2011

Genero Leptospira
Microbiologa Bsica

Resumen: El gnero Leptospira (Gr. Lepto = fino y espira = espiral) pertenece a la familia Leptospiraceae y al orden Spirochaetales. Este gnero incluye especies no patgenas de vida libre, as como especies patgenas que pueden infectar humanos y animales. La leptospirosis fue descrita por primera vez por Adolf Weil en 1886, y se le ha llamado tambin fiebre de los pantanos y fiebre de la cosecha.15 Enfermedades clnicamente similares a la leptospirosis fueron reconocidas como de riesgo ocupacional en agricultores de arroz en la Antigua China. Adolf Weil reporto su descripcin como un sndrome clnico caracterizado por esplenomegalia, ictericia y nefritis, comnmente referida como enfermedad de Weil, que se convirti en un sinnimo de leptospirosis. La leptospirosis ocurre en todo el mundo, pero es ms comn en las reas tropicales y subtropicales con altos ndices de precipitacin. La enfermedad se encuentra en cualquier lugar en donde los humanos entran en contacto con la orina de animales infectados o un ambiente contaminado con orina. Este trabajo se centrara en la explicacin del mecanismo de Leptospira para causar la enfermedad, as como las protenas con las que cuenta para poder llevar a cabo este proceso.

Manuel Gonzalez Castro Universidad Autnoma de Baja California 14/10/2011

GENERALIDADES
El gnero Leptospira (Gr. Lepto = fino y espira = espiral) pertenece a la familia Leptospiraceae y al orden Spirochaetales.1 Este gnero incluye especies no patgenas de vida libre, as como especies patgenas que pueden infectar humanos y animales.3 Las leptospiras son unas espiroquetas delgadas y enroscadas de 0.1 x 6 a 20 m con un gancho en uno o ambos extremos puntiagudos.15 Poseen dos flagelos periplasmticos, tambin llamados endoflagelo o filamento axial, insertados uno en cada extremo dirigindose hacia el centro y raramente sobrepasando la regin central de la clula. El cuerpo basal del flagelo es semejante al de los microorganismos Gram negativos.16

Una membrana o envoltura externa recubre al microorganismo. El metabolismo respiratorio es aerobio estricto. Las leptospiras son fcilmente destruidas por calor, desinfectantes, desecacin, acidez16 y cambios de pH; pH <6 y pH >8 son inhibidores; temperaturas <7-10C y temperaturas >34-36C son nocivas. Los organismos de Leptospira sobreviven hasta 180 das en suelos hmedos, por varios meses en superficies acuosas y sobreviven aun mejor en agua estancada que en movimiento.5

A diferencia de las dems espiroquetas, son bacterias aerobias estrictas, poseen oxidasa, catalasa y peroxidasa. Se pueden cultivar en medios artificiales ricos en suero de conejo a 10%, enriquecido con cidos grasos de cadena larga como principal requerimiento nutritivo. Se desarrollan lentamente en medio de albmina bovina a 1% y Tween-80, no detectndose crecimiento antes de los cuatro a seis das; el tiempo de duplicacin es lento (12 a 24 horas). La temperatura ptima de crecimiento es de 28 a 30 C con pH 7.4.7

Las leptospiras no se visualizan con los procedimientos de tincin habituales. Observadas en fresco, con microscopia de campo oscuro, se observan cordeles finsimos, muy brillantes, dotados de movimientos de rotacin y flexin muy activos. La bacteria tiene 18 hlices por clula y la conformacin es dextrgira (en direccin de las manecillas de un reloj).7

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CLASIFICACIN

La clasificacin tradicional, basado en propiedades fenotpicas, relaciones serolgicas y su patogenia15, especifica que todas las especies saprfitas se agrupan en L. biflexia, mientras L. interrogans incluye todas las especies patgenas de leptospiras. La clasificacin utilizada actualmente , basada en la gentica indica que hay al menos 19 especies (13 patgenas y 6 saprfitas) identificadas mediante el anlisis de hibridacin de DNA. Siete de estas especies L. interrogans, L. borgpetersenii, L. santarosai, L. noguchii, L. weilli, L. kirschneri y L. alexanderi son los principales agentes de leptospirosis.2 El problema con esta clasificacin radica en que las genoespecies de Leptospira no se corresponden con la clasificacin serolgica y, ms an, serovares patgenas y no patgenas se encuentran en la misma especie. Actualmente se recomienda que los
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laboratorios clnicos continen con la clasificacin serolgica, que desde el punto de vista prctico aun conserva utilidad en el diagnostico.

ENFERMEDAD QUE CAUSA

La mayor parte de la infecciones por Leptospira son clnicamente inaparentes y se detectan solo mediante la demostracin de los anticuerpos especficos. Las infecciones sintomticas se producen despus de un periodo de incubacin de 1 a 2 semanas. La presentacin inicial es parecida a la de un sndrome gripal, con fiebre y mialgias. Durante esta fase, el paciente esta bacteriemico con leptospiras y los microorganismos se pueden aislar con frecuencia del liquido cefalorraqudeo, incluso aunque no haya sntomas menngeos presentes. La fiebre y las mialgias pueden remitir despus de una semana, o el paciente puede desarrollar la siguiente fase de la enfermedad- incluyendo la meningitis asptica- o una enfermedad generalizada con cefalea, exantema, colapso circulatorio, trombopenia, hemorragia y disfuncin heptica y renal (enfermedad de Weil).15 La leptospirosis del sistema nervioso central se puede confundir con una meningitis viral porque el curso de la enfermedad no suele complicarse y tiene una tasa de mortalidad muy bajo. El cultivo de lquido cefalorraqudeo suele ser negativo en esta fase. Por el contrario, la forma ictrica de la enfermedad generalizada (alrededor del 10% de todas las infecciones sintomticas) es ms grave y se asocia con una mortalidad del 10%. Aunque la afectacin heptica con ictericia es llamativa en los pacientes con leptospirosis sistmica, no se observa necrosis heptica, y los pacientes que sobreviven no sufren lesiones hepticas permanentes. Igualmente, la mayor parte de los pacientes recuperan la funcin renal.15 Tambin puede haber una leptospirosis congnita. Esta enfermedad se caracteriza por el inicio brusco de la cefalea, fiebre y un exantema difuso.15

HISTORIA
La leptospirosis fue descrita por primera vez por Adolf Weil en 1886, y se le ha llamado tambin fiebre de los pantanos y fiebre de la cosecha.15 Enfermedades clnicamente similares a la leptospirosis fueron reconocidas como de riesgo ocupacional en agricultores de arroz en la Antigua China. Adolf Weil reporto su descripcin como un
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sndrome clnico caracterizado por esplenomegalia, ictericia y nefritis, comnmente referida como enfermedad de Weil, que se convirti en un sinnimo de leptospirosis. 6 Las leptospiras fueron identificadas como la causa de la enfermedad de Weil en Japn, donde era comn en mineros de carbn. Sitmpson fue el primero que reporto la presencia de organismos espirales en muestras de rin tenidas con la tecinas de Levadeti, obtenidas de un paciente, que se pens haba muerto por la fiebre amarilla. Inada e Ido, en 1915, satisfactoriamente demostraron la transmisin de la infeccin a los conejillos de india de la sangre de animales infectados que producan al organismo responsable. Conscientes de este desarrollo, Huebener y Reiter reportaron satisfactoriamente la transmisin de la enfermedad de Weil a conejillos de india un par de aos despus.6 Poco despus del descubrimiento de que la enfermedad de Weil era causada por leptospiras, se reconocieron otras enfermedades que tenan una etiologa de Leptospira. Estas incluyen nanukayami en Japons la fiebre del sptimo da, akiyami, la fiebre de la cosecha y ms recientemente la fiebre de Andamas o la fiebre hemorrgica Andaman. Mucho del conocimiento bsico de leptospiras y leptospirosis fue entendido dentro de la dcada, seguida del descubrimiento de leptospiras y muchos tipos de ellas durante este periodo. El mismo grupo japons que identifico a las leptospiras, ilustraron la naturaleza zoonotica de la enfermedad y las ratas como vectores. Posteriormente, animales domsticos fueron identificados como portadores.6

EPIDEMIOLOGIA
La leptospirosis ocurre en todo el mundo, pero es ms comn en las reas tropicales y subtropicales con altos ndices de precipitacin. La enfermedad se encuentra en cualquier lugar en donde los humanos entran en contacto con la orina de animales infectados o un ambiente contaminado con orina.12 En pases desarrollados, la incidencia de la enfermedad ha disminuido substancialmente y la mayora de los casos son asociados a la exposicin al agua. En contraste, la incidencia parece aumentar en los pases en desarrollo. La incidencia anual de leptospirosis ha aumentado de 0.3/100,000 a 3.3/100,100 personas en Tailandia. La mayora de los pases de Sureste de Asia son endmicos de leptospirosis. En promedio 10,000 casos que requieren hospitalizacin ocurren al ao en el mundo.6 Varios brotes de leptospirosis han sido reportados en varios lugares, Nicaragua, Salvador, Rio de Janeiro, Orissa, Mumbai, Archipilago Andaman en India. Algunos de estos brotes fueron asociados con desastres naturales como ciclones e inundaciones.6 En Mxico, durante el periodo 2003-2008, la tasa nacional fue de 0.6 a 2.1 casos por 10,000 habitantes, con el pico mximo en el ao 2007, en el cual los cambios meteorolgicos propiciaron el aumento de los casos. Las entidades federativas con las tasas ms elevadas fueron Tabasco, Oaxaca e Hidalgo, cabe sealar que estos
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estados tienen antecedente de haber sufrido severas inundaciones. Por su parte el grupo etareo ms afectado es de 25-48 anos. Finalmente, las entidades federativas con mayor nmero de casos reportados de 2003-2008 fueron: Tabasco, Oaxaca, Hidalgo, Sonora, Sinaloa, Chiapas, Tamaulipas, Guerrero y Veracruz.11

MODO DE TRANSMISION
Las leptospiras patgenas son parsitos de animales domsticos y silvestres. Entre los mamferos, los roedores son sus reservorios ms importantes (ratas, ratones). Adems, coypus, zarigeyas, zorros, armadillos, cuises y otros animales silvestres se encuentran entre los responsables de mantener leptospiras en un determinado ambiente. Por otro lado, porcinos, bovinos y caninos, por su contacto con el hombre, tambin son responsables de brotes de leptospirosis.16 El microorganismo llega al hombre al contactar directamente con orina o tejidos infectados, o en forma indirecta, a travs de agua o suelos contaminados. La bacteria penetra, principalmente, por inoculacin a travs de piel erosionada, mucosas nasofarngea, bucal, genital, o conjuntival. Excepcionalmente, se ha documentado transmisin sexual y transplacentaria y la infestacin por ingestin de agua contaminada.10 Las leptospiras son ubicuas, la principal fuente es la excrecin de animales, principalmente la orina.6 La transmisin puede ser directa o indirecta. La transmisin directa ocurre cuando las leptospiras de tejidos y fluidos corporales entran al cuerpo de un nuevo hospedero e iniciar una infeccin. La transmisin indirecta ocurre cuando un animal o humano adquiere leptospirosis mediante un medio infectado con leptospiras.6 Leptospiras pueden sobrevivir por largos periodos largos en el medio y probablemente se multipliquen

cuando las condiciones son favorables.6

FACTORES DE VIRULENCIA
Las lipoprotenas de membrana actan como el principal factor de virulencia hacia los tejidos del hospedero. El genoma de Leptospira interrogans codifica estas lipoprotenas, aproximadamente 145 genes han sido detectados que codifican lipoprotenas adems de las protenas de membrana. Solo unas protenas
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transmembrana han sido descritas: la primera es Omp1 L, que acta potencialmente como porina.3 Tambin contienen hemolisinas, que ayudan a lisar eritrocitos y otras membranas, adems contiene tambin protenas Tly, de las cuales se ha demostrado que TlyC se une a componentes de la matriz extracelular. Esfingomielinasa C (gen sphA), se ha demostrado que causa la lisis de eritrocitos.2 Lip 32 representa el mayor componente de la membrana externa. Esta protena es codificada durante la infeccin, y se ha demostrado que se une a laminina, colgeno II, IV y V y fibronectina plasmtica. Loa 22 es la nica protena que acta como un verdadero factor de virulencia. Esta protena de membrana provoca una respuesta inmune en pacientes humanos3, sin embargo su funcin aun no es conocida.2 Pero se ha demostrado que esta protena cumple con los postulados moleculares de Koch. 3 LenA, LenB, LenC, LenD, LenE y Len F son protenas que estn involucradas en la invasin y colonizacin. Se ha demostrado que LenA se une al factor H, FHR-1 y laminina, estudios recientes demuestran que esta protena se una al plasminogeno plasmtico, lo que aumentara la diseminacin a travs de los tejidos. LenB, C,D,E,F, se unen al factor H, laminina y fibronectina. LigA, B, C, son miembros de la superfamilia de inmunoglobulinas bacterianas, median las interacciones con el hospedero as como la invasin y su unin con otras bacterias. Son encontradas exclusivamente en leptospiras patgenas. Se unen fuertemente a componentes de la matriz extracelular, incluyendo fibronectina, fibringeno, colgeno y laminina. Los genes que codifican estas protenas se encuentran regulados por la osmolaridad fisiolgica y codifican protenas que son reconocidas en el suero de pacientes con leptospirosis. 3

MECANISMO DE ACCION
1. Adhesin
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Despus de la exposicin de membranas mucosas o abrasiones en la piel en agua o suelo contaminado con leptospiras, los microorganismos rpidamente establecen una infeccin sistmica cruzando las barreras en el tejido e invaden la sangre. Diferentes estrategias son llevadas a cabo por leptospiras para la invasin, una es su capacidad para unirse a la matriz extracelular. Se unen a componentes de la matriz, como colgenos, laminina, y fibronectina. Las leptospiras patgenas se unen a fibroblastos, epitelio de riones, y monocitos. No son organismos intracelulares, sin embargo ingresan eficientemente en las clulas del hospedero. Residen en estas clulas solo transitoriamente, dentro de fagosomas o en citoplasma, despus utilizan un mecanismo que le permite la rpida invasin a rganos , evadiendo el sistema inmune.3 Estudios recientes han demostrado que una vez en los riones, estos microorganismos producen proteoglucanos GAG, los cuales facilita la colonizacin de estos rganos, mediante la formacin de biofilms. En los biofilms, los microorganismos se vuelven ms resistentes a los antibiticos. La formacin comienza con la adhesin de bacterias planctnicas a superficies, incluyendo abiticas y biticas. La unin de clulas producir una matriz, consistente en sustancias exoplimericas y se multiplican, formando microcolonias. De estas microcolonias, un biofilm maduro puede surgir. En el ltimo paso de la formacin del biofilm, las clulas se pueden separar y regresar a su vida planctnica o morir.9 La formacin de biofilms por parte le Leptospira aun no est del todo aclarado, pero se cree que juega un papel importante en la habilidad de sobrevivir en diversos medios, incluyendo el hospedero.9 2. Evasin de fagocitosis Las leptospiras evaden la respuesta inmune del hospedero durante el inicio de la enfermedad, principalmente la fagocitosis y el complemento. Estos microorganismos so internalizados por neutrofilos y macrfagos. Un receptor es el involucrado en la adhesin a fagocitos, es la integrina CR3. Una vez fagocitados por neutrofilos, comienza el proceso, que es lento a travs de maquinaria dependiente de oxigeno. Las leptospiras parecen ser mas susceptibles ante la actividad bactericida de los pptidos cationicos de los neutrofilos, sin embargo este proceso solo ocurre solo con la presencia de anticuerpos especficos. Una vez que las leptospiras muestran una preferencia por SNC, los pacientes muestran experimentan sntomas neurolgicos. 3 Algunos estudios enfocados en la interaccion de leptospiras con clulas microgliales, muestran que estas clulas son capaces de internalizar a los microorganismos, pero no
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de matarlos. Adems, son estimulados por leptospiras para la activacin de NF-kB, as como la liberacin de oxido ntrico y citocinas proinflamatorias. Un componente de las leptospiras que causan esto son peptidoglucanos y lipopolisacaridos, que adems tienen la capacidad de activar receptores TLR2, este hecho se correlaciona con el 1metil fosfato que no es encontrado en LipidA de otras bacterias.3 3. Resistencia al complemento Ms que la resistencia a la fagocitosis, la invasin de leptospiras perece ser relacionada con la resistencia al complemento. La resistencia al complemento fue relacionado con la capacidad de unirse al factor H y con FHR-1, que es el principal regulador del complemento, evitando la unin del factor B con C3b, acelerando la decada de la convertasa de C3, y actuando como cofactor en la escicion de C3b por el factor I.3

CANTIDAD DE INOCULO
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La cantidad de Leptospira para iniciar la infeccin en animales vara. Una carga de leptospiras de 103-108 usualmente es introducida intraperitonealmente en hmsters para inducir una infeccin letal. Sin embargo la LD 50 depende del serovar y cepa utilizada. Experimentos con 10 8 de cepas L. interrogans serovar Icterohaemorrhagiae han causado el 50% de mortalidad, pero el mismo nmero de leptospiras fueron fatales utilizando L. interrogans serovar Copenhageni L1-130, L. interrogans serovar Canicola cepa Kito, L. noguchii serovar Australis cepa Hook y serovar Atumnalis cepa Bonito. Estas cepas son altamente virulentas en hmsters, con una LD 50 de 3-100 leptospiras.2

NIVEL DE BIOSEGURIDAD
De acuerdo a la Clasificacion Internacional de Riesgo, Leptospira debe manipularse de acuerdo al nivel de bioseguridad 2. 13

BIBLIOGRAFIA
1. Manuel Cspedes Z (2005). Leptospirosis: enfermedad zoonotica reemergente. Rev Peru Med Exp Salud Pblica 22(4). 2. Karen V Evangelista, Jennifer Coburn (2010). Leptospira as an emerging pathogen: a review of its biology, pathogenesis and host immune responses. NIH Public Access. Future Microbiol; 5(9): 1413-1425; doi: 10.2217/fmb.10.102. 3. Marina Cinco (2010). New insights into the pathogenecity of leptospiras: evasion of host defences. New Microbiologica, 33, 283-292. 4. Catherine Werts (2010). Leptospirosis: a toll road from B lymphocytes. Institute Pasteur. Chang Gung Med J Vol.33 No.6. 5. Roberto Gamarra R (2008). Leptospirosis. Curso: Investigacion II. Maestria en Salud animal. 6. P Vijayachari, A P Sugunan, A N Shriram (2008). Leptospirosis: an emerging global publica health problem. J. Biosci. 33(4), November 2008, 557569, Indian Academy of Sciences. 7. Teodoro Carrada-Bravo (2005). Leptospirosis humana. Historia natural, diagnostic y tratamiento. Rev Mex Patol Clin, Vol. 52, Nm. 4, pp 246-256. 8. Azad Eshghi, Paul A. Cullen, Laura Cowen, Richard L. Zuerner, Caroline E. Cameron (2009). Global proteome analysis of leptospira interrogans. Journal of Proteome Research 2009, 8, 45644578. 9. Paula Ristow, Pascale Bourhy, Sophie Kerneis, Christine Schmitt, MarieChristine Prevost, Walter Lilenbaum, Mathieu Picardeau (2008). Biofilm formation by saprophytic and pathogenic leptospiras. Microbiology, 154, 1309 1317 DOI 10.1099/mic.0.2007/014746-0. 10. Enna Zunino M., Rolando Pizarro P (2007). Leptospirosis. Puesta al dia. Rev Chil Infect 2007; 24 (3): 220-226. 11. Highlights en investigacion (2010). Aspectos clinicos y epidemiologicos de la lepotspira en Mexico. Revista de enfermedades infecciosas en Mexico.
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Genero Leptospira
12. OMS (2008). Leptospirosis humana: gua para el diagnostico, vigilancia y control.Rio de Janeiro. 13. Instituto de Salud Publica, departamento de laboratorios de salud. Norma Tecnica, Vigilancia de laboratorio. 14. Joel Navarrete-Espinosa, Juan Antonio Acevedo-Vales, Emilia HuertaHernndez, Jorge Torres-Barranca, Dolores Guadalupe Gavaldn-Rosas. (2006).Prevalencia de anticuerpos contra dengue y leptospira en la poblacide Jltipan, Veracruz. Salud pblica de mxico / vol.48, no.3. 15. Patrick R Murray, Ken S Rosenthal, Michael A Pfaller (2009). Microbiologa Medica. 6 edicin. Editorial Elsevier Mosby. Pag. 416-419. 16. Juan A Basualdo, Celia E Coto, Ramon A de Torres (2006). Microbiologa biomdica. 2 edicin. Editorial Atlante. Pag. 502-506. 17. Romero Cabello Raul (2007). Microbiologa y Parasitologia humana. 3 edicin. Editorial Panamericana. Pag. 593- 596.

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