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Correction de lexercice : VERIFICATION DE LA REPLICATION SEMI-CONSERVATIVE

Dcembre 2008

Enonc : Pour suivre le comportement des brins dADN au cours de la rplication, on utilise une molcule voisine de la thymine, la BRDU (Bromo-Dsoxy-Uridine). Celle-ci peut sincorpore la place de la thymine lors de la rplication. Cette molcule de BRDU est colore par un ractif lacridine : Si la BRDU est prsente sur les 2 brins de lADN, le chromatide devient orange aprs traitement lacridine. Si la BRDU est prsente sur 1 des 2 brins de lADN, le chromatide devient jaune aprs traitement lacridine. Des cellules sont cultives sur un milieu contenant de la thymine, sans BRDU. Aprs une mtaphase, elles sont transfres sur un milieu sans thymine et avec BRDU, durant 2 cycles (tous les autres nuclotides tant prsents). Les cellules sont traites lacridine. Le schma montre laspect des chromosomes, tous semblables.
Aspect des chromosomes mtaphasiques aprs traitement lacridine Chromatide jaune

Chromatide orange Centromre reliant les chromatides

Question : Montrez que cette double coloration des chromosomes confirme le mcanisme semi-conservatif, de la rplication. Des schmas explicatifs sont attendus. Pour illustrer, utilisez la squence suivante : C T G A C A GACTGT

REPONSE Relev du rsultat : On voit des chromosomes ayant 1 chromatide jaune et 1 chromatide orange.

Interprtation du rsultat : le texte nous informe de la signification des colorations : La couleur orange par acridine est due la prsence de BRDU sur les 2 brins du chromatide. La couleur jaune par acridine est due la prsence de BRDU sur 1 des deux brins du chromatide.

Le texte indique que la BRDU remplace la thymine dans les nuclotides.

Conclusion du rsultat : Le chromatide orange possde de la BRDU sur les 2 brins : C B G A C A G A C T G T Le chromatide jaune possde 1 brin seulement avec de la BRDU : C B G A C A GACBGB

La question demande de montrer que la coloration du chromosome confirme le mcanisme de la rplication semiconservative : cela revient montrer que la position de la BRDU sur ces 2 chromatides confirme le mcanisme de la rplication semi-conservative. On sait que, lors de la rplication semi-conservative, lADNp carte les 2 brins de lADN dun chromatide et associe les nouveaux nuclotides en complmentarit de base avec les anciens nuclotides formant lancien brin. On applique ce mcanisme lexprience dcrite dans le texte. Le texte nous informe des conditions exprimentales utilises dans la culture des cellules : Elles sont cultives sur un milieu contenant de la thymine sans BRDU : au dpart aucun brin ne contient BRDU. Aprs une mtaphase, elles sont transfres sur un milieu sans thymine et avec BRDU. On sait quaprs la mtaphase, il y a lanaphase puis la tlophase terminant la mitose, puis ensuite linterphase durant laquelle seffectue le doublement du chromatide par rplication semi-conservative. A la rplication suivante, la BRDU sintgrera la place de la thymine, en face des nuclotides adnine. Tous les chromatides auront donc 1 brin avec T et un brin avec BRDU : C B G A C A GACTGT

Les cellules restent 2 cycles sur un milieu avec BRDU remplaant la Thymine. On sait quun cycle cellulaire reprsente la succession dune mitose (P/M/A/T) et dune interphase (G1/S/G2). Le 1 cycle pris en compte ici commence par la fin de la mitose : 1anaphase o les chromatides de chaque chromosome se sparent, puis 1tlophase o les chromosomes 1 chromatide se regroupent se poursuit avec linterphase, notamment la phase S de rplication o les chromatides se ddoublent : ici ils incorporent BRDU la place de T et deviennent tous hybrides (jaunes), se termine avec le dbut de la mitose suivante (prophase et mtaphase) Le 2 cycle considrer suit les mmes phases que le 1 cycle : fin de mitose (anaphase et tlophase) o les chromatides hybrides se regroupent dans les noyaux, interphase S o les chromatides se rpliquent en incorporant BRDU la place de T et deviennent tous bicolores jaunes et orange. Chromosome hybride 1 chromatide, issu du 1 cycle : CBGACA les 2 brins se sparent et se compltent avec BRDU GACTGT C B G A C A chromatide orange G A C B G B car 2 brins avec B C B G A C A chromatide jaune G A C T G T car hybride T/B

Aprs 2 cycles sur BRDU, le mcanisme de rplication aboutit des chromosomes avec 1 chromatide orange et 1 chromatide jaune, comme pour le rsultat exprimental obtenu : ce qui vrifie le mcanisme semi-conservatif.