Patrick McCrystal

Respiração celular: de O 2 a CO2

Propósito:
Este laboratório forneceu informações sobre o processo de respiração celular e como ele
é afetado pela temperatura em sementes de ervilha germinantes e dormentes. A respiração celular
é um processo catabólico produtor de ATP no qual o receptor de elétrons é uma molécula
inorgânica. É a liberação de energia de compostos orgânicos por oxidação química nas
mitocôndrias dentro de cada célula. Carboidratos, proteínas e gorduras podem ser metabolizados,
mas a respiração celular geralmente envolve glicose: C 6 H12O 6 + 6O 2 → 6CO 2 +6H 2O + 686
Kcal de energia/mol de glicose oxidada. A respiração celular envolve glicólise, ciclo de Krebs e
cadeia de transporte de elétrons. A glicólise é uma via catabólica que ocorre no citosol e oxida
parcialmente a glicose em dois piruvatos (3-C). O ciclo de Krebs ocorre nas mitocôndrias e
quebra um piruvato (acetil-CoA) em dióxido de carbono. Esses dois ciclos produzem uma
pequena quantidade de ATP por fosforilação em nível de substrato e NADH por transferência de
elétrons do substrato para NAD+. O ciclo de Krebs também produz FADH2 transferindo elétrons
para FAD. A cadeia de transporte de elétrons está localizada na membrana interna da
mitocôndria e aceita elétrons energizados de enzimas que são coletadas durante a glicólise e o
ciclo de Krebs, e acopla essa lâmina exergônica de elétrons à síntese de ATP ou fosforilação
oxidativa. Este processo produz a maior parte do ATP. A respiração celular pode ser medida de
duas maneiras: o consumo de O 2 (quantos moles de O 2 são consumidos na respiração celular) e
a produção de CO 2 (quantos moles de CO 2 são produzidos na respiração celular). PV = nRT é a
fórmula para a lei dos gases inertes, onde P é a pressão do gás, V é o volume do gás, n é o
número de moléculas de gás, R é a constante do gás e T é a temperatura do gás em graus K. Essa
lei mostra várias coisas importantes sobre os gases. Se a temperatura e a pressão são mantidas
constantes, então o volume do gás é diretamente proporcional ao número de moléculas do gás.
Se a temperatura e o volume permanecerem constantes, então a pressão do gás muda em
proporção direta ao número de moléculas de gás. Se o número de moléculas de gás e a
temperatura permanecerem constantes, então a pressão é inversamente proporcional ao volume.
Se a temperatura muda e o número de moléculas de gás é mantido constante, então a pressão ou
o volume ou ambos mudarão em proporção direta à temperatura.

Métodos:
Durante o laboratório, preparamos uma temperatura ambiente e um banho-maria de 10 oC.
Em seguida, enchemos um cilindro graduado de 50 mL na metade do caminho com água. Foram
adicionadas 25 ervilhas germinantes e determinada a quantidade de água deslocada. Em seguida,
retiramos as ervilhas, colocamos em um papel toalha, enchemos novamente o cilindro graduado
e adicionamos contas de vidro ao cilindro graduado até que o volume fosse equivalente ao das
ervilhas germinantes expandidas. Retiramos as contas, reenchemos o cilindro graduado,
adicionamos 25 ervilhas não germinantes e, em seguida, adicionamos mais contas de vidro até
que o volume fosse novamente igual ao volume das ervilhas germinantes. Depois de tudo o que
foi feito, preparamos outro conjunto de ervilhas e contas para os últimos 3 respirômetros. A
montagem dos respirômetros foi o próximo passo. Foram obtidos 6 frascos, rolhas e pipetas
graduadas. Em seguida, colocamos um maço de algodão absorvente no fundo de cada frasco e,
usando uma pipeta, saturamos o algodão com cerca de 2-3 mL de KOH a 15%. Em seguida,
colocamos uma camada de algodão não absorvente sobre o algodão embebido em KOH para
proteger as ervilhas do KOH. O primeiro conjunto de ervilhas germinantes, ervilhas secas e
 contas e contas isoladamente nos frascos 1, 2 e 3, e o segundo conjunto nos frascos 4, 5 e 6, em
seguida, as rolhas em cada frasco. Fizemos slings com fita adesiva para manter as pipetas fora da
água durante o período de equilíbrio de 10 minutos e colocamos os frascos sobre elas (1, 2 e 3 no
banho à temperatura ambiente, 4, 5 e 6 no banho de 10oC). O período de 10 minutos foi
necessário para garantir que uma diferença de temperatura entre o ar no frasco e a água não
distorcesse nossos resultados. Uma vez que os frascos foram devidamente ajustados, nós os
baixamos na água. Felizmente, a água não correu para o respirômetro, o que teria indicado um
vazamento. Em seguida, registramos a leitura na pipeta em períodos de tempo definidos.

Resultados:

Medição do consumo de O2 por sementes de ervilha embebidas e secas à temperatura

ambiente e 10°C

Contas sozinhas Germinando ervilhas Ervilhas e contas secas

Temp
Tempo Leitura Leitura Leitura
real Corrigido Corrigido
(Min) no tempo Diff. no Diff. no Diff.
(oC) Diff.∆ Diff.∆
X tempo X tempo X

Inicial-
21 .87 .9 .89
0

0-5 20 .9 -.03 .79 .11 .14 .9 -.01 .02

0-10 20 .9 -.03 .7 .2 .23 .89 0 .03

0-15 20 .87 0 .62 .28 .28 .89 0 0

-20 20 .86 .01 .5 .4 .49 .89 0 -.01

Inicial-
9 .86 .85 .89
0

0-5 10 .84 .02 .79 .06 .04 .87 .02 0

0-10 10 .85 .01 .74 .11 .1 .9 -.01 -.02

0-15 10 .87 .01 .69 .16 .17 .92 -.03 -.02

0-20 10 .89 -.03 .65 .2 .23 .95 -.06 -.03

 Oxygen Comsumption of Germinating Peas, Non -
Germinating Peas, and Glass Beads at 20˚C and
10˚C
Beads Alone 20˚

1
Germinating Peas
0.8 20˚
Consumption

Dry Peas and Beads

Oxygen

0.6
20˚
0.4
Beads Alone 10˚
0.2
0 Germinating Peas
0 0-5 0-10 0-15 -20 10˚
Time Dry Peas and Beads
10˚
Foi necessário comparar a leitura das ervilhas com a leitura das contas, pois as
contas serviram como variável de controle, portanto, as contas não sofreram alteração no
volume de gás. Sementes em germinação apresentam maior taxa metabólica e necessitam
de mais oxigênio para crescimento e sobrevivência. As ervilhas não germinantes, embora
vivas, precisam consumir muito menos oxigênio para sobreviver. O KOH absorveu o
dióxido de carbono e fez com que ele formasse um precipitado no fundo do frasco,
impedindo que ele alterasse a pressão no frasco. Quando as ervilhas foram submetidas à
respiração celular, elas consumiram oxigênio e liberaram dióxido de carbono, que reagiu
com o KOH no frasco, resultando em uma diminuição do gás na pipeta. A água entrou na
pipeta porque a pressão na pipeta diminuiu.

Cálculos:

Condição Cálculos Taxa em mL Ø2/ minuto

Germinando ervilhas/ 10 (0,85-0,65)

o .01
C 20 min.

Germinando ervilhas/ 20 (0,9-0,5)

o .02
C 20 min.

Ervilhas secas/ 10 oC (0,89-0,95) -.003

 20 min.

(0,89-0,89)
Ervilhas secas/ 20 oC 0
20 min.
Conclusão:
O laboratório demonstrou muitas coisas importantes relacionadas à respiração celular.
Mostrou que as taxas de respiração celular são maiores em ervilhas germinantes do que em
ervilhas não germinantes. Também mostrou que as taxas de temperatura e respiração são
diretamente proporcionais; À medida que a temperatura aumenta, as taxas de respiração também
aumentam. Devido a esse fato, os respirômetros colocados na água a 10 oC apresentaram uma
taxa de respiração celular menor do que os respirômetros colocados na água à temperatura
ambiente. As ervilhas não germinantes consumiram muito menos oxigênio do que as ervilhas em
germinação. Isso porque, embora ervilhas germinantes e não germinadoras estejam vivas, as
ervilhas germinadas requerem uma quantidade maior de oxigênio para serem consumidas para
que a semente continue a crescer e sobreviver. Em laboratório, o CO 2 produzido durante a
respiração celular foi removido pelo hidróxido de potássio (KOH) e criado carbonato de potássio
(K2CO3). Foi necessário que o dióxido de carbono fosse removido para que a mudança no
volume de gás no respirômetro fosse diretamente proporcional à quantidade de oxigênio
consumida. O resultado foi uma diminuição no volume de gás dentro do tubo e uma diminuição
relacionada na pressão no tubo. O respirômetro apenas com as esferas de vidro serviu como
grupo controle que não foi submetido à respiração celular. Inúmeros erros podem ter ocorrido em
todo o laboratório. A temperatura dos banhos pode ter flutuado, o que mudaria a temperatura nos
frascos. As quantidades de ervilhas, miçangas, KOH e algodão podem ter variado de frasco para
frasco. Pode ter sido permitido que o ar entrasse no frasco para injetáveis através de uma rolha
com fuga ou de uma pipeta mal selada. Os frascos podem não ter se equilibrado adequadamente,
e os alunos podem ter lido as pipetas cedo demais ou tarde demais. Os alunos podem ter lido
pipetas incorretamente. O KOH poderia ter entrado em contato com as laterais dos frascos
quando estava sendo jogado no algodão. Imprecisões matemáticas podem ter ocorrido ao
completar a tabela.