DETERMINAO DE PERXIDO DE HIDROGNIO EM LEITE EMPREGANDO UM MICRODISPOSITIVO ELETROQUMICO ACOPLADO A SISTEMA DE ANLISE POR INJEO EM FLUXO

Montes, R.H. de O. (UFU), da Silva, R.A.B. (UFU), Richter, E.M. (UFU) e Munoz, R.A.A. (UFU) UFU Instituto de Qumica - Universidade Federal de Uberlndia

RESUMO: Neste trabalho apresentamos o uso de um microdispositivo eletroqumico alternativo 3 em 1 para a determinao seletiva de perxido de hidrognio em amostras de leite UHT desnatado e UHT integral em um sistema de anlise por injeo em fluxo (FIA). O eletrodo de trabalho (posicionado no interior da ponteira) foi modificado com partculas de Azul da Prssia. As condies timas de anlise do sistema FIA so: vazo de 1,0 mL min-1, volume injetado de 100 L e diluio da amostra no eletrlito suporte de no mnimo dez vezes. O sistema apresenta simplicidade e rapidez devido pequena manipulao da amostra (somente diluio) e alta freqncia analtica (sistema FIA).

Palavras Chave: determinao amperomtrica, perxido de hidrognio, leite.

INTRODUO: Perxido de hidrognio (H2O2) um produto de reaes catalisadas por oxidases e catalase, e importante em muitas reas incluindo bioqumica, qumica de alimentos, qumica clnica e qumica ambiental. A determinao de H2O2 de grande importncia para a indstria de alimentos, pois ele usado como agente antibacteriano para o leite (ALPAT et al., 2009). No Brasil, a adio de perxido em qualquer concentrao proibida pela ANVISA. Recentemente no Brasil (2007) amostras de leite cru estavam sendo adulteradas altas concentraes de perxido, conforme laudo realizado por laboratrio do Ministrio da Agricultura. Esse problema chamou a ateno para a necessidade de um sistema mais eficiente para monitorar a qualidade do leite. Muitos mtodos para H2O2 tm sido desenvolvidos usando titulao e espectrofotometria. No entanto, estes mtodos no oferecem alta sensibilidade e simplicidade operacional, e ao mesmo tempo, tambm tm reaes complexas (ALPAT et al., 2009). Nesta perspectiva, destacam-se algumas tcnicas eletroanalticas, devido alta seletividade, sensibilidade e baixo custo. Nesta vertente, utiliza-se o Azul da Prssia (AP), que um dos principais modificadores utilizados para a determinao de perxido. Com estes sensores, possvel detectar

H2O2 pela sua reduo eletrocataltica com um baixo potencial aplicado (0,0 V vs Ag/AgCl/KClsat.). O objetivo desse trabalho avaliar as condies experimentais para a deteco de perxido em amostras de leite (integral e desnatado) utilizando um microdispositivo alternativo. Este microdispositivo contm os trs eletrodos de compsitos condutores posicionados na extremidade de uma ponteira de micropipeta (DA SILVA et al., 2010), sendo que o eletrodo de trabalho modificado com partculas de AP.

MATERIAL E MTODOS: As determinaes de perxido foram realizadas com um sensor alternativo 3 em 1 (DA SILVA et al., 2010). Neste, os trs eletrodos so fixados na extremidade de uma ponteira de micropipeta de polietileno (10-100 L, interno 1 mm). Um compsito de prata e um de grafite so fixados em lados diametralmente opostos na face externa da ponteira e um compsito de grafite modificado com partculas de AP posicionado no interior da ponteira. Estes compsitos (em contato com fios de cobre) aps a cura e polimento atuam como eletrodos de pseudo-referncia, auxiliar e trabalho, respectivamente. O compsito fluido de prata (PC 9045) foi adquirido da empresa Joint Metal Comrcio Ltda. (Diadema/SP) e o compsito fluido de grafite foi preparado em laboratrio (DA SILVA et al., 2010). A modificao do grafite com partculas de AP foi feito adicionando-SE grafite puro numa soluo de cloreto frrico e ferrocianeto de potssio em meio de HCl, sob agitao (MOSCONE et al., 2001). As determinaes de H2O2 foram realizadas com um sistema de anlise por injeo em fluxo (FIA) de linha nica. As amostras de leite (dopadas ou no com soluo padro de perxido de hidrognio) foram injetadas com um injetor comutador. Para a otimizao das variveis do sistema, estudou-se as melhores condies do sistema FIA (vazo e volume injetado) e diferentes diluies de leite no eletrlito (tampo fosfato 0,05 mol L-1 e KCl 0,1 mol L-1; pH 7,2). O sensor utilizado facilmente introduzido no fim da tubulao do sistema FIA (configurao wall jet). Os experimentos eletroqumicos foram realizados empregando um potenciostato -Autolab III (Eco Chemie) e o software GPES 4.9.007 para a aquisio dos dados. Os estudos foram realizados com a tcnica amperometria.

RESULTADOS E DISCUSSO: A avaliao das correntes de pico do H2O2 em diferentes volumes injetados e vazes no sistema FIA so apresentados na Fig. 1.

De acordo com a fig. 1, as injees de volumes acima de 100 L (a2) no causam um aumento significativo na corrente dos picos, somente o alargamento dos mesmos. Em relao vazo, observa-se uma mxima corrente de pico a 1,0 mL min-1 (b2). Vazes inferiores a esta fornecem picos pouco intensos e largos (disperso da amostra no eletrlito) e vazes superiores a esta resultam em picos mais estreitos, porm menores (limitao cintica na reduo do H2O2 no mediador AP). Logo, as condies otimizadas foram: volume injetado de 100 L e vazo de 1,0 mL min-1. No estudo da determinao de H2O2 em leite, foram testadas duas amostras UHT, uma desnatada e outra integral. As amostras de leite (puras e dopadas com H2O2 100 mol L-1) foram submetidas a diferentes diluies no eletrlito suporte. A partir dos amperogramas obtidos (no apresentados), nenhum sinal correspondente a H2O2 foi encontrado nas amostras puras. Nas amostras dopadas as concentraes de H2O2 adicionadas foram comparadas com as obtidas e ento calculou-se a recuperao em cinco distintas diluies (Fig. 2).

Conforme a fig. 2, H2O2 pode ser determinado com boa exatido em diluies superiores a 10 vezes (recuperao entre 90 e 110 %). Em diluies mais baixas existe uma diminuio da corrente de pico, como apresentado nas menores recuperaes das diluies 4 e 5 (Fig.2). Nestas diluies, problemas relacionados a efeitos de matriz (gorduras, protenas e sais dissolvidos) podem ser responsveis pela queda do sinal (contaminao do eletrodo), alm de uma possvel variao no pH, pois o cido ltico que pode ter quebrado o efeito tamponante do tampo fosfato.

CONCLUSES: O mtodo analtico para determinar H2O2 em leite simples e rpido, devido ao simples pr-tratamento da amostra (somente diluio) e alta freqncia analtica (140 injees por hora) promovida pelo sistema FIA. Foi possvel a determinao de H2O2 com boa preciso e exatido, com uma diluio de no mximo dez vezes (recuperaes entre 90 e 110 %). Felizmente, H2O2 no foi detectado em nenhuma das amostras de leite puro analisadas. As microclulas para anlise no sistema FIA so facilmente construdas e apresentam um baixo custo, logo podem ser implementadas em qualquer laboratrio.

AGRADECIMENTOS: FAPEMIG, CNPq, CAPES e IQ-UFU.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS: ALPAT, S.; ALPAT, S. K.; DURSUN, Z.; TELEFONCU, A. 2009. Development of a new biosensor for mediatorless voltammetric determination of hydrogen peroxide and its application in milk samples. Journal of Applied Electrochemistry, 39: 971-977.

DA SILVA, R. A. B.; RABELO, A. C.; MUNOZ, R. A. A.; RICHTER, E. M. 2010. Three-Electrode-Integrated Sensor into a Micropipette Tip. Electroanalysis, aceito para publicao.

MOSCONE, D.; DOTTAVI, D.; COMPAGNONE, D.; PALLESCHI, G.; AMINE, A. 2001. Construction and analytical characterization of Prussian Blue-based carbon paste electrodes and their assembly as oxidase enzyme sensors. Analytical Chemistry, 73, 2529-2535.