DESNATURALIZACIN DE LAS PROTENAS

Cuando la protena no ha sufrido ningn cambio en su interaccin con el disolvente, se dice que presenta una estructura nativa (Figura inferior). Se llama desnaturalizacin de las protenas a la prdida de las estructuras de orden superior (secundaria, terciaria y cuaternaria), quedando la cadena polipeptdica reducida a un polmero estadstico sin ninguna estructura tridimensional fija. Estado nativo Estado desnaturalizado

Cualquier factor que modifique la interaccin de la protena con el disolvente disminuir su estabilidad en disolucin y provocar la precipitacin. As, la desaparicin total o parcial de la envoltura acuosa, la neutralizacin de las cargas elctricas de tipo repulsivo o la ruptura de los puentes de hidrgeno facilitar la agregacin intermolecular y provocar la precipitacin. La precipitacin suele ser consecuencia del fenmeno llamado desnaturalizacin y se dice entonces que la protena se encuentra desnaturalizada (Figura superior). En una protena cualquiera, la estructura nativa y la desnaturalizada tan slo tienen en comn la estructura primaria, es decir, la secuencia de AA que la componen. Los dems niveles de organizacin estructural desaparecen en la estructura desnaturalizada. La desnaturalizacin provoca diversos efectos en la protena: 1. cambios en las propiedades hidrodinmicas de la protena: aumenta la viscosidad y disminuye el coeficiente de difusin 2. una drstica disminucin de su solubilidad, ya que los residuos hidrofbicos del interior aparecen en la superficie 3. prdida de las propiedades biolgicas

Una protena desnaturalizada cuenta nicamente con su estructura primaria. Por este motivo, en muchos casos, la desnaturalizacin es reversible ya que es la estructura primaria la que contiene la informacin necesaria y suficiente para adoptar niveles superiores de estructuracin. El proceso mediante el cual la protena desnaturalizada recupera su estructura nativa se llama renaturalizacin. Esta propiedad es de gran utilidad durante los procesos de aislamiento y purificacin de protenas, ya que no todas la protenas reaccionan de igual forma ante un cambio en el medio donde se encuentra disuelta. En algunos casos, la desnaturalizacin conduce a la prdida total de la solubilidad, con lo que la protena precipita. La formacin de agregados fuertemente hidrofbicos impide su renaturalizacin, y hacen que el proceso sea irreversible.

Los agentes que provocan la desnaturalizacin de una protena se llaman agentes desnaturalizantes. Se distinguen agentes fsicos (calor) y qumicos (detergentes, disolventes orgnicos, pH, fuerza inica). Como en algunos casos el fenmeno de la desnaturalizacin es reversible, es posible precipitar protenas de manera selectiva mediante cambios en:

la polaridad del disolvente la fuerza inica el pH la temperatura

Las protenas se desnaturalizan cuando pierden su estructura tridimensional (conformacin qumica) y as el caracterstico plegamiento de su estructura. Las protenas son filamentos largos de aminocidos unidos en una secuencia especfica. Son creadas por los ribosomas que "leen" codones de los genes y ensamblan la combinacin requerida de aminocidos por la instruccin gentica. Las protenas recin creadas experimentan una modificacin en la que se agregan tomos o molculas adicionales, como el cobre, zinc y hierro. Una vez que finaliza este proceso, la protena comienza a plegarse sin alterar su secuencia (espontneamente, y a veces con asistencia de enzimas) de forma tal que los residuos hidrfobos de la protena quedan encerrados dentro de su estructura y los elementos hidrfilos quedan expuestos al exterior. La forma final de la protena determina cmo interaccionar con el entorno. Si la forma de la protena es alterada por algn factor externo (por ejemplo, aplicndole calor, cidos o lcalis), no es capaz de cumplir su funcin celular. ste es el proceso llamado desnaturalizacin. Cmo la desnaturalizacin afecta a los distintos niveles.

En la desnaturalizacin de la estructura cuaternaria, las subunidades de protenas se separan o su posicin espacial se corrompen. La desnaturalizacin de la estructura terciaria implica la interrupcin de: o Enlaces covalentes entre las cadenas laterales de los aminocidos (como los puentes disulfuros entre las Cistenas). o Enlaces no covalentes dipolo-dipolo entre cadenas laterales polares de aminocidos. o Enlaces dipolo inducidos por fuerzas de Van Der Waals entre cadenas laterales no polares de aminocidos. En la desnaturalizacin de la estructura secundaria las protenas pierden todos los patrones de repeticin regulares como las hlices alfa y adoptan formas aleatorias. La estructura primaria, la secuencia de aminocidos ligados por enlaces peptdicos, no es interrumpida por la desnaturalizacin.

Prdida de funcin La mayora de las protenas pierden su funcin biolgica cuando estn desnaturalizadas, por ejemplo, las enzimas pierden su actividad cataltica, porque los sustratos no pueden unirse ms al centro activo, y porque los residuos del aminocido implicados en la estabilizacin de los sustratos no estn posicionados para hacerlo. Reversibilidad e irreversibilidad En muchas protenas la desnaturalizacion no es reversible; esto depende del grado de modificacin de las estructuras de la protena.Aunque se ha podido revertir procesos de desnaturalizacin quitando el agente desnaturalizante, en un proceso que puede tardar varias horas incluso das; esto se debe a que el proceso de reestructuracin de la protena es tentativo, es decir, no asume su forma original inmediatamente, as muchas veces se obtienen protenas distintas a la inicial, adems con otras caractersticas como insolubilidad (debido a los agregados polares que puedan unrsele). Recientemente se ha descubierto que, para una correcta renaturalizacin, es necesario agregar trazas del agente desnaturalizante. Esto fue importante histricamente, porque condujo a la nocin de que toda la informacin necesaria para que la protena adopte su forma nativa se encuentra en la estructura primaria de la protena, y por lo tanto en el ADN que la codifica. Algunos ejemplos comunes Cuando se cocina el alimento, algunas de sus protenas se desnaturalizan. Esta es la razn por la cual los huevos hervidos llegan a ser duros y la carne cocinada llega a ser firme. Un ejemplo clsico de desnaturalizacin de protenas se da en la clara de los huevos, que son en gran parte albminas en agua. En los huevos frescos, la clara es transparente y lquida; pero al cocinarse se torna opaca y blanca, formando una masa slida intercomunicada. Esa misma desnaturalizacin puede producirse a travs de una desnaturalizacin qumica, por ejemplo volcndola en un recipiente con acetona. Otro ejemplo es la nata (nombre que proviene de la desnaturalizacin), que se produce por calentamiento de la lactoalbmina de la leche (y que no tiene nada que ver con la crema) La protena de la leche se llama casena y se desnaturaliza cuando el pH de la leche se modifica. Esto se le conoce en lo cotidiano Se cort la leche. La casena se desnaturaliza cuando le agregas a un vaso de leche suficiente jugo de limn para modificar el pH de la leche.

DESNATURALIZACION Y RENATURALIZACION DE LAS PROTEINAS La renaturalizacin es hacer que protenas que han perdido su estructura cuaternaria, por medio de detergentes como el SDS u otros agentes desnaturalizantes, recuperen su conformacin tridimensional. La desnaturalizacin es un cambio estructural de las protenas o cidos nucleicos, donde pierden su estructura nativa, y de esta forma su ptimo funcionamiento y a veces tambin cambian sus propiedades fsico-qumicas.

Sntesis de Protenas Las protenas tienen una funcin especfica y esta especificidad viene dada por su estructura y sus propiedades qumicas, para darle validez a esta aseveracin podemos poner como ejemplo, la insulina es una hormona y la hemoglobina es la que se encarga transportar el oxgeno de los glbulos rojos. Estos compuestos ocupan un posicin fundamental en las caractersticas estructurales y funcionales de los organismos vivos porque son parte fundamental en las clulas. La molcula de protena consiste en una cadena o ms cadenas de molculas que estn formadas por aminocidos. La secuencias de los aminocidos estn dispuestos en cadenas que determinan el carcter biolgico de la molcula de protena y basta una pequea variacin en esta secuencia para que su funcin se altere o destruya .

La sntesis de protenas: es una operacin mediante el cual el lenguaje de los nucletidos es traducido al lenguaje de los aminocidos.

El ARNt toma el aminocido recin sintetizado y lo lleva a la superficie del ribosoma. este proceso se puede sintetizar en cuatro fases: activacin de los aminocidos, iniciacin, elongacin y terminacin. Iniciacin; esta etapa empieza cuando la subunidad ribosmica ms pequea se une a la cadena de ARNm ms pequea, exponiendo su primer codn o codn iniciador A continuacin se te coloca en su sitio el primer ARNt. El primer codn siempre es AUG, el primer anticodn siempre es UAC y el primer aminocido es una metionina modificada, conocida como fMet, que despus se elimina. Luego la subunidad ms grande del ribosoma se une con la subunidad ms pequea y el primer ARN con fMet fijado a l, encaja en el sitio P (pptido) de la subunidad completndose as la etapa de iniciacin Elongacin: En esta etapa, el segundo codn del ARNm se coloca frente al sitio A (aminocido); un ARNt con el anticodn se fija en la molcula de ARNm y, junto con el aminocido pasa a ocupar el sitio A en el ribosoma, donde ser ledo el mensaje. Cuando ambos sitios estn ocupados, una enzima que forma parte de la unidad ribosmica ms grande crea el enlace peptdico entre los dos aminocidos. unindose el primero con el segundo; el ARNt que est en primer lugar se libera y el ARNt que est de segundo y al cual est unido la fMet, el segundo aminocido pasa a la posicin P. Un tercer ARNt con su aminocido pasa a la posicin A frente al tercer codn en el ARNm y el paso se repite. Aqu la posicin que obtiene la P recibe al ARNt que trae consigo la cadena de polipptidos que estn en crecimiento y la posicin A recibe al ARNt que lleva el nuevo aminocido que se pegar a la cadena. Cuando el ribosoma se va desplazando a lo largo de la cadena de ARNm, la posicin iniciadora queda libre y otro ribosoma puede formar el complejo de iniciacin con ella. Terminacin: Es el proceso mediante el cual la traduccin cesa y las dos unidades que forman el ribosoma se separan para que ocurra la sntesis de protenas. La regulacin de la expresin gnica: El ADN de una especie cualquiera contiene la informacin para la sntesis de todas las protenas, estructurales y, enzimticas que el organismo, es capaz de utilizar a lo largo de toda su vida. Como el ambiente ha ido cambiando, la evolucin biolgica ha ido favoreciendo, desde sus comienzos a aquellos que han sido capaces de utilizar mejor; aprovechando los recursos de que disponen sin malgastar energa ni metabolitos. La regulacin en los procariotas: El modelo del opern: Por lo que se sabe las bacterias acomodan la sntesis de sus protenas a las necesidades y disponen de mecanismos que les permiten poner en funcionamiento slo una parte de sus genes. Existen dos tipos de genes: los genes estructurales, que codifican las secuencias de aminocidos de las protenas estructurales y enzimticas, y los genes reguladores, que controlan, conectndolos o desconectndolos, la expresin de aquellos genes estructurales por medio de la sntesis de protenas represoras que actan sobre stos. Este modelo fue desarrollado por J.Monod y F.Jacob, estudiaron la sntesis de la enzima B. galactosidasa, que cataliza la hidrlisis de lactosa en glucosa y galactosa en Escherichia coli

En el opern lac hay un gen regulador (gen i) y tres genes estructurales (z,y,a) que codifican para cada uno de ellos tres. Entre el uno y los otros hay una zona especfica denominada promotor, donde se fijar la enzima ARN-polimerasa, encargado de la transcripcin de los genes estructurales y, a su lado, la zona operador, donde se fija el represor producido por el gen regulador que impide la accin de la ARN polimerasa. Este opern tiene la posibilidad de ser activado por medio de la induccin por el efector, lactosa, es el

efector, ya que cuando sta se halla presente, se asocia con la represora y hace que sta pierda afinidad por la zona del operador queda libre la ARN polimerasa y de esta forma transcribe el contenido de los genes estructurales. Existe la posibilidad de la sntesis de los genes estructurales por un procedimiento en el que interviene el nucletido AMPc o AMP cclico. Algunos operones de represin por catabolito funcionan relativamente inversa al de la lactosa de Escherichia coli La regulacin en los eucariotas: el problema de la expresin gnica en los eucariotas y en especial en los pluricelulares, es ms complicada, porque las clulas adems de hacer frente a las necesidades de cada momento, coordinan su actividad en el seno de un organismo de nivel superior. Durante su desarrollo las clulas pierden su potencia y se especializan, de forma que la expresin gnica es diferencial, estos procedimientos son desconocidos, pero la existencia de intrones en sus genes y el reordenamiento dirigido de los genes durante algunos procesos permite suponer que difieren notablemente de los procariotas. Se conoce como sntesis de protenas al proceso por el cual se componen nuevas protenas a partir de los veinte aminocidos esenciales. En estre proceso, se transcribe el ADN en ARN. La sntesis de protenas se realiza en los ribosomas situados en el citoplasma celular.

En el proceso de sntesis, los aminocidos son transportados por ARN de transferencia correspondiente para cada aminocido hasta el ARN mensajero donde se unen en la posicin adecuada para formar las nuevas protenas. Al finalizar la sntesis de una protena, se libera el ARN mensajero y puede volver a ser leido, incluso antes de que la sntesis de una protena termine, ya puede comenzar la siguiente, por lo cual, el mismo ARN mensajero puede utilizarse por varios ribosomas al mismo tiempo. A continuacin puedes ver ms informacin sobre en qu consiste el proceso de la sntesis de protenas, cuales son sus fases y los pasos que se realizan en cada fase de la sntesis de proteinas.

Fases de las sntesis de protenas

La realizacin de la biosntesis de las protenas, se divide en las siguientes fases: 1. Fase de activacin de los aminocidos. 2. Fase de traduccin que comprende: 1. Inicio de la sntesis proteica.

2. Elongacin de la cadena polipeptdica. 3. Finalizacin de la sntesis de protenas. 3. Asociacin de cadenas polipeptdicas y, en algunos casos, grupos prostsicos para la constitucin de las protenas.

Fase de activacin de los aminocidos

Mediante la enzima aminoacil-ARNt-sintetasa y de ATP, los aminocidos pueden unirse ARN especfico de transferencia, dando lugar a un aminoacil-ARNt. En este proceso se libera AMP y fosfato y tras l, se libera la enzima, que vuelve a actuar.

Inicio de la sntesis proteica

En esta primera etapa de sntesis de protenas, el ARN se une a la subunidad menor de los ribosomas, a los que se asocia el aminoacil-ARNt. A este grupo, se une la subunidad ribosmica mayor, con lo que se forma el complejo activo o ribosomal. Leer ms sobre la fase de iniciacin de la sntesis de protenas.

Elongacin de la cadena polipeptdica

El complejo ribosomal tiene dos centros o puntos de unin. El centro P o centro peptidil y el centro A. El radical amino del aminocido inciado y el radical carboxilo anterior se unen mediante un enlace peptdico y se cataliza esta unin mediante la enzima peptidil-transferasa. De esta forma, el centro P se ocupa por un ARNt carente de aminocido. Seguidamente se libera el ARNt del ribosoma producindose la translocacin ribosomal y quedando el dipeptil-ARNt en el centro P. Al finalizar el tercer codn, el tercer aminoacil-ARNt se sita en el centro A. A continuacin se forma el tripptido A y despus el ribosoma procede a su segunda translocacin. Este proceso puede repetirse muchas veces y depende del nmero de aminocidos que intervienen en la sntesis. Leer ms sobre la fase de elongacin de la sntesis de protenas.

Finalizacin de la sntesis de protenas.

En la finalizacin de la sntesis de protenas, aparecen los llamados tripletes sin sentido, tambin conocidos como codones stop. Estos tripletes son tres: UGA, UAG y UAA. No existe ARNt tal que su anticodn sea complementario. Por ello, la sntesis se interrumpe y esto indica que la cadena polipeptdica ha finalizado.