APOPTOSIS MUERTE CELULAR PROGRAMADA

DRA FUENTES

Definicion:
Es un proceso fisiolgico, que es normal, las clulas innecesairas hacen apoptosis. Existen los telomeros lo cuales se van perdiendo en cada divisin celular. Para eso esxitse la Telomerasa que la repone . Que puede estar sobreexpresada en clulas tumorales. Existen mecanismos apoptoticos y antiapoptoticos, como tambin receptores de muerte, que ya vamos a ir viendo. El inicio:1972 cuando Kerr, Wyllie y Currie describieron el detalle de los cambios ultraestructurales de clulas muriendo normalmente. A pesar de la importancia de sus observaciones, pasaron ms de 10 aos para que otros investigadores comenzarn a confirmarlas. Actualmente miles de expertos estn empeados en descifrar cmo? y cundo? las clulas se autodestruyen. Las aplicaciones de este conocimiento estn creando una revolucin cientfica en las ciencias biolgicas. La muerte celular no solo es la apoptosis, sino: Clasificacin de la muerte celular: recomendaciones del Comit de Nomenclatura de Muerte Celular Apoptosis : la mas conocida Autofaga : La misma celula se destruye Necrosis y oncosis Catstrofe mittica Anoikis Excitotoxicidad Degeneracin Walleriana Cornificacin Todas estas son tipos de muerte celular. Para que una celula se muera tiene que haber un dao celular TIPOS PROGRESIVOS DE INJURIA CELULAR Y SUS RESPUESTAS

Adaptacin Injuria celular activa Reversible

Atrofia, hipertrofia, hiperplasia, metaplasia Respuesta inmediata de toda la clula Prdida de ATP, hinchazn celular, liberacin de ribosomas del retculo endoplsmico rugoso, autofagia por lisosomas

Irreversible

Punto de no retorno estructural con vacuolizacin severa de las mitocondrias y aumento del calcio intracelular Muerte celular con hinchazn severa y destruccin de organelos

Necrosis

Apoptosis Autodestruccin celular con eliminacin de (muerte celular programada) poblaciones celulares no deseadas Injuria celular crnica La respuesta al estmulo persistente puede (alteraciones subcelulares) comprometer slo algunos organelos (mitocondrias) o estructuras (citoesqueleto) Acumulaciones o infiltraciones Calcificacin patolgica Agua, pigmentos, glicgeno, lpidos, protenas Calcificacin distrfica y metasttica

Dicto estos trminos: Hipertrofia: Aumetno de volumen celular Hipotrofia: disminucin de volumen celular. Atrofia: Involucin de un rgano. Displasia: Presencia de inflamacin crnica Metaplasia : cambio de tejido. Distintos tipos de muerte celular

Trmino Necrosis Autolisis Apoptosis Autofagia

Definicin Muerte celular patolgica antemortem Muerte celular post-mortem Muerte celular programada antemortem Muerte celular programada antemortem

CAMBIOS QUE SIGUEN A LA INJURIA CELULAR En una celula normal hay injuria , la cual dependiendo de la intensidad y duracin, hace cambios adaptativos (adaptaciones) que pueden llegar a ser cambios reversibles (degeneracin ) , necrosis y muerte celular. Causas de injuria y muerte celular Isquemia (disminucin del aporte sanguneo a los tejidos) Hipoxia y anoxia (disminucin o carencia de oxgeno) Agentes fsicos (distintos mecanismos) Agentes qumicos (distintos mecanismos) Agentes biolgicos (distintos mecanismos) Inmunidad (reacciones de hipersensibilidad, auntoinmunidad) Desrdenes genticos (productos alterados, acumulacin) Carga de trabajo incrementada (aumento de la temperatura, agotamiento de reservas) Envejecimiento (abiotrofia, disminucin de la capacidad de adaptacin) Resumen de causas, desarrollo y resultados de la injuria celular AGENTES ETIOLGICOS Isquemia Hipoxia y anoxia Agentes fsicos Agentes qumicos Agentes biolgicos Reacciones de hipersensibilidad Desrdenes genticos Carga de trabajo incrementada Envejecimiento VAS PATOGNICAS Dao a las membranas Respiracin anaerbica Radicales libres INJURIA CELULAR VISIBLE Adaptaciones Injuria celular reversible Injuria celular irreversible

Como vemos nosotros que ha habido injuria celular Lo vemos mediante las enzimas; Por ejemplo, la pancreatitis hace qu se liberes amilasa, y si lo encontramos, nosotros pensamos que hay dao en el pancres, igual si encontramos Transaminasas, pensamos que hay dao en hgado, cerebro y corazn, Si hay fiebres significa dao celular Aumento de frecuencia cardiaca El dolor Agentes Fsicos que producen dao celular Energa radiante (dao directo o por generacin de radicales libres) Radiacion UV Calor (dao directo o aumento de la actividad metablica de la clula) Energa elctrica (dao directo o por calor) Trauma (agudo o crnico) Fro (formacin de cristales o disminucin de la actividad metablica) Agentes biolgicos que producen dao celular Priones Virus Bacterias Hongos Rickettsias Protozoos Hemintos MUERTE CELULAR Directa: - subversin de la maquinaria biosinttica celular - Activacin de mecanismos de muerte intrnsecos de la clula (apoptosis, necrosis, otras formas de muerte) Indirecta: Por mecanismos extrnsecos -Efectos del sistema inmune (C, clulas inmunes: NK, celulas T CD4 y CD8) - isquemia Ahora veamos uno por uno: APOPTOSIS Las clulas cuentan con un programa gentico de autodestruccin que implica la activacin de enzimas que las van a destruir, es por eso que un glbulo rojo vive 120 dias La membrana celular permanece intacta a diferencia de la necrosis No da lugar a inflamacin a diferencia de la necrosis , Porque existen una secuencia exacta de fenmenos a ocurrir. CAUSAS Pueden ser fisiolgicas y patolgicas

Causas fisiolgicas Destruccin programada de clulas durante la embriognesis. Muchas estructuras del embrin han regresionado antes del nacimiento Involucin de tejidos dependientes de hormonas: o Endometrio estrgenos y progesterona o Atresia folicular gonadotrofinas o Mama lactante prolactina o Prstata hormonas masculinas Renovacin de epitelios (piel, tubo digestivo etc) Eliminacin de clulas que ya han cumplido su funcin (neutrfilos en una respuesta inflamatoria aguda y linfocitos al final de una reaccin inmunolgica Eliminacin de linfocitos T autoreactivos en el timo Eliminacin de clulas infectadas por virus, de clulas neoplsicas y de clulas de rganos trasplantados (inducida por linfocitos T citotxicos) Causas patolgicas Apoptosis inducida por lesin al DNA (efectuada por radiacin y frmacos antineoplsicos) Apoptosis inducida por protenas mal plegadas en la clula Algunos virus desencadenan la apoptosis en las clulas que infectan (hepatitis viral, SIDA) Atrofia de rganos tras obstruccin ductal (pancreas, partida y rin) Muerte celular en tumores Apoptosis acelerada por alteraciones genticas. Ejemplo: atrofia muscular espinal por mutaciones heredadas del gen SMN 1 (gen de la supervivencia de la neurona motora), situado en el cromosoma 5, cerca de este gen se ubica el gen de la proteina inhibidora de la apoptosis neuronal (NAIP), que puede estar delecionado. AHORA CUALES SON LAS ALTERACIONES MORFOLOGICAS EN LA APOPTOSIS -Encogimiento celular y aumento de la densidad del citoplasma por prdida de agua -Condensacin de la cromatina en masas que se pegan a la membrana nuclear

CARACTERISTICAS ULTRAESTRUCTURALES DE LA APOPTOSIS. ALGUNOS FRAGMENTOS NUCLEARES MUESTRAN SEMILUNAS PERIFERICAS DE CROMATINA COMPACTADA MIENTRAS QUE OTROS SON UNIFORMEMENTE DENSOS

Muerte Celular: Necrosis vs. Apoptosis ? RECUERDEN ESTO! Necrosis Muerte no fisiolgica. Proceso pasivo que no requiere la sntesis de protenas. No se produce durante el desarrollo. Alteracin en la permeabilidad celular dao a mltiples organoides, cambios nucleares relativos. Se vierte el contenido celular. Inflamacin. Apoptosis Muerte fisiolgica. Proceso activo que requiere la sntesis de protenas. Se produce durante el desarrollo. Evidentes cambios nucleares durante el proceso. No se vierte el contenido celular (Cuerpos Apoptticos) No hay Inflamacin. DIFERENCIAS ENTRE NECROSIS Y APOPTOSIS

ALTERACIONES MORFOLOGICAS EN LA APOPTOSIS La dicotoma necrosis / apoptosis no es tan clara en la naturaleza porque existen casos de muerte celular con caractersticas tanto de necrosis como de apoptosis. Formacin de protrusiones citoplasmticas y cuerpos apoptticos Fagocitosis de las clulas apoptticas por macrfagos u otras clulas vecinas. Estas ltimas migran o proliferan para reemplazar el espacio ocupado por la clula que sufri apoptosis EN LA CLULA LIBERACIN DE SEALES DE MUERTE CELULAR MODULACIN DE ACTIVADORES DE MUERTE CELULAR MODULACIN DE EFECTORES DE MUERTE CELULAR FRAGMENTACIN NUCLEAR

 FRAGMENTACIN CELULAR DEGRADACIN FAGOCITOSIS SIN INFLAMACIN EN EL ORGANISMO EN EL DESARROLLO EN EL CONTROL DE LA HOMEOSTASIS TISULAR EN ALGUNAS ENFERMEDADES

EVENTOS COMUNES EN INJURIA Y MUERTE CELULAR

EVENTO

COMENTARIOS

Deplecin de ATP

Disminucin o cese de la produccin de ATP (mitocondrial, glicoltico o del ciclo de Krebs), con hinchazn celular, sntesis proteica disminuida, transporte activo disminuido, lipognesis. Todos estos cambios contribuyen a la alteracin de la membrana celular.

Formacin de especiesLa hipoxia es clave en la progresin de la injuria celular en la reactivas derivadas isel emia; las especies reactivas de oxgeno (O -, H O , OH) causan d qu 2 2 2 oxgeno destruccin de la membrana y estructura celular.

Incremento del calciLa concentracin citoslica de calcio es muy baja en condiciones o intracelular y prdida de normales. La injuria incrementa dicha concentracin, con la homeostasis del calcio sacoplamiento de la respiracin-fosforilacin mitocondrial y de activacin de enzimas hidrolticas.

Alteraciones de la rdida de la permeabilidad selectiva de la membrana en todos los P permeabilidad de la tipos de injuria celular. membrana

ALTERACIONES MORFOLOGICAS EN LA APOPTOSIS La integridad mantenida en las membranas celulares permite que se siga sintetizando ATP (mitocondrias) y proteinas (RER), lo cual es indispensable porque la clula invierte energa encaminandose hacia la apoptosis y requiere sintetizar una serie de proteinas que necesita para morir. La estabilidad de las membranas celulares tambin evita la ruptura de lisosomas y la digestin de componentes celulares tpico de la necrosis. Activacin de proteasas especiales denominadas CASPASAS, significa cistena (la enzima tiene cistena en su centro activo), ASP significa asprtico (escinden las protenas despus de residuos de cido asprtico) Las caspasas existen normalmente en las clulas como pro-enzimas (no activadas) Las caspasas actan sobre las lminas, el armazn nuclear, el citoesqueleto y las DNAasas Las lminas son el recubrimiento externo de la envoltura nuclear, su desensamblaje causa encogimiento del nucleo Las caspasas tambin inactivan FAKs (quinasas de adhesin focal), lo cual interrumpe la adhesin celular, con lo que se desprende la clula apoptsica de sus vecinas Entre las protenas del citoesqueleto afectadas por caspasas se encuentran los filamentos intermedios, la actina, la tubulina y la gelsolina, su desactivacin produce cambios en la forma celular El DNA se fragmenta en NUCLEOSOMAS (segmentos de 180 a 200 pares de bases o un mltiplo de estos nmeros), por medio de endonucleasas dependientes de Ca y Mg, dando un patrn en escalera en la electroforesis, a diferencia del patrn continuo de la necrosis (en la que los segmentos de DNA tienen un tamao variable). Estas endonucleasas son activadas por caspasas

ELECTROFORESIS EN GEL DE AGAROSA DEL DNA EXTRAIDO DE CELULAS EN CULTIVO (TINCION CON BROMURO DE ETIDIO, FOTOGRAFIA CON LUZ ULTRAVIOLETA). LINEA A: CULTIVO CONTROL. LINEA B: APOPTOSIS POR CALOR. LINEA C: NECROSIS.

 Reconocimiento fagoctico: cambio de orientacin de fosfolpidos de la membrana tales como la fosfatidilserina de la superficie interna a la superficie externa (por prdida del glicoclix), este cambio permite a la membrana celular fijar colorantes tales como la anexina V, que permiten reconocer a las clulas apoptticas Existe una revoltasa de fosfolpidos responsable del cambio de orientacin de la fosfatidil serina Tambien la trombospondina (glucoproteina de adhesin) se expresa en la superficie externa de las clulas apoptticas, de modo que sirve como molcula de reconocimiento fagoctico Las molculas de reconocimiento fagoctico permiten la fagocitosis sin liberacin de componentes intracelulares al espacio extracelular (lo que desencadenara inflamacin). Tambin se producen enlacen cruzados entre proteinas en el citoplasma por accin de la enzima transglutaminasa. La apoptosis presenta una fase de iniciacin y una fase de ejecucin. La fase de iniciacin puede tener dos orgenes: Va extrnseca (iniciada en un receptor de la membrana celular) Va intrnseca (o mitocondrial) VIA EXTRINSECA Los receptores de la membrana celular que median la apoptosis son miembros de la familia del receptor del factor de necrosis tumoral (FNT). Tienen una zona de la molcula ubicada en la membrana celular que se une a un ligando y una zona intracitoplasmtica denominada dominio de muerte.

INICIACION DE LA VIA EXTRINSECA DE LA APOPTOSIS POR ACTIVACION DE UN RECEPTOR DE LA MEMBRANA CELULAR, EN ESTE CASO FAS.

El dominio de muerte citoplasmtico se une a una proteina adaptadora que tambin tiene un dominio de muerte denominada FADD (fas associated death domain). FADD activa a la caspasa 8 o 10 iniciando la apoptosis

 Los receptores de muerte mejor conocidos son el receptor 1 del factor de necrosis tumoral (TNFR1) y la molcula fas (CD95). Las molculas que conducen el mensaje de muerte son por lo tanto FNT y el ligando de Fas La molcula FLIP puede unirse a la pro-caspasa 8 y bloquearla por su incapacidad para activarla. Algunos virus producen FLIP para evitar que la clula que estn infectando se encamine a la apoptosis VIA INTRINSECA O MITOCONDRIAL Se desencadena por alteraciones de la permeabilidad mitocondrial, saliendo de esta organela molculas proapoptticas que se dirigen al citosol. Esto sucede por estmulos internos tales como el dao gentico irreparable, concentraciones elevadas de calcio en el citosol o el stress oxidativo grave (grandes cantidades de radicales libres en el citosol) En esta va la familia de protenas bcl-2 tiene gran importancia. Algunos miembros de esta familia son proapoptticos y otros antiapoptticos Los miembros antiapoptticos mas importantes son el Bcl-2 y el Bcl-xL, de menor importancia son Mcl-1, Bcl-w y A1. Los miembros proapoptticos mas importantes son Bax, Bak y Bim, otros de menor importancia son Bcl-xS, Bad, Bik, Bid, y Bok. Cuando las clulas son estimuladas por factores de crecimiento u otras seales de supervivencia aumenta la sntesis de los miembros antiapoptticos de la familia Bcl-2. Cuando las clulas no reciben seales de supervivencia o estn sometidas a stress, se producen canales de transicin de permeabilidad mitocondrial, que aumentan la permeabilidad de las membranas mitocondriales saliendo el citocromo c al citosol y perdiendo Bcl-2 la membrana mitocondrial externa. El citocromo c en el citosol se une a Apaf-1 Apoptosis activating factor 1 y el complejo activa a la caspasa 9 que es la caspasa de iniciacin de la va intrnseca. El Bcl-2 puede inhibir directamente la activacin de Apaf-1 Otras proteinas mitocondriales tales como el factor inductor de la apoptosis (AIF), salen al citosol y bloquean a diversos inhibidores de la apoptosis.

VIA INTRINSECA (MITOCONDRIAL) DE LA APOPTOSIS (imagen anterior) La fase de ejecucin est mediada por caspasas diferentes a las de iniciacin, las mas importantes son la caspasa 3 y la caspasa 6 Las caspasas de ejecucin actan sobre el citoesqueleto, sobre las protenas de la matriz nuclear y sobre las protenas implicadas en la transcripcin, replicacin y reparacin del DNA. Cuando el DNA est daado se acumula p53 en la clula y detiene el ciclo celular en G1 esperando la reparacin, si esta no es posible la clula se encamina a la apoptosis probablemente porque p53 estimula la sntesis de molculas pro-apoptticas. Recuerden que el p53 es el guardian del genoma.

P53, REPARACION DEL DNA Y APOPTOSIS FNT Y SEALES DE APOPTOSIS Y SUPERVIVENCIA El FNT puede en ocasiones no conducir a la clula a la apoptosis sin mas bien estimular su supervivencia. A diferencia de la apoptosis iniciada por Fas, la apoptosis iniciada por FNT requiere de una segunda molcula adaptadora (TRADD), que tambin tiene un dominio de muerte. TRADD se une a FADD por medio del dominio de muerte y en adelante el camino es el mismo que en el caso de Fas. Cuando FNT va a estimular seales de supervivencia el adaptador que se une a TRADD es TRAF (factores asociados al receptor del FNT).

 TRAF estimula al al factor nuclear kB (FN-kB) que es un factor de transcripcin importante en la supervivencia celular TRAF estimula a este factor degradando a su inhibidor (IkB). APOPTOSIS MEDIADA POR EL LINFOCITO T CITOTXICO Los linfocitos T citotxicos reconocen los antgenos extraos a nuestro organismo situados en las membranas celulares y en respuesta segregan perforina, que forma poros en la membrana celular por los que ingresa la Granzima B (proteasa de serina similar a caspasas), activando directamente la fase de ejecucin de la apoptosis.

MANIFESTACIONES SISTMICAS DE LA INJURIA CELULAR

MANIFESTACION Fiebre CAUSA Liberacin de pirgenos endgenos (interleuquina-1, factor de necrosis tumoral alfa) por macrfagos; accin de pirgenos exgenos bacterianos; respuesta inflamatoria aguda. Incremento de los procesos oxidativos provocados por la fiebre.

Aumento de la frecuencia cardaca

Leucocitosis (aumento de leucocitos circulantes) Dolor

Incremento del nmero de leucocitos circulantes en forma proporcional a la severidad de la infeccin. Varios mecanismos, como liberacin de bradiquinina, obstruccin, presin. Liberacin de enzimas desde clulas, que depende del peso molecular de stas, de la gradiente de concentracin, del metabolismo y su velocidad de excrecin. Liberada de eritrocitos, hgado, rin y msculo esqueltico Liberada de msculo esqueltico, encfalo y corazn Liberada de corazn, hgado, rin, msculo esqueltico y pncreas Liberada de hgado, rin y corazn

Presencia de enzimas intracelulares en el lquido extracelular Isoenzimas de lactato deshidrogenasa (LDH) Isoenzimas de creatina kinasa (CK) Aspartato aminotrasferasa (AST/SGOT) Alanina aminotranferasa (ALT/SGPT) Fosfatasa alcalina (ALP) Amilasa Aldolasa

Liberada de hgado y hueso Liberada de pncreas Liberada de msculo esqueltico y corazn