LEUCEMIAS AGUDAS, CLASIFICACION, DIAGNOSTICO, TRATAMIENTO Y APORTACION DE LAS NUEVAS TECNICAS DIAGNOSTICAS.

Ana Maria Gmez Garca FIR 3 ao Anlisis Clnicos

CANCERES INFANTILES

MIELOBLASTICAS

LINFOBLASTICAS

LEUCEMIAS

CRONICAS
Expansin de elementos maduros de MO

AGUDAS
Expansin clonal de precursores hematopoyeticos

80% L.infantiles son LLA 15% son LMA Restantes son indiferenciadas o cronicas (LMC, LMMC JUVENIL)

LEUCEMIAS AGUDAS EN LA INFANCIA

ANTECEDENTES HISTORICOS
Virchow, 1845 Ehrich, 1891 Citoquimica Farber, 1948 empleo Aminopterina

ESTRATEGIAS DE ESTUDIO DE LAS L.A:

METODOS DE LABORATORIO PARA CARACTERIZAR BLASTOS LEUCEMICOS: DATOS LABORATORIO CLINICA MORFOLOGIA

L.A.
BIOLOGIA MOLECULAR INMUNOFENOTIPO

FISH

CITOGENETICA

Complejo diagnostico de las Leucemias en la Actualidad.

DEFINICION LEUCEMIA
Proliferacin neoplsica a partir de una clula hematopoytica inmadura que ha perdido la capacidad de diferenciarse. Disminucin del tejido hematopoyetico normal en MO y posterior invasin de sangre perifrica y otros rganos. Enfermedad oncolgica ms frecuente diagnosticada en menores de 15 aos.

ETIOLOGIA
La mayora carecen de etiologa clara Factores predisponentes: Factores genticos Anomalas cromosmicas Inmunodeficiencias congnitas Radiaciones ionizantes Frmacos mielotxicos. Enfermedades inmunolgicas Virus

CLINICA
SINTOMAS CONSTITUCIONALES: astenia, debilidad, perdida peso, sudoracin nocturna. SINTOMAS POR INFILTRACION DE LA MO: - desplazamiento serie roja: Anemia ( palidez) - desplazamiento serie blanca: Fiebre (50%), infecciones 2 a neutropenia. - desplazamiento serie plaquetar: ditesis hemorrgicas (petequias, sangrado) por la plaquetopenia.

CLINICA
1. 2. 3. 4. 5.

SINTOMAS POR INFILTRACION DE ALGUN ORGANO O TEJIDO: - 50-80% hepatoesplenomegalia - linfoadenopatias - 40% nios dolor seo o articular - hipertrofia gingival - infiltracin piel, mediastino y SNC (5-7% de nios con L.A.)

DATOS DE LABORATORIO
95% Anemia normoctica, normocrmica y arregenerativa ( ret )
El compromiso de 2 o mas series hematopoyeticas

Neutropenia.
MIELOGRAMA

90% Trombocitopenia. 16% carecen de blastos en SP.

CARACTERISTICAS SERICAS
LDH elevada: Se correlaciona con la masa tumoral y la gravedad de la enfermedad Otras menos frecuentes Hipercalcemia Hiperuricemia Aumento de transaminasas Uremia

FROTIS SANGUINEO NORMAL

PLAQUETAS

LINFOCITO

MONOCITO

NEUTROFILO

AUTOANALIZADOR : ADVIA 120 SISTEMA AUTOMATIZADO PARA ESTUDIO DEL HEMOGRAMA

ADVIA 120: AUTOANALIZADOR HEMATOLOGICO

Autoanalizador por citometria de flujo. Tres sistemas analticos:
1Citmetro de flujo con lmpara diodo laser para canales: RBC/PLAQ BASOLOBULARIDAD RETICULOCITOS 2.Citometro de flujo con lmpara tungsteno para canal de PEROXIDASA. 3.Colorimetro para medir HEMOGLOBINA.

Autoanalizador hematologico:
Graficas serie blanca

tamao

mieloperoxidasa Graficas serie roja

Complejidad nuclear Serie plaquetar

VOLUMEN DENSIDAD

CONCENTRACIO N DE Hb

TAMAO

HEMOGRAMA AUTOMATIZADO DE SANGRE NORMAL

DIAGNOSTICO DIFERENCIAL
Reacciones leucemoides linfocitarias: mononucleosis infecciosa, Bordetella Pertussis. Hiperplasia linfoide madura en nios< 2 aos. Otros: Anemia aplasica, linfoma, neuroblastoma, sndromes hemorrgicos (purpura trombocitopenica aguda), sndrome mielodisplasico

MONONUCLEOSIS INFECCIOSA
AUTOMATIZADO MANUAL

Atipias linfocitarias

LEUCEMIA AGUDA VISTA AL M.OPTICO

BLASTOS

LEUCEMIA AGUDA (SISTEMA AUTOMATIZADO:

LEUCEMIAS AGUDAS.CLASIFICACION FAB

British Journal of Hematology, 1976 Aug ; 33(4): 451-8

Proposals for the Classification of the Acute Leukaemias

FRENCH-AMERICAN-BRITISH (FAB) CO-OPERATIVE GROUP Bennett JM , Catovsky D, Daniel MT , Flandrin G, Galton DA, Gralnick HR, Sultan C, Accepted for publication 26 January 1976

PROBLEMAS CON LA CLASIFICACION FAB:

No todas las L. Agudas tienen 30% blastos (traslocaciones especificas). Excluye leucemias bifenotipicas. No incluye L. multilnea u otras poco frecuentes Excluye informacin esencial para tto y pronostico.

CLASIFICACION MORFOLOGICA
FAB (1976)

MIELOBLSTICA LINFOBLSTICA M0 M1 M2 M3 M4 M5 M6 M7 minimamente diferenciada Sin maduracin Con maduracin promielocitica mielomonocitica monoblstica eritroleucemia megacarioblstica

L1 L2 L3

Tamao celular Morfologa Nuclear Nucleolos Basofilia citoplasmtica Vacuolas citoplasmticas

L1: cels pequeas L2: cels pequeas y grandes L3: tipo Burkitt.

LEUCEMIA AGUDA CLASIFICACION OMS ( 2001)

L.MIELOIDES AGUDAS L.LINFOIDES AGUDAS
De precursor de cel B De precursor de cel T De Burkit

L.MIELOIDE CRONICA L.LINFATICA CRONICA

LEUCEMIA AGUDA CLASIFICACION OMS ( 2001)

L. AGUDA 20% BLASTOS

CLASIFICACION OMS:

MORFOLOGIA GENETICA FENOTIPO

CLASIFICACION INMUNOFENOTIPICA
EGIL (1995) Mas usada

LINFOBLASTICAS AGUDAS

MIELOBLASTICAS AGUDAS

BIFENOTIPICAS AGUDAS

SCORE INMUNOFENOTIPICO DE LAS LEUCEMIAS BIFENOTIPICAS

ESTUDIO INICIAL DE LA LEUCEMIA. CITOMETRIA DE FLUJO

Paneles de anticuerpos monoclonales empleados para el estudio inicial de las LAs (FITC/ PE/ ECD/ PC5/ PC7)

LLA DE FENOTIPO B LLA de fenotipo B

cMPO/ cCD79a/ CD45/ cCD3 nTdT/ cIgM/ CD45/ CD34 CD45/ CD4/ CD8/ CD3/ CD19 CD10/ CD20/ CD45/ CD34/ CD19 CD38/ CD22/ CD45/ HLADR/ CD19 CD15/ CD13/ CD45/ CD33/ CD19 KOR-SA/ 7.1/ CD45/ CD24/ CD19 IP (DNA)/ pan-B

LLA DE de fenotipo T T LLA FENOTIPO

cMPO/ cCD79a/ CD45/ cCD3 nTdT/ cIgM/ CD45/ CD34 CD45/ CD4/CD8/ CD3/ CD19 CD7/ CD34/ CD3/ HLADR/ CD5 CD7/ CD1a/ CD45/ CD33/ CD56 CD7/ CD13/ CD45/ CD10/ CD2 CD38/ TCR/ CD45/ TCR/ CD3

LMA LMA
cMPO/ cCD79a/ CD45/ cCD3 nTdT/ cIgM/ CD45/ CD34 CD45/ CD4/ CD8/ CD3/ CD19 CD15/ CD13/ CD45/ CD33/ CD34 CD7/ CD117/ CD45/ CD34/ CD56 CD65/ CD135/ CD45/ CD2/ CD34 CD64/ CD11b/ CD45/ CD14/ CD16 HLADR/ CD235a/ CD45/ CD34/ CD41

INMUNOFENOTIPOS LEUCMICOS

LEUCEMIAS 2001-2005
MIELOIDES 25%

MIELOIDES

75% LINFOIDES LINFOIDES

LEUCEMIA T LEUCEMIA B

LEUCEMIAS NIO JESUS 2005

LINFOIDES

LLA T INTERMEDIA

LLA T PRO T

MIELOIDE M0 CD56+

MIELOIDES

MIELOIDE M0 LLA PROB LLA B PROBPREB MIELOIDE M3 MIELOIDE M4 MIELOIDE M5

LMMJ

LLA B COMUN

LMC

LEUCEMIAS LINFOBLSTICAS AGUDAS B (EGIL):

FRECUENCIA

SUBTIPOS

MARCADORES INMUNOLOGICOS CD79a+ y/o CD 22+ y/o CD19+,CD34+

CD10++

CD34+ TdT + CD19+

5%

LAL B1 o pro-B LAL B2 o comun LAL B3 o pre- B

CD22+

60%

CD79a+ y/o CD 22+ y/o CD19+,CD34 CD 10+ CD79a+ y/o CD 22+ y/o CD19+, Cad intracitoplasmatica CD79a+ y/o CD 22+ y/oCD19+, Ig Sup+

CD34+/TdT+ CD19+ CD22+ CD20++ IgM+ CD10 +d CD10+/IgM+ Ig super+ CD20++ CD19+ CD22++ CD22+ CD19+

15%

3%

LAL B4 o maduros

LEUCEMIAS LINFOBLSTICAS AGUDAS T (EGIL):

FRECUENCIA

15%

SUBTIPOS MARCADORES INMUNOLOGICOS LAL T1 o pro-T LAL T2, pre-T LAL T3, tmicocortical LAL T4, madura + CD 7 Y CD3 citoplasmtico, CD34+ A lo anterior aadir + CD 2 y/o CD 5 y/o CD8. + CD1a
CD4+ CD8+

TdT+ CD3+

CD34 + CD7+

TdT+ CD2+ CD3+ CD2 TdT + CD3+ CD5 CD7

CD8+ CD5+ CD7+

MAS FRECUENTE

Demostracin de la existencia de CD 3 de sup en ausencia de CD 1a.

CD1a+

CD3+ CD4 o CD8 TdT+

CD2+ CD5+ CD7+

LEUCEMIAS LINFOBLASTICAS T
Menos frecuentes ( 15% LAL peditricas). Mas agresivas (30% recaen a los dos aos). Menos caracterizadas citogeneticamente (25-50% presentan cariotipos alterados). Menos informacin pronostica. Ttos menos especficos.

CLASIFICACION INMUNOLOGICAMORFOLOGICA
TIPO inmunolog proB COMUN PreB B ProT PreT TIMICO CORTICAL TIMICO MADURO TdT HLA DR + + + + CD10 CALLA + CD3 CD1 a POS CD7 CD2 CD5 CD8 + + CD19 CIg SIg Tipo FAB L1L2 L1L2 L1L2 L3 L1L2 L1L2 L1L2

+ + + NEG + + +

+cit +cit +cit

+ + +

+ + + + -

+ -

+ -

+sup

NEG

L1L2

LEUCEMIAS AGUDAS
1.

DIAGNOSTICO TRATAMIENTO TRANSPLANTE EMR

2.

3.

4.

COMO SE REALIZA UN DIAGNOSTICO?

ANALIZADORES AUTOMATICOS. EXTENSION DE SANGRE PERIFERICA. EXTENSIONES DE MEDULA OSEA CITOQUIMICA DE EXTENSIONES MO.

CITOMETRIA DE FLUJO DEL ASPIRADO DE MEDULA OSEA PARA TIPIFICAR LA LEUCEMIA CITOGENETICA Y BIOLOGIA MOLECULAR

FROTIS NORMAL MO

megacariocito

eritroblastos

MO PATOLOGICA

LEUCEMIA MIELOIDE AGUDA

LEUCEMIA LINFOIDE AGUDA

CONTRIBUCION DE LA CITOQUIMICA AL DIAGNOSTICO HEMATOLOGICO

La citoqumica estudia la composicin qca. de las clulas y hace posible detectar y precisar la localizacin de algunos principios inmediatos, enzimas y sust.inorgnicas (metales pesados). Compuestos: Carbohidratos: reaccin del c perydico de Shiff o reaccin del PAS. Enzs oxidantes: reaccin de las peroxidasas. Enzs hidrolticas: fosfatasas alcalinas, cidas, glucuronidasa, muramidasa, N-acetil- glucosaminidasa, esterasas inespecficas. Componentes inorgnicos: hierroazul de Prusia o de Perls.

CITOQUIMICA
Tipos FAB
PAS
L1 L2 L3 MO M1 M2 M3 M4 M5 M6

+ GRANO
-

+ GRANO
-

MPX

++

+++

++

-+

P acida

+T

+T

Cloroacetato esterasa ANAE ( naftol acetato estarasa)

-+

++

+++

-+

+T

+T

++

FOTOS CITOQUIMICA
ANAE PAcida

PAS MPX

GRACIAS