Patrick McCrystal

Zelluläre Atmung: Von O2 zu CO2

Zweck:
Dieses Labor lieferte Einblicke in den Prozess der Zellatmung und wie er durch die
Temperatur sowohl bei keimenden als auch bei ruhenden Erbsensamen beeinflusst wird. Die
Zellatmung ist ein ATP-produzierender kataboler Prozess, bei dem der Elektronenempfänger ein
anorganisches Molekül ist. Es ist die Freisetzung von Energie aus organischen Verbindungen
durch chemische Oxidation in den Mitochondrien innerhalb jeder Zelle. Kohlenhydrate, Proteine
und Fette können alle metabolisiert werden, aber die Zellatmung beinhaltet normalerweise
Glukose: C6H12O6 + 6O → 2 6CO 2 + 6H2O + 686 kcal Energie/Mol oxidierte Glukose. Die
Zellatmung umfasst die Glykolyse, den Krebszyklus und die Elektronentransportkette. Die
Glykolyse ist ein kataboler Weg, der im Zytosol auftritt und Glukose teilweise zu zwei
Pyruvaten (3-C) oxidiert. Der Krebszyklus findet in den Mitochondrien statt und zerlegt ein
Pyruvat (Acetyl-CoA) in Kohlendioxid. Diese beiden Zyklen produzieren beide eine kleine
Menge ATP durch Phosphorylierung auf Substratebene und NADH durch Übertragung von
Elektronen vom Substrat auf NAD+. Der Krebs-Zyklus produziert auch FADH2, indem er
Elektronen auf FAD überträgt. Die Elektronentransportkette befindet sich an der inneren
Membran der Mitochondrien und nimmt angeregte Elektronen von Enzymen auf, die während
der Glykolyse und des Krebszyklus gesammelt werden, und koppelt diesen exergonischen
Elektronenschlitten an die ATP-Synthese oder oxidative Phosphorylierung. Dieser Prozess
produziert den größten Teil des ATP. Die Zellatmung kann auf zwei Arten gemessen werden:
der Verbrauch von O2 (wie viele Mol O2 werden bei der Zellatmung verbraucht) und die
Produktion von CO2 (wie viele Mol CO2 werden bei der Zellatmung produziert). PV = nRT ist
die Formel für das Inertgasgesetz, wobei P der Druck des Gases, V das Volumen des Gases, n
die Anzahl der Gasmoleküle, R die Gaskonstante und T die Temperatur des Gases in Grad K ist.
Dieses Gesetz zeigt mehrere wichtige Dinge über Gase. Wenn Temperatur und Druck konstant
gehalten werden, ist das Volumen des Gases direkt proportional zur Anzahl der Moleküle des
Gases. Wenn Temperatur und Volumen konstant bleiben, ändert sich der Druck des Gases direkt
proportional zur Anzahl der Gasmoleküle. Bleiben die Anzahl der Gasmoleküle und die
Temperatur konstant, so ist der Druck umgekehrt proportional zum Volumen. Wenn sich die
Temperatur ändert und die Anzahl der Gasmoleküle konstant gehalten wird, ändert sich entweder
der Druck oder das Volumen oder beides in direktem Verhältnis zur Temperatur.

Methoden:
Während des Labors haben wir sowohl eine Raumtemperatur als auch ein 10oC
Wasserbad vorbereitet. Dann füllten wir einen 50-ml-Messzylinder auf halbem Weg mit Wasser.
Wir fügten 25 keimende Erbsen hinzu und bestimmten die verdrängte Wassermenge. Dann
entfernten wir die Erbsen, legten sie auf ein Papiertuch, füllten den Messzylinder nach und
fügten dem Messzylinder Glasperlen hinzu, bis das Volumen dem der expandierten keimenden
Erbsen entsprach. Wir entfernten die Perlen, füllten den Messzylinder nach, füllten 25 nicht
keimende Erbsen und fügten dann weitere Glasperlen hinzu, bis das Volumen wieder dem
Volumen der keimenden Erbsen entsprach. Nach allem, was getan wurde, bereiteten wir einen
weiteren Satz Erbsen und Perlen für die letzten 3 Respirometer vor. Die Montage der
Respirometer war der nächste Schritt. Wir haben 6 Fläschchen, Stopfen und graduierte Pipetten
erhalten. Dann legten wir ein Bündel saugfähiger Baumwolle in den Boden jeder
Durchstechflasche und sättigten die Baumwolle mit einer Pipette mit etwa 2-3 ml 15 % iger
 KOH. Wir haben dann eine Schicht aus nicht saugfähiger Baumwolle auf die mit KOH getränkte
Baumwolle gelegt, um die Erbsen vor der KOH zu schützen. Wir legten den ersten Satz von
keimenden Erbsen, trockenen Erbsen und Perlen und Perlen allein in die Fläschchen 1, 2 und 3
und den zweiten Satz in die Fläschchen 4, 5 und 6 und legten dann die Stopfen in jedes
Fläschchen. Wir haben Schlingen aus Abdeckband hergestellt, um die Pipetten für die 10-
minütige Äquilibrierungszeit aus dem Wasser zu halten, und die Fläschchen darauf gelegt (1, 2
und 3 im Raumtemperaturbad, 4, 5 und 6 im 10o C-Bad). Der Zeitraum von 10 Minuten war
notwendig, um sicherzustellen, dass ein Temperaturunterschied zwischen der Luft in der
Durchstechflasche und dem Wasser unsere Ergebnisse nicht verzerren würde. Sobald die
Ampullen richtig eingestellt waren, senkten wir sie ins Wasser. Zum Glück stürzte das Wasser
nicht in das Respirometer, was auf ein Leck hingewiesen hätte. Wir haben dann den Messwert
auf der Pipette zu festgelegten Zeiträumen aufgezeichnet.

Ergebnisse:

Messung des O2 -Verbrauchs durch eingeweichte und trockene Erbsensamen bei

Raumtemperatur und 10˚C

Tatsäc Perlen allein Keimende Erbsen Erbsen und Perlen

hliche Lesen Lesen Lesen
Zeit
Tempe zum zum Korrigierte zum Korrigierte
(Min) Diff. Diff. Diff.
ratur Zeitpunkt Zeitpunk Diff.∆ Zeitpunk Diff.∆
(oC) X tX tX

Initial-
21 .87 .9 .89
0

0-5 20 .9 -.03 .79 .11 .14 .9 -.01 .02

0-10 20 .9 -.03 .7 .2 .23 .89 0 .03

0-15 20 .87 0 .62 .28 .28 .89 0 0

-20 20 .86 .01 .5 .4 .49 .89 0 -.01

Initial-
9 .86 .85 .89
0

0-5 10 .84 .02 .79 .06 .04 .87 .02 0

0-10 10 .85 .01 .74 .11 .1 .9 -.01 -.02

0-15 10 .87 .01 .69 .16 .17 .92 -.03 -.02

0-20 10 .89 -.03 .65 .2 .23 .95 -.06 -.03

 Oxygen Comsumption of Germinating Peas, Non -
Germinating Peas, and Glass Beads at 20˚C and
10˚C
Beads Alone 20˚

1
Germinating Peas
0.8 20˚
Consumption

Dry Peas and Beads

Oxygen

0.6
20˚
0.4
Beads Alone 10˚
0.2
0 Germinating Peas
0 0-5 0-10 0-15 -20 10˚
Time Dry Peas and Beads
10˚
Es war notwendig, den Messwert der Erbsen mit dem Messwert der Perlen zu
vergleichen, da die Perlen als Kontrollvariable dienten und die Perlen daher keine
Änderung des Gasvolumens erfuhren. Keimende Samen haben eine höhere
Stoffwechselrate und benötigen mehr Sauerstoff für Wachstum und Überleben. Nicht
keimende Erbsen, obwohl lebendig, müssen viel weniger Sauerstoff verbrauchen, um zu
überleben. Die KOH absorbierte das Kohlendioxid und veranlasste es, einen
Niederschlag am Boden der Durchstechflasche zu bilden, wodurch verhindert wurde,
dass sich der Druck in der Durchstechflasche änderte. Als die Erbsen einer Zellatmung
unterzogen wurden, verbrauchten sie Sauerstoff und setzten Kohlendioxid frei, das mit
dem KOH in der Ampulle reagierte, was zu einer Abnahme des Gases in der Pipette
führte. Das Wasser bewegte sich in die Pipette, weil der Druck in der Pipette abnahm.

Berechnungen:

Berechnunge
Bedingung Rate in ml O2/ Minute
n

(0,85-0,65)
Keimende Erbsen/ 10 oC .01
20 Min.
 (0.9-0.5)
Keimende Erbsen/ 20 oC .02
20 Min.

(0,89-0,95)
Erbsen trocken/ 10 oC -.003
20 Min.

(0,89-0,89)
Erbsen trocken/ 20 oC 0
20 Min.
Fazit:
Das Labor zeigte viele wichtige Dinge in Bezug auf die Zellatmung. Es zeigte sich, dass
die Zellatmungsraten bei keimenden Erbsen höher sind als bei nicht keimenden Erbsen. Es zeigte
sich auch, dass Temperatur und Atemfrequenz direkt proportional sind; mit steigender
Temperatur steigt auch die Atemfrequenz. Aufgrund dieser Tatsache zeigten die Respirometer,
die bei 10 °C im Wasser platziert wurden, eine geringere Zellatmungsrate als die Respirometer,
die im Wasser mit Raumtemperatur platziert wurden. Die nicht keimenden Erbsen verbrauchten
weit weniger Sauerstoff als die keimenden Erbsen. Dies liegt daran, dass, obwohl keimende und
nicht keimende Erbsen beide am Leben sind, keimende Erbsen eine größere Menge an Sauerstoff
verbrauchen müssen, damit das Saatgut weiter wächst und überlebt. Im Labor wurde während
der Zellatmung gebildetes CO2 durch das Kaliumhydroxid (KOH) entfernt und erzeugte
Kaliumcarbonat (K2CO3). Es war notwendig, dass das Kohlendioxid entfernt wurde, damit die
Änderung des Gasvolumens im Respirometer direkt proportional zur verbrauchten
Sauerstoffmenge war. Das Ergebnis war eine Abnahme des Gasvolumens innerhalb des Rohrs
und eine damit verbundene Abnahme des Drucks im Rohr. Das Respirometer mit nur den
Glasperlen diente als Kontrollgruppe, die sich keiner Zellatmung unterzog. Im gesamten Labor
könnten zahlreiche Fehler aufgetreten sein. Die Temperatur der Bäder könnte schwanken, was
die Temperatur in den Fläschchen verändern würde. Die Mengen an Erbsen, Perlen, KOH und
Baumwolle können von Ampulle zu Ampulle variieren. Möglicherweise wurde Luft über einen
undichten Stopfen oder eine schlecht abgedichtete Pipette in die Durchstechflasche gelangen
lassen. Die Fläschchen sind möglicherweise nicht richtig ausgeglichen, und die Schüler hätten
die Pipetten entweder zu früh oder zu spät lesen können. Möglicherweise haben die Schüler
Pipetten falsch gelesen. KOH könnte mit den Seiten der Fläschchen in Kontakt gekommen sein,
als es auf die Baumwolle fiel. Beim Ausfüllen der Tabelle können mathematische
Ungenauigkeiten aufgetreten sein.