DETERMINACIN DE MARIHUANA La marihuana (mota, caf grifa, la verde, juanita, mostaza, toque o de buena) como problema de identificacin con

fines forenses representa sin duda el primero y ms importante por ser la ms importante por ser la ms comn de las drogas de abuso en nuestro medio. Puede presentar en una amplia variedad de formas, cada una de las cuales requiere de la aplicacin de una metodologa diferente para su identificacin. La formas ms frecuentes es la de la planta o picadura de la misma ,los siguientes residuos de combustin as como aquellos que pueden quedar en los elementos, incluyendo los dedos que fueron utilizados el momento de fumarla8pipas,boquillas,etc)una forma usa especialmente para el trfico es le extracto obtenido con solventes orgnicos (ter, cloroformo, etanol ,hexano) y por ltimo el tradicional Hashish, constituido por un concentrado de resina de las sumidades florecidas de la planta de cannabis. La mayora de las muestras que llegan al laboratorio de criminalstica estn constituidas por material vegetal de tamao variable ms o menos seco, en los cuales es imposible reconocer los elementos botnicos de la planta a excepcin de la presencia de las semillas .estas tiene forma elipsoide ligeramente comprimida, son de color gris o caf con una longitud de 2.5-5mm.Y la superficie de su dura cubierta presenta una tupida red de nervaduras de color claro. La importancia y eficacia del examen microscpico combinado con el emplea de pruebas con desarrollo de color y la utilizacin de cromatografa de capa delgada ha sido puesta de manifiesto por numerosas autores extranjeros y comprobamos en nuestro laboratorio. COMPOSICIN QUIMICA Esencia a base de p-simeno y de diversos productos orgnicos y minerales. Resina poco soluble en agua, soluble en alcohol, ter, cloroformo, ter de petrleo, aceites y esencias. Las propiedades narcticas parecen relacionarse con los componentes fenlicos o al menos con alguno de ellos. Dichos componentes son: Acido Cannabidiolico (CBD),Tetrahidrocannabidol(THC) y el Cannabinol(CEN). (CBA),Cannabidiol

El tener de cada uno de estos componentes responde al grado de madures de la droga. As vamos a tener un cannabis verde contiene sobre todo CEA mientras q un cannabis maduro contiene un importante porcin de TCH y un cannabis muy maduro alterado presenta una

taza aumentada de CEN. Estas transformaciones fotoqumicas se operan tambin el producto seco (maduracin paulatina de la resina en el curso de su conservacin) PRINCIPIO ACTIVO: El efecto psicofarmacolgico en los humanos es imputable a ismeros del tetrahidrocannabinol (TCH), confirmado por korte y col. Por cromatografa en capa delgada y ulterior elucin. l SEA y el CBD no presentan accin narctica y el SEN acusara una accin farmacodinamia muy dbil o nula en relacin con el PHC. El CPA presentara una actividad antibitica revelable por una inhibicin del desarrollo de bacterias Grampositivas la variedad Cannabis Sativa contiene una resina igual a la de Cannabis cultivada en Asia y pases mediterrneo, diferencindose en el tenor en resina y en relativo contenido de CBA, CBD, THC, CBN. EXAMEN ANALTICO: Examen microscpico: Como criterio para identificacin morfolgica de la Cannabis se ha tenido en cuenta la presencia de glndulas productoras de resinas y tricomas (uas de gato) con sistlico basal de carbonato de calcio en los fragmentos de hoja o tallos de la planta en cuestin. Sin embargo se sabe que muchas de las especies de la planta de Dicotiledneas presentan tricomas del tipo de la Cannabis. Entre ellas destaca la presencia Humulus Lupulus (lpulo), la nica otra especie que junto con la Cannabis pertenece a la familia Cannabineceae. Aunque la planta fresca presenta numerosas caractersticas botnicas que ayudan a una pronta identificacin macroscpica y microscpica, en casos forenses no es suficiente sino hay necesidad de apelar a tcnicas qumicas especiales. Muestra El material se pulveriza se mezcla con agua o glicerina y una muestra de l se coloca entre porta y cubre objeto para su posterior observacin al microscopio. Si desea una mejor visualizacin de los detalles se reconcomiendo hacer el siguiente proceso de preparacin que aunque ms elaborado sin embargo permite captar ms claramente los detalles. Trasvasar a un tubo de ensayo de solucin concentrada de hidrato de cloral, hervir. Utilizar el material sobrenadante que se trasvasa a un porta, cubrir y observar a varios aumentos segn las partes que puedan ofrecer inters. De tratarse de marihuana se observara.

 Pelos sistlicos, unicelulares, no glandulares, de paredes gruesas, ms o menos arqueadas, que presenta en su base un sistlico, en ocasiones en forma de valva, en otras arracimado. Glndulas secretoras de resina, algunas ssilos y otras con tallos o pednculos , por lo cual se encuentran libres o separadas. Pelos largos, simples delgados o curvos. ENSAYOS QUIMICOS A Pasar que la identificacin microscpica es suficiente para determinar que se trata de marihuana, debe realizarse por rutina pruebas qumicas sobre el material existente para completar y confirmar lo observado al microscopio. Para el efecto hay cierto nmero de pruebas qumicas que se detallan a continuacin. Ensayo de Beam. Reactivos Solvente para extraccin, etanol, ter de petrleo liviano, acetato de etilo o alcohol amilo. Carbn activado. Reactivo de Beam solucin alcohlica de hidrxido de potasio ( 10gr por 100ml de etanol absoluto) Metodologa: Reducir el material a polvo fino y extraer con etanol ter de petrleo, etc., filtrar y evaporar a sequedad al bao de mara. La solucin es color castao de intensidad variable y verde neto (clorofila) bien de otro color segn el material extrao que contiene. En estos casos tratar con la menor cantidad posible de carbn activado y filtrar, evaporar a sequedad. Sobre el residuo agregar 12 gotas de reactivo de Beam y dejar en reposo. Aparece gradualmente el color violeta si existe resina camn indiano. Noirfalice seala que puede calentarse suavemente o bien agregar el reactivo estando caliente el residuo. Interpretacin y observaciones: Esta reaccin es producido por el cannabinol y no por el tretrahidrocanabinol, por lo tanto, no refleja la actividad fisiolgica de la droga.

Esta comprobacin explica el resultado negativo que suele obtenerse con muestra de cannabis ricas en resina fisiolgicamente activa y, por el contrario, positivas con muestras fisiolgicamente inactivas o dbiles. Ensayo de Bouquet: Reactivos Acetato de Etilo Acetona Reactivo de Bouquet: Se toman 3 partes de etanol absoluto que se colocan en un Beaker y lentamente y con agitacin se aaden dos partes de cido sulfrico concentrado. (Este reactivo deber prepararse siempre fresco este reactivo deber prepararse siempre fresco) Metodologa: Una porcin de material sospechoso se coloca en un tubo de ensayo. Se aaden 5ml de acetato de etilo los contenidos se agitan por 5 minutos y se filtran. Extrigase con 5ml ms de acetato de etilo: Fltrese y combnese los dos extremos. Estos generalmente de color verdoso con resultado de la extraccin de clorofila, se decolora con la mnima cantidad de carbn activo despus de filtrar el tubo de ensayo conteniendo el filtrado se coloca en una capsula de porcelana y se evapora al bao mara hasta sequedad. Dejar enfriar y el resultado disolver en 1ml de acetona. Se aade: 0.5ml del reactivo de bouquet recientemente preparado. Al dejar reposar se observa un color rojo-marrn, que se desarrolla lentamente si el material es Cannabis. Si aaden unas gotas de agua destilada a la solucin se observara una opalescencia blancuzca. Observaciones: Algunos otros materiales pueden desarrollar un color marrn con este reactivo pero, estos no reaccionan de manera similar cuando se aade el agua. Ensayo de Ghramraway: Reactivos ter de petrleo Reactivo de Ghramraway: pesar 10gr de p-metilaminobenzaldehido, aadir 100ml de alcohol etlico disolver y posteriormente aadir 20 gotas de cido sulfrico concentrado (preparar en fresco).

Metodologa: Procdase a extraer una cierta cantidad de la muestra 10ml de ter de petrleo. Agtese por 5 minutos y fltrese. Si el filtrado es de color verdoso decolorar con carbn activo. Evaprese hasta sequedad en una capsula de porcelana; djese enfriar y adase el reactivo. Al aadir el reactivo si hay Cannabis se formara un color violeta que al evaporar pasa a azul. IDENTIFICACIN CROMATOGRFICA EN CAPA DELGADA Un buen nmero de autores expresan que los ensayos qumicos son inespecficos y proponen la resolucin cromatogrfica en capa delgada que permite una buena separacin de los principales componentes de la resina (CBN,THC,CBD). La aplicacin del mtodo permite tener una idea bastante clara de la composicin de las muestras en estudio, y la separacin e identificacin de los componentes de la resina constituye un importante elemento de juicio para sentar criterio presuntivo sobre la actividad farmacolgica de las mismas, si se tiene en cuenta que los tetrahidrocannabioles son los responsables de la arreflexia corneal y ataxia e los animales de experimentacin y de las acciones psicofarmacolgicas en los humanos, y que el cannabidiol es el responsable de la llamada potenciacin hipntica". La cromatografa en capa fina ha venido a reforzar los mtodos antes descritos. Esta tcnica de separacin proporciona una alta resolucin y especificidad, especialmente si se corre paralelamente un testigo conocido. Los solventes empleados para la extraccin del material cuestionado son: ter de petrleo, cloroformo, hexano, benceno o etanol. Los dos primeros son en nuestra opinin los mejores. La fase estacionaria o slida ms usada es la silicagel G sobre placas de vidrio de aluminio pudindose usar como marcador fluorescente el f-254(Merck), que permite usar luz ultravioleta para visualizar las placas. Las fases mviles o sistema de solventes son mltiples y varan segn los autores, la aplicacin o finura que se requiera dar al anlisis, el tiempo que se disponga o el nivel de resolucin que se pretenda. ELUENTES: a) Benceno. b) N-butanol-hexano-dietilamina c) N- hexano-ter etlico

d) N-hexano-dioxano REVELADORES: a) Azul slido B solucin al 0.15% b) Bencina diazotada: disolver 0.5g de bencidina en 1.4 ml de cido. Clorhdrico puro y llevar a 100ml con agua destilada. Mezclar una parte de esta solucin con igual volumen de nitrito de sodio al 10%. c) Reactivo de Beam: Solucin alcohlica de hidrxido de potasio al 5%. d) Reactivo de Duquenois: Disolver 0.5g de vainillina con 20ml de etanol y agregar 45 gotas de formaldehdo PROCEDIMIENTO: La muestra en estudio se deja en desecador durante 2 das.Se seleccionan las partes que contienen mayor cantidad de resina, y se pulveriza. Para deternimaciones cuantitativas pesar exactamente1.0gr de productoy colocar en recipientes cerrados con 10ml de etanol dejando a temperatura ambiente durante 2 das;evaporar a sequedad al bao de maria y disolver el residuo en un pequeo volumen de etanol. Resolver para cromatografaen capa delgada y en fases de gaseosa. Sobre la placadesilicagel se simbran partes alcuotas de la muestra en estudio, se deja correr 15cc en el solvente escogido luego de sacar de la cmara se deja secar y se procede al revelado con los reactivos mencionados .Para la comprobacin de los rescpectivas manchas con los reactivos mencionados,se debe tener en cuenta lo siguiente: a) Con la bencidina diazotada se obtienen colorres amarillo-naranja para el CANNABINOL (CBN), rojo naranja para para el TETRAHIDROCANNABINOL ( THC), y rojo castao con el CANNABIDIOL (CBD). b) Con el reactivo de Bean: a temperatura ordinaria se requieren alrededor de 12 horas para revelar el CANNABIDIOL (CBD) pero a105|C c) Con el reactivo de Duquenois:despus de aspersin se deja secar y se efectua un tratamiento similar con cido clohdrico, se llava posteriormente a una estufa a 150C DURANTE 5 MINUTOS. Se producen manchas azules con tres componentes estudiados: CBN,THC,CBD. d) Con el azul slido B se obtiene una mancha roja violceo para el CBD, rosa para el THC, purpura para el CBN. La mayora de los auotores estn deacuerdo con que el diazotado de la bencidina y el azul slido B son los reactivos massencibles.

E. INVESTIGARCIN UTILIZANDO CROMATOGRAFA GASEOSA Para la resolucincromatografica se recomienda la suiente tcnica: Columna de vidrio de 2ml llena con SE-3Oal 3% sobre chromesorb G de 80/100mallas. Temperatura de la columna: 210C Temperatura del Detector 250C Temperatura bloque de inyeccin 270C Gas vector:nitrgeno Sensibilidad:1:2 Detector: ionizacin (llama) Las fracciones que corresponde a los primeros minutos sealan la presencia de limonemo, betacarolifno, mirceno,etc. Con tiempos retencin superiores (20,30,40 y 45 minutos) se comprueban mximos de superficies diferentes en las diversas fracciones que, de acuerdo con las referencias bibliografcas, se supone que corresponde al cido cannabidiolico o cannabidiol, dos ismeros de tetrahidrocannabinoly cannabinol. INVESTIGACIN DE CANNABINOIDES EN SUJETOS FUMADORES: Se recomienda trabajar con muestra de orina obtenidas dentro de 6 horas, despus de fumarse el ultimo cigarrillo. Tomar un volumen determinado de orina con un tercio de su volumen de n- hexano. Repetir el agotamiento con n- hexano. Centrifugar y dejar separar segn el volumen que se disponga. Los extractos obtenidos en un embudo de decantacin se lavan con un pequeo volumen de solucin saturada de cloruro de sodio; se separa la capa inferior acuosa salina y se agrega, al embudo la cantidad suficiente de sulfato de sodio anhidro. Filtrar el n- hexano ya tratado a travs de un papel seco y evaporar a presin reducida (a falta de implementos para tal objeto, se proyectara aire fro con un secador de cabello). Reducir el extractivo orgnico a un pequeo volumen. Efectuar resolucin cromatografa en capa delgada de la manera corriente y revelar con el diazoico de la bencidina o con la solucin de azul slido B o con el reactivo de Duquenois. La identificacin de los componentes de la marihuana en el residuo, as obtenido puede efectuarse tambin por resolucin cromatografa en fase gaseosa, que permita as comprobar que la tcnica extractiva que se indica, resulta efectiva en caso de existir Cannabinoides en orina.

ESTUDIO DE RASPADO O LAVADO DE LOS DEDOS EN USUARIOS DEL CANNABIS: La muestra que obtiene de los individuos que fuman marihuana. Extrayendo con un solvente (ter de petrleo) la resina adherida a los dedos del fumador (mano derecha o izquierda) se practica con ayuda con un pedazo de vidrio (puede ser portaobjeto) y s se arrastra en este solvente el principio a investigar recogiendo el solvente en un vaso de precipitacin, donde se colocaran en posicin abierta los dedos manchados (el ndice y el medio). El ter de petrleo proveniente del raspado de este individuo se evapora a sequedad en un capsula de porcelana y se le practica la reaccin de Duquenois, o la reaccin de Gramraway; tambin se puede realizar una lectura de una porcin en el espectrofotmetro a la luz U.V. o se hace un corrimiento cromatogrfico.