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Referncias Citando artigos Dave R. van Staveren e Nils Metzler-Nolte.* Institut fr Pharmazie und Molekulare Biotechnologie, Universitt Heidelberg, Im Neuenheimer Feld 364, D-69120 Heidelberg, Alemanha. Rev. Chem., 2004, 104 (12), pp 59315986 DOI: 10.1021/cr0101510 Data de publicao (Web): 8 de Dezembro de 2004 Copyright 2004 American Chemical Society Dave R. van Staveren nasceu em Rotterdam, Holanda, em 1976. Ele estudou qumica na Universidade de Leiden, de 1994 a 1999 e realizou sua pesquisa de diploma no grupo do Professor Jan Reedijk. Posteriormente, ele se mudou para o Max-Planck-Institut fr Strahlenchemie (hoje conhecido como o Max-Planck-Institute for Bioinorganic Chemistry) em Mlheim an der Ruhr, Alemanha, para realizar pesquisa de doutorado no grupo do Professor Karl Wieghardt, sob a superviso de Nils Metzler-Nolte. Ele foi premiado com um grau de pH.d. da Universidade de Bochum em 2001. Mudou-se para o Max-Planck-Institut de Kohlenforschung, outro-Instituto Max Planck-em Mlheim an der Ruhr, para trabalhar como um companheiro com Professor Alois Frstner no domnio da mettese de alquino a partir de 2001, durante a maior parte de 2002. Depois de passar um semestre na Universidade de Heidelberg, Alemanha, como assistente de ensino, no departamento de farmcia, mudou-se para a Sua para trabalhar em um projeto financiado industrialmente envolvendo radioativos de vitamina B12, com 99 mTc. A primeira parte deste projecto foi concluda na Universidade de Zurique, sob superviso pelo Professor Roger Alberto (20032004), Considerando que a segunda parte actualmente em curso no Paul Scherrer Institut de Villigen no grupo do Professor p. Agosto Schubiger. Nils Metzler-Nolte nasceu em Hamburgo, na Alemanha, em 1967. Depois de estudar qumica em universidades de Hamburgo e Freiburg, mudou-se para a Universidade Ludwig-Maximilians de Munique, em 1989, onde obteve seu diploma em qumica em 1991 e seu Ph.d. em 1994, ambos em qumica de organo-boro sob a superviso do Professor H. Nth. Ele fez seu psdoutorado com m. l. h. Green em Oxford e, em seguida, mudou-se para o Max-Planck-Institute fr Strahlenchemie (hoje em dia sabe como Max-Planck-Instituto de qumica Bioinorganic), onde comeou sua investigao independente em bioorganometallic qumica e trabalhou como chefe do grupo de servio NMR. Obteve sua habilitao, na Universidade de Bochum, em Maio de 2000. Logo depois, foi nomeado professor titular para Bioinorganic qumica na faculdade de farmcia da Universidade de Heidelberg. Ele atualmente est localizado a Instituto desta universidade para a farmcia e biotecnologia Molecular, que faz parte da faculdade de biocincias. Seu interesse de pesquisa em bioorganometallic qumica e bioconjugates geralmente funcional com metais de transio, tais como metalpeptide e metalPNA conjugados, incluindo aspectos da qumica inorgnica medicinal. Seu trabalho tem

sido reconhecido por vrios prmios, e ele foi cochairman do segundo Simpsio Internacional sobre qumica Bioorganometallic em julho de 2004 em Zurique, na Sua. Seo: Organometlicos e compostos de Organometalloidal

Parte superior da pgina 1. Introduo 2. Conjugados do ferroceno com aminocidos e peptdeos 2.1.2. 1, 1'-Ferrocenylbisalanine e seus conjugados 2.1.3. Outros aminocidos baseado em Ferrocenyl 2.2.1. Amidas do cido Ferrocenecarboxylic 2.2.2. Amidas de ferroceno-1, 1'-cido dicarboxlico 2.3.2. Ferrocenylmethylamines atravs da reduo das iminas 2.4.2. Outros mtodos para rotular C-terminal 2.4.3. Outros mtodos para rotular N-terminal 2.4.4. Rtulos para o grupo tiol em cistena 2.4.5. Diversos 2.5.2. Peptdeo sntese atravs de reaes de quatro-componente com ferroceno alquilaminas 3. Conjugados do ferroceno com protenas 3.1.2. d-Aminocido Oxidase (DAAO) 3.1.3. Citocromo P450cEstou 3.1.4. Peroxidase de rbano 3.2.1. Imunoglobulinas 3.2.2. Albumina bovina (BSA) 3.2.3. Vrias protenas 4. Conjugados do ferroceno com DNA, RNA e PNA 4.2.1. Anlise de estabilidade frente e verso com oligmeros de Ferrocenylated 5. Conjugados do ferroceno com carboidratos

5.2.2. Dendrimers 6. Ferroceno conjugados com outras biomolculas 6.1.1. Hormnios esterides 6.1.2. Outros hormnios. 7. Futuras perspectivas 8. Confirmao de 9. A lista de abreviaturas 10. Referncias de 1. Introduo

Em 1951, um novo composto contendo ferro e dois ciclopentadieno ligantes foi relatado. 1,2 Embora mesmo os primeiros relatrios notou sua estabilidade elevada e inesperada, a estrutura correta foi apenas mais tarde sugeriu independentemente por Wilkinson3 e Fischer. 4 Devido semelhana de sua reatividade do benzeno, o nome ferroceno (1) foi cunhado para o novo composto por Woodward. 5 O termo "composto sanduche" para este composto hoje universalmente aceite para uma classe muito mais vasta de compostos. A descoberta de ferroceno e elucidao da sua estrutura notvel , sem dvida, o ponto de partida para a moderna qumica organometlica. Nos ltimos anos, bioorganometallic qumica desenvolveuse como um rpido crescimento e maturingarea que liga qumica organometlica clssica biologia, medicina e Biotecnologia molecular.6-8 A acessibilidade de uma grande variedade de derivados e suas propriedades eletroqumicas favorveis fizeram a estabilidade do grupo ferrocenyl em meios aquosos, aerbicos, ferroceno e seus derivados molculas muito populares para aplicaes biolgicas e conjugao com biomolculas. Esta avaliao abrange bioconjugates do ferroceno com aminocidos e peptdeos (seo 2), protenas (ponto 3), DNA, RNA e PNA (seo 4), carboidratos (seo 5) e hormnios e outros (seo 6). Principalmente, ns limitamos nossa discusso para conjugados em que ferroceno covalentemente ligado biomolecule e a respectiva aplicao. Aplicativos nos qual ferroceno livre serve um biolgicas purpose, por exemplo, como um mediador de eltrons entre enzimas e um eletrodo, no so considerados. Alm disso, no discutimos as propriedades fisiolgicas de ferroceno ou seus derivados. Aplicaes medicinais de derivados do ferroceno tambm no so abrangidas exaustivamente nesta reviso. Ferroceno si apresenta propriedades interessantes como anti-aenemic ou agente citotxico.Neuse 9,10 e colegas de trabalho encontraram atividade muito reforada de citotxicos compostos metlicos incluindo ferroceno quando estes eram obrigados a polmeros como prodrugs. 11,12 Conjugados do ferroceno com drogas conhecidas foram registrados, por exemplo, com antibiticos como a penicilina e cefalosporinas. 13-23 Alm disso, variaes estruturais de drogas estabelecidas com o grupo de ferrocenyl foram registradas, tais como ferrocenyl

aspirina,24-26 a cloroquina antimalricos drogas (chamado ferroquine), quinina, mefloquina e artemisinina,27-39 e o tamixofen de droga anti-cncer dar ferrocifen.40-42 Esta avaliao abrange a literatura de 1957, quando Schlgl relatou os aminocidos ferrocenyl primeiros,43 atravs o incio de 2004. No h nenhuma avaliao anterior que estamos conscientes de que cobre o tpico deste artigo de forma concisa. Um livro escrito por Togni em ferroceno qumica no toque aspectos biolgicos. 44 Cabeza, Severin e Beck publicaram um artigo bastante completo sobre bioorganometallic derivados de aminocidos e peptdeos. 45 Ryabov reviu a interao de compostos organometlicos com enzimas e protenas. 46 Muito recentemente, Salmain e Jaouen publicou uma reviso no rtulo covalente de protenas com complexos organometlicos. 47 Em uma srie de inquritos anuais em ferroceno no Jornal de qumica organometlica,48-65 um captulo foi geralmente dedicado para aplicaes biolgicas deste particular compostos organometlicos. Apareceram duas avaliaes mais velhas em qumica biolgica da metalocenos. 66,67 Avaliaes mais especializadas cobrem aspectos da qumica de ferroceno, como, por exemplo, aplicativos do composto em glicose biosensores68 e bioelectrnica.Foi publicada 69,70 muito recentemente, uma excelente reviso russa em ferroceno-contendo cidos nucleicos.71

Parte superior da pgina 1. Introduo 2. Conjugados do ferroceno com aminocidos e peptdeos 2.1.2. 1, 1'-Ferrocenylbisalanine e seus conjugados 2.1.3. Outros aminocidos baseado em Ferrocenyl 2.2.1. Amidas do cido Ferrocenecarboxylic 2.2.2. Amidas de ferroceno-1, 1'-cido dicarboxlico 2.3.2. Ferrocenylmethylamines atravs da reduo das iminas 2.4.2. Outros mtodos para rotular C-terminal 2.4.3. Outros mtodos para rotular N-terminal 2.4.4. Rtulos para o grupo tiol em cistena 2.4.5. Diversos 2.5.2. Peptdeo sntese atravs de reaes de quatro-componente com ferroceno alquilaminas 3. Conjugados do ferroceno com protenas 3.1.2. d-Aminocido Oxidase (DAAO) 3.1.3. Citocromo P450cEstou

3.1.4. Peroxidase de rbano 3.2.1. Imunoglobulinas 3.2.2. Albumina bovina (BSA) 3.2.3. Vrias protenas 4. Conjugados do ferroceno com DNA, RNA e PNA 4.2.1. Anlise de estabilidade frente e verso com oligmeros de Ferrocenylated 5. Conjugados do ferroceno com carboidratos 5.2.2. Dendrimers 6. Ferroceno conjugados com outras biomolculas 6.1.1. Hormnios esterides 6.1.2. Outros hormnios. 7. Futuras perspectivas 8. Confirmao de 9. A lista de abreviaturas 10. Referncias de 2. Conjugados do ferroceno com aminocidos e peptdeos

2.1. Antinatural aminocidos que contm uma cadeia lateral de Ferrocenyl2.1.1. Ferrocenylalanine e conjuga o seu Os dois primeiros anlogos de aminocidos de ferroceno foram relatados por Schlgl como incio de 1957, apenas seis anos aps os relatrios iniciais sobre a sntese de ferroceno.1,2 Estes anlogos constituem (1) dl- ferrocenylalanine (dl- Fer, 2)43,72,73 e (2) dlferrocenylphenylalanine (3)43 (esquema 1). Este ltimo nunca foi utilizado aps seu relatrio inicial, Considerando que tem ferrocenylalanine foi objecto de uma extensa pesquisa. Algumas dcadas mais tarde, vrios outros relatrios apareceram sobre a sntese (Filadlfia) deste aminocido. 74-77 Duas estratgias foram adaptadas para obter ferrocenylalanine na sua forma pura enantiomerically: atravs da resoluo da mistura racmica ou atravs de sntese de stereospecific. Resolvendo a mistura racmica possvel por cristalizao (1) fracionada do diastereomricos brucina sal76 ou (2) cintica resoluo por Filadlfia deacylation de acylated racmica usando a enzima Acilase.77 Ferrocenylalanine podem ser sintetizado com at 94% de stereospecifically ee atravs da hidrogenao assimtrica do correspondente Z-configurado dehydro acil derivados 4 esquema 2, dar N-acetil-protegido l-2 (5) seguido de desproteo.75 Outro mtodo elegante para a obteno de enantiomerically puro protegido pelo COB

ferrocenylalanine 6 consiste em um Pd (0)-catalisada acoplamento entre 1-iodoferrocene (7) e o reagente serina-derivado organozinc 8 (regime de 2).74

Esquema 1. Estrutura molecular do Ferrocenylalanine (2) e (Ferrocenylphenylalanine3)

Esquema 2. Dois mtodos para obter (puro Enantiomerically Ferrocenylalanine2) Uma variedade de peptdeos que contm ferrocenylalanine como um aminocido natural foram sintetizados. Este grupo de compostos pode ser dividido em duas classes, dependendo do seu grau de relevncia para peptdeos biologicamente que ocorre. Peptdeos biologicamente irrelevantes que tenham sido preparados constituem cyclo (dferrocenylalanyl-l- prolil), cyclo (l- ferrocenylalanyl-l- prolil),76 e polipeptdeos contendo repetio l-Fer-[Glu(OBzl)]4 ou l- Fer2-[Glu(OBzl)]4 unidades.77 A outra classe compreende pela peptdeos biognicos em que ferrocenylalanine tem sido substitudo especificamente para um resduo de fenilalanina. Em comparao com Phe, Fer explosivo em forma muito mais volumosos e lipoflicos. Devido a estas diferenas, resultados de ensaios para o peptdeo modificado em comparao com aqueles para o peptdeo natural de vinculao poderiam revelar informaes importantes sobre interaes substratereceptor. O peptdeo biognica primeiro que foi modificado com Fer o pentapeptide [Leu5]-encefalina, que tem estrutura primria H-Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-OH (9, esquema de 3). [Leu5]-encefalina foi primeiramente isolada em mistura com seu anlogo de metionina posio 5 ([conheceu5]encefalina) por Hughes et al. de crebro de porco em 1975. 78 As enkephalins so neuropeptides com uma ao semelhante da morfina, exibindo alta afinidade para os receptores opiides. Estes pentapeptides foram detectados em vrios tecidos humanos, tais como o crebro humano, na espinal humana fluida e no plasma sanguneo. 79 Trs relatrios sobre a sntese de [Fer4, Leu5]-encefalina, em que o resduo de fenilalanina na posio 4 foi substitudo pelo ferrocenylalanine (10de esquema 3), apareceu mais ou menos simultaneamente na literatura. 80-82 Os compostos foram sintetizados em um suporte slido, empregando tcnicas de sntese de peptdeo de fase slida clssicas Merrifield. Diastereomerically pura [d- Fer4] - e [l- Fer4] - enkephalins foram obtidas pela purificao de HPLC do racmica [dl- Fer4, Leu5]-encefalina mistura82 ou realizando a sntese de peptdeo de fase slida com pura enantiomerically l- Fer e d- Fer.81 Ou Diastereoismero exibe uma afinidade muito reduzida para o receptor encefalina em comparao com [Leu5]encefalina,80,82 embora ambos sejam significativamente mais potentes do que muitos outros anlogos posititon 4. 83 Curiosamente, o [d- Fer4] - Diastereoismero foi significativamente mais potente que o l- analgico.80,82

Esquema de 3. Sequncia de aminocidos de [Leu5] - encefalina (9) e [Fer4, Leu5] - encefalina (10) Substncia P (SP, 11) um undecapeptide, pertencente classe dos tachykinins, com dois consecutivos Phe resduos em posies 7 e 8 (regime 4). O peptdeo foi descoberto pela primeira vez por von Euler e Gaddum em 1931,84 mas ele tomou outro quatro dcadas antes de sua seqncia de aminocidos foi determinada por Chang et al.85,86 SP est envolvido em vrios processos fisiolgicos importantes, tais como contrao da musculatura lisa, transmisso de dor e ativao do sistema imunolgico. 87 Trtaro e colegas de trabalho sintetizaram as seguintes trs Fer-modificado SP-derivados: [dl- Fer7]-SP (12), [dl- Fer8] - SP (13) e [dl- Fer7, Ile8] - SP (14). 88 Conforme discutido acima para encefalina, um ou ambos os resduos Phe foram substitudos por Fer. Fer racmica foi usado para as snteses, resultando em misturas de diastereomricos, que no podem ser resolvidas por HPLC preparao. Resultados vinculem ensaios mostram uma diminuio da atividade dos peptdeos ferrocenylalanine substitudo em comparao a native SP em oder seguinte: [dl- Fer8]-SP (2 10-2 de SP) > [dl- Fer7]-SP (3 10-3 relativo para SP) > [dl- Fer7, Ile8]-SP (6 10-4 comparado a SP).88

Regime de 4. Estrutura primria para a substncia P (SP, 11) e Ferrocenylalanine derivados 1214 . O mesmo grupo tambm preparou ferrocenylalanine anlogos da bradicinina (regime 5).88 Nonapeptide bradicinina (BK, 15) um hormnio de tecido envolvido no processo de coagulao do sangue. Quando o hormnio liberado da cininognio de precursor, efetua uma reduo da presso arterial atravs de dilatao dos vasos sanguneos. 89,90 Quer dos resduos Phe posio 5 ou 8 foi substituda pelo dl- Fer, resultando em que conjuga o 16 e 17 , mostrado no esquema 5. Embora a separao entre o diastereomers foi realizada por HPLC, no foi possvel atribuir sua configurao absoluta. Vinculao estudos revelou uma diminuio significativa da atividade aps a substituio de Phe por Fer. Os dois diastereomers de [Fer5] - BK (16) e [Fer8] - BK (17) mostrou actividades relativo a BK nativo de 7 10-2 e 3,5 10-2e 1.8 10-2 e 1,7 10-2, respectivamente. Esses resultados mostram a mesma tendncia, como os obtidos por Couture e colegas de trabalho, o que acharam que a introduo de carboranylalanine de aminocidos volumosos na posio 8 tinham um impacto maior sobre a atividade de substituio de carboranylalanine do resduo Phe posio 5. 91,92 Considerando as atividades de baixas de diastereomricos [Fer]-anlogos BK, parece que a fraco ferrocenyl mal interage com o receptor.

Regime de 5. Seqncia de aminocidos da bradicinina (BK, 15) e anlogos Ferrocenylalanine 16 e 17 A famlia de angiotensina II (AT II) relacionados com compostos tem atrado a ateno de trtaro e colegas de trabalho tambm. Angiotensina II, um peptdeo tendo uma fenilalanina na

posio 8, aumenta a presso arterial em mamferos (18, regime de 6). 93 Vrios derivados II angiotensina encontraram aplicaes medicinais, tais como agonista [Asn1, Val5]-AT II (Hypertensin), que tem sido usado para normalizar a presso arterial to rapidamente quanto possvel aps um choque ou recolher. O antagonista [Sar1, Val8]-AT II (Saralasina), por outro lado, foi usado para o diagnstico de formas AT II-dependente de hipertonia. Ferrocenylalanina-modified [Sar1]-angiotensina II {[Sar1, Fer8]-AT II, (20)} foi elaborado, como mostrado no esquema de 6. 94,95 a sntese de 20 foi executada com dl- Fer e o diastereomers foram separadas por HPLC fisiolgicas somente para teste. Qualquer Diastereoismero mostrou aproximadamente 1% da atividade relativos a [Sar1]-AT II (19) em um ensaio com tiras de aorta Coelho.94 A mistura de diastereomricos de 20 mostrou uma atividade de 6,1% relativos a [Sar1]-AT II (19) em um ensaio de ligao purificado bovina Hiperfuno membranas.95

Regime de 6. Estrutura primria da angiotensina II (AT II, 18) e derivados 19 e 20 . O (Sar = NMethylglycine) Investigaes de hidrlise quimiotripsina foram realizadas em peptdeos H-Lys-Gly-Phe-GlnGly-OH (21) e H-Lys-Gly-Fer-Gln-Gly-OH (22).88 Quimiotripsina pertence classe de proteases de serina, juntamente com tripsina e elastase e est presente no pncreas humano. Alta seletividade da quimiotripsina enzima para a ciso das ligaes peptdicas Avanar para os aminocidos aromticos Phe, Trp e Tyr pode ser racionalizada pela estrutura de cristal de raioX do quimiotripsina bovina. 96,97 Aps a aco da quimiotripsina, o Phe-contendo pentapeptide 21 foi hidrolisado (Km = 3,85 mM), enquanto o Fer-congnere 22 no foi hidrolisado em tudo. Curiosamente, o anlogo 23 contendo o aminocido natural cymantrenylalanine (cymantrene = Mn(Cp)(CO)3) foi hidrolisado, embora com menor afinidade do que a derivada de Phe (Km = 37 mM, mas inalterada vmax).88 O ferrocenylalanine de aminocidos sozinho (Fer, 2) tambm foi submetido a testes biolgicos. Em um ensaio de crescimento bacteriano com a fenilalanina exigindo bactria Leuconostoc mesenteroides, dl- Fer foi testado por sua capacidade de (1) apoiar o crescimento de bactrias na ausncia de Phe e (2) inibem o desenvolvimento de bactrias crescimento na presena de Phe. DL- Fer no suportava a crescimento de l. mesenteroides , na ausncia de Phe, nem era capaz de inibir o crescimento desta bactria na presena de Phe.Alm disso 98,99 , dl- Fer foi testado para a toxicidade contra clulas de (CHO) ovrios de hamster chins.99 Apenas em concentraes relativamente elevadas de 0,45 mM ou mais, foi dl- Fer txico contra clulas CHO. DL- Fer tambm foi testado para sua funo servir como um substrato ou inibidor da fenilalanina hidroxilase e aromticas l-aminocidos descarboxilase. Para fenilalanina hidroxilase, dl- Fer foi um inibidor amistosa (Keu = 0,89 mM) de l- Phe e um inibidor misto com respeito a cofator (DMPH4).98,99 dl- Fer foi encontrado para ser um inibidor competitivo (Keu = 7,2 mM) de aromticos l-aminocidos descarboxilase de fenilalanina.

Regime de 7. Estrutura molecular do 1, 1'-Ferrocenylbisalanine (24)

Regime de 8. Sntese de um 1 opticamente puro, 1'-derivado de Ferrocenylbisalanine 27 contendo uma enciclopdia Amino e um livre parte activa do cido carboxlico

Regime de 9. Lactamization de 27 para rendimento Macrocycles 2830

Parte superior da pgina 1. Introduo 2. Conjugados do ferroceno com aminocidos e peptdeos 2.1.2. 1, 1'-Ferrocenylbisalanine e seus conjugados 2.1.3. Outros aminocidos baseado em Ferrocenyl 2.2.1. Amidas do cido Ferrocenecarboxylic 2.2.2. Amidas de ferroceno-1, 1'-cido dicarboxlico 2.3.2. Ferrocenylmethylamines atravs da reduo das iminas 2.4.2. Outros mtodos para rotular C-terminal 2.4.3. Outros mtodos para rotular N-terminal 2.4.4. Rtulos para o grupo tiol em cistena 2.4.5. Diversos 2.5.2. Peptdeo sntese atravs de reaes de quatro-componente com ferroceno alquilaminas 3. Conjugados do ferroceno com protenas 3.1.2. d-Aminocido Oxidase (DAAO) 3.1.3. Citocromo P450cEstou 3.1.4. Peroxidase de rbano

3.2.1. Imunoglobulinas 3.2.2. Albumina bovina (BSA) 3.2.3. Vrias protenas 4. Conjugados do ferroceno com DNA, RNA e PNA 4.2.1. Anlise de estabilidade frente e verso com oligmeros de Ferrocenylated 5. Conjugados do ferroceno com carboidratos 5.2.2. Dendrimers 6. Ferroceno conjugados com outras biomolculas 6.1.1. Hormnios esterides 6.1.2. Outros hormnios. 7. Futuras perspectivas 8. Confirmao de 9. A lista de abreviaturas 10. Referncias de 2.1.2. 1, 1'-Ferrocenylbisalanine e seus conjugados

Alm de ferrocenylalanine, tambm a derivada de difunctionalized 1, 1'-ferrocenylbisalanine (24de regime 7) tem sido relatado.74.100-105. Os mtodos para obteno de 24 no formulrio opticamente puro so idnticos s de ferrocenylalanine: (1) o Pd (0) - catalisado acoplamento de 1, 1'-diiodoferrocene (25) com o reagente de serina-derivado organozinc 8 mostrado no esquema 274 e (2) hidrogenao assimtrica de derivados de aminocidos adequado bisdidehydro.101-104 Com o ltimo mtodo, um excesso de enantiomeric superior a 99% poderia ser atingido.103.104 Atravs de uma sofisticado via sinttica, Frejd e colegas de trabalho sintetizaram uma enantiomerically pura 1, 1'-ferrocenylbisalanine derivados 26 que contm grupos protetores ortogonais (regime de 8).102-104,106 Opticamente puro 26 convenientemente foi transformado por hidrogenao em S, S-27, tendo um grupo amino livre e um grupo cido carboxlico livre (regime de 8). Quando 27 foi reagiu com o reagente de acoplamento de peptdeo PyAOP, uma mistura de 1, 1'-ferrocenophane lactmicos 28 e dois macrociclos pptidos (dmero 29 e trmero 30) foi obtido (regime de 9).106 A relao exata entre estes compostos depende fortemente as condies de reao. Frejd e colegas de trabalho usado lactmicos 28 como um estrutural H-Phe-Phe-OH mimtico e incorporadas a um peptdeo.103 Isto resultou em um conjugado 31, que era esperado para funcionar como um Mmico estrutural da substncia P (regime de 10). No entanto, estudos

espectroscpicos CD indicaram que as restries impostas por 1, 1'-ferrocenophane proibido o peptdeo aprovar a estrutura secundria -hlice caracterstica encontrada para SP nativo em um ambiente de micellar do SDS (sulfato de sdio n- dodeclico) biomimtico. De acordo com os autores, os resultados dos testes de actividade biolgica desta SP Mmico sero publicados em breve.103 O resultado desses testes ser interessante, especialmente em comparao s actividades determinado para os anlogos de Fer-SP descrito acima.88

Regime de 10. Mimic estrutural da substncia P, com 1, 1'-Ferrocenophane que serve como um substituto para o dipeptdeo Phe-Phe Em outro livro interessante, Frejd e colegas de trabalho prepararam um [Leu5] - 1, 1' em loop encefalina mimtica, no qual a subunidade de H-Tyr-Gly-Gly-Phe foi substituda por um Gly-Gly - ferrocenylbisalanine resduo (32, regime de 11).104 Os anis de ferroceno deste composto restrito constituem um substituto para o fenol aromtico (Tyr) e fenil anis (Phe). Estudos espectroscpicos NMR revelaram esta conjugado de possuir uma ligao de hidrognio entre o grupo de Fer CO e o do outro anel Fer, parte activa de NH. Esta conformao representa um modelo para nativo [Leu5]-encefalina na conformao de single-bend, que estabilizada por uma -volta. 107.108 Infelizmente, estudos de ligao deste composto para os receptores opiides ainda no tenham sido declarados.

Regime de 11. Mimic estrutural de [Leu5] - encefalina (9) com 1, 1'-Ferrocenophane

Parte superior da pgina 1. Introduo 2. Conjugados do ferroceno com aminocidos e peptdeos 2.1.2. 1, 1'-Ferrocenylbisalanine e seus conjugados 2.1.3. Outros aminocidos baseado em Ferrocenyl 2.2.1. Amidas do cido Ferrocenecarboxylic 2.2.2. Amidas de ferroceno-1, 1'-cido dicarboxlico 2.3.2. Ferrocenylmethylamines atravs da reduo das iminas 2.4.2. Outros mtodos para rotular C-terminal 2.4.3. Outros mtodos para rotular N-terminal 2.4.4. Rtulos para o grupo tiol em cistena

2.4.5. Diversos 2.5.2. Peptdeo sntese atravs de reaes de quatro-componente com ferroceno alquilaminas 3. Conjugados do ferroceno com protenas 3.1.2. d-Aminocido Oxidase (DAAO) 3.1.3. Citocromo P450cEstou 3.1.4. Peroxidase de rbano 3.2.1. Imunoglobulinas 3.2.2. Albumina bovina (BSA) 3.2.3. Vrias protenas 4. Conjugados do ferroceno com DNA, RNA e PNA 4.2.1. Anlise de estabilidade frente e verso com oligmeros de Ferrocenylated 5. Conjugados do ferroceno com carboidratos 5.2.2. Dendrimers 6. Ferroceno conjugados com outras biomolculas 6.1.1. Hormnios esterides 6.1.2. Outros hormnios. 7. Futuras perspectivas 8. Confirmao de 9. A lista de abreviaturas 10. Referncias de 2.1.3. Outros aminocidos baseado em Ferrocenyl

Nesta fase, deve notar-se que foram relatados vrios outros anlogos ferrocenylalanine. Estes incluem 1,2-ferrocenylbisalanine 33,100 , que foi facilmente obtido como os bis (N-formil) mas derivadas decomposta mediante desproteo (regime de 12). -amino cidos ferrocenyl-alanina (34) e 1, 1'--ferrocenylbis -alanina (35) poderia ser sintetizada em sua forma pura enantiomerically (regime de 12). 109 Nenhum tentativas foram feitas para hidrolizam os steres metlicos e obter os aminocidos livres. Alm disso, alguns derivados foram sintetizados que formalmente tm uma estrutura do tipo de aminocidos: 1, 1'ferrocenylbisglycine, ferrocenylenebisvaline110 ,111 e 1, 1'-acrescida funcional ferroceno com N,N- dibenzylalanine-like moieties.112

Regime de 12. Aminocidos baseado em ferroceno A sntese do mais simples que contm ferroceno aminocido 1'-aminoferrocene - 1-cido carboxlico (36a, Fca, R = R' = H, regime 12) tem sido relatado. Uma primeira preparao por lithiation de 1'--amino 1-bromoferrocene, seguido de tmpera com dixido de carbono slido, no ceder puro 36a. 113 Na sobre ao mesmo tempo, uma sntese que acertos 36a bastante baixo rendimento foi publicado,114 juntamente com uma comparao cuidadosa estrutural de derivados do 36 no estado slido e em soluo. A sntese recentemente foi melhorada por Heinze e Schlenker. 115 Rapid e colegas de trabalho foram capazes de obter este composto muito interessante a partir do ferroceno-1, 1'-cido dicarboxlico juntamente com vrios protegido derivados. 116 Vrios derivados protegidos de 36 foram tambm preparados (regime 12). As estruturas de single-crystal de raio-X do N-acetil metil ster 36. oB (R = Me, R' = Ac, Ac-Fca-OMe)117 e N- Boc-protegido 36 c (R = H, R' = Boc, Boc-Fca-OH) foram publicados. 118 Inicial de 36. oB, um nmero de aminocidos e peptdeos derivados foram preparados em que 36 serve como um aminocido. Esses peptdeos mostram ligaes de hidrognio intramoleculares interessantes. Em colaborao com grupo do Rapid, temos publicado a primeira derivada oligopeptdeos 36. 119 Figura 1 mostra um grfico ORTEP da Boc-Ala-FcaAla-Ala-OMe composto (37), que formalmente uma tetrapeptide. Peptdeo 37 foi preparado em soluo por peptdeo pela reaes de acoplamento e purificado por cromatografia em camada fina. A configurao das vertentes peptdeo estabilizada por duas ligaes de hidrognio intramoleculares, que impor uma conformao P-hlice no metaloceno. Conforme mostrado por espectroscopia de CD, esta conformao muito estvel e conservados em soluo. Em contraste com os compostos discutidos na seco 2.2.2 abaixo, peptdeos como 37 estendendo a partir do C - e N-termini de 36 formam antiparalelo folhas. Como tal, 36a no apenas um aminocido organometlico, mas tambm o primeiro turno "real" organometlico mimtico.

Figura 1 estrutura de Estado slida da tetrapeptide Boc-Ala-Fca-Ala-Ala-OMe 37 , contendo o antinatural 1'-aminoferrocene - 1-cido carboxlico (Fca).119 Outros aminocidos organometlicos como 38a e 39a (R = R' = H em ambos os casos) foram relatados pelo mesmo grupo. 120 Ambos compostos foram preparados em vrias etapas e poderiam ser exaustivamente caracterizados. As estruturas de single-crystal de raios-X de 38b (R = Me, R' = Ac) e 39 d (R = Me, R' = Boc) foram registrados, juntamente com a preparao de vrios outros derivados com diversos grupos protetores. Estes compostos devem revelar-se flexvel blocos de construo de pptidos com uma unidade de ferrocenyl incorporada na cadeia peptdica. 2.2. Formao de amida com derivados do cido Ferrocenecarboxylic

A maneira mais extensivamente explorada para acoplar a fraco de ferroceno de aminocidos e peptdeos atravs da formao de amida entre cido ferrocenecarboxylic (40) e o grupo amino terminal. O primeiro aminocido e dipeptdeo derivados deste tipo, Fc-CO-Gly-OMe, FcCO-Gly-OH, e Fc-CO-Gly-Leu-OEt, foram relatados por Schlgl desde 1957.43 Possibilitar acoplamento de um cido carboxlico com um grupo amino sob condies leves temperatura ambiente, o cido precisa ser ativado. H trs estratgias para ativar este cido carboxlico (regime 13): (1) a transformao no cloreto cido 41 com cloreto de oxaloyl ou cloreto de tionilo,43.121 (2) transformao do cido 40 em succinimid 42 ou benzotriazole ster 43, com o uso de DCC ou CED em conjunto com N- hydroxysuccinimid (HOSu) ou 1hydroxybenzotriazole (HOBt),122 ou (3) a ativao do cido in situ por HBTU ou TBTU. 123 Do ponto de vista prtico, o terceiro mtodo preferido por causa das seguintes razes: (1) um procedimento de um pote, com a ativao que ocorrem no local aps a mistura os componentes de Amina e cido carboxlico com TBTU ou HBTU na presena de uma base como a NEt3; (2) o engate requer curtos tempos de reao de < 45 min; (3) no necessrio utilizar solventes secas; solventes de tipo comercial, preferencialmente DMF ou MeCN, podem ser utilizados; e (4) os lado-produtos originrios do engate reagentes podem ser facilmente removidos por um apropriado adsorvido extractivo, produzindo produtos de pureza bom sem mais purificao. 123.124 Beck e colegas de trabalho relataram um outro mtodo interessante para transformar ferrocenoylamino cidos em derivativos dipeptdeo correspondente atravs da formao de oxazolone com o uso de uma carbodiimida.125

Regime de 13. Sintticas possibilidades de obter ferroceno carboxlico amida derivados dos aminocidos e peptdeos

Parte superior da pgina 1. Introduo 2. Conjugados do ferroceno com aminocidos e peptdeos 2.1.2. 1, 1'-Ferrocenylbisalanine e seus conjugados 2.1.3. Outros aminocidos baseado em Ferrocenyl 2.2.1. Amidas do cido Ferrocenecarboxylic 2.2.2. Amidas de ferroceno-1, 1'-cido dicarboxlico 2.3.2. Ferrocenylmethylamines atravs da reduo das iminas 2.4.2. Outros mtodos para rotular C-terminal 2.4.3. Outros mtodos para rotular N-terminal

2.4.4. Rtulos para o grupo tiol em cistena 2.4.5. Diversos 2.5.2. Peptdeo sntese atravs de reaes de quatro-componente com ferroceno alquilaminas 3. Conjugados do ferroceno com protenas 3.1.2. d-Aminocido Oxidase (DAAO) 3.1.3. Citocromo P450cEstou 3.1.4. Peroxidase de rbano 3.2.1. Imunoglobulinas 3.2.2. Albumina bovina (BSA) 3.2.3. Vrias protenas 4. Conjugados do ferroceno com DNA, RNA e PNA 4.2.1. Anlise de estabilidade frente e verso com oligmeros de Ferrocenylated 5. Conjugados do ferroceno com carboidratos 5.2.2. Dendrimers 6. Ferroceno conjugados com outras biomolculas 6.1.1. Hormnios esterides 6.1.2. Outros hormnios. 7. Futuras perspectivas 8. Confirmao de 9. A lista de abreviaturas 10. Referncias de 2.2.1. Amidas do cido Ferrocenecarboxylic

At ao momento, uma grande quantidade de metilcicloexano ferrocenoylamino cido e peptdeo conjugados da estrutura molecular definida so conhecidos; uma viso geral indicada no quadro 1. Vrios desses derivados estruturalmente caracterizados por cristalografia de raios X (ver quadro 1). No estado slido, interaes de ligao de hidrognio so uma caracterstica dominante e em ziguezague,126.127 sheetlike,128 e arranjos de embalagem helicoidais128.123 foram observados. Na soluo, a maioria desses derivados no parecem ter uma estrutura ordenada. Excees, no entanto, so Fc-CO-Pro-Pro-Phe-OH e Fc-

CO-(Pro)x- OBn com x = 24, compostos relatada por Kraatz e colaboradores. 129 A antiga, um enredo ORTEP do que descrito na Figura 2, revela uma caracterstica estrutural motivo para uma -volta em protenas. Os dois resduos Pro esto conectados em um cis-moda e uma forte ligao de hidrognio est presente entre os prtons no tomo de nitrognio de amida Phe N3 e ferrocenyl o tomo (NO contato = 2.853). Investigaes espectroscpicas NMR comprovar que a conformao observada de Estado slida mantida em MeCN -d3 soluo.129

Figura 2 lote ORTEP de Fc-COPro-Pro-Phe-OH. Reimpresso (com modificaes) com permisso de ref 129. Copyright 1999 Elsevier. Tabela 1. Viso geral do relatado cido Ferrocenoylamino e peptdeo derivados compostos Ref compostos Ref

Derivados do cido Ferrocenoylamino

FC-CO-Gly-OMe

144um

FC-CO-Ala-OMe

125

FC-CO-Gly-OEt

43, 122, 125

FC-CO-Ala-OEt

125

FC-CO-Gly-OBn

145um

FC-CO-Ala-OBn

122um

FC-CO-Gly-OH.

43, 125

FC-CO-Ala-OH.

125

FC-CO-Gly-OSu

146 b , c

FC-CO-Asp-OH.

136um

FC-CO-Cys (SBn)-OMe

122c

FC-CO-Asp (OBn)-OBn

136

FC-CO-conheceu-OEt

147

FC-CO-Pro-OH.

148, 129um

FC-CO-Pro-OBn

122

FC-CO-Pro-OMe

121

FC-CO-Phe-OMe

125, 121, 123, 149c FC-CO-Phe-OH.

125, 148

FC-CO-Phe-OtBu

146

FC-CO-Phe-OBn

122

FC-CO-Tyr-OBn

122

FC-CO-Val-OMe

121, 150um

FC-CO -dl-Leu-OHd

148

FC-CO -dl-Val-OH

148

FC-CO-Lys(N-CO-Fc) OHd 148

FC-CO-Glu (OBn)-OBn

122um

FC-CO-seu-OMe

151

FC-CO-His(N-CO-Fc)-OMe 151um

[Fc-CO-Gly-NHC2H4S]2

133

[Fc-CO-Pro-NHC2H4S]2

132

[Fc-CO-Ala-NHC2H4S]2

152c

Derivados de dipeptdeo de Ferrocenoyl

FC-CO-Gly-Gly-OEt

125, 134, 128um

FC-CO-Gly-Gly-OMe

149c

FC-CO-Gly-Ala-OMe

125

FC-CO-Gly-Pro-OEt

153

FC-CO-Ala-Ala-OBn

134, 128

FC-CO-Ala-Ala-OMe

125

FC-CO-Ala-Pro-OEt

126, um 127, 154

FC-CO-Ala-Phe-OEt

149c

FC-CO-Ala-Phe-OMe

123um

FC-CO-Asp (OBn) - Asp (OBn) - 136 OBn

FC-CO-Asp (OBn) - Glu (OEt) - 136 OEt

FC-CO-Asp (OBn) - Cys (SBn) OMe

136

FC-CO-Leu-Phe-OMe

134, 128um

FC-CO-Pro-Gly-OEt

153

FC-CO-Pro-Pro-OBn

129um

FC-CO-Gly-Leu-OEt

43

FC-CO-Ala-Pro-NHPya, e, f

155

FC-CO-Phe-Phe-OMe

128, 149c

FC-CO-Phe-Leu-OBn

149c

FC-CO-Phe-Ser-OEt

149c

FC-CO-Val-Phe-OMe

128

FC-CO-Val-Val-OMe

128

FC-CO-Leu-Leu-OEt

149c

FC-CO-Leu-Leu-OMe

128

[Fc-CO-Pro-Pro-NHC2H4S]2

132

Ferrocenoyl Tri - Tetra- e oligopeptdeos derivados

Fc-CO-Pro-Pro-Pro-OBn

129um Fc-CO-Pro-Pro-Phe-OH

129um

Fc-CO-Gly-Phe-Leu-OHc

148

Fc-CO-Pro-Pro-Pro-OBn

129um

FC-CO-Gly-Gly-Tyr (OBn) - Arg (no2) - 156 OMe

FC-CO-Gly-Gly-Tyr (OBn) - Arg (no2) - OH

156

Fc-CO-Gly-Gly-Tyr-Arg-OH

156

FC - CO-(substncia P)

140g

Fc-CO-Pro-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu-Met- 148h [Fc-CO-(Pro)x- NHC2H4S]2 NH2c

132Eu

Fc-CO-(Gly)4- NHC2H4SH

157

[Fc-CO-(Pro-Pro-Gly)y- NHC2H4S]2

152j c,

um Estrutura cristalina apresentada nesta referncia do raio X. b OSu = grufo. c No bem caracterizadas. d Mistura racmica usada. e NHPy = amida de 2-aminopyridin. f Tambm a complexao de PdCl2 para os tomos de nitrognio piridina tem sido relatada neste documento. g Substncia P um undecapeptide (ver esquemas 4 e 15). h Este o fragmento de aminocidos 411 de substncia p.eu x = 36. j y = 13. A estrutura de cristal de raios-X de Fc-CO-(Pro)4- OBn mostrado na Figura 3.129 As ligaes amida entre os resduos Pro so trans-configurado, e o composto tem uma conformao helicoidal canhota caracterstica de polyproline II. 130.131 Estruturas cristalinas de raios-X das disposies compostos Fc-CO-(Pro)3- OBn e Fc-CO-(Pro)2- OBn tambm mostram uma orientao helicoidal canhota, com trans-configurado vnculos de prolina.129 Investigaes espectroscpicas NMR revelaram que a conformao de Estado slida destes compostos de prolina mantida em CDCl3 e MeCN -d3; nenhum indicativo de Cruz-picos do cis-ligaes de prolina foram observadas no espectro RMN de NOESY.

Figura 3 enredo ORTEP do Fc-CO(-Pro)4- OBn. Reimpresso (com modificaes) com permisso de ref 129. Copyright 1999 Elsevier.

Galka e Kraatz tambm relataram uma srie de dissulfureto-bridged prolil cystamine ferrocenoyl compostos do geral frmula Fe (C5H4-CO-(Pro)n- NHC2H4S)2, com n = 06. 132 Monocamadas caseiro em um eletrodo de ouro foram preparadas a partir destes compostos, e as propriedades de transferncia de eltrons entre o grupo de ferrocenoyl e a superfcie do microelctrodo ouro foram investigadas. Sugere-se um mecanismo por meio de bnus do processo de transferncia de eltrons de um desvio significativo do comportamento de Marcus-tipo, embora kET mostra uma dependncia de distncia. Kraatz et al. tambm preparou a derivada de cystamine de glycyl Fe (C5H4-CO-Gly-NHC2H4S)2. 133 Este composto cristaliza-se em um assembly helicoidal supramoleculares consistindo de dois hlices diferentes. Em dois jornais, o mesmo grupo estudou a interao de vrios ferrocenoyldipeptides (Fc-CO-Gly2- OEt, Fc-CO-Ala2- OBn, Fc-CO-Phe2- OMe, Fc-CO-Leu2OMe, Fc-CO-Val2- OMe, Fc-CO-Leu-Phe-OMe e Fc-CO-Val-Phe-OMe) com 3-aminopyrazole (Apzl), 3-amino-5-methylpyrazole (3-AMP) e 3-trifluoroacetylamido-5-methylpyrazole (3-TFAcAMP). 134.128 Em soluo, estes compostos foram encontrados ao formulrio 1:1 associates estabilizadas por trs pontes de hidrognio, como mostra esquematicamente para 45 em regime de 14. Dos resultados da titulao do 1H NMR experimentos, as constantes de ligao entre esses derivados de pirazol e os dipeptides em CDCl3 estavam determinados a gama de 8 a 27 M-1. Esses valores correspondem a energias de ligao moderadas de 57 kJ mol-1. Em solventes de polaridade superior tais como MeCN -d3 e acetona -d6, foram consideradas as constantes de vinculao < 5 M-1.

Regime de 14. Ligao de hidrognio interao entre Fc-CO-Ala2- OBn e 3-Amino-5methylpyrazole (3-AMP) em soluo Recentemente, a Kraatz apresentou uma viso geral do seu extenso trabalho em ferrocenoylpeptides. 135 As propriedades eletroqumicas de ferrocenoylpeptides tambm foram discutidas nessa conta. Potencial redox determinaes em cidos ferrocenoylamino e ferrocenoylpeptides realizado por diferentes grupos foram comparadas. No entanto, os resultados e concluses devem ser tomados com os cuidados adequados pois cada grupo faz referncia a seu redox potenciais de forma diferente. Kraatz define o PCH/PCH+ como +450 mV versus SCE,122 , Considerando que o grupo de Hirao mede redox potencial versus Ag/Ag+ e determinado o casal de PCH/PCH+ em uma medio externo para ser +0.51 v.127 isso sublinha a necessidade de um mtodo consistente resolver este problema geral, e sugerimos usar o casal de PCH/PCH+ como padro interno, ou seja, adicionando uma pequena quantidade de ferroceno no final de cada inqurito eletroqumico para determinar a exata redox potencial nas condies usadas.123 Isso d muito confiveis valores relativos a PCH/PCH+ , que so facilmente reproduzveis e independente de solvente, instalao experimental e condies. Este procedimento tambm recomendado pela IUPAC. Um resultado interessante que certamente confivel a mudana de potencial redox observada da transio Fc/Fc+ em direo a potenciais menos positivos quando o peptdeo

anexado torna-se mais helicoidal. Em ir de Fc-CO-Pro-OH Fc-CO-Pro4- OBn, uma diminuio do potencial redox de cerca de 30 mV ocorre.129.135 No outro livro interessante, Kraatz e colegas de trabalho medido o redox potencial de ferrocenoyl dipeptides em uma grande variedade de solventes, concluindo que o redox potencial poderia ser correlacionado com o hidrognio doador capacidade do formalismo de KamletTaft.136 Os derivados de peptdeo Fc-CO-Phe-OMe (46) e Fc-CO-Ala-Phe-OMe (47) foram submetidos a 57Fe Mssbauer espectroscpicas investigaes.Mudana de valores para o ismero 123 e quadrupolo diviso est na faixa relatada para vrios outros derivados de ferroceno retirada do eltron substituintes sobre o137.138 Cp anel e que lembram as do ferrocenepeptide derivados de cidos nucleicos (PNA). 139 O fragmento de peptdeo parece ter pouca influncia sobre o gradiente de campo eltrico do ncleo de ferro. Os derivados de peptdeo apresentados at aqui nesta seo foram sintetizados atravs de mtodos de sntese de peptdeo em soluo. No entanto, um ferrocenoyl-rotulado derivados 48 undecapeptide substncia p foi elaborado atravs de mtodos de sntese de slido-fase clssicos Merrifield (regime de 15). 140 Em contraste com os derivados de ferrocenylalanine apresentados na seco 2.1 (regime 4), nenhuma oxidao grave ou decomposio foi observada aps a clivagem de conjugado a ferrocenoyl 48 da resina com HF. A maior robustez de 48 foi atribuda ao aumento do potencial de oxidao da fraco de ferroceno, devido retirada do efeito de amida a densidade de eltrons. Curiosamente, a potncia de spasmogenic de 48 foi idntica dentro o erro experimental de SP nativo (0,93 0,10 relativo a SP nativo), determinado por um ensaio de leo cobaia.

Regime de 15. Estrutura da substncia Ferrocenyl P conjugada 48 obtidos atravs de sntese de slido-fase Merrifield Nesta fase, deve notar-se que um pptido helicoidal 21-mer contendo seis grupos de ferrocenoyl acompanhada de lisina-N-grupos amino foi preparado. 141.142 a ideia subjacente a sntese do conjugado era espectroscopicamente investigar se a conformao de peptdeo de pai preservada aps derivatizao. Os resultados espectroscpicos mostraram o conjugado para adaptar uma conformao helicoidal semelhante do peptdeo sem modificaes. Outro papel informou sobre a reao de um l-polmero de lisina de 126,2 MW kDa com 41. 143 Neste caso, o conjugado foi obtido com 6% dos resduos de lisina carregando uma marca de ferrocenoyl. No mesmo livro, um copolmero de lisina 52,1 kDa, tendo a relao molar do aminocido Lys/Ala/Glu/Tyr de 34:45:14:7, foi reagiu com 41. Isto resultou em derivatizao de 14% dos grupos de2 lisina NH. Estes dois polmeros hidrossolveis ferrocenoyl foram usados para a construo de um eletrodo de glicose-sensoriamento amperomtricos, por Imobilizadora-los juntamente com a enzima glicose oxidase (Deus) na superfcie de um elctrodo carbono vtreo.

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1. Introduo 2. Conjugados do ferroceno com aminocidos e peptdeos 2.1.2. 1, 1'-Ferrocenylbisalanine e seus conjugados 2.1.3. Outros aminocidos baseado em Ferrocenyl 2.2.1. Amidas do cido Ferrocenecarboxylic 2.2.2. Amidas de ferroceno-1, 1'-cido dicarboxlico 2.3.2. Ferrocenylmethylamines atravs da reduo das iminas 2.4.2. Outros mtodos para rotular C-terminal 2.4.3. Outros mtodos para rotular N-terminal 2.4.4. Rtulos para o grupo tiol em cistena 2.4.5. Diversos 2.5.2. Peptdeo sntese atravs de reaes de quatro-componente com ferroceno alquilaminas 3. Conjugados do ferroceno com protenas 3.1.2. d-Aminocido Oxidase (DAAO) 3.1.3. Citocromo P450cEstou 3.1.4. Peroxidase de rbano 3.2.1. Imunoglobulinas 3.2.2. Albumina bovina (BSA) 3.2.3. Vrias protenas 4. Conjugados do ferroceno com DNA, RNA e PNA 4.2.1. Anlise de estabilidade frente e verso com oligmeros de Ferrocenylated 5. Conjugados do ferroceno com carboidratos 5.2.2. Dendrimers 6. Ferroceno conjugados com outras biomolculas 6.1.1. Hormnios esterides 6.1.2. Outros hormnios. 7. Futuras perspectivas

8. Confirmao de 9. A lista de abreviaturas 10. Referncias de 2.2.2. Amidas de ferroceno-1, 1'-cido dicarboxlico

Alm de metilcicloexano derivados de aminocidos, um grande nmero de 1, 1'-disubstituido aminocidos derivados foram preparados. Uma viso geral destes dado na tabela 2. Em 1996, Herrick et al. encontrado que compostos de frmula geral Fe (C5H4-CO-Aaa-OMe)2, com Aaa diferente de Pro, tm uma estrutura ordenada no CH2Cl2 e3 de CHCl (49, regime de 16).121 Ordenou a estrutura composta por duas pontes de hidrognio simetricamente equivalentes entre a amida NH e o tomo de oxignio metil ster carbonila outra vertente. Desde a justificao para as propriedades de aceitador de m ligao de hidrognio de metil ster carbonila grupos, esta conformao apareceu em primeiro lugar um pouco duvidoso para ns. No entanto, fomos capazes de confirmar que a derivada de fenilalanina Fe (C5H4-COPhe-OMe)2 (50), na verdade, adapta-se tal uma conformao em CH2Cl2 e3de CHCl.123 Em contraste, o anlogo cobaltocenium (cobrado) composto foi encontrado a existir como uma mistura desta conformao de hidrognio-ligadas e uma forma no-hidrognio-ligadas temperatura ambiente no CH2Cl2 e3de CHCl. Concluiu-se com a presena de dois c o alongamento vibraes no espectro de soluo IR no CH2Cl2 no 3365 e 3404 cm-1 (cf. o anlogo de ferroceno exibe apenas uma vibrao alongamento no CH2Cl2 no cm 3380-1).

Regime de 16. Ordenou a conformao observada para Fe (C5H4-CO-Aaa-OMe)2 no CH2Cl2 e CHCl3 soluo Tabela 2. Viso geral do relatado 1, 1'--cido Bisamino e 1, 1' derivados de Bispeptide compostos Ref compostos Ref

1, 1'-Derivados de ferroceno de cido Bisamino

Fe (C5H4-CO-Gly-OEt)2

173a, f.

Fe (C5H4-CO-Gly-OH)2

173a, f.

Fe (C5H4-CO-Gly-NH2)2

158b

Fe (C5H4-CO-Pro-OMe)2

121, 168b

Fe (C5H4-CO-Pro-OBn)2

168

Fe (C5H4-CO-Phe-OMe)2

121, 123b

Fe (C5H4-CO-Val-OMe)2

148, 150b Fe (C5H4-CO-Cys(SEt)-OMe)2

164, 165

Fe (C5H4-CO-Gly-NHC2H4S)2

166b

Fe (C5H4-CO-Ala-NHC2H4S)2

166

Fe (C5H4-CO-Val-NHC2H4S)2

166

Fe (C5H4-CO-Leu-NHC2H4S)2

166

1, 1'-Derivados do ferroceno Bispeptide

Fe (C5H4-CO-Gly-Gly- 125 OMe)2

Fe (C5H4-CO-Gly-Ala-OMe)2

125

Fe (C5H4-CO-Gly-Leu- 126, b 154 Fe (C5H4-CO-Gly-Phe-OMe)2 OEt)2

125

Fe (C5H4-CO-Gly-Pro- 153 OEt)2

Fe (C5H4-CO-Gly-Phe-OEt)2

154

Fe (C5H4-CO-Ala-Pro- 126, b 127, Fe (C5H4- CO-d- Ala-d-Pro-OEt)2 OEt)2 154

154

Fe (C5H4-CO-Ala-Pro- 127b OMe)2

Fe (C5H4-CO-Ala-Pro-OPr)2

127b

Fe (C5H4-CO-Ala-Pro- 127b OBn)2

Fe (C5H4-CO-Pro-Gly-OEt)2

153

Fe (C5H4-CO-Ala-Phe- 123b OMe)2

Fe (C5H4-CO-Pro-Pro-OBn)2

168c

Fe (C5H4-CO-Ala-Pro- 160b, d NHPy)2

Fe (C5H4-CO-Ala-Pro-NHPy)2PdCl2

160b, d

Fe (C5H4-CO-Ala-Pro- 161b, e NHPy)2CA

Fe (C5H4-CO-Pro3- OBn)2

168c

Fe (C5H4-4- OBn de CO-Pro)2

168c

COB-NHCH2CH2(C5H4) NHCO-Fe(C5H4)-COAla-(Leu-Aib)8- lipoamide

174e

um No bem caracterizadas. b Estrutura cristalina relatada nesta referncia do raio X. c Tambm o Fe derivado (C5H4-CO-Pro3- OBn) (C5H4-CO-OBt) isolado da mesma reao. d NHPy = amida de 2-aminopyridin. e CA = (1R, 3S)-cido camphoric; AIB = cido aminoisobutyric, tambm conhecido como dimethylglycine; lipoamide = amida do lipoamine. f Desses dois compostos foram recentemente exaustivamente caracterizados por Kraatz e colaboradores, incluindo estruturas de single-crystal de raios-X.175 Curiosamente, a conformao ordenada mostrada por 49 em regime de 16 observada para a derivada de valina Fe (C5H4-CO-Val-OMe)2 (51) no estado cristalino, embora as interaes de ligao de hidrognio so bastante fracas (N contatos de 3,25 ).150 Em contraste, o volumoso Phe-OMe derivados 50 tem uma conformao diferente no estado slido (consulte a Figura 4), embora ele se adapta a conformao mostrada no esquema de 16 na soluo. No estado slido, 50 faz uma ligao de hidrognio intramolecular e um intermolecular, montando uma hlice destro.123 Talvez a diferena entre 50 e 51 devido a T-empilhamento dos anis aromticos na antiga.

Figura 4 estrutura de Estado slida de Fe (C5H4-CO-Phe-OMe)2 (50). Reimpresso (com modificaes) com permisso de ref 123. Copyright 2003 A Royal Society of Chemistry. A diferena de pontos fortes aceitador de hidrognio bond entre moieties de carbonila amida e grupos de carbonila do ster muito bem ilustrada pelas estruturas de cristal de raios-X de 51 e Fe (C5H4-CO-Gly-NH2)2 (52).150.158 Ambos exibir a conformao ordenada com as duas pontes de hidrognio simtricos, mas o N contatos so consideravelmente menores para os compostos glycinamide 52 comparado a valina metil ster 51 (2.88 vs 3.25 ). De 1, 1'-disubstituido derivados de aminocidos, tambm compostos foram preparados em que cada anel de Cp substitudo por um ster de dipeptdeo; uma viso geral destes dado na tabela 2. Hirao e colegas de trabalho foram o primeiro relatrio e investigar compostos de composio geral Fe (C5H4-CO-Ala-Pro- ou)2 (53), com (R = Me (um), Et (b), n-Pr (c), (d) Bn).126.127 Como um exemplo representativo, a estrutura de cristal de raio-X da oA representada na Figura 5.127 A estrutura revela uma conformao ordenada relacionada a 49 mostrado no esquema de 16, tendo ligaes de hidrognio intramoleculares entre a Ala-NH e o Ala-CO de outra vertente, com N contatos de 2,91 e 3.04 .

Figura 5 estrutura de Estado slida de Fe (C5H4-CO-Ala-Pro-OMe)2 (oA). Reimpresso (com modificaes) com permisso de ref 127. Copyright 1999 Elsevier. Todos esses derivados com diversos grupos r exibem um tipo semelhante de estrutura ordenada no estado slido, bem como em soluo, mesmo em mdia polar, como MeCN e CDCl3/DMSO-d6 (9:1 v/v) misturas. Isto foi derivado, combinando os resultados de investigaes espectroscpicos NMR, IR e CD.127 Na Figura 6, so mostrados os espectros de CD de Fc-CO-Ala-Pro-OEt (54) e oAd em MeCN.127 O algodo efeitos devido aos cromforos ferroceno so de muito maior intensidade para 1, 1'-disubstituido compostos 53 do que para o metilcicloexano ferrocenoyl derivativos 54, que confirma que o primeiro grupo de compostos tem uma estrutura ordenada. Hirao e colaboradores preparados e estruturalmente caracterizada a d-Fe de compostos que contm cido amino (C5H4- CO-d- Ala-d-Pro-OEt)2.154 O fato de que este composto uma relao enantiomeric com Fe (C5H4-CO-Ala-Pro-OEt)2 (53b) tem sido muito bem ilustrado por espectroscopia de CD: efeitos de algodo de intensidade idntica, mas oposto sinal, foram observados.

Figura 6 CD espectros de Fe (C5H4-CO-Ala-PrOR)2 (53) (com R = Et, 1; Me, 2; n-Pr, 3; e Bn, 4) e Fc-CO-Ala-Pro-OEt (5) em MeCN (0,1 mM). Reproduzido com permisso do ref 127. Copyright 1999 Elsevier.

Vale ressaltar que o composto Fe (C5H4-CO-Gly-Pro-OEt)2 (55) tem o mesmo tipo de acordo como o acima referido Ala-Pro derivados 53 no estado slido, bem como na soluo.153 Para complementar os compostos 53 e 55, que possuem um grupo de NH por vertente peptdeo, derivados de peptdeo com dois moieties de amida NH foram preparados. Estes incluem Fe (C5H4-CO-Gly-Leu-OEt)2 (56), Fe (C5H4-CO-Gly-Phe-OEt)2 (57),154 e Fe (C5H4-CO-Ala-PheOMe)2 (58).123 As moieties de NH amida do segundo aminocido no so orientados de forma a permitir a formao de ligaes de hidrognio intramoleculares. Em vez disso, esses grupos NH esto envolvidos em interaes intermoleculares ligao de hidrognio no estado slido, resultando em supramoleculares assemblies. X-ray cristalogrficas anlise revelou 56 para montar em um arranjo constitudo em toda a malha.Ambos 154 57 e 58, por outro lado, foram encontrados para formar anis de hidrognio-ligadas 14 Membros, conforme ilustrado na Figura 7 para este ltimo.123,154

Figura 7 estrutura de Estado slida de Fe (C5H4-CO-Ala-Phe-OMe)2 (58), representando o anel de hidrognio-ligadas 14 Membros. Reimpresso (com modificaes) com permisso de ref 123. Copyright 2003 A Royal Society of Chemistry. Em certa medida, as estruturas discutidas acima se assemelham a estruturas de turno em peptdeos. Uma estrutura de turno de peptdeo tpico retratada em regime de 17. As restries de anel por pontes de hidrognio definem -voltas (anel de 7 Membros) ou -voltas (anel de 10 Membros), Considerando que os anis 13 Membros esto presentes em -hlice. Antes e depois da virada, o peptdeo estende antiparalelas to vertentes, muitas vezes em folhas de . Em todos os derivados de peptdeo de ferroceno-1, 1'-cido dicarboxlico uma orientao paralela das vertentes peptdeo aplicada. Embora estes compostos no podem ser considerados como verdadeiro -turn mimetics,121 topolgico semelhanas permanecem. Desta considerao, sugerimos uma nomenclatura para tal paralelo virar mimetics,123 e esta nomenclatura exemplificada por estruturas de Estado slidas de 50 e 58 (regime de 17). Para 50, um anel de 8 Membros formado atravs da ligao de hidrognio (H n cc o cCpipso Fe cCp-ipso cc o O). A ligao de hidrognio formada entre o eu (C O) e i + 2 (NH) aminocidos. Este tipo de turno que ns denotar pseudo-p (p para paralelo). Se um formalismo semelhante aplicado, 58 forma anis 11 Membros atravs da ligao de hidrognio intramolecular entre amino cidos i e i + 3 e isso ns denotar um pseudo-p turn. Por causa da aproximado C2 simetria desta molcula, as mesmas regras aplicam-se para anis de Cp e seus substituintes.

Regime de 17. Ligaes de hidrognio intramoleculares nos 50 e 58 em comparao com o de ocorrncia natural peptdeo turno estruturas (topo)

Regime de 18. Dois 1, 1'-derivados de ferroceno peptdeo que no formam ligaes de hidrognio intramoleculares em soluo

Regime de 19. Sntese de cistena-Bridged Pseudo-1, 1'-ferrocenyl Dipeptides A fora de pontes de hidrognio no CH2Cl2 e CHCl3 solues de 58 foi investigadas em relao dos seus derivados cobaltocenium positivamente carregada 59.123 Parece que as interaes de ligaes de hidrognio para os derivados cobaltocenium 59 so ligeiramente mais fortes do que aqueles para o composto ferroceno 58. No entanto, as diferenas so pequenas e sensveis s condies experimentais. Especialmente a presena de vestgios de gua tem uma influncia significativa sobre a propriedades de ligao de hidrognio. Os parmetros espectroscpicos de Fe Mssbauer 57de 50 e 58 foram comparados com os de ferroceno (1),159 46e 47.123 Os turnos de ismero para estes compostos so muito semelhantes, que os valores para o quadrupolo diviso (EQ) foram encontrados para variar na seguinte ordem: PCH (EQ = 2.42 mm s-1)138.159 > ferrocenoyl derivados 46 e 47 (EQ = mm 2,32 s-1) > 1, 1'-disubstituido derivados 50 e 58 (EQ = mm 2,27 s-1). Tem sido observado antes que que eq diminui quando um anel de Cp de ferroceno substitudo com um substituinte retirada do eltron, e ainda mais quando tal substituinte est presente em qualquer anel Cp.137 Hirao e colegas de trabalho prepararam a compostos Fe (C5H4-CO-Ala-Pro-NHPy)2 (59) (NHPy a amida de 2-aminopyridin) e posteriormente transformou em trans- PdCl2 complexo 60com os tomos de nitrognio piridina coordenados ao tomo de Pd.160 Estruturas de cristal de raios-X para ambos compostos foram relatadas; Esse para 60 reproduzida na Figura 8. Compostos 59 e 60 adaptarem o "habitual" ordenou a conformao no estado slido, bem como em soluo, com o grupo de Ala-NH sendo envolvida em interaes de hidrognio intramoleculares com o agrupamento de Ala-CO outra vertente. Na verdade, coordenao dos anis piridina ao tomo de Pd estabiliza as ligaes de hidrognio intramoleculares significativamente, em soluo, bem como no estado slido. Em outro livro, Hirao e Moriuchi preparado em estruturalmente caracterizado o aduto de 59 (1R, 3S)-cido camphoric.161 , Hirao e Moriuchi apresentaram recentemente uma conta em alguns dos seus resultados em ferrocenoylpeptides na lngua japonesa.162

Estrutura de single-crystal Figura 8 raios-X para o complexo de2 de PdCl 60. Reproduzido com permisso do ref 160. Copyright 2001 American Chemical Society. Um ponto importante que uma estrutura ordenada s ocorrer se os grupos amino terminais de amidas de formulrio de aminocidos e/ou pptidos com um cido carboxlico que est diretamente ligada ao anel de Cp. Os grupos de Hirao e Beck preparados compostos 61 e 62 com um vinculador mais diferente (regime de 18), e descobriram que estas no apresentam uma conformao aderente de hidrognio intramolecular em soluo.154,163 Han et al. preparado macrociclos compostos de ferroceno-1, 1'-cloreto de cido dicarboxlico (63) e derivados, pseudo-cystine com vrios ligadores entre os tomos de enxofre.164 A sntese cedeu 1, 1'-ferrocenophane derivados 64 como cyclodimers 65 (regime de 19). Redox potencial para o Fe (C5H4- R)2/Fe (C5H4-R)2+ par de 1, 1'-ferrocenophane derivados 64 depende da natureza do nion. Em particular, a adio de flor resultou em uma mudana de potencial redox pronunciado de sobre mV 120150 a valores mais positivos. Desde a ocorrncia desta mudana de redox potencial, prev-se que os ons de haleto ocupam uma posio no bolso de ligao de 1, 1'-ferrocenophane. A vinculao estabilizada por pontes de hidrognio para os dois moieties de NH e, no caso do Estado de redox ferrocenium, por uma interao eletrosttica adicional entre o haleto e o tomo de ferro. Em um relatrio subsequente,165 cistina e cistina di - e tripeptides ((AA)n- Cys)2 (AA = Gly, Ala, Leu, Met Pro; n = 0, 1, 2) foram sintetizadas e reagiu com 63 a forma ferrocenophanes com uma cavidade de tamanho diferente. Nesta cavidade, alcalina e alcalino-terrosos ctions poderiam ligar. CD spectrosocpy e cclico voltammetry foram usados para determinar constantes de vinculao. Para uma derivada, afinidade de ligao alta para2++ Mg e Ca2++, juntamente com uma alta preferncia para Ca2++ sobre k+, foi observada, que foi ainda melhor do que os valores para a Valinomicina de ionforo natural. Recentemente, outros macrociclos aminocido cystamine derivados Fe (C5H4-CO-AA-NHC2H4S)2 foram relatados (AA = Ala, Val, Leu).166 Estes compostos mostram forte hidrognio intramolecular colagem e estruturas relacionadas com 49, como discutido acima. Suas propriedades eletroqumicas foram tambm investigadas em soluo como imobilizadas em eletrodos de Au.167 Recentemente, Kraatz e colegas de trabalho prepararam compostos da frmula geral Fe (C5H4-CO-Pron- OBn)2, com n = 14.168 Como observado para o metilcicloexano compostos Fc-CO-Pron- OBn,129 , as cadeias de prolina do 1, 1'-disubstituido compostos exibir a caracterstica de arranjo helicoidal canhoto para polyproline II. Para compostos Fe (C5H4-CO(Pro)2- OBn)2, a conformao ordenada adaptado pelo outro 1, 1'-derivados de disubstituido apresentados acima no for respeitado, porque as ligaes Proamide faltam moieties de NH. Redox potencial para o Fe (C5H4-R)2/Fe (C5H4-R)2+ par foi encontrada a mudar de forma pequena para valores menos positivos em passar de Fe (C5H4-CO-Pro-OBn)2 a Fe (C5H4-COPro4- OBn)2, uma tendncia observada da mesma forma para os derivados de metilcicloexano Fc-CO-(Pro)x- OBn.129 Curiosamente, foi noticiado que a sntese de Fe (C5H4-CO-Pron- OBn)2 com n = 2, 3 ou 4 rendido uma segunda classe de compostos, ou seja, os "incompletos" derivados substitudos Fe (C5H4-CO-Pron- OBn) (C5H4-CO-OBt).168 Em uma subseqentes papel, Kraatz e colaboradores reagiu a "incompleta" derivados com n = 3 e 4 com um anlogo de pepstatin

para obter o conjugados 66 mostrado no esquema de 20.169 Pepstatin um potente inibidor natural de proteases aspartato, incluindo pepsina e protease do HIV-1. 170-172 Trabalho atual para testar se estes derivados tm a capacidade de inibir proteases aspartato est em curso, de acordo com ref 169.

Esquema de 20. Estrutura do 1-Oligopropyl-1'-pep - estatina derivados de Fereocene 66 2.3. Imina e formao de Amina com Ferrocenecarbaldehyde2.3.1. Iminas de Ferrocenecarbaldehyde Iminas de ferrocenecarbaldehyde (67) e aminocidos ou steres de aminocidos podem ser preparadas em uma maneira fcil (68, regime de 21). Vrios solventes tm sido utilizados para esta transformao sinttica, tais como EtOH,176 MeOH,177 ou CHCl3.178 As reaes so executadas na temperatura ambiente177 ou ligeiramente elevadas temperaturas, variando entre 60 e 80 c.177.178 No entanto, um relatrio apareceu na literatura em que este tipo de iminas foi obtido em condies de solventes temperatura ambiente.179 Uma viso geral da Constituio da iminas relatadas entre 67 e aminocidos ou steres de aminocidos dado na tabela 3.

Regime de 21. Sntese geral de iminas 68 de aminocidos e Ferrocenecarbaldehyde 67 Tabela 3. Constituio do relatado iminas 68 de 67 e derivados de aminocidosum compostos Ref compostos Ref

FC-C

N(Gly-OH)

176, 177

FC-C

N(Gly-OEt)

176, 177

FC-C

N (dl-Ala-OH)

176

FC-C

N(Ala-OH)

177

FC-C

N(Ala-OMe)

179

FC-C

N (dl-Ala-OEt)

176

FC-C

N(Ala-OEt)

179

FC-C

N(-Ala-OH)

176

FC-C

N (dl-Val-OH)

176

FC-C

N(Val-OH)

177

FC-C

N (dl-Val-OEt)

176

FC-C

N (dl-Leu-OH)

176

FC-C

N(Leu-OH)

177

FC-C

N(Leu-OMe)

178

FC-C

N(Leu-OEt)

176

FC-C

N (dl- Ile-OH)

176

FC-C

N(Ile-OMe)

179

FC-C

N (dl-Asp-OH)

176

FC-C

N(Glu-OH)

176

FC-C

N(Phe-OMe)

178

FC-C

N (dl-Tyr-OH)

176

FC-C

N(Tyr-OH)

176

FC-C

N(Met-OH)

176, 178

FC-C

N(Arg-OH)

176

FC-C

N(His-OMe)

179

FC-C

N(Ser-OMe)

179

FC-C

N (Lys(N

C-Fc)-OMe)

179

[Fc-C

N(Cys(S-)-OH)]2

176

um Estas iminas so compostos bastante estveis na ausncia de cidos aquosos. Eles podem ser reduzidos com NaBH4 ou H2/Pd para produzir os derivados de aminas secundrias mais estveis, que sero descritos na seo 2.3.2. Aminocido ferrocenylimines tm sido usados como ligantes para ons de metais de transio. Beck e colegas de trabalho prepararam complexos de Pd(II) com iminas de 67 e os aminocidos Ala, Gly, Val e Leu como ligantes.177 Especialista dos complexos isolados depende o sal de Pd(II) e o tipo de aminocido derivado, conforme ilustrado no regime de 22. Com nd2PdCl4 e iminas de 67 e cido carboxlico livre do Ala, Leu e Val, mononucleares complexos com uma proporo de ligante/Pd de 2:1 foram obtidos (69). Por outro lado, a reao de PdCl2 com o correspondente ferroceno imina glicina derivados 70 rendeu o complexo de Pd(II) de clorobridged dinuclear 71. A reao de Pd(OAc)2 com as iminas entre 67 e H-Gly-OMA e HAla-OMe resultou no isolamento de espcies com ponte acetato 72, em que se verificou ortopalladation do anel ferrocenyl-Cp. Vrios destes complexos, incluindo um derivado de ortopalladated, foram estruturalmente caracterizados por cristalografia de raios X. Em resumo,

dois tipos de modos quelantes foram observados, N normal, modo de coordenao (69 e 71) e tambm o c incomum, modo bidentado N (72).

Regime de 22. PD complexos de ferroceno cidos Imino Em um estudo posterior, Beck e colegas de trabalho prepararam iminas de benzenos tri, tetra e hexasubstituted com p- ethynylphenylalanine metil ster.180 Como um exemplo representativo, a estrutura molecular dos derivados hexaferrocene 73 retratada em regime de 23.

Regime de 23. Estrutura da "Star-Shaped" Hexa-kis (ferroceno imino cido) benzeno derivada 73 O peptdeo de 21-mer mesmo, que foi derivatized com cido ferrocenecarboxylic (40) (ver seco 2.2.1), foi tambm reagiu com ferrocenecarbaldehyde (67). Tambm neste caso, os seis grupos lisina lado cadeia NH2 foram rotulados e o conjugado resultante foi encontrado para adaptar uma conformao helicoidal semelhante.141,142

Parte superior da pgina 1. Introduo 2. Conjugados do ferroceno com aminocidos e peptdeos 2.1.2. 1, 1'-Ferrocenylbisalanine e seus conjugados 2.1.3. Outros aminocidos baseado em Ferrocenyl 2.2.1. Amidas do cido Ferrocenecarboxylic 2.2.2. Amidas de ferroceno-1, 1'-cido dicarboxlico 2.3.2. Ferrocenylmethylamines atravs da reduo das iminas 2.4.2. Outros mtodos para rotular C-terminal 2.4.3. Outros mtodos para rotular N-terminal 2.4.4. Rtulos para o grupo tiol em cistena

2.4.5. Diversos 2.5.2. Peptdeo sntese atravs de reaes de quatro-componente com ferroceno alquilaminas 3. Conjugados do ferroceno com protenas 3.1.2. d-Aminocido Oxidase (DAAO) 3.1.3. Citocromo P450cEstou 3.1.4. Peroxidase de rbano 3.2.1. Imunoglobulinas 3.2.2. Albumina bovina (BSA) 3.2.3. Vrias protenas 4. Conjugados do ferroceno com DNA, RNA e PNA 4.2.1. Anlise de estabilidade frente e verso com oligmeros de Ferrocenylated 5. Conjugados do ferroceno com carboidratos 5.2.2. Dendrimers 6. Ferroceno conjugados com outras biomolculas 6.1.1. Hormnios esterides 6.1.2. Outros hormnios. 7. Futuras perspectivas 8. Confirmao de 9. A lista de abreviaturas 10. Referncias de 2.3.2. Ferrocenylmethylamines atravs da reduo das iminas

Ferrocenylmethylamine derivados 74 foram preparados por meio da reduo de iminas de ferrocenecarbaldehyde (67) e aminocidos com NaBH4 ou H2/Pd. Alternativamente, estes aminas podem ser synthe-se diretamente em um procedimento de um pote de 67, a derivada de aminocidos e o reagente redutor adequado (regime 24). At ao momento, foram relatado um nmero considervel de Fem derivados, como mostrado na tabela 4. Alguns destes compostos, em especial o derivado de glicina Fem-Gly-OH (75, Fem = ferrocenylmethyl), encontrado aplicativo na sntese de peptdeo como resduos de aminocidos lipoflicos, com moieties de amida mascarado. Isso tratado na seo 2.5.1. Em uma reao estequiomtrica,

pequenas quantidades do bimetlico compostos (Fem)2Gly-OMe (76) foram isoladas para complementar a derivada de mono-Fem esperado Fem-Gly-OMe (75b).181

Esquema de 24. Formao de aminocidos (Fem) Ferrocenylmethyl 74 Tabela 4. Viso geral sobre os derivados de aminocidos Fem relatado compostos Ref compostos Ref

Fem-Gly-OH (75)

182

Fem-Gly-OMe (75b)

182

Fem-Ala-OH (78)

177, 182

Fem-Ala-OMe

182

Fem-Pro-OH (77)

177

Fem-conheceu-OMe

178

Fem-Phe-OMe

178

Fem-Phe-OH (84)

178, 182

Fem-Phe-OtBu

182

Fem-Leu-OtBu

182

Fem-Leu-OMe

178

Fem-Val-OtBu

178

Fem2- Gly-(OMe76)

181

Beck e colegas de trabalho usado Fem-Pro-OH (77) e Fem-Ala-OH (78) como ligantes para Pd(II).177 A reao de nd2PdCl4 com 77 e 78 rendeu dois tipos diferentes de complexos (esquema de 25). Com 77, o tri-metlicos (1Pd e 2Fe) compostos 79 com um ligante em relao taxa de 2:1 Pd foi obtida. Em condies idnticas, a sntese com 78 resultou no isolamento do Pd(II) bis--cloro dimrica complexo 80.

Regime de 25. PD complexos de aminocidos Ferrocenylmethyl

Metzler-Nolte e colegas de trabalho exploraram a qumica de acoplamento de peptdeo de derivados do cido amino-Fem. Acoplamento de aminocidos e peptdeos para o C - terminal da Fem-amino cido steres prossegue prontamente aps hidrlise da funcionalidade de ster e subseqente ativao de HBTU.178,183,184 Por outro lado, HBTU ativado protegido por n aminocidos no mostrou nenhum reatividade na direo do grupo amino secundrio da FemPhe-OMe (regime de 26). Isto provavelmente pode ser atribudo para efeitos estricos, porque Fem-Benzilamina (81a) e Fem-methylbenzylamine (81b) reagem sem problemas com HBTUativado aminocidos para produzir derivados 82a e 82b, respectivamente.178,183,185 l- Leu, bem como l- e d-Ala, foi usado com sucesso para esta reao de acoplamento. Investigaes NMR em combinao com modelagem molecular foram usadas para elucidar a estrutura destes conjugados em soluo e explicar as diferenas de reactividade.178

Regime de 26. Diferena de reatividade do grupo Amino secundrio de steres de aminocidos Fem e aminas em direo de aminocidos

Regime de 27. Bimetlico derivados de aminocidos Ferrocenyl Esses derivados de ferrocenylbenzylamine podem ser aplicados como um grupo de ancoragem para C-terminal de aminocidos e peptdeos.185 Neste sentido, a rotulagem complementar 40, que pode servir como um marcador para o N-terminal de peptdeos e aminocidos. A partir de derivados de dipeptdeo 83do Fem, vrios derivados bimetlico interessantes como 85 e 86 foram preparados no grupo Metzler-Nolte tambm (regime 27).178,183 2.4. Outros mtodos de fixao2.4.1. Acoplamento Sonogashira A reao de Sonogashira um Pd-catalisada acoplamento de um terminal alquino com um anel aromtico halognio substitudo, de acordo com o esquema de 28. 186-188 Embora muitas variaes foram publicadas recentemente, incluindo exemplos de Cu-livre, o sistema de catalisador mais comum ainda a combinao de PdCl2(PPh3)2 e CuI. A reao requer condies anaerbias, mas solventes misturas contendo at uma pequena porcentagem de gua so toleradas, tornando assim possvel o uso de solventes undried comerciais. O grupo de Nolte Metzler desenvolveu um mtodo prtico e flexvel para rotular o c ou N-terminal de aminocidos e peptdeos, consistindo de um processo de duas etapas. 189-191 Duas rotas sintticas semelhantes para anexar um marcador para o C-terminal tem sido exploradas, conforme mostrado no esquema de 29.

Regime de 28. Acoplamento Sonogashira

Regime de 29. Dois mtodos para rotular o C-terminal de pptidos por acoplamento Sonogashira

Regime de 30. Esquema para rotular N-terminal de aminocidos e peptdeos por acoplamento Sonogashira

Regime de 31. Estruturas de dois derivados de ferroceno Alamethicin 94um um Note que o grupo de ferrocenoyl est ligado a C-terminal do peptdeo. O primeiro passo para a introduo de um rtulo no C-terminal consiste em functionalizing um aminocido Boc protegido ou protegidos pelo COB dipeptdeo no seu C-terminal pela formao de amida com propargylamines 87 (R = H (um), (b) Et) ou com p- iodoaniline (88). A sntese comea com a preparao de amidas 89 e 90 de cido ferrocenecarboxylic (40) e 88 ou 87, respectivamente. Estes amidas preparam-se atravs de mtodos de sntese de peptdeo de fase de soluo padro, empregando isobutylchloroformiate e N- metilmorfolina. 192 Na segunda etapa, o acoplamento Sonogashira executado, rendendo a acrescida funcional ferroceno aminocidos e peptdeos como 91 e 92. O ferroceno diethylpropargylamide derivativos ob provada ser superior do ferroceno propargylamide congnere 90 devido sua solubilidade significativamente aprimorada e purificao mais fceis de conjugados, como 92b. Este mtodo no est restrito a C-terminal rotular, mas atravs de uma ligeira modificao pode ser adaptado para a introduo de um marcador na N-terminal, como mostrado no esquema de 30. A amida de p- iodobenzoic cido e H-Leu-OMe foi reagiu com 90 sob Sonogashira idntica condies de engate, produzindo o N-terminal rotulado composto 93.190 Este procedimento de rotulagem de duas etapas muito atraente, por vrias razes. Em primeiro lugar, ambas as etapas, formao de amida e engate Sonogashira, proceder-se bom rendimento, variando de 70 a 95%. Solventes de segunda, comercial reagentes de qualidade podem ser empregadas para cada etapa. Somente para a Sonogashira etapa de acoplamento o uso de solventes venoso necessrios. Em terceiro lugar, o mtodo verstil e de grande alcance, como ele tolera uma variedade de grupos funcionais, tais como lcoois (Ser), tioteres (Met), steres e amidas.191

Parte superior da pgina 1. Introduo 2. Conjugados do ferroceno com aminocidos e peptdeos 2.1.2. 1, 1'-Ferrocenylbisalanine e seus conjugados 2.1.3. Outros aminocidos baseado em Ferrocenyl

2.2.1. Amidas do cido Ferrocenecarboxylic 2.2.2. Amidas de ferroceno-1, 1'-cido dicarboxlico 2.3.2. Ferrocenylmethylamines atravs da reduo das iminas 2.4.2. Outros mtodos para rotular C-terminal 2.4.3. Outros mtodos para rotular N-terminal 2.4.4. Rtulos para o grupo tiol em cistena 2.4.5. Diversos 2.5.2. Peptdeo sntese atravs de reaes de quatro-componente com ferroceno alquilaminas 3. Conjugados do ferroceno com protenas 3.1.2. d-Aminocido Oxidase (DAAO) 3.1.3. Citocromo P450cEstou 3.1.4. Peroxidase de rbano 3.2.1. Imunoglobulinas 3.2.2. Albumina bovina (BSA) 3.2.3. Vrias protenas 4. Conjugados do ferroceno com DNA, RNA e PNA 4.2.1. Anlise de estabilidade frente e verso com oligmeros de Ferrocenylated 5. Conjugados do ferroceno com carboidratos 5.2.2. Dendrimers 6. Ferroceno conjugados com outras biomolculas 6.1.1. Hormnios esterides 6.1.2. Outros hormnios. 7. Futuras perspectivas 8. Confirmao de 9. A lista de abreviaturas 10. Referncias de 2.4.2. Outros mtodos para rotular C-terminal

Para complementar o processo de Sonogashira, foram desenvolvidos vrios outros mtodos para o cloreto de C-terminal. Um deles, formao de amida entre Fem-Benzilamina ou Femmethylbenzylamine e cido carboxlico C-terminal, j foi apresentado na seo 2.3.2. Outros mtodos incluem formao ster ou anidrido e exemplos sero dada abaixo. Eisenthal e colegas de trabalho prepararam dois ferrocenoyl derivados 94 de alamethicin de peptdeo formadoras de canal (ALM). 193 Um dos derivados (94a) foi preparado de 40, Considerando que os outros (94b) foi sintetizado a partir do ferroceno-1, 1'-cido dicarboxlico. Portanto, os compostos diferem no anel Cp unconjugated; 94a tem um anel de Cp, que 94b tem um grupo de - COOH4-C5H (regime 31). Em ambos os casos, os moieties de ferrocenoyl estavam ligadas atravs da formao de ster C-terminal do pptido de 20-mer na soluo. Alamethicin um canal formando peptdeo, produzido pelo fungo Trichoderma viridee pertence classe de peptaibols. Alamethicin self-associates na bilayers de lipdios, assim formando dependentes de voltagem canais inicos.194-197 A forma reduzida (neutra), ambos ferrocenoyl alamethicin derivados 94 so mostrados para formar canais dependentes de voltagem no bilayers de lipdios planar em potenciais positivos, com propriedades de condutncia semelhantes a alamethicin sem modificaes. Enquanto sob a forma de bicamada lipdica, oxidao de 94b resulta em um canal viveu mais curto enquanto a oxidao de 94a faz com que uma eliminao de dependente do tempo das aberturas de canal, que podem ser restaurados, aumentando o potencial de trans-lipdica. Pr-tratamento de peptdeos de ferrocenoyl com agentes oxidantes altera suas propriedades de canal nico de maneira qualitativamente similar. Embora o exemplo a seguir no estritamente um mtodo de marcao para o C-terminal, apresentada nesta fase porque anexo do marcador semelhante ao exemplo anterior. Toniolo, Maggini e colegas de trabalho prepararam um nonapeptide com um 310-conformao helicoidal, no qual tirosina dois anis de fenol foram esterificados com cido ferrocenecarboxylic. 198-200 Que estes pptidos sintticos helicoidais foram mostrados para ter um hidrofbico vinculao cavidade, que pode servir como um host eficiente para fulerenos [60].

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2.3.2. Ferrocenylmethylamines atravs da reduo das iminas 2.4.2. Outros mtodos para rotular C-terminal 2.4.3. Outros mtodos para rotular N-terminal 2.4.4. Rtulos para o grupo tiol em cistena 2.4.5. Diversos 2.5.2. Peptdeo sntese atravs de reaes de quatro-componente com ferroceno alquilaminas 3. Conjugados do ferroceno com protenas 3.1.2. d-Aminocido Oxidase (DAAO) 3.1.3. Citocromo P450cEstou 3.1.4. Peroxidase de rbano 3.2.1. Imunoglobulinas 3.2.2. Albumina bovina (BSA) 3.2.3. Vrias protenas 4. Conjugados do ferroceno com DNA, RNA e PNA 4.2.1. Anlise de estabilidade frente e verso com oligmeros de Ferrocenylated 5. Conjugados do ferroceno com carboidratos 5.2.2. Dendrimers 6. Ferroceno conjugados com outras biomolculas 6.1.1. Hormnios esterides 6.1.2. Outros hormnios. 7. Futuras perspectivas 8. Confirmao de 9. A lista de abreviaturas 10. Referncias de 2.4.3. Outros mtodos para rotular N-terminal

Um procedimento no convencional para rotular N-terminal de aminocidos foi desenvolvido por Jaouen e colaboradores. 201 O mtodo consiste na sntese de um sal de pyrilium de

lithioferrocene (95) e 2,6-dimetil--pirona (96) e acidificao subseqente (regime 32). Este sal pyrilium 97 reage com aminas, no presente processo -alanina, para produzir piridnio sal 98. Para o melhor do nosso conhecimento, este mtodo no foi adaptado para a introduo de uma marca de ferroceno para maiores biomolculas.

Regime de 32. Reao de um sal de Pyrilium de Ferrocenyl com -alanina Gallagher et al. preparados os derivados do cido benzico p-Fc-C6H4-CO2H e acoplado a ele a alanina atravs da formao de amida. 202 Este mtodo est relacionado com cloreto de cido carboxlico ferroceno, tratados na seo 2.2.1. Em dois livros e uma patente, Eckert e Koller descrevem uma variedade de compostos de ferroceno para derivatizao do N-terminal de aminocidos e as moieties de2 de lisina-NH da protena BSA.146,203,204 o objetivo era investigar qual dos reagentes foi mais adequado para rotular fins e deteco electroqumica subseqente de conjugados por HPLC-ECD (cromatografia lquida de alta performance com deteco electroqumica). Entre os aminocidos que ocorre naturalmente, nica metionina, tirosina e tryptophane mostram uma pequena atividade eletroqumica, mas seu redox potencial muito alto para boa seletividade (> + 0,5 v vs PCH/PCH+). 205-210 Introduo de um grupo de ferroceno diminuir redox potencial para deteco pelo menos algumas centenas milivolts, o valor exato dependendo da funcionalidade que est diretamente conectado ao ringue Cp. A reduo de redox potencial ir resultar em uma aumento substancial selectividade. Reagentes para derivatizao HPLC-ECD que foram investigados por Eckert e Koller incluem, por exemplo, Fc-SO2-Cl (99), Fc-CO-Cl (41), anidrido de cido ferrocenecarboxylic (100), anidrido de cido ferrocenepropionic (101) e ferrocenylmethyl isocianato (102). Desses derivados, 101 verificou-se ser mais adequado de rotular os resultados e a sensibilidade para deteco electroqumica de conjugados correspondentes.203 , No entanto, alguns resultados na literatura so contradictive, porque Koppang et al. encontrados 99 e 41 seja reagentes de derivatizao boa para HPLC-ECD,148 enquanto Eckert e Koller encontraram estes ser inadequado.203 Em um livro relacionado, Shimada et al. comparado a isotiocianato de ferrocenyl e ferrocenylethyl isotiocianato de glicina e etiquetagem de cido 4-aminobutrico. 211 Este exibido mais elevada reatividade e propriedades eletroqumicas mais favorveis e foi adaptado para determinao de cido 4-aminobutrico em amostras biolgicas por HPLC-ECD.

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2.2.1. Amidas do cido Ferrocenecarboxylic 2.2.2. Amidas de ferroceno-1, 1'-cido dicarboxlico 2.3.2. Ferrocenylmethylamines atravs da reduo das iminas 2.4.2. Outros mtodos para rotular C-terminal 2.4.3. Outros mtodos para rotular N-terminal 2.4.4. Rtulos para o grupo tiol em cistena 2.4.5. Diversos 2.5.2. Peptdeo sntese atravs de reaes de quatro-componente com ferroceno alquilaminas 3. Conjugados do ferroceno com protenas 3.1.2. d-Aminocido Oxidase (DAAO) 3.1.3. Citocromo P450cEstou 3.1.4. Peroxidase de rbano 3.2.1. Imunoglobulinas 3.2.2. Albumina bovina (BSA) 3.2.3. Vrias protenas 4. Conjugados do ferroceno com DNA, RNA e PNA 4.2.1. Anlise de estabilidade frente e verso com oligmeros de Ferrocenylated 5. Conjugados do ferroceno com carboidratos 5.2.2. Dendrimers 6. Ferroceno conjugados com outras biomolculas 6.1.1. Hormnios esterides 6.1.2. Outros hormnios. 7. Futuras perspectivas 8. Confirmao de 9. A lista de abreviaturas 10. Referncias de 2.4.4. Rtulos para o grupo tiol em cistena

Os mtodos de marcao tratados at agora nesta reviso so adequados para o cloreto de moieties de cido carboxlico e amino de peptdeos e aminocidos. No entanto, tambm foram relatados rtulos seletivos para o grupo de Sulfidrila de cistena. 212-214 Para a etiquetagem de glutationa 103, ferrocenylethyl maleimide (104) e ferrocenyl iodoacetamide (105) (regime de 33) acabou por ser muito eficaz para produzir 106 e 107, respectivamente.212.214 Um derivado maleimide relacionados tambm foi usado para rotular o hexapeptide Ac-Arg-ArgAla-Ser-Leu-Cys-OH.213 Esta rotulado hexapeptide foi aplicada para a deteco de fosforilao serina pela protena quinase a atravs de mtodos eletroqumicos. O uso de 104 para rotular de Cys resduos de protenas como a citocromo P450 descrito na seo 3.1.3. Ferrocenyl iodoacetamide (105) tambm tem sido usada para rotular de BSA (quiser seo 3.2.2) e um 5'thiolated oligonucleotide (ver tambm o ponto 4).214

Regime de 33. Dois reagentes de ferroceno para rotular glutationa 103 Note-se que os reagentes Fc-HgCl (108) e ferrocenoylchloro acetamida (109), (Fc-CO-NHCH2Cl) foram usados para a introduo de um marcador baseado em ferroceno em grupos Cys-SH em protenas. Exemplos relevantes sero apresentados na seo 3. Na seo 2.5.1, o uso do resto ferrocenylmethyl como um grupo de proteo para a fraco SH cistena durante a sntese de peptdeo apresentado.

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3. Conjugados do ferroceno com protenas 3.1.2. d-Aminocido Oxidase (DAAO) 3.1.3. Citocromo P450cEstou 3.1.4. Peroxidase de rbano 3.2.1. Imunoglobulinas 3.2.2. Albumina bovina (BSA) 3.2.3. Vrias protenas 4. Conjugados do ferroceno com DNA, RNA e PNA 4.2.1. Anlise de estabilidade frente e verso com oligmeros de Ferrocenylated 5. Conjugados do ferroceno com carboidratos 5.2.2. Dendrimers 6. Ferroceno conjugados com outras biomolculas 6.1.1. Hormnios esterides 6.1.2. Outros hormnios. 7. Futuras perspectivas 8. Confirmao de 9. A lista de abreviaturas 10. Referncias de 2.4.5. Diversos

Microcistina uma classe de baixo peso molecular cclica peptdeo hepatoxins. Estes Microcistina produzida por cianobactrias (algas cianofceas) eutropic lagos e reservatrios de gua potvel, particularmente nas regies globais que so quentes e relativamente seco, como China, Austrlia e frica do Sul. 215 Porque essas substncias so perigosas para os seres humanos, gado e animais selvagens, importante desenvolver mtodos para deteco rpida destas toxinas. Lo, Lam e colegas de trabalho muito recentemente desenvolveram um mtodo elegante que possibilita a deteco de uma determinado Microcistina, Microcistina-LR, atravs de uma rpida mensurao eletroqumica. 216 Este mtodo baseia-se em derivatizao especfica de dupla exocclica de , grupo carbonilo -insaturados de Microcistina-LR (110) com ferrocenylhexanethiol (111) (regime 34) e a deteco electroqumica subseqente da fraco de Fc/Fc+ em conjugada ferroceno-tags 112. O limite de deteco foi encontrado para ser 18 ng, que no intervalo de outros mtodos de deteco comuns, tais como a

cromatografia em camada fina e HPLC com deteco de UV. Deve notar-se que nveis muito inferiores de Microcistina pode ser detectado com mtodos mais caros, como a espectroscopia de fluorescncia e HPLC-MS. O mtodo electroqumico, no entanto, rpido, especfico e barato.

Regime de 34. Cloreto de Microcistina 110 com 6-Ferrocenylhexanethiol 111 2.5. Aplicao de compostos de ferroceno na sntese de peptdeo2.5.1. O grupo Ferrocenylmethyl (Fem) como um grupo de proteo Eckert e colegas de trabalho apresentou o grupo ferrocenylmethyl (Fem) como um descanso lipoflico para mascarar a fraco de amida glicina altamente polar durante a sntese de peptdeo em soluo.181,182,217 Fem esta fraco (regime de 35) podem ser introduzidas em glicina atravs da formao de imina com ferrocenecarbaldehyde, seguido de reduo para produzir 75 (ver seco 2.3). Acoplamento de peptdeo este resduo de glicina modificados para outros aminocidos ou fragmentos de peptdeo prontamente continua empregando o mtodo carbodiimida padro usado para sntese de peptdeo em soluo. 218.219 As vantagens de empregar este derivado de glicina mascarado para sntese de peptdeo na soluo so as seguintes: (1) os intermedirios e os produtos mostram maior solubilidade em prticos solventes orgnicos como consequncia do resto lipoflico Fem. Isso resulta em reaes completas e melhores rendimentos. Alm disso, a purificao cromatogrfica sobre slica facilitada, uma vez que os produtos podem ser eludos com acetato de etilo/hexano, em vez de com mais polares MeOH/CHCl3 misturas. (2) Os cromforos ferroceno dos intermedirios e produtos facilita a identificao do produto e isolamento durante a purificao cromatogrfica. (3) O crescente peptdeo estvel contra racemization durante as etapas de engate, quando ele montado de forma gradual a partir de C-terminal. Clivagem do grupo Fem adiada at se obter a seqncia de aminocidos desejado. Remoo do grupo Fem realizada por tratamento com TFA/-thionaphthol CH2Cl2 temperatura de 24 h.181,182,217 sob estas condies, COB e terc-grupos protetores de butilo so clivados simultaneamente. A utilidade da Fem-Gly derivados para sntese de peptdeo em soluo ilustrada pela sntese bem-sucedida de [Leu5]-encefalina e H-(Gly)6-OH.181

Regime de 35. O grupo Ferrocenylmethyl (Fem) 75 O grupo de Fem tambm pode ser adaptado para a sntese de resduos asparagina mascarado de cido asprtico. A estratgia desse mtodo elegante descrita no esquema de 36. Protegido por TCBoc cido asprtico 113 reagiu com ferrocenylmethylamine (114) em DMF na presena de 2-morpholinoethyl Isocianeto (MEI).217 Isso rende 73% da -ismero desejado 115, juntamente com 23% do -ismero 116 como um subproduto, depois de purificao por cromatografia em coluna. O -ismero 115 pode ser usado como um bloco de construo de

Asn na sntese de peptdeo. Assim como a derivada de Fem-Gly, a reao de -ismero com TFA/-thionaphthol no CH2Cl2 liberta a asparagina. A utilidade deste resduo Asn-protegido em combinao com a derivada de Fem-Gly demonstrou-se para a sntese da seqncia de peptdeo 2431 de humanos--endorfina.217

Esquema de 36. Adaptao do grupo Fem para a preparao de resduos asparagina mascarado O resto Fem tambm tem sido usado como um grupo de proteo para a funcionalidade de tiol cistena. 220.221 o composto H-Cys(S-Fem)-OH pode ser convenientemente preparado por reagir cistena com ferrocenylmethanol em acetona aquosa na presena de uma quantidade cataltica de cido. Esta cistena protegido por cadeia lateral pode ser transformada em derivados de COB ou Fmoc protegido de N-terminal. Estas, por sua vez, so blocos de construo til para sntese de peptdeo, como demonstrado pela sntese de glutationa 103. Aps a montagem completa do peptdeo, a fraco de ferrocenylmethyl pode ser clivada por TFA ou por ons de soft heavy metal, como Ag+ ou Hg2+.220,221

Parte superior da pgina 1. Introduo 2. Conjugados do ferroceno com aminocidos e peptdeos 2.1.2. 1, 1'-Ferrocenylbisalanine e seus conjugados 2.1.3. Outros aminocidos baseado em Ferrocenyl 2.2.1. Amidas do cido Ferrocenecarboxylic 2.2.2. Amidas de ferroceno-1, 1'-cido dicarboxlico 2.3.2. Ferrocenylmethylamines atravs da reduo das iminas 2.4.2. Outros mtodos para rotular C-terminal 2.4.3. Outros mtodos para rotular N-terminal 2.4.4. Rtulos para o grupo tiol em cistena 2.4.5. Diversos 2.5.2. Peptdeo sntese atravs de reaes de quatro-componente com ferroceno alquilaminas 3. Conjugados do ferroceno com protenas 3.1.2. d-Aminocido Oxidase (DAAO)

3.1.3. Citocromo P450cEstou 3.1.4. Peroxidase de rbano 3.2.1. Imunoglobulinas 3.2.2. Albumina bovina (BSA) 3.2.3. Vrias protenas 4. Conjugados do ferroceno com DNA, RNA e PNA 4.2.1. Anlise de estabilidade frente e verso com oligmeros de Ferrocenylated 5. Conjugados do ferroceno com carboidratos 5.2.2. Dendrimers 6. Ferroceno conjugados com outras biomolculas 6.1.1. Hormnios esterides 6.1.2. Outros hormnios. 7. Futuras perspectivas 8. Confirmao de 9. A lista de abreviaturas 10. Referncias de 2.5.2. Peptdeo sntese atravs de reaes de quatro-componente com ferroceno alquilaminas

A condensao de componente de quatro (4-CC) da isocianetos (tambm chamados de isonitriles), descoberto por Ugi na dcada de 50,222 fornece uma alternativa para os mtodos clssicos para a sntese de peptdeos na soluo. 223-228 Que mtodos convencionais so caracterizados pela reao de um C-terminal protegido aminocido ou peptdeo com um Nterminal protegido aminocido ou peptdeo na presena de um reagente de engate, tais como isobutylchloroformiate ou um derivado de carbodiimida.218,219,229 As condensaes de quatro-componente proceder de forma diferente e podem ser subdivididas em duas categorias, de acordo com o esquema de 37. 230-235 No primeiro mtodo, dois fragmentos de peptdeo, um deles tendo um grupo cido carboxlico desprotegidos e outro tendo um grupo amino grtis, so reagiu com um Isocianeto e um aldedo. Isso leva formao de um instvel -aduto, que reorganiza espontaneamente para formar uma amida terciria. Geralmente so escolhidos os grupos R1 e2 de r tal que o fragmento R1-NH-CO-CH-R2 facilmente clivado em condies acidolytic. Neste caso, o resultado o acoplamento de dois fragmentos peptdeo ou aminocidos (regime de 37, top).

Regime de 37. Dois tipos de quatro-componente engate (4-CC) reaes O outro mtodo, um peptdeo N-protegido ou aminocidos, uma amina primria (quiral), um aldedo e um fragmento de isocyanidepeptide so combinados para produzir, tambm neste caso atravs do rearranjo espontneo de um instvel-aduto, um composto que tem formado um novo segmento de peptdeo (regime de 37, inferior). Quando amnia ou aminas primrias achiral so usadas, o resduo de aminocido recm-formado achiral ou racmica. 236-240 Se o segmento de peptdeo recm-formado deve corresponder a um aminocido quiral, necessrio usar uma amina primria quiral como um indutor quiral. Quirais ferrocenylalkylamines, composto nomeadamente 117 mostrado no esquema de 38, ter encontrado ampla aplicao nestes condensaes de quatro-componente de Filadlfia. 241248 , Isso ocorre porque (1) eles mostraram ter forte poder induzindo assimtrica e (2) eles foram clivados facilmente em condies acidolytic. Na verdade, a amina primria quiral 117 pode ser regenerado a partir de peptdeo 118 por uma srie de etapas, conforme mostrado no esquema de 39.245,249,250 Sem racemization ocorre porque a barreira rotacional do ction 119 alta e o nuclefilo (NH3) s pode atacar o ction do lado superior do ferroceno devido a razes estricos.

Regime de 38. Particularmente poderosa baseada em ferroceno quiral indutor (117) para Filadlfia 4-CC reaes

Regime de 39. Clivagem de Ferrocenylalkyl Frag-mento e regenerao de Amina quiral 117 Como uma prova de conceito, Filadlfia 4-CC que empregam quiral ferrocenylalkylamines foi usado para sintetizar tetravaline e glutationa 103 do elevado grau de pureza de enantiomeric.243,244,248 Em duas patentes relacionadas, foi relatado que Filadlfia 3-CC com isobutyraldehyde -N- -ferrocenylethylamine como um dos componentes produz N-acil-amidas de aminocidos e peptdeos aps clivagem TFA. 251.252 Estes compostos foram alegou ser til como espessantes de tintas e vernizes e como plastisizers para poly(vinyl chloride). Ratajczyak e Checa usado um ferrocenylamine quiral para sntese de alanina de Filadlfia, conforme mostrado no esquema de 40. A amina quiral 120 foi reagiu com cido pirvico (121), seguido por hidrogenao in situ para produzir 122, e na prxima etapa, o aminocido foi rompido de ferrocenylamine com cido tiogliclico. 253 , O cido ferrocenylthioglycolic assim formado (123) pode ser transformado em S-configurado amina 120 por reao com HgCl2 em aquosa NH3, um procedimento anteriormente publicado pela Ratajczak.249.250 Dependendo quiralidade de Amina, d- ou l-alanina obtida com um excesso enantiomeric variando de 53 para 60%.

Esquema de 40. Sntese de S-alanina, cido pirvico e (S)-Ferrocenylethylamine (120)

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6.1.1. Hormnios esterides 6.1.2. Outros hormnios. 7. Futuras perspectivas 8. Confirmao de 9. A lista de abreviaturas 10. Referncias de 3. Conjugados do ferroceno com protenas

Salmain e Jaouen publicaram recentemente um artigo de reviso sobre o lado-cadeia-seletiva e covalente rotular de protenas com complexos organometlicos de transio.47 Seu artigo enfoca organometlicos rtulos diferentes de ferroceno e sua seletividade de cadeia lateral. 3.1. Redox protenas3.1.1. Glicose Oxidase (Deus) Glicose oxidase (Deus) de Aspergillus niger uma glicoprotena dimrica de kD de 150180, a enzima que constitui cerca de 1624% do peso molecular da parte dos carboidratos. 254.255 Por outro lado, a enzima contm dois cofactores FAD rigidamente acoplados, que so essenciais para a atividade. 256 Dissociao de duas subunidades s ocorre sob fortemente desnaturao condies (SDS) e acompanhada pela perda de cofactores de FAD. 257 A sequncia de aminocidos primrios para a protena de 583 aminocido foi determinada de Aspergillus niger gene clonado,258.259 e a estrutura cristalina da enzima deglycosylated parcialmente foi resolvido a resoluo 2.3. 260.261 a enzima contm 32 NH2 grupos reactivos, que 15 resduos de lisina por monmero e um grupo amino Nterminal.258,259,262 Glicose oxidase oxida -d- glicose para -d- glucolactone atravs de um processo de dois eltrons (consulte eq 1). O cofactor FAD serve como o doador de eltrons e reduzida para FADH2. Em uma prxima etapa, FADH2 regenerada pela oxidao com dioxignio, que leva formao de2 H2O (eq 2).

Monitoramento do nvel de glicose no sangue importante para quem sofre de diabetes. Portanto, necessrio para determinao rpida e confivel de glicose em soluo. O desenvolvimento desses dispositivos de sensor recentemente revisado por Wang.68 Grupos de Hill, Heller e Bartlett independentemente informou sobre a rotulagem de glicose oxidase com derivados do ferroceno em 1986 e 1987.Vrios relatrios adicionais 263-265 pelos grupos de Bartlett,266 Heller,267-270 e outros271-274 seguido na prxima dcada. Os compostos ferrocenecarboxylic cido (40) e o cido ferrocenylacetic (124) trabalhavam principalmente

marcando reagentes, em combinao com o reagente ativar EDC. As reaes de acoplamento foram realizadas sob diferentes condies, resultando em conjugados com diferentes taxas de Fc para Deus; uma viso geral dada na tabela 5. Os resultados de etiquetagem na literatura so um pouco contradictive, porque derivatizao em condies aparentemente idnticas, mas executadas por diferentes grupos, leva a conjugados com relao de Fc-a-Deus diferente. Isto exemplificado comparando mutuamente 37 entradas como entradas de 12 e 13 na tabela 5. Alm disso, o cloreto de Deus com cido ferrocenecaproic Willner, Katz e colegas de trabalho levar a conjugados com ferroceno: proporo de protena de 21 ou 24 (entradas de 16 e 17). Em outros relatrios a proporo de ferroceno/protena no foi dada.69,275 Tabela 5. Viso geral do Deus derivatizao com vrios derivados do ferroceno nmero de derivado de entrada ferroceno reagente de engate condies de desnaturao Relao de FC/Deus Ref

FC-COOH (40)

IBCF

nenhum

263

FC-COOH (40)

EDC

nenhum

8.5

274

FC-COOH (40)

EDC

3M ureia

12 1

265, 267, 268, 270

FC-COOH (40)

EDC

3M ureia

13

264, 266

FC-COOH (40)

EDC

3M ureia

3.6, 8.5, 13, 29 3um

272

FC-COOH (40)

EDC

3M ureia

18.2

274

FC-COOH (40)

EDC

3M ureia

9.2

278, 279

FC-COOH (40)

EDC

400 MPa

7.4

274

FC-COOH (40)

CED/HOSu

nenhum

5 1, 12um

272

10

FC-COOH (40)

CED/HOSu

nenhumb

271

11

Fe (C5H4COOH)2

CED/HOSu

nenhum

7.5

272

12

FC-CH2- COOH EDC (124)

3M ureia

13 1

267, 268, 270

13

FC-CH2- COOH EDC (124)

3M ureia

22

264, 266

14

FC-CH2- COOH CED/HOSu (124)

nenhum

10

272

15

FC-(CH2)3COOH

EDC

3M ureia

29

264

16

FC-CH2CED/HOSu caprico cidoc

nenhum

21

273, 284

17

FC-CH2CED/HOSu caprico cidoc

nenhum

24

285, 286, 287

18

FC-CHO (67)

NaBH4d

nenhum

4.2

274

19

FC-CHO (67)

NaBH4d

3M ureia

8.1

274

20

FC-CHO (67)

NaBH4d

nenhum

27.5

274

um Diferentes concentraes dos cidos carboxlicos ferroceno resultaram em conjugados com diferentes taxas de Fc/Deus. b Realizada em micelas inversas da protena razo H2O/MeCN de 1:75. c Fc-CH2- NH-(CH2)5- COOH. d NaBH4 no um reagente de engate, mas um reagente redutor para transformar a imina instveis em uma amina secundria. O objetivo por trs o derivatizao foi possibilitar a comunicao eletroqumica direta entre o eletrodo e a glucose oxidase. O centro de redox da enzima, juntamente com o cofactor FAD, est enterrado profundamente no ncleo da enzima, com a parte circundante da protena que serve como uma espessa eletricamente isolante shell. Por ligao ferrocenyl resduos covalentemente enzima, transferncia de eltrons entre o cofactor FAD e o eletrodo pode ocorrer atravs da moieties de ferroceno. Na verdade, ons de ferrocenium (substitudos) FcR+, que formam por oxidao do grupo ferroceno, podem aceitar electres de FADH2 e servir como um substituto para o dioxignio (eq. 3). Ao contrrio de dioxignio, ferroceno est em apenas uma transferncia de um eltron; regenerao de FAD de FADH2 , portanto, um processo gradual. Para a derivatizao, verificou-se que a desnaturao de protenas na presena de 3m ureia resultou em uma perda significativa da atividade da enzima reconstituda, mesmo quando nenhum derivado do cido carboxlico ferrocenyl foi adicionado.271.272 Condies mais adequadas para obter conjugados com maior actividade enzimtica incluem ativao dos grupos cido carboxlico do reagente rtulo com EDC e HOSu, sem adio de uria. Etiquetagem de Deus com cido ferrocenylacetic (124) acabou por ser mais favorvel no que se refere derivatizao com cido ferrocenecarboxylic (40), porque os resultantes conjugados exibiram maior actividade enzimtica. No entanto, para a construo de sensores de glicose reagente-menos, estes conjugados com actividade enzimtica bom fizeram diferente Propriedades satisfatrias. Em primeiro lugar, repetidos ciclos eletroqumicos foram mostrados para provocar uma diminuio gradual no pico atual, que pode ser interpretado pela lenta decomposio dos centros redox covalentemente ligados. O segundo fato insatisfatrio foi revelado pelo trabalho por Mikkelsen, ingls e colegas de trabalho, o que determinou as taxas de transferncia de eltrons intramolecular para alguns dos conjugados listados na tabela 5.272 Apesar da diferena do nmero de moieties de ferroceno conectados, os valores de eltron transferir entre os conjugados e a extenso de eletrodo uma estreita faixa entre 0.16 e 0,90 s-1. Isto sugere que a localizao da ferrocenyl grupos em vez do nmero de moieties de ferrocenyl ligado determinante de taxa,272 , de acordo com a teoria de Marcus de transferncia de eltrons. 276.277 Uma anlise da nesse momento determinado recentemente estrutura cristalina de Deus revelou que as separaes entre os lysines e o cofactor FAD eram todos > 23 .261 estas duas desvantagens deixam claras que uma abordagem alternativa necessria no sentido eletroquimicamente com fio derivados de Deus com excelente mediao entre o cofactor FAD e o eletrodo.

Heller e colaboradores tentaram melhorar a comunicao eletrnica entre o cofactor FAD e o elctrodo usando derivados de ferrocenyl com uma cadeia longa alquil marcando reagentes, e alm disso, estas foram anexadas parte de carboidratos em vez da parte de protena da enzima.269 Na primeira etapa, Deus foi oxidado com NaIO4 para produzir uma mdia de 6.4 grupos de aldedo na superfcie externa da enzima. Posteriormente, aminoferrocenyl resduos 125 com diferentes comprimentos de espaador foram amarrados aos grupos aldedo atravs da formao de imina e subsequente diminuio de4 NaBH (regime de 41). Analisando as coulometric, o nmero de ferroceno introduzido moieties foi estimado em cerca de 1 para cada derivada.

Regime de 41. Modificao da Glucose Oxidase na parte perifrica de carboidratos da enzima O comprimento do espaador acabou por desempenhar um papel crucial para o mecanismo de comunicao eltrica entre a enzima e o eletrodo. Quando conectado a cadeias de mais de mais de 10 ttulos, o ferrocenyl parte activa pode penetrar a enzima a uma profundidade suficiente para permitir a transferncia de eltrons rpidos intramolecular entre os centros de flavina e o eletrodo. Quando de cadeias curtas de menos de 5 ttulos, por outro lado, o processo de transferncia de eltrons era principalmente intermolecular, com outra molcula de Deus pela atuando como um mediador difusor convencional (consulte a Figura 9).269 Os resultados obtidos com cadeias curtas so consistentes com os obtidos por derivatizao com vrios derivados de carboxlico (cadeia) apresentados acima.

Figura 9 dois mecanismos diferentes de eltron transferir entre ferroceno e FADH2 em Deus ferroceno-modificado (intramolecular e intermoleculares). Reproduzido com permisso do ref 269. Copyright 1991 American Chemical Society. Alguns anos mais tarde, Karube et al. tambm introduziu grupos aldedo sobre os resduos de acar de Deus e, posteriormente, ligados ferrocenyl moieties em espaadores de maleica de cido adpico enzima. 278-280 Tambm neste caso, comunicao eltrica direta entre a enzima e o elctrodo teve lugar. Alm disso, uma mistura da derivada de Deus com solvente orgnico foi usada como o componente de tinta para a tcnica de serigrafia. Katz, Willner e colaboradores divised uma estratgia diferente para diminuir a distncia entre o cofactor FAD e a fraco de ferroceno activa redox. Em vez de anexar ferroceno moieties aleatoriamente na periferia da enzima, eles reconstitudo Deus de apo-Deus na presena de um semi-sintticos FAD cofactor 126 para que uma cauda com um grupo de ferrocenyl amarrada. 281.282 o cofactor pela retratado em regime de 42. Realizando anlises eletroqumicas e cinticas, verificou-se a taxa de transferncia de eltrons entre a enzima

modificada e o elctrodo 40 s-1.282 Esse valor cerca de 45 vezes mais elevado do que o observado mais alto constante para Deus aleatoriamente substitudo na periferia com ferroceno moieties (k = 0,9 s-1). Em concluso, a enzima reconstituda com o cofactor FAD ferrocenyl-modificado apresenta comunicao eltrica superior ao conjugados aleatoriamente derivatized.

Regime de 42. Estrutura molecular do Cofactor FAD modificado Ferrocenyl 126 Chen et al. Deus sobre o nvel do gene alterado, a fim de anexar uma cauda de10 Lys atravs um vinculador de peptdeo (Ser-Gly)5 a C-terminal e expressa a protena recombinante em levedura Pichia pastroris. 283 Porque a traduo do produto de N-terminal para o C-terminal, estava previsto que a cauda de10 Lys no iria ser enterrada no ncleo da enzima. Alm disso, a estrutura de cristal de raio-X do nativo de Deus mostrou C-terminal para ser localizado na superfcie da protena tipo selvagem (wt), Considerando que o N-terminal est enterrado profundamente no ncleo da protena.261 Alm disso, os resduos de Lys adicionados so hidroflicos e devem preferir uma posio na superfcie de uma posio no ncleo hidrofbico da protena. Na verdade, esses moieties de2 H lisina-Nforam encontrados para ser acessvel para rotular. Aps derivatizao com 40 e EDC na ureia M 2, o Lys pela10-derivado de Deus exibido atividade 90% relativo ao wt Deus. Alm disso, o Lys10-Deus-Fc conjugado foi encontrado para ter uma melhor disponibilidade elctrica e uma vida mais elevada do que o Deus ferrocenyl conjugados controla a falta da cauda de10 Lys.283 O grupo de Katz e Willner adaptado modificado Deus para sondar a associaes de antigenantibody nas interfaces do monolayer e o eletrodo e desenvolvidos amperomtricos immunosensor eletrodos.69,273,275,284-287 o campo de bioelectrnica foi comentado por este grupo.70,288 Aizawa et al. preparados derivados de Deus que foram conjugados com ferrocenyl moieties e digoxina. 289 Os autores usaram dois procedimentos diferentes para rotular de ferrocenyl: (1) o protocolo Fc-COOH/CED e (2) rotulao atravs da formao de imina com Fc-CHO e subsequente diminuio de4 NaBH. Conjugados com vrias relaes de Fc/digoxina/Deus estavam preparados, e estas foram adaptadas em um imunoensaio electroenzymatic homognea.

Parte superior da pgina 1. Introduo 2. Conjugados do ferroceno com aminocidos e peptdeos 2.1.2. 1, 1'-Ferrocenylbisalanine e seus conjugados 2.1.3. Outros aminocidos baseado em Ferrocenyl

2.2.1. Amidas do cido Ferrocenecarboxylic 2.2.2. Amidas de ferroceno-1, 1'-cido dicarboxlico 2.3.2. Ferrocenylmethylamines atravs da reduo das iminas 2.4.2. Outros mtodos para rotular C-terminal 2.4.3. Outros mtodos para rotular N-terminal 2.4.4. Rtulos para o grupo tiol em cistena 2.4.5. Diversos 2.5.2. Peptdeo sntese atravs de reaes de quatro-componente com ferroceno alquilaminas 3. Conjugados do ferroceno com protenas 3.1.2. d-Aminocido Oxidase (DAAO) 3.1.3. Citocromo P450cEstou 3.1.4. Peroxidase de rbano 3.2.1. Imunoglobulinas 3.2.2. Albumina bovina (BSA) 3.2.3. Vrias protenas 4. Conjugados do ferroceno com DNA, RNA e PNA 4.2.1. Anlise de estabilidade frente e verso com oligmeros de Ferrocenylated 5. Conjugados do ferroceno com carboidratos 5.2.2. Dendrimers 6. Ferroceno conjugados com outras biomolculas 6.1.1. Hormnios esterides 6.1.2. Outros hormnios. 7. Futuras perspectivas 8. Confirmao de 9. A lista de abreviaturas 10. Referncias de 3.1.2. d-aminocido Oxidase (DAAO)

d-aminocido oxidase (DAAO) foi um dos flavoprotenas primeiras a ser descoberto na dcada de 1930. 290.291 a enzima encontrada em numerosos organismos, tais como fermento, insetos, aves e mamferos. 292 Catalisa a desaminao oxidativa do d-aminocidos de acordo com as seguintes equaes (NQA 46) com a ajuda de um cofator FAD.

Na primeira etapa, o aminocido reduzido a uma imina (eq 4), que posteriormente hidrolisa para produzir um ster de keto (eq. 5). Semelhante para a regenerao da glucose oxidase, FADH2 regenerada por dioxignio para retornar o DAAO no estado FAD (eq 6). In vitro, DAAO reativo em direo a uma ampla gama de neutro e base d-aminocidos, mas a mais alta reatividade exibido em direo de aminocidos que possuem uma cadeia lateral hidrofbicas. Os aminocidos d- aspartato e d- glutmico cido no so substratos para DAAO, mas estes so, em vez disso, oxidatively desaminadas por d-oxidase aspartato. Uma excelente reviso sobre todos os aspectos da DAAO apareceu recentemente na literatura.293 d-aminocido oxidase de rim de porco (pkDAAO) foi o primeiro DAAO podem ser obtidas na forma pura em 1973.Foram relatados 294 sobre 1520 anos mais tarde, o isolamento e purificao de DAAO de leveduras gracilis Rhodoturula (rgDAAO) e Trigonopsis variabilis (tvDAAO). 295.296 a pkDAAO de enzima uma protena de aminocido 347 monomrico, que contm um cofactor FAD, com uma massa molecular de 39,6 kDa. O rgDAAO uma enzima homodimeric de aproximadamente 80 kDa, com cada monmero consistindo de 368 aminocidos. Alm disso, o rgDAAO contm um cofactor de FAD nonconvalently ligado. 297 Estruturas de cristal de protena de raios-X de pkDAAO298-302 e rgDAAO303.304 foram relatadas. Heller e Degani poderiam ligar 3 1 ferrocenoyl moieties na pkDAAO por reao com 40 na presena de engate reagente EDC e 3M ureia.267.268 o conjugado resultante mostrou cerca de 25% atividade relativo enzima nativa. Katz, Willner e colaboradores reconstitudo apopkDAAO na presena da modificao ferrocenyl cofactor 126. A enzima reconstituda foi relatada para exibir apenas cerca de 20% da actividade relativo para o pkDAAO nativo.281 Para ambos conjugados, foi demonstrado que comunicao direta de eletroqumica ocorrido entre o eletrodo e pela enzima. A adio de d-alanina para qualquer um conjugado resultou em uma resposta eletroqumica, com a magnitude da corrente dependendo da concentrao de dalanina. Na verdade, observou-se uma relao linear entre o d-alanina concentrao e o atual, tornando a utilizao das enzimas modificadas na amperomtricos d-aminocido sensores possveis.267,268,281

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2. Conjugados do ferroceno com aminocidos e peptdeos 2.1.2. 1, 1'-Ferrocenylbisalanine e seus conjugados 2.1.3. Outros aminocidos baseado em Ferrocenyl 2.2.1. Amidas do cido Ferrocenecarboxylic 2.2.2. Amidas de ferroceno-1, 1'-cido dicarboxlico 2.3.2. Ferrocenylmethylamines atravs da reduo das iminas 2.4.2. Outros mtodos para rotular C-terminal 2.4.3. Outros mtodos para rotular N-terminal 2.4.4. Rtulos para o grupo tiol em cistena 2.4.5. Diversos 2.5.2. Peptdeo sntese atravs de reaes de quatro-componente com ferroceno alquilaminas 3. Conjugados do ferroceno com protenas 3.1.2. d-Aminocido Oxidase (DAAO) 3.1.3. Citocromo P450cEstou 3.1.4. Peroxidase de rbano 3.2.1. Imunoglobulinas 3.2.2. Albumina bovina (BSA) 3.2.3. Vrias protenas 4. Conjugados do ferroceno com DNA, RNA e PNA 4.2.1. Anlise de estabilidade frente e verso com oligmeros de Ferrocenylated 5. Conjugados do ferroceno com carboidratos 5.2.2. Dendrimers 6. Ferroceno conjugados com outras biomolculas 6.1.1. Hormnios esterides 6.1.2. Outros hormnios. 7. Futuras perspectivas 8. Confirmao de

9. A lista de abreviaturas 10. Referncias de 3.1.3. Citocromo P450cEstou

P450 citocromo n. ocam CyP450 (cam) da bactria de solo Pseudomonas putida um monooxigenase com uma massa molecular de 45 kD, que catalisa a hidroxilaes de stereospecific de cnfora 127 para 5 -exo- hydroxycamphor (128) (regime 43). 305 Para essa transformao, ele conta com dois parceiros de redox transferir eltrons do NADH para CyP450cam, nomeadamente a putidaredoxina, um redoxin com uma Fe2S2Cys4 estrutural motif e putidaredoxina redutase. Como todos os membros da famlia CyP450, CyP450cam contm uma subunidade de heme, com o tomo de ferro, sendo coordenado por um ligante de hemo tetradentate planar e por um tomo de cysteinato-S. Uma variedade de estruturas de cristal de CyP450cam foram relatados por Poulos e colaboradores, incluindo a enzima livre de substrato306.307 e a enzima complexada com sua308 substrato natural cnfora e com vrios outros anlogos do substrato. 309.310 Alm disso, estruturas de cristal de CyP450cam inibida por monxido de carbono311 como por vrios outros inibidores foram relatadas. 312.313 As propriedades eletroqumicas e espectroscpicas da CyP450cam tm sido estudadas extensivamente, e eles foram correlacionados com os resultados da protena cristalografia de raios X.314

Regime de 43. Stereospecific hidroxilaes de cnfora 127 por Cytotyrone P450cEstou Em uma srie de artigos, Hill, Di Gleria, Wong e colaboradores preparados derivados do citocromo P450cam modificado com resduos de maleimide de ferrocenyl.212,315,316 a fraco de maleimide tem uma alta afinidade e seletividade para o grupo de Sulfidrila de cistena (ver seco 2.4.4). O destaque destes papis , sem dvida, a protena de estrutura de single-crystal x-ray em resoluo 2.2 do mutante decam(C334A) de CyP450 para que os dois grupos de maleimide (104) de ferrocenylethyl foram covalentemente ligados.315 Cys334 exposta, que est na superfcie da protena wt, foi alterado para uma alanina atravs do mutagenesis local-dirigido para evitar dimerizao da enzima atravs da formao de dissulfeto. A estrutura geral da enzima modificada representada na Figura 10.

Figura 10 estrutura de single-crystal protena x-ray em resoluo 2.2 do mutante decam(C334A) de CyP450 com dois grupos de ferroceno covalentemente ligados. Um grupo de ferroceno est localizado perto do grupo hemina no centro da enzima, enquanto o outro ferroceno est do lado de fora da enzima (canto inferior esquerdo). Grficos criados a partir de

entrada PDB 1GJM usando WebLab Viewer Lite Vers. 3.2 computadores Macintosh G4 Powerbook. Esta anlise de estrutura de cristal de raios-X revelou que um dos grupos de maleimide de ferrocenylethyl amarrado ao Cys136 na periferia da enzima, que a outra parte activa do maleimide covalentemente est relacionada com Cys85, ocupando uma posio no bolso de ligao da enzima. A fraco de ferrocenyl ligado a Cys85 acabou por ser um inibidor irreversvel da enzima. Por espectroscopia de UV, foi mostrado que cnfora deslocada do bolso de ligao durante a reao de derivatizao da cnfora enzima complexa com 104. Resultados de espectroscopia UV tambm indicaram a ligao simultnea de um sexto ligante, provavelmente uma molcula de gua, o tomo de ferro heme durante o procedimento de derivatizao. Isso consistente com os resultados de cristalografia de raios X, que mostram a ligao de um ligante aqua ao tomo de ferro heme. A vinculao de cnfora inibida de ocupao do stio activo do grupo de ferrocenyl de Cys85-ligado relativamente volumosos. O tomo de ferro heme, no entanto, ainda acessvel para pequenas molculas, como monxido de carbono. Isso poderia por verificada pelo surgimento de uma banda a 448 nm do espectro UV sobre reduo da exposio ao CO e enzimas. Esta banda Soret caracterstica para a forma de carbonmonoxy de perhidrol da enzima.314 Outro mutante da CyP450cam foi preparado por meio do mutagenesis local-dirigido.316 Todos as superfcie cistenas (Cys58, Cys85, Cys136 e Cys334) foram alterados para alanines, e alm disso, a lisina 344 na periferia da enzima foi transformada em uma cistena. Posteriormente, este mutante de K344C foi modificado com N- ferrocenyl maleimide (Observe que se trata de um derivado de maleimide diferente daquele usado para a modificao de protena mencionada acima). Em contraste com a enzima duplamente rotulada apresentada acima, foi encontrado esta conjugado para expor cerca de 80% atividade comparado a wt CyP450cam, conforme determinado pelas taxas de volume de negcios de NADH.316 Nesta fase deve notar-se que foram feitas tentativas para modificar leveduras para panificao CyP450 com chloromercuriferrocene (108).Dmero um protena, no qual um tomo de Hg pontes grupos thiolate de dois resduos de Cys102, formada e 317-319 em vez de fixao do grupo ferrocenylmercury para Cys102, um monmero de protena modificados em Cys102 com uma HgCl+ .

Parte superior da pgina 1. Introduo 2. Conjugados do ferroceno com aminocidos e peptdeos 2.1.2. 1, 1'-Ferrocenylbisalanine e seus conjugados 2.1.3. Outros aminocidos baseado em Ferrocenyl 2.2.1. Amidas do cido Ferrocenecarboxylic 2.2.2. Amidas de ferroceno-1, 1'-cido dicarboxlico

2.3.2. Ferrocenylmethylamines atravs da reduo das iminas 2.4.2. Outros mtodos para rotular C-terminal 2.4.3. Outros mtodos para rotular N-terminal 2.4.4. Rtulos para o grupo tiol em cistena 2.4.5. Diversos 2.5.2. Peptdeo sntese atravs de reaes de quatro-componente com ferroceno alquilaminas 3. Conjugados do ferroceno com protenas 3.1.2. d-Aminocido Oxidase (DAAO) 3.1.3. Citocromo P450cEstou 3.1.4. Peroxidase de rbano 3.2.1. Imunoglobulinas 3.2.2. Albumina bovina (BSA) 3.2.3. Vrias protenas 4. Conjugados do ferroceno com DNA, RNA e PNA 4.2.1. Anlise de estabilidade frente e verso com oligmeros de Ferrocenylated 5. Conjugados do ferroceno com carboidratos 5.2.2. Dendrimers 6. Ferroceno conjugados com outras biomolculas 6.1.1. Hormnios esterides 6.1.2. Outros hormnios. 7. Futuras perspectivas 8. Confirmao de 9. A lista de abreviaturas 10. Referncias de 3.1.4. Peroxidase de rbano

Peroxidase de rbano (HRP) uma glicoprotena monomrico hemo-uma pasta, consistindo de 308 resduos de aminocidos. 320 A atividade da enzima conta com a presena de ons2++ Ca,

que regulam a estrutura da protena. 321.322 a estrutura cristalina de the x-ray de recombinante que HRP determinado em resoluo 2,15 recentemente foi relatada. 323 A enzima reage com alkylperoxides do seguinte modo, de acordo com um mecanismo de pinguepongue modificados (NQA 79).

Para HRP, apenas um intervalo estreito de molculas pode atuar como um oxidante, Considerando que uma grande variedade de enzimas ou molculas pode agir como o redutor (Dvermelho). Equaes de 8 e 9 so um eltron redues para HRP-O, e vrios derivados do ferroceno tm demonstrados ser muito adequado de doador de eltron substratos dvermelho.324-328 Tsai e Cass preparados derivados HRP com um grupo de ferrocenyl covalentemente ligado aos resduos de manose oxidado da cadeia principal hidratos de carbono. 329 A estratgia para a modificao descrita no esquema de 44. Em primeiro lugar, grupos aldedo so gerados pela oxidao de4 NaIO de moieties de terminal manose. Em seguida, iminas so formadas entre o aldedo e a ferrocenylamine (129), seguido de reduo com NaBH3CN para produzir o correspondente amina secundria HRP conjugada 130. Os parmetros cinticos para esta conjugado de HRPferrocene so, no caso de H2O2 como o substrato, na mesma faixa de HRP sem modificaes. Com hidroperxido linolico como substrato, no entanto, foram observadas diferenas entre ferroceno-modificado HRP e wt HRP. A enzima pela mostra um valor dem kaparente significativamente inferior e uma significativamente maior aparente vmax em comparao com a enzima nativa. Uma explicao para a diferena pode ser que a superfcie da enzima modificada mais lypophilic do que a enzima no modificada. Um eletrodo de enzima foi construdo por absorver o ferroceno conjugado HRP em um eletrodo de carbono impressa. Este elctrodo de enzima era adequado para determinao de H2O2 no intervalo 150 mol/L e quantificao de linoleico hidroperxido no intervalo 5100 mol/l.

Regime de 44. Modificao da cadeia lateral manose Ryabov e colegas de trabalho usaram um mtodo diferente para introduzir uma fraco de ferroceno eletroquimicamente ativo ao HRP. 330 Esta estratgia consiste de derivatizao de cloreto de hemina com ferrocenylmethylamine (114), usando CED/HOSu como a mistura de reagente de acoplamento (ver esquema de 45). Alm de duas diferentes Metilcicloexano isomrica derivados 131 e 132, tambm foi obtido o conjugado disubstituido 133 . Os compostos mono e disubstituido poderiam ser separados por cromatografia em coluna, mas no foi possvel separao entre duas metilcicloexano diferentes ismeros posicionais 131 e 132 . Reconstituio da apo-HRP na presena de qualquer mistura de 131 e 132 ou 133 sozinho rendeu uma enzima cataliticamente ativa apenas com a mistura do metilcicloexano (131/132) derivados de cloreto de hemina. Medies cinticas ABTS (2, 2'-azinobis (3ethylbenzothiazoline-6-sulfnico)) como um substrato revelou que 131/132 reconstitudo HRP exibido a mesma constante de Michaelis como HRP nativo. Isso indica que a ligao do substrato no influenciada pela presena de mono-ferrocenyl-modificao heme. O valor vm HRP reconstitudo com 131/132 cerca de um tero do valor vm para HRP nativo, o que

significa que a atividade cataltica da enzima modificada cerca de 33% do que o HRP nativo. Quando derivados do ferroceno solvel em gua servem como doadores de eltrons, duas diferenas entre HRP contendo 131/132 e HRP nativo so observados: (1) uma mudana na lei de taxa e (2) um aparente aumento na atividade cataltica para HRP reconstitudo com 131/132. Resultados da modelagem molecular, iniciando a partir o raio-X estrutura cristalina da recombinao HRP,323 mostrou que o resto do ferrocenyl provavelmente est situado na superfcie do stio activo. Acredita-se que um bolso de ligao mais hidrofbico criado sobre a enzima modificada, contribuiu com o resto do ferrocenyl e os anis de fenil de dois resduos de fenilalanina. Isto pode explicar a cintica alterada da enzima modificada em relao ao HRP nativo de compostos ferroceno servindo como doadores de eltrons.

Regime de 45. Sntese de cloreto de FerrocenylHemin conjuga 131133 3.2. Protenas nonredox Os primeiros relatrios de polipeptdeos sintticos e protenas ser rotuladas com o ferroceno parte activa datam dos anos de 1966 e 1967. 331-334 Como rotular reagentes, isotiocianato de ferrocenylmethyl, cido ferrocenylpropionic,331-333 com carbodiimida como o cloreto de reagente,332 e ferrocenesulfonyl de ativao (Fc-SO2-Cl)334 foram usados. Em 1967, um novo tipo de reagente, ou seja, p- ferrocenylphenyl isotiocianato e seu isotiocianato de 3-carboxi-4-ferrocenylphenyl derivados do cido carboxlico (CFPI, 134, regime de 46), foi introduzido para conjugao com grupos amino primrios. 335-337 Estes compostos foram aplicados para fins histoqumicas. ou seja, a fraco covalentemente ligados ferroceno foi visualizada e localizada atravs de microscopia de fluorescncia ou, de forma mais eficiente, atravs de mtodos microscpica do eltron. A utilidade desta tcnica demonstrouse pela primeira vez atravs da marcao de vrios tecidos, tais como a placenta,338-341 e vrias protenas.Posteriormente 342-340 , em especial a derivada de carboxi mais polar CFPI encontrado aplicativo para rotular de imunoglobulinas, que sero tratadas na prxima seo.

Regime de 46. Etiquetagem de imunoglobulina g com CFPI (134)

Regime de 47. Estrutura do ligadores Poly(ethylene glycol) anexado para IgG imunoglobulinas

Regime de 48. Sntese de um anticorpo Anti-transferrin de polmero de ferroceno

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1. Introduo 2. Conjugados do ferroceno com aminocidos e peptdeos 2.1.2. 1, 1'-Ferrocenylbisalanine e seus conjugados 2.1.3. Outros aminocidos baseado em Ferrocenyl 2.2.1. Amidas do cido Ferrocenecarboxylic 2.2.2. Amidas de ferroceno-1, 1'-cido dicarboxlico 2.3.2. Ferrocenylmethylamines atravs da reduo das iminas 2.4.2. Outros mtodos para rotular C-terminal 2.4.3. Outros mtodos para rotular N-terminal 2.4.4. Rtulos para o grupo tiol em cistena 2.4.5. Diversos 2.5.2. Peptdeo sntese atravs de reaes de quatro-componente com ferroceno alquilaminas 3. Conjugados do ferroceno com protenas 3.1.2. d-Aminocido Oxidase (DAAO) 3.1.3. Citocromo P450cEstou 3.1.4. Peroxidase de rbano 3.2.1. Imunoglobulinas 3.2.2. Albumina bovina (BSA) 3.2.3. Vrias protenas 4. Conjugados do ferroceno com DNA, RNA e PNA 4.2.1. Anlise de estabilidade frente e verso com oligmeros de Ferrocenylated 5. Conjugados do ferroceno com carboidratos 5.2.2. Dendrimers 6. Ferroceno conjugados com outras biomolculas 6.1.1. Hormnios esterides 6.1.2. Outros hormnios. 7. Futuras perspectivas

8. Confirmao de 9. A lista de abreviaturas 10. Referncias de 3.2.1. Imunoglobulinas

A marcao de anticorpos, em particulares IgG imunoglobulinas, com CFPI foi relatada em um srie de artigos por Franz, Wildfhr, Wagner e colegas de trabalho na dcada de 1960 e incio dos anos 1970 (regime de 46). 342-348 CFPI the rotulado imunoglobulinas foram usadas para investigaes imuno-histoqumica ou, em outras palavras, a visualizao microscpica de eltrons de sites hapteno (ou antignios). Em uma srie de artigos, o conceito deste mtodo de imuno-histoqumica, em combinao com uma descrio detalhada sobre como poderia ser conseguido a etiquetagem de imunoglobulinas, foi apresentado.347,348,344 Nos documentos subseqentes, identificado como CFPI imunoglobulinas foram adaptadas para a localizao e visualizao de antignios (1) a parede celular, neste caso a protena M, na bactria Streptococcus pyogenes,343 (2) superfcie antgenos no parasita Toxoplasma gondii,346 e antgenos de superfcie (3) GRAFFI vrus-induzida em clulas de leucemia GRAFFI rat. Nestes trs casos, as imunoglobulinas CFPI poderiam ser visualizadas satisfatoriamente quando eles estavam ligados ao antgeno.345 Alm de derivatizao com CFPI, exemplos de imunoglobulina etiquetando com os reagentes chloromercuriferrocene (108), cido ferrocenecarboxylic319.349 (40),350-356 ferrocenylacetic cido (124),357 e ferrocenecarbaldehyde (67)358 tambm foram relatados. Yasuda 67 grupos amino de imunoglobulina atravs da formao de imina e subsequente diminuio de4 NaBH para produzir anticorpos rotulados com o grupo Fem.358 No entanto, estas rotulado imunoglobulinas no foram bem caracterizadas e suas propriedades no foram determinadas. Em outro livro, Yasuda e Yamamoto, rtulos de ferroceno foram introduzidos de forma indirecta sobre a imunoglobulina, usando ovalbumina como uma molcula de portadores de etiqueta ferroceno (ver tambm o ponto 3.2.3).349 Em primeiro lugar, ovalbumina de ovo de galinha foi reagiu com N- acetylhomocystein tiolactona, que resultou na formao de amida entre grupos de2 NH protena e C-terminal de N- acetylcystein. Desta forma, cerca de nove novos grupos de Sulfidrila foram introduzidos em ovalbumina de protena. Posteriormente, ferroceno moieties foram covalentemente ligados atravs da formao de vnculo de Fc-Hg-S de chloromercuriferrocene (Fc-HgCl, 108) com grupos sulfidrila. Em seguida, grupos aldedo foram introduzidos na parte de carboidratos do derivado ovalbumina via reao com NaIO4. Na ltima etapa, o conjugado de ovalbuminHgFc foi anexado covalentemente imunoglobulinas atravs da formao de imina, seguido de reduo com NaBH4. Apenas na ltima dcada, cido ferrocenecarboxylic (40) e cido ferrocenylacetic (124) tem sido usados para rotular imunoglobulinas diferentes aps a ativao do cido carboxlico com EDC ou reagentes relacionados.350-357 Estes conjugados foram usados para imunoensaios com deteco electroqumica aps Electroforese capilar ou imobilizadas em superfcies de ouro. Por exemplo, as concentraes de histamina entre 200 e 2000 ng/mL foi possvel

determinar com fiabilidade dentro de 2 minutos a partir de amostras de sangue total usando um dispositivo de coluna de matriz multicanal no chip de entradas.354 Em uma srie de artigos interessantes, Moiroux e colegas de trabalho rotulado IgG imunoglobulinas com molculas de PEG-Fc para produzir conjugada 135 (regime 47). 359-361 Contendo ferroceno Cadeia de 135 com peso mdio M = 3400 muito flexvel. Eles montagem camadas de molculas de IgG modificadas e anti-IgG antibodies em eletrodos e determinado vrias propriedades fsicas, tais como a difuso das sondas redox e a dinmica da cadeia. Amplificao de sinal foi atingida em um immunosensors de amperomtricos de Yasuzawa e colaboradores. O anticorpo anti-transferrin 15C2H3 foi rotulado com uma conduo ferroceno contendo polmero 136 (HO-poli-Fc, regime de 48). Este polmero acoplado a grupos amino do anticorpo imobilizado, e realizada uma anlise quantitativa da transferrina medindo-se a electrooxidation atual de ferroceno, que proporcional concentrao de transferrina.

Parte superior da pgina 1. Introduo 2. Conjugados do ferroceno com aminocidos e peptdeos 2.1.2. 1, 1'-Ferrocenylbisalanine e seus conjugados 2.1.3. Outros aminocidos baseado em Ferrocenyl 2.2.1. Amidas do cido Ferrocenecarboxylic 2.2.2. Amidas de ferroceno-1, 1'-cido dicarboxlico 2.3.2. Ferrocenylmethylamines atravs da reduo das iminas 2.4.2. Outros mtodos para rotular C-terminal 2.4.3. Outros mtodos para rotular N-terminal 2.4.4. Rtulos para o grupo tiol em cistena 2.4.5. Diversos 2.5.2. Peptdeo sntese atravs de reaes de quatro-componente com ferroceno alquilaminas 3. Conjugados do ferroceno com protenas 3.1.2. d-Aminocido Oxidase (DAAO) 3.1.3. Citocromo P450cEstou 3.1.4. Peroxidase de rbano 3.2.1. Imunoglobulinas

3.2.2. Albumina bovina (BSA) 3.2.3. Vrias protenas 4. Conjugados do ferroceno com DNA, RNA e PNA 4.2.1. Anlise de estabilidade frente e verso com oligmeros de Ferrocenylated 5. Conjugados do ferroceno com carboidratos 5.2.2. Dendrimers 6. Ferroceno conjugados com outras biomolculas 6.1.1. Hormnios esterides 6.1.2. Outros hormnios. 7. Futuras perspectivas 8. Confirmao de 9. A lista de abreviaturas 10. Referncias de 3.2.2. Albumina bovina (BSA)

Albumina de soro bovino (BSA) uma protena com um peso molecular de 66,7 kD, consistindo de 607 aminocidos, dos quais 57 so resduos de lisina. 362 O primeiro relatrio de ele ser rotulado com um derivado de ferroceno apareceu na literatura em 1969. 363 Schlgl et al. BSA reagiu com ster de cido etlico de imidocarboxylic de ferroceno (137) (regime de 49), resultando em um conjugado que, de acordo com os autores, continha aproximadamente 60 grupos de ferrocenyl. Esse valor deve ser tomado com cuidado apropriado, porque foi determinado por gravimetria e no por tcnicas mais precisas, tais como espectrometria de absoro atmica (AAS) ou espectrofotometria. 364 Na verdade, BSA contm apenas 57 grupos amino de lisina.362

Regime de 49. Etiquetagem de BSA com ster etlico de cido Ferrocenylimidocarboxylic (137) Em dois jornais, Mizutani e Asai introduziram Fem grupos no tomo n de lysines, via a reao com ferrocenecarbaldehyde (67) seguidos de reduo de4 NaBH. 365.366 Sob condies na presena de 6 M ureia a desnaturao, cerca de 40 de lisina 57 N tomos foram derivatized, Considerando que, sem adicionado ureia, apenas 20 Fem competncia foram introduzidas.366 Estes conjugados de ferrocenylBSA foram aplicados como eficientes difunde macromoleculares mediadores entre a glucose oxidase de enzima e o eletrodo.

Shinohara e colegas de trabalho reagiram BSA com cido ferrocenylpropionic na presena de EDC, o que resultou na formao de dois tipos de conjugados: protenas que possuam 23 ou 5 restos de ferrocenyl. 367 Os autores mostraram estes conjugados para ser eficientes macromoleculares mediadores entre a enzima desidrogenase de frutose e um eletrodo. O conjugado com maior proporo de ferroceno/BSA foi encontrado para ser mais eficaz, que foi explicado pelo nmero maior de centros redox anexado. Em um livro interessante, Kunugi et al. explorou a reao da BSA com 67 , seguido de reduo de4 NaBH em condies diferentes. Eles investigaram as diferenas entre a desnaturao da protena atravs de alta presso (500 MPa) ou as concentraes de ureia variando de 3 a 6 M durante o processo de marcao. Conjugados com maior proporo de ferroceno/BSA foram obtidos aplicando uma presso MPa 500. No entanto, conjugados preparados atravs de desnaturao com ureia foram melhores mediadores entre Deus e o eletrodo, apesar do nmero menor de restos de ferrocenyl anexado.274 Aizawa e colegas de trabalho prepararam ferroceno e digoxina derivados de BSA doubleconjugados para aplicao em um imunoensaio eletroqumico homognea. 368 No total, 39 grupos Fem e molculas de 8 digoxina estavam ligadas a BSA atravs da formao de imina e subsequente diminuio de4 NaBH. Este derivado foi usado como um hapteno de vrios sites para pesquisa de anticorpos de digoxina. Vinculao dos resultados de anticorpos digoxina em uma diminuio da atividade eletroqumica do derivado BSA. Isso causado pela disponibilidade eletroqumica diminuda de restos de ferroceno, uma vez que os anticorpos volumosos protegem os moieties de ferroceno. As correntes de altura medido pico so inversamente relacionadas concentrao de anticorpos, assim permitindo a quantificao dos anticorpos. Lo e colegas de trabalho tambm usaram ferrocenyl iodoacetamide (105) para a etiquetagem de Sulfidrila-modificado BSA.214 Antes de reao com 105, BSA foi tratado com N- grufo-Sacetylthioacetate para aumentar o nmero de grupos tiol grtis. Aps a marcao, o rcio de ferroceno para a BSA foi sobre 40:1, estimado de espectros de absoro de UV.

Parte superior da pgina 1. Introduo 2. Conjugados do ferroceno com aminocidos e peptdeos 2.1.2. 1, 1'-Ferrocenylbisalanine e seus conjugados 2.1.3. Outros aminocidos baseado em Ferrocenyl 2.2.1. Amidas do cido Ferrocenecarboxylic 2.2.2. Amidas de ferroceno-1, 1'-cido dicarboxlico 2.3.2. Ferrocenylmethylamines atravs da reduo das iminas 2.4.2. Outros mtodos para rotular C-terminal

2.4.3. Outros mtodos para rotular N-terminal 2.4.4. Rtulos para o grupo tiol em cistena 2.4.5. Diversos 2.5.2. Peptdeo sntese atravs de reaes de quatro-componente com ferroceno alquilaminas 3. Conjugados do ferroceno com protenas 3.1.2. d-Aminocido Oxidase (DAAO) 3.1.3. Citocromo P450cEstou 3.1.4. Peroxidase de rbano 3.2.1. Imunoglobulinas 3.2.2. Albumina bovina (BSA) 3.2.3. Vrias protenas 4. Conjugados do ferroceno com DNA, RNA e PNA 4.2.1. Anlise de estabilidade frente e verso com oligmeros de Ferrocenylated 5. Conjugados do ferroceno com carboidratos 5.2.2. Dendrimers 6. Ferroceno conjugados com outras biomolculas 6.1.1. Hormnios esterides 6.1.2. Outros hormnios. 7. Futuras perspectivas 8. Confirmao de 9. A lista de abreviaturas 10. Referncias de 3.2.3. Vrias protenas

O primeiro relatrio de uma protena, no presente processo ovalbumina, rotulada com a data de resto de ferroceno de 1967.334 Ovalbumina, a principal protena do ovo, uma glicoprotena com uma massa molecular de 45 kD. 369 A seqncia de aminocidos primrios de ovalbumina de galinha tem 385 resduos, dos quais 20 so lysines,370.371 e N-terminal da protena acetilado. 372 Estrutura cristalina da ovalbumina uncleaved foi determinada ao 1.95

resoluo . 373 Numa comunicao curta, Peterlik relatou a reao de cloreto de ferrocenesulfonyl com ovalbumina para produzir conjugados, em que, em mdia, 8,6 as totais 20 lysines foram derivatized.334

Regime de 50. Conjugado de biotina Ferrocenyl 138 A papana protena encontrada nos frutos imaturos (mames) da rvore Carica papaya pertence classe de proteinases cistena. 374 Esta protena consiste de uma nica cadeia de 212 aminocidos, dos quais 7 so cistenas. 375-377 Estrutura cristalina de the x-ray da protena revelou que 6 destas cistenas forma dissulfetos, Considerando que o Cys25 est localizado no stio activo. 378 Cys25 este essencial para a actividade enzimtica.374 Douglas e colegas de trabalho realizaram experimentos para investigar se chloroacteylferrocene (41) ou chloromercuriferrocene (108) poderia irreversivelmente inactivar Papana. 379 O ltimo reagente acabou por ser completamente inadequada, Considerando que 41 rapidamente inactiva Papana. Experimentos cinticos indicam que a inibio ocorre atravs de um processo de duas etapas, envolvendo complexao inicial de 41 pela enzima, seguida por ligao covalente atravs da formao de thioether. O avidin de protenas tetramricas (da clara de ovo) e capaz (de bactria Streptomyces avidinii) so notveis por sua habilidade de ligar at quatro molculas de biotina com alta afinidade (Kd = 10-15 M para avidin e kd = 10-13 M para capaz). 380.381 Embora estas protenas so geneticamente remotas, suas estruturas primrias so bastante similares382 e os resduos de aminocidos conservada limitam-se principalmente a seis segmentos homlogos. 383.384 Estruturas de cristal de protena foram relatadas de avidin385.386 e capaz387.388 com e sem biotina ligada. Padeste e colegas de trabalho atrelado a fraco de ferroceno em um espaador flexvel atravs de uma ligao amida a avidin, bem como para capaz, aplicando EDC como o reagente de engate. 389.390 , Controlando as condies de reao, avidin e capaz conjugados com rcios de Fc/protena, variando de 3 a 30 (para avidin) e de 3 a 16 (para capaz) foram obtidos.389.390 o procedimento de derivatizao no altera os recursos de ligao de biotina da enzima significativamente. Estes conjugados de ferrocenylavidin foram usados para construir um sensor baseado em enzima biotina por Imobilizadora-los em um eletrodo.389 Em outro livro, Mosbach e Schuhmann seguiram uma abordagem diferente em direo a um sensor baseado em afinidade biotina, fazendo uso do sistema biotinstreptavidin. Em vez de derivatizing a enzima, eles prepararam um conjugado de ferrocenebiotin 138 (regime de 50). 391 Ensaio afinidade foi baseia-se no fato de que a medida atual para um microelctrodo correlacionada com o coeficiente de difuso das espcies redox. Ligao de conjugado a electroactive 138 capaz resulta em uma mudana do coeficiente de difuso do rtulo electroactive do aumento de massa molecular. Sugestes para amplificao de sinal foram dadas no presente documento, e demonstrou-se a generalidade da idia.

Khodonov e colegas de trabalho preparado um anlogo de ferrocenyl da retina 139 e testado sua interao com bacteriorhodopsin (BR) de Halobacterium salinarum (regime 51).Bacteriorhodopsin de 392 , descoberto em 1971 por Oesterhelt e Stoekenius,393 uma protena de membrana. Seu componente protena, chamada bacterioopsin, consitutes uma Cadeia de nico polipeptdeo 247 aminocidos, com uma lisina na posio 216. O retinal cromforos acompanha atravs de uma ligao de imina a Lys216, com o fragmento de aldimine sendo protonada. 394-396 Compostos 139 foi reagiu com bacterioopsin apomembranes, e um pigmento estvel formado lentamente. UVVIS investigaes mostraram que o mximo de bacterioopsin de 139 reconstitudo quase o mesmo que para o nativo BR (492 vs 483 nm, respectivamente).

Regime de 51. Conjugado de Ferrocenyl Retinal 139

Regime de 52. PD-catalisada sntese de nucleosdeos Ferrocenylatedum um R' denota Me grupos3R protegido por Si.

Parte superior da pgina 1. Introduo 2. Conjugados do ferroceno com aminocidos e peptdeos 2.1.2. 1, 1'-Ferrocenylbisalanine e seus conjugados 2.1.3. Outros aminocidos baseado em Ferrocenyl 2.2.1. Amidas do cido Ferrocenecarboxylic 2.2.2. Amidas de ferroceno-1, 1'-cido dicarboxlico 2.3.2. Ferrocenylmethylamines atravs da reduo das iminas 2.4.2. Outros mtodos para rotular C-terminal 2.4.3. Outros mtodos para rotular N-terminal 2.4.4. Rtulos para o grupo tiol em cistena 2.4.5. Diversos 2.5.2. Peptdeo sntese atravs de reaes de quatro-componente com ferroceno alquilaminas 3. Conjugados do ferroceno com protenas

3.1.2. d-Aminocido Oxidase (DAAO) 3.1.3. Citocromo P450cEstou 3.1.4. Peroxidase de rbano 3.2.1. Imunoglobulinas 3.2.2. Albumina bovina (BSA) 3.2.3. Vrias protenas 4. Conjugados do ferroceno com DNA, RNA e PNA 4.2.1. Anlise de estabilidade frente e verso com oligmeros de Ferrocenylated 5. Conjugados do ferroceno com carboidratos 5.2.2. Dendrimers 6. Ferroceno conjugados com outras biomolculas 6.1.1. Hormnios esterides 6.1.2. Outros hormnios. 7. Futuras perspectivas 8. Confirmao de 9. A lista de abreviaturas 10. Referncias de 4. Conjugados do ferroceno com DNA, RNA e PNA

Em comparao com os derivados de ferroceno de aminocidos e protenas descritas na seo 2, este um campo relativamente jovem e menos explorado na qumica bioorganometallic do ferroceno. interessante notar, no entanto, que a maioria dos aplicativos de ferroceno e qumica bastante semelhante. Formao imina e amida com ferrocenecarbaldehyde (67) ou cido ferrocenecarboxylic (40), respectivamente, bem como o acoplamento de Sonogashira os mtodos preferidos para ligao covalente de ferroceno de nucleotdeos (oligo). Uma aplicao potencialmente muito promissor sensores de gene simples e barato. 397 Para esses dispositivos, eletroquimicamente ativos derivados de DNA para deteco seqncia especfica de oligmeros de DNA so necessrios. Sem surpresa, a maioria dos esforos concentram-se em derivados do ferroceno para essa finalidade. Como ser discutido mais tarde (ponto 4.3), uma variedade de deteco so concebvel e no parece haver um padroouro ainda. Grinstaff e colegas de trabalho tem resumido metallo oligodeoxynucleotides398 e desenvolvimentos recentes na redox sondas de DNA. 399 Objecto da presente seco recentemente foi examinado.71

4.1. Ferroceno derivados de nucleotdeos, Nucleosdeos e Nucleobases O primeiro trabalho em derivados do ferroceno de nucleosdeos apenas cerca de 10 anos de idade. 400 Por outro lado, esta obra de um grupo francs no foi citado freqentemente novamente, mas, obviamente, alguns "primeiro" ou "sem precedentes" crditos nos documentos posteriores so injustificados. Gautheron e colegas de trabalho usada uma variedade de diferente ligao Pd-catalisada reaes de acoplamento para sintetizar Nucleosdeos ferroceno e seus derivados.400 A reao dos desprotegidos 5-chloromercuryuridina com rendimentos de ethenylferrocene, em catlise Pd e depois adsorvido redutora, uma mistura de derivados de ferrocenyluridine. Observou-se uma reao mais limpa com 5iodouridine TMS-protegido, 8-bromoadenosine e 2'-desoxyuridine usando o zirconylated composto Cp2Zr (Cl) CH CH Fc (derivado de ethynylferrocene e Schwartz reagente Cp2Zr(Cl)H) e (C6H5CN)2PdCl2 como um catalisador. Aps adsorvido com aquosa MeOH, uridina desprotegida, 2'-desoxyuridine e adenosina derivados 140142 foram obtidos no bom rendimento (regime de 52). Tambm possvel com uma reao ethynylferrocene (143) prpria e 5-iodouracil, iodouridine, 2-desoxyiodouridine e bromoadenosine (Sonogashira acoplamento),186 rendendo substitudos nucleobase 5-ethynylferrocenyluracil (144), 5ethynylferrocenyluridine (145) e 5-ethynylferrocenyldes-oxyuridine (146) bem como o ethynylferrocenyladenosine (150) (53 do regime). Os derivados de 5-ethynyluracil podem ser cyclized na presena de base, por exemplo, NEt3, rendendo ferrocenyl derivados 147149. Estes autores achar que no uma reao catalisada por metal porque a reao de ciclizao ocorre por aquecimento simplesmente ethynylferrocenyluracil em DMF na presena de base.400 A mesma observao foi feita mais tarde por Yu et al., e um mecanismo foi sugerido. 401 , No entanto, em uma publicao muito recente, a presena de CuI alegou ser essencial para quantidades substanciais de 147 a ser formado. 402 Foram encontrados dois produtos lado inesperado adicionais, os quais formaram exclusivamente a partir de 144. Um mecanismo melhorado foi sugerido que explica satisfatoriamente a gama de produtos observado at agora. De acordo com isso, o protegido nucleosdeo 151, na qual ciclizao no possvel, produz o produto Sonogashira 152 no rendimento de 79%. Reaes de ciclizao relacionados com substratos orgnicos puramente anteriormente foram relatadas na literatura. 403-406 O substituinte ferrocenyl estabiliza uma carga positiva sobre o tomo de carbono directamente ligado ethynyl,407 facilitando assim um ataque do tomo de oxignio nucleoflica para formar o anel de cinco membros. Presque Isle e colegas de trabalho tambm reinvestigated esta reao de ciclizao. 408 Eles relataram estruturas cristalinas dos derivados protegidos de 146 e 149. A formao de ciclizao produto 149 poderia ser completamente suprimida executando a reao de Sonogashira temperatura ambiente durante 4 h. Nestas condies, 5'--DMT protegido 146 poderia ser isolado em 75% de rendimento. Curiosamente, uma quantidade substancial de produto de ciclizao foi encontrada aps a sntese ODN no suporte slido e clivagem, mesmo sob condies muito suaves usando chamado ULTRAMILD phosphoramidites e 0,05 m metanlica K2CO3 para desproteo.408 Este resultado na verdade pe em causa a necessidade de CuI na reao de ciclizao. Clivagem da ligao em derivados de adenosina de ferrocenyl 150 anomrico poder ser afectada por uma soluo de gs de HCl anidro no clorofrmio para produzir o ethynylferrocenyladenine (153).400 Desta reao, a cor azul tpica de ctions ferrocenium foi observada, mas o ethynylferrocenyladenine foi recuperado em bom rendimento aps adsorvido. Finalmente, a citotoxicidade de

compostos selecionados foi testada com um ensaio de proliferao celular simples, mas apenas modestos efeitos foram observados.400

Regime de 53. Sonogashira de engate de nucleosdeos Ferrocenylated Outra abordagem para derivados de metal nucleobase foi publicada pelo grupo de Presque Isle. 409.410 Iodeto de amnio trimetil (ferrocenylmethyl) (154) foi usado como uma fonte conveniente do ction ferrocenylmethyl na reao com nucleobases dos variuos e nucleo derivados de base. Uma srie completa de derivados de adenina, timina, uracil, guanina e citosina foi obtida e exaustivamente caracterizada, tambm pela anlise de raios-X. Em geral, a presena da fraco lipoflicos ferrocenylmethyl faz os compostos menos hidroflico. Alguns dos compostos mostram interessante hidrognio intermolecular padres de ligao no estado slido, como revelado por anlises de single-crystal de raios-X. Um exemplo representativo mostrado no esquema de 54 para o caso de 9-ferrocenylmethyl-adenina (155).409 A preparao desta primeira composto foi relatado em 1980 por Chen, que obteve na verdade uma mistura de 155 juntamente com o isomrica N6- ferrocenylmethyladenine e 7ferrocenylmethyladenine. 411 A estrutura cristalina de 155 revela uma combinao de hidrognio para WatsonCrick, bem como estruturas de ligao sites (Figura 11).

Regime de 54. Sntese de 155

Regime de 55. Sntese de um Receptor Molecular para o dinucletido TpT

Figura 11 anlise de estrutura de single-crystal de raios-X de 155. Pontes de hidrognio entre os anis de adenina so formados usando sites de estruturas (perifrico, uma ligao de hidrognio cada) e WatsonCrick (duas pontes de hidrognio, centrais). Reproduzido com permisso do ref 409. Copyright 1996 A Royal Society of Chemistry. Uma aplicao interessante de hidrognio que envolvam nucleobases de ligao foi relatada recentemente. A distncia entre os anis de Cp em ferroceno cerca de 3,5. Isso corresponde quase exatamente a distncia entre as bases empilhadas em dsDNA. Usando este princpio, um receptor 156 para o dinucletido TpT foi sintetizado pela Sonogashira de engate de 1, 1'-diiodoferrocene (157) com 2 equiv de 2,6-diamido-4-ethynylpyridine (158) (regime de 55). 412 Constante de associao de 156 (R = COMe) com um TpT lipoflico anlogo de cerca de 1,2 105 L/mol foi calculado em CHCl3. Alm disso, um sinal de CD induzido foi observado

resultante da absorptions do grupo de ferroceno. Porque o receptor 156 achiral, este sinal de CD induzida s pode ser explicado por uma orientao torcida dos dois anis Cp como consequncia do hidrognio forte ligao molcula quiral TpT. Esta situao assemelha-se a obra de Hirao, onde hydro-gen ligaes entre adjacentes aminocidos e peptdeos estavam forando os anis de Cp substitudos em ferroceno em uma posio fixa, introduzindo assim um elemento de quiralidade helicoidal.154 Igual modo, um CD induzido foi observado em ambos os casos. A seletividade do receptor TpT 156 sobre outros mononucleotides ou dinucleotdeos tambm foi alta. De uma mistura de todos os possveis mono e dinucleotdeos, apenas TpT foi extrado pelo receptor molecular 156 (R = COnBu).412 Embora no est claro como este princpio pode ser estendido para mais oligonucleotdeos, tais receptores seletivas podem certamente desempenhar um papel na identificao e purificao de oligonucleotdeos no futuro. Compostos 159, que tem quiralidade planar, representa uma abordagem diferente para metaloceno derivados de nucleobases. 159 foi sintetizada regio - e stereospecifically atravs de um procedimento de oito etapas a partir de ferrocenecarbaldehyde (67) protegido com um auxiliar quiral. 413 A chave intermedirio 1-amino-2-cyanoferrocene (160) cyclized com trimethylorthoformate e p- toluenossulfnico cido, seguido por tratamento com uma soluo de NH3 em MeOH para produzir 159 (regime de 56). Este composto representa um anlogo de adenina eletroquimicamente ativo, no qual o metaloceno electroactive realmente parte de nucleobase-se. Se tais derivados de nucleobase metaloceno podem encontrar qualquer aplicao continua a ser visto.

Regime de 56. Sntese de 159 4.2. Sntese de DNA slido-fase com nucleotdeos Ferrocenylated Como disse antes, o principal interesse derivados do ferroceno do oligonucleotide para electrochemisensores de DNA de cal. Portanto, a maior parte da literatura abrange a sntese de oligmero de ferrocenyl sob o aspecto de deteco electroqumica. No entanto, alguns papis lidar com aspectos sintticos sozinhos, e estes so abordados nesta seo. Tabela 6. Lista de temperaturas de Ferrocenylated ODNs com DNA complementar de fuso entrada comprimento nenhuma. de oligmero seqncia lugar de substituio com Fc Tm um / C tmb/ Ref C

17

5'-CTFcG CTA GAG base ATT TTT AC-3'

52,2 (compl 0.4 DNA)

414

48.3 (compl 7.7 RNA)

17

5'-CTA CTG GAG ATTFc TTT AC-3'

base

38,5 (compl 14.1 414 DNA)

41,3 (compl 14.7 RNA)

16

5'--TA TGCFcAAA C base CTG TTG A 3'

43.2

7.6

419

16

5'--TGC TAC AFcAA base CTG TTG A 3'

41.8

9.0

419

16

5'--TAC TGC AAAFc base CTG TTG A 3'

42.4

8.4

419

16

5'--TAC TGC AAA CTG TU AFcG 3'

base

49.6

1.2

418, 419

16

5'-A TAC TGC AAA CUFcG TTG - 3'

base

48.2

2.6

418, 419

12

5'-TGC TAC AAA CUFcG-3'

base

42.6

+1.2

418

15

5'-ATC UFcGA GTC base GGT CAT-3'

48,0 (A frente uFc)

5.7

401

56,5 (G

4.2

oposto uFc)

10

15

5'-AAFcC AFcGA GTC GGT CAT-3'

2'

51.3

+0.1

452

11

15

5'-ACFcum cFcTA GAG CCA GCT-3'

2'

57.4

0.9

452

12

15

5'-ACA CTA GAG CFcCA GCT-3'

2'

58.7

+0.4

452

13

15

5'-ACFcum cFcTA GAG CCA GCT-3'

3'

53.7

4.6

452

14

15

5'-ACA CTA GAG CFcCA GCT-3'

3'

54.2

4.1

452

15

15

5'-AAFcC AFcGA GTC GGT CAT-3'

2'

51.3

+0.1

454

50,5 0.7 (derivado da Fc diferente)

16

37c

5'-CAA CGT CCG base AGC AGT ACA TFcTFcG ACA GAC TFcAA GGA GCTFc TFc-3 '

75

423

um Valores dependem da concentrao de oligmero, adicionadas de sais, concentraes de sal e esquemas de fuso empregadas. Em alguns casos, mas no todos, foram efectuadas vrias medies e erros foram dados ou estimados. Por favor consulte a literatura original para obter os detalhes. b tm contra uma combinao perfeita (Tm(ferrocenylated nucleotdeo)

tm(sem modificaes nucleotdeo)). Somente o site da etiquetagem com ferroceno indicado; etiquetas diferentes foram usadas (ver texto e esquemas). c a vertente complementar foi uma mer-40 com um trio de AGC adicional no final 3'. Em um exemplo, reao de Mitsunobu de ferrocenylmethanol com 5'-O-(4,4'dimethoxytriphenylmethyl)-3'-O- acetylthymidine produz o engate produto 161, que foi prontamente convertido para o phosphoramidite 162 (regime de 57). Purificado 162 foi usado como um bloco de construo na sntese do oligonucleotide automatizado de DNA 16-mers e 17-mers. 414 Quatro diferentes metalated oligmeros foram sintetizados, diferindo na posio do rtulo de metal. Efectuaram-se uma srie de estudos com vertentes complementares de DNA e RNA de fuso. Em todos os casos, uma reduo drstica na estabilidade do duplices foi observada excepto quando o t metalated foi quase terminal em um duplex de B-DNA (entrada 1 no quadro 6). At mesmo a formao de hlices triplos observou-se com a terceira vertente tendo o CD de t. metalated espectroscpicos estudos e ponto de fuso de CD foram ainda mais utilizado para complementar as informaes estruturais sobre a duplices e a triplices formada neste estudo. Este trabalho representa o mais completo estudo at data sobre a influncia do site da substituio de ferroceno sobre a estabilidade e a estrutura de DNADuplices de RNA, dsDNA e triplex formao.

Regime de 57. Ferrocenylated t monmeros 161 e 162um um Compostos 162 poderia ser usado como um monmero de t modificado na sntese do oligonucleotide automatizado. cido Ferrocenecarboxylic (40) foi anexado ao grupo amina de um 5'-hexylamine terminal da ODNs. Em 1991, esses conjugados pretendia usar istopos estveis de ferro para deteco multiplexada de nucleotdeos de seqncia diferente por espectroscopia de ionizao de ressonncia (RIS), quer induzidas por ies de pulverizao catdica (iniciada pelo catdica RIS ou SIRIS) ou dessoro laser (laser atomizao RIS ou LARIS). 415-417 Esta idia de alguma forma est relacionada com os primeira metallo imuno ensaios sobre ferrocenyl derivados de esterides relatados pelo Cais, no quais AAS deteco foi usada (ver seco 6.1.1). Embora o mtodo trabalhado com alta resoluo espacial em gis de eletroforese e a sensibilidade foi comparvel ao autoradiografia com 32P, seu uso muito limitado. Um fundo relativamente elevado de 56Fe foi encontrado em outras operadoras, como membranas de Nylon, fazendo o uso de 57Fe necessrias para a boa sensibilidade.416 Em segundo lugar, um dispositivo sofisticado e caro para deteco necessrio. Finalmente, o advento de chips de DNA superou em grande parte a necessidade de anlise multiplexada no seqenciamento tradicional. Na maioria dos outros trabalhos, ferrocenylated nucleotdeos foram sintetizadas por acoplamento de Sonogashira de ethynylferrocene (143) ou derivados de ferroceno relacionados com um grupo de ethynyl de iodo-U ou bromo-a. Seguiram-se duas estratgias sintticas, qualquer transformao de nucleotdeos de ferrocenylated em phosphoramidites e sujeio sntese de oligmero automatizados ou derivatizao com ethynylferrocene assembly depois do oligmero. Metzler-Nolte et al. descobriram que ferrocenecarboxylic cido

propargylamides 90 so derivados de ferroceno particularmente apto para Sonogashira de engate em aminocidos e peptdeos (ver esquema 29 acima). Alm disso, esses compostos so convenientemente preparados em grande escala, e a estrutura de cristal de raios-X de 90 foi relatada.190 Composto 90 foi usado por Grinstaff et al. para a etiquetagem de nucleotdeos por acoplamento Sonogashira.398,418,419 Estes autores relataram melhores rendimentos e pureza dos conjugados se o derivatizao sejam efectuada na coluna, em vez de em soluo depois de clivagem da do oligonucleotide. Resultados semelhantes foram feitos para rotular de DNA por Sonogashira de engate com um tris (bipiridina) derivada de propargylamine do Ru. 420.421 Em seu trabalho, Grinstaff et al. descobriu que a estrutura de dsDNA temperatura no significativamente alterada pela incorporao de uma ethynylferrocenyl-A, ou -U, independentemente da posio do rtulo. Por outro lado, observada uma diminuio da temperatura de at 9 C (de 50,8 a 41.8 C para um 16-mer) de fuso se um a no meio de uma vertente substituda por ferroceno. Mais uma vez, o efeito menor se u substitudo e se o rtulo o fim do duplex.419 Durante seus esforos para incorporar ethynylferrocene diretamente em US monmeros por acoplamento Sonogashira, Yu e colegas de trabalho observou a mesma reao de ciclizao na presena de DIPEA que j havia sido informado por Gautheron e colaboradores.400.401 Tanto ismeros 146 e 149 (ver esquema 53 acima) poderiam ser separados, transformados em phosphoramidites e usados como blocos de construo na sntese de oligmero de DNA automatizado. Por outro lado, padro DNA desproteo/acoplamento exige condies bsicas e clivagem de (ferrocenylated) ODNs do apoio slido conseguida concentrada NH3. , portanto, no surpreendente que s o cyclized ferrocenyl-U (149) encontrado em ODNs, independentemente das matrias-primas, e este ponto na verdade convincentemente demonstrado neste documento. No entanto, outro aspecto deste trabalho realmente surpreendente. Uma srie de experimentos de hibridizao com 15-mer (ODNs) foram realizada utilizando ferrocenyl-U na quarta posio.401 Se (cyclized) Fc-U oposto , Tm 48.0 C e a diminuio da temperatura tm de fuso 5.7 C em comparao com uma combinao perfeita. No entanto, se g colocado em frente ao Fc-U, a temperatura de fuso 56.5 C, que ainda maior do que do perfeito AT correspondem apenas mencionado. Por outro lado, tm para uma combinao perfeita de GC 4.2 C, o que parece um nmero razovel. Pode concluir-se que cyclized Fc-U se comporta mais como dC e prefere para cruzar g em vez da. Este um importante encontrar porque ele sublinha a necessidade de estudos exaustivos. Um derivado de nucleobase ferrocenyl ou de facto, qualquer modificao nucleobase pode alterar as propriedades de que nucleobase a tal ponto que ele realmente se assemelha a uma base diferente. Ainda assim, uma investigao aprofundada ao longo destas consideraes est faltando completamente para modificao de ferrocenyl ODNs. Em todos os casos relatados at agora, incluindo aqueles na seo a seguir (ponto 4.3), o rtulo de ferroceno apresentado no palco monmero, por uma reao catalisada de metal (Sonogashira), ou aps a montagem da seqncia oligmero na extremidade 5'. Uma alternativa interessante para a etiquetagem de 3' fim do oligonucleotide foi apresentada por Anne e colegas de trabalho. Estes autores usaram o trifosfato dideoxynucleotide Fc-ddUTP (163) (58 do regime) em uma reao enzimtica para estender o Terminal 3' do oligonucleotide. 422 O bloco de construo 163 foi preparado do 5-iodouridine e um alquino de ferrocenyl, seguido por vrias etapas de sntese orgnica padro em um rendimento global

de cerca de 10%. Transferase de terminal deoxinucleotidil a enzima (TDT), em seguida, foi usado para estender a 5'-(dT)10 no final 3'. Transformao rpida e quantitativa foi observada por HPLC com um dez excesso de Fc-ddUTP. Wlassoff e o rei tem testado duas ferroceno dUTP derivados 164a e 164b como substratos para polimerases de DNA comuns (regime 58). 423 Curiosamente, apenas 164a foi um bom substrato, Considerando que um pouco mais 164b muito mal. Estes autores tambm convincentemente demonstraram a maior sensibilidade de deteco no Ultravioleta eletroqumicos vesus para anlise por HPLC de ferrocenylated ODNs.423

Plano de 58. Derivados de Ferrocenylated (UTP) que foram usados em reaes enzimticas de modificao do Oligonucleotide Uma abordagem geral para a introduo de um rtulo como ferroceno foi publicada por Saito. 424 O aldedo contendo universal base 3-formylindole 2'-deoxynucleoside introduzido em um ODN durante a fase de slido sntese em qualquer posio desejada. A ODN ento tratado com uma carbohydrazide de hidrazina ou ferroceno para produzir o postsynthetically pela ferroceno ODN. Infelizmente, h dados adicionais, por exemplo, temperaturas com DNA complementar ou caracterizao eletroqumica, de fuso foram apresentados. Por outro lado, esta abordagem bastante universal e certamente merece mais ateno.

Parte superior da pgina 1. Introduo 2. Conjugados do ferroceno com aminocidos e peptdeos 2.1.2. 1, 1'-Ferrocenylbisalanine e seus conjugados 2.1.3. Outros aminocidos baseado em Ferrocenyl 2.2.1. Amidas do cido Ferrocenecarboxylic 2.2.2. Amidas de ferroceno-1, 1'-cido dicarboxlico 2.3.2. Ferrocenylmethylamines atravs da reduo das iminas 2.4.2. Outros mtodos para rotular C-terminal 2.4.3. Outros mtodos para rotular N-terminal 2.4.4. Rtulos para o grupo tiol em cistena 2.4.5. Diversos 2.5.2. Peptdeo sntese atravs de reaes de quatro-componente com ferroceno alquilaminas

3. Conjugados do ferroceno com protenas 3.1.2. d-Aminocido Oxidase (DAAO) 3.1.3. Citocromo P450cEstou 3.1.4. Peroxidase de rbano 3.2.1. Imunoglobulinas 3.2.2. Albumina bovina (BSA) 3.2.3. Vrias protenas 4. Conjugados do ferroceno com DNA, RNA e PNA 4.2.1. Anlise de estabilidade frente e verso com oligmeros de Ferrocenylated 5. Conjugados do ferroceno com carboidratos 5.2.2. Dendrimers 6. Ferroceno conjugados com outras biomolculas 6.1.1. Hormnios esterides 6.1.2. Outros hormnios. 7. Futuras perspectivas 8. Confirmao de 9. A lista de abreviaturas 10. Referncias de 4.2.1. Anlise de estabilidade frente e verso com oligmeros de Ferrocenylated

O paradigma da biologia molecular afirma que a informao gentica de qualquer organismo armazenada no DNA desse organismo. 425 Este DNA um heteroduplex (DNA de cadeia dupla, dsDNA) consistindo de dois nonidentical nica cadeias de ADN (ssDNA) que so complementares. Complementaridade obtida por emparelhamento de bases opostos atravs de ligaes de hidrognio. Perfeito emparelhamento alcanada no chamado cannico pares de bases, ou seja, GC e AT (ou AU em caso de um DNADuplex de RNA). Em uma dupla hlice ideal, os pares formam trs (GC) ou duas pontes de hidrognio (AT), uma situao que chamado de WatsonCrick de emparelhamento de base. Normalmente, mesmo curto (> 15 bases) vertentes dsDNA acabam em uma hlice. A estabilidade trmica de tal um dsDNA helicoidal pode ser estimada por medir sua temperatura de fuso (Tm). A temperatura de fuso definida como a temperatura na qual uma (pequena) pea dsDNA metade dissociadas em ssDNA. A experincia mais facilmente realizada em um espectrmetro de

UVvis, monitorando a mudana na absoro em 260 nm com temperatura. H uma baixa absoro para dsDNA que ssDNA este comprimento de onda, em consequncia da formao de frente e verso. Em um duplex bem comportado, uma forma sigmoidal de absoro versus curva de temperatura observada porque formao e ciso duplex um processo altamente cooperativo.425 A temperatura de fuso facilmente extrada a partir desta curva (UVtm) e d uma indicao sobre a estabilidade do duplex. Esta estabilidade geralmente reduzida, introduzindo uma incompatibilidade em duplex, por exemplo, substituindo a c em um fio com T, provocando assim um menos estvel GT noncanonical base par, em vez do GC cannico. Todas as temperaturas de fuso publicadas para estabilidade frente e verso com ferrocenylated oligmeros esto resumidas na tabela 6. Embora esses dados foram coletados por diferentes grupos em condies ligeiramente diferentes, algumas tendncias podem ser deduzidas. Substituio da base (entradas 39), bem como substituio na posio 3' (entradas de 13 e 14) prejudicar significativamente a emparelhamento base e leva a uma diminuio acentuada da estabilidade frente e verso. Note-se, no entanto, que a substituio na base foi conseguida pela reao de Mitsunobu (entradas de 1 e 2) ou Sonogashira (38 de entradas) de acoplamento em todos os casos relatados at agora. Com esta qumica, T, U e a nica foram substitudos, e assim, esta concluso estritamente verdadeiro somente para AT/U base emparelhamento. Substituio em 2' posio (por exemplo, anlogos de RNA ferrocenylated, entradas ismeros e 15) no parece afetar emparelhamento base ou estabilidade frente e verso. Se a e U Sonogashira produtos de engate so comparados (entradas 35 vs 68), a diminuio da estabilidade frente e verso muito mais pronunciado se um a substituda por um derivado de ferroceno. Finalmente, os produtos de substituio de Mitsunobu (entradas de 1 e 2) diminuem duplex estabilidade drasticamente dsDNA e DNADuplices de RNA se o ferroceno for colocado no meio da hlice. Por outro lado, se ferroceno colocado perto de uma das extremidades da hlice, o efeito observado fortemente dependente do tipo de hlice formada (entrada 1). Se uma hlice de tipo b formada (como em dsDNA), a estabilidade frente e verso dificilmente influenciada pelo substituinte ferroceno. Por outro lado, uma hlice de tipo (como em um DNARNA duplex), o substituinte ferroceno aparentemente menos bem acomodados e encontra-se uma diminuio acentuada da estabilidade. Um caso muito interessante a entrada 9, em que ferrocenylated que u interagir muito melhor com um g oposto do que com o parceiro "correto" de WatsonCrick A. Por outro lado, em ambos os casos, h uma diminuio comparvel estabilidade de cerca de 5 C, em comparao com o caso de um jogo perfeito com bases unsubstituted. Uma desestabilizao de magnitude semelhante esperada como o resultado de uma incompatibilidade de base nica. 4.3. O pedido de oligmeros de DNA ferroceno rotulado como sensores de Gene com deteco electroqumica A interao, ou hibridao, de duas vertentes de complementar do oligonucleotide geralmente ocorre de forma estritamente seqncia especfica, que de DNA em pares de GC e AT (ou AU de RNA). Um sensor de gene chamado capitaliza sobre essa interao especfica. Strand eu, a sonda, com seqncia conhecida, interage com vertente II, o desconhecido do oligonucleotide ou a amostra. Num mundo ideal, um sinal gerado se e somente se vertentes I e II so exatamente complementares. Esta resposta "digital" quase nunca atingida. No

mundo real, a cintica de hibridao so um problema, bem como a sensibilidade do sistema para um ou mais incompatibilidades. Uma variedade de diferentes sinais so vivel e foram testados. O meio mais comum de deteco hoje fluorescncia, devido a sua alta sensibilidade e facilidade de manipulao ambos quimicamente como um rtulo para DNA ou RNA e espectroscopicamente. Deteco electroqumica oferece que um meio alternativo de deteco que tambm pode ser altamente sensvel e fcil de manusear. Comparado a espectroscopia de fluorescncia, deteco electroqumica provavelmente mais robusto e menos propenso a erros. Finalmente, eletroqumicas sensores podem ser construdas muito menores do que um espectrmetro de fluorescncia e em muito menor custo. Por todas estas razes, h um grande interesse em sensores de DNA eletroqumicas.397 Vrias avaliaes nos ltimos anos discutiram aspectos individuais de sensores de DNA eletroqumicos, como mtodos de deteco, superfcies e miniaturizao. 426-430 O elevado potencial nesta rea tem atrado vrias empresas.431,432 No DNA ou RNA oligmeros, o nucleobases de guanina podem ser oxidados eletroquimicamente. Este facto tem sido explorado com efeito dos chamados "indicatorless" eletroqumicas DNA hibridao sensores em eletrodos de colar de carbono. 433 , Obviamente, essa abordagem requer que um livre de guanina imobilizadas "capturar a vertente". Alm disso, um potencial relativamente elevado necessrio e esta reao de oxidao pode facilmente ser irreversvel. Tendo em conta as propriedades eletroqumicas favorveis de ferroceno e derivados, no propriamente surpreendente que rotular de oligonucleotdeos com ferroceno o foco das atenes no campo dos sensores de gene eletroqumica. Ferroceno foi anexado por meio de um vinculador flexvel a extremidade 5' de um oligmero de DNA, como exemplificado por ferrocenylated (dT)12 ODN 165 , em regime de 59. Esta sonda eletroquimicamente ativa DNA hibridizada para o complementar DNA e o conjugado pode agora ser detectados eletroquimicamente, por exemplo, por HPLC-ECD. 434-437 Esta tcnica est relacionada com o trabalho de Eckert et al, que costumava ferroceno rtulos faa peptdeos modificvel para a deteco electroqumica altamente sensvel em HPLC.146.203 Sistema de ECD HPLC, Takenaka et al. alcanado uma sensibilidade de at 1 fmol de DNA sob condies favorveis quando um ferrocenylated T12- mer foi hibridizado com um excesso de poly(dA).434 Em um caso mais realista, o mesmo teste foi hibridizado com um plasmdeo contendo um fragmento de gene (CTG) do transportador de colina de 3693 bp. A regio de promotor do CTG contm uma seqncia de13 A, e o todo fragmento CTG detectou-se a uma concentrao mnima de 20 fmol. Conseguiu-se uma melhor sensibilidade usando um ferrocenylated misturado seqncia 20-mer como a sonda,434 , e essa diferena foi atribuda para a temperatura de fuso mais alta de duplices contendo o teste mais longo. Por outro lado, uma temperatura de fuso mais alta poderia implicar uma sensibilidade de incompatibilidade diminuda, mas este aspecto infelizmente no foi investigado. A termodinmica da formao triplex com um ferrocenylated ODN tm sido estudada em detalhes.437 Um enorme ganho enthalpic mediante formao triplex em grande parte cancelado por efeitos Entrpico, resultando em um ganho de energia livre de 23 kcal mol-1, em comparao com formao triplex com um ODN sem modificaes. Uma compensao semelhante enthalpyentropy tem sido observada antes em triplices ODN sem modificaes, sugerindo que formao triplex com um ferrocenylated que ODN regido pelo mesmas principais influncias como com ODNs sem modificaes e que no nenhum incomum

especfico do ferroceno efeito, pelo menos nestes sistemas. Finalmente, dados eletroqumicos para a fraco de ferroceno no triplex so muito favorveis. H apenas uma dependncia de seqncia ligeira do potencial redox de 30 mV. Deteco nessa configurao de HPLC-ECD tripla hlice possvel a nvel femtomole, que compara favoravelmente sensibilidade de inveno ou vinculados ao enzima colorimtricos ensaios. 437.438 No mais recente trabalho, estabilidade e estrutura de um triplex de DNA de 16-mer contendo um 3 -N- Fem-resduo com timidina a terceira vertente foram comparadas com um triplex sem modificaes da mesma seqncia, Calorimetria, espectroscopia de CD e modelagem molecular. Neste caso, o nucleotdeo ferroceno no interrompa a geometria global do triplex, mas reduz o aparente pkum valor dos vizinhos citosinas, tornando-os mais acessveis para o solvente.439

Regime de 59. Estrutura de uma chamada de ferroceno (dT)12 ODN 165 A sensibilidade do sistema HPLC-ECD pode ainda ser reforada se o DNA de amostra amplificado pelo PCR com o uso de uma cartilha ODN ferrocenylated. 440 Fragmentos de DNA dois (uma kb 0,97 DNA fragmentar o oncogene v-myc e um fragmento de 0,51 kb de exo 48 do gene humano distrofina) foram PCR amplificado usando primers ferroceno-modificado e no modificados de 25 bp e comprimento de bp 26. Em ambos os casos, obtiveram-se produtos PCR corretos e a eficincia de amplificao com primers ferrocenylated foi sobre a metade do que dos primers sem modificaes. Em baixo nmero de ciclos PCR, a amplificao de DNA procede-se exponencialmente. Assim, uma resposta quantitativa foi observada ao longo de pelo menos 2 ordens de magnitude, e to pouco quanto 0,1 fmol de oncogene v-myc DNA foi detectada com fiabilidade. Este experimento sugere que ferrocenylated as primeiras demo podem ser usadas para anlise PCR quantitativo juntamente com HPLC-ECD. Uma vantagem adicional desse mtodo o fato de que nenhuma referncia necessria, em contraste com o PCR quantitativo convencional, em que o exemplo e um referncia DNA so coamplified em um frasco. Excelente sensibilidade tambm alcanada engate electroforese em gel capilar (CGE) para deteco electroqumica e usando ferrocenylated ODNs.430 Essa tcnica tem sido pioneiro Kuhr e colegas de trabalho. 441.442 Sinusoidal deteco (SV) voltammetric foi recomendado para identificao selectiva dos produtos de amplificao de DNA aps PCR.441.442 Essa tcnica tambm foi proposta por detetction electrochemical nativos aminocidos e peptdeos. 443 Foi desenvolvida uma estratgia para chamada "seqenciamento de DNA quatro cores" por este grupo.441 Como exemplo, a cartilha de PCR T3 foi covalentemente 5'-modificado com quatro diferentes ferroceno derivados 166169 (regime de 60). Seus potenciais redox abrangem uma gama de 230 mV, mas a diferena mnima entre 166 e 167 apenas 34 mV. Esta diferena, que seria difcil diferenciar de forma confivel em um currculo normal, facilmente perceptvel por SV. Quando acoplado a separao da CGE, o poder discriminar da tcnica mostrou-se aplicveis ao seqenciamento de DNA "baixa resoluo".441 , Combinando a tcnica de extenso PCR base nica de uma cartilha de ferrocenylated com CGE e deteco electroqumica, um romance sistema para anlise de polimorfismo (SNP) nico nucleotdeo foi estabelecida. A cartilha de 20-mer numa poderia ser separada do produto de extenso de 21-

mer, demonstrando assim uma separao de single-base resoluo de um oligmero de DNA com deteco electroqumica.442

Regime de 60. Quatro Ferrocenylated A monmeros com diferentes potenciais Redox: E1/2 (CV com 1 V/s, vs Ag/AgCl) = 39 mV (166), 73 mV (167), 202 mV (168) e 268 mV (169) O desenvolvimento da tecnologia de chip revolucionou a anlise gentica. Em um chip, um grande nmero de ODNs com seqncias diferentes (normalmente milhares, mas chip densidades at a milhes de ODN por cm2 foram atingidas) imobilizado de forma espacialmente enderevel. Sequncias de DNA ou RNA complementares de uma amostra ligam a estas ODNs, e um sinal gerado em um lugar exatamente definido. Novamente, a espectroscopia de fluorescncia a principal tcnica para a leitura deste sinal. A deteco de eventos de hibridao em um formato de chip em combinao com tcnicas eletroqumicas particularmente elegante porque a superfcie de um eletrodo diretamente pode servir como o chip em que ODNs so imobilizadas. Claramente, nenhum equipamento adicional (como um laser e cmera CCD para deteco e excitao da fluorescncia) necessrio. Letsinger et al. foram os primeiros a imobilizar ferrocenylated ODNs em um monolayer de redox-ativo caseiro em uma superfcie de Au. 444 6-Hydroxyhexylferrocene foi reagiu com cianoetil -N,N- diiospropylchlorophosphoramidite para produzir o correspondente ferrocenyl amidite 170, que foi acoplado ao timidina modificao CPG. Alm de monmero 171, um 5'-ferrocenylated (dT)14 ODN 172 foi sintetizado, bem como um monmero de timidina ferrocenylated com um 3' grupo tiol (173, regime de 61). Compostos 173 foi adsorvido na superfcie dos eletrodos Au como um monolayer. O CV de um substrato Au modificado dessa maneira exibiu uma onda reversvel com potencial um pouco mais positivo do que foi observado por 171 em soluo. Juntamente com aplicativos como sensores de DNA eletroqumicos, tais monocamadas de DNA caseiro com grupos eletroquimicamente ativos podem fornecer informaes sobre o mecanismo de transferncia de eltrons atravs de DNA, bem como sobre a flexibilidade de DNA curto. Kraatz e colegas de trabalho usado diferenas entre o redox ferroceno potencial e kET valores para diferenciar entre os diferentes modos de eltron transferem entre um eletrodo de Au e dsDNA rotulado de ferroceno, em particular intrastrand ET versus mecanismos de passagem interstrand. 445 Em um papel mais tarde, as propriedades de ssDNA ferroceno-rotulado Adsorvido em eletrodos Au foram estudadas. 446 Quando ssDNA com uma sonda ferrocenyl est ligado a um eletrodo Au, pode presumir a adoptar uma conformao de bobina no ordenada. Se, por outro lado, adicionado um ODN complementar, a bobina abrir e ir formar a dupla hlice do ADN. Essas alteraes conformacionais resultarem em alteraes na mobilidade do grupo reprter ferrocenyl, que por sua vez altera suas propriedades de transferncia de eltrons, como mostrado por Anne et al. em uma recente publicao muito interessante. 447 Na verdade, este conceito

semelhante ao chamado balizas moleculares ou sondas de "light-up", em que a fluorescncia desde a sonda est desligada por um Gatorade nas proximidades. Aps a ligao da ODN complementar, sonda e Gatorade espacialmente so separados e um sinal de fluorescncia pode ser pego. Este princpio foi traduzido em um sistema de deteco de DNA em que a sonda um ODN imobilizado, identificado como ferroceno. 448 Aps a ligao de um ODN complementar, a distncia entre o ferroceno e a superfcie Au significativamente alterada, a corrente de pico diminui. Este sistema mostra uma notvel gama linear ao longo de 5 ordens de magnitude com concentraes de DNA alvo to baixo como 22. Em contraste com as balizas moleculares com deteco fluorescente descrito acima, isso sim um "luz-off" dispositivo. Infelizmente, esses sistemas so mais suscetveis a respostas de falsos positivos. Alm disso, picomolar sensibilidade na maioria dos casos no suficiente para deteco direta de agente patognico DNA sem amplificao. Essa limitao pode ser superada pela amplificao do PCR, para complementar a utilizao de rtulos com potencial redox diferentes, como discutido acima, que permitir diferenciao entre sinais positivos real e artificiais. Como exemplificado por estes primeiros relatrios neste campo, claramente um elevado potencial de sntese qumica organometlica combinado com tcnicas comumente usadas em biologia molecular. Outro exemplo recente de um teste de "luz-off" demonstra que mais melhorias na manipulao de deteco de DNA eletroqumica so possveis por meio de sondas de duplahlice e um ensaio de hibridao competitiva. 449 Nesse caso, a excelente sensibilidade (subnanomolar) e a incompatibilidade de sensibilidade alcanada pela libertadora de uma Cadeia de DNA de ferrocenylated da superfcie eletrodo sem a necessidade de etapas de lavagem adicionais.

Regime de 61. Um 5'-Ferrocenylated Phosphoramidite (170), uma 5'--Ferrocenylated timina monmero (171), um 5' Ferrocenylated (dT)14 ODN (172) e um grupo 5'--Ferrocenylated timina monmero com um 3' tiol para imobilizao sobre uma superfcie Au (173) Uma abordagem ligeiramente diferente para um sensor de imobilizados eletroqumicos gene foi publicada por Ihara e colegas de trabalho, usando um sistema de trs-ODN,450 mais tarde denominada "ensaio de sanduche" (Figura 12).436 Em primeiro lugar, uma sonda de captura ODN imobilizao sobre uma superfcie de eletrodo Au, neste caso por cinco unidades de sucessivas Fosforotiotato. O ADN do alvo liga a sonda de captura imobilizados se a seqncia complementar est presente. Alm disso, o destino de DNA carrega uma seqncia de ligao (aqui um (dA)12) para o ferrocenylated de sinalizao teste ADN 165. O ferrocenylated (dT)12 sonda 165 hybridizes com a seqncia de poli-A do ADN do alvo. Se o DNA de destino tambm vincula ao teste de captura imobilizados ODN, o ferroceno trazido perto de eletrodo e um pico andica significativo devido oxidao do ferocene observado em DPV do sistema. Se g substitudo por C, gerando uma nica incompatibilidade CC na sequncia de DNA, de destino ligao da sonda imobilizados se torna muito mais fraca. Como resultado, menos molculas ferroceno realizam-se nas proximidades do eletrodo, e por conseguinte, apenas um muito pequeno pico andica foi observado na DPV.450 Este sistema caracterizou-se mais tarde em

detalhes, incluindo uma anlise exaustiva da superfcie ODN-modificado por espectroscopia de IR e um estudo de Microbalana (QCM) de cristal de quartzo.451

Figura 12 o princpio do "ensaio sanduche" para sensores eletroqumicos de DNA. Reproduzido com permisso do ref 450. Copyright 1997 A Royal Society of Chemistry. Este esquema de deteco mais recentemente foi refinada por Yu e colegas de trabalho. Em contraste com a maioria dos outros grupos, que usaram 5'-terminal substituio de nucleotdeos com ferroceno, estes trabalhadores sintetizaram 2'-ferrocenyl nucleotdeos como 174 e 175 (regime 62). 452 Estes compostos so a primeira derivada de ferrocenyl-RNA, e como tal, eles so mais versteis quimicamente porque eles podem ser incorporados em uma vertente do oligonucleotide em qualquer posio e at mesmo ODNs com incorporao de ferrocenyl mltiplos so viveis. Considerando que a sntese de derivados a adenosina 174 foi simples e a correspondente phosphoramidite poderia ser obtida no rendimento razovel, os derivados citidina 175 foi obtido juntamente com 3'-ismero ferrocenylated em uma proporo de 2:1. No entanto, ambos ismeros poderiam ser separados em slica sob a forma de seus 5'-derivados DMT. Estes phosphoramidites protegidos pode ser usados diretamente na sntese de DNA de fase slida. Em estudos de fuso trmicos de seqncia misturados 15-mer ODNs, substituio de a com 174 ou c com 175 no produziu um efeito significativo sobre a temperatura de fuso do duplices. No entanto, se o 2'-ferrocenylated 175 foi substitudo por seu ismero 3', a temperatura de fuso das duplices diminuda 4 C, comparvel introduo de uma incompatibilidade GG nica na mesma posio. O CV de um 15-mer ODN contendo 174 mostrou uma onda reversvel praticamente na mesma posio como que para um derivado ethylferrocene solveis em gua, nas mesmas condies experimentais. Recentemente, o desenvolvimento de uma plataforma verstil para diagnstico molecular em microarrays baseados esta qumica foi descrito mais detalhadamente. 453 Um formato de ensaio de sanduche foi usado em que a sonda de captura de DNA foi imobilizada em um monolayer caseiro (SAM) em um eletrodo de ouro. Sinalizao eletroquimicamente ativo sondas contendo 2'-ferrocenylated adenosina foram empregadas e realizado nas proximidades de SAM mediante vinculao concomitante ao destino sem rtulo DNA. O sistema foi testado com xito para deteco eletroqumica seqncia especfica de DNA amplificao por PCR sem a necessidade de mais de purificao. A utilidade demonstrou-se ainda mais por SNP anlise e acompanhamento de expresso de gene com estes sistemas de microarray simples e relativamente barato.453 Tambm, um aplicativo para o rastreio de mutaes de ponto em um gene associado a hemocromatose hereditria foi descrito.432

Regime de 62. Trs eletronicamente ativo 2'-modificado Phosphoramidite nucleotdeos 174176 e um ativo eletroquimicamente segmentao de intercalador 177 proposto pela Takenaka Para alterar as propriedades eletroqumicas oligmeros de DNA na dependncia da sequncia de DNA, um segundo um monmero 176 com um derivado de diferentes ferroceno anexa posio 2' foi elaborado (regime 62). a diferena dos potenciais redox de 174 e 176 de 454 170 mV como consequncia do grupo de carboxamide de dimetil no ltimo. Dependente da seqncia deteco electroqumica agora funciona da seguinte maneira. Uma sonda de captura (23-mer ODN) imobilizao sobre uma superfcie de Au. O destino ODN conhecido por conter a seqncia complementar da sonda de captura e vincula com alta afinidade. Finalmente, a sonda de sinalizao vincula-se a outra parte de destino ODN. Dois diferentes 16-mer ODN sinalizao sondas I e II foram usados que so estendidos com trs molculas de 174 ou 176, respectivamente, na extremidade 5'. Alm disso, duas sondas sinalizao diferem em seqncia somente em uma base. Dependendo a seqncia exata do alvo de DNA, uma sonda se ligar preferencialmente, trazendo derivados de ferroceno diferentes com potenciais diferentes redox prximo superfcie. Esta diferena facilmente detectada pelo voltammetry de corrente alternada (ACV). Este regime usos similares ferroceno sondas do trabalho da Kuhr discutida acima e claramente tem um monte de promessas, embora a diferena de estabilidade (temperatura de fuso) no foi relatada, nem foi investigada qualquer mais sensibilidade de incompatibilidade. Em uma recente publicao interessante, descreveu-se a extenso de tais sistemas de deteco de RNA. 455 A eletroquimicamente ativo RNA monmero c 164 (regime 58) foi sintetizado e totalmente caracterizado. c 164 poderia ser incorporada no oligmeros de RNA no lugar de u por dois diferentes polimerases de RNA. Aumentar a proporo /U 164 ccom efeito produzido mais pesadamente rotuladas transcries, conforme mostrado por electroforese em gel e uma maior rea-em-a-curva em SWV de transcries de RNA. Estes oligmeros de RNA rotulado de ferroceno poderiam ser imobilizados em eletrodos Au (SAM), e o sistema foi usado com sucesso para a deteco electroqumica de quantidades muito pequenas de RNA. Prope-se um ensaio de "duas cores" eletroqumico usando c 164modificao oligmeros de RNA juntamente com rotulado antraquinona monmeros UTP.455 Outro aspecto interessante a deteco de leses do ADN por hibridizao de uma sonda ferrocenylated ODN com ODNs imobilizados em um eletrodo de grafite. 456 O montante da sonda de hibridizao que DNA determinada como o andica pico atual de ferroceno por pulso diferencial voltammetry (DPV). Se o DNA amostra est danificado deliberadamente, por exemplo, pela ao dos radicais hidroxila, menos DNA sonda vincula e detectado um sinal menor. Esta instalao experimental, em seguida, foi usada para avaliar a eficincia da proteo de vrios absorvedores de radicais hidroxila, e os resultados foram encontrados para correlacionar bem com a literatura. Em seu trabalho na deteco de DNA de seqncia especfica, Fang et al. servir o vinculador mesmo Takenaka para ligao covalente de ferroceno para a extremidade 5' de oligmeros de DNA. No entanto, ferroceno foi anexado por meio de uma ligao de imina ao invs de amida. 457 Como uma alternativa ao Au ou grafite eletrodos, grupo de Fang props o uso de eletrodos de carbono vtreo que foram revestidas com um filme de oligmero quitosano. 458 Que isso carregado positivamente formulrios de polmero

complexos muito estveis com negativamente carregada DNA. Ainda o ADN hybridizes com uma sonda ODN complementar, que transporta um rtulo de ferroceno, levando a um sinal eletroqumico. Uma relao linear do pico andica atual para a quantidade de DNA imobilizado durante mais de 2 ordens de magnitude foi medida. Curiosamente, este livro tambm relata a reao do grupo amino primrio de um derivado de aminoferrocene com o grupo fosfato terminal de um ODN aps a ativao com imidazol e EDC.458 Para aplicaes futuras, o vinculador pode ser melhorado na direo de melhores propriedades de transferncia de eltrons, como mostrado pela Creager e colegas de trabalho. 459 Tambm, silcio pode vir a ser uma alternativa atraente para Au tambm para dispositivos eletroqumicos de DNA. 460 Por exemplo, Si/SiO2 superfcies podem ser modificados com oligonucleotdeos covalentemente ligados atravs de amino- ou do ligadores glycidoxysilane. 461.462 o evento de hibridao pode ser medido por mudanas na impedncia. Uma leitura direta do valor tm para dsDNA tambm possvel com um dispositivo desse tipo. 463 Wayner e colaboradores publicaram trabalhos sobre a ligao covalente modificao de superfcies de Si pela formao de vnculo directo siliconcarbon.464,465 Finalmente, foram feitas tentativas para fazer deteco electroqumica de DNA sem ter que usar ODNs metal-modificado.436 Isto ser possvel Imobilizadora captura ODN em um eletrodo, permitindo-lhe cruzar com o ADN do alvo e adicionando um electrocactive composto que ir interagir preferencialmente com dsDNA. Um grande nmero de compostos tm sido utilizado para deteco, incluindo complexos de Co, o brometo de ethidium e intercalante drogas como daunomicina. Grupo da Takenaka utilizou com sucesso pela vez ferroceno naphthalenediimide (177) como um segmento intercalador (regime 62). 466-468 Este sistema quimicamente muito robusto e altamente sensveis, atingir um limite de deteco de 10 zmol DNA com DPV.466 A sensibilidade do sistema poder ser reforada por ele de engate para uma reao enzimtica como a oxidao de glicose usando glucose oxidase (Deus).468 Alm disso, o sistema tem o potencial de deteco direta de incompatibilidade, determinando o nmero de molculas intercalares ou a taxa de transferncia de eltrons.467 Numa situao perfeita, uma molcula de 177 intercalada entre cada segunda base. Supe-se que esse nmero diminuir se a geometria local perturbada por uma incompatibilidade de base nica e menos eltrons sero transferidos menos rpido como um consequncia. Evidentemente, este sistema precisa calibrao cuidadosa e, provavelmente, otimizao para cada aplicao nica. Por outro lado, verstil no sentido de que um e o mesmo teste simples electroactive (177) usado para cada seqncia ODN para ser investigado, fazendo a sntese de rotulado de ferroceno ODNs com todos os problemas inesperados talvez desnecessrias. Um aplicativo que permite a anlise rpida de heterozygous deficincia do gene humano Lipoprotena lipase foi relatado.469 4.4. Ferroceno derivados de oligmeros e PNA monmeros cidos nucleicos de peptdeo (PNAs) so uma classe de anlogos de DNA, no qual o backbone de steres de fosfato de ribose substitudo por um backbone de pseudo-peptide. 470-472 As nucleobases esto ligados a esse backbone atravs de um carboxymethylene vinculador. 473.474 PNAs vincular a oligmeros de DNA ou RNA complementares de acordo com as regras de WatsonCrick com alta estabilidade475-480 e encontrei aplicaes em biologia molecular e agentes "antisense".471,472,481 Metzler-Nolte o grupo preparou os primeiros

organometlicos derivados de monmeros PNA. Os derivados ferroceneamine 81a foi usado para a reao com o C-terminal de um nmero de aminocidos e peptdeos derivados (ver seco 2.3.2). Da mesma forma, o T-PNA ferroceno derivados 178 (regime de 63) foi preparado. N- Fmoc protegendo o grupo pode ser facilmente removido em condies suaves e acoplamento a um segundo monmero de T-PNA possvel, produzindo o ferrocenylated PNA dmero 179. cido Ferrocenecarboxylic (40) tambm pode ser acoplado ao grupo amino de monmeros PNA usando HBTU como o agente de acoplamento para dar compostos 180 (T) e 181 (protegido por Z C).139 A ativao barreira g para a rotao sobre a amida terciria vnculo foi estabelecido por ferrocenylated T-PNA monmero 180 ser 75 0,5 kJ mol-1. Para 180, um TT self-association constante kTT = 2,5 0.2 m-1 foi medido por experimentos de diluio de NMR 1H em CDCl3. Em comparao, a associao constante kem para o par de base regular AT WatsonCrick foi encontrado para ser 78 9 M-1 (na seca CDCl3) atravs da mesma tcnica experimental, com 180 e tris (isoproplico) adenosina como um derivado de adenina solvel. Esses valores so tambm constantes a nica associao para monmeros PNA na literatura. Dentro dos limites experimentais, esses valores correspondem tambm aos valores de literatura, indicando que no h nenhum estabilizao adicional ou desestabilizao emparelhamento de backbone de amida PNA e (b) que WatsonCrick de emparelhamento base de base no seja prejudicada por metaloceno no N-terminal.

Regime de 63. Ferroceno derivados de PNA A primeira derivada bimetlica de monmeros PNA foi preparada no grupo Metzler-Nolte sob a forma de 183. Este composto foi preparado pela coordenao do fragmento2 Pt (PPh3) para a ferrocenyl T-PNA alquino 182. Como todos os monmeros PNA e oligmeros de cadeia simples, compostos 183 existe como uma mistura de cis-/trans-ismeros na ligao amida tercirio. Alm disso, ele mostra sinais de NMR caractersticos como conseqncia de acoplamento para dois ncleos de inequivalent 31P e o ncleo do Pt. Finalmente, ferroceno foi tambm incorporado oligmeros PNA por sntese de peptdeo slido-fase. 482 PNA the heptamer Fmoc-tggatcg-Gly foi preparado com o slido apoio por padro mtodos de sntese de Fmoc PNA. Aps desproteo do ltimo grupo Fmoc, o heptamer foi reagiu com ferrocenecarboxylic ativado cido sobre a resina. Clivagem da resina foi alcanada por metanlica amonaco com remoo simultnea dos grupos de proteo exocclico. Apenas um produto principal foi observado na fase inversa HPLC do produto bruto de reao (> 90%). O conjugado Fc-CO-tggatcg-Gly-NH2 (184) foi purificada por HPLC preparao e demonstra ter correto de massa por MS comparado a um tris (bipyridyl) Ru e um derivado de acetil da mesma seqncia, 184 foi, de longe a derivada menos hidroflica e, consequentemente, no muito solveis em solventes aquosas.

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1. Introduo 2. Conjugados do ferroceno com aminocidos e peptdeos 2.1.2. 1, 1'-Ferrocenylbisalanine e seus conjugados 2.1.3. Outros aminocidos baseado em Ferrocenyl 2.2.1. Amidas do cido Ferrocenecarboxylic 2.2.2. Amidas de ferroceno-1, 1'-cido dicarboxlico 2.3.2. Ferrocenylmethylamines atravs da reduo das iminas 2.4.2. Outros mtodos para rotular C-terminal 2.4.3. Outros mtodos para rotular N-terminal 2.4.4. Rtulos para o grupo tiol em cistena 2.4.5. Diversos 2.5.2. Peptdeo sntese atravs de reaes de quatro-componente com ferroceno alquilaminas 3. Conjugados do ferroceno com protenas 3.1.2. d-Aminocido Oxidase (DAAO) 3.1.3. Citocromo P450cEstou 3.1.4. Peroxidase de rbano 3.2.1. Imunoglobulinas 3.2.2. Albumina bovina (BSA) 3.2.3. Vrias protenas 4. Conjugados do ferroceno com DNA, RNA e PNA 4.2.1. Anlise de estabilidade frente e verso com oligmeros de Ferrocenylated 5. Conjugados do ferroceno com carboidratos 5.2.2. Dendrimers 6. Ferroceno conjugados com outras biomolculas 6.1.1. Hormnios esterides 6.1.2. Outros hormnios. 7. Futuras perspectivas

8. Confirmao de 9. A lista de abreviaturas 10. Referncias de 5. Conjugados do ferroceno com carboidratos

Com poucas excees, todos os derivados de acar ferroceno relatados at agora so derivados de ferrocenylmethyl ou steres, Tiosteres ou amidas obtidas de cido ferrocenecarboxylic. 1, 1'--Disubstituido ferroceno derivados so quase exclusivamente derivados do ferroceno-1, 1' cido dicarboxlico. Reaces tpicas foram os mesmos que os derivados do descrito nas sees anteriores, ou seja, alquilao com iodeto de trimethylferrocenylmethylammonium (154), formao de base de Schiff com ferrocenecarbaldehyde (67) seguido por reduo para a amina e reao com ativado carboxlico ferroceno (di). 5.1. Carboidratos derivados de ferroceno metilcicloexano Tabela 7 resume a maioria dos derivados de ferroceno Metilcicloexano simples descritos at agora. O primeira acar derivados de ferroceno foram relatados em 1961,483 apenas uma dcada aps a descoberta de ferroceno-se e quatro anos aps o primeiro relatrio sobre derivados do cido ferrocenylamino. Compostos 185b foi preparada a partir de hydroxymethylferrocene e 2.346-tetra-O-acetil- -d- glucopiranosidurnico brometo na presena de atrs e CaSO4, seguido por hidrlise base de acetil grupos protetores. Este composto foi usado em uma investigao cintica da hidrlise da ligao glicosdica e comparado a 186, que no gera o ction ferrocenylmethyl relativamente estvel.407.483 No entanto, os resultados deste estudo mais tarde foram corrigidos. 484 Da mesma forma, resultados cinticos da hidrlise de derivados a galactose 187b ajudaram a lanar luz sobre o mecanismo da enzima -galactosidase.485 Tabela 7. Carboidratos derivados de ferroceno

Tabela 7 (continuado)

Tabela 7 (continuado)

Em um estudo abrangente de preparao, Adam e Hall informaram a sntese de uma grande variedade de derivados de acar do ferroceno por diferentes mtodos. 486.487 Glucosamina derivados 190a foram obtidas Schiff formao base de aComissoadoptouumapropostaalterada com ferrocenecarbaldehyde (67),487 seguida de reduo. 488 Desta reao, N,N-bis(Fem) derivados 191a tambm poderia ser isolado.488 A formao de 191a paralelos do isolamento de (Fem)2Gly-OMe (76) mencionado na seco 2.3.2. Os mesmos compostos foram tambm facilmente preparados pela reao de Glucosamina com ferrocenylmethyl tosylate.487 , De facto, este reagente provou ser superior ao iodeto de trimethylferrocenylmethylammonium (154) em que os rendimentos mais elevados dos produtos desejados foram obtidos em condies mais amenas. Por exemplo, os derivados thiosugar 195a foi obtida em 2 dias a temperatura na forma pura enantiomerically, Considerando que a reao com 154 exigido refluxo em acetonitrila com anidro Na2CO3, levando a isomerizao no tomo de carbono anomrico (/ = 2:3). O glucopyranosylamine derivados 192a194a foram obtidos pela reao de glucopyranosylamine com 154 sob reteno de estereoqumica no tomo de carbono anomrico. 489 Hidrlise cuidado rendeu o desprotegido acares 192b194b. Compostos 190a e 191a poderiam ser deacetylated para produzir 190b e 191b por tratamento com resina Amberlite IRA 400 (OH) em metanol. Em seu estudo anterior, Adam e Hall foram possvel encontrar os derivados deprotected sem decomposio.487 Apenas os derivados thiosugar relativamente estvel 195b anteriormente poderia ser deacetylated com NaOMe em metanol. A preparao de trs derivados de acar imino de ferroceno tambm foi relatada por Schneider e Wenzel em 1979 (de glucosamina, galactosamina e mannosamine). 490 Hidrogenao cataltica em etanol na presena de PtO2 reduzido no s a c n ligao dupla, mas tambm o grupo aldedo amino acar, produzindo ferrocenylmethyl derivados de amino sorbit, dulcit amino e amino mannit. No entanto, nenhuma caracterizao mais alm de dados do MS foi relatada.490 Outra classe de solvel em gua ferrocenecarbohydrate conjugados foi relatado recentemente por Robinson e colegas de trabalho. Eles prepararam benzilo derivados 198o200a, que poderia ser deprotected por hidrogenao cataltica cuidadosa, produzindo o totalmente desprotegidos 198b200b.488 Compostos 198b tambm foi preparado por uma rota mais simples atravs do acetificados derivados 198 c, que foi deacetylated com xito usando a resina de IRA 400 (OH). O anomerically puro -d- glucopiranosidurnico derivados 196 foi obtido em uma reao de formao de vnculo de ligao em 31% de rendimento via a reao de alquilao de FriedelCrafts de uma mistura de anomrico (/ = 4:1) de benzilo protegido 1 -O- acetil -d- glucopyranose. 491 A mesma reao, tiofeno e benzeno deram rendimentos em 62% e 23%, respectivamente, como iria ser previsto de simples consideraes de densidade de eltrons do anel aromtico. Mais acetificados derivados listados na tabela 7 foram relatados por Adam e Hall (201, 205a, 207209; mas ver tambm Captulo 5.2 para derivados de ster de ferroceno-1, 1'-cido dicarboxlico).486,487,492 Em todas as preparaes, cloreto de cido carboxlico ferroceno (di) foi usado e anidrido de cido ferrocenecarboxylic observou-se frequentemente como um subproduto. O deprotected 207b pode ser obtido sem decomposio. Em um trabalho recente, Kraatz et al. relataram a sntese de 205b e 206 diretamente do ferrocenecarboxylic ativado cido benzotriazolo (43) e a Glucosamina desprotegida e glucosamido-2'-fosfato. Este livro tambm relata a sntese de 5'-ferrocenoylamidoadenosine (210); consulte o regime de 64.

493 Desses derivados de ferroceno solvel em gua foram submetidos a estudos eletroqumicos em soluo aquosa a valores de pH diferentes. A oxidao do 205b totalmente reversvel entre pH 2 e pH 9. A pH 12, no entanto, a oxidao torna-se irreversvel e prope-se um mecanismo de decomposio.

Regime de 64. 5'-Ferrocenylamidoadenosine 210

Regime de 65. Sntese de 2,3-(Ferrocene-1,1'-dicarbonyl)-O- -d- glucopiransido (212) e seus derivados

Figura 13 estrutura de single-crystal de raios-X de 212. Reimpresso da ref 499, pela permisso de The Real Sociedade de qumica (RSC) pelo Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS). Copyright 2002. 5.2. Carboidratos derivados de ferroceno-1, 1'-cido dicarboxlico5.2.1. steres 2,3-(Ferrocene-1,1'-dicarbonyl)-O- -d- glucopiransido (212) tem sido a chave iniciar material para um nmero de derivados, como resumido em regime de 65. Aplicativos como matrizes quirais foram avaliados pelos Itoh e colegas de trabalho,494-496 e aplicaes medicinais foram propostas pelos grupos de Itoh497.498 e Keppler.499

Regime de 66. Bifenil Ferrocenylated (220) e Binaphthyl (221), derivados de Ellagitannin Compostos 212 facilmente preparado pela reao de ferroceno-1, 1'--dicarboxlico cido cloreto (63) com 4,6 benzilideno-O-metil- -d- glucopiransido (211) para produzir 213, seguido por benzylidene desproteo (regime de 65).497.499 a estrutura slida deste composto mostrada na Figura 13. Reao de 212 com cloreto de cido carboxlico ferroceno (di) (41 ou 63) produz 214498 e 215,499 , respectivamente. 212, O dissacardeos 217 e 218 e o trissacardeo 216 foram obtidas em cerca de 50% render.498 Grupo do Itoh tem tambm preparou ferrocenoyl derivados 219221 de ellagitannins (regime 66),497 que constituem o principal ingrediente de curativo e paliativo de vrios medicamentos base de plantas tradicionais. Os derivativos bifenilo quiral 220 , bem como os derivados binaphthyl 221 realmente foram sintetizados na sua forma pura enantiomerically.497.498 Todos os ferroceno

derivados 212221 , bem como 202204 foram testados pela sua actividade antimalrico contra um sensvel cloroquina por p. falciparum estirpe.498 Todos os compostos foram muito menos ativos do que de quinino e nica (SD)-220 mostrou um valor de50 CE no intervalo de alta nanomolar. Surpreendentemente, todos os compostos mostraram atividade antitumor semelhante contra uma linha de celular do tumor mamrio rato com valores de50 CE bastante elevadas (cerca de 20 M). Keppler e colegas de trabalho mais tarde encontraram ainda pior citotxica atividade para 212 em quatro outro tumor linhas celulares.499 Em outro aplicativo interessante, grupo do Itoh tem sido capaz de resolver a mistura racmica de de ferroceno quiral planar 222 em puro enantiomerically R-222 por intermdio do acar 223 (regime 67).494 A configurao absoluta de 222 foi criada por uma combinao de mtodos computacionais, espectroscopia de CD e espectros de RMN de NOE H 1do intermedirio de acar 223. Tendo em conta que o acar protegido 211 barato e facilmente disponvel, este procedimento fornece uma maneira simples de metalocenos quirais planares enantiomerically puros. Enantiomerically puro R-222 posteriormente foi transformada em um diboronic cido derivados 224, que foi usado para complexantes uma variedade de diferentes acares (regime de 68).495 Vinculao de acares diferentes com diferente quiralidade absoluta foi monitorada por espectroscopia de UVvis e CD. Embora foram observadas alteraes marcadas aps a ligao, infelizmente no foi possvel determinar regras simples para prever ou explicar essas alteraes espectrais. Por outro lado, a vinculao preferencial para alguns acares poderiam ser racionalizados por impedimento estrico apinhamento usando modelagem molecular.496

Regime de 67. Quiral resoluo de derivados de ferroceno quiral Planar por intermdio de acar 223

Regime de 68. Enantiomerically puro ferroceno Di - boronic derivado do cido 224 por complexao de acares.

Parte superior da pgina 1. Introduo 2. Conjugados do ferroceno com aminocidos e peptdeos 2.1.2. 1, 1'-Ferrocenylbisalanine e seus conjugados 2.1.3. Outros aminocidos baseado em Ferrocenyl 2.2.1. Amidas do cido Ferrocenecarboxylic

2.2.2. Amidas de ferroceno-1, 1'-cido dicarboxlico 2.3.2. Ferrocenylmethylamines atravs da reduo das iminas 2.4.2. Outros mtodos para rotular C-terminal 2.4.3. Outros mtodos para rotular N-terminal 2.4.4. Rtulos para o grupo tiol em cistena 2.4.5. Diversos 2.5.2. Peptdeo sntese atravs de reaes de quatro-componente com ferroceno alquilaminas 3. Conjugados do ferroceno com protenas 3.1.2. d-Aminocido Oxidase (DAAO) 3.1.3. Citocromo P450cEstou 3.1.4. Peroxidase de rbano 3.2.1. Imunoglobulinas 3.2.2. Albumina bovina (BSA) 3.2.3. Vrias protenas 4. Conjugados do ferroceno com DNA, RNA e PNA 4.2.1. Anlise de estabilidade frente e verso com oligmeros de Ferrocenylated 5. Conjugados do ferroceno com carboidratos 5.2.2. Dendrimers 6. Ferroceno conjugados com outras biomolculas 6.1.1. Hormnios esterides 6.1.2. Outros hormnios. 7. Futuras perspectivas 8. Confirmao de 9. A lista de abreviaturas 10. Referncias de 5.2.2. Dendrimers

Credi e colaboradores publicaram recentemente um extenso estudo sobre contendo ferroceno dendrimers hidrato de carbono.Compostos de 500 225228 (regime de 69) foram preparados por acoplamento de cloretos de ferroceno, para o grupo amino dos acares protegidos. Desproteo do benzilo ou acetil derivados um alegou ser quantitativa. Reaes de transferncia de eltrons do ncleo do ferroceno foram investigado para todos os compostos de fundo. A mesma tendncia conforme mostrado para muitos outros derivados do cido carboxlico ferroceno prevalece. O potencial de oxidao de um eltron reversvel de ferroceno de cerca de 200 mV mais positiva para o disubstituido derivados 226 e 228 em comparao com 225 e 227. Por outro lado, potenciais para os compostos deprotected b, que foram determinadas em gua, foram consistentemente cerca de 200 mV mais positiva do que aqueles para protegidos derivados um (medido em acetonitrilo). Esta concluso foi atribuda a uma melhor estabilizao do on ferrocenium o meio aquoso mais polar. O disubstituido dendrimeric 228 mostrou um comportamento peculiar eletroqumico que sugere a presena de pelo menos duas espcies em soluo, possivelmente uma forma ciside e transoid de substitutents sobre os dois anis de Cp. A tmpera de luminescncia do animado [Ru(bpy)3]2++ mais rpido que a constante de taxa de difuso para o solvente. Isto leva concluso de que a etapa de limitao de taxa do processo de tmpera que dentro do complexo de encontro. O aumento observado na difuso corrigido tmpera taxa kCdR para maior derivados 227 e 228 corresponde ao aumento de proteo da fraco de ferroceno e est de acordo com o mecanismo de Dexter de troca de eltrons duplo. 501 Apenas o metilcicloexano derivados 225b e 227b foram complexados por -ciclodextrina (-CD) em soluo aquosa com estabilidade constantes kfacada de 2000 200 L mol-1 (225b) e 1300 200 L mol-1 (227b), respectivamente. Esses valores foram determinados eletroquimicamente. Uma mudana para potencial mais positivo para a oxidao de um eltron de ferroceno aps a adio de -CD prontamente foi explicada pelo fato de que os derivados de ferroceno complexado so eletroquimicamente inativos e, portanto, o processo de transferncia de eltrons deve ser precedido por decomplexation de -CD (Figura 14).502,503

Regime de 69. Ferroceno hidrato de carbono Dendrimers

Figura 14 cclica voltammogram de 225b na ausncia (linha completa) e presena (linha tracejada) de 10 equiv de -CD. soluo de 1 mM em H2O, 0,1 M NaClO4, eletrodo de carbono vtreo, 100 mV/s. Reprinted com permisso do ref 500. Copyright 2002 Wiley-VCH.

5.3. Ciclodextrinas Ciclodextrinas ser pode considerada como derivados de acar e tm sido estudadas na sua interaco com ferroceno. Em etileno glicol, ferroceno sozinho foi mostrado para ter uma posio axial de -CD, Considerando que uma posio equatorial foi assumida na cavidade maior de -CD, tal como sugerido por uma faixa de CD induzida positiva cerca de 450 nm para a incluso complexo Fc--CD e um CD similar mas negativo banda Fc--CD (Figura 15). 504 Mais detalhes, incluindo parmetros termodinmicos e estabilidade constantes em vrios solventes, tambm foram obtidos por amarrar a fraco de ferroceno covalentemente ao ncleo ciclodextrina.Detalhes estruturais 505-507 foram obtidos de clculos de modelagem molecular por dois grupos.508,509

Figura 15 CD espectros de ferroceno complexado CD de e -CD como anotado. Reproduzido com permisso do ref 504. Copyright 1990 A Royal Society of Chemistry. 5.4. Outros derivados de carboidratos Derivados do ferroceno encontraram uso generalizado auxiliares como quirais com aplicaes em catlise assimtrica. 44.510 Albinati et al. relatou a primeira utilizao de um ligante quiral baseado em ferroceno 229 derivada de thioglucose (regime de 70). 511 A Pd(II) alil complexo de 229 foi usado na alquilao de allicos de enantioselective de PhCH CHCH (OAc) Ph, dando uma nonoptimized ee de 88%. A base molecular para esta enantioseletividade facilmente foi explicada por uma anlise de estrutura de cristal do 229.

Regime de 70. Ferroceno acar Auxiliares quirais 229 para Pd-catalisada alquilao allicos At agora, grupo do Vasella preparou-todos o ferroceno quimicamente mais incomun derivados de acar que conhecemos. 512-514 Ciclopentadienila C-glicosdeos foram preparados como Fulvenos latentes.512 Reduo de4 LiAlH, seguida por formao de ter hidrolisvel, deu o totalmente protegido ciclopentadienila mannitols 230a. De forma semelhante, a reao com PhLi, seguido por formao de ter hidrolisvel, deu 230b. Lithiation de 230, seguido por adio de FeCl2 ou um Cp * Fe synthon, ento, deu a ferroceno derivados 231a,b e 232. Separao entre os trs diastereomers de outros, que se formou em uma relao de nonstatistical, por HPLC preparao oferecidas estas interessante metalocenos na sua forma pura stereochemically (regime de 71). A configurao destas estereoismeros foi deduzida a partir de 1H NMR dados. Relacionados sequncias de reaces deram os dois metalocenos 233 e 234 derivado fromribose e arabinosa, respectivamente. interessante notar que stereochemically quase puro compostos 233b foram obtidos em THF, em contraste com um excesso de baixa dia-stereomeric para outros. A estereoqumica no C-1 rigorosamente controlada nos precursores de phenylated de 233b e evidentemente mantida

pela seqncia de reao lithiation/mettese. O conseqnciado uma anlise da estrutura de raios-X de 234 mostrado na Figura 16.

Regime de 71. C-ligaes Ferrocenylated carboidratos, preparados por Vasella e colegas de trabalho

Estrutura de single-crystal Figura 16 raios-X de 234. Reproduzido com permisso do ref 512. Copyright 1994 Wiley-VCH. Anelados ferroceno derivados de hidratos de carbono foram relatados pelo mesmo grupo.513.514 a dimesylate de 1.346-tetra -O- metil -d-manitol 235 reagiu com CpNa para dar um spiro [4,4] nona-1,3-butadieno. Termlise deste composto oferecidas trs tetrahydroindenes isomricos, que poderia ser transformados o anelados C2-simtrica ferroceno 236a por lithia-o e reao com FeCl2.514 De forma relacionada, 236b e c foram obtidos (regime 72).513 C1-simtricas anelados ferrocenes foram obtidos de 2, 3:5, 6-di-Oisopropilideno-d- manitol (237) ou o correspondente tetra -O-derivado de metilo.513 Neste caso, uma mistura de 238, 239e 240 foi obtida com uma ligeira preferncia para 238a e 239b, respectivamente, sobre a relao estatstica (regime 73). Os derivados de isopropilideno poderiam ser deprotected por HCl em MeOH, produzindo 238 cc 240. Todos esses derivados deprotected foram bastante solveis em gua (pelo menos 100 g/L). 238A foi prontamente convertido em 1, 1'-diiododerivative (238e) atravs do chloromercuration (238 d, regime de 74). Neste documento,513 que as estruturas de cristal de 239a, 240ae 238 d foram relatados juntamente com acompanhamentos caracterizao NMR de todos os derivados.

Regime de 72. Anelados derivados de ferroceno hidrato de carbono 236

Regime de 73. C1-simtrica anelados derivados de ferroceno hidrato de carbono

Regime de 74. Cloreto do anelados ferroceno hidrato de carbono derivados 238um

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6.1.1. Hormnios esterides 6.1.2. Outros hormnios. 7. Futuras perspectivas 8. Confirmao de 9. A lista de abreviaturas 10. Referncias de 6. Ferroceno conjugados com outras biomolculas

Neste captulo, apresentam-se ferroceno conjugados de biomolculas que diferem das classes nas sees anteriores. s ateno biomolculas que so importantes para os mamferos, tais como hormonas e molculas envolvidas no metabolismo de lipdios. No comprometeram-se nenhum esforo para coletar relatrios no rtulo de biomolculas que desempenham um papel importante na Baixos organismos, como plantas (por exemplo, reguladores de crescimento) e insetos (feromnios por exemplo). 6.1. Ferroceno conjugados com hormnios Pptidos hormonais como encefalina j foram abordados na seo 2.

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2.5.2. Peptdeo sntese atravs de reaes de quatro-componente com ferroceno alquilaminas 3. Conjugados do ferroceno com protenas 3.1.2. d-Aminocido Oxidase (DAAO) 3.1.3. Citocromo P450cEstou 3.1.4. Peroxidase de rbano 3.2.1. Imunoglobulinas 3.2.2. Albumina bovina (BSA) 3.2.3. Vrias protenas 4. Conjugados do ferroceno com DNA, RNA e PNA 4.2.1. Anlise de estabilidade frente e verso com oligmeros de Ferrocenylated 5. Conjugados do ferroceno com carboidratos 5.2.2. Dendrimers 6. Ferroceno conjugados com outras biomolculas 6.1.1. Hormnios esterides 6.1.2. Outros hormnios. 7. Futuras perspectivas 8. Confirmao de 9. A lista de abreviaturas 10. Referncias de 6.1.1. Hormnios esterides

Os primeiros relatrios de hormonas esterides rotulados com a parte activa ferroceno ocorreram na literatura em 1977. 515.516 Riesselmann e Wenzel esterificado ferroceno carboxlico (40) com o grupo 3-OH de estradiol e estrona.515 Posteriormente, reaes de troca de metal com 103RuCl3 proporcionado o estradiol ruthenocene radioactivos e conjuga estrona. Esses derivados foram usados para estudar as propriedades de distribuio e de apuramento do rgo em ratos. Cais e colegas de trabalho prepararam rotulado de ferroceno esterides derivados de imunoensaios. 516.517 Pela primeira vez, eles mostraram que a introduo de um metal complexos em um biomolecule permite a quantificao de biomolculas sem rtulo em um ensaio competitivo por meio de espectroscopia de absoro atmica. Seu mtodo hoje em

dia conhecido sob o ensaio do termo metallo imuno. Outros mtodos de deteco de metalespecficos, tais como espectroscopia de IR (metallo imuno ensaio de carbonilo, CMIA) deteco de518.519 e amperomtricos (veja abaixo), tambm tm sido explorado. Em particular, o hormnio esteride estradiol 241 tem sido objecto de rotulagem extensa com o grupo de ferroceno. Uma viso geral do conjugados relatados dado na tabela 8 (ver tambm regime 75). Dois muito interessante ferroceno conjugados no esto includos nesta tabela, ou seja, 17-ferrocenyl-17-estradiol (242)520-522 e 17-ferrocenylethynyl-17estradiol (243); 523.524 ver esquema 76. A estrutura molecular do 242 est descrita na Figura 17. Curiosamente, estes conjugados foram encontrados para ter uma afinidade de ligao relativo (RBA) de 8% e 28% para o -receptor de estrgeno (ER). Esses valores so resumidos na tabela 9, juntamente com vrios outros conjugados de estradiol organometlicos mononucleares (regime 77). Um chins grupo introduziu mais um radiolabel de 3H em 242.525

Regime de 75. Estradiol 241 e substitudo derivados seu (inferior)

Regime de 76. Estrutura molecular do 17-Ferrocenyl-17-estradiol (242) e 17Ferrocenylethynyl-17-estradiol (243)

Estrutura de single-crystal Figura 17 raios-X de 242. Reimpresso (com modificaes) com permisso de ref 521. Copyright 1994 Elsevier.

Regime de 77. Derivados de estradiol testados pelo Receptor vinculao (tabela 9) Tabela 8. Viso geral sobre o relatado ferroceno 17-Estradiol derivadosum R1 R2 R3 Ref

CO

Fc

AH

515

AH

CO

Fc

515, 528

CO

Fc

CO

Fc

528

AH

CO (CH2)2 CH2 Fc

CO

NH H

516, 517, 529

AH

CO (CH2)2 CH2 Fc

CO

NH O CO (CH2)2 NH CH2 Fc

CO

517, 529

CH2 CO CH2 Fc

NH AH

529

CH2 CO CH2 Fc

NH AH

AH

529

AH

NH NH

CO (CH2)2 CH2 Fc

CO

517

OCH3

Ahum

CH

Fcb

530c

OCH3

Ahum

NH

CH2

Fcb

530c

um 17-ferrocenyl e 17-ferrocenylethynyl derivados 242 e 243 no esto includos nesta tabela. b Tambm foi relatado o composto com a geometria invertida neste tomo de carbono. c Estrutura cristalina de raios-X relatada nesta referncia. Tabela 9. Parente vinculao afinidade (RBA) de alguns derivados de Estradiol organometlicos mononucleares ao Receptor ER, b (ver esquema 77) R RBAum Refb

FC

531c

(-C5H4)RU(CP)

531c

- -Fc

28, 37d

524c

(-C6H5)CR(co)3

11

532

- -(-C6H5) Cr(CO)3

24

532

- -(-C5H4) Mn(CO)3

15

533

- -(-C5H4) Re(CO)3

16

533

CH2-(-C5H4) Mn(CO)3

2.5

533

CH2-(-C5H4) Re(CO)3

0.8

533

*Ru(Cp*) (-C5H4)]OTf

532

um Valores RBA determinados em um ensaio de ligao radioreceptor competitiva a 0 c. b Para exemplos de estradiol conjugados com dinuclear complexos organometlicos, consulte refs 534 e 535. c Estrutura cristalina relatada de raios X. d RBA ao receptor de ER. O ER o primeiro subtipo de receptor que foi descoberto e clonado. 526 Em 1996, um segundo receptor de estrgeno, denominado ER, foi identificado e clonado. 527 At o momento, apenas a afinidade de 17-ferrocenylethynyl-17-estradiol para o ER foi determinada para ser 37% de estradiol (tabela 9). Dois relatrios em uma fmea diferente sexual hormnio estrona 244 apareceu na literatura (ver quadro 10 e esquema de 78).523.529 Em um papel diferente, Shimada et al. rotulada a posio 3 glucoronides de estradiol e estrognio com a parte de Fem activa para investigaes de HPLC-ECD.536 Em um livro relacionado, o grupo de Shimada tambm investigou cloreto de

hydroxysteroids, tais como o estrognio e dehidroepiandrosterona, com vrios reagentes de ferroceno.537

Regime de 78. Estrona 244 e derivados (propertiesclick) Tabela 10. Constituio dos derivativos estrona relatado (regime de 78) R1 R2 Ref

AH

CH

Fc

523

CH2

CO

NH

CH2

Fc

529

Tabela 11. Viso geral dos derivativos relatado Ferrocenylated colesterol (regime 80) R1 R2 Ref

OcoFC

528

Ococh2Fc

538

Oco (CH2)4Fc

538

NHch2Fc

530

N (Ac) CH2Fc

530

NHch2Fc

AH

530

Apenas um exemplo de um ferroceno-rotulado conjugada 246 do hormnio sexual masculino testosterona 245 foi relatado. 515.528 Este derivado mostrado no esquema de 79.

Regime de 79. Testosterona 245 e derivados (inferior) Uma variedade de derivados do colesterol ferroceno foram preparados. Uma viso geral destes dado na tabela 11 e regime de 80. Note-se que um esteride derivado com alguma semelhana com colesterol foram comunicado muito recentemente por Coutoli-Argyropoulou et al. atravs de acoplamento Sonogashira.402

Regime de 80. Colesterol (topo) e derivados (baixo, ver tabela 11) Em seu trabalho de doutorado, Koller sintetizada uma variedade de esterides derivados em que um ncleo de ferroceno serviu como o anel (ver esquema 75).539 Vrios desses derivados foram selecionados para a atividade antibacteriana e inibindo a pepsina. Em concentraes de 100 g/mL, todos estes compostos exibiram propriedades antibacterianas, Considerando que apenas um foi encontrado para exibir uma actividade significativa inibindo a pepsina.

Parte superior da pgina 1. Introduo 2. Conjugados do ferroceno com aminocidos e peptdeos 2.1.2. 1, 1'-Ferrocenylbisalanine e seus conjugados 2.1.3. Outros aminocidos baseado em Ferrocenyl 2.2.1. Amidas do cido Ferrocenecarboxylic 2.2.2. Amidas de ferroceno-1, 1'-cido dicarboxlico 2.3.2. Ferrocenylmethylamines atravs da reduo das iminas 2.4.2. Outros mtodos para rotular C-terminal 2.4.3. Outros mtodos para rotular N-terminal 2.4.4. Rtulos para o grupo tiol em cistena

2.4.5. Diversos 2.5.2. Peptdeo sntese atravs de reaes de quatro-componente com ferroceno alquilaminas 3. Conjugados do ferroceno com protenas 3.1.2. d-Aminocido Oxidase (DAAO) 3.1.3. Citocromo P450cEstou 3.1.4. Peroxidase de rbano 3.2.1. Imunoglobulinas 3.2.2. Albumina bovina (BSA) 3.2.3. Vrias protenas 4. Conjugados do ferroceno com DNA, RNA e PNA 4.2.1. Anlise de estabilidade frente e verso com oligmeros de Ferrocenylated 5. Conjugados do ferroceno com carboidratos 5.2.2. Dendrimers 6. Ferroceno conjugados com outras biomolculas 6.1.1. Hormnios esterides 6.1.2. Outros hormnios. 7. Futuras perspectivas 8. Confirmao de 9. A lista de abreviaturas 10. Referncias de 6.1.2. Outros hormnios.

Os dois relacionados com hormonas da tiride triiodotironina (T3) e tiroxina (T4) tem sido rotuladas com a parte activa do ferroceno (regime 81). Considerando que a antiga s foi rotulada com cido de ferrocenecarboxylic (40) para produzir 247,353 , este ltimo foi rotulado com ambos a parte ferrocenoyl activa, atravs da formao de amida com cido ferrocenecarboxylic (248),540 e a fraco Fem, atravs da formao de imina com ferrocenecarbaldehyde (67) e subsequente reduo com NaBH4 (249).541 T the3 e T4 conjugados foram empregados na amperomtricos imunoensaios. O immunosensors construdos com os derivados de ferroceno de4 T permitido um limite de deteco para T4 de 15 nM.540,541

Regime de 81. Triiodotironina e conjugados de Thyroxin 6.2. Vrias biomolculas Uma classe de biomolculas que no tem sido rotuladas extensivamente molculas envolvidas no metabolismo de lipdios. Por exemplo, quase nenhum conjugados do ferroceno com cidos graxos foram relatados at agora. Nambara e colegas de trabalho relataram a determinao de 10 cidos graxos por HPLC-ECD aps derivatizao com 3-bromoacetyl-1, 1'dimethylferrocene (250) (regime de 82).542 O mtodo mostrou um limite de deteco to baixo quanto 0,5 pmol e era adequado para determinao direta de vrios cidos graxos no soro humano. Um conjugado de ferroceno com outro constituinte de gorduras, ou seja, glicerol, foi relatado.543.544 Sokolov e Troitskaya usado o complexo ferrocenylorganopalladium dimrica 251 sintetizar glicerol opticamente ativos derivados 252 atravs de uma reao de carbonilao diastereoselective (regime 83). O grupo de ferrocenoyl neste caso funciona como um grupo de proteo que pode ser removido por hidrlise de base.

Regime de 82. Um reagente ferroceno 250 que foi usado para o cloreto de cidos gordos

Regime de 83. Sntese dos derivados do glicerol 252 Uma molcula importante para o metabolismo dos fosfolpidos colina. Um derivado de ferrocenylcholine foi preparado e testado por sua capacidade de inibir a hidrlise de butirilcolina pela butirilcolinesterase de soro de cavalo de enzima.545 O Keu do conjugado ferrocenylcholine estava determinado a ser 9,63 10-6 M/l. Em um trabalho muito recente, descrita a sntese de ferrocenetheophylline conjugados para uso em um imunoensaio eletroqumico.546 Tal sistema foi originalmente proposto usar ferrocenemorphine conjuga547 e posteriormente foi aplicado a outras drogas, como a lidocana.548 Condensao de cidos carboxlicos ferrocenylalkyl 5,6-diamino-1,3dimethyluracil (253) produz ferrocenylalkyltheophylline conjugados 254 com alquil diferente comprimentos de cadeia (regime de 84).549 Functionalization do anel Cp unsubstituted tambm possvel por acetilao FriedelCrafts ou por metilao. Uma reao de Mannich produz derivados amino tercirios, embora como uma mistura de ismeros que no poderiam ser facilmente separados. A mistura foi alquilada para produzir mais de hidroflico ferroceno quaternrio de amnio sais com cadeias de laterais de teofilina pendente. Os conjugados foram avaliados em um imunoensaio homogneo e competitivo para teofilina com deteco de amperomtricos.546 O sistema foi acoplado amplificao de oxidase/glicose enzimtica da glicose. Infelizmente, o sistema original tinha sensibilidade pobre no intervalo clinicamente

relevante das concentraes. A sensibilidade poderia ser melhorada, no entanto, quando os catinicos conjugados de Mannich do teofilina foram usados.

Regime de 84. Ferrocenylalkyl derivados de teofilina (254)

Parte superior da pgina 1. Introduo 2. Conjugados do ferroceno com aminocidos e peptdeos 2.1.2. 1, 1'-Ferrocenylbisalanine e seus conjugados 2.1.3. Outros aminocidos baseado em Ferrocenyl 2.2.1. Amidas do cido Ferrocenecarboxylic 2.2.2. Amidas de ferroceno-1, 1'-cido dicarboxlico 2.3.2. Ferrocenylmethylamines atravs da reduo das iminas 2.4.2. Outros mtodos para rotular C-terminal 2.4.3. Outros mtodos para rotular N-terminal 2.4.4. Rtulos para o grupo tiol em cistena 2.4.5. Diversos 2.5.2. Peptdeo sntese atravs de reaes de quatro-componente com ferroceno alquilaminas 3. Conjugados do ferroceno com protenas 3.1.2. d-Aminocido Oxidase (DAAO) 3.1.3. Citocromo P450cEstou 3.1.4. Peroxidase de rbano 3.2.1. Imunoglobulinas 3.2.2. Albumina bovina (BSA) 3.2.3. Vrias protenas 4. Conjugados do ferroceno com DNA, RNA e PNA 4.2.1. Anlise de estabilidade frente e verso com oligmeros de Ferrocenylated 5. Conjugados do ferroceno com carboidratos

5.2.2. Dendrimers 6. Ferroceno conjugados com outras biomolculas 6.1.1. Hormnios esterides 6.1.2. Outros hormnios. 7. Futuras perspectivas 8. Confirmao de 9. A lista de abreviaturas 10. Referncias de 7. Futuras perspectivas

O trabalho resumido neste artigo testemunho impressionante para o desenvolvimento do campo nos ltimos 50 anos. Rotas de sntese qumica tem foi concebidas para criar conjugados do ferroceno com todos os tipos diferentes de biomolculas, conforme descrito em vrias sees acima. Naturalmente, grande parte desta pesquisa foi guiado por curiosidade qumica e o principal objetivo era "fazer" o composto ou classe de compostos. Alm disso, muito esforo tem se dedicado a caracterizao estrutural e espectroscpica. Para trabalho futuro, ns esperamos ver mais funcional caracterizao de bioconjugates de ferroceno, juntamente com sintticos esforos para chegar a um destino especfico molecular com propriedades projectadas. Tais compostos devem capitalizar as propriedades exclusivas do ncleo metaloceno. Em termos de propriedades estruturais, seria certamente o preorganization dos anis ciclopentadienila a uma distncia fixa, juntamente com um certo grau de liberdade devido rotao sem impedimentos dos anis uns contra os outros. Isso pode levar a uma situao onde um host ligado a um conjugado de ferroceno em um ajuste "induzida". Tal situao anloga certas protenas, onde a conformao das mudanas de protenas aps a ligao do ligante e uma reao ou um sinal molecular iniciada. O sinal de ferroceno seria, por exemplo, uma alterao nas propriedades eletroqumicas.