Actividad anti cancergena del extracto acuoso de Bomarea cornigera en sarcomas TG-180 inducidos en ratones

Jos Surez1, 3*, Claudia Rodrguez 1,2, Melissa Barbieri1, 3, Luis Guzmn1, 2, Ricardo Alfaro1, 2 Frank Muoz1, 3, Stefanie Hoffman3 y Jos Pino1
1 Asociacin Presservaris 2 Laboratorio de Reproduccin y Biologa del Desarrollo, Facultad de Ciencias Biolgicas, Universidad Nacional Mayor de San Marcos 3 Facultad de Medicina Humana, Universidad Cientfica del Sur *Email: jsuarez@presservaris.org / pepedearmero@hotmail.com

I. INTRODUCCION
Desde hace 3500 aos el hombre ha empleado las plantas para el tratamiento del cncer y son ms de 3000 especies de plantas las que se han reportado para el tratamiento de esta enfermedad, las cuales inhiben, revierten o retardan la carcino-gnesis multi estadio (Young-Joon et al. 2001). Las investigaciones para encontrar una droga anticncer efectiva ha motivado a los cientficos a investigar la eficacia de los productos naturales en el tratamiento del cncer, teniendo en cuenta que la literatura indica que mucha gente se cura del cncer usando solo productos naturales las cuales en su mayora tienen efecto antiproliferativos y mejorador de la respuesta inmune entre otros. Segn Fabricant y Farnsworth (2001), el 80% de 122 drogas derivadas de plantas estaban relacionadas a su propsito etnofarmacolgico original, dichas plantas eran originarias de los pases tropicales. La medicina tradicional es una actividad mundialmente reconocida y tiene una importancia econmica creciente. Solamente en el ao 2007 se gastaron en todo el mundo 4 billones de dlares por la venta de drogas anti cncer de origen vegetal y es significativo que de los 141 medicamentos contra el cncer que existen en el mercado de Estados Unidos de Amrica, el 67% de stos son de origen natural (Vega- Avila et al. 2006). Bussmann & Sharon (2006) publicaron un compendio de plantas medicinales utilizadas en el norte del Per y sealaron a Bomarea dulcis (Hook.) Beauv. como una planta usada para proteger y prevenir enfermedades. Bomarea cornigera Herb. es un bejuco, endmico del Per, conocido solo en el centro del pas, en unas pocas localidades, en la cuenca del Tulumayo. Si bien el valle de Chanchamayo ha sido extensamente alterado ecolgicamente, esta especie ha sido registrada en diferentes aos desde el siglo XIX. (Len & Salinas 2006).

Foto 1. Bomarea sp.

II. MATERIALES Y METODOS

1. Animales de experimentacin: Ratones machos (Mus musculus) de la cepa albina Swiss obtenidos del Bioterio del laboratorio de Reproduccin y Biologa del Desarrollo de la Facultad de Ciencias Biolgicas de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Todos los ratones fueron mantenidos bajo un rgimen de 14 horas luz y 10 horas oscuridad, 22 24 C, 75 85 % HR y alimentados con alimento balanceado para animales (Purina, Per), y agua ad libitum. 2. Dosis: Se hirvieron nudos (8 10 g) del tronco del bejuco en agua destilada por cada dosis, durante 30 min hasta obtener una infusin en recipientes conteniendo: 2 nudos en 1000mL (1X), 2 nudos en 500 mL (2X) y 2 nudos en 250 mL (4X) mL de agua, las dosis se mantuvieron a una temperatura de -20 C en condiciones de esterilidad para su uso diario. 3. Induccin de Tumores Slidos: Se trabajo con clulas de la lnea TG180, estas fueron descongeladas a bao mara durante 1 minuto, luego se aadi al vial 1mL de solucin R10 (RPMI 1640 Sigma-Aldrich suplementado con Suero Bovino Fetal inactivado Gibco, Solucin Hepes 1M Sigma y L-Glutamine-Pe-Streptomycin Sigma) y se traslado todo el contenido a un tubo Falcn de 15 mL con 8 mL de R10 a 4 C. Las clulas de sarcoma fueron lavadas 3 veces centrifugndolas a 500 g por 10 min a 5 C. Luego fueron estabilizadas en R10 (37 C, 5% de CO2) durante 4 h. . Se calculo viabilidad, recuperacin, y concentracin clulas de sarcoma mediante el conteo de clulas (Azul de Trypan) en un microscopio compuesto. Cada ratn fue inyectado subcutneamente (dorso) con 105 clulas/100 L. Luego de la inoculacin los ratones fueron observados (comportamiento, respiracin e irritabilidad) a los 30, 60, 120, 360 y 720 minutos posteriores al inoculo y luego cada 24 h, a fin de evaluar cualquier cambio que nos indique alguna reaccin secundaria durante el proceso de colonizacin del de las clulas tumorales. Se espero 15 das para que el sarcoma se desarrollara, luego de lo cual se inicio la fase del tratamiento. 4. Diseo Experimental: Los ratones fueron distribuidos al azar en cinco grupos (n= 5, cada grupo) de tratamiento: Grupo control positivo (TI): Ciclofosfamida (0,3 mg/mL) Grupo TII (1X) Grupo TIII (2X), Grupo TIV (4X):las dosis preparadas y guardadas Grupo control negativo (TV):Solucin fisiolgica Los tratamientos fueron aplicados va intraperitoneal (Grochow & Ames 1997) una vez al da, el mismo volumen (0.3ml) a la misma hora, (12:00 m) durante 17 das. 5. Evaluacin de los Ratones: Al finalizar el periodo de tratamiento los animales fueron eutanizados por dislocacin cervical y se procedi a realizar la extraccin de los tumores (Bezerra et al. 2006) Los parmetros evaluados en los tumores fueron: peso y dimetro (balanza analtica y vernier, respectivamente). La tasa de inhibicin (%) fue calculada por la siguiente formula:

III. RESULTADOS
Tabla 1. Resultados del conteo celular post descongelamiento de clulas TG-180
100.00%
91.46% 84.49% 82.95% 83.33%

80.00%

60.00%

Foto 2. Formacin de tumor solido en regin dorsal

40.00%

20.00%

0.00% Viabilidad Recuperacion Viabilidad Recuperacion

1er Recuento

2do Recuento

Tabla 2. Efecto (en porcentaje) de la infusin de extracto acuoso de Bomarea cornigera sobre la inhibicin de tumores inducidos por clulas de Sarcoma TG180 en ratones.

IV. CONCLUSIONES
Los resultados obtenidos muestran que la infusin de B. cornigera a la concentracin 1X posee un efecto antitumoral, tanto en trminos de peso como en longitud, similar al de la Ciclofosfamida (Tabla 1) La Ciclofosfamida posee un ndice teraputico muy bajo y es frecuente encontrar efectos txicos especialmente en pacientes que han recibido tratamiento inmunosupresor, adems de ser potencialmente teratognico. Nuestra observaciones de los rganos como hgado, estomago, rin, pulmones y cerebro no encontraron lesiones macroscpicas. El mecanismo de accin responsable de la actividad antitumoral de la infusin de B. cornigera aun no est elucidado.

Tasa de inhibicin (%) = [(A B)/A] x 100

Donde A es el peso promedio del tumor del control negativo, y B es el peso del tumor en el grupo tratado.

V. RECOMENDACIONES
El presente estudio in vivo puntualiza la potencial actividad antitumoral de B. cornigera, sin embargo es importante sealar
que se requieren estudios posteriores a fin de caracterizar los principios activos y elucidar los mecanismos biolgicos por los cuales la infusin tendra este efecto (Factores de inhibicin de la mitosis (Bezerra et al. 2006), aquellos que estimulan al sistema inmune (Malik et al. 1991, Ismaili et al. 2009) o los que actuaran sobre el material gentico (Hu et al. 2007) ELISPOT con la cual podramos medir el grado de expresin del INF- por parte de los linfocitos T (Alzamora et al. 2007)

6. Anlisis Estadstico: Los resultados fueron expresados como medias D.S. y analizados por la prueba de ANOVA para un factor y el Test de Tukey (SPSS 15), p<0,05 fue considerado estadsticamente significativo.

VI. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

Xue Z., W. Yu, M. Wu, & J. Wang. 2009. In Vivo Antitumor and Antioxidative Effects of a Rapeseed Meal Protein Hydrolysate on an S180 Tumor-Bearing Murine Model. Bioscience Biotechnology Biochemistry. 73 (11):2412-2415. Patel B., D. Sattwik, R. Prakash & M. Yasir. 2010. Natural Bioactive Compound with Anticancer Potential. International Journal of Advances in Pharmaceutical Sciences 1:32-41. Hofreiter A. & E. Rodriguez. 2006. The Alstroemeriaceae in Peru and neighbouring areas. Rev. peru. biol. 13(1): 5 69.