Tesis Total

UNIVERSIDAD NACIONAL Campus Omar Dengo FACULTAD DE CIENCIAS EXACTAS Y NATURALES ESCUELA DE QUMICA
Evaluacin del efecto insecticida de aceites esenciales selectos, sobre mosca blanca (Bemisia tabaci)
Trabajo sometido a consideracin del Tribunal Examinador de la Escuela de Qumica, como requisito parcial para optar por el grado de Licenciatura en Qumica Industrial
Jos Vinicio Acua Corrales
Dr. Luko Hilje Quirs Dr. Victor Cartn Leiva M.Sc. Marco Calvo Pineda
Heredia
Mayo, 2008
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Este trabajo de graduacin fue __________________ por el Tribunal Examinador de la Escuela de Qumica de la Universidad Nacional, como requisito parcial para optar al grado de Licenciatura en Qumica Industrial.
Miembros del Tribunal del trabajo final de graduacin:
NOMBRE
FIRMA
Decana (o)
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Director de la Escuela ___________________
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Tutor
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Asesor1
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Asesor2
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Lector
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Proponente
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Resumen
Bemisia tabaci, tambin llamada mosca blanca, es una de las plagas que causan mayores prdidas mundialmente. Los cultivos que afecta son al menos 26, entre los cuales destacan el tomate y el chile dulce, ya sea como plaga directa (magnitud de poblaciones) o como vector de virus, de los cuales se han reportado 50 tipos. En decenios pasados se han utilizado insecticidas de amplio espectro, pero B. tabaci ha desarrollado resistencia a la mayora de ellos.
Bajo el concepto de un manejo integrado de plagas (M.I.P.), se desarroll esta investigacin, con el objetivo de evaluar el uso de aceites esenciales como agentes insecticidas contra B. tabaci en condiciones de invernadero. Este mtodo no contaminante podra sustituir el uso de insecticidas convencionales, condicin que podran aprovechar los productores de hortalizas que quieran posicionar sus productos en mercados locales o internacionales.
Para lograr lo propuesto, se realiz la evaluacin insecticida de nueve aceites esenciales derivados del follaje de albahaca (Ocimum basilicum), canela (Cinnamomun zeylanicum), clavo de olor (Eugenia caryophyllata), juanilama (Lippia alba), menta de palo (Satureja viminea), a partir de semillas, el culantro (Coriandrum sativum), perejil (Petroselinum sativum) y botones florales de clavo de olor (Eugenia caryophyllata). Los aceites esenciales de canela, hojas de clavo y menta de palo presentaron un mayor efecto insecticida, a las concentraciones de 2,5%, 10,0% y 10,0% respectivamente. Se
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observ un efecto como de derribo (knock down), cuando se los de canela, hojas de clavo y en menor proporcin, albahaca.
Posteriormente, los aceites esenciales con mayor efecto insecticida fueron analizados por cromatografa de gases acoplado a un detector de masas, para ser identificados sus componentes por comparacin de sus espectros con la base de datos N.I.S.T. (National Institute of Standards and Technology) del ao 2005, as como el valor porcentual de cada componente. Se realiz una segunda identificacin por cromatografa de gases acoplado a un detector F.I.D., por comparacin de los ndices de retencin Kovats obtenidos con el valor terico, los cuales fueron calculados utilizando los etil esteres de 1-12 tomos de carbono.
Para los aceites esenciales de hojas de canela y clavo de olor, se identific el fenilpropanoide eugenol como principal componente y para el aceite esencial de menta de palo fue la pulegona, un monoterpeno oxigenado. El alto contenido de estos compuestos en los aceites esenciales, sugiere que fueron los que provocaron el efecto insecticida detectado.
Dedicatoria
Dedico este trabajo a mi familia, por su apoyo en todo momento. A mis padres por su comprensin, paciencia y amor. A mi hermanos, por respaldarme siempre.
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Agradecimiento
A Dios, por respaldarme y permitirme culminar mis estudios superiores. A mis padres, por su apoyo, confianza, dedicacin y amor. Gracias a ellos aprendemos los valores del esfuerzo, emprendimiento, tenacidad y perseverancia. Al Dr. Luko Hilje, tutor de tesis, por su confianza, amistad, dedicacin, paciencia y apoyo incondicional. Al M.Sc. Marco Calvo, por su ayuda en todo momento, sus enseanzas y amistad. A las autoridades del CATIE por el prstamo de las instalaciones para realizar los experimentos entomolgicos. Al Dr. Vctor Cartn, por su asistencia e ideas en el desarrollo de la tesis. Al seor Arturo Ramrez, por su cooperacin y apoyo en el desarrollo de los experimentos entomolgicos en el CATIE. A Lic. Marco Mata Sand, por su colaboracin y grandes aportes en el anlisis de los aceites esenciales. A los gerentes de ASTEK, Luis Arturo Quirs y Elas Quirs por la donacin de los aceites esenciales para los experimentos entomolgicos. Al Dr. Romano Andrade, por su ayuda y el tiempo dedicado al anlisis de los aceites esenciales. Al gerente general de MALUQUER, Enrique Vallcaneras, por el prstamo del equipo de cromatografa de gases con detector de masas y la base N.I.S.T. 2005. Al seor David Barrantes, por su colaboracin en el anlisis de los aceites esenciales.
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ndice General
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Resumen Dedicatoria
. . ...
iii v vi vii ix x xii
Agradecimientos ndice General
ndice de cuadros ndice de figuras ndice de anexos
Captulo I: Introduccin. 1.1 Antecedentes y justificacin 1.2 Fundamento terico 1.3 Objetivos 1 6 30
Captulo II: Parte Experimental. 2.1 Localizacin del material vegetal 2.2 Equipos 31 32 32 33
...
2.3 Materiales y reactivos .. 2.4 Metodologa .
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Captulo III: Resultados. 3.1 Obtencin de los aceites esenciales 3.2 Evaluacin insecticida . 40 40 47
3.2 Anlisis por cromatografa de gases
Captulo IV: Discusin.
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Captulo V: Conclusiones y recomendaciones. 5.1 Conclusiones . 67 . 68
5.2 Recomendaciones
Captulo VI: Referencias.
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Captulo VII: Anexos.
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ndice de cuadros
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Cuadro 1. Componentes del aceite esencial de C. zeylanicum hojas de diferente origen geogrfico 23
Cuadro 2. Aceites esenciales utilizados en el tamizado para encontrar el efecto insecticida sobre B. tabaci.. 32
Cuadro 3. Identificacin y cuantificacin de los principales componentes del aceite esencial de hojas de canela (Cinnamomum zeylanicum), de origen comercial 48
Cuadro 4. Identificacin y cuantificacin de los principales componentes del aceite esencial hojas de clavo de olor (Eugenia caryophyllata), de origen comercial... 50
Cuadro 5. Identificacin y cuantificacin de los principales componentes del aceite esencial de menta de palo (Satureja viminea), obtenido por hidrodestilacin 52
ndice de figuras
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Figura 1. Dispositivo experimental para la evaluacin del efecto insecticida de aceites esenciales sobre B. tabaci. 35
Figura 2. Aplicacin de las concentraciones de los aceite esenciales para la evaluacin del efecto insecticida sobre B. tabaci.. 35
Figura 3. Mortalidad de los adultos a las 48 horas de aplicados los aceites esenciales de culantro (C. sativum) (A), spearmint (M. spicata) (B) y clavo brotes (E. caryophyllata) (C), sobre B. tabaci. Los promedios seguidos por una misma letra no difieren estadsticamente entre s segn Duncan (p=0,05) 42
Figura 4. Mortalidad de los adultos a las 48 horas de aplicados los aceites esenciales de albahaca (O. basilicum) (A), juanilama (L. alba) (B), y perejil (P. sativum) (C), sobre B. tabaci. Los promedios seguidos por una misma letra no difieren estadsticamente entre s segn Duncan (p=0,05) 44
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Figura 5. Mortalidad de los adultos a las 48 horas de aplicados los aceites esenciales de canela (C. zeylanicum) (A), Clavo hojas (E. caryophyllata) (B) y menta de palo (S. viminea) (C), sobre B. tabaci. Los promedios seguidos por una misma letra no difieren estadsticamente entre s segn Duncan (p=0,05) 45
Figura 6. Corrida cromatogrfica con deteccin de masas de los componentes del aceite esencial de hojas de canela (C. zeylanicum), identificado por comparacin de las masas con la base de datos NIST 2005.. 49
Figura 7. Corrida cromatogrfica con deteccin de masas de los componentes del aceite esencial de hojas de clavo de olor (E. caryophyllata), identificado por comparacin de las masas con la base de datos NIST 2005. 51
Figura 8. Corrida cromatogrfica con deteccin de masas de los componentes del aceite esencial de menta de palo (S. viminea), identificados por comparacin de las masas con la base de datos NIST 2005 53
Figura 9. Estructuras de los principales compuestos qumicos identificados en los aceites esenciales de C. zeylanicum, E. caryophyllata hojas y S. viminea; eugenol (A), cariofileno (B), -cariofileno (C), bencil benzoato (D), eugenil acetato (E), linalol (F),safrol (G), pulegona (H), -menth-3-en-8-ol (I), allo-aromadendreno (J), xido de cariofileno (K), d-limoneno (L); (Base de datos NIST 2005). 54
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ndice de anexos
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Anexo 1. Anlisis de la mortalidad de los adultos mediante la prueba de Duncan para el aceite esencial de albahaca 78
Anexo 2. Anlisis de la mortalidad de los adultos mediante la prueba de Duncan para el aceite esencial de clavo de olor. 79
Anexo 3. Anlisis de la mortalidad de los adultos mediante la prueba de Duncan para el aceite esencial de juanilama. 80
Anexo 4. Anlisis de la mortalidad de los adultos mediante la prueba de Duncan para el aceite esencial de perejil... 81
Anexo 5. Anlisis de la mortalidad de los adultos mediante la prueba de Duncan para el aceite esencial de menta de palo.. 82
Anexo 6. Anlisis de la mortalidad de los adultos mediante la prueba de Duncan para el aceite esencial de canela.. 83
Anexo 7. Anlisis de la mortalidad de los adultos mediante la prueba de Duncan para el aceite esencial de botones florales de clavo de olor... 84
Anexo 8. Anlisis de la mortalidad de adultos mediante la prueba de Duncan para el aceite esencial de culantro.. 85
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Anexo 9. Anlisis de la mortalidad de adultos mediante la prueba de Duncan para el aceite esencial de spearmint 86
CAPITULO I
Introduccin
1.1 Antecedentes y justificacin
La mosca blanca (Bemisia tabaci, Homoptera: Aleyrodidae), es un insecto muy pequeo, del tamao de una cabeza de alfiler, que casi siempre se encuentra debajo de las hojas. Su aparato bucal es una especie de aguja muy fina y pequea para chupar la savia de las plantas (Hilje, 2001). Actualmente se le considera la principal plaga agrcola mundial, causando prdidas anuales de varias decenas de millones de dlares (Oliveira et. al., 2002).
Dicha plaga afecta al menos 26 cultivos en el continente americano, ya sea como plaga directa (debido a la magnitud de sus poblaciones) o como vector de virus, de los cuales al menos 50 tipos se han reportado (Markham et al., 1996).
En Amrica Central, y en Costa Rica en particular, su principal dao se debe a geminivirus (begomovirus), entre los que sobresalen el virus del mosaico dorado del frijol (BGMV) (Morales, 1994) y del moteado amarillo del tomate (ToYMoV) (Polston y Anderson, 1997); no obstante, en los ltimos aos ste ha sido desplazado casi por completo por el Sinaloa Tomato Leaf Curl Virus (STLCV), de origen forneo (L. Hilje, comunicacin personal).
En los decenios de los 80 y 90 los agricultores utilizaron insecticidas en amplio espectro (piretroides, organofosforados, carbamatos, organoclorados, y algunas mezclas de productos), pero B. tabaci desarroll resistencia a la mayora de stos. Ante esta situacin, aparecieron en el mercado insecticidas con nuevos modos de accin. Entre ellos estn los neonicotinoides, que actan sobre los receptores de los neurotransmisores (acetilcolina), as como varios reguladores del crecimiento (que actan sobre la cutcula de los insectos), de los cuales la buprofezina es un inhibidor de la sntesis de quitina, mientras que el piriproxifn es un imitador de la hormona juvenil; sin embargo ya hay evidencias de desarrollo de resistencia en varios pases (Palumbo et al., 2001).
En cuanto a opciones no contaminantes para el manejo de B. tabaci, es comn el uso de trampas amarillas adhesivas (de plstico o cartn), pues los adultos son fuertemente atrados por las longitudes de onda asociadas con dicho color. En realidad, prefieren, en orden decreciente, el verde-amarillento, amarillo, rojo, anaranjado-rojizo, verde oscuro y morado (Van Lenteren y Noldus, 1990). Aunque dicho mtodo en general funciona bien, sobre todo en ambientes cerrados, como los invernaderos, tiene varios inconvenientes. En primer lugar, las poblaciones de B. tabaci pueden ser tan altas que pueden saturar las trampas en pocos das. En segundo lugar, los fuertes vientos en la estacin seca (cuando el problema con esta plaga es mayor) acarrean polvo que se adhiere a las trampas, disminuyendo su capacidad de captura. Por ltimo, la manipulacin de las trampas es incmoda para los agricultores, debido al pegamento, que se adhiere a las manos y brazos, sobre todo si se cambian con mucha frecuencia.
Estos problemas podran ser superados reemplazando el pegamento por un insecticida que se impregne bien a la trampa y que acte por contacto, de modo que los adultos mueran al posarse sobre sta. Pero, tambin, para ganar en eficacia y persistencia, as como reducir los costos de produccin (menores gastos, tanto en trampas como en mano de obra para cambiarlas) sera ideal contar con un insecticida de liberacin controlada.
En experimentos exploratorios en el Centro Agronmico Tropical de Investigacin y Enseanza (CATIE), realizados en un invernadero, se ha determinado que el endosulfn aplicado a pequeas trampas confeccionadas con esponja delgada amarilla mata rpidamente a los adultos (L. Hilje, indito). Sin embargo, sera deseable sustituir dicho insecticida por algn producto de origen vegetal. Entre los casi 30 extractos vegetales (provenientes de follaje, semillas, bulbos, botones florales, frutos y aceites esenciales) evaluados hasta ahora en el CATIE, varios disuaden la alimentacin en los adultos de B. tabaci (Hilje, 2001), pero ninguno causa mortalidad.
No obstante, en Corea del Sur, Choi et al. (2003) evaluaron la toxicidad de 53 aceites esenciales sobre diferentes estados de desarrollo de una especie de mosca blanca afn, Trialeurodes vaporariorum, y observaron que un grupo de aceites pertenecientes a plantas de la familia de las Lamiaceae mostraron un fuerte efecto insecticida, con la metodologa empleada por ellos. En un estudio preliminar del aceite esencial de Mentha piperita, se evalu el efecto insecticida sobre adultos de B. tabaci, con algn grado de xito (L. Hilje, comunicacin personal), lo cual sugiere que hay un potencial importante con ste y otros aceites esenciales.
Por tanto, en esta investigacin se evalu la actividad insecticida de un grupo selecto de aceites esenciales. Dichos aceites podran ser utilizados en el campo o en ambientes protegidos (invernaderos) en trampas con algn dispositivo de liberacin controlada.
En este ltimo caso hay oportunidades inslitas para hacer aportes innovadores, pues los invernaderos representan una modalidad productiva que se ha impulsado mucho en aos recientes en Costa Rica. Desarrollada inicialmente para rubros de exportacin muy rentables (helechos, flores, plantas ornamentales y semillas), se ha expandido hacia hortalizas, de las cuales hay 180 ha, en manos de 340 productores, entre las que destacan el tomate y el chile dulce (Comisin Nacional para la Produccin Agrcola en Ambientes Protegidos, 2003). Esta opcin es muy atractiva debido al incremento de la productividad en dichos ambientes, la mayor estabilidad de los precios en el mercado, la disminucin de los costos de produccin (al tener menos problemas con plagas) y el aprovechamiento de nichos de mercados especficos y favorables.
Tanto el tomate como el chile dulce son seriamente afectados por B. tabaci, por lo que hay una oportunidad nica de investigacin. As, el uso de mtodos de manejo que rentables y no contaminantes permitira aprovechar nichos de mercado atractivos, pudindose mejorar el posicionamiento y la competitividad de las hortalizas producidas en invernaderos, en los mercados internacionales, cumpliendo las normas y restricciones que stos demandan, en aspectos tales como la oferta constante, calidad, inocuidad, restricciones fitosanitarias, gestin social y proteccin ambiental (Comisin Nacional para la Produccin Agrcola en Ambientes Protegidos, 2003).
Este trabajo pretende responder a la necesidad en investigacin y manejo de B. tabaci, como parte de la Estrategia Nacional en ambiente protegidos.
1.2 Fundamento terico
1.2.1 Cambio de paradigma en la agricultura
Durante los ltimos aos ha existido una preocupacin por los sistemas agrcolas predominantes en los ltimos decenios, basados en el desarrollo de cultivos de monocultivo de forma intensiva y el uso desmedido de plaguicidas sintticos. Estos ltimos han provocado resistencia y aparicin de nuevas plagas, por su uso constante (Borlaug y Dowswell, 2002).
Los plaguicidas sintticos representaron la base fundamental del combate de plagas durante la segunda mitad del siglo XX. Es sabido que su empleo produce la contaminacin de los agroecosistemas, con las conocidas afectaciones que causan sobre el suelo, los alimentos (residualidad), la fauna benfica y el hombre. La exposicin a bajos niveles de plaguicidas durante perodos prolongados puede producir efectos crnicos en los humanos. Los efectos comprobados ms importantes son: daos en el sistema nervioso, malformaciones congnitas, efectos mutagnicos y cncer, daos en piel, pulmones, ojos y sistema inmunolgico y esterilidad masculina (Henao, 2000).
En 1996, los plaguicidas ms frecuentemente asociados con intoxicaciones fueron organofosforados, carbamatos y bipiridilos (Paraquat) (Agne et al., 1999). De las intoxicaciones, 48% fueron por ingestin del producto y del 52% restante la mayor parte se produjo por absorcin por la piel o inhalacin. El 38,5% fueron intoxicaciones laborales y
un 33% como accidentes. Por otro lado, en estudios de residualidad realizados en hortalizas en los mercados nacionales se determin que el 37% contenan residuos y cerca del 6% violaban el lmite mximo permitido en Costa Rica.
El manejo integrado de plagas (MIP) y la agricultura orgnica forman parte del cambio de paradigma en la agricultura de campo y en invernaderos (Henao, 2000).
En el manejo integrado de plagas (MIP) se combinan varios mtodos, para reducir las plagas a niveles que no causen prdidas de importancia econmica y adems no provoquen impactos negativos en el ambiente y en la salud humana. Tres principios son importantes en la definicin del MIP, los cuales son la convivencia con las plagas, la prevencin y sostenibilidad (Hilje, 2005).
En la convivencia con B. tabaci, es necesario aceptar que siempre habr daos y prdidas (Hilje, 2005). En su manejo podran utilizarse umbrales econmicos o de accin, aunque los daos a bajas densidades del vector descartan este mtodo. Por otro lado, se podra usar la fenologa del cultivo y aplicar un mtodo de manejo solamente cuando el cultivo sea ms susceptible. Por ejemplo en el tomate, el perodo crtico (infeccin con geminivirus) son los primeros 50-60 das. Este manejo en los primeros das de cultivo podra ahorrar dinero y reducir la contaminacin con insecticidas.
En la prevencin de B. tabaci, se han utilizado prcticas agrcolas preventivas, cultivos resistentes a virus, control biolgico y se est investigando en el uso de sustancias de origen botnico con propiedades repelentes o disuasivas. El principio de la sostenibilidad, se refiere al uso racional de los recursos naturales, su aprovechamiento econmico y
proteccin para las generaciones futuras (Hilje, 2005). Para esto se requiere mtodos de control ambientalmente inocuos, con factibilidad econmica y fcil aplicacin. As el MIP, plantea la un mayor necesidad de conocer mejor la biologa, ecologa de B. tabaci y de los virus que transmite y de investigar nuevos mtodos de manejo.
1.2.2 Produccin de hortalizas en invernaderos
La razn de los sistemas de invernadero es proteger de condiciones ambientales adversas (lluvias fuertes, viento, temperaturas extremas, insectos y enfermedades) y prolongar el perodo de cultivo de hortalizas delicadas, frutales y plantas ornamentales (CIA, 2001).
Este modelo de cultivo se desarroll inicialmente en pases fros, para extender la temporada de crecimiento y ampliar el nmero de cultivos que se podan producir bajo condiciones locales. Pero con la aparicin de importantes mercados internacionales de productos hortcolas, en Latinoamrica han surgido numerosas empresas de agricultura protegida, orientadas hacia la exportacin (Mabbett, 2001).
Entre las ventajas de esta tcnica destacan, un aumento significativo en los rendimientos y la calidad del producto, precocidad de la cosecha, posibilidad de obtener cosechas fuera de poca, ahorro de agua, mejor manejo de plagas, siembra de variedades selectas con rendimientos mximos, la posibilidad de obtener dos o tres cosechas al ao y de permitir la incorporacin de especies tradicionalmente cultivadas a campo abierto. La produccin en
ambientes protegidos tambin tiene algunas desventajas, como lo son el elevado costo inicial de la infraestructura, fragilidad y susceptibilidad a deteriorarse en el tiempo, altos costos de mantenimiento y de operacin, adems de requerir una alta especializacin empresarial y tcnica de las personas que se dedican a esta actividad productiva (Comisin Nacional para la Produccin Agrcola en Ambientes Protegidos, 2003).
No obstante, estos ambientes proporcionan tambin condiciones ptimas para el desarrollo y la diseminacin de plagas (Mabbett, 2001). El cultivo en invernaderos es favorable para introduccin y persistencia de plagas exticas, ya sean insectos, caros o patgenos, pues las condiciones controladas de los invernaderos suelen ser las mismas en numerosas regiones geogrficas. De igual manera, el transporte rpido de estos productos de gran valor favorece el traslado de las plagas de un continente a otro, a pesar de todas las reglamentaciones cuarentenarias (Mabbett, 2001). El cultivo en invernaderos tiende a agudizar los problemas de plagas, a la vez que el control con plaguicidas de gran residualidad se ve ms limitado dentro de esos recintos. Por fortuna, la produccin intensiva de cultivos de gran valor ha originado el empleo tambin intenso del control biolgico, mediante depredadores y parasitoides.
La transmisin de virus mediante de insectos vectores como la mosca blanca (B. tabaci) constituye un problema epidemiolgico de gran importancia, que provoca ms de la mitad de los costos en tratamientos fitosanitarios dentro de la agricultura protegida (Larrain, 1992; Fernndez et. al., 2002). Por ejemplo, en Mxico se ha reportado a B. tabaci como la plaga ms comn en la produccin de tomate bajo invernadero, presentando altas poblaciones en los primeros 50 das desde la siembra (Prez, 1998).
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En Costa Rica existe una Estrategia Nacional (Comisin Nacional para la Produccin Agrcola en Ambientes Protegidos, 2003) para el desarrollo de la agricultura en este tipo de ambientes. En un inicio la introduccin de esta modalidad de produccin fue para plantas ornamentales. No obstante, a partir de 1996, debido a los problemas productivos, costos y comportamiento de precios de actividades como hortalizas, caf y otras, esta tecnologa empiez a adaptarse por pequeos y medianos productores.
En un estudio realizado por esta comisin en el ao 2003, se registran 180 ha en todo el pas y se identificaron 340 productores y 63 diferentes cultivos, de los cuales el chile y tomate fueron los principales. En el Valle Central, 51% de los cuales se localizan en la Regin Central Occidental (cantones de San Isidro y Beln en Heredia y de Grecia, Naranjo, Palmares, Valverde Vega, San Ramn y Alfaro Ruiz en Alajuela), y el 38% en la Central Oriental (La Unin, Cartago, Oreamuno, Jimnez, Turrialba, Paraso Los Santos y Coronado), son las zonas de relevancia en este tipo de modelo productivo. Para el destino de los productos, el 84% se comercializa en el mercado local y un 16% se exporta. En este estudio se seala como los principales problemas la fertilizacin y las plagas (Bemisia spp., trips, caros y el hongo Botrytis).
Existe en la actualidad un incremento de la produccin bajo ambientes protegidos, debido a los beneficios econmicos, dinmica y exigencias de los mercados tanto nacionales como internacionales. El sistema de ambientes protegidos se propone adems como una alternativa de desarrollo para el sector agrcola nacional frente a las firma de tratados de libre comercio. Hasta el momento, la tecnologa aplicada en dichos ambientes es similar a
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la usada en el campo, debido a un carencica en la oferta de tecnologa adaptada a los trpicos, orientada a la calidad y asociada con el concepto de produccin sostenible y oferta de bienes inocuos, con el fin de mejorar la insercin y permanencia en el mercado nacional e internacional (Comisin Nacional para la Produccin Agrcola en Ambientes Protegidos, 2003).
1.2.4 Importancia econmica del complejo B. tabaci-virus
Uno de los daos causados por B. tabaci es la extraccin de savia, por parte de las ninfas y adultos, al introducir el estilete en las hojas, alterando la fisiologa de la planta, disminuyendo la calidad de los frutos y el rendimiento (Byrne et. al., 1991). Tambin, las ninfas pueden promover sndromes o alteraciones fitotxicas, causados por toxinas presentes en su saliva.
Un sndrome comn en Cucurbita spp. es el de la hoja plateada, en el cual las nervaduras se tornan blanquecinas o brillantes, y la hoja paulatinamente adquiere una apariencia reticulada en el haz, hasta quedar totalmente plateada, lo cual provoca serios efectos en el rendimiento (Yokomi et. al., 1990). En el tomate ocurre el sndrome de maduracin irregular, que hace que el fruto muestre bandas amarillentas longitudinales y que los tejidos internos permanezcan blanquecinos, sin llenar completamente (Schuster et. al., 1990). Otras alteraciones son el palidecimiento del tallo en brcoli y el amarillamiento del follaje en lechuga, con arrugamiento y severas prdidas en el peso del follaje (Costa et. al., 1993).
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Otros daos importantes son la formacin de fumagina (crecimiento de hongos, como holln), cuya densidad afecta la fotosntesis y la respiracin, disminuyendo el rendimiento. Este crecimiento fngico se debe a la excrecin de mielcilla por parte de ninfas y adultos (Byrne et. al., 1991). Sin embargo, el dao de mayor importancia econmica es la transmisin de virus, y especialmente de geminivirus (begomovirus), comnmente diseminados por B. tabaci, que transmite al menos 50 mundialmente (Markham et al., 1996).
En Amrica Latina, B. tabaci ha causado importantes prdidas como plaga directa o como vector en al menos 26 cultivos, entre los que sobresalen: Citrullus lanatus (sanda), Cucumis melo (meln), Cucurbita maxima (zapallo), C. mixta (pipin), C. moschata (ayote), Glycine max (soya), Phaseolus vulgaris (frijol), Gossypium hirsutum (algodn), Capsicum annuum (chile dulce), Lycopersicon esculentum (tomate) y Nicotiana tabacum (tabaco) (Hilje, 2001).
En tomate, chile dulce, soya, algodn y varias cucurbitceas ha provocado grandes prdidas, por debilitamiento de la planta o por la formacin de fumaginas. No obstante, los mayores problemas se relacionan con la transmisin de begomovirus, especialmente en frijol y tomate. En Mxico, Amrica Central y el Caribe, se han detectado begomovirus en meln, pepino, calabaza, sanda y chile, an no se presentan epidemias tan graves como las observadas en frijol y tomate (Brown, 1994).
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1.2.5 Aspectos biolgicos de B. tabaci
El ciclo de vida de B. tabaci es influenciado por diferentes variables como la temperatura, la humedad relativa (HR), el fotoperodo y las caractersticas del hospedante. Salas y Mendoza (1995) determinaron que el intervalo desde la oviposicin hasta la emergencia del adulto, en tomate, fue de 22 das a 24C y 70% de HR. En el campo, el huevo y los nstares ninfales I, II, III y IV duraron en promedio 4, 3, 3 y 6 das, respectivamente. En promedio las hembras adultas pueden vivir entre 12-29 das y los machos 14-29 das.
En cuanto al nmero de huevos por hembra (fecundidad), los datos son muy variables (entre 72 y 127 huevos), dependiendo del hospedante, la edad del follaje, la humedad relativa, e incluso el biotipo involucrado (Gerling et al., 1986). El nmero de hospedantes en el mundo para B. tabaci es de 600 aproximadamente, pertenecientes a 74 familias. En Amrica Central y el Caribe tiene al menos 70 hospedantes, la mayora silvestres pertenecientes a 39 familias; predominan las familias Asteraceae (17 especies), Solanaceae (10), Cucurbitaceae (8), Malvaceae (7), Euphorbiaceae (5) y Fabaceae (4) (Hilje, 1995).
B. tabaci tiene la capacidad de originar nuevas razas o biotipos, ya que posee una gran variabilidad gentica. Todos son individuos con caractersticas morfolgicas idnticas a la especie original, pero biolgicamente diferentes, en cuanto a reproduccin, alimentacin y habilidad de adaptacin a latitudes y altitudes ms fras (Brown et al., 1992). A nivel mundial existen 19 biotipos de B. tabaci, de los cuales siete (A, B, C, D, E, G y N) estn en Amrica
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Central y el Caribe (Perring, 2001). En Costa Rica predomina el biotipo A en las principales zonas productoras de tomate (Hilje, 2003), mientras que el B se restringe a ciertas zonas de las provincias de Guanacaste y Puntarenas, en campos de cucurbitceas, como meln, sanda y pepino, as como de chile jalapeo.
B. tabaci no es un volador eficiente. El vuelo es de dos tipos, migratorio y trivial. En el primer caso, es dependiente de las corrientes de viento a grandes alturas, esto en horas de la maana. En el otro tipo los vuelos son continuos durante el da (Byrne et. al., 1996). En el cultivo de tomate en Costa Rica, B. tabaci disemina los geminivirus con gran rapidez, debido probablemente a los continuos vuelos dentro de las parcelas, pues aunque los adultos muestran mayor actividad en horas tempranas, se mantienen volando durante todo el da (Jovel et. al., 200).
Otro patrn importante es la localizacin del hospedante, en lo cual el color es orientador; los adultos prefieren el verde-amarillento al amarillo y al verde oscuro (van Lenteren y Noldus, 1990). El contraste entre el suelo desnudo y el color de la planta tambin es importante, de modo que cuando el suelo se cubre con coberturas vivas verdes, la cantidad de adultos disminuye y la diseminacin de virosis se retarda, en comparacin con el suelo desnudo (Hilje y Stansly, 2008).
La respuesta a olores parece funcionar solamente a corta distancia. Antes de insertar su estilete en la planta, los adultos de varios Aleyrodidae, incluyendo a B. tabaci, la palpan o frotan con la punta del labio, donde poseen siete pares de setas sensoriales pequeas; su
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ultraestructura sugiere que son receptores qumicos (quimiorreceptores), o qumicos y mecnicos a la vez (mecano-quimiorreceptores) (Walter y Gordh, 1989).
1.2.7. Estudios de repelencia y mortalidad sobre B. tabaci
La resistencia de B. tabaci a los insecticidas convencionales, hace necesaria la bsqueda de otras opciones. Por ejemplo, es conocido que las plantas tienen mecanismos de defensa (metabolitos secundarios), gracias a sustancias qumicas como, alcaloides, flavonoides, glicsidos, antraquinonas, taninos, terpernos entre otros (Pascual, 2006). As es que los bioplaguicidas representan una alternativa importante, pues algunos insecticidas poseen una toxicidad alta y sus efectos negativos sobre insectos benficos pueden ser reducidos si se aplican selectivamente; adems son biodegradables (IFOAM, 2006).
Para Isman (2000), ciertos aceites esenciales de plantas y/o sus constituyentes tienen un amplio espectro de actividad contra insectos plaga, patgenos de plantas y nemtodos. Se proyecta una participacin importante y estratgica de stos en el mercado, adems de una gran aceptacin por parte de los agricultores, especialmente donde exista una ventaja en cuanto a seguridad de los trabajadores y proteccin ambiental.
En la bsqueda de sustancias repelentes Gmez et al. 1997, evaluaron 27 extractos vegetales, provenientes de follaje, semillas, bulbos, botones florales y frutos, as como aceites esenciales. Los extractos de follaje evaluados fueron de apazote (Chenopodium ambrosioides,
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Chenopodiaceae); chile muelo (Drymis granadensis, Winteraceae); culantro de castilla (Coriandrum sativum, Umbelliferae); culantro coyote (Eryngium foetidium, Umbelliferae); eucalipto (Eucalyptus deglupta, Myrtaceae); gavilana (Neurolaena lobata, Compositae); madero negro (Gliricidia sepium, Fabaceae); menta (Satureja obovata, Labiatae); organo (Lippia graveolens, Lamiaceae); ruda (Ruta chalepensis, Rutaceae); soros (Momordica charantia, Cucurbitaceae); flor de muerto (Tagetes jalisciensis y T. microglossa); y zacate limn (Cymbopogon citratus, Poaceae).
Los extractos de semilla fueron de canavalia (Canavalia ensiformis, Fabaceae); de bulbo, los de ajo (Allium sativum, Alliaceae) y cebolla (Allium cepa, Alliaceae); de botones florales, el de clavo de olor (Syzingium aromaticum, Myrtaceae); y el chile picante (Capsicum frutescens, Solanaceae).
Los aceites esenciales fueron de follaje de ciprs (Cupressus lusitanica, Cupressaceae); chile muelo (Drymis granadensis, Winteraceae); jamaica (Pimenta officinalis, Myrtaceae); cscara de lima (Citrus limetta, Rutaceae); fruto de indio desnudo (Bursera simaruba, Burseraceae); semilla de cardamomo (Elettaria cardamomum, Zingiberaceae); y espigas de higuillo (Piper aduncum, Piperaceae). Satureja viminea (nombrada en el estudio como S. obovata por
error) mostr un fuerte efecto insecticida e importante efecto en la oviposicin.
En evaluaciones realizadas por Cubillo et al. (1999) con extractos etanlicos de albahaca (Ocimum basilicum, Labiatae), anisillo (Tagetes filifolia, Asteraceae), madero negro (Gliricidia sepium, Fabaceae), pimienta negra (Piper nigrum, Piperaceae) y Echinacia
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purpurea (Asteraceae) tampoco hubo evidencias de repelencia; no obstante, el anisillo y una fraccin de Echinacia purpurea (en ter) causaron mortalidad.
Asimismo, Gina Bagnarello (2007) encontr un efecto fagodisuasivo de los extractos crudos y de las fracciones metanlicas del follaje de titonia (Tithonia diversifolia) y tora (Montanoa hibiscifolia) sobre B. tabaci.
Choi et al. (2003), evaluaron la toxicidad de 53 aceites esenciales en diferentes estados de desarrollo de la mosca blanca de invernaderos, Trialeurodes vaporariorum y detectaron una toxicidad (adultos) sobresaliente de cuatro especies aromticas pertenecientes a la familia Lamiaceae: organo (Origanum vulgare), pippermint (Mentha piperita), pennyroyal (Mentha pulegium) y tomillo (Thymus vulgaris).
En estudios preliminares realizados en el Centro Agronmico Tropical de Investigacin y Enseanza (CATIE) (L. Hilje, comunicacin personal), con aceites esenciales de la empresa ASTEK S. A. (Aromas y Sabores Tcnicos), se determin que hubo un efecto txico significativo del aceite esencial de M. piperita sobre B. tabaci a partir de una
concentracin de 2,5% y para el aceite de Origanum vulgare a una concentracin de 25%. En el aceite esencial de Thymus vulgaris hubo un efecto txico reducido.
Estos estudios representan un antecedente importante para el posible control de B. tabaci en el marco del manejo integrado de plagas. Su aplicacin tecnolgica en el campo podra
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ayudar a bajar las poblaciones y disminuir los costos de control, con la reduccin de aplicaciones de insecticidas.
1.2.8 Aceites esenciales como insecticidas
Los aceites esenciales se han utilizado en las ltimos decenios como saborizantes, fragancias, condimentos y medicinas, pero no se han comercializado como repelentes o insecticidas, a pesar de que en el pasado algunos tuvieron estos usos. Se han identificado en la actualidad barreras comerciales para su venta con este uso, como la disponibilidad de material vegetal; la estandarizacin de los ingredientes activos en el producto; y la aprobacin del gobierno, lo cual normalmente requiere costosos estudios toxicolgicos de los productos (Isman, 1997).
Las plantas aromticas pertenecen a un grupo pequeo de familias, entre las que sobresalen Lamiaceae, Myrtaceae, Rutaceae y Apiaceae. Entre los componentes de los aceites
esenciales predomina el grupo de los monoterpenos, compuestos por dos unidades de isopreno, que pueden ser cclicos o acclicos, oxigenados o no. Los grupos funcionales incluyen alcoholes, aldehdos o cetonas, y tambin hidrocarburos.
Entre los aceites esenciales con actividad contra insectos y otras plagas destacan los aceites esenciales de clavo (eugenol), tomillo (timol y carvacrol), menta (mentol y pulegona), zacate de limn (citronellal y citral), canela (cinamaldehdo), romero (1,8-cineol) y organo
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(carvacrol). Es importante sealar que la composicin qumica de los aceites esenciales puede variar segn las condiciones fenolgicas de la planta, la parte de la planta extraida, la poca del ao, el clima y variaciones del suelo (Isman y Machial, 2006).
El modo de accin en artrpodos, se ha reportado el efecto como de derribo (knock down), inhibicin de acetilcolinesterasa, bloqueo de receptores de octapamina (neurotransmisor, neuromodulador y neurohormonal en insectos). Se ha sugerido la destruccin de las membranas celulares y el bloqueo del sistema traqueal como mecanismos alternativos de toxicidad (Isman y Machial, 2006).
Los monoterpenos y los fenilpropanoides han sido fueron los grupos usados como compuestos puros con mayor toxicidad, en estudios sobre varios insectos (Isman y Machial, 2006). El timol y la pulegona fueron los ms potentes individualmente. Sin embargo, la toxicidad puede ser relativa, pues algunos componentes presentaron un efecto potente en unas especies de insectos, pero con un efecto dbil o nulo en otras. Es necesario entonces realizar investigacin sobre la toxicidad de los monoterpenos, relacionando la estructura con la actividad biolgica y adems, seleccionar monoterpenos o fenilpropanoides de los cuales se podran derivar anlogos a los naturales con un efecto txico ms fuerte.
Al compararlos con los insecticidas sintticos, los botnicos requieren altas concentraciones de aplicacin (cercanas al 1% de ingrediente activo). Sin embargo, los insecticidas basados en aceites esenciales tienen varios beneficios. Debido a la rpida volatilizacin, hay menor riesgo de contaminacin ambiental que con los productos sintticos. Adems los insectos
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benficos podran ser menos afectados como resultado de la baja residualidad, hacindolos compatibles con los programas de manejo integrado de plagas. Tambin se cree que el desarrollo de resistencia a estos productos botnicos podra ser ms lento que en productos sintticos, debido la compleja mezcla caracterstica de estos aceites. En la agricultura estos productos podran ser usados ampliamente para proteger las cosechas de alto valor (invernaderos) y dentro de la agricultura orgnica (Isman y Machial, 2006).
1.2.9 Clavo de olor (Eugenia caryophyllata)
Pertenece a la familia Myrtaceae. Es un rbol siempre verde, nativo de Asia tropical. El aceite esencial es un lquido que vara de incoloro a caf-amarillo y posee un olor y sabor fuerte. El aceite recientemente destilado es amarillo plido, pero en contacto con el hierro cambia rpidamente a pardo y hasta prpura. Los pases que ms lo producen son Tanzania, Malasia, Indonesia, Ceiln y Madagascar (Lawrence, 2006).
El aceite esencial de E. caryophyllata es obtenido por el mtodo de destilacin por agua, pero algunas veces se utiliza la destilacin por vapor. Se emplean los retoos secos, pero tambin se obtiene de las hojas, aunque ste difiere un poco en su composicin qumica, por lo que es menos aceptado para su uso en sabores y perfumera. Sin embargo, es usado en mezclas baratas y en el aislamiento de eugenol. El eugenol aislado es usado en preparaciones farmacuticas y dentales, en la sntesis de vainillina y otros derivados (Lawrence, 2006).
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El rbol de E. caryophyllata produce gran cantidad de aceite esencial. El retoo tiene un rendimiento de aceite esencial del 16%, conteniendo 85-89% de eugenol, por destilacin por agua. Por este mtodo, las hojas tienen un rendimiento de 2-3% de aceite esencial, con 82-85% de eugenol, mientras que por destilacin por vapor es del 6% de aceite esencial, con 90-95% de eugenol como componente principal (Lawrence, 2006).
En el aceite esencial de retoos obtenidos en plantaciones en China se encontr 2-propenil fenol (0,12%), eugenol (85,07%), metil eugenol (0,10%), b-cariofileno (2,37%), ahumuleno (0,28%), acetato de eugenol (9,45%) y xido de cariofileno (0,48%). Para el aceite de retoos y hojas, en Cuba se reportaron el eugenol (69,8%), -cariofileno (13,0%), acetato de eugenol (16,1%) y -humuleno (0,6%); en el aceite de hojas se encontr eugenol (78,1%), -cariofileno (20,5%), -humuleno (1,1%) y xido de cariofileno (0,1%) (Lawrence, 2006).
1.2.10 Canela (Cinnamomum zeylanicum)
Tambin llamada C. verum es un rbol originario de Asia tropical, cultivada en las regiones tropicales. Tambin llamada C. verum. Pertenece a la familia Lauraceae. El rbol mide 815 metros, la corteza es muy aromtica, posee hojas opuestas y sub-opuestas, de hasta 15 cm, marcadamente trinervadas desde la base hasta cerca del pice, brillantes en el haz, glabras, aovadas a elptico-lanceoladas y redondeadas en la base. Las Flores son de color blanco-amarillentas en las panculas laxas. Los frutos son de 1,7 cm (Germosn, 2005).
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De la corteza se extrae el aceite esencial por destilacin por vapor y tambin se obtiene de las hojas. La produccin se realiza en Ceilan, Seychelles y China. El componente principal de la corteza del aceite esencial de C. zeylanicum es el cinamaldehdo, mientras que en el de hojas es el eugenol. En el aceite de hojas en China el cinamaldehdo es el principal componente. El rendimiento es de 1,2-1,8% (Lawrence, 2006).
Los principales componentes del aceite esencial de la corteza son: cinamaldehdo (6590%), eugenol (4-10%), cariofilenos, l-linalol, l-felandreno, -cimeno, furfural, acetado de eugenol, alcohol cinmico y cinamlico, metil eugenol, benzaldehdo, cinamaldehdo, cinamil acetato, entre otros. El rendimiento es de 1-4% (Germosn, 2005).
1.2.11 Menta de palo (Satureja viminea)
Pertenece a la familia Lamiaceae. Originaria de las Antillas Mayores, es cultivado por las hojas, que reemplazan a las de yerbabuena (Mentha spp.). Alcanza hasta 3 m de altura, es muy ramificado, con tallos color pardo, cuadrangulares y hojas de tamao y forma muy variadas, generalmente oblanceoladas 0,5-5 x 0,5-1 cm, lisas o con pubescencia escasa. Las flores, solitarias o en grupos, tienen el cliz de 2-3 mm de largo, piloso y la corola blanca, de 5-10 mm de longitud (Len y Poveda, 1999).
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Cuadro 1. Componentes del aceite esencial de C. zeylanicum hojas de diferente origen geogrfico (Lawrence, 2006).
Componente
-tujeno -pineno canfeno -pineno mirceno -felandreno -3-careno -cimeno limoneno -felandreno terpinoleno linalol -terpineol (E)-cinamaldehido eugenol etil eugenol -cariofileno (E)-acetato de cinamilo -elemeno viridiflorol bencil benzoato -ylangeno benzaldehido xido de cariofileno safrol -humuleno terpinen-4-ol -terpineno 1,8-cineol -terpineno (E)--ocimeno xido de linalol borneol (E)-alcohol cinamico -cadineno sabineno (Z)-cinamato de metilo (E)--farneseno
Camern
Seychelles
India
China
0.1 0.5 0.2 0.2 0.1 0.9 0.1 0.4 0.3 0.1 0.1 2.8 0.1 4.9 85.2 0.1 1.8 0.1 0.5 0.1 0.1 0.3 0.1 0.1 0.1 0.1 -
0.3 0.6 0.6 0.7 0.6 1.8 0.2 2.3 0.5 0.2 0.3 2.7 0.9 11.1 72.4 1.4 3.8 2.2 0.3 0.5 0.2 0.5 1.2 0.7 1.1 0.4 0.6 0.4 0.3 0.2 0.3 -
0.1 0.45 0.05 0.08 0.09 1.19 0.06 0.50 t 0.04 8.5 76.60 2.74 0.93 0.22 0.06 0.09 0.53 t 0.03 0.04 0.14 0.02 0.02 0.18 0.18
0.24 1.02 0.24 0.28 0.17 2.50 0.20 1.98 0.36 0.33 0.17 0.40 0.19 0.43 81.26 1.80 0.34 0.17 0.67 5.46 t t -
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En Costa Rica se utiliza en infusin y es conocida popularmente como una menta. En Jamaica tambin ha sido usada como t, mezclada con jengibre, para el tratamiento de clicos. Crece fcilmente en las reas sombreadas de los jardines en el Valle Central de Costa Rica. Sus flores son usadas para el tratamiento del insomnio. Diferentes especies de Satureja spp. han sido usadas en la medicina tradicional, como antimicrobial, espasmoltica, analgsica, cicatrizante y diurtica. La propiedad antibacterial se ha registrado para los aceites esenciales de S. montana y S. timbra. Los aceites esenciales de S. obovata, S. cuneifolia y S. hortensis, han sido evaluados como agentes espalmolticos. El aceite esencial de S. montana ssp. montana de Croacia fueron estudiadas por su actividad diurtica (Surez et al., 2003).
La composicin del aceite esencial de las hojas de S. viminea ha sido recientemente descrita por Vila et al. (2000) y Tucker y Maciarello (2000). El rendimiento del aceite fue de 1,3% (m/m) de material vegetal proveniente de San Jos, Costa Rica y 0,3% de material comercial en los Estados Unidos, cuyo origen fue Costa Rica . Los principales componentes para el primero fueron -ment-3-en-8-ol (40,0%), pulegona (35,3%) y pmenta-3,8-dieno (5,2%); otros componentes en menor cantidad fueron -cariofileno (3,6%), -humuleno (1,3%), limoneno (1,0%) y terpinoleno (0,9%) (Vila et al., 2000).
El alto contenido de pulegona, no lo hace apto para su consumo, pues varios estudios han documentado que en su metabolizacin se producen productos txicos para el hgado (Chen et al., 2001, 2003; Khojasteh-Bakht et al., 1999). La pulegona tiene una toxicidad de DL50 de 470 mg/kg en ratas. Se realiz un estudio de la actividad farmacolgica del aceite
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esencial y extracto acuoso de S. viminea, en la cual se observ un claro y significativo efecto analgsico con la administracin oral del aceite esencial de S. viminea comparado al observado con indometacina (Surez et al., 2003). El aceite esencial inhibi el trnsito intestinal y el vaciamiento gstrico. La DL50 del aceite esencial de S. viminea sobre ratas fue de 556,8 mg/kg.
La produccin de Costa Rica es escasa, limitada a pequeas fincas, pero es una especie que crece habitualmente en todo el Valle Central (L. Poveda 2006, comunicacin personal). Su alto contenido de pulegona no lo hace apto para su uso en medicina natural y tal vez por esta razn no existen grandes cultivos en el pas. Sin embargo, se podra incentivar su cultivo, dado su posible uso como insecticida o repelente sobre B. tabaci.
1.2.12 Juanilana (Lippia alba)
Es un arbusto originario de Amrica tropical y subtropical. Tambin llamada Lippia germinata o Lantana alba. Pertenece a la famila Verbenaceae. Es un arbusto aromtico de 1-2 m de alto, ramas largas mimbreadas, decumbentes y arraigantes, densamente puverulentas o estrigosas. Hojas opuestas o ternadas, brevemente pecioladas, de 2-6 cm de longitud y 1,2-4,5 cm de ancho, oblongas, arrugadas, festonadas, cubiertas con pelillos cortos y nervaduras prominentes. Inflorescencias en cabezuelas axilares globosas,
cilndricas en la fructificacin. Brcteas ovadas, acuminadas, las inferiores mucronadas. Flores zigomorfas, cliz de 1,5-1,7 mm de largo y acrescente a la madurez; corola morada,
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rosada o blanca de 4-5 mm de largo. Fruto obovoide de 3 mm de ancho. Tiene un uso en la medicina tradicional, en casos de gripe y resfriados (Germosn, 2005).
En un estudio en Colombia se reporta los principales componentes como: limoneno (32,6%), carvona (51,0%), piperitona (0,43%), piperitetona (1,47%),
biciclosesquifelandreno (7,3%) (Cicci y Ocampo, 2004). En estudios en Uruguay, Brasil y India se encontr como principal componente el linalol, mientras que en Guatemala fueron el limoneno y la piperitona. Sin embargo, la composicin del aceite esencial vara mucho y esta relacionado con las condiciones ontognicas de la planta (Cicci y Ocampo, 2004). En un estudio realizado en la zona atlntica de Costa Rica el contenido de carvona fue de 69,2% y limoneno 23,3%, con un rendimiento de 2,7% (v/m) (Cicci y Ocampo, 2004).
1.2.13 Albahaca (Ocimum basilicum)
Es una planta originaria de Asia y cultivada en todo el mundo. Pertenece a la familia Lamiaceae. Herbcea anual, erecta, de hasta 60 cm, con las partes nuevas pubescentes. Hojas elpticas, ovadas u oblongas de 2-4cm, agudas en el pice, atenuadas en la base, dentadas o enteras, glabras. Inflorescencia verticilada de hasta 20 cm; pedicelos muy cortos, recurvados; cliz largo-ciliado de 5 mm: corola blanca, de 4 a 5 mm; filamentos superiores con un apndice dentiforme en la base (Germosn, 2005).
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Un estudio en Turquia reporta como principales componentes: -pineno (1,17%), 1,8cineol (13,63%), linalol (24.25%), -elemeno (3,59%), -terpineol (1,38%), germacreno D (1,32%), -guaieno (1,34%), - elemeno (1,93%), -cadineno (2,34%), metil-(Z)-cinamato (16,72%), espatulenol (1,20%), eugenol (4,25%), -cadinol (5,27%) (Lawrence, 2006). El aceite esencial de la India tiene como principales componentes: linalol (44,09-49,82%), terpineol (0,82-0,83%), -elemeno (1,03-1,42%), -bisaboleno (0,91-1,99%), -cadinol (2,76-3,25%), limoneno (4,25-5,57%), (E)- -ocimeno (0,60-1,91%), alcanfor (0,812,35%), terpinen-4-ol (0,41-2,63%), eugenol (20,18-27,07%), biciclogermacreno (0,281,01%) (Lawrence, 2006).
1.2.14 Spearmint (Mentha spicata)
Pertenece a la familia Lamiaceae. Se cultiva en zonas de clima templado, en los Estados Unidos, Canad, Japn y Europa. Posee rizomas del arrastramiento y los vstagos
erguidos, cuadrados se levantan a una altura de cerca de 60 cm, con las hojas cortas en forma de lanza, verde claro, con los bordes finamente dentados y las superficies lisas. Las pequeas flores se agrupan en espirales o anillos, en los axilares de las hojas superiores, son de color lila (Germosn, 2005).
En Japn se encontr que el aceite esencial contena: carvona (60,5%), 1,8-cineol (2,6%), 3-octanol (1,3%), linalol (1,0%), dihidrocarvona (5,0%), neodihidrocarvona (1,6%), pineno (1,0%), limoneno (16,5%), dihidrocarvil acetato (2,0%), dihidrocarveol (1,2%)
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(Lawrence, 2006). Para aceites esenciales obtenidos en Estados Unidos y Canad se encontr: carvona (61,40-70,81%), 1,8-cineol (0,97-1,57%), -cariofileno (0,53-0,91%), pineno (0,36-0,78%), mirceno (0,55-1,25%), limoneno (11,85-18,50%), 3-octanol (1,572,35%), mentona (1,07-1,36%), -bourboneno (0,74-1,14%), cis-dihidrocarvona (1,194,64%) (Lawrence, 2006).
1.2.15 Culantro (Coriandrum sativum)
Pertenece a la familia Apiaceae. Es una hierba anual de color verde, de tallo recto de 30-90 cm de alto, ramificado y delgado, con hojas compuestas, flores blancas, frutos aromticos, los racimos de semillas son muy simtricos y stas caen tan pronto como maduran. El culantro es de uso comn en la preparacin de los alimentos en todo el mundo (Germosn, 2005).
El aceite esencial de culantro comercial esta compuesto por: linalol (68,4-87,5%), -pineno (0,5-6.0%), mirceno (0,2-0,8%), -terpineno (2,7-7,7%), geranil acetato (0,8-3,7%), limoneno (1,3-6,3%), -cimeno (0,6-5,9%), geraniol (0,4-3,5%), alcanfor (4,4-4,8%) (Lawrence M. B. 2006).
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1.2.16 Perejil (Petroselinum sativum) Pertenece a la familia Apiaceae. Planta perenne aromtica de hasta 1 m. de altura. Tallos inclinados. Hojas inferiores tripinnadas, con amplios lbulos cuneados, en especies cultivadas generalmente rizados; hojas superiores con tres lbulos. Flores en umbelas de hasta 5 cm, aplanadas por arriba. Frutos ovoides de hasta 3 mm (Germosn, 2005).
El perejil en Cuba tiene como principales componentes la miristicina (63,90%), mirceno (0,84%), germacreno D (1,09%), -sesquifelandreno (1,04%), -felandreno (1,60%), menta-1,3,8-trieno (3,90%), elemicina (1,70%), carotol (1,42%), apiol (14,40%) (Lawrence, 2006).
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1.3 Objetivos
1.3.1 Objetivo General
Realizar un tamizado de aceites esenciales con actividad insecticida sobre Bemisia tabaci en trampas amarillas y determinar la composicin de los que presenten un mayor efecto, dentro de una estrategia de manejo integrado de plagas.
1.3.2 Objetivos Especficos
1.3.2.1 Evaluar la actividad insecticida sobre adultos de Bemisia tabaci de los aceites esenciales derivados del follaje de albahaca (Ocimum basilicum), canela (Cinnamomun zeylanicum), clavo de olor (Eugenia caryophyllata), juanilama (Lippia alba), menta de palo (Satureja viminea), a partir de semillas, el culantro (Coriandrum sativum), perejil (Petroselinum sativum) y botones florales de clavo de olor (Eugenia caryophyllata) a diferentes concentraciones, impregnados en trampas amarillas.
1.3.2.2 Identificar y cuantificar los principales componentes de los aceites esenciales con mayor actividad insecticida.
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CAPITULO II Parte Experimental
2.1 Localizacin de material vegetal y obtencin de aceites esenciales comerciales

Los aceites esenciales fueron donados por la empresa de sabores tcnicos ASTEK S.A. Por su parte, de Lippia alba (recolectada en cantn de Sarapiqu, en octubre de 2006) y Satureja viminea (recolectada en el Jardn Botnico El Arca de las Hierbas, en Santa Brbara, Heredia, en julio de 2006), comercialmente. no fue posible conseguir el aceite esencial
Cuadro 2. Aceites esenciales utilizados en el tamizado para la bsqueda del efecto insecticida sobre B. tabaci.
Nombre comn
Albahaca Canela Clavo de olor de botones florales Clavo de olor de hoja Culantro Juanilama Menta de palo Perejil Spearmint
Familia
Lamiaceae Lauraceae Myrtaceae Myrtaceae Apiaceae Verbenaceae Lamiaceae Umbelliferae Lamiaceae
Nombre cientfico
Ocimum basilicum Cinnamomun zeylanicum Eugenia caryophyllata Eugenia caryophyllata Coriandrum sativum Lippia alba Satureja viminea Petroselinum sativum Mentha spicata
Parte de la planta
Hojas Hojas Botones florales Hojas Semillas Hojas Hojas Semillas Hojas
Origen
Comercial Comercial Comercial Comercial Comercial Extraccin Extraccin Comercial Comercial
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2.2 Equipos
Invernadero de la Unidad de fotoproteccin, en el CATIE, en Turrialba, Costa Rica. Atomizador De Vilbiss15 (The De Vilbiss, Somerset, PA, Estados Unidos). Trampa para aceites esenciales con densidad menor al agua. Cromatgrafo de gases Aligent 6850, con detector de masas Aligent 5973. Cromatgrafo de gases Perkin Elmer Clarus 500 con detector FID.
2.3 Materiales
Pao esponja marca Spontex Insecticida Endosulfan Tensoactivo Citowett Metanol
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2.4 Metodologa
2.4.1 Obtencin de los aceites esenciales
2.4.1.1 Localizacin
Las extracciones se realizaron en el Laboratorio de Investigacin y Desarrollo en Tecnologa Qumica (LIDETEQ), en la Universidad Nacional en Heredia, Costa Rica.
2.4.1.2 Extraccin de los aceites esenciales
Las hojas de juanilama y menta de palo fueron la parte de la planta del que se extrajo el aceite esencial. Se realiz la hidrodestilacin de 5 kg de material. El tiempo de la hidrodestilacin fue de 2 horas. El aceite esencial obtenido fue secado sobre sulfato de sodio anhidro (Na2SO4) y se mantuvo en vidrio ambar y refrigeracin hasta su uso.
2.4.2 Evaluacin del efecto insecticida
2.4.2.1 Localizacin
Los experimentos se realizaron en un invernadero de la Unidad de Fitoproteccin, en el Centro Agronmico Tropical de Investigacin y Enseanza (CATIE), en Turrialba, Costa Rica.
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2.4.2.2 Condiciones experimentales
Se utiliz un diseo de bloques completos al azar, con cuatro repeticiones. La unidad experimental fue una jaula. Las jaulas de manga (30 x 30 x 45 cm), poseen paredes de madera, malla fina y vidrio (Fig. 1).
En cada jaula se colocaron dos macetas, una con una planta de tomate (var. Hayslip) de 35 das de sembradas y la otra con una trampa amarilla impregnada con el aceite esencial extrado. La trampa (5 x 9 cm) se confeccion con una esponja de cocina (marca spontex), sujetada a una estaca de madera de 15 cm, para mantenerla a la misma altura de la planta de tomate.
El aceite esencial se roci en ambas caras de la trampa mediante un atomizador De Vilbiss 15 (The DeVilbiss, Somerset, PA, EE.UU.), de punta ajustable (Fig. 2), conectado a una bomba de vaco, con una presin constante de 10 kg/cm2. Por cada trampa se aplic un total de 25 ml de la dispersin preparada. Se evaluaron sies concentraciones del aceite (1,0; 2,5; 5,0; 10,0; 15,0 y 25,0 % v/v). La preparacin de las dispersiones se realiz el mismo da de su aplicacin, en agua destilada y Citowett (0,025%), el cual es un agente tensoactivo (BASF, Alemania) para mejorar la adherencia del aceite al follaje. Se compararon con un testigo absoluto (planta tratada con agua destilada) y uno relativo (planta tratada con el insecticida endosulfn) tratados en las mismas condiciones.
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Fig. 1. Dispositivo experimental para la evaluacin del efecto insecticida de aceites esenciales sobre B. tabaci.
Fig. 2. Aplicacin de las concentraciones de los aceite esenciales para la evaluacin del efecto insecticida sobre B. tabaci.
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2.4.2.3 Manipulacin de los insectos
Los adultos de B. tabaci, de edad desconocida y sin sexar, se capturaron con un succionador manual, de una colonia criada en tomate y berenjena, en un invernadero del CATIE. Dentro de cada jaula se liberaron 50 adultos.
2.4.2.4 Variables de respuesta y anlisis estadstico
La variable de respuesta fue el nmero de adultos muertos (contabilizados por diferencia, a partir del nmero de adultos vivos dentro de cada jaula) a las 48 h. Los datos se analizaron mediante el programa estadstico InfoStat/P versin 2005 p1, mediante un anlisis de varianza, y las medias se compararon mediante una prueba de Duncan, con una probabilidad de 95%.
2.4.3 Anlisis por cromatografa de gases de los aceites esenciales
2.4.3.1 Localizacin
El anlisis cromatogrfico se realiz en el laboratorio instrumental de la Escuela de Qumica Industrial, en la Universidad Nacional y en empresa de sabores MALUQUER, en Heredia, Costa Rica.
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2.4.3.2 Anlisis por cromatografa de gases
Los aceites esenciales fueron analizados por cromatografa de gases. Se utiliz un cromatgrafo de gases Aglient 6850, con un detector de masas Aglient 5973, una columna DB-5MS (5% fenil metil siloxano), 30 m, 250 m de dimetro, 0,25 m de espesor de pelcula. Las condiciones analticas fueron: gas de arrastre helio (1,2 mL/min); split 1:15; temperatura del inyector 250C; temperatura del detector 280C. El programa de
temperatura tuvo una temperatura inicial de 60C, mantenido por 4 min, despus a 5 C/min hasta 220C. Los aceites esenciales se diluyeron en metanol y se inyect 1 L. La identificacin de los componentes de los aceites esenciales, se realiz con la base de datos NIST (Nacional Institute of Standards and Technology) 2005; adems, se obtuvo el valor porcentual de los componentes de los aceites esenciales.
Los componentes de los aceites esenciales mencionados anteriormente fueron identificados al comparar los espectros de masas obtenidos por el detector de masas del cromatgrafo, contra los espectros de masas de la base de datos NIST. 2005. El programa de la base de datos aporto una lista de posibles componentes con la probabilidad de su identidad correspondiente. Para que un componente de un aceite esencial se clasificara como identificado, el resultado de la probabilidad debi ser superior al 90%.
En un segundo anlisis se utiliz un cromatgrafo de gases Perkin Elmer Clarus 500, con un detector FID.-ECD (Electron Capture Detector), una columna DB5 (5% fenil metil siloxano), 30 m, 530 m de dimetro, 0,5 m de espesor de pelcula. Las condiciones de
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operacin fueron: gas de arrastre helio, velocidad linear 32 cm/s, split 1:100; temperatura del inyector 250C, temperatura del detector 250C. El programa de temperatura fue: temperatura inicial 75C (4 minutos), 75 200C a 3C/min, 200C (8 min). Se inyectaron 0,2 L de aceite puro. En ste anlisis se realiz una segunda identificacin por la comparacin de los ndices de retencin kovats obtenidos con los de la base de datos NIST 2005.
Para el clculo de los indices Kovat se utiliz la siguiente frmula:
( K2 K1 / T2 T1 ) (TX T1) + K1
K1: Indice de retencin Kovat del etil ester anterior al pico a identificar. K2: Indice de retencin Kovat del etil ester posterior al pico a identificar. T1: Tiempo del etil ester anterior al pico a identificar. T2: Tiempo del etil ester posterior al pico a identificar. Tx: Tiempo del pico a identificar.
Para este anlisis de identificacin se realizaron las corridas del los aceites esenciales y la de los steres de etilo de 1-12 atmos de carbono (12 etil steres). Para realizar el anlisis de un compuesto de inters se tom el tiempo de retencin y se compar con el cromatograma de los etil steres de tal forma que se escogieron los tiempos de retencin que eluyeron justo antes y despus del pico de inters. Estos datos se incluyeron en la frmula, adems se agregan los datos de ndice Kovat de los etil steres escogidos, el
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resultado de la interpolacin arroja el dato, el cual puede variar en 10 unidades con el indice terico (Linskens y Jackson, 1986).
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CAPITULO III Resultados
3.1 Obtencin de los aceites esenciales
Se obtuvo el aceite esencial de S. viminea, con un rendimiento de 1,1%, el cual fue de coloracin amarillo leve y aroma similar a la menta. En el aceite esencial de L. alba se obtuvo un rendimiento de 0,8%, y fue de coloracin amarillo leve, con aroma intenso y penetrante.
3.2 Evaluacin del efecto insecticida

Los aceites esenciales se ordenaron por grupos, segn el nivel de accin insecticida detectado. El primer grupo estuvo compuesto por el culantro, spearmint y botones florales de clavo de olor (Fig. 1), el segundo lo conformaron la albahaca, juanilama y perejil (Fig. 2), y el tercero estuvo compuesto por la canela, hojas de clavo de olor y menta de palo (Fig. 3).
El primer grupo se caracteriz por tener en general un efecto insecticida muy reducido. Para el aceite esencial de culantro (Fig. 1A), se observ un efecto importante a partir de la concentracin al 1,0%. Adems las concentraciones del 1,0 al 5,0% mostraron un efecto inverso en la respuesta a la concentracin aplicada. A partir de la concentracin al 10,0%
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hubo un porcentaje de mortalidad similar entre tratamientos. Cuando se compararon los testigos con las concentraciones no se logr determinar una tendencia hacia ninguno de los testigos.
Para el aceite esencial de spearmint (Fig. 1B), las concentracin utilizadas no mostraron diferencias significativas en la mortalidad con el testigo absoluto, pero s del endosulfn. Lo mismo ocurri para el aceite esencial de botones florales de clavo de olor (Fig. 1C).
Los aceites esenciales del segundo grupo se caracterizaron por tener un efecto insecticida moderado. Para el aceite de albahaca (Fig. 2A) se observ un efecto insecticida Se observ una tendencia
significativo a partir de la concentracin al 10,0%.
concentracin-respuesta inversa en las concentraciones entre el 10,0% y el 25,0%.
Cuando se utiliz aceite de juanilama (Fig. 2B) se observ que a partir de la concentracin al 10,0% no hubo diferencias con el testigo relativo. Por su parte, el experimento con aceite de perejil (Fig. 3C), mostr que a partir de la concentracin al 2,5% no hubo diferencias significativas con respecto al endosulfn, excepto al 5,0%. En estos dos experimentos sin embargo, se observ un importante aumento en la mortalidad del testigo absoluto. Este efecto fue ms visible en el experimento con perejil, en el cual el testigo relativo y absoluto no presentaron diferencias significativas. Este tipo de tedencias
pudieron deberse a las altas temperaturas dentro del invernadero durante la poca del experimento.
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El tercer grupo de aceites se caracteriz por mostrar un efecto insecticida ms notorio. Para el aceite de canela (Fig. 3A), se observ un efecto importante a partir de la concentracin al 2,5%. Cuando se utiliz el aceite de hojas de clavo de olor (Fig. 3B) se encontr que a partir de la concentracin al 10,0% hubo un efecto insecticida importante. En estos
experimentos utilizando aceite esencial de hojas de canela y clavo se registr un aumento significativo en la mortalidad del testigo absoluto. En el caso del aceite de menta de palo (Fig. 3C), hubo un efecto insecticida significativo a partir de la concentracin al 10,0%.
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Figura 3. Mortalidad de los adultos de B. tabaci a las 48 h de aplicados los aceites esenciales de culantro (C. sativum) (A), spearmint (M. spicata) (B) y botones florales de clavo de olor (E. caryophyllata) (C). Los promedios seguidos por una misma letra no difieren estadsticamente entre s segn Duncan (p=0,05).
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Figura 4. Mortalidad de los adultos de B. tabaci a las 48 h de aplicados los aceites esenciales de albahaca (O. basilicum) (A), juanilama (L. alba) (B), y perejil (P. sativum) (C). Los promedios seguidos por una misma letra no difieren estadsticamente entre s segn Duncan (p=0,05).
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Figura 5. Mortalidad de los adultos de B. tabaci a las 48 h de aplicados los aceites esenciales de canela (C. zeylanicum) (A), hojas de clavo de olor (E. caryophyllata) (B) y menta de palo (S. viminea) (C). Los promedios seguidos por una misma letra no difieren estadsticamente entre s segn Duncan (p=0,05).
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Despus de 48 h, en todos los experimentos se observ la forma en que murieron los adultos. Hubo dos formas de mortalidad provocadas por los aceites esenciales. En la
primera, los adultos se encontraban principalmente adheridos a la trampa amarilla, mostrando ellos una coloracin amarillenta. Esto se observ con los aceites esenciales de culantro, spearmint, botones florales de clavo de olor, albahaca, juanilama, perejil y menta de palo.
En el segundo caso, se encontr gran cantidad de adultos en la maceta de la trampa amarilla, mostrando su coloracin blanca caracterstica. Este efecto fue observado en los aceites esenciales de hojas de clavo de olor y canela. En el aceite de albahaca tambin se observ este tipo de mortalidad, pero el nmero de adultos fue mucho menor.
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3.3 Anlisis por cromatografa de gases
Para su anlisis por cromatografa de gases, se escogieron los aceites esenciales de hojas de canela, clavo de olor y menta de palo, dado que fueron los que reflejaron con mayor claridad el efecto insecticida detectado en los experimentos entomolgicos.
Para el aceite esencial de canela (hojas) se identificaron 41 componentes (Cuadro 2, Fig. 4), de los cuales los principales fueron, porcentualmente, el eugenol (66,68), bencil benzoato (4,49), -cariofileno (4,30), eugenil acetato (3,52), linalol (2,15) y safrol (2,00) (Fig. 7). El 98,95% del total del aceite esencial fue identificado. El 81,71% de los componentes del aceite pertenece a la familia de los fenilpropanoides.
En el aceite esencial de hojas de clavo de olor se identificaron 11 componentes (Cuadro 3, Fig. 5), que representaron el 99,31% del total del aceite. Los principales fueron,
porcentualmente, el eugenol (83,43), -cariofileno (10,81), -cariofileno (2,83) (Fig. 7). El 83,53% de los componentes pertenece a la familia de los fenilpropanoides.
Para el aceite esencial de menta de palo se identificaron 27 componentes (Cuadro 4, Fig. 6), para un total de 90,26% del aceite. Los principales componentes fueron, porcentualmente, la pulegona (47,01), -menth-3-en-8-ol (27,43), allo-aromadendreno (2,56), xido de cariofileno (2,52), -cariofileno (2,18) y d-limoneno (1,39) (Fig. 7). El 77,52% de los componentes pertenece a la familia de los monoterpenos oxigenados.
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Cuadro 3. Identificacin y cuantificacin de los principales componentes del aceite esencial de hojas de canela (C. zeylanicum), de origen comercial.
Componente
-tujeno -pineno canfeno benzaldehido -pineno -felandreno 3-careno -terpineno -cimeno -cimeno -felandreno alcohol benclico -terpinoleno terpinoleno linalol 3-fenilpropanal 4-terpineol -terpineol 3-fenilpropanol chavicol cis-cinamaldehido safrol timol alcohol cinmico eugenol fenil propil acetato -copaeno vainillina metil eugenol -cariofileno (+)-aromadendreno cinamil acetato -cariofileno (+)-ledeno -cadineno -Cadinene eugenil acetato espatulenol xido de cariofileno bencil benzoato fenil etil benzoato Total Fenil propanoides Hidrocarburos monoterpnicos Monoterpenos oxigenados Hidrocarburos sesquiterpnicos Sesquiterpenos oxigenados Otros
Porcentaje
0,09 1,24 0,42 0,21 0,32 1,49 0,10 0,20 0,03 1,41 1,17 0,04 0,07 0,17 2,15 0,11 0,12 0,34 0,11 0,14 1,98 2,00 0,04 0,11 66,68 0,46 1,37 0,05 0,05 4,30 0,09 1,98 0,83 0,16 0,06 0,23 3,52 0,07 0,56 4,49 0,03 98,95 81,71 5,.27 2,61 7,11 0,56 1,69
Cromatografa de gases
GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS
Indice de retencin terico

930 940 950 960 980 1005 1010 1019 1030 1031
Indice de retencin experimental

931 942 960 966 989 1012 1020 1025 1031 1037
1095 1160 1184 1195 1232 1249 1283 1285 1312 1355 1365 1375 1405 1410 1420 1440 1441 1450
1102 1171 1195 1207 1242 1252 1282 1300 1315 1374 1379 1402 1412 1434 1442 1451 1473 1462
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Figura 6. Corrida cromatogrfica con deteccin de masas de los componentes del aceite esencial de hojas de canela (C. zeylanicum), identificado por comparacin de las masas con la base de datos NIST 2005.
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Cuadro 4. Identificacin y cuantificacin de los principales componentes del aceite esencial hojas de clavo de olor (E. caryophyllata), de origen comercial.
Componente
chavicol -cariofileno -copaeno -cubebeno -cariofileno -cadineno eugenol farneseno humuleno-(v1) xido de cariofileno vainillina Total Fenil propanoides Hidrocarburos monoterpnicos Monoterpenos oxigenados Hidrocarburos sesquiterpnicos Sesquiterpenos oxigenados Otros
Porcentaje
0,05 2,83 0,47 0,05 10,81 0,52 83,43 0,09 0,14 0,87 0,05 99,31 83,53
GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS

1450

1475
1420 1355
1445 1374
14,91 0,87
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Figura 7. Corrida cromatogrfica con deteccin de masas de los componentes del aceite esencial de hojas de clavo de olor (E. caryophyllata), identificado por comparacin de las masas con la base de datos NIST 2005.
Cuadro 5. Identificacin y cuantificacin de los principales componentes del aceite esencial de menta de palo (Satureja viminea), obtenido por hidrodestilacin.
Componente
3-metil ciclopentanona cis-3-hexen-1-ol -pineno sabineno -pineno d-limoneno eucaliptol -menta-3,8-dieno linalol -menth-3-en-8-ol iso-isopulegol isopulegol isopulegona -terpineol mirtenal pulegona piperitenona -copaeno -cariofileno -cariofileno allo-aromadendreno -candineno trans-Nerolidol espatulenol xido de cariofileno viridiflorol -murolol Total Fenil propanoides Hidrocarburos monoterpnicos Monoterpenos oxigenados Hidrocarburos sesquiterpnicos Sesquiterpenos oxigenados Otros
Porcentaje
0,05 0,05 0,32 0,22 0,41 1,39 0,11 0,93 0,29 27,43 0,22 0,15 1,07 0,33 0,13 47,01 0,79 0,43 2,18 0,15 2,56 0,18 0,18 0,98 2,52 0,10 0,09 90,26
GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS GC/MS

848 858 940 975 974 1024 1030 1070 1095 1149 1150 1152 1155 1193 1198 1235 1342 1370 1420 1450 1460

852 899 939 978 985 1034 1041 1075 1094 1164 1173 1188 1189 1203 1212 1262 1356 1393 1435 1464 1470
3,27 77,52 5,50 3,87 0,10
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Figura 8. Corrida cromatogrfica con deteccin de masas de los componentes del aceite esencial de menta de palo (S. viminea), identificados por comparacin de las masas con la base de datos NIST 2005.
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Figura 9. Estructuras de los principales compuestos qumicos identificados en los aceites esenciales de C. zeylanicum, E. caryophyllata hojas y S. viminea: eugenol (A), cariofileno (B), -cariofileno (C), bencil benzoato (D), eugenil acetato (E), linalol (F),safrol (G), pulegona (H), -menth-3-en-8-ol (I), allo-aromadendreno (J), xido de cariofileno (K), d-limoneno (L). Fuente: Base de datos NIST 2005.
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CAPITULO IV Discusin
La capacidad para causar dao a los cultivos, as como la variabilidad gentica de la mosca blanca (B. tabaci), hacen necesaria la bsqueda continua de opciones para su manejo. Entre las opciones no contaminantes sobresale el uso de trampas amarillas adhesivas, pues los adultos son atrados por este color.
Hasta ahora se han realizado experimentos en lo cuales se utiliz endosulfn aplicado en trampas amarillas confeccionadas con una esponja delgada, logrando que los adultos murieran al entrar en contacto con sta (L. Hilje, indito). Sin embargo lo ideal sera sustituir el uso de este insecticida por uno de origen natural, de modo que los adultos mueran al posarse en sta, sin efectos adversos sobre el ambiente.
Varios estudios compilados Isman y Machial (2006), por han mostrado la actividad de los aceites esenciales sobre diferentes plagas. Uno de estos muestra que los aceites esenciales podran ser utilizados tambin como insecticidas contra Trialeurodes vaporariorum, un tipo de mosca blanca afn a B. tabaci (Choi et al., 2003).
Un hecho que refuerza la idea de aplicar los aceites esenciales en un material atrayente para B. tabaci y no la aplicacin directa sobre las plantas, es la fitotoxicidad que producen algunos aceites en la platas de tomate, an a bajas concentraciones (Flores, 2003).
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En cuanto a los experimentos realizados en esta investigacin, el primer grupo, compuesto por los aceites de culantro, spearmint y botones florales de clavo de olor, se caracteriz por mostrar un efecto insecticida muy reducido o nulo sobre B. tabaci. Sobre los aceites de culantro y botones florales de clavo de olor, Gmez et al. (1997b) detectaron un efecto repelente al utilizar los extractos crudos. Por otro lado, Choi et al. (2003) evaluaron la mortalidad causada por stos, sin que la hubiera, como se demostr en esta investigacin. Dichos resultados podran deberse a la utilizacin de los diferentes procesos de extraccin de la planta, que liberaron sustancias distintas.
En el caso del culantro, no est claro si la mortalidad observada a partir de la concentracin al 1,0% es atpica. La comparacin de los testigos y las concentraciones no mostr diferencias de estas ltimas con el testigo absoluto, pero tampoco con el relativo. Este tipo de comportamiento podra deberse a que los adultos experimentaron una situacin conflictiva, entre un efecto disuasivo del culantro y la atraccin al color amarillo de la trampa. Se podra argumentar entonces que el estrs generado aument la actividad en los adultos, los cuales finalmente pudieron morir por deshidratacin o agotamiento de sus reservas.
Para el aceite de spearmint hubo un efecto insecticida muy reducido. Choi et al. (2003) utilizaron este mismo aceite esencial y encontraron tambin un efecto insecticida reducido en sus experimentos.
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En el segundo grupo se observ un efecto insecticida moderado. En cuanto a la albahaca, se ha reportado un efecto insecticida sobre el abejn Tribolium castaneum, que ataca granos almacenados (Clemente et al., 2005). En los experimentos de Gmez et al. (1997b) el extracto crudo no mostr repelencia, ni tampoco mortalidad. Sin embargo, Choi et al. (2003) encontraron un efecto insecticida del aceite esencial semejante al obtenido en esta investigacin, es decir moderado o intermedio.
Los aceites esenciales de juanilama y perejil no fueron evaluados por Choi et al. (2003). En los experimentos de Gmez et al. (1997b), se evalu el extracto crudo de una planta congnere, el organo (Lippia graveolens), con el que se detect un efecto insecticida leve.
Cuando se utiliz aceite de hojas de canela y clavo de olor, se observ un efecto insecticida notorio. El contenido de eugenol de estas especies sugiere que ste podra ser el agente causante de la mortalidad. Algunos autores tambin han encontraron un efecto txico del eugenol sobre varios insectos, como Spodoptera litura, Sitophilus granarius, Coptotermes formosanus, Musca domestica, Diabrotica virgifera, Drosophila melanogaster y Aedes aegypti (Isman y Machial, 2006). Gmez et al. (1997a) no encontraron un efecto insecticida, ni de repelencia del eugenol a una concentracin al 0,1%. Es evidente que estas diferencias pueden ser debidas a la concentracin utilizada, pues la menor concentracin que se utiliz en los tratamientos de esta investigacin fue del 1,0%.
En cuanto a la menta de palo, se observ un efecto insecticida significativo al 10,0%. Gmez et al. (1997b) encontraron un efecto importante en la oviposicin cuando se us el
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extracto crudo, pero no de la mortalidad.
Estas diferencias podran deberse a la
composicin de fitoqumicos obtenidos en los diferentes tipos de extraccin utilizados para cada investigacin.
A pesar de no ser usada en los experimentos por Choi et al. (2003), s se utiliz el aceite esencial de pennyroyal (Mentha pulegium), que posee un alto contenido de pulegona (3585%) (Nassiff, 2004), el cual mostr un efecto insecticida importante. Asimismo el porcentaje de pulegona en menta de palo explicara el claro efecto insecticida encontrado. La pulegona tambin es txica para otros insectos como Musca domestica, Diabrotica virgifera, Peridroma saucia y Spodoptera litura (Isman y Machial, 2006).
Por otra parte, se registr un aumento en la mortalidad del testigo absoluto (mayor al 50%) en los experimentos cuando se utilizaron los aceites de juanilama, perejil y hojas de clavo de olor, en comparacin con los otros experimentos. Esto podra deberse al efecto ambiental, es decir, a las altas temperaturas (cercanas a 40C) en el invernadero en la poca en la cual se realizaron estos experimentos.
Tambin se observ un efecto inverso de la relacin concentracin-respuesta en los experimentos cuando se us aceite de culantro (1-5%) y el de albahaca (10-25%). Estas variaciones pudieron deberse a la separacin de fases agua y aceite en las concentracines, que quizs pudo afectar la aplicacin homognea y el modo en que se fijaba el aceite en las trampas amarillas, exponiendo el aceite esencial sobre la superficie de sta y liberndolo con mayor rapidez, favorecidos por las altas temperaturas. La mayor o menor adherencia
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de los aceites esenciales tambin pudo estar afectada por la composicin qumica de stos. Esto explicara por qu en algunos casos no se observ una tendencia anormal de la mortalidad.
El efecto insecticida fue monitoreado por un recuento de adultos, aunque tambin se observ la forma en que murieron en los diferentes tratamientos. La mortalidad tuvo dos formas: las que lo hicieron en la maceta de la trampa, con una coloracin blanca y las que murieron adheridas a la trampa amarilla, las cuales presentaron una coloracin amarillenta. En el primer caso se observ un efecto como de derribo (knock down), pues haba una gran cantidad de adultos en la maceta de la trampa, mostrando la coloracin blanca caracterstica. De lo anterior se podra argumentar que quiz los adultos no tuvieron contacto con el aceite esencial y que la fase gaseosa de ste a una distancia cercana los derrib.
En los experimentos de Choi et al. (2003) los adultos no tuvieron contacto con el aceite esencial adrede, gracias a la metodologa empleada. Ellos sugieren que el efecto txico encontrado fue a travs de la penetracin por la va respiratoria. Este mismo argumento podra ser vlido para el tipo de toxicidad mostrado. Este efecto instantneo fue observado en los aceites esenciales de hojas de clavo de olor y canela y en menor proporcin, en el aceite de albahaca.
En el segundo caso, en el cual los adultos adquirieron una coloracin amarilla, estos pudieron haberse posado sobre la trampa y haber muerto, o volaron lejos de sta, pues en
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algunos casos se encontraron adultos muertos en la planta de tomate. Esto hace pensar que B. tabaci tuvo contacto directo con el aceite esencial y quizs fue absorbido por los tarsos. Este efecto insecticida fue caracterstico de los dems aceites esenciales.
Desde el punto de vista tecnologico la trampa amarilla no funciona como un dispositivo efectivo de liberacin del aceite esencial, pues despus de aplicacin que se observ la prdida de color y el olor de aceite esencial, adems se endurecio. En este ltimo caso, la prdida del olor se dio a las concentraciones inferiores al 15%. Es por esto que se podra experimentar con mtodos de liberacin controlada que puedieran mantener el efecto txico en los primeros 30 das, pues es en este perodo en el que el cultivo de tomate es ms susceptible a los virus transmitidos por B. tabaci.
Para este fin se podran utilizar polmeros sintticos como el nailon, el cual posee tamaos de poro muy pequeos, lo cual sera ideal para la liberacin de compuestos voltiles. Otros materiales con uso potencial en la experimentacin podran ser el quitosano y la quitina. En el caso del quitosano (Peniche et al., 2001), ya se ha utilizado experimentalmente para la liberacin controlada en biomedicina. Adems, estos son obtenidos como subproductos de los desechos de la industria del camarn, que en el caso del quisotano es altamente biodegradable.
Por otra parte, desde el punto de vista de la concentracin-respuesta, se podran utilizar sustancias sinrgicas para potenciar el efecto insecticida de los aceites esenciales, como por ejemplo el dilapiol (L. Hilje, comunicacin personal).
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En cuanto a los aceites esenciales que fueron extrados mediante la hidrodestilacin (menta de palo y juanilama), se obtuvo un rendimiento muy cercano al reportado por la literatura para el primero, un 1,3% (m/m) de un material vegetal de San Pedro de Montes de Oca (Vila et al., 2000), un 0,3% (m/m) de San Vito de Coto Brus (Tucker y Maciarello, 2000) y un 1,1% (m/m) obtenido experimentalmente de material extrado de Santa Brbara de Heredia. El bajo contenido de aceite esencial del Cantn de Coto Brus, tal vez se deba a que el material analizado se obtuvo comercialmente en Estados Unidos, el cual quizs perdi parte de los componentes voltiles durante el traslado.
Para el aceite esencial de juanilama, se obtuvo un rendimiento de 2,7% (v/m) de material obtenido de Talamanca, en la zona Atlntica de Costa Rica (Cicci y Ocampo, 2004). Experimentalmente se obtuvo un 0,8% (m/m) de material proveniente del cantn de Sarapiqu. Estas diferencias en el rendimiento tal vez se deban a diferentes condiciones ambientales, tipos de los suelo, humedad, temperatura y pluviosidad entre una zona y otra, as como la poca de recoleccin del material.
El rendimiento de la menta de palo mostr particularmente ser potencial para su extraccin, pero no el de juanilama. Sin embargo, seran necesario estudios ms detallados de los factores genticos, ontognico, fenolgicos y ambientales (Sharapin et al., 2000), as como econmicos, para evaluar su produccin a gran escala.
Por otro parte, para el anlisis por cromatografa de gases se escogieron los aceites esenciales de hoja de canela, clavo de olor y menta de palo, debido a que reflejaron con
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mayor claridad un efecto insecticida. Sin embargo, sera importante analizar tambin la composicin de los aceites esenciales que mostraron un efecto txico moderado y verificar con la literatura consultada.
Para el aceite esencial de hojas de canela y clavo de olor se identific como principal componente el eugenol. El porcentaje reportado en la literatura (72,4% para canela y 8589% para el clavo) (Lawrence, 2006) fue similar al obtenido experimentalmente (66,68% para canela y 83,43% para el clavo). Debido al alto contenido de ste, quizs fue el agente causante del efecto insecticida de derribo (knock down).
Sin embargo no se descarta un posible efecto sinrgico con otros componentes del aceite esencial, especialmente aquellos pertenecientes a la familia de los fenilpropanoides, los cuales son utilizados por las plantas contra varios insectos, con efecto txico (Isman y Machial, 2006). Otros componentes en el aceite esencial de canela pertenecientes a la familia de los fenilpropanoides fueron el benzoato de bencilo, eugenil acetato, safrol, acetato de cinamilo y cis-cinamaldehdo.
En el caso del aceite esencial de clavo de olor, a pesar de que la literatura menciona un contenido semejante de eugenol para el obtenido a partir de hojas (82-85%) y de botones florales (85-89%), hubo un efecto inseticida distinto entre ellos. Esto podra deberse a la existencia de componentes con una accin sinrgica sobre el eugenol en el aceite obtenido a partir de hojas o de un supresor en el aceite esencial de botones florales de clavo de olor.
63
Para el aceite esencial de menta de palo, se identificaron la pulegona y el p-menta-3-en-8-ol como sus principales componentes. Cabe indicar que savory (Satureja montana), a pesar de ser congnere, tiene como principales componentes al carvacrol y timol (Lawrence, 2006). Vila et. al. (2000) encontraron en la menta de palo una composicin menor de la pulegona (35,3%) y mayor de p-menta-3-en-8-ol (40,0%) que la obtenida en esta investigacin.
El alto contenido de stos en el aceite esencial quizs provoc el efecto insecticida. La pulegona y el p-menta-3-en-8-ol pertenecen a la familia de los monoterpenos oxigenados que son utilizados por las plantas como mecanismo de defensa, con efectos txicos y repelentes contra diferentes especies de insectos (Isman y Machial, 2006). Otros componentes del aceite esencial quizs pudieron contribuir al efecto insecticida, especialmente los monoterpenos oxigenados, como el iso-pulegol, iso-pulegona, piperitenona y eucaliptol y tambin sesquiterpenos oxigenados, como el xido de
cariofileno, viridiflorol y espatulenol.
La identificacin de los componentes del aceite esencial se realiz por medio de la base de datos NIST 2005 y tambin se utiliz la determinacin de los ndices de retencin Kovat (Linskens y Jackson, 1986). No todos los componentes del aceite esencial pudieron ser identificados por este mtodo, pues algunos de los picos del cromatograma pudieron quedar traslapados con los picos de mayor tamao y otros quedaron fuera del mbito de anlisis de los etil steres.
64
Tericamente, la variacin de ndices Kovat, puede ser 10 unidades, para corridas cromatogrficas utilizando un programa de temperatura (Linskens y Jackson, 1986). Experimentalmente se determin que en los primeros componentes hubo una variacin de 5 a 10 unidades, cuando se mantuvo una temperatura constante en los primeros minutos del anlisis. Sin embargo, en los componentes posteriores se obtuvieron diferencias de hasta 20 unidades. En teora, las variaciones en los ndices Kovat pueden ser debidas a aumentos de temperatura de la columna y al estado de la fase estacionaria en sta misma (Linskens y Jackson, 1986). En el primer caso, la tasa de cambio de temperatura utilizada (3C/min) fue idnea, pues otros autores han realizado la identificacin de compuestos con tasas de cambio mayores (5C/min) (Base de datos NIST 2005). Por otro lado,
posiblemente el revestimiento de la columna estacionaria (5% fenil metil siloxano), estaba deteriorada por su uso, lo cual provoc la retencin inadecuada de los compuestos.
Estas diferencias entre el ndice de retencin terico y experimental, pueden ser explicadas para componentes con una alta concentracin en el aceite esencial, como es el caso del eugenol. El efecto de la concentracin produjo una base ancha, de modo que el tiempo de retencin reportado en el cromatograma podra estar desplazado, desviando el ndice Kovat. Sin embargo, componentes que eluyeron antes y despus del eugenol tambin experimentaron grandes variaciones a concentraciones inferiores, lo que descarta esta idea como posible causa de error.
El compuesto p-menta-3-en-8-ol no fue identificado por medio de la base de datos NIST 2005. Entonces se utiliz el ndice Kovat para su identificacin. Se obtuvo una diferencia
65
de 15 unidades en el valor del ndice con respecto al terico. Sin embargo, se considera como identificado pues, como se mencion anteriormente, el programa de temperatura no permiti un mayor acercamiento. Para posteriores anlisis se debera utilizar una tasa de cambio no inferior a 5C/min.
En sntesis, los aceites esenciales han mostrado ser eficientes para controlar varios insectos plaga (Isman y Machial, 2006). En el caso de B. tabaci, el uso de trampas amarillas con aceites esenciales podra tener gran potencial, sobre todo en la proteccin de hortalizas como el tomate y el chile dulce de produccin en invernadero, en el que se necesitan opciones de manejo menos contaminantes y de menor residualidad. Sin embargo, es necesaria la insercin de la industria agroqumica y las universidades para desarrollar un producto que cumpla con los requerimientos de precio y eficacia. Una herramienta
importante en la investigacin es la derivacin qumica, que puede ser utilizada para encontrar molculas similares que resulten ms txicas que las originales naturales o que no pudieran ser obtenidos con altos rendimientos en la naturaleza.
En la agricultura, los insecticidas peligrosos estn siendo progresivamente removidos del mercado, mientras que el cambio cultural hacia mtodos de control de plagas novedosos est ganando aceptacin, sobre todo en cultivos de alto valor agregado y productos de origen orgnico, en los cuales tanto el mercado nacional como internacional requieren alimentos sin plaguicidas contaminantes. Actualmente se utilizan normas internacionales como lo es el sistema de Anlisis de Peligros y de Puntos Crticos de Control (HACCP), debido a los problemas en materia de sanidad de los alimentos de las ltimas dcadas, que
66
han incrementado los controles de todas las etapas de produccin, procesamiento y distribucin. Es por esto que las prcticas agrcolas afrontan el reto de buscar alternativas de control de plagas que permitan producir cosechas de manera sostenible, a la vez que satisfacen la demanda de productos agrcolas, sin que se perjudique el ambiente en el proceso.
67
CAPITULO V
Conclusiones y recomendaciones
5.1
Conclusiones
5.1.1 Los aceites esenciales de hojas de clavo de olor, canela y menta de palo mostraron un efecto insecticida significativo sobre los adultos B. tabaci, mientras que fue moderado para los aceites de albahaca, juanilama y perejil, y reducido o nulo para los de culantro, spearmint y botones florales de clavo de olor.
5.1.2 Con los aceites esenciales de hojas de clavo de olor y canela se observ un efecto txico como de derribo (knock down) sobre los adultos de B. tabaci.
5.1.3 El eugenol y la pulegona fueron los componentes mayoritarios en los aceites esenciales de hojas de clavo de olor, canela y menta de palo, y quiz fueron los que provocaron el efecto insecticida detectado.
68
5.2 Recomendaciones
5.2.1 Realizar cambios en la formulacin de las soluciones, para obtener en todas ellas fases homogneas an a altas concentraciones del aceite esencial.
5.2.2 Utilizar gomas dispersantes (como la xantan o arbiga), para soluciones a base de agua y solventes como el propilenglicol, dipropilenglicol, triacetina, polisorbato 20 o 80, vaselina lquida y aceite vegetal, para obtener fases homogenas.
5.2.3 Evaluar el eugenol y la pulegona como sustancias puras, para determinar si causan el efecto insecticida detectado.
5.2.4 Evaluar con compuestos qumicos anlogos, que podran ser ms potentes, como el iso-eugenol, metil eugenol, etil eugenol, anetol, chavicol, metil chavicol, estragol y anisaldehdo (para el eugenol) y el iso-pulegol, mentona, carvona, mentol, piperitetona, y terpineol (para la pulegona).
5.2.5 Analizar por cromatografa de gases los aceites esenciales que tuvieron un efecto insecticida moderado, para verificar la composicin reportada en la literatura.
69
CAPITULO VI
Referencias
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75
CAPITULO VII
Anexos
76
Anexo 1. Anlisis de la mortalidad de adultos de B. tabaci causada por el aceite esencial de albahaca, mediante la prueba de Duncan.
El sistema SAS Procedimiento GLM Clase Tratamiento Niveles 8 Valores 12345678
Nmero de observaciones: 32 Nmero de repeticiones: 4 Medida Referencia Error Total R cuadrado 0,6099 DF 7 24 31 Coeficiente variacin 33,5534 Suma de Cuadrado cuadrados de media 149,9993 21,4285 95,9267 3,9969 245,9260 Raz MSE 1,9992 0,05 24 3,9969 3 3,064 Tratamiento 6 8 2 7 4 3 5 1 4 3,159 5 3,225 6 3,275 7 3,313 8 3,344 Media de mortal1 5,9584 Valor F 5,36 Pr > F 0,0009
Alfa Error de grados de libertad Error de cuadrado de la media Nmero de media Rango crtico Grupacin de Duncan A AB AB AB BC C C C 2 2,918 Media 8,544 8,201 7,889 7,231 5,268 4,114 4,030 2,360
Las medias con la misma letra no son significativamente diferentes.
77
Anexo 2. Anlisis de la mortalidad de adultos B. tabaci causada por el aceite esencial de hojas de clavo de olor, mediante la prueba de Duncan.
Alfa Error de grados de libertad Error de cuadrado de la media Nmero de media Rango crtico Grupacin de Duncan A AB AB ABC ABCD BCD CD D 2 1,119 Media 9,529 9,430 9,370 9,270 8,510 8,246 8,074 7,932
78
Anexo 3. Anlisis de la mortalidad de adultos B. tabaci causada por el aceite esencial de juanilama, mediante la prueba de Duncan.
Alfa Error de grados de libertad Error de cuadrado de la media Nmero de media Rango crtico Grupacin de Duncan A A A AB BC BC BC C 2 1,238 Media 9,821 9,213 9,013 8,521 7,694 7,620 7,229 6,820
79
Anexo 4. Anlisis de la mortalidad de adultos B. tabaci causada por el aceite esencial de perejil, mediante la prueba de Duncan.
Alfa Error de grados de libertad Error de cuadrado de la media Nmero de media Rango crtico Grupacin de Duncan A A AB AB AB AB B B 2 1,194 Media 9,590 9,580 9,430 9,144 9,053 8,384 8,198 8,140
80
Anexo 5. Anlisis de la mortalidad de adultos B. tabaci causada por el aceite esencial de menta de palo, mediante la prueba de Duncan.
Alfa Error de grados de libertad Error de cuadrado de la media Nmero de media Rango crtico Grupacin de Duncan A A A A AB B B B 2 3,271 Media 8,622 8,484 8,282 7,945 5,642 4,136 4,035 3,690
81
Anexo 6. Anlisis de la mortalidad de adultos B. tabaci causada por el aceite esencial de canela, mediante la prueba de Duncan.
Alfa Error de grados de libertad Error de cuadrado de la media Nmero de media Rango crtico Grupacin de Duncan A A A AB AB AB BC C 2 1,548 Media 9,340 9,176 9,050 8,770 8,739 8,706 7,300 6,933
82
Anexo 7. Anlisis de la mortalidad de adultos B. tabaci causada por el aceite esencial de botones florales de clavo de olor, mediante la prueba de Duncan.
Alfa Error de grados de libertad Error de cuadrado de la media Nmero de media Rango crtico Grupacin de Duncan A B B B B B B B 2 2,646 Media 9,924 6,041 5,795 5,461 5,290 5,161 5,038 4,568
83
Anexo 8. Anlisis de la mortalidad de adultos B. tabaci causada por el aceite esencial de culantro, mediante la prueba de Duncan.
Alfa Error de grados de libertad Error de cuadrado de la media Nmero de media Rango crtico Grupacin de Duncan A AB AB AB AB AB AB B 2 3,714 Media 9,228 8,084 7,732 7,706 7,538 7,271 5,795 4,711
84
Anexo 9. Anlisis de la mortalidad de adultos B. tabaci causada por el aceite esencial de spearmint, mediante la prueba de Duncan.
Alfa Error de grados de libertad Error de cuadrado de la media Nmero de media Rango crtico Grupacin de Duncan A B BC BC BC BC BC C 2 1,851 Media 9,454 7,068 6,971 6,901 6,730 6,149 5,549 4,940
85

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UNIVERSIDAD NACIONAL Campus Omar Dengo FACULTAD DE CIENCIAS EXACTAS Y NATURALES ESCUELA DE QUMICA

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iii v vi vii ix x xii

Agradecimientos ndice General

ndice de cuadros ndice de figuras ndice de anexos

2.3 Materiales y reactivos .. 2.4 Metodologa .

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3.2 Anlisis por cromatografa de gases

Captulo IV: Discusin.

Captulo V: Conclusiones y recomendaciones. 5.1 Conclusiones . 67 . 68

Captulo VI: Referencias.

Captulo VII: Anexos.

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1.1 Antecedentes y justificacin

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1.2 Fundamento terico

1.2.1 Cambio de paradigma en la agricultura

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1.2.2 Produccin de hortalizas en invernaderos

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1.2.4 Importancia econmica del complejo B. tabaci-virus

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1.2.5 Aspectos biolgicos de B. tabaci

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1.2.7. Estudios de repelencia y mortalidad sobre B. tabaci

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error) mostr un fuerte efecto insecticida e importante efecto en la oviposicin.

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1.2.8 Aceites esenciales como insecticidas

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1.2.9 Clavo de olor (Eugenia caryophyllata)

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1.2.10 Canela (Cinnamomum zeylanicum)

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1.2.11 Menta de palo (Satureja viminea)

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1.2.12 Juanilana (Lippia alba)