PRCTICA 05: EXTRACCION Y RECONOCIMIENTO DEL ADN

I.- INTRODUCCION
El cido desoxirribonucleico(polmero de unidades menores denominados nucletidos) junto con el cido ribonucleico, constituye la porcin prosttica de los

nucleoproteidos, cuyo nombre tiene un contexto histrico, ya que se descubrieron en el ncleo de la clula. Se trata de una molcula de gran peso molecular (macromolcula) que est constituida por tres sustancias distintas: cido fosfrico, un monosacrido aldehdico del tipo pentosa (la desoxirribosa), y una base nitrogenada cclica que puede ser prica (adenina ocitosina) o pirimidnica (timina o guanina). La unin de la base nitrogenada (citosina, adenina, guanina o timina) con la pentosa (desoxirribosa) forma un nuclesido; ste, unindose al cido fosfrico, nos da un nucletido; la unin de los nucletidos entre s en enlace diester nos da el polinucletido, en este caso el cido desoxirribonucleico. Las bases nitrogenadas se hallan en relacin molecular 1:1, la relacin adenina + timina / guanina + citosina es de valor constante para cada especie animal. Estructuralmente la molcula de ADN se presenta en forma de dos cadenas helicoidales arrolladas alrededor de un mismo eje (imaginario); las cadenas estn unidas entre s por las bases que la hacen en pares. Los apareamientos son siempre adenina-timina y citosina-guanina. El ADN es la base de la herencia.

II.- OBJETIVO:
Extraer el ADN de un fruto. Reconocer su presencia mediante una reaccin coloreada. Confirmar la estructura fibilar del ADN.

III.- REVISION DE LITERATURA 3.1.- ADN.

Wikipedia (2011) seala que el cido desoxirribonucleico, frecuentemente abreviado como ADN (y tambin DNA, del ingls deoxyribonucleic acid), es un tipo de cido nucleico, una macromolcula que forma parte de todas las clulas. Contiene la informacin gentica usada en el desarrollo y el funcionamiento de los organismos vivos conocidos y de algunos virus, y es responsable de su transmisin hereditaria. Desde el punto de vista qumico, el ADN es un polmero de nucletidos, es decir, un polinucletido. Un polmero es un compuesto formado por muchas unidades simples conectadas entre s, como si fuera un largo tren formado por vagones. En el ADN, cada vagn es un nucletido, y cada nucletido, a su vez, est formado por un azcar (la desoxirribosa), una base nitrogenada (que puede ser adeninaA, timinaT, citosinaC o guaninaG) y un grupo fosfato que acta como enganche de cada vagn con el siguiente. Lo que distingue a un vagn (nucletido) de otro es, entonces, la base nitrogenada, y por ello la secuencia del ADN se especifica nombrando slo la secuencia de sus bases. La disposicin secuencial de estas cuatro bases a lo largo de la cadena (el ordenamiento de los cuatro tipos de vagones a lo largo de todo el tren) es la que codifica la informacin gentica: por ejemplo, una secuencia de ADN puede ser ATGCTAGATCGC... En los organismos vivos, el ADN se presenta como una doble cadena de nucletidos, en la que las dos hebras estn unidas entre s por unas conexiones denominadas puentes de hidrgeno.

3.2.- Extraccin de ADN

Jpimentel (2011) menciona que la extraccin de ADN requiere una serie de etapas bsicas. En primer lugar tienen que romperse la pared celular y la membrana plasmtica para poder acceder al ncleo de la clula. A continuacin debe romperse tambin la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por ltimo hay que proteger el ADN de enzimas que puedan degradarlo y para aislarlo hay que hacer que precipite en alcohol. La solucin de lavavajillas y sal ayudada por la accin de la licuadora es capaz de romper la pared celular y las membranas plasmtica y nuclear. Los zumos de pia y papaya contienen un enzima, la papana, que contribuye a eliminar las protenas que puedan contaminar el ADN. El alcohol se utiliza para precipitar el ADN que es soluble en agua pero, cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interfase entre el alcohol y el agua.

IV.- MATERIALES Y METODOS

4.1.- mbito del Estudio. 4.1.1.- Localizacin. La prctica se realizo en los ambientes del laboratorio de Anatoma de la Madera perteneciente a la Facultad de Ciencias Forestales, de la Universidad Nacional de Ucayali, ubicado en el Km. 6.200 de la C.F.B. 4.2.- Materiales: Un Pltano y Fruto comestible de un rbol. Filtro tipo cafetera. Pipeta Pasteur. Vaso para batir Vaso de precipitados. Embudo para filtrar. 4.2.1.- Mtodo. En la realizacin de esta prctica fue de observacin directa y experimental. 4.2.2.- Procedimiento. 1. batir un pltano en 250 ml. De agua destilada durante 15 a 20 segundos hasta obtener un papilla homognea. 2. Por otra parte, en vaso de precipitados pequeo se mezcla una cucharada de champ o lavajillas liquido con dos pizcas de sal de mesa. 3. Aadir 20 ml de agua a la mezcla de champ y sal. 4. Aadir ahora tres cucharaditas de pur de pltano en el interior del vaso que contiene la mezcla anterior, revolver con la esptula durante 5 o 10 minutos evitando formar espuma. Durante este tiempo se pueden preparar los tubos de ensayo como se describe en el siguiente punto y discutir la accin que desempean el detergente y la sal. 5. Preparar un tubo de ensayo con alcohol etlico por cada gupo y poner a enfriar lo mximo que sea posible, por ejemplo en bao de agua con hielo. Mejor aun si se ha mantenido refrigerado hasta el momento de realizar la prctica. Tubo de ensayo. Agua destilada. Detergente tipo lavajillas. Matraz. Alcohol 96 muy fri. Esptula. Un poco de sal comn.

6. Con los pasos anteriores hemos conseguido liberar el ADN en la disolucin acuosa, la cual contendr tambin diversos restos tisulares y celulares. Para eliminar esos restos dejamos filtrar la solucin durante varios minutos en papel de filtro, filtro de cafetera o un pao de algodn suave, hasta obtener unos 5 ml de filtrado. 7. Para precipitar el ADN separndolo de la disolucin, se toma una parte del filtrado con una pipeta Pasteur y se aade suavemente al tubo de ensayo que contiene el alcohol muy frio. El filtrado, ms denso que el alcohol y algo turbio, se deposita en el fondo del tubo. Dejar reposar durante 2 o 3 minutos sin moverlo en absoluto. 8. Veremos precipitar ADN de color blanco en la interface con el alcohol y ascender lentamente formando un grumo de aspecto algodonoso. 9. Podemos teirlo aadiendo unas gotas de azul de metileno o verde de metilo al tubo. 10. Se puede extraer ADN del tubo recogindolo cuidadosamente con una varilla de vidrio o un instrumento similar que se hace girar lentamente. 11. Ahora se pone un poco de ese ADN sobre un portaobjeto y se tie con azul de metileno durante 3 minutos. Se limpia el porta y se lleva al microscopio para su observacin.

V.- RESULTADOS.
5.1.- Procedimiento y Resultado. 5.1.1.- Procedimiento

Se hecho el Pltano en la Licuadora

Se hecho el agua y se licuo

Se hecho el shampoo

Se puso el alcohol en hielo

Luego de todo el procedimiento se extrajo el ADN del Fruto y se hecho azul de metileno para luego ser llevado al microscopio

5.1.2.- Resultado

Estructura fibrilar del ADN

VI.- DISCUSION.

VI.- CONCLUSION.
Lo mismo avisen si cambio algo perras

VII.- BIBLIOGRAFIA.
ADN. 2011. En lnea. Jorthan S. T. Consultado 11 de Febrero 2011. Disponible en www.wikipedia.com Extraccin de ADN. 2011. En lnea. Jorthan S.T. Consultado 11 de Febrero 2011. Disponible en www.jpimentel.com

Ao de la Unin Nacional Frente la Crisis Externa

Facultad de Ciencias Forestales y Ambientales

Prctica 05: Extraccin y Reconocimiento del ADN

Alumno : Soto Tapia, Jorthan Alberto

Curso

: Gentica General

Docente

: Ing. Jorge Mor Vsquez

Pucallpa Per 2011