INSTITUTO SUPERIOR CIÊNCIAS DA SAÚDE-SUL

Curso Medicina Dentária

Ano lectivo 02/03

MICROBIOLOGIA ORAL

PROGRAMA PRÁTICO E TEÓRICO-PRÁTICO

Regente:Dr.Samuel Llobet
Assistente:Dra.Teresa Nascimento

1ªSEMANA

Ecologia microbiana oral:

 - Mecanismos de colonização oral
- Interacção bactéria-hospedeiro
- Interacção bactéria-bactéria
Composição; tipos de microorganismos

2ªSEMANA

Métodos de estudo microbiológicos e imunológicos da flora oral normal e da flora

associada a patologia oral.

Colheitas:
- Importância no diagnóstico clínico
- Conceitos acerca da qualidade dos produtos a submeter a exame
microbiológico
- Métodos de colheita de amostras para estudo bacteriano e fungico:
- saliva
- placa dentária
- punção de abcessos
- Acondicionamento e transporte de amostras:
- aeróbios
- anaeróbios

3ªSEMANA

Aula Prática
Execução de colheitas dos diferentes ecossistemas orais:
- Saliva (Método indirecto de colheita)
- Placa bacteriana (supra e subgengival)
- Dorso da lingua
Exame microscópico directo- Coloração de Gram
Determinação dos morfotipos bacterianos
Exame cultural- Meio Mitis Salivarius Agar (com e sem bacitracina)

4ªSEMANA

Aula Prática:
Leitura macroscópica e microscópica do exame cultural executado na aula anterior
Identificação dos Estreptococos orais com Galeria API 20Strep.
Realização de provas de aglutinação para identificação de Estreptococos

5ªSEMANA

Aula Teórico-prática:
Identificação e caracterização dos Estreptococos implicados em patologia oral.
6ªSEMANA

Antibióticos e antifungicos
- Mecanismos de acção
- Mecanismos de resistência
- Importância clínica

7ªSEMANA

Avaliação.

8ªSEMANA

Bacilos anaeróbios Gram negativos

Bacilos anaeróbios Gram positivos
Cocos anaeróbios Gram negativos
Cocos anaeróbios Gram positivos

Importância na patologia infecciosa oral:

- Cárie
- Doença periondontal
- Doença endodontal

Diagnóstico laboratorial:
-meios de cultura
-incubação
-galerias de identificação

9ªSEMANA

Aula prática:

Diagnóstico microbiológico de amostras a partir do sulco gengival e bolsa periodontal:

- Colheita
- Transporte
- Processamento das amostras
- Inoculação em meios de cultura
- Atmosfera de anaerobiose
10ªSEMANA

Aula prática:

Diagnóstico microbiológico de amostras do sulco gengival e bolsa periodontal: (CONT.)

- Leitura e interpretação das placas
- Exame macroscópico e microscópico das colónias
- Identificação presuntiva:
- Testes bioquímicos convencionais
 - Galeria API 20A

11ªSEMANA

Aula prática:

Diagnóstico microbiológico de amostras do sulco gengival e bolsa periodontal: (CONT.)

- Leitura dos testes de identificação
- Execução de antibiogramas por sistema API, com galerias ATB ANA

12ªSEMANA

Aula teórico-prática:
Cárie dentária
-Espécies implicadas
-Diagnóstico laboratorial

Aula prática:
Leitura e interpretação dos antibiogramas realizados na semana anterior

Testes para avaliar o risco bacteriológico à cárie:

- Determinação da capacidade tampão da saliva

- Contagem de S.mutans e Lactobacilos através do diagnóstico microbiológico tradicional
e pelo sistema Dentocult SM e LB

13ªSEMANA

Aula teórico-prática:
Doença periondontal e endodontal
-Espécies implicadas
-Diagnóstico laboratorial

Aula prática:
Comparações e conclusões sobre as duas metodologias utilizadas para avaliar o risco
bacteriológico de cárie.

14ªSEMANA
Avaliação.

1ªSEMANA 18 e 19 Março

Ecologia microbiana oral:

- Mecanismos de colonização oral
- Interacção bactéria-hospedeiro
- Interacção bactéria-bactéria
Composição;tipos de microorganismos

2ªSEMANA 25 e 26 Março

Métodos de estudo microbiológicos e imunológicos da flora oral normal e da flora

associada a patologia oral.
Colheitas:
- Importância no diagnóstico clínico
 - Conceitos acerca da qualidade dos produtos a submeter a exame
microbiológico
- Métodos de colheita de amostras para estudo bacteriano e fungico:
- saliva
- placa dentária
- punção de abcessos
- Acondicionamento e transporte de amostras:
- aeróbios
- anaeróbios

3ªSEMANA 1 e 2 Abril
Aula Prática

Execução de colheitas dos diferentes ecossistemas orais:

- Saliva (Método indirecto de colheita)
- Placa bacteriana (supra e subgengival)
- Dorso da lingua
Exame microscópico directo- Coloração de Gram
Exame cultural- Meio Mitis Salivarius Agar

Material necessário:
- Lâminas/lamelas
- Reagentes de coloração de Gram
- Zaragatoas (200)
- Meio Mitis Salivarius Agar (50 placas)
- Meio Mitis Salivarius Bacitracina Agar (adicionar 0.2U/ml + 15 g de sacarose em 100
de MSA) (50 placas)
- Tubos de ensaio com 0.5ml de SF (25x)
- Tubos de ensaio com 1.0ml de BHI (50x)

- Meio BHI + agar (25x)

- Meio TSA + 5% de sangue de carneiro
- Meio Columbia agar + 10% de sangue de cavalo

4ªSEMANA 8 e 9 Abril
Aula Teórico-prática:
Identificação e caracterização dos Estafilococos e Estreptococos implicados em patologia
oral.

Aula Prática:
Leitura macroscópica e microscópica do exame cultural executado na aula anterior
Identificação dos Estreptococos orais com Galeria API 20 Strep.
Realização de provas de aglutinação para identificação de Estreptococos
Material necessário:
- 50 Galerias API 20 Strep
- Tubos com 2ml/cd de SF (50x)
- Micropipetas de 100 e 1000 µl
- Pontas amarelas e azuis estereis
- 1 Slidex Strepto-Kit (teste latex)
- Lâminas q.b.
- 2 frascos com A.D.E:
- Reagentes da Coloração de Gram
- 1 Kit para tipagem dos Estreptococos
- Densitómetro (escala de Mc-Farland)
- H2O2 (10 vol.)
- Pipetas Pasteur de plástico (20x)
- Agitador mecânico

5ªSEMANA 15 e 16 Abril

Antibióticos e antifungicos
- Mecanismos de acção
- Mecanismos de resistência
- Importância clínica

6ªSEMANA 6 e 7 Maio

Avaliação.

7ªSEMANA 28 e 29 Abril

Bacilos anaeróbios Gram negativos

Bacilos anaeróbios Gram positivos
Cocos anaeróbios Gram negativos
Cocos anaeróbios Gram positivos

Importância na patologia infecciosa oral:

- Cárie
- Doença periondontal
- Doença endodontal

Diagnóstico laboratorial:
-meios de cultura
-incubação
-galerias de identificação
8ªSEMANA 20 e 21 de Maio
Aula prática:

Diagnóstico microbiológico de amostras a partir do sulco gengival e bolsa periodontal:

- Colheita
- Transporte
- Processamento das amostras
- Inoculação em meios de cultura
- Atmosfera de anaerobiose

Material necessário: (Grupos de 4 alunos) (25 grupos)

- Vortex
- Placa rotativa de aquecimento (35-37ºC)
- 125 tubos com 900µl /cd de Meio API 20A
- Micropipetas de 100 e 1000µl
- 6 espalhadores de vidro
- 100 placas de gelose CDC (5% sangue desfribinado de carneiro)
- 100 placas de gelose BHI (+ hemina + vitamina K)
- 50 placas de meio TSBV (tripticase-soja-bacitracina-vancomicina)
- Jarras de anaerobiose q.b. (150 placas)
- Geradores de anaerobiose – GENbox anaer / GENbox CO2
- Reagentes para a coloração de Gram
- Lâminas q.b.
- Cultura pura de Porphyromonas gingivalis, Prevotella intermedia,
Bacteroides forsythus

9ªSEMANA 27 e 28 Maio
Aula prática:

Diagnóstico microbiológico de amostras do sulco gengival e bolsa periodontal: (CONT.)

- Leitura e interpretação das placas
- Exame macroscópico e microscópico das colónias
- Identificação presuntiva:
- Testes bioquímicos convencionais
- Galeria API 20A

Material necessário: (grupos de 4 alunos)

- Lupas q.b.
- Discos de oxidase
- Pipetas Pasteur de vidro
- H2O2 a 10 vol.
- Lâmpada de UV
- Lâminas e lamelas
 - 25 sistemas API 20 A
- 25 ampolas com meio API 20A
- Micropipetas de 100 e 1000µl
- 25 sistemas ID 32 A
- Suspension Medium (pode ser A.D.E.) (2ml x 25 tubos)
- Óleo de parafina q.b.
- Densitómetro (escala de Mc-Farland)
- Geradores de CO2 + jarras
- PerioScan Cards (BANA test)- Lab. Oral B

10ªSEMANA 3 e 4 Junho
Aula prática:

Diagnóstico microbiológico de amostras do sulco gengival e bolsa periodontal: (CONT.)

- Leitura dos testes de identificação
- Execução de antibiogramas por sistema API, com galerias ATB ANA

Material necessário:

- 20 galerias ATB ANA

- Densitómetro
- Micropipetas de 100 e 1000µl
- Reagentes de revelação para as galerias API 20 A
- Livros de sequenciação numérica para identificação

11ªSEMANA 3 e 4 Junho

Aula teórico-prática:
Cárie dentária
-Espécies implicadas
-Diagnóstico laboratorial

Aula prática:
Leitura e interpretação dos antibiogramas realizados na semana anterior

12ªSEMANA 11 de Junho
Aula prática:

Testes para avaliar o risco bacteriológico à cárie:

- Determinação da capacidade tampão da saliva

- Contagem de S.mutans e Lactobacilos através do diagnóstico microbiológico tradicional
e pelo sistema Dentocult SM e LB
Material necessário:

- 25 comprimidos de parafina (pastilhas s/ açucar)

- Recipientes para recolha de saliva
- 25 tubos com 1ml cd/ de solução 0.005N HCl
- Papel indicador de pH
- 2 sistemas Dentocult SM (Strip Mutans)
- 1 sistema Dentocult LB
- 25 ansas calibradas de 10µl
- 6 espalhadores de vidro
- 25 placas de gelose Mitis-Salivarius-Bacitracina
- 25 placas de gelose BHI
- 50 placas de gelose Mitis-Salivarius
- 75 tubos de SF com 900µl cd/
- Vortex
- Micropipetas de 100µl
- Pontas amarelas estereis

13ªSEMANA

Aula teórico-prática:
Doença periondontal e endodontal
-Espécies implicadas
-Diagnóstico laboratorial

Aula prática:
Comparações e conclusões sobre as duas metodologias utilizadas para avaliar o risco
bacteriológico de cárie.

14ªSEMANA 17 e 18 Junho

Avaliação.
 INSTITUTO SUPERIOR CIÊNCIAS DA SAÚDE SUL

CURSO DE MEDICINA DENTÁRIA

Microbiologia Oral

2ºAno/2ºSemestre
Ano lectivo 02/03

Regente:Dr.Samuel Llobet
Assistente:Dra.Teresa Nascimento

Material necessário para as aulas práticas de Microbiologia Oral:

Previsão para 100 alunos:

- Lâminas/lamelas
- Cristal Violeta (8 frascos)
- Lugol (8 frascos)
- Alcool-acetona (8 frascos)
- Fucsina diluida (8 frascos)
- Zaragatoas (200)
- Meio de transporte: 30 frascos de Meio VMGA III (anaerobic)
- 200 placas de Meio Mitis-Salivarius-Agar
- 200 placasde Meio Mitis-Salivarius-Bacitracina-Agar
- Bacitracina (5g) Ref: 106992 (Merck)
- Sacarose
- Cultura pura de Estreptocos B-hemolíticos em columbia agar.
- 1 Slidex Strepto Kit (teste latex) Ref: 58810 bioMérieux
- 3 caixas de Galerias API 20 Strep Ref: 200600 bioMérieux
- 40 tubos de ensaio com 0.5ml de SF
- 40 tubos de ensaio com 1ml de BHI
- 50 tubos de hemólise com 2ml de SF
- 6 micropipetas de 100 e 1000µl
- Pontas amarelas e azuis estéreis
- 2 caixas de Dentocult SM
- 1 caixa de Dentocult LB
- 25 recipientes graduados para recolha de saliva
- 25 tubos com 1ml/cd de solução 0.005 N de HCl
- Papel indicador de pH
- 25 Comprimidos de parafina
- 6 espalhadores de vidro
- 50 ansas calibradas de 10µl
- 3 Vortex
- Placa rotativa de aquecimento (35-37ºC)
- 1 caixa de Meio API 20 A (25 x 6 ml) Ref: 20320 bioMérieux
- 3 caixas de galerias API 20 A Ref: 20300 bioMérieux
- 1 ampola Ehrlich Ref: 70520 bioMérieux
- XYL (xileno) Ref: 70530 bioMérieux
- BCP (púrpura de bromocresol) Ref: 70510 bioMérieux
- 2 caixas de GENbox anaer (10 geradores) Ref: 96124 bioMérieux
- 2 caixas de GENbox CO2 (10 geradores) Ref: 96126 bioMérieux
- 1 caixa de Suspension Medium Ref: 70700 bioMérieux
- 1 caixas de ATB ANA (10gal + 10 amp.) Ref:14269 bioMérieux
- 20 tubos de caldo de carne
- 200 placas de BHI + agar + hemina + vitamina K
- sangue de cavalo
- columbia agar
- BHI
- Anaerobic Blood Agar Base acc. to CDC (500g) Ref: 116331.0500
(Merck)
- Vitamina K1 (1g) Ref: 5.01890.0001 (Merck)
- Etanol (1l) Ref: 1.00983.1000 (Merck)
- Solução de hemina
- Sangue desfibrinado de carneiro (50 ml)
- TSBV (tripticase-soja-bacitracina-vancomicina)
- Lâmpada de UV
- H2O2 a 10 volumes
- Discos de oxidase
- Lupas q.b.
- Óleo de parafina (6 frascos)
- Densitómetro (escala de Mc Farland)
- Reagentes de revelação para as galerias API 20 A
- Livros de sequenciação numérica para identificação do API 20A
 - PerioScan Card (BANA test) Oral-B
- Estirpes ATCC:
- Porphyromonas gingivalis ATCC 33277
- Prevotella intermedia ATCC 25611
- Bacteroides forsythus ATCC 29522
- Streptococcus mutans
- Streptococcus sanguis
- Streptococcus sobrinus
- Streptococcus anginosus
- Lactobacillus salivarius
- Lactobacillus acidophilus

Antibióticos e antifúngicos
- Mecanismos de acção
- Mecanismos de resistência
- Importância clínica

Material necessário:

-Antibiogramas para Gram-/+ e Pseudomonas (2 placas de cada)

5ªSEMANA

Identificação e caracterização dos Estafilococos e Estreptococos implicados em patologia

oral.

Material necessário:

- Cultura pura de Estreptocos B-hemolíticos e Estafilococos em gelose sangue.

- Serologia para identificação de Estreptococos (aglutinação)
- Discos de Bacitracina
- 12 placas de Mueller-Hinton (adicionado de 5% de sangue)
- Galeria API para Estreptococos (S.salivarius;S.mutans;S.pyogenes)

6ªSEMANA

Avaliação.
7ªSEMANA

Anaeróbios: -Gram negativos e Gram positivos

Importância na patologia infecciosa oral:

- Cárie
- Doença periondontal
- Doença endodontal
Diagnóstico laboratorial:
-meios de cultura
-incubação
-galerias de identificação
8ªSEMANA

Manifestações orais de infecções sistémicas ao nível da mucosa e submucosa oral.

- Etiologia bacteriana

Estudo da familia Treponemataceae e associação a patologia oral.

Estudo do género Mycobacterium sp. e associação a patologia oral.
Mycobacterium tuberculosis
Mycobacterium leprae

Coloração de Zhiel-Neelson.

9ªSEMANA

Manifestações orais de infecções sistémicas ao nível da mucosa e submucosa oral.

- Etiologia viral,micológica e parasitológica.

Fungos , parasitas e virus na cavidade oral

- Espécies mais importantes
- Papel na patologia infecciosa oral
- Diagnóstico laboratorial

Material necessário:

- Candida albicans em cultura pura

- Soro humano- prova da blastese
- Trichomonas tenax em BHI
10ªSEMANA

Cárie dentária
-Espécies implicadas
-Diagnóstico laboratorial

11ªSEMANA

Aula prática:

-Determinação da capacidade tampão da saliva

-Contagem de S.mutans e lactobacilos

Material necessário:

-Dentocult SM (Strip Mutans)

-Dentocult LB
-Solução 0.005 N de HCL/papel indicador de pH
-Comprimidos de parafina

12ªSEMANA

Doença periondontal e endodontal

-Espécies implicadas
-Diagnóstico laboratorial

13ªSEMANA

Avaliação.
 INSTITUTO SUPERIOR CIÊNCIAS DA SAÚDE
CURSO DE MEDICINA DENTÁRIA

MICROBIOLOGIA GERAL
(2ºAno-1ºSemestre)

Programa Prático e Teórico-Prático

REGENTE:Prof.Doutor Nuno Taveira

ASSISTENTES:Dra.Ausenda Oliveira
Dra.Teresa Nascimento

1ªSEMANA
1ªAULA (Teórico-prática)
-Apresentação
-Noções de comportamento laboratorial
a.Assépsia
b.Precauções na manipulação de produtos contaminados

2ªAULA (Teórico-prática)

-Estudo da célula bacteriana por microscopia óptica

a.Exame a fresco
-estudo da mobilidade
-estudo da morfologia

b.Exame após coloração

b.1-Tipos de corantes e coloração usados em microbiologia

b.2-Colorações simples pelo azul de metileno
b.3-Coloração diferencial de Gram
b.4-Colorações especiais
b.4.1.-Coloração de cápsula
b.4.2.-Coloração de esporos
b.4.3.-Coloração de flagelos
b.4.4.-Coloração de micobactérias pela técnica de Ziehl-Neelson

3ªAULA

-Exame fresco entre lâmina-lamela

-Coloração de Azul de metileno
-Coloração de Gram

MATERIAL

-3 caixas de lâminas
-3 caixas de lamelas
-30 ansas de Henle
-30 pinças
-15 microscópios ópticos
-15 frascos de óleo de imersão
-6 frascos de azul de metileno

-8 frascos de:
cristal violeta
lugol
alcool-acetona
fucsina diluida
Estirpes bacterianas em BHI

-Escherichia coli
-Proteus mirabilis
-Pseudomonas sp.
-Staphylococcus epidermidis

2ªSEMANA
1ªAULA

-Exame a fresco entre lâmina/lamela

-Coloração de Gram

2ªAULA

-Coloração de cápsula
a.Método com tinta da china
b.Método com fucsina diluida
-Coloração de micobactérias pela técnica de Ziehl-Neelson

MATERIAL

-8 frascos com tinta da china

-1 saco de papel de filtro
-8 frascos com fucsina diluida
-8 frascos com:
-Fucsina fenicada (Zhiel)
-Alcool etilico 95%
-Ácido sulfúrico 25-30%
-Azul de metileno
-20 ansas com algodão em mecha

Estirpes bacterianas em BHI

-Klebsiella pneumoniae
-Mycobacterium smegmatis

3ªAULA

-Observação de colorações de esporos e flagelos

-Exame a fresco e coloração de Gram

3ªSEMANA
1ªAULA

Cultura de bactérias (teórico-prática)

-Meios de cultura
a.Tipos de meios e a sua constituição
b.Técnicas de preparação

-Técnicas de inoculação para isolamento bacteriano

-Caracteristicas macroscópicas das colónias bacterianas

2ªAULA

-Demonstração das técnicas de preparação de meios de cultura

-Inoculação de meios de cultura sólidos
a.Meio de Gelose -Tripticase-Soja
b.Meio de Drigalsky
c.Meio de Chapman
d.Meio de Gelose Chocolate
e.Meio Manitol mobilidade

MATERIAL:

-30 ansas de Henle

-30 zaragatoas
-1 caixa de pipetas Pasteur de vidro

POR GRUPO (grupos de 4 alunos) (por turma/6 grupos)

-1 placa de GTS,Drigalsky,Chapman e Gelose Chocolate

-2 tubos de Manitol Mobilidade
-1 tubo de BHI com:
-Escherichia coli
-Proteus mirabilis
-Staphylococcus epidermidis

3ªAULA

-Leitura das inoculações executadas na aula anterior

-Coloração de Gram a partir do meio sólido

MATERIAL:

-2 Tubos com A.D.E. ou S.F. por grupo

-Reagentes para a coloração de Gram
4ªSEMANA
1ªAULA (Teórico-prática)

-Genética bacteriana
-Transferência de AND plasmidico entre bactérias por transformação

2ªAULA

-Transformação de E.coli por AND pasmidico (pSK29)

MATERIAL

-Bactérias competentes (E.coli DH5α)

-Plasmidio pUC19 (solução a 200ng/ul de plasmidio purificado)
-Banho a 42ºC
-Gelo
-Suportes de eppendorfs em esferovite
-Micropipetas automáticas p20,p100-200 e p1000/ 3 de cada
-Pontas estéreis para as micropipetas (pontas amarelas e azuis)

Por grupo (cd/ com 4 alunos):

-Meio de cultura liquido sem ampicilina (BHI) em 10 tubos de vidro,cada com 5 ml

-Meio de cultura sólido (TSA) com ampicilina /100 placas
-Frascos de 20ml de etanol (2 por grupo)
-Pipetas Pasteur (2 por grupo)

3ªAULA

-Determinação da eficiência da transformação.

5ªSEMANA
1ªAULA (Teórico-prática)

-Controlo dos microorganismos por agentes quimicos

a)Determinação da sensibilidade bacteriana aos antibióticos
-Revisão dos diferentes métodos
-Execução,leitura e interpretação de um antibiograma

b)Efeitos dos agentes quimicos nas bactérias;desinfectantes.

2ªAULA
MATERIAL:

-1 caixa de pipetas Pasteur de vidro

-1 aparelho de medição da escala de McFarland
-3 aplicadores de discos de antibióticos
-3 micropipetas de 500ul e de 100ul
-2 caixas de pontas estereis azuis e amarelas
-1litro de hipoclorito de sódio
-1litro de glutaraldeido
-1 caixa de ATB Gnegativo (25galerias/25 meios)
-20 tubos de BHI com Pseudomonas
-20 tubos de BHI com Estafilococos
-20 tubos de BHI com E.coli
-Discos de antibióticos para Escherichia coli

-Amoxacilina
-Augmentin
-Gentamicina
-Netilmicina
-Furadantina
-Ác.nalidixico
-Norfloxacina
-Ciprofloxacina
-Cefuroxina
-Cefotaxina

-Discos de antibióticos para Pseudomonas aeruginosa

-Ticarcilina
-Piperacilina
-Imidazol
-Cefatazidima
-Tobramicina
-Gentamicina
-Netilmicina
-Colistina
-Ciprofloxacina

-Discos de antibióticos para Staphylococcus aureus

-Penicilina
-Kanamicina
-Gentamicina
-Tetraciclina
-Eritromicina
-Furadantina
-Vancomicina
-Amoxacilina
-Augmentin
Material por grupo (cd/com 2 alunos):

-1 placa de Mueller-Hinton
-1 tubo de hemólise com ADE
-1 placa de TSA (tripticase-soja-agar)

3ªAULA

-Leitura e interpretação dos antibiogramas

-Leitura sobre a acção dos desinfectantes

6ªSEMANA
1ªAULA

-Micologia;estudo dos fungos unicelulares e fungos filamentosos

-Inoculação do meio de Sabouraud com cloranfenicol

Material: (grupos de 2 alunos)

-1 placa de Sabouraud
-1tubo com Candida albicans
-1 tubo com Candida torulopsis
-1 tubo com Geotrichum sp.

2ªAULA

-Caracterização macroscópica
-Caracterização microscópica
-Exame a fresco com colorações simples (azul de metileno,azul de
lactofenol)
-Coloração de Gram
-Prova de filamentação em soro fresco
-Identificação bioquimica de fungos
-Auxonograma
-Zimograma
-Pesquisa de fungos na face interna da lingua

Material: (Por turma)

-3 caixas de laminas/lamelas
-10 xizatos
-30 ansas de Henle
-30 tubos de hemólise com soro humano fresco
-1 caixa de API 20C
-2 micropipetas de 500 e 1000ul
-Pontas azuis estéreis
-8 frascos de azul de metileno/azul de lactofenol
-8 frascos de cada reagente para a coloração de Gram
-15 tubos com Candida albicans
Candida tropicalis
Candida glabrata
Geotrichum sp.
-5 tubos com Penicillium sp.
Aspergillus sp.

-24 zaragatoas
-24 placas de meio de Sabouraud

3ªAULA

-Leitura e conclusão dos resultados obtidos

7ªSEMANA
1ªAULA

-Estudo bioquimico e metbólico de cocos de Gram positivo

-Provas bioquimicas para os Estafilococos
-Prova da fermentação do manitol
-Estudo das caracterisiticas hemoliticas
-Pesquisa de enzimas elaboradas como a catalase,coagulase,DNAse,fosfatase e
gelatinase
-Provas bioquimicas para os Estreptococos
-Estudo das caracterisiticas hemoliticas
-Estudo da sensibilidade a antibióticos (bacitracina e trimetroprim-sulfometoxazol)
-Prova da bilis-esculina
-Isolamento da pele do antebraço para meio de gelose sangue com zaragatoa embebida em
soro fisiológico.

Material necessário por grupo:

-1 placa de meio de Chapman

-1 placa de Gelose Sangue
-1 placa de D-cocccosel
-1 tubo com S.epidermidis
-1 tubo com S.aureus
-1 tubo com S.pyogenes
-1 tubo com Enterococcus faecalis

2ªAULA

Material necessário por turma:

-6 frascos de cada reagente para a coloração de Gram

-6 frascos com água oxigenada (10vol)
-1 caixa de pipetas Pasteur de vidro
-3 caixas de lâminas
-30 ansas de Henle
-1 API Strept.
-Micropipetas de 500 e 1000 ul (2 de cada)
-Pontas azuis estéreis
-Parafina liquida q.b.

Material necessário por grupo:

-2 placas de Gelose Sangue

-1 disco de bacitracina e SXT
-1 pinça
-1 tubo de hemólise com plasma de coelho
-1 placa com meio DNAse
-1 meio de fosfatase
-1 frasco com SF
-1 zaragatoa

3ªAULA

Material necessário por turma:

-4 frascos de HCL 1N
-8 frascos de cada reagente da coloração de Gram
-Reagentes de revelação de API Strept.

8ªSEMANA
1ªAULA

-Estudo bioquimico e metabólico de bactérias das familias Pseudomonaceae e

Enterobacteriaceae.
-Inoculação de meios selectivos e diferenciais
-Exame morfológico após coloração de Gram
-Provas do metabolismo glucidico
-Estudo da fermentação da lactose em meios diferenciais
 -Provas especificas dos produtos de degradação
a)Vermelho de metilo
b)Voges-Proskauer
-Pesquisa da β-galactosidase (teste ONPG)
-Estudo do metabolismo respiratório
-Pesquisa de citocromo-oxidase
-Prova da utilização de um subtracto especifico
-Utilização do citrato

Material necessário por grupo:

-2 meios de Drigalsky
-1 meio de TSA
-4 ansas de Henle
-Estirpes bacterianas:
-E.coli
-Klebiella oxytoca
-Salmonella
-Proteus mirabilis
-Proteus vulgaris
-Pseudomonas aeruginosa
-Enterobacter cloacae

2ªAULA

Material necessário por grupo:

-1 tubo de hemólise com ADE (2ml)

-1 tubo com meio de Kliger
-2 tubos com meio de Clark-Lubs
-1 placa com Citrato de Simmons
-1 disco de ONPG
-1 ansa
-1 lamina/lamela
-1 disco de Oxidase
-1 pipeta Pasteur de vidro

3ªAULA

Material necessário por turma:

-3 frascos com vermelho de metilo

-3 frascos com solução VP1
-3 frascos com solução VP2

9ªSEMANA
1ªAULA

-Estudo bioquimico e metabólico dos bacilos Gram negativos

-Inoculação de meios selectivos e diferenciais
-Inoculação de meios combinados para a identificação de Enterobactérias
-Meio de Hajna-Kliger
-Exame morfológico após coloração de Gram
-Estudo do metabolismo respiratório
-Pesquisa de citocromo-oxidase
-Estudo do metabolismo proteico
-Pesquisa da Urease
-Pesquisa da triptofano desaminase
-Pesquisa do indol
-Utilização de micrométodos de leitura automatizados na identificação microbiana
-Galerias API (e similares)

Material necessário por grupo:

-2 meios de Drigalsky
-1 meio de TSA
-4 ansas de Henle
-Estirpes bacterianas:
-E.coli
-Klebiella oxytoca
-Salmonella
-Proteus mirabilis
-Proteus vulgaris
-Pseudomonas aeruginosa
-Enterobacter cloacae

2ºAULA

Material necessário por grupo:

-1 disco de oxidase
-1 pipeta Pasteur de vidro
-2 tubos com meio de Ureia-Indol
-1 tubo com meio de Hajna-Kliger
-1 API 10S
-Micropipetas de 500 e 1000ul e pontas respectivas
-1 frasco com parafina liquida
-1 lamina
-Reagentes para a coloração de Gram

3ªAULA
-Leitura e identificação das bactérias Gram negativas
-Elaboração de quadro com identificação bioquimica das bactérias Gram negativas

Material necessário por turma:

-3 frascos com reagente de Kovacks

-3 frascos com TDA

ESQUEMA DA AULA

2ªAULA

a.No meio de GTS inocular por espalhamento E.coli

-Pipeta Pasteur (espalhador)
-Tubo de BHI com E.coli

b.No meio de Drigalsky dividir em dois e inocular Proteus e E.coli

-Ansa de Henle

c.No meio de Chapman dividir em dois e inocular Staphylococcus e E.coli

-Ansa de Henle

d.Na Gelose Chocolate dividir em três e inocular com zaragatoa E.coli,Proteus e

Estafilococos.

e.Nos tubos de Manitol mobilidade com ansa de Henle por picada central inocular
Estafilococos e Proteus

3ªAula

-Leitura dos meios

-No meio de Drigalsky:estudo da fermentação da lactose
-No meio de Chapman: estudo da fermentação do manitol

a.Com ansa de Henle retirar 3-4 colónias

a.1-do meio de Chapman e suspender em SF ou BHI
a.2-do meio de Drigalsky

b.Tirar 4-5 gotas para lâmina e fazer esfregaço,utilizar a coloração de Gram

Ficha para preparação da aula:
1ºdia

Dividir o meio de Sabouraud em 3,em cada parcela inocular Candida albicans

Candida tropicalis
Geotrichum sp.

Incubar 24-48h/37ºC

2ºdia

a)Executar a prova de filamentação em soro fresco

Em 2 tubos com soro fresco inocular em cada Candida albicans e Candida
tropicalis
b)Executar o exame a fresco com azul de lactofenol
-Candida albicans
-Geotrichum sp.
c)Coloração de Gram a partir do Sabouraud de Candida sp. e Geotrichum sp.
d)Exame a fresco com azul de lactofenol para Penicillium e/ou Aspergillus
e)Demonstração em cada turma da realização do API 20C para Candida albicans e
Candida tropicalis
f)Cada 4 alunos -pesquisa de fungos na face interna da lingua
Lista de antibióticos necessários :

-Discos de antibióticos para Escherichia coli

-Amoxacilina
-Augmentin
-Gentamicina
-Netilmicina
-Furadantina
-Ác.nalidixico
-Norfloxacina
-Ciprofloxacina
-Cefuroxina
-Cefotaxina

-Discos de antibióticos para Pseudomonas aeruginosa

-Ticarcilina
-Piperacilina
-Imidazol
-Cefatazidima
-Tobramicina
-Gentamicina
-Netilmicina
-Colistina
-Ciprofloxacina

-Discos de antibióticos para Staphylococcus aureus

-Penicilina
-Kanamicina
-Gentamicina
-Tetraciclina
-Eritromicina
-Furadantina
-Vancomicina
-Amoxacilina
-Augmentin
Estirpes bacterianas e micológicas:
-Klebsiella pneumoniae
-Mycobacterium smegmatis
-Escherichia coli
-Klebsiella oxytoca
-Salmonella sp.
-Proteus mirabilis
-Proteus vulgaris
-Pseudomonas aeruginosa
-Enterobacter cloacae
-Staphylococcus epidermidis
-Staphylococcus aureus
-Streptococcus pyogenes
-Enterococcus faecalis
-Candida albicans
-Candida tropicalis
-Candida glabrata
-Candida torulopsis
-Geotrichum sp.
-Penicillium sp.
-Aspergillus sp.
1ªe 2ªSEMANA
-Apresentação
-Noções de comportamento laboratorial
a.Assépsia
b.Precauções na manipulação de produtos contaminados
-Estudo da célula bacteriana por microscopia óptica
a.Exame a fresco
-estudo da mobilidade
-estudo da morfologia
b.Exame após coloração
b.1-Tipos de corantes e coloração usados em microbiologia
b.2-Colorações simples pelo azul de metileno
b.3-Coloração diferencial de Gram
b.4-Colorações especiais
b.4.1.-Coloração de cápsula
b.4.2.-Coloração de esporos
b.4.3.-Coloração de flagelos
b.4.4.-Coloração de micobactérias pela técnica de Ziehl-Neelson

3ªSEMANA
Cultura de bactérias
-Meios de cultura
a.Tipos de meios e a sua constituição
b.Técnicas de preparação
-Técnicas de inoculação para isolamento bacteriano
-Caracteristicas macroscópicas das colónias bacterianas
-Demonstração das técnicas de preparação de meios de cultura
-Inoculação de meios de cultura sólidos
a.Meio de Gelose -Tripticase-Soja
b.Meio de Drigalsky
c.Meio de Chapman
d.Meio de Gelose Chocolate
e.Meio Manitol mobilidade

4ªSEMANA
-Genética bacteriana
-Transferência de AND plasmidico entre bactérias por transformação
-Transformação de E.coli por AND pasmidico (pSK29)
-Determinação da eficiência da transformação.
5ªSEMANA
-Controlo dos microorganismos por agentes quimicos

a)Determinação da sensibilidade bacteriana aos antibióticos

-Revisão dos diferentes métodos
-Execução,leitura e interpretação de um antibiograma
b)Efeitos dos agentes quimicos nas bactérias;desinfectantes.

6ªSEMANA
-Micologia;estudo dos fungos unicelulares e fungos filamentosos
-Inoculação do meio de Sabouraud com cloranfenicol
-Caracterização macroscópica
-Caracterização microscópica
-Exame a fresco com colorações simples (azul de metileno,azul de
lactofenol)
-Coloração de Gram
-Prova de filamentação em soro fresco
-Identificação bioquimica de fungos
-Auxonograma
-Zimograma
-Pesquisa de fungos na face interna da lingua

7ªSEMANA
-Estudo bioquimico e metabólico de cocos de Gram positivo
-Provas bioquimicas para os Estafilococos
-Prova da fermentação do manitol
-Estudo das caracterisiticas hemoliticas
-Pesquisa de enzimas elaboradas como a catalase,coagulase,DNAse,fosfatase e
gelatinase
-Provas bioquimicas para os Estreptococos
-Estudo das caracterisiticas hemoliticas
-Estudo da sensibilidade a antibióticos (bacitracina e trimetroprim-sulfometoxazol)
-Prova da bilis-esculina
-Isolamento da pele do antebraço para meio de gelose sangue com zaragatoa embebida em
soro fisiológico.

8ªSEMANA
-Estudo bioquimico e metabólico de bactérias das familias Pseudomonaceae e
Enterobacteriaceae.
-Inoculação de meios selectivos e diferenciais
-Exame morfológico após coloração de Gram
-Provas do metabolismo glucidico
-Estudo da fermentação da lactose em meios diferenciais
-Provas especificas dos produtos de degradação
a)Vermelho de metilo
b)Voges-Proskauer
-Pesquisa da β-galactosidase (teste ONPG)
-Estudo do metabolismo respiratório
-Pesquisa de citocromo-oxidase
-Prova da utilização de um subtracto especifico
-Utilização do citrato

9ªSEMANA
-Estudo bioquimico e metabólico dos bacilos Gram negativos
-Inoculação de meios selectivos e diferenciais
-Inoculação de meios combinados para a identificação de Enterobactérias
-Meio de Hajna-Kliger
-Exame morfológico após coloração de Gram
-Estudo do metabolismo respiratório
-Pesquisa de citocromo-oxidase
-Estudo do metabolismo proteico
-Pesquisa da Urease
-Pesquisa da triptofano desaminase
-Pesquisa do indol
-Utilização de micrométodos de leitura automatizados na identificação microbiana
-Galerias API (e similares)

10ªSEMANA
-Avaliação

Bibliografia Aconselhada:

Brisou,J.Techniques d’Enzymologie Bactériene. 1971 Masson & Cie.

Buttiaux,R.,H. Beerens and A.Tacquet.Manuel de Techniques Bacteriológiques. 4ªEdition

1974 Flammarion Médécine-Sciences.

Harley,J.P., and L.M. Prescott.Laboratory Exercises in Microbiology. 2nd Edition.

1993.W.C. Brown.

Larone,D.H.Medically Important Fungi. A Guide to Identification.3rd Edition.

1995.American Society for Microbiolgy Press.
INSTITUTO SUPERIOR CIÊNCIAS DA SAÚDE SUL
CURSO DE MEDICINA DENTÁRIA
Microbiologia Oral
 2ºAno/2ºSemestre
Ano lectivo 00/01

Regente:Dr.Samuel Llobet
Assistente:Dra.Teresa Nascimento

Material necessário para as aulas práticas de Microbiologia Oral:

Previsão para 100 alunos:

- Lâminas/lamelas
-Cristal Violeta (8 frascos)
-Lugol (8 frascos)
-Alcool-acetona (8 frascos)
-Fucsina diluida (8 frascos)
-Zaragatoas (200)
-Meio de transporte:
- Meio VMGA III (anaerobic)
- Meio Mitis-Salivarius-Agar
- Meio Mitis-Salivarius-Bacitracina-Agar
- Bacitracina (5g) Ref: 106992 (Merck)
- Cultura pura de Estreptocos B-hemolíticos e Estafilococos em gelose sangue.
- 1 Slidex Strepto Kit (teste latex) Ref: 58810 bioMérieux
- 2 caixas de Galerias API 20 Strep Ref: 200600 bioMérieux
- 40 tubos de ensaio com 0.5ml de SF
- 40 tubos de ensaio com 1ml de BHI
- 50 tubos de hemólise com 2ml de SF
- 6 micropipetas de 100 e 1000µl
- Pontas amarelas e azuis estéreis
- 2 caixas de Dentocult SM Medicinália
- 1 caixa de Dentocult LB Medicinália
- 25 recipientes para recolha de saliva
- 25 tubos com 1ml/cd de solução 0.005 N de HCl
- Papel indicador de pH
- 25 Comprimidos de parafina
- 6 espalhadores de vidro
- 25 ansas calibradas de 10µl
- 3 Vortex
- Placa rotativa de aquecimento (35-37ºC)
- Meio API 20 A (25 x 6 ml) Ref: 20320 bioMérieux
- 25 galerias API 20 A Ref: 20300 bioMérieux
- 1 ampola Ehrlich Ref: 70520 bioMérieux
- XYL (xileno) Ref: 70530 bioMérieux
- BCP (púrpura de bromocresol) Ref: 70510 bioMérieux
- GENbox anaer (10 geradores) Ref: 96124 bioMérieux
- GENbox CO2 (10 geradores) Ref: 96126 bioMérieux
- ID32 A Ref: 32300 bioMérieux
- Suspension Medium Ref: 70700 bioMérieux
- 2 caixas de ATB ANA (10gal + 10 amp.) Ref:14269 bioMérieux
- - Anaerobic Blood Agar Base acc. to CDC (500g) Ref: 116331.0500
(Merck)
- Vitamina K1 (1g) Ref: 5.01890.0001 (Merck)
- Etanol (1l) Ref: 1.00983.1000 (Merck)
- hemina
- Sangue desfibrinado de carneiro (50 ml)
- Brucella Blood Agar
- TSBV (tripticase-soja-bacitracina-vancomicina)
- Lâmpada de UV
- H2O2 a 10 volumes
- Discos de oxidase
- Lupas q.b.
- Óleo de parafina (6 frascos)
- Densitómetro (escala de Mc Farland)
- Reagentes de revelação para as galerias API 20 A e ID32 A
- Livros de sequenciação numérica para identificação do API 20A
- PerioScan Card (BANA test) Oral-B
- Estirpes ATCC
Porphyromonas gingivalis ATCC 33277
Prevotella intermedia ATCC 25611
Bacteroides forsythus ATCC 29522
Actinobacillus actinomycetemcomitans ATCC 43037