Seminario 1

Introducción, biología viral y

metodología de estudio de los virus
 Postulados de Koch
Cómo saber que un agente infeccioso es
responsable de una enfermedad determinada?

i.El agente debe estar presente en todos los

casos de la enfermedad.
ii.El agente debe ser aislado desde el huésped y
crecer in vitro.
iii.La enfermedad debe ser reproducida cuando
desde un cultivo puro del agente se inocule a
un huésped susceptible.
iv.El mismo agente debe ser recuperado una
vez más desde el huésped experimentalmente
infectado.
 ¿Cómo definimos a un virus?
Parásito genético intracelular obligado de tamaño sub-microscópico.
Carecen del potencial bioquímico y genético para generar su propia
energía
Fundamentos sobre la estructura viral

1.CAPSIDE constituye la cubierta proteica que recubre y protege al

ácido nucleico, constituida por unidades estructurales.
2.CAPSOMEROS son las unidades morfológicas que representan a
las unidades estructurales.
3.La cápside en estrecha asociación con el ácido nucleico recibe el
nombre de NUCLEOCAPSIDE.
4.La nucleocápside puede estar cubierta por una ENVOLTURA de
tipo lipoproteica que contiene proteínas del huésped y del virus.
5.VIRION es la partícula viral completa y dotada de capacidad
infectante.
6.PROTEINA ESTRUCTURAL es aquella que codificada por el
virus se encuentra formando parte del virión; las NO
ESTRUCTURALES son requeridas para la replicación, pero no
están en el virión.
 Las cosas por su nombre...
•Viroides son pequeñas moléculas de RNA (200-400 nt),
circulares con estructura secundaria semejante a la del círculo
rodante, no poseen cápside ni envoltura y se asocian con
enfermedades de plantas. Son también parásitos intracelulares
obligados para su replicación.

•Virusoides son moléculas satélite, semejantes a los viroides

auqnue algunos más grandes (ej. aproximadamente 1000nt) los
cuales dependen de la replicación de un virus para multiplicarse,
aparecen como pasajeros dentro de la cápside viral.

•Priones son agentes infecciosos de enfermedades definidas que

se cree,consisten en un tipo simple de proteína sin presencia de
ácido nucleico. La proteína y el gen que la codifica se encuentran
en células sanas, no infectadas. Estos agentes están asociados
con enfermedades humanas tales como la enfermedad de
Creutzfeldt-Jakob, scrapie en ovejas y la encefalopatía bovina
espongiforme (BSE) en ganado vacuno.
Virus
=
veneno
Tamaño comparativo de los virus
 Simetría viral
Helicoidal Icosaédrica Mixta Compleja

Bacteriofago T4
Viuela

Ebola

Adenovirus
HIV

Influenza
ADENOVIRUS
VIRUS PAPILOMA
HERPESVIRUS
PICORNAVIRUS
VIRUS DE HEPATITIS B
VIRUS INFLUENZA
Virus DNA relevantes en enfermedades humanas
Virus RNA relevantes en enfermedades humanas
Clasificación
de virus DNA
Clasificación
de virus RNA
 Metodologías para el estudio de los virus
Huevos embrionados

Animales de laboratorio

Cultivos celulares
 Tipos y características de los
cultivos celulares
Cultivo primario Células diploides Línea celular
continua
•Población homogénea
• Euploidismo
(tipo celular único),
• Constituido por distintos • Único tipo celular
diploide
tipos celulares
• Aneuploidismo
• Crecimiento limitado (5 •Hasta 100 divisiones
a 10 divisiones • Crecimiento
celulares) •Uso: vacunas ilimitado
• Uso: Estudios de • Surgidas desde
virología experimental; células tumorales o
preparación de vacunas de cultivos diploides
a virus atenuado • Menos diferenciadas
(ej:Sabin)

Monocapa Suspensión
Línea continua
epitelioide:
A549
(carcinoma
humano de
pulmón)
Línea continua
fibroblástica:
BHK
(baby hamster
kidney)
BSC40 (Mono verde africano)

Control Infectadas
 A549
Control Infectadas
(Sarampión)
MT-2 (células
linfoides – HTLV-I)
Infectadas con HIV-1
Formación de
sincicios
 Membrana
corioalantoidea
Infectada con virus
viruela

Coloreada con azul

de tetrazolio
Cuantificación de virus por plaqueo
ENSAYO DE HEMAGLUTINACIÓN
(virus Influenza)
 ENSAYO DE
INHIBICIÓN DE LA
HEMAGLUTINACIÓN
(virus Influenza)
Prueba de ELISA (Enzyme linked-immunosorbent
assay)
Western blot
Criterio de interpretación
con fines diagnósticos
Virus HIV (investiga presencia
de Ac específicos)

Positivo:
2/3 bandas mayores
(anticuerpos contra
gp160/120, gp41, p24)

Indeterminado:
No cumple criterio de
positividad

Negativo:
Ausencia de bandas
Inmunofluorescencia (Ej: detección de Ags
de hantavirus)
 CMV
(Ag pp65)

HSV-1
PCR

(pesquisa de ácidos nucleicos)

Hibridación fluorescente
in-situ
PCR in situ
Detección de ARN viral (HIV) por PCR in situ
 QUANTIPLEX

HIV-1 TARGET PROBES Pre-amplifier bDNA

CAPTURE PROBES
Amplifier

15 alcaline-phosphatase
labeled DNA branches

RNA

CAPTURE

Dioxetane

SIGNAL AMPLIFICATION

CHEMILUMINESCENCE
 Cómo se estudia la
ultraestructura de un virus?
•Métodos físicos
•Determinación del tamaño por filtración (filtros
coloidales), coeficiente de sedimentación
(ultracentrífugas), contenido de ácidos nucleicos y
dispersión de la luz (espectroscopia), electroforesis de
ácidos nucleicos y proteínas del virus, estructura viral a
nivel atómico (difracción de rayos X-cristalografía,
RMN)

•Métodos químicos
•Determinación de la composición y naturaleza de los
componentes virales, y su relación para la construcción
de la partícula viral. Se estudian los lípidos, las
proteínas, y los ácidos nucleicos.

•Microscopia electrónica
•Puede superar los X 100,00. Básicamente dos tipos de
información: a) recuento total del número de partículas
virales en un preparado y, b) la apariencia/estructura de
las partículas