Manual de capacitación para diagnóstico microscópico de malaria

Secretara de Salud Direccin General de Vigilancia de la Salud Departamento de Laboratorio Nacional de Vigilancia Laboratorio Nacional de Malaria
Manual de Capacitacin para el Diagnstico Microscpico de Malaria
Tegucigalpa M.D.C
Sec r
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Honduras, 2010
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Fondo Mundial
Secretara de Salud Direccin General de Vigilancia de la Salud Departamento de Laboratorio Nacional de Vigilancia Laboratorio Nacional de Malaria
Tegucigalpa M.D.C
Honduras, 2010
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Ttulo:
Autores:
Dra. Rosa Elena Meja, MQC Dr. Engels Banegas, MQC Adela Fuentes
Diagramacin:
Impresin:
Publigrficas
Edicin:
Febrero, 2010
Tiraje:
Autoridades de la Secretaria de Salud Dr. Arturo Bendaa Secretario de Estado en el Despacho de Salud Lic. Miriam Paz Sub-Secretaria de Riesgos Poblacionales Dr. Tomas Guevara Director General de Vigilancia de la Salud Dr. Jos Orlinder Nicolas Jefe Programa Nacional de Prevencin y Control de la Malaria Dra. Mara Luisa Matute Jefe del Departamento de Laboratorio Nacional de Vigilancia
Elaborado por: Dra. Rosa Elena Meja Jefe Laboratorio Nacional de Parasitologa Dr. Engels Ilich Banegas Laboratorio Nacional de Malaria
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Revisin Tcnica del Manual de Capacitacin Para Diagnstico Microscpico de Malaria En octubre del 2009, se realiz la reunin para la revisin tcnica del Manual de Capacitacin Para Diagnstico Microscpico de Malaria. Se reconoce y agradece la participacin y aporte del personal de salud del nivel central, departamental y local que se listan a continuacin.
Departamento de Laboratorio Nacional de Vigilancia, Secretara de Salud Dra. Jssica Henrquez, Laboratorio Nacional de Malaria Dra. Yesica Rodrguez, Laboratorio Nacional de Malaria Dra. Carla Lanez, Laboratorio Nacional de Malaria Mc. Amrica Gonzlez, Laboratorio Nacional de Malaria Regiones Departamentales, Secretara de Salud Dra. Nelly Amador, Laboratorio Regin Departamental de Corts Dra. Olga Lidia Garca, Laboratorio Regin Departamental de Olancho Mc. Jos Andrs Torres, Microscopista, Centro de Salud de Jutiapa, Atlntida Mc. Daisy Gonzales, Microscopista, Centro de Salud de Comayagua, Comayagua. Mc. ngela Andrade, Laboratorio Regin Departamental de Corts Mc. Isolina Lazo, Laboratorio Regin Departamental de Choluteca Tc. Ana Almendres, Laboratorio Clnico Hospital de La Paz Mc. Anarda Euceda, Laboratorio Regin Departamental de Comayagua Tc. Leslie Alfonso, Laboratorio Clnico Centro de Salud El Confite, Atlntida Tc. Jess Suazo, Laboratorio Regin Departamental de Comayagua
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CONTENIDO
Autoridades de la Secretara de Salud..................................................................................... i Revisin Tcnica........................................................................................................................ ii Introduccin............................................................................................................................... 1 Mdulo I Malaria, La enfermedad............................................................................................................... 3 Mdulo II Bioseguridad................................................................................................................................ 4 Mdulo III Uso y cuidados del microscopio Material de Vidrio, Limpieza, Almacenamiento de lminas portaobjetos, Uso y cuidado del microscopio.................................................................................................................................. 5 Mdulo IV Preparacin de soluciones y colorantes...................................................................................... 6 Mdulo V Toma de muestra para el diagnstico de malaria........................................................................ 7 Mdulo VI Coloracin de gota gruesa y extendido fino................................................................................. 8 Mdulo VII Elementos presentes en la sangre, microorganismos y artefactos.............................................. 9 Mdulo VIII Caractersticas Morfolgicas de Plasmodium.spp ...................................................................... 10 Mdulo IX Observacin Microscpica de las muestras de sangre................................................................ 11 Mdulo X Subsistema de informacin.......................................................................................................... 12 Mdulo XI Red de Laboratorios y Gestin de la calidad............................................................................... 13 Bibliografa ................................................................................................................................ 15 Anexos ....................................................................................................................................... 17
Na ciona c ia l de Vigilan

INTRODUCCIN
Pgina 1 de 35 Fecha: Febrero, 2010
La Malaria o Paludismo es una enfermedad parasitaria, causada por parsitos del gnero Plasmodium y transmitida a travs de la picadura del mosquito hembra del gnero Anopheles. Es una enfermedad endmica y trasmisible en las zonas tropicales y subtropicales del mundo, y es una de las principales causas de morbilidad y mortalidad a nivel mundial. La Organizacin Mundial de la Salud (OMS) estima que anualmente ocurren ms de 200-300 millones de infecciones de malaria y que, 1,5 a 2,5 millones de personas fallecen como consecuencia de esta enfermedad. Esto supone una amenaza para 200 millones de personas, dado que deteriora la salud y bienestar de la poblacin econmicamente activa, disminuyendo los escasos recursos de muchos pases en vas de desarrollo. Al igual que otras parasitosis las mujeres embarazadas y los nios menores de 5 aos son las poblaciones ms susceptibles a esta enfermedad. (World Malaria Report 2008. Geneva, World Health Organization, 2008.) La malaria es la enfermedad parasitaria ms importante. Tambin puede ser transmitida por transfusin sangunea, va placentaria o durante el parto. La reproduccin asexual de los parsitos en la fase sangunea es la responsable de las manifestaciones clnicas. Los gametocitos (estados sexuales sanguneos) son los responsables de la transmisin y los estados latentes hepticos de P. vivax y P. ovale son los responsables de las recadas. El diagnstico microscpico es un mtodo sensible y especfico para la identificacin de la especie y estados de los parsitos Plasmodium. La toma de la muestra, su procesamiento y su observacin microscpica por un microscopista capacitado pueden ser relativamente sencillos. Sin embargo, el factor humano hace que la calidad de la tcnica sea variable por lo que podemos observar personal con la misma capacitacin desempeando funciones con diferente nivel de responsabilidad. La calidad y reproducibilidad del procedimiento y de los reactivos son factores crticos para un diagnstico microscpico de una calidad aceptable. La malaria en las Amricas contina siendo un reto a pesar de los avances de salud en la regin. Los problemas de salud se originan a partir de factores de riesgo relacionados con cambios demogrficos, climticos, sociales y econmicos. El presente Manual de Capacitacin Para Diagnstico Microscpico de la Malaria, tiene como propsito contribuir a que el personal que trabaja en Salud Pblica, cuente con una herramienta que sirva para capacitar al personal voluntario y personal institucional, como Tcnicos en Salud Ambiental, Enfermeras, Microscopista, Tcnicos de Laboratorio, Microbilogos, Clnicos y Epidemilogos, en llenado de formularios, toma de muestras, coloracin, transporte, canalizacin de muestras y diagnstico de los mismos procedimientos descritos en el Manual de Procedimientos Operativos Estndar para el Diagnostico Macroscpico de la Malaria, Septiembre 2006. Incluye fundamentos, procedimientos y anlisis de los resultados obtenidos, todos ellos factibles de realizar en los diferentes niveles de atencin de salud, para poder ofrecer un diagnstico rpido y de calidad para un tratamiento oportuno.
Manual de Capacitacin para el Diagnstico Pgina 3 de 35 Fecha: Febrero, 2010 Microscpico deManual de Capacitacin 2010 Malaria
MDULO I MALARIA, LA ENFERMEDAD En este mdulo, los estudiantes conocern la importancia de la malaria como enfermedad, signos y sntomas ms comunes, pacientes asintomticos, cual es el parsito que produce la infeccin, identificacin, diagnstico y densidad parasitaria de las muestras de sangre coloreadas y examinadas al microscopio. Objetivos de la Capacitacin: Al final de este mdulo, el estudiante ser capaz de conocer: 1. 2. 3. 4. Que es la Malaria y la importancia de esta como enfermedad? Determinar las vas de transmisin, signos y sntomas que se presenta en la matriz Conocer el ciclo de vida del Plasmodiun spp. Conocer los diferentes mtodos de diagnostico de la Malaria y su Tratamiento
Temas a desarrollar: 1. 2. 3. 4. 5. 6. Fuente: Manual de Procedimientos Operativos Estndar para el Diagnostico Microscpico de la Malaria, Septiembre/2006 Tiempo recomendado para el desarrollo del tema: 16 Horas Malaria la enfermedad. Ciclo de vida del Plasmodium spp. Aspectos generales de la Malaria (Clinica, Epidemiologica). Aspectos epidemiolgicos y clnicos Diagnstico y Tratamiento. Importancia de un diagnstico de calidad.
MDULO II BIOSEGURIDAD El personal involucrado en la toma de las muestras, debe seguir lineamientos de bioseguridad ya que todas las muestras biolgicas deben ser consideradas como potencialmente infecciosas. En este mdulo, los estudiantes conocern las medidas bsicas de bioseguridad que se deben utilizar en los laboratorios clnicos al igual que la preparacin de soluciones necesarias para el desarrollo de buenas prcticas dentro del laboratorio. Objetivos de la capacitacin: Al final de este mdulo, el estudiante ser capaz de conocer: 1. Definir que es la Bioseguridad. 2. Conocer cuales son los elementos de proteccin con los que debe contar al momento de la toma y procesamiento de la malaria. 3. Conocer las buenas practicas de Bioseguridad dentro del laboratorio. 4. Describir los pasos para la preparacin. Temas a desarrollar: 1. Bioseguridad: Definicin y generalidades. 2. Equipo de Proteccin Personal (EPP), dentro del laboratorio y su uso (guantes, gabachas, mascarillas, lentes, etc). 3. Normas de bioseguridad para trabajar dentro de un laboratorio. 4. Uso de soluciones desinfectantes y antispticas. Prctica de Laboratorio: 1. Revisin de los materiales e insumos 2. Preparacin de solucin desinfectante y antispticos para uso en el laboratorio. Fuente: Manual de Procedimientos Operativos Estndar para el Diagnostico Microscpico de la Malaria, Septiembre/2006, Capitulo 2. Manual de Bioseguridad para Laboratorios Clnicos, Departamento de Laboratorio Nacional de Vigilancia, Secretara de Salud, Tegucigalpa, Honduras 2009 Tiempo recomendado para el desarrollo del tema: 8 Horas
MDULO III MATERIAL DE VIDRIO, LIMPIEZA, ALMACENAMIENTO DE LMINAS PORTAOBJETOS Y USO DEL MICROSCOPIO En este mdulo el estudiante aprender a conocer el material de vidrio, almacenamiento y limpieza de las lminas portaobjetos. Objetivos de la capacitacin: 1. Describir los procedimientos para la limpieza y almacenamiento de lminas portaobjetos. 2. Hacer la seleccin de lminas portaobjetos adecuadas para la toma de muestra hemtica. 3. Describir los materiales de vidrio, equipos, su uso y funcionamiento. 4. Describir las partes, uso y mantenimiento del microscopio. Temas a desarrollar: 1. Descripcin, uso y funcionamiento de material de vidrio y equipos utilizados en el laboratorio. 2. Procedimiento para el mantenimiento de lminas portaobjetos nuevas y usadas para la toma de muestras de sangre (lminas limpias y almacenadas segn procedimientos estndares). 3. Seleccin de lminas portaobjetos adecuadas para preparar muestras hemticas. 4. Microscopio: Descripcin y uso de cada una de sus partes. Prctica de laboratorio: 1. Revisin del material de vidrio, limpieza y almacenamiento. 2. Lavado, secado y almacenamiento de las lminas portaobjetos nuevas y usadas para muestras de sangre. 3. Revisin de microscopio y descripcin de sus partes Fuente: Manual de Procedimientos Operativos Estndar para el Diagnostico Microscpico de la Malaria, Septiembre/2006, Capitulo 2, 8 y 9. Tiempo recomendado para el desarrollo del tema: 16 Horas
MDULO IV PREPARACIN DE SOLUCIONES Y COLORANTES Para la obtencin de un diagnstico de calidad la preparacin de soluciones (solucin stock de Giemsa) y reactivos a utilizar es fundamental, por lo que se requiere que el personal de laboratorio sea capaz de preparar las diferentes soluciones de trabajo para el buen desempeo de las actividades. Objetivos de la capacitacin: 1. Conocer las soluciones y colorantes utilizados en la coloracin de las muestras. 2. Describir los pasos necesarios para la preparacin de las soluciones de trabajo en el laboratorio. 3. Evaluar la calidad de los colorantes y soluciones preparadas. Temas a desarrollar: 1. Reactivos y soluciones de laboratorio: 1.1 Descripcin de los colorantes utilizados en el laboratorio (Reactivo de Giemsa, alcohol metlico, alcohol etlico, agua destilada, solucin amortiguadora, glicerina, aceite de inmersin). 1.2 C lculos matemticos, para preparar las soluciones de trabajo: Conversiones, Regla de tres. Prctica de laboratorio: 1. Preparacin de solucin de trabajo (solucin stock de Giemsa) 2. Preparacin de solucin amortiguadora (preparacin de solucin A y solucin B). Fuente: Manual de Procedimientos Operativos Estndar para el Diagnostico Microscpico de la Malaria, Septiembre/2006, Capitulo 2. Tiempo recomendado para el desarrollo del tema: 4 horas
MDULO V TOMA DE MUESTRA PARA EL DIAGNSTICO DE LA MALARIA En este mdulo se evaluar los procedimientos para toma de matriz hemtica, identificacin, almacenamiento, transporte de las laminas cumpliendo con los criterios de calidad capacitando as al personal de salud en como se realiza una gota gruesa y extendido fino cumpliendo los criterios de calidad descritos en el Manual de Procedimientos Operativos Estndar para el Diagnostico Microscpico de la Malaria. Objetivos de la capacitacin: 1. Describir los pasos necesarios para la toma de muestra hemtica (gota gruesa y extendido fino) de calidad (identificacin de gota gruesa y extendido fino, errores y aciertos en la identificacin). 2. Conocer la forma correcta de identificacin de las muestras hemticas. 3. Establecer los procedimientos de almacenamiento y transporte de muestras hemticas a la unidad de diagnstico ms cercana. Temas a desarrollar: 1. 2. 2.1 2.2 2.3 2.4 2.5 Descripcin del mtodo utilizado para el diagnstico de la malaria: gota gruesa y extendido fino (ventajas y desventajas de los dos mtodos). Toma de muestra hemtica: Materiales e insumos para la toma de muestra. Procedimientos para la gota gruesa y extendido fino. Identificacin de muestras hemticas. Almacenamiento y transporte de muestras hemticas al laboratorio ms cercano. Caractersticas de una gota gruesa y extendido fino de calidad (grosor, ubicacin, tamao e identificacin).
Prctica de laboratorio: 1. Revisin del procedimiento de toma de muestra hemtica por el mtodo de gota gruesa y extendido fino. 2. Realizacin de gota gruesa y extendido fino en la misma lmina. 3. Identificacin de muestras hemticas. 4. Almacenamiento de muestras hemticas. Fuente: Manual de Procedimientos Operativos Estndar para el Diagnostico Microscpico de la Malaria, Septiembre/2006, Capitulo 2. Tiempo recomendado para el desarrollo del tema: 4 horas.
MDULO VI COLORACIN DE GOTA GRUESA Y EXTENDIDO FINO Al realizar un buen proceso de coloracin de las muestras hemticas (Gota gruesa y extendido fino) se puede observar las diferentes estructuras morfolgicas de los parsitos, lo que facilita la identificacin de los diferentes estadios de Plasmodium spp. Objetivos de la capacitacin: 1. Conocer las formas correctas e incorrectas de manejar y utilizar el colorante Giemsa. 2. Realizar coloracin de la gota gruesa y extendido fino para el diagnstico de malaria. Temas a desarrollar: 1. Descripcin de los procedimientos de coloracin con Giemsa. 2. Preparacin de la solucin de trabajo (Solucin stock de Giemsa ms solucin amortiguadora) para colorear muestras de gota gruesa. Prctica de laboratorio: 1. Preparacin de los materiales y soluciones utilizadas en la coloracin de muestras hemticas con el reactivo de Giemsa. 2. Preparacin de la solucin de trabajo para colorear 1 muestra, 5 muestras, 10 muestras y 20 muestras hemticas. 3. Coloracin de gota gruesa y extendido fino. 4. Evaluacin de la calidad de la coloracin (Deshemoglobinizacin, tonalidad y precipitado). Fuente: Manual de Procedimientos Operativos Estndar para el Diagnostico Microscpico de la Malaria, Septiembre/2006, Capitulo 2. Tiempo recomendado para el desarrollo del tema: 4 horas.
MDULO VII ELEMENTOS PRESENTES EN LA SANGRE, MICROORGANISMOS Y ARTEFACTOS Es de vital importancia para un buen diagnstico, la correcta identificacin de cualquier estructura normal, la presencia de artefactos y otros microorganismos que pueden observarse en la gota gruesa y extendido fino. Objetivos de la Capacitacin: 1. Identificar los elementos presentes en muestras de gota gruesa y extendido fino. 2. Conocer otros microorganismos que pueden encontrarse en la sangre (Trypanosoma, Histoplasma, Leishmania, Babesia, microfilarias). 3. Reconocer los artefactos comunes, presentes en una muestra hemtica. Temas a desarrollar: 1. Definicin de la sangre. 2. Identificacin de cada uno de los elementos formes de la sangre, (Eritrocitos, Leucocitos y Plaquetas) sus caractersticas en gota gruesa y extendido fino. 3. Microorganismos y artefactos que se pueden presentar en la sangre. Prctica de Laboratorio: Observacin microscpica de muestras de gota gruesa y extendido fino: 1. Identificacin de los elementos formes de sangre: Eritrocitos, Leucocitos y Plaquetas. 2. Observacin de artefactos y microorganismos frecuente en sangre. 3. Observacin de lminas con los elementos formes de la sangre (Eritrocitos, Leucocitos y Plaquetas) y muestras positivas con algunos microorganismos que se pueden detectar en la gota gruesa y extendido fino. Fuente: Manual de Procedimientos Operativos Estndar para el Diagnostico Microscpico de la Malaria, Septiembre/2006, Capitulo 3. Tiempo recomendado para el desarrollo del tema: 16 Horas
MDULO VIII CARACTERSTICAS MORFOLGICAS DE Plasmodium spp Es fundamental identificar las Caractersticas morfolgicas de Plasmodium spp. (Cromatina, citoplasma y pigmento malrico), de igual forma la identificacin de especies para que el diagnstico sea de calidad. Objetivos de la capacitacin: 1. Describir las caractersticas morfolgicas de Plasmodium spp. 2. Reconocer y nombrar los estadios de trofozoito, esquizonte y gametocito, en la gota gruesa y el extendido fino. 3. Establecer la diferencia entre las especies de Plasmodium spp que parasitan al ser Humano y que estn presentes en el pas. 4. Distinguir los parsitos en la gota gruesa y el extendido fino Temas a desarrollar: 1. Caractersticas morfolgicas de los Plasmodium spp: Cromatina, citoplasma y pigmento malrico. 2. Caractersticas morfolgicas de Plasmodium vivax en gota gruesa y extendido fino. 3. Caractersticas morfolgicas de Plasmodium falciparum en gota gruesa y extendido fino. Prctica de Laboratorio: Revisin de muestras de gota gruesa y extendido fino: 1. Observacin microscpica de muestras hemticas positivas de Plasmodium vivax: Identificacin de Trofozoitos jvenes o anillos, Trofozoitos, esquizontes y gametocitos. 2. Observacin microscpica de muestras hemticas positivas de Plasmodium falciparum: Identificacin de Trofozoitos jvenes o anillos, Trofozoitos, esquizontes y gametocitos. Fuente: Manual de Procedimientos Operativos Estndar para el Diagnostico Microscpico de la Malaria, Septiembre/2006, Capitulo 3. Tiempo recomendado para el desarrollo del tema: 24 Horas
MDULO IX OBSERVACIN MICROSCPICA DE LA MUESTRA DE SANGRE MTODO PARA LA REVISIN DE MUESTRAS DE GOTA GRUESA Y EXTENDIDO FINO En este mdulo se podr realizar la revisin de la gota gruesa y extendido fino siguiendo los procedimientos establecidos para observacin microscpica de una muestra hemtica, ofrecindole al estudiante una metodologa que le garantice la completa revisin de la muestra de una forma estandarizada y sistemtica. Objetivos de la capacitacin: 1. 2. 3. 4. Conocer los pasos necesarios para la exploracin de la gota gruesa y extendido fino. Conocer la importancia de informar la especie, estadios y densidad parasitaria. Utilizar correctamente los diferentes mtodos para estimar la densidad parasitaria. Estimar la densidad parasitaria presente en las muestras positivas de malaria.
Temas a desarrollar: Caractersticas de la gota gruesa y extendido fino. Exploracin de gota gruesa. Exploracin de Extendido fino. Deteccin Pasiva de Casos (DPC) y Deteccin Activa de Casos (DAC). Estimacin de la densidad Parasitaria: Sistema Cuantitativo en Gota gruesa y extendido fino. 6. Densidad parasitaria estimada por microlitro de sangre. 7. Informe de resultados e interpretacin. Prctica de Laboratorio: Observacin microscpica de muestras hemticas positivas con malaria 1. Exploracin de la gota gruesa y extendido fino (especie, estadios y densidad parasitaria). 2. Exploracin del extendido fino (especie, estadios y densidad parasitaria). 3. Reporte de resultados de muestras diagnosticadas. 4. Estimacin de parasitemia por microlitros de sangre. Fuente: Manual de Procedimientos Operativos Estndar para el Diagnostico Microscpico de la Malaria, Septiembre/2006, Capitulo 4. Tiempo recomendado para el desarrollo del tema: 24 Horas 1. 2. 3. 4. 5.
MDULO X SUBSISTEMA DE INFORMACIN Reporte de resultados y canalizacin de la informacin El uso correcto de los formularios de laboratorio y la canalizacin de la informacin son esenciales para el anlisis de la situacin epidemiolgica de las zonas endmicas, para el desarrollo de las actividades de control y prevencin de la malaria a nivel local, departamental y nacional. Objetivos de la capacitacin: 1. Conocer el llenado correcto de los formularios de Laboratorio Nacional de Malaria (ML-1, ML-2, ML-3, ML-4, ML-5) realizar la canalizacin de la informacin a los niveles correspondientes. 2. Conocer los flujogramas de trabajo para el diagnstico microscpico de la malaria. Temas a desarrollar: 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Formulario Notificacin casos sospechosos de Malaria (ML-1) Formulario Informe Semanal del Microscopista (ML-1) Formulario de Libro Diario de Laboratorio (ML-2) Formulario informe Semanal del Diagnstico de Malaria (ML-3) Formulario Indicadores de Calidad Muestras Hemticas (ML-4) Formulario Evaluacin de Control de Calidad de Muestras Hemticas(ML-5) Canalizacin de muestras y Diagnstico de Malaria (flujogramas)
Prctica de Laboratorio: 1. Llenado de formularios del subsistema de informacin. 2. Preparacin de paquetes para el envo de la informacin del nivel local al nivel departamental y envos del nivel departamental al nivel nacional. Fuente: Manual de Procedimientos Operativos Estndar para el Diagnostico Microscpico de la Malaria, Septiembre/2006, Capitulo 5. Tiempo recomendado para el desarrollo del tema: 16 Horas
MDULO XI RED DE LABORATORIO Y GESTIN DE LA CALIDAD La Red de Laboratorios provee una estructura en la cual varios laboratorios trabajan en diferentes niveles y estn unidos por objetivos comunes, informacin, suministros, programas, supervisin, evaluacin y sistema de control de calidad. Objetivos de la capacitacin: Al final de esta Unidad, el estudiante debe: 1. Comprender la estructura y funcionamiento de la red de laboratorios y sus diferentes niveles. 2. Conocer la importancia del subsistema de informacin. 3. Comprender el proceso de Gestin de la Garanta de la Calidad del diagnstico microscpico de la malaria. 4. Conocer como se evala la competencia profesional. Temas a desarrollar: 1. 2. 3. 4. Descripcin de la Red Nacional de Laboratorio. Nivel Nacional, Departamental y Local: descripcin de funciones. Descripcin de flujogramas de notificacin de informacin y control de calidad. Control de Calidad: Revisin de Lminas diagnosticadas y Evaluacin del Desempeo. 5. Garanta de la Calidad.
Fuente: Manual de Procedimientos Operativos Estndar para el Diagnostico Microscpico de la Malaria, Septiembre/2006, Capitulo 6. Tiempo recomendado para el desarrollo del tema: 5 horas

BIBLIOGRAFA
1. Alger J, Matute ML, Meja RE. Manual de Procedimientos Operativos Estndar para el Diagnstico Microscpico de la Malaria. Departamento de Laboratorio Nacional de Vigilancia, Secretara de Salud, Tegucigalpa, Honduras, 2006. 2. Alger J, Alvarado T, Bu E, Fernndez J, Javier CA, Kaminsky RG, Padgett, Palou EY, Rivera M, Valenzuela R, Zniga C. Manual de Manejo de Enfermedades Infecciosas y Parasitarias Prioritaria de Honduras. Instituto de Enfermedades Infecciosas y Parasitologa Antonio Vidal-OPS/OMS, Tegucigalpa, Honduras Segunda Ed. 2009. 3. Laboratory Identification of Parasites of Public Health Concern, Center for Disease Control and Prevention, http://www.dpd.cdc.gov/dpdx/default.htm 4. Medios Auxiliares, para el diagnstico Microscpico de Parsitos Intestinales y Tisulares en Honduras, Departamento de Laboratorio Nacional de Vigilancia, Secretara de Salud, Tegucigalpa, Honduras, 2010. 5. Mendoza de Padilla S, Procedimientos Operativos Estndar para Recoleccin, Manejo y Transporte de muestras biolgicas. Departamento de Laboratorio Nacional de Vigilancia, Secretara de Salud, Tegucigalpa, Honduras 2008. 6. Membreno H, Rosa MI, Manual de Bioseguridad para Laboratorios Clnicos, Departamento de Laboratorio Nacional de Vigilancia, Secretara de Salud, Tegucigalpa, Honduras 2009. 7. Norma de Diagnstico de Laboratorio de la Malaria. Seccin de Malaria, Departamento Laboratorio Nacional de Vigilancia de la Salud, Secretara de Salud de Honduras, 2007. 8. Organizacin Panamericana de la Salud/Organizacin Mundial de la Salud. Gua para la implementacin de un sistema de gestin de calidad en el diagnstico microscpico de malaria: Estandarizacin de procedimientos y herramientas sobre el control de calidad y la evaluacin externa del desempeo en las redes de laboratorio. Propuesta de un grupo tcnico, Caracas, Venezuela, julio de 2004. OPS/DPC/CD/M/393/06. 9. Organizacin Mundial de la Salud. Medios Auxiliares para el diagnstico de las infecciones paldicas. Segunda Edicin, Ginebra, 2000. 10. Programa Nacional de Prevencin y Control de la Malaria. Diagnstico Situacional del Programa Nacional de Prevencin y Control de la Malaria de Honduras. Proyecto Fortalecimiento de la Respuesta Nacional para la Proteccin y Promocin de la Salud en Malaria, Tuberculosis y SIDA, Secretara de Salud, Honduras, 2009. 11. World Health Organization. Basic Malaria Microscopy, Part I. Learner's Guide, Second Edition, 2010. 12. World Health Organization. Basic Malaria Microscopy, Part II. Tutor's Guide, Second Edition, 2010.
Esquizontes responsables de las recadas
Esporozoitos
Hipnozoitos
Glndulas salivales
Merozoito
ANEXOS: ANEXO I CICLO DE VIDA DE PLASMODIUM SPP
Higado
Fecundacin
Esquizontes Exoeritrocitarios
Sangre
Macrogametocito
Merozoito
Anillo
Cigoto
Microgametocito
Exflagelacin Esquizonte Trofozoito
Ooquiste
Ooquineto
Anopheles
Humano
ANEXO II TRANSMISIN DE MALARIA
Mediante la picadura de una hembra del Anopheles spp. infectada con parsitos de malaria. (Esporozoitos)
Mediante transfusiones de sangre que estn Infectadas con estadios asexuales sanguneos (EAS)
Transmisin de la malaria de forma congnita
ANEXO III MICROSCOPIO BINOCULAR Y SUS PARTES Microscopio ptico compuesto y sus partes: ocular (1), tubo principal (2), objetivo (3), platina (4), condensador (5), diafragma de campo (6), lmpara (7), mecanismos de movimiento coordenadas x-y (8), regulador de la intensidad de la luz (9), interruptor de encendido (10),tornillo macromtrico (11), y tornillo micromtrico (12).
10 4 9 8 5 12
11
ANEXO IV PROCEDIMIENTOS DE TOMA DE MUESTRAS DE GOTA GRUESA Y EXTENDIDO FINO

No. 1 No. 2
No. 3
No. 4
No. 5
No. 6
ANEXO V PATRN DE TOMA DE MUESTRA HEMTICA (GOTA GRUESA Y EXTENDIDO FINO EN LA MISMA LMINA PORTAOBJETO) Caractersticas Gota Gruesa y Extendido Fino
1. Tamao lmina portaobjeto 2. Tamao gota gruesa 3.Distancia del borde a la gota gruesa 4.Distancia entre gota gruesa y extendido fino 5.Identificacin de las muestras
2.5 cm x 7.5 cm 1.5 cm x 1.0 cm 1.5 cm 1.0 cm Comprende el nmero de muestras y el cdigo de la persona responsable de la toma de muestra.
1.0cm 1.5cm 1.0cm
2.5cm
7.5cm
Errores comunes en la preparacin de la gota gruesa y el extendido fino
Esto provoca que al momento de colorear se pierda la muestra

0801123-04
Exceso de sangre en la lmina No permite la deshemoglobinizacin
Lmina quebrada en mltiples pedazos

La muestra no se puede diagnosticar en el laboratorio Son muestras que debido a que se desconoce a quien pertenece como su procedencia no se pueden identificar El uso de este tipo de lminas no permite realizar extendido fino de calidad.
Muestras sin identificacin
ANEXO VI ERRORES COMUNES EN LA PREPARACIN DE LA GOTA GRUESA Y EXTENDIDO FINO
Lmina portaobjetos sucia o con grasa
0801123-04
Poca sangre en la lmina
Clula
Caracterstica
ANEXO VII ELEMENTOS FORMES DE LA SANGRE
Glbulos rojos o Eritrocitos:
Los glbulos rojos tienen una forma de disco bicncavo. Es la clula ms comn que se encuentra en el extendido fino. Hay cerca de 5,000,000 glbulos rojos por cada microlitro de sangre. Con una buena coloracin de Giemsa, los glbulos rojos, que miden aproximadamente 7.5m de dimetro y no tienen ncleo, se colorean rosa-grisceo plido. Sin embargo, algunas clulas inmaduras pueden contener material que se colorea diferente y parecen ms grandes que los glbulos rojos normales, estos se denominan reticulocitos.
Plaquetas:
Son pequeos cuerpos de forma irregular que se colorean de rojo y que no poseen ncleo. Se estiman unas 100,000 plaquetas por microlitro de sangre. Con frecuencia aparecen en grupos de 5-100 pero puede agruparse un nmero mayor si el extendido fino no est bien hecho. Es importante identificarlas porque pueden confundirse con parsitos.
Glbulos blancos o Leucocitos:
El nmero total de leucocitos por microlitro de sangre oscila entre 6,000 y 8,000 clulas. Existen diferentes tipos de leucocitos los cuales se colorean de manera diferenciada. En el extendido fino se les puede reconocer el ncleo, el citoplasma y la membrana celular. Cada leucocito contiene un ncleo rodeado por citoplasma. Algunos tienen ncleo polimorfonucleares y algunas veces el citoplasma es de apariencia granular. Los leucocitos pueden dividirse en dos grupos.
Clula
Caracterstica
ANEXO VIII ELEMENTOS FORMES DE LA SANGRE
Leucocitos multilobulados o polimorfonucleares
1. Neutrfilos. Corresponden hasta el 60-65% del total de los leucocitos de una persona sana. Tienen grnulos bien definidos en el citoplasma y ncleo que se colorea prpura intenso. En algunos casos de malaria se pueden observar neutrfilos conteniendo pigmento malrico, como un producto final de la fagocitosis de los parsitos. 2.Eosinfilos. Corresponden a 1-4% del total de leucocitos de una persona sana. La apariencia granular del citoplasma es bien caracterstica, con grnulos color rosado. 3. Basfilos. Son infrecuentes usualmente corresponden a menos del 1% del total de leucocitos de una persona sana. Sus grnulos son grandes y de color azul o morado plido.
Leucocitos no-multilobulados o mononucleares
4.Monocitos. Son los leucocitos de mayor tamao, dimetro de 1218m. El Ncleo grande tiene forma de rin o frijol y el citoplasma puede contener poca cantidad de grnulos de color rosado o rojo. Corresponden a 2-10% del total de leucocitos de una persona sana. Tambin puede fagocitar parsitos. 5.Linfocitos. Los dos tipos de linfocitos, grandes y pequeos. corresponden a 20-45% del total de leucocitos de una persona sana. El ncleo del linfocito grande es redondo y de color morado intenso. El citoplasma se colorea en azul celeste y puede presentar algunos grnulos morado claro. El linfocito pequeo es escasamente ms grande que un glbulo rojo. Tiene poco citoplasma y su ncleo se colorea azul oscuro.
Parsito
Morfologa del eritrocito Morfologa del parsito
Estado
Anillo
Normal-1 veces mas grande; Redondo; Citoplasma grande con pseudpodos Ocasionalmente punteado de Schffner ocasionales; Punto grande de cromafina. fino. Infeccin mltiple del eritrocito no es infrecuente.
Trofozoito
Agrandado de 1 a 2 veces, puede estar distorsionado. Punteado de Schffner fino.
Citoplasma ameboideo grande; cromatina grande, pigmento fino caf- amarillo.
P. vivax
estar distorsionado. Punteado de Schffner fino.
Esquizonte Agrandado de 1 a 2 veces, puede
Grande, puede llenar todo el eritrocito; Esquizonte maduro con 12-24 merozoitos; Pigmento caf-amarillo convergente. Redondo a oval; Compacto; Puede casi llenar el eritrocito; cromatina difusa (microgametocito) o compacta y excntrica (macrogametocito)Pigmento caf disperso.
Gametocito Agrandado de 1 a 2 veces, puede estar distorsionado. Punteado de schffner fino.
Anillo
Normal- Infeccin mltiple puede Citoplasma delicado; 1-2 puntos pequeos de encontrarse ms comnmente que en cromatina; Ocasionalmente se observan las otras especies. formas marginales. Muy raramente se observan en circulacin. Citoplasma compacto, pigmento oscuro.
ANEXO IX MORFOLOGA DE Plasmodium vivax Y Plasmodium falciparum
Trofozoito* Normal, raramente fisuras de maurer

(segn las condiciones de la coloracin)
P. falciparum
Esquizonte* Normal, raramente fisuras de maurer (segn las condiciones de la coloracin)
Muy raramente se observan en circulacin. En el maduro 12-30 merozoitos pequeos, pigmento oscuro agrupado en una masa.
Forma de luna creciente o salchicha; cromatina difusa (microgametocito), o en una sola masa (macrogametocito). Masa de pigmento oscuro.
Gametocito Distorsionado por el parsito
ANEXO X CARACTERSTICAS MORFOLGICAS DE Plasmodium vivax Y Plasmodium falciparum MUESTRAS DE GOTA GRUESA Y EXTENDIDO FINO
Anillo
Trofozoito
Esquizonte
Gametocito
Plasmodium falciparum
Plasmodium vivax
ANEXO XI MICROORGANISMOS QUE SE PUEDEN ENCONTRAR EN LA OBSEVACIN MICROSCPICA DE MUESTRAS DE SANGRE
Amastigotes de Leishmania spp
Tripomastigote de Tripanosoma cruzi
Babesia spp
Filariasis
ANEXO XII ARTEFACTOS QUE SE PUEDEN ENCONTRAR EN LA OBSERVACIN MICROSCPICA
Nubes y restos de cromatina derivados de glbulos rojos inmaduros en anemia severa.
Grupos aislados de grnulos eosinofilicos
Plaquetas y un linfocito para comparacin de tamao
Bacterias
Esporas
Esporas e hifas Clulas vegetales
Miscelaneas
Particulas de polvo
Cristales de colorante de Giemsa
Rayones en forma de espinazo de pescado sobre la lmina porta-objetos
Huecos cristalinos en porta-objetos viejos
ANEXO XIII ESTIMACIN DE LA DENSIDAD PARASITARIA SISTEMA CUANTITATIVO Extendido Fino Se localiza una porcin en la cola del extendido en que los campos sean uniformes 1. Se cuentan simultneamente glbulos rojos parasitados y campos hasta llegar a un nmero de campos equivalentes a 10,000 glbulos rojos. 2. Los glbulos rojos parasitados por ms de un parsito se cuentan como uno. 3. Ejemplo: si el rea escogida contiene 280 glbulos rojos por campo, se deben contar los parsitos presentes en 36 campos. 4. Si el conteo arroja un resultado de 20 parsitos en 10,000 glbulos rojos, la parasitemia se informa como 0.2% Frmula 20/10,000 x 100 5. Una parasitemia de 1% es una densidad parasitaria elevada, y de 5% es hiperparasitemia que puede poner en peligro la vida del paciente. ESTIMACIN DE LA DENSIDAD PARASITARIA SISTEMA CUANTITATIVO Gota gruesa Se cuentan leucocitos y parsitos simultneamente. 1. El conteo se detiene cuando se llega a 100 leucocitos y se han identificado 10 mas parsitos, ejemplo 40 parsitos en 100 leucocitos. 2. Cuando hay dos veces ms parsitos que leucocitos por campo, se recomienda hacer el conteo de parsitos en 50 leucocitos. 3. Si se identifican menos de 10 parsitos, el conteo sigue hasta 500 leucocitos. 4. Si no se identifican mas parsitos, el conteo se detiene en 500 leucocitos. Ejemplo: 3 parsitos en 500 leucocitos. 5. Se debe terminar de contar los leucocitos existentes en el campo, por lo que el conteo final puede ser mayor que 100 500 leucocitos. DENSIDAD PARASITARIA ESTIMADA POR MICROLITRO DE SANGRE 1. Se debe disponer del conteo de glbulos rojos y leucocitos del paciente, sino, se asumen concentraciones constantes de 5,000,000 eritrocitos/ul y 6,000 a 8,000 leucocitos/ul. 2. Gota gruesa, si se contaron 40 parsitos en 100 leucocitos, entonces 40x6,000/100= 2,400 parsitos/ul de sangre. 3. Extendido Fino, si se estim una parasitemia de 0.2%, entonces 0.2x5,000,000/100=10,000 parsitos/ul de sangre.
ANEXO XIV FLUJOGRAMA DE CAPTACIN DE PACIENTES Y DIAGNSTICO MICROSCPICO DE CASOS SOSPECHOSOS DE MALARIA (DETECCIN PASIVA DE CASOS)
Paciente febril
Puesto de notificacin voluntaria Toma de muestra hemtica y llenado de formulario M-1 (1)
Canalizacin de muestras y formularios M-1 (2)
Unidad de Salud Local Toma de muestra hemtica y llenado de formulario M-1 Diagnstico microscpico: coloracin y observacin de 100 campos con objetivo de llenado inmersin (3,4,5)
Resultado negativo: No se observ plasmodium spp. en 100 campo informar en formulario M-1
Resultado Positivo: Informar especie y densidad parasitaria en formulario M-1
Responsable: (1) Colaborador voluntario (2) T.S.A / A.S.A (3) Microscopista (4) Tcnico de Laboratorio (5) Microbilogo
ANEXO XV FLUJOGRAMA DE CONTROL DE CALIDAD DE LAS MUESTRAS DIAGNSTICADAS
Nivel Departamental Envo anual de100% lminas positivas y negativas revisadas correspondientes a 4 semanas segn calendario epidemiolgico y escogidas aleatoriamente (4,5)
7 dias despus
Nivel Local Envo semanal de100% de lminas diagnosticadas positivas y 10% negativas escogidas aleatoriamente (1,2,3)
15 dias despus
Nivel Central Ejecucin del control de calidad Anlisis de resultados de control de calidad (6)
Responsable: (1) Microscopista (2) Tcnico de Laboratorio (3) Microbilogo (4) Microbilogo Departamental (5) Microscopista revisor (6) Microbilogo y Microscopista revisor nivel central

Secretara de Salud Direccin General de Salud Programa Nacional Prevencin y Control de Malaria Notificacin de Sospechosos para el Diagnstico de Malaria
ANEXO XVI FORMULARIOS M1
M1 Rev Feb 2010
Sem. Epidemiolgica
Datos de notificador
Nmero Muestra: Reg_ Departamental: Tipo Notificador: ColVol Enfermera Fecha Toma Muestra: Municipio: Laboratorio Mdico Mdico Privado Otro Clave US: D: Localidad: Clave de ColVol: Nombre US: M: A:
Nombre Notificador:
Nivel de atencin: CMO
CSR
CMI
HOSP.
LAB.
IHSS
PRIVADO:
Datos del Paciente

Deteccin: Pasiva Nmero de Identidad: Fecha de Nacimiento: Ocupacin: Direccin exacta: Localidad (residencia actual): Edad/aos: Meses: Activa Febriles Encuesta Hemtica Cerco Epidemiolgico Otro Caso: Nuevo Control
Nombre del Paciente: < 1 ao Sexo: Hombre Mujer Embarazada Si No
Nombre del jefe de familia:
Tel / Cel: Barrio / Colonia: Municipio (residencia actual):
Departamento (residencia actual):
Grupo tnico: Mestizo
Negro habla inglesa Garifuna Misquito Pech Chorts Lencas Nahoas Tawacas Tolupanes Otros
Donde permaneci hace dos semanas?: Fecha de inicio de los sntomas: Da: Estado febril: Mes: Ao: Tipo de Sntomas: Dolor de Cabeza Escalofros Ninguno
Actual (0-5 das) Reciente (6-30 das) NO Febril ( >30 das) Primaquina 15 mg
Suministrar tratamiento completo Primaquina 5 mg
Cloroquina 150 mg
Laboratorio
Prueba de Diagnstico rpido (PDR): Si No Resultado: Negativo Positivo Plasmodium: Vivax Falciparum Mixto Plasmodium vivax Plasmodium falciparum Mixto Fecha de PDR: Gota gruesa: Negativa Positiva Densidad plasmodium vivax Densidad plasmodium falciparum
EAS: Gametocitos: Leucocitos: EAS: Gametocitos: Leucocitos:
Fecha de Diagnstico Gota Gruesa: Nombre laboratorio: Municipio:
Nombre Microscopista: Depto.:
EAS: Estados Asexuales Sanguneos ARRL Original (Estadstica Regional) Copia 1 (TSA, actualizacin del puesto de notificacin y entrega de resultado al paciente) Copia 2 (Notificador)
Repblica de Honduras Secretara de Salud Informe Semanal

Departamento Total lminas ingresadas Nombre Microscopista

Fecha Diagnstico
Municipio Total lminas diagnsticadas Semana diagnstico
Laboratorio
Ml1 Feb 2010
Fecha informe
ANEXO XVII FORMULARIOS ML1
No. Orden Fecha Recibo Emb SEM Nombre Sexo
No. de muestras Lugar de infeccin del Paciente (ver M-1)
Clave ColVol / TSA
Fecha de toma
Caso Nuevo Control Datos Paciente Edad
Diagnstico PV PT MX Neg
SECRETARA DE SALUD Departamento de Laboratorio Nacional de Vigilancia / Laboratorio Nacional de Malaria Libro Diario de Laboratorio
Ml2 May 06
Departamento
Fecha Das entre Recibo-DX Nombre completo del paciente Edad Sexo Emb. Municipio Localidad Pv Pf Pm Po Mx Neg Dx Fecha Firma Diagnstico Calidad de la muestra B R M Entrega de resultados
Municipio
Laboratorio
S.E.
ANEXO XVIII FORMULARIOS ML2
Fecha del No. de Orden da
Fecha Fecha de No. de de toma recibo muestra
Clave ColVol

SECRETARA DE SALUD Departamento de Laboratorio Nacional de Vigilancia Laboratorio Nacional de Malaria Libro Diario de Laboratorio Ml3 May 06 No. Municipio U.D Clave
No. R. Departamental
ANEXO XIX FORMULARIOS ML3
Nombre de Responsable al dias entre toma y diagnstico Neg <1 1a3 4a7 8 de del
S.E.
del
de
Muestras exminadas y resultados
Fecha M.E.
Pv
Pf
Mx
Total
MUESTRAS DE CONTROL DE CALIDAD
No. Cdigo Resultado
No. Cdigo Resultado
No. Cdigo Resultado
No. Cdigo Resultado
No. Cdigo Resultado
No. Cdigo Resultado
Total Total Positivos Pv Pt Mx Neg
Total Mstra. enviadas CC

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Esquizontes responsables de las recadas

ANEXOS: ANEXO I CICLO DE VIDA DE PLASMODIUM SPP

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ANEXO II TRANSMISIN DE MALARIA

Transmisin de la malaria de forma congnita

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ANEXO IV PROCEDIMIENTOS DE TOMA DE MUESTRAS DE GOTA GRUESA Y EXTENDIDO FINO

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1.0cm 1.5cm 1.0cm

Errores comunes en la preparacin de la gota gruesa y el extendido fino

Esto provoca que al momento de colorear se pierda la muestra

Exceso de sangre en la lmina No permite la deshemoglobinizacin

Lmina quebrada en mltiples pedazos

Muestras sin identificacin

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ANEXO VI ERRORES COMUNES EN LA PREPARACIN DE LA GOTA GRUESA Y EXTENDIDO FINO

Lmina portaobjetos sucia o con grasa

Poca sangre en la lmina

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ANEXO VII ELEMENTOS FORMES DE LA SANGRE

Glbulos rojos o Eritrocitos:

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Pgina 23 de 35 Fecha: Febrero, 2010

Glbulos blancos o Leucocitos:

ANEXO VIII ELEMENTOS FORMES DE LA SANGRE

Leucocitos multilobulados o polimorfonucleares

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Leucocitos no-multilobulados o mononucleares