TECNICA DE DETERMINACIN DE CIDO ASCRBICO (VIT.

C) POR TITULACIN DIRECTA CON IODO Es una tcnica utilizada por Suntornsuk y colaboradores en 2002 en la cuantificacin de vitamina C en jugos y fruta fresca por titulacin directa con solucin de Iodo. Tambin es una tcnica volumtrica descrita en la USP XXIII, mediante titulacin de xido-reduccin en medio cido, utilizando como agente valorante la solucin 0.1 N de Iodo, con solucin de almidn como indicador. Este mtodo en comparacin con otros es un mtodo de titulacin directa que es barato, simple confiable y riguroso. No requiere de extraccin o pretratamiento en la muestra previo a la titulacin, as que el tiempo de anlisis es en menos de 5 min por muestra, permitiendo tantas como 12 titulaciones por hora. El cido Ascrbico acta como un fuerte agente reductor y en su oxidacin cede dos tomos de hidrgeno para transformarse en cido dihidroscrbico, que tambin tiene actividad de Vitamina C. La concentracin se determinar titulando con solucin de yodo 0.01 N 0.05 N. Ya que el cido Ascrbico tiene un doble enlace en su estructura, el yodo se fijar en los dobles enlaces de las molculas de cido ascrbico y consecuentemente el volumen de yodo gastado en la titulacin ser directamente proporcional a la concentracin de cido ascrbico

MATERIAL Y EQUIPO: Matraces Erlenmeyer 250 mL Bureta Soporte universal Perilla Pinzas de soporte Pipetas 5, 10 mL. Probeta 25, 50 mL. Esptula Vaso de precipitado Matraces aforados, 100, 250 y 1000 mL. Agitador magntico Pizeta Agitador de vidrio Licuadora

Vasos pequeos de licuadora Cedazo Balanza analtica Plancha de calentamiento y agitacin

REACTIVOS: cido sulfrico cido clorhdrico concentrado Hidrxido de sodio Almidn Trixido arsnico Yoduro de potasio (IK) Yodo resublimado (i2) cido ascrbico de 99% pureza Bicarbonato de sodio anhidro Rojo de metilo Etanol 95%

PREPARACIN DE SOLUCIONES Solucin de yodo al 0.05 N. Pesar 20 gr de yoduro de potasio (IK) y disolver en 50 mL de agua destilada, agregar 6.35 g de yodo resublimado (I2)), agitar hasta su completa disolucin. Pasar a un matraz aforado de 1 L y aforar hasta la marca con agua destilada. Vaciar en un frasco de vidrio mbar al abrigo de la luz. Dejar reposar 24 horas para lograr estabilizacin. Durante la preparacin se debe transferir inmediatamente el I2 despus de pesarlo a la disolucin de IK, debido a que pueden ocurrir prdidas por la volatilidad del I 2 tanto del slido como de la solucin. No dejar nunca la solucin en recipientes abiertos durante perodos prolongados. Indicador de almidn. Pesar 2 gr de almidn soluble y disolver con 250 mL de agua destilada, hervir durante 4 minutos agitando frecuentemente, dejar enfriar y pasar a un matraz volumtrico de un litro y se afora.

Solucin de NaOH al 10%. Pesar 10 gr de NaOH y diluir con 100 mL de agua destilada, agitando hasta su completa disolucin. Nota: En caso de prepararse la solucin de NaOH al 10% con solucin de NaOH 8 N. Se toman 31.25 mL de NaOH 8N y diluir en agua hasta completar los 100 mL como volumen total de la solucin. Solucin de HCl 1 N Se toman 16.7 mL de HCl y se pasa a un vaso de precipitado con 50 mL de agua donde se agrega lentamente con agitacin suave, pasar a un matraz volumtrico de 200 mL y se afora con el agua destilada. Solucin de H2SO4 2N. Medir cuidadosamente 54.34 ml de cido sulfrico concentrado, vaciar lentamente y con cuidado a un vaso de precipitado de 500 ml con 200 mL de agua y despus se agrega ms agua, tener precaucin debido a que provoca una reaccin exotrmica, despus se pasa a un matraz volumtrico de 1 L y aforar hasta la marca con agua. Rojo de metilo. Pesar 0.01 gr de rojo de metilo, disolver en 25 ml de etanol al 95% y 25 ml de agua destilada. VALORACIN DE LA SOLUCIN DE YODO. Pesar 0.0494 g de trixido de arsnico (anotar la cantidad real que se pesa), pasar a un matraz erlenmeyer, agregar 10 ml de NaOH al 10% y 3 gotas de rojo de metilo como indicador, agregar cuidadosamente HCl 1N gota a gota hasta obtener una coloracin rosa, para acidular. Despus agregar 2 g de bicarbonato de sodio, 40 ml de agua destilada, 2 ml de indicador de almidn y se realiza la titulacin con la solucin de yodo hasta la coloracin azul intenso. Esto se realiza por triplicado. El anhdro arsenioso reacciona con el iodo segn la reaccin reversible: AS2O3 + 2I2 + 2 H2O AS2O5 + 4HI

Para que la oxidacin se produzca en forma cuantitativa es necesario neutralizar el cido yodhdrico formado con bicarbonato de sodio, no debindose utilizar un hidrxido alcalino, pues ste reacciona con el Iodo formando yoduro, yodato o hipoyodito. El clculo de la normalidad de la solucin de Iodo se hace teniendo en cuenta que, de acuerdo a la reaccin anterior, el peso equivalente del AS2O3 es: Peso molecular = 197.84 eq = 197.84 / 4 = 49.46 entonces 1 eq = 49.46 g

Por lo que la normalidad del yodo se calcula con la siguiente frmula: Normalidad = (gr. trixido arsnico * 1000) / (49.46 *ml gastados Iodo) No olvides poner los gramos pesados exactamente de trixido arsnico. Es necesario sacar el promedio del gasto de Yodo y de los gramos pesados en las tres muestras de arsnico en la valoracin de Yodo para sacar la Normalidad con la formula. Resultados del gasto No. Muestra gramos de AS2O3 1 2 3 ml. de soln. Yodo

DETERMINACIN DEL PORCENTAJE DE RECUPERACIN Pesar exactamente 25 mg de cido ascrbico de pureza al 99% (anotar la cantidad exacta que se pesa), vaciar a un matraz, aadir 25 mL de cido sulfrico 2 N y 25 mL de agua destilada, agitar hasta su completa disolucin, agregar los tres.mililitros de indicador de almidn. Se titula con la solucin de Yodo hasta el vire de color a azul intenso. Anotar el gasto en mL de Yodo. Esto se realiza por triplicado para determinar el porcentaje de recuperacin En cada determinacin se espera encontrar 25 mg (0.025 g) de Aa. Calcular el contenido de Aa con el gasto de solucin de yodo. Para los clculos tener en cuenta que 1 mL de soln.de Yodo 1 N es equivalente a 8.806 mg de Acido ascrbico. Para calcular el contenido se utiliza la siguiente frmula: mg Aa = (N soln. Yodo) (8.806) (mL gastados Yodo) / (0.1) (1) Para determinar el % de recuperacin %R= (Conc. Obtenida / Conc. Esperada) * 100 El porcentaje de recuperacin debe caer siempre en el rango de 80 a 120%. Nota: Para determinar el porcentaje de recuperacin tambin se puede hacer preparando una solucin estndar de cido ascrbico. La solucin estndar se prepara pesando con exactitud 50 mg de acido ascrbico, transferir a un matraz aforado de 100 mL, se disuelve agitando con agua destilada y se lleva a volumen. De esta solucin estndar se toman tres alcuotas de 10 mL, se les adiciona 25 mL de acido sulfrico 2 N y 25 mL de agua, se le adiciona los tres mL de solucin de almidn, se titula con la solucin de Yodo hasta vire de color a azul intenso. Se espera encontrar en los 10 mL 5 mg de cido ascrbico

PREPARACIN DE LA MUESTRA Se pesan 3 g de guayaba fresca molida sin semilla se colocan en un vaso pequeo de licuadora y se le agregan 25 mL de H2SO4 y 25 mL de agua destilada. Se licua perfectamente y se filtra en un cedazo. El filtrado se coloca en un vaso Erlenmeyer y se le agregan 3 mL de indicador de almidn. Titular con la solucin de Yodo hasta coloracin azul intensa. Cada mL de soln. de yodo 0.1 N = 8.806 mg cido ascrbico entonces la normalidad obtenida de soln. de yodo se le calcula los mg Aa en 1 mL y por los mililitros gastados en la titulacin con Yodo. N de Yodo (8.806) / 0.1N * gasto mL soln. Yodo = mg Aa mg. Aa * 100 / 3 = mg Aa por cada 100 gr de muestra. Frmula para obtener los miligramos por cada cien gramos de muestra: mg. Aa= (N de Yodo) (8.806) (mL Yodo gastados) / (0.1) (gr. muestra) *100

REFERENCIAS Suntornsuk L., Gritsanapun W., Nilkamhank S. and Paochom A. 2002. Quantiation of vitamin C content in herbal juice using direct titration. Journal of Pharmaceutical and biomedical analysis. 28. 849-855. United States Pharmacopeia 23 and National Formulary 18. 1995. Inc. Rockville: United States Pharmacopeial Convention. Pp: 130 Tauguinas, Alicia L; Avallone, Carmen M Hoyos, Silvia; Cravsov, Alicia L. Anlisis de niveles de concentracin de vitamina C en mieles de la provincia del Chaco. Facultad de Agroindustrias, UNNE.