IMPLEMENTAO DE TCNICAS DE CROMATOGRAFIA LQUIDA DE ALTA EFICINCIA (CLAE) PARA ESTUDOS DE HIDROCARBONETOS POLICCLICOS AROMTICOS (HPA) EM TESTEMUNHOS SEDIMENTARES

INTRODUO Segundo ZAMBONI (2000), entre as mais problemticas interferncias humanas no meio ambiente esto as atividades que contaminam e poluem os corpos dgua, refletindo negativamente na biota. Estas atividades introduzem uma grande variedade de substncias, dentre elas encontram-se os HPAs. Tais compostos podem reagir com o DNA tornando-se carcinognicos e potenciais mutagnicos; no meio aqutico so rapidamente adsorvidos pela frao argila e pela M.O. do sedimento. Concentraes entre 3 a 5 mg/kg podem afetar a biota. Portanto, os HPAs tm sido alvo de muitos estudos devido a sua toxicidade e ubiqidade (LOPES E ANDRADE, 1996), so compostos considerados prioritrios em estudos ambientais. O que torna evidente a importncia de se otimizar as tcnicas de amostragem e quantificao. O presente trabalho pretende otimizar e implementar uma metodologia analtica para HPAs em sedimentos. As etapas analticas consistem em 3 etapas: extrao, clean-up, e anlise por CLAE. OBJETIVOS Avaliar o mtodo de determinao de HPAs em testemunhos sedimentares por cromatografia lquida de alta eficincia com arranjo de diodos e sua aplicao para estudos de monitoramento ambiental. OB. ESPECFICOS Otimizar a metodologia para identificao e quantificao de HPAs Implementar a metodologia otimizada, e estudar a distribuio vertical Correlacionas a [] dos HPAs com a granulometria e COT do sedimento REVISO BIBLIOGRFICA So compostos por 2 ou mais anis benznicos fusionados entre si os quais apresentam apenas tomos de C e H na sua estrutura. Tem como origem principal a decomposio incompleta da matria orgnica. So considerados poluentes orgnicos prioritrios, e acordo com a agncia de proteo ambiental americana existem 16 HPAs prioritrios devido ao seu efeito nocivo FONTES DE HPAs Piroltica: combusto incompleta da M.O. sob condies de alta T, baixa P e curto tempo de formao. De 4-6. Petrognica: so formados por processos diagnicos (formao do petrleo), alta P, baixa T e longo tempo de formao. Predominantes de 2 a 3 anis Diagentica: aps a deposio inicial de sedimentos ocorre o incio da diagnese baixas P e T. Biolgica: alguns organismos so capazes de sintetizar HPAs PROPRIEDADES FSICO-QUMICAS Apresentam de 2 a 6 anis benznicos Seus pesos moleculares variam de 128 a 278 g/mol Quanto a solubilidade em gua: variam de altamente insolveis a pouco solveis Quanto a sua volatilidade: variam de muito volateia a pouco volteis. Apresentam altos valores de coeficientes de partio octanol gua e carbono orgnicos MOBILIDADE AMBIENTAL So transportados, principalmente por via area Podendo depositar-se em reas remotas, em ambientes terrestres e aquticos So de grande persistncia ambiental Quando adentram o ambiente aqutico, devido suas caractersticas fsico-qumicas, eles tendem a fazerem parte do compartimento sedimentar, sendo ressuspendidos, permanecendo no compartimento, podendo ser ingeridos por algum organismo, ou mesmo degradados A degradao ambiental dos HPAs pode ocorrer por foto-oxidao ou decomposio microbiolgica EXPOSIO A exposio dos HPAs ao meio ambiente causam danos irreparveis A absoro humana pode ocorrer por diversas vias, sendo as principais a inalao e a ingesto de alimentos e gua contaminados O hbito de fumar uma forma de contaminao por HPAs inerente apenas nossa espcie, alm da exposio ocupacional por absoro drmica. OTIMIZAO DO MTODO ANALTICO PARA HPAs Com o CLAE podemos trabalhar com diversos tipos de matrizes, portanto, torna-se necessria a otimizao do mtodo Cavalcante et al. (2008) e Cotta et al (2009) trabalharam com matrizes sedimentares em prol da otimizao do mtodo analtico, analisaram as fases de extrao e clean-up, avaliando apenas sedimentos superficiais. O diferencial do presente trabalho a avaliao vertical de HPAs correlacionando-os tanto com o COT e com a granulomentria Para testar o mtodo sero utilizados brancos, amostras Spike (fortalecidas com uma mistura dos 16 HPAs prioritrios com pureza de 99,5 a 99,9%)

MATERIAIS E MTODOS LIMPEZA DO MATERIAL Todo o material dever ser lavado com gua e detergente apropriado, ser enxaguado para retirada do detergente, em seguida ficar de molho por 3 horas no etanol, um novo enxge com gua destilada por duas vezes e ser borrifado com etanol. AMOSTRAGEM E ARMAZENAMETO Inserir manualmente o tubo de acrlico no sedimentos e retirar, cerca de 50 cm, in situ identificar embalar e refrigerar, j em labroratrio fotografar e fatiar de 2 em 2 cm, cada fatia dever ser fracionada e destinada para cada tipo de anlise Cerca de 30 g de sedimento ser utilizada para anlise de HPAs DETERMINAO DE HPAS ANLISES GRANULOMTRICAS Pesar a frao, lavar a amostra para retirada do sal e adicionar perxido de hidrognio para remover a M.O., secar a amostra em estufa a 50C, pesar para quantificar a M.O., retirar 1 g desta amostra e adicionar 6 mL de pirofosfato de sdio e manter por 24h, levar ao ultra-som por 15 minutos e imediatamente encaminhar a amostra ao granulmetro a laser. A anlise de COT ser realizada de acordo com o mtodo de Walkley-Black EXTRAO A extrao ocorrer atravs de ultra-som, devido a sua viabilidade em relao outras tcnicas Sero utilizados uma mistura de solventes orgnicos, no caso acetoca/decm (1:1) Sero adicionados 40 mL de solventes por 4 vezes durante 10 minutos cada vez CLEAN-UP Aps a extrao deve-se realizar a limpeza do extrato para retirada de compostos indesejveis A tcnica escolhida foi a cromatografia de adsoro, na qual a amostra ser eluida com uma mistura de solventes, neste caso pentano e DCM, no interior da coluna cromatogrfica ser inserida l de vidro (anteriormente tratada com solvente) + os adsorvente: sulfato de sdio anidro e slica gel, a funo dos adsorventes reter as impurezas do extrato. A proporo dos solventes ser da seguinte forma: 40 mL de DCM, 25 mL de pentano, 25 mL pentano/DCM CONDIES CROMATOGRFICAS A tcnica cromatogrfica selecionada foi a CLAE de fase reversa com detector de UV, no caso arranjo de diodos Utilizarei uma coluna cromatogrfica C-18, na qual a amostra ser eluida em uma T de 25C com acetonitrila e gua na vazo de 1,8 mL por min A deteco ser realizada atravs de arranjo de diodos, comprimento de onda 254 nm RECUPERAO Ser avaliada a recuperao dos analitos de interesse na amostra atravs da equao, poderei verificar a eficiccia do mtodo IDENTIFICAO DE FONTES Atravs das razo da porcentagem de perileno com a somatria de todos os HPAs de 5 anis podemos identificar a possvel origem predominante dos HPAs encontrados na amostra, pois o perileno um HPA de 5 anis considerado de fonte mista, porm de origem natural, formado principalmente por processos diagenticos. IDENTIFICAO DE ORIGEM Assim como possvel relacionar os istopos para identificar as origens predominantes, muitas razoes podem ser utilizadas dentre elas ..... isto possvel pela estabilidade e calor de formao do composto. Para que realizar este estudo: Poderemos utilizar este trabalho para analisar a evoluo histrica da concentrao.