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Hemogramme Automatique 09-10
Hemogramme Automatique 09-10
Pentra 60 Horiba-ABX
Perçage du tube et
prélèvement
Segmentation
des aliquotes
1- Mesure par impédance
Principe de la mesure par impédance
Electrode
60 à 100 µm
externe
Flux de diluant
Temps
Milieu électrolyte
très conducteur
Une cellule coupe le champ électrique
* diminution de la conductivité
* augmentation de la résistance électrique
Le nombre d ’impulsions
enregistré correspond au
passage des cellules
N
O
M
B
R
E
25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36
volume
4 canaux
16 canaux
Application : les numérations
• Numération des érythrocytes
• Numération des thrombocytes
• Numération des leucocytes
Numération des Globules Rouges
Electrode interne
VMP
Numération leucocytaire
suspension où les érythrocytes ont été lysés
dilution au 1/250
seuil de mesure 30 fL ( population décomptée à
partir de 35fL)
35-360 fL WBC,LY,MO,GR
RBC,HGB,HCT,MCV,MCH,
24-260 fL MCHC,RDC
PLT,PCT,MPV,PDW
2-20 fL
2 Analyse cytométrique tridimensionnelle
Cellule SOURCE
photoélectrique
Diluant Diluant
Diffraction lumineuse Echantillon
La cellule passe individuellement devant un faisceau lumineux conventionnel (lampe halogène à vapeur
de Hg ou de Xe) ou LASER (Argon, Kryton-Argon, Helium-Neon…)
Diffraction lumineuse
Grands angles = Densité intracellulaire
(8-20 )
3- la conductivité
Conductivité: analyse du noyau et de la composition Simultanéité des mesures
chimique du cytoplasme en enregistrant les modifications
subies par un courant haute fréquence traversant la cellules.
3 mesures physiques pour la formule complète
V
o
l
u
m
e
Conductivité
noyau
Diffraction : Surface,granulations
Analyse en 3D
Exploration
réalisée sur
plus de 8000
cellules
Analyse en 256 canaux ( 16 millions de positions unitaires)
Le scattergramme DF1 (Abbott)
Taille/Cytolyse/Cytochimie
(Activité peroxydasique) Bayer
Combinaison cytochimique
Recherche de l ’activité myéloperoxydasique
in situ (MPO)
• les lymphocytes sans peroxydase ne sont
pas colorés (-)
• les monocytes sont faiblement colorés (+)
• les granulocytes neutrophiles sont fortement
colorés (+++)
Taille/Cytolyse/Cytochimie (Peroxydase)
Diffraction lumineuse enregistrée sous deux angles différents (Bayer)
Miroir
Matrice
semi- PEROX
Petit angle 2/3 Lentille transparent
=
Taille
Lentille
neutrophiles
Formule sur
lymphocytes monocytes éosinophiles 7000 cellules
LUC: grandes cellules sans peroxydase
( GL stimulés ou blastes agranuleux des LA ou GLHB des MNI)
LUC N
Mo
L
E
débris
Taille/Cytolyse/Cytochimie (Peroxydase)
Canal basophiles
Histogramme
Miroir
semi- Basophiles
Petit angle 2/3 Lentille transparent
=
Taille
Lentille Laser
LUC Neutrophiles . .
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.. .
. .
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BASOS .
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. . . . .
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. . . . . . .
Mo . . .
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L . .
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. . . .
y Noyaux . . . . . .
Noyaux
monolobés Polylobés
Débris Eosinophiles
DENSITE/SEGMENTATION
Taille/Cytolyse/Cytochimie
(Coloration des Eo.) Abx Horiba
Absorbance
Matrice LMNE
Nombre
Eo . .
. . .
. . . .
. .
. .. . . .
. . . . . .
.. .
. . . . .
. . . .
. . . . . . .
. . . . . .. . . .
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Bruit Ne . .
de . . . . GCI
. . Basophiles
. . .
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fond . .
. . . . . .
Noyaux
. . . . .
. . GB
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. .
. . .
.
GCI
.
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. . . . . . .
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Volume
. . . .
. . . .
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. . . . . . .
. . .
Histogramme Ba
. .
. .
. . Ly . .
. . .
.
Mo+Ba . . .
Volume
LyA
3 Le marquage spécifique
- ADN: noyau
- ARN : réticulocytes /plaquettes réticulées
- Récepteurs membranaires : CD4/CD8
Diffraction lumineuse + Marquage
ADN/ARN
Abbott
Marquage de l’ADN à l'iodure de propidium
Laser ARGON
Granulations PMT1
Eosinophiles
Lobularité 90 Dépol.
90 Pol.
PMT2
PMT3
Complexité.
Viabilité Blcs 7
Erythroblastes
Numération
0 Taille
Analyse de la fluorescence:
Marquage des noyaux accessibles
Leucocytes
viables
Les noyaux nus des
cellules lysées et les
Leucocytes
noyaux des cellules
non viables
mortes sont
marqués par
l'iodure de
propidium
Noyaux nus
Marquage fluorescent sur ARN
Laser ARGON
Réticulocytes PMT1
PMT2
PMT3
Complexité.
7
Numération
0 Taille
Réticulocytes
Fluorescence vs Complexité
Réticulocytes : coloration au bleu de méthylène
Mesure des réticulocytes
Pré-traitement: coloration
au BCB et décoloration de
l ’hémoglobine
Réticulocytes en %
réticulocytes en nombre absolu
volume moyen
indice de maturation
Diffraction lumineuse /Fluorescence
Sysmex
• cytolyse différentielle des • Lyse des globules rouges et des
cellules nucléées autres que les plaquettes.
polynucléaires basophiles. • les membranes des globules blancs
sont rendues perméables au
• Comptage des PB par
fluorochrome. Fixation du
diffraction optique fluorochrome sur l’ARN et l’ADN
cellulaires.
• Comptage par diffraction à petit angle,
grand angle et intensité de
• fluorescence (3D).
4- Bilan
Français Anglais Unités
Nb érythrocytes Erc RBC 103/mm 3 ou 1012/L
Concentration en Hb HGB g/dL
Hémoglobine
Hématocrite Ht HCT L/L
VGM VMC MCV fL
TCMH TCMH MCH pg
CCMH CCMH MCHC L/dl de GR
Indice de distribution IDC RDW %
érythrocytaire IDR
Nb plaquettes plt PLT 109/L
Volume plaquettaire moyen VMP MPV fL