USTO – MB Techniques d’analyse

Faculté de Chimie L3 GP – 2019/2020

Examen de Rattrapage - 1h 30min

Exercice 1 : (06 pts) Caféine dans le guarana

Le guarana est une liane originaire de la forêt amazonienne qui grimpe sur les arbres et produit des
graines riches en caféine (C8H10N4O2). Le guarana est recommandé pour favoriser la concentration
mentale et la mémoire, il est commercialisé sous formes de graine, gélules, poudres, comprimés.
Cependant, la dose journalière de caféine a été fixée, le 27 mai 2015, par l’Agence Européenne pour
la Sécurité des Aliments, à 3mg par kilogramme de masse corporelle pour un adolescent.

Afin de déterminer le nombre de gélules de Guarana qui pourrait être consommé quotidiennement,
sans risque pour la santé, on prépare six solutions aqueuses à partir d’une solution mère de caféine
de concentration molaire 2,5 mmol.L-1, puis on mesure les absorbances correspondantes sur un
spectrophotomètre UV-Visible.

Solutions S1 S2 S3 S4 S5 S6
filles
C (mmol.L-1) 2,5. 10-2 5.10-2 7,5.10-2 1.10-1 1,25.10-1 1,5.10-1
Abs 0,230 0,452 0,677 0,880 1,112 1,325
La dissolution d’une gélule de guarana dans 500ml d’eau distillée donne une solution trop
concentrée pour qu’elle soit mesurée par spectroscopie. Elle est diluée d’un facteur de 10 est donne
une absorbance A = 0,524.

1- La molécule de caféine est elle colorée, justifier.

2- Tracer la courbe d’étalonnage A=f (C).
3- Calculer le coefficient d’absorption molaire pour
cette molécule sachant que b=1cm.
4- Combien de gélules de caféine, un adolescent de
60 Kg peut-il ingérer sans aucun risque pour sa
santé ?

Exercice 2 : (06 pts) Spectre IR de la caféine

Nous voulons étudier le spectre IR de la caféine.

1- Indiquer le nom des fonctions présentes dans la

molécule.
2- Attribuer les bandes 2900 cm-1, 1700 cm-1 et
1650 cm-1 ….. aux groupements correspondants.
3- La vibration C-N est caractérisée par une bande
à 1230 cm-1. Calculer sa force de liaison.
4- La bande d’absorption à 1460 cm-1 est une déformation de la
liaison qui existe à 2900 cm-1. Calculer sa force K. La comparer
avec la force de la liaison C-N . Discuter.
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Exercice 3 : 08 pts (Test 2 pour étudiants ayant une absence justifiée en examen)

A- Caféine dans une boisson énergétique

Une boisson énergétique est analysée par une chromatographie liquide haute
performance utilisant une colonne type Ascentis HILIC, 10cm x 3,0 mm avec une
phase mobile acétate ammonium – eau – acétonitrile. La quantité injectée est 2
µL, le débit utilisé est de 0,6 mL/min, la température du four est de 35°C et le
détecteur est de type UV à 254 nm.

Le chromatogramme révèle 10 pics traduisant la présence de la caféine, des

sucres, des conservateurs et des vitamines inclus dans la boisson énergétique.

Chromatogramme HPLC d’une boisson énergétique

1- Calculer la vitesse linéaire de la phase mobile en déduire le temps mort.

2- Calculer le facteur de résolution entre la caféine (w = 10 sec) et la Niacinamide (w = 8 sec).
3- Calculer le facteur de sélectivité entre les trois sucres fructose, Glucose et sucrose.
4- Quelle est la nature de la phase utilisée dans cette analyse ?
L’estimation des temps de rétention doit se faire à partir du chromatogramme.

B- Caféine dans des boissons gazeuses

Afin de déterminer le taux de la caféine dans les boissons gazeuses, on procède à l’établissement
d’une courbe de calibration donnant l’aire du pic de la caféine en fonction de la concentration à
travers l'injection de différentes concentrations de la solution standard de caféine dont les aires des
pics sont relevées dans le tableau suivant.

Concentration (mg/L) 10 20 40 60 80 100

Aires des pics 118,403 247,869 571,511 892,249 1176,621 1447,089
Trois boissons gazeuses, Coca-cola 50 cl, Coca-cola 33 cl et Pepsi Max sont analysées par
chromatographie HPLC.
1- Tracer la courbe de calibration de la caféine (C = f(Aires des pics))
2- Sachant que les aires des pics correspondant à des échantillons pris de Coca-cola 50 cl et
Coca-Cola 33 cl sont respectivement 1368,205 et 1437,603. Déterminer la concentration de
la caféine en mg/L dans ces deux boissons.
3- Un échantillon de Pepsi Max, dilué dix fois, donne une aire de pic 183,256. Calculer sa
concentration en caféine. Conclure.
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numéro de la fiole 1 2 3 4 5 V (caféine) prélevé / µL 10 20 30 40 50 C (caféine) en mg.L-1 Aire du pic

de la caféine 0,124 0,232 0,331 0,447 0,548
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Savoir lire un spectre IR

On note la présence d’une fonction amide et d’une fonction amine tertiaire.

 Amide tertiaire, pas de bande à 3 200 cm–1.

 C=O, bande vers 1 680 cm–1.
 C—N, bande vers 1 425 cm–1.
 Amine C—N, bande vers 1 230-1 030 cm–1.
 CH3, bandes à 2 960 cm–1, 1 460 et 1 380 cm–1.
 C=C, bande à 1 645 cm–1.

Le spectre infrarouge confirme la présence de ces fonctions. Pour la fonction amide, on n’observe pas de
bande vers 3 200 cm–1. On trouve une bande vers 1 700 cm–1 pour C=O ; pour la fonction amine, on recense
une bande vers 1 230 cm–1 caractéristique de C—N.

On peut noter également les bandes à 2 900 et 1 460 cm–1 caractéristiques des alcanes, ici CH3 mais aussi
une bande à 1 650 cm–1 correspondant à C=C.

HPLC Conditions
column: Ascentis Express HILIC, 10 cm x 3.0 mm I.D., 2.7 µm (Product No. 53970-
U); mobile phase: (A) 100 mM ammonium acetate, pH 5.0; (B) water, (C)
acetonitrile (9:1:90, A:B:C); flow rate: 0.6 mL/min; pressure: 815 psi; column
temp.: 35 °C; detector: UV, 254 nm or ELSD, 55 °C, 3.5 bar nitrogen; injection: 2
µL commercial energy drink diluted 1:9 in acetonitrile
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