tanto pr quanto ps sinapticamente como canais inicos abertos por ligantes.
Os receptores de acetilcolina so divididos em duas classes: Uma primeira inibida por agonistas nicotnicos e uma segunda insensvel a estes agonistas e a alfa neurotoxinas. Quando a ACh liberada pelos neurnios de placa motora estimulam clulas musculares esquelticas. Receptores na fibra muscular reconhecem a ACh como um sinal para contrao. Muitos animais como serpentes venenosas e o baiacu (um peixe venenoso) produzem toxinas que causam paralisia por bloquear os receptores de ACh. H tambm uma doena denominada Miastenia gravis que envolve os receptores de ACh, pacientes com esta doena produzem anticorpos contra os receptores que se ligam a ele impedindo que recebam os sinais para contrao, como resultado os msculos no contraem. O tratamento envolve a administrao de drogas que causam uma liberao de ACh pelos terminais nervosos maiores que o normal. Precursores: Colina e Acetil-CoA Enzima: Colina Acetil Transferase Enzima: Acetilcolinesterase Metablitos: Colina e acetato A chegada de um impulso nervoso promove a exportao sincrnica do contedo de cerca de 300 vesculas de acetilcolina elevando a concentrao desta na fenda sinptica de 10nM para 500 M em menos de 1 milisegundo. A ligao da acetilcolina membrana ps-sinptica aumenta a corrente de entrada dos ons sdio e diminui a de sada dos ons potssio o que eleva a despolarizao da
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membrana ps-sinptica e dispara o potencial de ao. O receptor possui cinco subunidades em alfa hlice, distribudas simetricamente em torno do poro: 2 alfa,1 beta, 1 gama e 1 delta. As subunidades alfa possuem o sitio para ligao da acetilcolina. A ligao de duas molculas de acetilcolina abre, transitoriamente o poro o que ocorre em aproximadamente 1000 microsegundos. O canal permanece aberto por cerca de um milisegundo pois a acetilcolina hidrolisada pela acetilcolinesterase que se encontra ancorada na membrana ps-sinaptica por um grupamento glicolipdico unido covalentemente. A acetilcolinesterase atingiu a perfeio cintica o que permite que potenciais de ao possam ser transmitidos com alta freqncia. Organofosforados (inseticidas agrcolas, gases neurotxicos para fins militares) inibem a
acetilcolinesterase por formarem complexos covalentes fosforil-enzima muito estveis. A forma aberta do canal nunca foi visualizada por ocorre em espaos muito curtos de tempo.
DIABETES MELLITUS
1 - A INSULINA:
um hormnio peptdico produzido pelas clulas beta das Ilhotas de Langerhans pancreticas. Formado por duas cadeias oligopeptdicas ligadas entre si por duas pontes dissulfeto intercadeias e uma ponte dissulfeto intracadeia. Sintetizado a partir de um pr-hormnio (Pr-insulina). Pr-insulina (84 AA) = Insulina (51 AA) + Peptdeo C (33 AA)
Seu mecanismo de ao baseado na ligao da insulina a um receptor especfico de membrana, tetramrico e formado por duas subunidades alfa e duas subunidades beta. Este receptor possui ainda atividade de tiosina-quinase intrnseca, e desencadeia um efeito cascata intracelular. A ao da insulina ainda regulada por feed-back e por outros hormnios que possuem efeitos hiperglicemiantes, como o glucagon, a adrenalina (glicogenlise), o cortisol e o GH hipofisrio (gliconeognese).
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2 - AES DA INSULINA:
A Insulina o Hormnio central de todo o METABOLISMO INTERMEDIRIO ENERGTICO da clula. Aes sobre o Tecido Adiposo:
- Entrada de glicose na clula - Sntese de AG a partir de glicerol e Acetil-CoA - Sntese de cidos Graxos - Bloqueia a liplise Aes sobre o Tecido Muscular:
- Entrada de glicose na clula - Entrada de aminocidos e a biossntese protica - Sntese de glicognio - Bloqueio protelise Aes sobre o Fgado O Fgado um tecido permevel glicose, e no precisa da insulina para capt-la!
3- O "DIABETES MELLITUS" Doena causada pela deficincia relativa ou absoluta da insulina e, consequentemente, em ambos os casos, de seus efeitos sobre o metabolismo energtico intermedirio. Dois mecanismos principais: 1 - Destruio autoimune das clulas beta do pncreas: tpica do diabetes tipo I ou insulinodependente. geralmente condicionada geneticamente, ou desencadeada por vrus/drogas. 2 - Resistncia perifrica insulina somada falncia gradual das clulas beta pancreticas: tpica do diabetes tipo II ou no insulino-dependente. Nestes casos a leso primria desconhecida.
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Dados sobre a Autora e sua Obra

Raquel da Silveira Nogueira Lima
A autora nascida em Itagua, Rio de Janeiro, em 1971.Viveu em Braslia, Distrito Federal de 1973 at 1994. Durante esse perodo, realizou sua graduao em Cincias Biolgicas, na Universidade de Braslia (UnB), formada professora de ingls pela Sociedade Brasileira de Cultura Inglesa (SBCI-DF)e bolsista de Iniciao Tecnolgica e Industrial durante 3 anos do Centro Nacional de Recursos Genticos e Biotecnologia (CENARGEN/EMBRAPA). Desde sua mudana para a cidade de Fortaleza, Cear, em 1994, cursou Mestrado em Bioqumica e atualmente Doutorado em Bioqumica no Departamento de Bioqumica e Biologia Molecular na Universidade Federal do Cear. professora do Centro de Cincias da Sade da Universidade de Fortaleza e das Faculdades Integradas do Cear, tambm na rea de sade. Ministra as disciplinas de Biologia e Bioqumica para os cursos de sade, assim como realiza consultoria na rea de educao em Bioqumica e Biologia Geral. Sentindo a necessidade dos alunos em uma melhor compreenso da bioqumica, reuniu anotaes de aula, conceitos, dvidas mais freqentes e discusses em um compndio de idias que agora apresentado sob o ttulo de "Caminhando pela Bioqumica... uma viso (pr)acadmica". Atravs do referido trabalho, espera-se poder atingir, no apenas o pblico acadmico, mas tambm preparar o ingressante s carreiras das reas biolgicas.
Para corresponder com Raquel da Silveira Nogueira Lima, escreva: rsnlima@yahoo.com
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Uma viso objetiva e acad mica

RAQUEL DA SILVEI RA NOGUEIRA LIMA

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RAQUEL DA SILVEIRA NOGUEIRA LIMA

s pessoas que, de alguma forma, tenho aprendido a amar.

Raquel da Silveira Nogueira Lima Fortaleza, 2000

A menor unidade da matria viva

A Clula e Ciclo Celular Fenmenos de Transporte Transmembrana

Caminhando pela Bioqumica...

Lipdeos Digesto e Absoro de Lipdeos e Vitaminas L-Acetil-Carnitina

Carboidratos Carboidratos: Vias Especiais

Metabolismo Lipdico: Degradao e Biossntese Degradao Oxidativa de Protenas

Tecnologia do DNA Recombinante

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Bioqumica da Respirao: Transporte de Gases e Equilbrio

Consideraes sobre a Contrao Muscular Acetil-Colina: Importncia Diabetes

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Viso Geral sobre os Primeiros Trabalhos em Bioqumica ...

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Cronologia dos primeiros trabalhos...

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OS ORGANISMOS VIVOS SO ORGANIZADOS

COMO A MATRIA VIVA COMPOSTA? TOMOS, MOLCULAS E OUTROS BICHOS...

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Vide Hiptese do Endossimbionte, sobre a origem de mitocndrias e cloroplastos em clulas eucariticas.

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PRINCPIOS DA LGICA MOLECULAR DA VIDA

EVOLUO QUMICA - A ORIGEM DA VIDA

Antoine L. Lavoisier, sculo XVII.

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Ribozima (enzima ribossmica).

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A CLULA E CICLO CELULAR

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Protenas de carter bsico, constitudas, principalmente do aminocido bsico histidina.

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FENMENOS DE TRANSPORTE TRANSMEMBRANA

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Componentes Necessrios para a Traduo

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Os stios "A" e "P" cobrem juntos dois cdons vizinhos

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Elongamento da Cadeia: Depende dos "fatores de elongamento" e do complexo de iniciao

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