Ecole Nationale Supérieure de

Biotechnologie - Taoufik Khaznadar,

Constantine
3ème Année du cycle Ingénieur
[Cours UE-SF 2 : Enzymologie
(Module V); Régulations enzymatiques
« allostériques »

Enseignant responsable : Dr. MAROUF A., Mohamed

Année universitaire 2023-2024

CONTENTS

05 Régulations enzymatiques « allostériques »

Méthodes de dosage et mesure des

06 activités enzymatiques
Régulations enzymatiques
« allostériques »
 Introduction
 Dans une voie métabolique  enzyme « E1 » qui catalyse la première
réaction de la voie métabolique est inhibée par le produit terminal de
cette voie «rétro-inhibition » ou « Feed-back ».
Les enzymes de cette classe ont certaines propriétés exceptionnelles :
 Leur cinétique n'obéit pas à l'équation de Michaelis-Menten  les
courbes de « v » en fonction de « [S] » sont des sigmoïdes et non pas des
hyperboles équilatères.

 Ces courbes suggèrent une relation d'ordre 2 (ou supérieur) entre «v» et «[S]»  «v» est
proportionnel à [S]n, avec n > 1.
 Ces enzymes portent le nom d’enzymes allostériques.
Le terme allostérique  du grec « allos », autre, et « stereos », forme  Les enzymes
allostériques prennent une autre forme (une autre conformation) à la suite de la liaison d’un
effecteur.
 Dans une voie métaboliques, les enzymes allostériques forment les enzymes-clés de la
régulation de la voie métabolique  enzymes régulateurs: contrôle la vitesse de l'ensemble
de la voie:
 Enzyme michaelienne  activité enzymatique régulée par la concentration du substrat
processus inefficace pour réguler une voie métabolique.

 Les enzymes allostériques  augmentation de la vitesse pour de faibles [S] meilleur

contrôle métabolique.
 1. Propriétés Générales des enzymes allostériques

1.1. Définition

Allostérie  Propriété de certaines protéines actives qui

peuvent changer de structure spatiale lorsqu'elles se lient à un

ligand (substrat ou effecteur ) en un site différent du site actif 

cette liaison se traduit par une modification de l'activité.
1.2. Effecteurs allostériques
 Les effecteurs allostériques  inhibiteurs ou activateurs 
ligands dont le site de fixation est différent du site actif  site
allostérique.
Les effecteurs allostériques possèdent 3 propriétés
caractéristiques:
Leur structure est souvent très éloignée de celle du substrat naturel de l’enzyme  d’où
nom d’effecteurs allostériques
Leur action est spécifique  des composés de structure voisine n’ont pas d’action.
Agissent sur la première enzyme spécifique de la voie métabolique  régulateurs de
l’activité enzymatique.
 Effet allostérique homotrope ou Allostérie homotrope
 effecteur est une molécule de substrat.
 Effet allostérique hétérotrope ou Allostérie
hétérotrope  effecteur est une molécule qui n'est pas
le substrat.
 La modification de l'activité est toujours
quantitative:
 augmentation  activation allostérique
 ralentissement  inhibition allostérique.

1.3. Structure des enzymes allostériques: structure oligomérique

 Enzymes allostériques ont une structure quaternaire

oligomérique  formées d’un petit nombre de protomères
identiques ou différents « de 2 à 12 ».

 Il y a plusieurs sites actifs et plusieurs sites allostériques par

molécule d’enzyme 1 site actif et 1 site allostérique par
protomère  sites non indépendants.
 La conformation de chaque protomère est contrainte par la
conformation des autres.
 Il y a deux états possibles pour chaque protomère:
Etat tendu ou Tense « T »  état non catalytique  faible
affinité pour le substrat
Etat relâché ou Relaxed « R »  état catalytique  forte
affinité pour le substrat
On nomme transition allostérique le passage d'un état à
l'autre (tendu à relâché ou inversement).
1.4. Coopérativité ou Association Coopérative
Le graphe représentant « v0 » d’une enzyme allostérique
n’est pas une hyperbole  Courbe sigmoïde  coopération
entre les protomères.
Cette cinétique allostérique est plus lente que la cinétique
michaelienne pour les petites concentrations du substrat et
devient plus rapide au-delà  existence d’une concentration
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seuil pour la coopérativité.
 1.4.1. Définition de la « Coopérativité »
 La fixation d'une molécule substrat sur un protomère facilite
la fixation d'autres molécules de substrats sur les autres
protomères  coopération entre les sous-unités.

1.4.2. Types de coopérativité

a) Coopérativité positive
 une molécule d'un ligand (substrat ou activateur) entraîne
l'augmentation de l'affinité pour les mêmes molécules de
substrat  v = f([S] sigmoïde positive
 Activateur déplace la courbe vers la gauche

 Il y a deux types de coopérativité positive:

a1) Coopérativité homotrope positive (allostérie homotrope)
 Ligand  est une molécule de substrat  effet du substrat sur sa propre fixation 
Appétit vient en mangeant
a2) Coopérativité hétérotrope positive (allostérie hétérotrope positive)
 Ligand  est une molécule d’activateur  Plus je connais les hommes,
plus j'aime mon chien.

b) Coopérativité négative (coopérativité hétérotrope négative ou

allostérie hétérotrope négative)

 une molécule d'un effecteur (inhibiteur ) entraîne la diminution de

l'affinité pour les molécules de substrat  v = f([S] sigmoïde positive  la
soif s’en va en buvant.
 Inhibiteur tend à aplatir la courbe en la déplaçant vers la droite.

1.4.3. La désensibilisation

 La dissociation d’une enzyme allostérique en protomères peut soit:

 entrainer une perte de l’activité catalytique

 disparition du comportement allostérique  le protomère obéit la loi de Michaelis-Menten
 La désensibilisation  montre interaction entre protomères est responsable de l’allostérie.
 1.5. Cinétique d’une enzyme allostérique: Equation de Hill
 Soit une enzyme oligomérique possédant « n* » sites actifs équivalents.

Cinétique est donnée par l’équation de Hill applicable à des réactions

enzymatiques du type:
k1 k2
E  nS  ESn  E  nP
k 1

 Equation de Hill peut s’écrire:

v

S
n

K 0.5  S 
n
Vmax

 «K0.5» ou «K1/2»  concentration de substrat donnant pour un enzyme

allostérique une vitesse de réaction égale à la moitié de la vitesse maximale

 « n »  nombre de Hill ou coefficient de Hill ou coefficient d’interaction ou indice de

coopérativité

 « n » un nombre positif, inférieur, égal ou supérieur à 1.

 « n »  mesure le degré de coopérativité entre protomères  plus la valeur est élevée 

plus grande est la coopérativité:

« n = n* »  Coopérativité totale  cas théorique jamais atteint

« n=1»  absence de coopérativité  pas d’interaction entre les sites  enzyme aura un

comportement purement michaëlien  sites indépendants

« n >1 »  coopérativité positive  affinité apparente de l’enzyme augmente

« n <1 » coopérativité négative  affinité apparente de l’enzyme diminue.

1.5.1. Détermination du nombre du Hill

v

S
n

v

S
n

K 0.5  S 
Equation de Hill peut être réarrangée:
Vmax n
Vmax  v K 0.5
 Si on prend le logarithme, on obtient:

 v   S n   v 
Log    Log    Log 
   nLogS   LogK0.5
 
 Vmax  v   K 0.5   Vmax  v 

 
 V  v   LogS 
La courbe Log 
v  droite de pente « n » et d’ordonnée à l’origine
 max 
«-LogK0.5»

Les valeurs expérimentales de « n » ne sont pas

souvent entières  prendre comme valeur de

« n » le nombre immédiatement supérieur.

 1.6. Modèles moléculaires de l’allostérie
 Deux modèles différents ont été proposés pour expliquer la coopérativité des ligands.

1.6.1. Modèle Concerté ou Symétrique ou modèle MWC (1965)

Modèle proposé par MONOD, WYMAN et CHANGEUX Ce modèle stipule que:

 Enzyme se répartisse entre deux conformations qui sont en équilibre  R T

 Tous les protomères d’une même molécule d’enzyme sont tous identiques  adoptent la

même conformation R ou T (R et T étant en équilibre)

 Il n’existe pas d’état mixte formé de formes R et T  modèle du tout ou rien.

Les protomères sont équivalents dans l’espace  disposés par rapport à un axe de symétrie

 conservation de la symétrie lors de la transition allostérique.

 Dans le modèle de MWC chaque ligand déplace
l’équilibre en faveur de la forme capable de le fixer
 c’est ce déplacement d’équilibre ou transition
allostérie qui se fait de manière coopérative:

 En l’absence de substrat  l’équilibre est en faveur de T

 En présence du substrat  l’ équilibre est déplacé vers R

 Pour une molécule d’enzyme, la transition se fait en bloc  comme un château de cartes :

les cartes tombent tous en même temps  pas d’état mixte

 1.6.1. Modèle Séquentiel ou modèle KNF(1966)
Modèle proposé par KOSHLAND, NEMETHY et FILMER  Ce modèle
stipule que:
 En l’absence de substrat  toutes les molécules d’enzymes sont en
conformation T
La fixation du ligand sur un protomère d’une molécule d’enzyme fait
basculer le protomère dans l’état R ou T  Transition allostérique
 Une perte de symétrie transitoire de l’enzyme  Il existe d’état mixte
formé de formes R et T .

 Transition allostérique se répercute de proche en

proche d’un protomère au protomère voisin 

coopérativité entre différents protomères  comme une

rangée de dominos qui tombent l’un après l’autre.

 1.7. Modèles cinétiques de l’allostérie
 Effets activateurs ou inhibiteurs sont mesurés par des variations de « Km » et de « Vmax » par
rapport au substrat (S), activateur (A) ou Inhibiteur (I).
 Cas d’enzymes allostériques deux modèles ou systèmes cinétiques sont définis:

1.7.1. Enzymes allostériques du système « K »

 Enzymes du système « K »  substrat et l'effecteur

ont des affinités différentes pour les formes R et T de

l'enzyme  fixation toujours sigmoïde.

 Les formes R et T ont une même vitesse maximale.

 Effecteur ne peut modifier que l'affinité apparente

de l'enzyme pour le substrat  modification de Km

(K0.5)
 1.7.2. Enzymes allostériques du système « V »
 Enzymes allostériques du système V  substrat (S) a la même affinité pour les deux
formes d'enzyme R et T mais des activités catalytiques différentes  Tout se passe comme
s'il n y avait qu’une seule forme d'enzyme  fixation hyperbolique de S.
 Pas de coopérativité homotrope
 Activateur (A) et inhibiteur (I) modifient la vitesse sans modifier l’affinité.

NB: Pour beaucoup d’enzymes allostériques,

mais pas pour tous, si on trace v en fonction
de S, on obtient une courbe sigmoïde.
 Enzyme allostérique  effet coopératif des effecteurs (activateur : A ; inhibiteur : I)
 mesure de la vitesse en faisant varier leur concentration à concentration de substrat
constante:
C’est une façon de détecter le caractère allostérique des enzymes du système V.
R et T  Affinité différentes pour A et I
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Importance d’allostérie
Importance d’allostérie
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