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la cintique enzymatique
7.1 les constantes de vitesse

Effet de la concentration de lenzyme [E] sur la vitesse v dune raction enzymatique, pour une concentration constante et sature se substrat [S]. Puisque la vitesse de raction est affecte par la concentration de lenzyme, mais pas par lautre ractif S, la raction bimolculaire est de pseudo ordre 1. 1

7.2 lquation de vitesse de Michaelis-Menten


Base : les vitesses initiales

Un substrat unique est converti en produit P. Le profil de la courbe de [P] en fonction du temps est linaire au dbut de la raction (pour t proche de 0), quand le substrat est peine transform. La pente tangente la courbe au temps zro donne la vitesse initiale de la raction.

On suppose un tat stationnaire


Variations des concentrations d enzyme libre [E], de substrat [S] et de complexe enzymesubstrat [ES] avec le temps. Les variations de [E], de [S] et de [ES] au dbut dune raction enzymatique montrent (1) que lapparition du produit P reflte la disparition du substrat,

(2) que [E] tombe trs vite une valeur basse constante,

(3) quentre les temps t1 et t2, la concentration du complexe enzyme-substrat reste inchange; cette condition dfinit la phase stationnaire de la raction. La concentration totale d enzyme [E]t = [E] + [ES]

Les espces prsentes sont lquilibre


Graphe de la vitesse initiale vo en fonction de la concentration initiale en substrat S.

(a) Chaque point est obtenu partir dune exprience spare. La forme est une hyperbole. faible concentration de substrat, la courbe sapproche dune ligne droite de pente abrupte. Dans cette rgion, la raction est de premier ordre par rapport au substrat. forte concentration de substrat, lenzyme est sature et la raction est dordre zro par rapport au substrat.

(b) La concentration de substrat qui correspond la moiti de la vitesse maximale sappelle la constante de Michaelis Km. Lenzyme est moiti sature quand [S] = Km.

7.3 la dtermination des paramtres cintiques


Reprsentation graphique de Lineweaver-Burk (double inverse). Cette reprsentation sobtient en inversant les deux membres de lquation de Michaelis-Menten pour lquation stationnaire.

7.4 le turnover kcat

Le turnover Kcat est la constante de vitesse dordre 1 pour la conversion de complexe ES en E + P. Il se mesure le plus facilement quand lenzyme est sature en substrat (rgion A sur la courbe de MichaelisMenten). 6

Acclrations des vitesses pour quelques enzymes

7.5 efficacit et spcificit enzymatique

Le rapport Kcat/Km est la constante de vitesse d ordre 2 pour la conversion de E + S en E + P trs faible concentration de substrat (rgion B sur la courbe de MichaelisMenten). 8

7.6 linhibition enzymatique


Inhibition comptitive classique

Un inhibiteur comptitif se fixe rversiblement une enzyme et dispute le site actif au substrat.

Inhibition comptitive non classique

Le substrat S se lie la conformation active R, empchant la liaison de linhibiteur I. Linhibiteur I se lie la conformation inactive T, empchant la liaison du substrat S.

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Inhibition incomptitive

Un inhibiteur incomptitif se fixe seulement au complexe enzymesubstrat, pas lenzyme libre. Linhibition exige que lenzyme fixe dabord S, puis I.

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Inhibition non comptitive

La liaison de I modifie la conformation du site actif. Bien que la conformation inactive puisse toujours lier S, aucun produit ne se forme

Inhibition non comptitive pure (Ki = Ki)

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Inhibition non comptitive mixte (Ki Ki)

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