Diferencias entre entre enfermedades genticas, hereditarias y congnitas en el feto

Durante el embarazo, el feto puede tener alteraciones que comprometen su desarrollo fsico e intelectual. Algunas de ellas son incompatibles con la vida. Se estima que entre un 2 y 3 por ciento de los bebs en el mundo nacen con algn tipo de malformacin. Si al ao hay un milln de nios, 30.000 tendrn anomalas y pueden ser genticas, hereditarias o congnitas. La etapa ms temprana para detectarlas es la semana siete de embarazo. En primera instancia, las anomalas se detectan con pruebas de tamizaje y ecografas que permiten identificar embarazos con riesgo de malformaciones fetales. Tambin, se realizan exmenes de diagnstico para confirmar la presencia de enfermedades genticas en el feto. En Colombia, el Plan Obligatorio de Salud (POS) incluye la prueba de embarazo en sangre, que, adems de confirmarlo, sirve para descartar una mola, es decir, un tumor con aspecto de embarazo. Segn Antonio Bermdez, coordinador del Grupo de Gentica de la Subdireccin de la Red Nacional de Laboratorios del Instituto Nacional de Salud, sera conveniente incluir en el POS la medicin en sangre de los niveles de tres sustancias producidas en el feto, que marcan la presencia de algunas alteraciones. Las pruebas idealmente se deben practicar entre las semanas 15 y 19 de embarazo. Con el anlisis de las tres sustancias se pueden descartar espina bfida, anencefalia y sndrome de Down, dice Clara Esteban, directora del programa de Biogentica Molecular de Cecolfes. Tambin anlisis diagnsticos como la biopsia de vellosidad corinica (placenta) o la amniocentesis (anlisis del lquido amnitico) y ecografas de alta resolucin hechas por especialistas. Con estas pruebas se puede identificar y diagnosticar casi con exactitud la presencia de algunas enfermedades que comprometen el material gentico y la herencia. Enfermedades genticas:se caracterizan por un dao puntual en los genes o en los cromosomas y pueden ser heredables o no.En el caso de los cromosomas, se habla de las trisomas 21 o sndrome de Down, 13 y 18. En estos ltimos dos casos, el beb no supera el ao. En las cromosmicas, falla un cromosoma completo o parte de l. Casi todos los afectados tienen retardo mental y defectos fsicos, seala Carlos Restrepo, genetista de la Universidad del Rosario. Enfermedades hereditarias: estn determinadas genticamente pero no implica que se observen en el momento del nacimiento; por ejemplo, el cncer de seno y diabtes. Enfermedades congnitas: caractersticas con las que se nace y no siempre se deben a la herencia o a los genes. Se presentan durante el embarazo, por factores distintos a los genes. Generan malformaciones fsicas.

La sustitucin de un gen defectuoso permite curar a cuatro "nios burbuja"

Se trata de la primera victoria de la terapia gentica en la curacin de enfermedades

19 de abril de 2002

La terapia gentica ha conseguido curar a cuatro nios burbuja, que tenan que vivir en zonas completamente aisladas y desinfectadas porque su sistema inmunolgico era incapaz de hacer frente a las enfermedades. La curacin de estos pequeos supone la primera gran victoria de estas nuevas tcnicas cientficas. El Hospital de Enfermedades Infantiles Necker, en Pars, ya trat en el ao 2000 a dos nios con este problema y logr algunos resultados alentadores. Ahora, un equipo internacional de cientficos ha confirmado que otros dos nios han sido curados mediante esta tcnica, segn informa en su ltima edicin la revista cientfica New England Journal of Medicine. La terapia gentica, tambin llamada terapia gnica, se basa en el reemplazo en un ser humano de un gen defectuoso por otro que funciona de forma correcta. Los nios burbuja citados sufran un fallo gentico por el que su sistema inmune era incapaz de fabricar defensas, principalmente clulas T, que hacen frente a cualquier enfermedad o cuerpo extrao que penetra en el organismo. Como resultado, los nios se vean obligados a vivir permanentemente en un ambiente esterilizado para evitar enfermedades y contagios. Hasta ahora, los afectados por este tipo de dolencias solamente podan ser tratados con un trasplante de mdula sea. El equipo de cientficos que ha realizado esta investigacin ha ideado un sistema en el que utiliza un virus genticamente modificado para incorporar as a los nios el gen correcto que les faltaba.

DIAGNSTICO GENTICO PRENATAL

Por el Dr. Carlo Bellieni

(Volver)

Junto al profesor C. Bellieni, pediatra y neonatlogo del Centro de Biotica de la Universidad de Siena, Italia, conocido entre otros estudios - por sus investigaciones acerca de la percepcin del dolor por el feto, son coautores de este esclarecedor documento biotico: Guido Cocchi, neonatlogo; Margherita Gravina, psiquiatra; Marco Maltoni, mdico paliativista; Giuseppe Noia, gineclogo; Patrizia Vergani, ginecloga; Gabriella Gambino, bioeticista; Claudia Navarini, bioeticista; Paolo Arosio, neonatlogo, presidente de la asociacin "Amici di Giovanni"; Luigi Vittorio Berliri, presidente de la asociacin "Spes contra Spem"; Loris Brunetta, presidente de la asociacin ligur de talasmicos; Sabrina Paluzzi, presidente de la asociacin "La Quercia Millenaria"; Claudia Ravaldi, psiquiatra, presidente de la asociacin "Ciao Lapo".

El diagnstico gentico prenatal consiste en un screening o criba de enfermedades genticas, bien sea por medio de anlisis de sangre o bien por procedimientos invasivos guiados por ecografa como la amniocentesis o la biopsia de vellosidades corinicas. Entre las probables consecuencias de su uso (en los pases occidentales actualmente amplio e indiscriminado) a corto o a largo plazo sobre la poblacin cabe destacar: 1. Peligro de uso generalizado y

selectivo diagnstico prenatal.

del

"Es como si con el cribado (screening) de las trisomas 18 y 21 (Down) [] la ciencia hubiera cedido a la sociedad el derecho de decidir que el nacimiento de ciertos nios ya no es deseable. [En tal contexto] los progenitores que desean el nacimiento han de exponerse, adems de al dolor de la minusvala, al reproche social por no haber aceptado la propuesta de la ciencia legitimada por la ley. En Francia, la difusin generalizada del screening se basa en una propuesta, pero en la prctica se ha vuelto casi obligatoria". (D. Sicard, Presidente del "Comit National d'Ethique" de Francia, Le Monde, 2007). Vale la pena recordar que en Italia la interrupcin del embarazo despus de los 90 das ha aumentado 5 veces desde el 1981 al 2006 (0.5% vs 2.6% de los partos). 2. Falta de lmites institucionales en el empleo selectivo del diagnstico prenatal. Un ejemplo de limitacin del uso del diagnstico gentico prenatal ha sidopropuesto por la Organizacin Mundial de la Salud, que ha explicado cmo la metdica invasiva no de ser regulada por las meras leyes de mercado, en un cuadro definido en una situacin denominada por Henn de "consumismo prenatal" que afecta tambin a los mtodos no invasivos:"El diagnstico prenatal debe ser efectuado

slamente para dar a los padres y a los mdicosinformacin acerca de la salud del feto". "El diagnstico prenatal dirigido a aliviar la ansiedad materna, en ausencia de indicaciones mdicas que la justifiquen, debe tener una prioridad secundaria por lo que se refiere a la asignacin de losrecursos con respecto al diagnstico prenatal con indicaciones mdicas". (OMS, Ginebra 1998). Se considera que el lmite de 35 aos introducido para aconsejar la amniocentesis ha sido elegido porque ms all de dicha edad el riesgo de aborto ligado a la tcnica invasiva equivale a aquel que deriva de tener un hijo afecto de Sndrome de Down (Prenat Diag 2002), basado por tanto en un clculo de costes-beneficios, en el cual los costes vienen representados por la prdida de fetos sanos como consecuencia del procedimiento y los beneficios el descubrimiento de fetos afectados por el Sndrome de Down. 3. Uso equivoco "prevencin". del trmino

A da de hoy existen pocos tratamientos prenatales para enfermedades genticas (es el caso de los trasplantes prenatales para los sndromes de inmunodeficiencia congnita, para la osteognesis imperfecta, para la betatalasemia, que ya se han efectuado en el hombre aunque con resultados clnicos no siempre ptimos) aceptados para el diagnstico gentico prenatal. Diversos autores llaman la atencin desde hace tiempo sobre la equivocidad inherente a la expresin mdica "disease prevention": "Prevencin significa prevenir el nacimiento de individuos diagnosticados como genticamente

aberrantes" (B.L. Eide, 1997). Poder acceder a un diagnstico de patologa gentica fetal no constituye, salvo en casos excepcionales, un presupuesto para poder intervenir preventivamente y en una manera ms eficaz sobre la enfermedad, respecto al diagnstico efectuado en el momento del nacimiento. Sin embargo en algunas situaciones clnicas el uso de procedimientos invasivos para precisar el diagnstico se hace necesario incluso para enfrentarse a la angustia del riesgo de anomala cromosmica que el diagnstico gentico no invasivo - con sus falsos positivos - puede generar. 4. Riesgos diagnstico. del procedimiento

En base a datos ms recientes publicados por la Asociacin de Gineclogos Canadienses, el riesgo de prdida fetal a consecuencia del empleo de procedimientos diagnsticos invasivos (amniocentesis o biopsia de vellosidades coriales) es de 1 aborto non deseado por cada 200 procedimientos y de 1 de cada 100 segn el "Royal College of Obstetrics and Gynecology", o valores intermedios segn otros. Adems, considerando que en Italia se realizan cada ao alrededor de 100.000 amniocentesis y que la mayor parte de los fetos que fueron sometidos a investigacin prenatal se comprueba despus que estaban sanos, parece desconcertante el elevado nmero de nios (probablemente sanos) perdidos a consecuencia del procedimiento. 5. Peligros para la autonoma de la mujer.

Varios estudios demuestran que las mujeres que si someten a diagnstico gentico prenatal (sea en su forma invasiva o en aquella forma de screening que se realiza con ecografa dirigida o integrada con anlisis de la sangre materna) raramente tienen conocimiento pleno de los lmites, de los riesgos, de la modalidad de realizacin y de los fines de los screening del Sndrome de Down (Am J Obst Gyn 2008) y que la informacin en el momento de la propuesta o de la realizacin del examen es en ocasiones deficiente (Fetal Diagnosis and Therapy, 2008) as como con respecto a los exmenes combinados con ecografa y anlisis de sangre que tienen como fin descubrir fetos con un riego mayor de anomalas cromosmicas, y respecto a los cuales a menudo las mujeres no saben che pueden dar resultados Falsos Negativos (tranquilizacin falsa) o Falsos Positivos (preocupacin falsa) con los consiguientes riesgos de ansiedad y depresin. Por ello se considera oportuno sugerir las siguientes propuestas con el fin de que el diagnstico prenatal se lleve a cabo de acuerdo con criterios ticamente aceptables. En caso de diagnstico gentico prenatal con pocas posibilidades teraputicas, la decisin de realizar o no la prueba debe ser cuidadosamente evaluada a la luz de sus posibles riesgos y beneficios para los dos sujetos (madre y nio/a), y: A - Nunca puede llevarse a cabo de forma rutinaria ni puede nunca ser propuesta de forma sistemtica, ni siquiera en el caso del diagnstico

gentico ecogrfico (por ejemplo la medicin del espesor del pliegue nucal), sino que debe ir siempre precedida de una detallada informacin acerca de los lmites, riesgos, implicaciones y posibilidades teraputicas en el mbito de una adecuada consulta prediagnstica (OMS, 1995), a fin de que la mujer pueda as llevar a cabo una decisin informada y autnticamente consciente, conservando la plena libertad de aceptar o rehusar el anlisis (screening) o prueba de cribado. Cuando se explica la tasa de riesgo no deben emplearse nunca trminos genricos ("pequeo", "negligible", "grande"), sino que se deben proporcionar datos numricos, as como el significado de tales datos. Se debe requerir claramente el consentimiento informado y explcito acerca del nmero, tipo y finalidad de las pruebas a efectuar. B - En caso de hallazgo de patologa, el diagnstico prenatal non debe considerarse terminado (salvo por expreso deseo de la mujer) sin la participacin de un especialista en la patologa hallada (consulta postdiagnstica, JAMA 2007), capaz de proporcionar informaciones acerca de la patologa, acerca de la posibilidad de un procedimiento teraputico y sobre ayudas socioeconmicas disponibles para ayudar a la familia, y sin informar acerca de la posibilidad de tener al nio de forma annima y darlo en adopcin. Ser competencia del gineclogo que realiza el diagnstico

referir a la mujer a la mencionada consulta especializada. Nuestra exigencia de integrar sistemticamente el diagnstico prenatal en una "fase prediagnstica" y otra "post-diagnstica" se basa en la constatacin de que el diagnstico gentico prenatal no es ticamente neutro: como todos los actos humanos es una eleccin y las elecciones requieren un conocimiento real de los datos e implican una responsabilidad. La autonoma de las mujeres en las decisiones acerca de su embarazo puede hallarse seriamente comprometida por un uso rutinario (por tanto una "no eleccin") del diagnstico gentico prenatal, que a menudo proviene de una presin social dirigida a no introducir en el mundo hijos con anomalas genticas. Es necesario garantizar en los hechos la libertad en la eleccin. A tal fin se debern implementar polticas sociales y dinmicas culturales nuevas con el fin de que la mujer no se vea nunca forzada a considerar la interrupcin del embarazo como la nica salida posible en caso de enfermedad gentica del feto.

Diagnstico Gentico Prenatal

Se estima que, aproximadamente, un 4% de todos los recin nacidos vivos presentan algn tipo de defecto congnito. Los factores de riesgo ms comunes a la hora de tener un hijo con estas caractersticas son los antecedentes familiares, haber superado una cierta edad o el hecho de haber tenido con anterioridad un hijo con una anomala. LabGenetics est especializado en el Diagnstico Gentico Prenatal y ofrece la posibilidad de analizar el ADN de clulas fetales, mediante tcnicas basadas en la tecnologa de la PCR , para poder detectar durante el embarazo, de la manera ms rpida posible, eventuales defectos congnitos en el feto.

Diagnstico prenatal rpido de aberraciones cromosmicas por QF-PCR

Caractersticas del servicio

Estudio del ADN fetal, analizando STRs, por PCR cuantitativa fluorescente (QF-PCR) mediante un secuenciador automtico capilar (ABI 310 Genetic Analyzer) Deteccin, en 1 sola prueba, de los desrdenes numricos cromosmicos o aneuploidas ms frecuentes en humanos: o Cromosoma 21: Sndrome de Down (trisoma) o Cromosoma 18: Sndrome de Edwards (trisoma) o Cromosoma 13: Sndrome de Patau (trisoma) o Cromosomas sexuales X e Y: Sndrome de Turner: X0 (monosoma) Sndrome de Klinefelter: XXY Otras aneuploidas: XXX; XYY Detecta el 70-80% de las aberraciones cromosmicas causantes de defectos congnitos (99.8-99.9% en embarazos de bajo riesgo). Mxima fiabilidad con pequeas cantidades de muestra: o Menos de 1 ml de lquido amnitico (no es necesario cultivo celular previo) o 1 sola gota de sangre fetal del cordn umbilical Garanta de Calidad: o Laboratorio miembro de la Asociacin Espaola de Diagnstico Prenatal (AEDP) o En proceso de acreditacin segn la norma ISO 15189 o Protocolos adaptados segn recomendaciones de la European Molecular Genetics Quality Network (EMQN) y la UK Clinical Molecular Genetics Society Resultados en 24 horas

Muestras susceptibles de ser analizas

Lquido amnitico (sin cultivo previo) obtenido mediante amniocentesis Vellosidad corinica obtenida mediante biopsia transcervical o puncin abdominal Sangre fetal del cordn umbilical obtenida mediante cordocentesis Restos abortivos

Ventajas de la tcnica de QF-PCR frente a la tcnica de FISH

Menor volumen de muestra fetal necesario: o Fundamental en amniocentesis precoces (a comienzos del 2 trimestre) o Reduccin del riesgo de aborto durante la amniocentesis Mayor sensibilidad del anlisis Mxima fiabilidad, precisin, reproducibilidad y consistencia de los resultados. Simplificacin y automatizacin de los procedimientos diagnsticos: o Menor coste o Mayor rapidez

Diagnstico citogentico

LabGenetics tambin ofrece un servicio de diagnstico citogentico, en el que a mediante el denominado cariotipo completo, es posible analizar el nmero y la estructura de los cromosomas para detectar posibles anomalas, tanto numricas (aneuploidas: trisomas, monosomas, etc) como estructurales (inserciones, deleciones y traslocaciones).
Para poder realizar este estudio es necesario realizar un cultivo celular previo, por lo que el tiempo de respuesta vara entre las 2-3 semanas, en funcin del tipo de muestra de partida. En LabGenetics realizamos los siguientes estudios citogenticos:

Cariotipo en lquido amnitico Cariotipo en vellosidades corinicas Cariotipo en sangre fetal Cariotipo en restos abortivos Cariotipo en sangre perifrica Cariotipo en fibroblastos cultivados (piel y otros)

Diagnstico prenatal de enfermedades hereditarias

LabGenetics tambin ofrece la posibilidad realizar un screening gentico prenatal de enfermedades hereditarias cuando los padres son portadores conocidos, diagnosticados o enfermos.
LabGenetics analiza el ADN de las clulas fetales, mediante tcnicas basadas en las tecnologas de PCR, para identificar las alteraciones (mutaciones) en la secuencia de ADN que estn relacionadas con una enfermedad o con el aumento de riesgo de desarrollar una enfermedad. Nuestro laboratorio se ha especializado en el diagnstico de un buen nmero de las enfermedades hereditarias de mayor incidencia y/o peor pronstico. Para ello LabGenetics utiliza la tecnologa ms avanzada, combinando diferentes tcnicas:

PCR y deteccin fluorescente en secuenciadores automticos Amplificacin y secuenciacin directa de los genes implicados Deteccin de mltiples mutaciones mediante la tecnologa SNaPshot Deteccin de mutaciones puntuales mediante tecnologa ARMS

Anlisis de inestabilidad de microsatlites mediante tecnologa TP-PCR

Puede consultar aqu nuestro catlogo de enfermedades

Tcnicas de estudio mediante FISH

Hibridizacin In Situ Fluorescente (FISH)

La tcnica de Hibridizacin In Situ Fluorescente (FISH) consiste en la deteccin de secuencias de ADN con sondas marcadas con fluorescencia sobre cromosomas o ncleos celulares fijados sobre un portaobjetos, usando para ello un microscopio de fluorescencia y un sistema de captura y procesamiento de imgenes. La ventaja de la prueba radica en la rapidez de la misma (resultados entre 24 y 36 horas) al no necesitar cultivo de clulas, lo que reduce el nivel de ansiedad de los padres. Tras la hibridacin de las sondas con ncleos en interfase o en metafase es posible observar la presencia de ganancias, prdidas o fusiones entre genes. Esta metodologa se usa cada vez ms en el diagnstico de las hemopatas y tambin es de extraordinaria importancia en el estudio de las alteraciones cromosmicas en el lquido amnitico, vellosidades coriales, material de abortos espontneos y en sangre de individuos en los que se sospecha la existencia de una alteracin cromosmica.

Diagnstico Gentico Preimplantacin

El diagnstico gentico preimplantacin se presenta como un nuevo campo que, unido a las tcnicas de reproduccin asistida, ofrece la posibilidad de analizar la presencia de alteraciones cromosmicas y genticas en embriones antes de ser transferidos al tero y, por tanto, antes de que se haya producido la implantacin.

Para utilizar esta tcnica la pareja debe someterse a un tratamiento de fecundacin In Vitro (FIV). En estas condiciones, Clula femenina normal
Clula masculina normal

despus de la fecundacin, el cigoto humano se divide

aproximadamente cada 24 horas de manera que, 3 das despus de la obtencin de los vulos, los embriones tienen una media aproximada de 8 clulas o blastmeros. En este momento, se realiza la biopsia embrionaria, tcnica mediante la cual podemos extraer 1 2 blastmeros para su anlisis posterior, mientras que el embrin se mantiene en cultivo hasta que se obtienen los resultados y se realiza la transferencia. Estas tcnicas de anlisis cromosmico o gentico permiten un diagnstico muy rpido, que oscila entre las 24 horas y las 48 horas, segn los casos, compatible con el tiempo mximo de desarrollo embrionario In Vitro. De esta manera, podemos mantener los embriones en cultivo hasta que se obtienen los resultados y as seleccionar embriones normales para la transferencia al tero materno.
Se realiza una seleccin muy precoz, previa a la implantacin, lo cual representa una gran ventaja frente a las tcnicas de diagnstico prenatal (amniocentesis, biopsia corial) en las que en caso de diagnosticar un feto como afectado, se plantea la opcin de un aborto teraputico. Es la estrategia de diagnstico ms temprana que existe para asegurar a la pareja un beb sano.

FISH en Espermatozoides

Mediante esta tcnica se puede calcular el porcentaje de espermatozoides cromosmicamente alterados permitiendo enumerar la cantidad de cromosomas por espermatozoide. Las sondas fluorescentes utilizadas son de dos tipos, sondas centromricas para los cromosomas X, Y, y 18; y sondas especficas de loci para los cromosomas 13 y 21.

Quien se realiza este estudio?

Las indicaciones bsicas de la FISH en espermatozoides han sido oligoastenoteratozoospermia, abortos de repeticin; baja tasa de fecundacin ( 50%) y fallo de implantacin. Un semen con un alto porcentaje de espermatozoides cromosmicamente alterados dar lugar a embriones anormales. El resultado de este estudio permite aconsejar a la pareja cual es la tcnica de reproduccin asistida adecuada a seguir.

HER2/neu
El HER2/neu es un oncogn que produce una protena que constituye un receptor en la membrana de la clula, al que se unen sustancias que favorecen el crecimiento de la clula (factor de crecimiento). Cuando el gen HER2 est alterado, la protena produce encuentra en cantidad mayor de la normal, se dice entonces est incrementada su expresin e indica un grado mayor de proliferacin y divisin de la clula, confiriendo al cncer de mama una mayor agresividad, as como resistencia a la quimioterapia y hormonoterap ia. Entre el 25 y el 30% de las mujeres con cncer de mama diseminado presentan

una alteracin del gen HER2. Esta alteracin se asocia a peor pronstico (mayor tasa de recurrencia y mortalidad) y mltiples estudios han demostrado su valor predictivo para sensibilidad o resistencia a distintos regmenes de terapia sistmica.El inters primordial de este gen reside en su papel como diana teraputica del trastuzumab (Herceptin), anticuerpo monoclonal humanizado capaz de bloquear la accin del receptor HER2. Esta nueva terapia fue aprobada por la FDA en 1998, limitndola inicialmente a pacientes con enfermedad diseminada. Ms recientement e se ha demostrado que el empleo de trastuzumab

en estados iniciales de la enfermedad, como agente nico o en regmenes combinados, reduce significativam ente tanto el riesgo de recurrencia como la mortalidad. La Hibridacin In Situ Fluorescente (FISH) es uno de los mtodos utilizados para el estudio de HER2/neu, en donde se evala el nmero de copias del gen en el ncleo celular para detectar su amplificacin. La prueba utilizada en el Centro de Gentica y Biotecnologa - BIOGEN se llama PATHVYSION y esta aprobada por el Food and Drug Administratio n de Estados Unidos.

Hibridacin fluorescente in situ

FISH o hibridacin fluorescente in situ es una tcnica de marcado de cromosomas en la que se provoca que los cromosomas especficos brillen bajo el microscopio. Esta tcnica permite la rpida determinacin de aneuploida, la ausencia del cromosoma completo o la presencia de un cromosoma adicional, as como la adjudicacin de un marcador gentico a un cromosoma (cartografa gentica). Los cromosomas que son usualmente utilizados con FISH son los 13, 18, 21, X e Y; sin embargo, como son posibles marcados adicionales del cromosoma, otros cromosomas pueden ser visualizados con esta tcnica. FISH usa segmentos de una nica hebra de ADN que son tintados, o etiquetados, con una sustancia fluorescente que puede ligarse a un cromosoma especfico; estos segmentos de ADN son llamados sondas. El primer paso de la tcnica consiste en la desnaturalizacin del DNA para separar la doble hlice. A la muestra desnaturalizada se le aade entonces la sonda de inters (fragmento de ADN marcado fluorescentemente). Primero, las sondas hibridan a regiones especficas. Despus, se tien los ncleos con un color de contraste inespecfico (generalmente DAPI). Las sondas de DNA pueden marcarse con molculas fluorescentes (mtodo directo) o no fluorescentes que se detectan con anticuerpos fluorescentes (mtodo indirecto). La tcnica FISH puede realizarse a los cromosomas en metafase o en interfase.

FISH interfsico en ratn.

En metafase se utiliza para detectar microdeleciones especficas, translocaciones o para identificar material extra de origen desconocido. Los tipos de sondas usadas son csmidos,satlites alfas y sondas completas (painting probes). Los csmidos son secuencias nicas que hibridan con fragmentos pequeos. Se emplean en estudios de microdeleciones. Las sondas satlites estn formadas por secuencias altamente repetidas que se encuentran cerca de lo centrmeros. En la mayora de los casos son

especficas de cada cromosoma. Se usan para determinar aneuploidias o para identificar el origen de cromosomas marcadores. No siempre es posible tener ncleos fijados en metafase para realizar el FISH. Normalmente, cuando se fija una clula sin tratar el ncleo se encuentra en interfase, con los cromosomas descondensados. A pesar de ello, es posible realizar el FISH aunque los resultados obtenidos no sean tan especficos. Se emplea sobre todo para la deteccin de aneuploidias o grandes deleciones, duplicaciones o translocaciones en clulas fetales o tumorales. Adems del FISH mltiple, est el FISH en hebra y el FISH inverso. El FISH en hebra es un FISH en el que se extiende linealmente en un porta el fragmento de cromosoma que nos interesa estudiar; permite distinguir pequeas reorganizaciones sin tener que clonar y secuenciar, esta tcnica se usa bastante para detectar deleciones en clones o para estimar huecos en los proyectos de genoma.Por su parte, el FISH inverso es una tcnica que consiste en recortar un fragmento de cromosoma teido con Giemsa o con una sonda, esto sirve para marcar ese ADN y convertirlo en una nueva sonda; se utiliza para detectar el origen de un ADN marcador o fabricar sondas inespecficas que hibriden con determinada regin. Esta tcnica ha resultado ser muy til en el campo de la Medicina Reproductiva, con aplicacin en el diagnstico gentico preimplantatorio (DGP). Resulta una forma muy precoz de diagnstico que, apoyndose en las tcnicas de reproduccin asistida, posibilita el estudio de embriones antes de ser transferidos al tero materno y, por consiguiente, antes de que se lleve a cabo la implantacin embrionaria. Para el anlisis de anomalas cromosmicas embrionarias, tanto numricas como estructurales, puede utilizarse la tcnica DGP-FISH. Para este fin se requiere una biopsia embrionaria, mediante la cual se extrae una clula del embrin en cultivo "in vitro". Seguidamente, se procesa la muestra de tal manera que quede fijado el ncleo en interfase y se hibrida con sondas especficas para el estudio cromosmico de la patologa que se sospecha pueda estar presente en el embrin. Entre las anomalas cromosmicas que pueden ser analizadas, caben citarse:

Anomalas numricas.

Alteraciones en cromosomas sexuales: Alta frecuencia de mosaicismo en pacientes implica que, en muchos casos, slo se den defectos leves en el desarrollo. Gran relevancia en Medicina Reproductiva por ir asociado, en mayor o menor grado, a problemas de fertilidad. Tales son los casos de sndrome de Klinefelter, trisoma X y monosoma X.

Edad materna avanzada, aborto de repeticin de causa desconocida y/o fallo de implantacin: Ms de la mitad de los casos son debidos a alteraciones en los cromosomas 13, 16, 18, 21, 22, X e Y. En estos casos, la seleccin de aquellos embriones normales para los cromosomas citados, aumenta las probabilidades de conseguir una gestacin a trmino.

Factor masculino grave: Con este estudio embrionario, se pueden evitar las alteraciones cromosmicas surgidas en la descendencia de aquellos grupos de

pacientes con calidad seminal baja y que tienen que recurrir a la tcnica de microinyeccin intracitoplasmtica del espermatozoide (ICSI).

Anomalas estructurales.Surgen espontneamente, en la mayora de los casos, como consecuencia de un fallo de meiosis durante la oognesis o espermatognesis, en los casos en que los padres presentan cariotipos normales. Algunas veces, algn miembro de la pareja puede ser portador de una anomala estructural equilibrada, que podra transmitir a su descendencia. De esta manera, por medio del estudio gentico especfico de embriones de la pareja portadora, podran distinguirse aquellos embriones desequilibrados cromosmicamente de los equilibrados. Un vez hecha esta seleccin de embriones, podran transferirse con total tranquilidad al tero materno los embriones que no presentan la alteracin gnica.

[editar] Mltiple FISH

El FISH Multicolor, M-FISH o SKY (Spectral Karyotiping) es una adaptacin del FISH que permite la visualizacin de los 23 pares de cromosomas a la vez, teidos con diferentes sondas fluorescentes. Para colorear los cromosomas, dado que slo hay 5 colores distintos posibles, se puede usar la sonda de un color concreto, o combinar dos tipos de sondas para crear un nuevo color. Un programa informtico se encarga de analizar las imgenes y formar el cariotipo: organiza los cromosomas de acuerdo a la emisin de las sondas que tiene integradas y las combina hasta dar las 23 combinaciones. Se utiliza con frecuencia en el estudio de clulas tumorales. El poder de dicho mtodo reside en su habilidad para:

determinar rpidamente si hay algn cromosoma extra en el cariotipo y de qu cromosoma se trata, determinar si est presente algn cromosoma translocado y qu cromosomas estn implicados en la translocacin, permite la rpida identificacin de material cromosmico de un cromosoma que haya sido insertado en otro cromosoma, y ayuda en gran manera a la identificacin de cromosomas pequeos o fragmentados que frecuentemente implican el problema de averiguar de qu cromosoma son originarios.

Aberraciones cromosmicas
Aberracin cromosmica: es un error durante la meiosis de los gametos o de las primeras divisiones del huevo y que provoca una anomala de nmero o estructura de los cromosomas. Estos cambios pueden ser observados en la metafase del ciclo celular y que tienen su origen en roturas (procesos clastognicos) de las cadenas de ADN no reparadas o mal reparadas, entre otros factores.

Anomalas Cromosmicas Autosmicas Numricas

Nos referimos con anomalas cromosmicas autosmicas a aquellas alteraciones en el nmero de copias de alguno de los cromosomas no sexuales. En humanos, no todas las aneuploidias numricas son viables, pero existen y generan alteraciones en el fenotipo de los humanos. Entre las ms frecuentes destacan:

trisoma del cromosoma 21 ms conocida como Sndrome de Down:

es un trastorno gentico causado por la copia extra del cromosoma 21 (o una parte del mismo), en vez de los dos habituales (trisoma del par 21), caracterizado por la presencia de un grado variable de retraso mental y unos rasgos fsicos peculiares que le dan un aspecto reconocible. Es la causa ms frecuente de discapacidad psquica congnita1 y debe su nombre a John Langdon Haydon Down que fue el primero en describir esta alteracin gentica en 1866, aunque nunca lleg a descubrir las causas que la producan. No se conocen con exactitud las causas que provocan el exceso cromosmico, aunque se relaciona estadsticamente con una edad materna superior a los 35 aos tienen una probabilidad del 20% de dar a luz a un nio con Sndrome de Down. Las personas con Sndrome de Down tienen una probabilidad algo superior a la de la poblacin general de padecer algunas patologas, especialmente de corazn, sistema digestivo y sistema endocrino, debido al exceso de protenas sintetizadas por el cromosoma de ms. Estos individuos son mentalmente retardados, de baja estatura, presentan pliegue en los ojos que recuerdan a la raza de mongololica, tienen dedos cortos y gordezuelos y lengua engrosada.la no disyunco ion del par cromosmico 21 durante la espermatogenesis tambin puede producir un nio con Sndrome de Down. Trisoma del cromosoma 18 ms conocida como Sndrome de Edwards (Trisoma: cromosoma adicional en uno de los pares de cromosomas), se trata de una enfermedad cromosmica rara, caracterizada por la presencia de un cromosoma adicional en el par 18. Su prevalencia se estima entre 1/6.000 - 1/13.000 nacidos vivos. Ocurre en todas las razas y zonas geogrficas. No se conoce la causa exacta de esta enfermedad, pero se relaciona con la edad materna, es ms frecuente en madres de edad avanzada; a partir de los 35 aos la frecuencia aumenta progresivamente desde 1/2.500 hasta 1/500 a los 44 aos. En mujeres mayores a 35 aos de edad, o con un hijo anterior con trisoma 18 debe hacerse diagnstico prenatal mediante amniocentesis (procedimiento obsttrico mediante el cual se extrae una pequea cantidad de lquido amnitico para su posterior anlisis).los nios con esta enfermedad mueren por lo general antes del primer ao.

Trisoma del cromosoma 13 ms conocida como Sndrome de Patau

El sndrome de Patau, trisoma en el par 13 o trisoma D es una enfermedad gentica que resulta de la presencia de un cromosoma 13 suplementario. El cariotipo da 47 cromosomas y sirve de diagnstico prenatal por amniocentesis o coriocentesis sobre todo si los padres optan por el aborto eugensico. Se trata de la trisoma menos frecuente, descubierta en 1960 por Patau. Se suele asociar con un problema meitico materno, ms que paterno y como el sndrome de Down, el riesgo aumenta con la edad de la mujer. Los afectados mueren poco tiempo despus de nacer, la mayora a los 3 meses, como mucho llegan al ao. Se cree que entre el 80-90% de los fetos con el sndrome no llegan a trmino. DESCRICCION El feto presenta un retraso en el desarrollo y uno o varios de los siguientes sntomas:

Anomalas en el sistema nervioso Retraso mental Holoprosencefalia: es un trastorno caracterizado por la ausencia del desarrollo del prosencfalo (el lbulo frontal del cerebro del embrin). (50% de los casos) Dilatacin de la bifurcacin ventricular Alargamiento del surco posterior El bulbo raqudeo o mdula oblonga es el ms bajo de los tres segmentos del tronco del encfalo, situndose entre el puente troncoenceflico o protuberancia anular por arriba y la mdula espinal por debajo. Est separado de la protuberancia anular por el surco bulboprotuberancial. Anomalas faciales Disminucin de distancia interorbital (hipotelorismo) que puede llegar a la presencia de un solo