Una molcula expuesta a un campo electromagntico absorber la energa en cantidades discretas, llamado cuantos, si ambos la condicin de resonancia y las

normas de seleccin de la mecnica cuntica transicin estn satisfechos. Asimismo, la emisin de un fotn a travs de fluorescencia o fosforescencia tambin se mide en trminos de los cuantos. La energa de un cuanto (Ley Plack) Aunque la clorofila absorbe mucho en rojo y en azul, la fluorescencia ocurre esencialmente toda en la regin roja. Esto es porque el estado ms excitado de la clorofila, que es en la regin del azul es extremadamente inestable, y baja al estado excitado ms bajo en aproximadamente 10-12 seg, es decir, antes que alguna emisin lumnica pueda ocurrir. El proceso de fluorescencia se rige por tres importantes acontecimientos. La primera es la excitacin electrnica de una molcula por una foto de entrada, que sucede en femtosegundos, esto es seguido por la relajacin vibracional en el estado excitado, con lo que la molcula al nivel ms bajo de vibracin del estado excitado. Este fenmeno se puede medir en picosegundos. El proceso final es la emisin de una foto de longitud de onda ms larga y el retorno de la molcula al estado fundamental, que se produce en un perodo relativamente largo de nanosegundos Es entonces debido a la rpida degradacin de energa por la transicin no radiactiva que se produce en la zona azul, que los fotones absorbidos en esa regin, son menos efectivos para la fotosntesis, que los absorbidos en la regin roja. Dicho en otras palabras, la energa de los fotones absorbidos en la regin roja, son emitidos como fluorescencia, cuando se produce una transicin radiactiva. Cuando la transicin es no radiactiva en esa zona (la roja), el electrn excitado entra en el sistema de "trampa", y se emplea para reducir al NADP. Por lo tanto, el fenmeno de fluorescencia est asociado con una transicin no radiactiva de un fotn absorbido en la zona del rojo, y se manifiesta como una luz emitida a una longitud de onda levemente mayor (energa por lo tanto, menor) que la de la banda de absorcin de la clorofila. La longitud de onda para la fluorescencia ocurre entre 662 y 728 nm. Se puede observar la fluorescencia roja de la clorofila acompaando la absorcin de luz, si iluminamos una hoja con luz de longitud de onda ms corta que la de la fluorescencia (por ejemplo, de 600 nm), en una habitacin oscura. Con un microscopio claro, podemos ver la fluorescencia roja emanando de cloroplastos individuales en las clulas de las hojas cuando usamos esa luz excitante. Rendimiento cuntico (a veces incorrectamente llamada eficiencia cuntica) es un indicador para medir la eficacia de la emisin fluorescente en relacin con todas las vas posibles para la relajacin, y se expresa generalmente como la relacin (adimensional) de fotones emitidos por el nmero de fotos absorbido. En otras palabras, el rendimiento cuntico representa la probabilidad de que un fluorocromo dado emocionados producir una foto emitida (fluorescencia). Molculas de fluorescencia comnmente empleados como sondas en microscopa tienen rendimientos cunticos que van desde muy bajo

(0.05 o menos) a casi la unidad (la ms brillante fluorforos). En general, un rendimiento cuntico altura es deseable en la mayora de aplicaciones de imgenes.