Metabolismo

Sustratos

Catabolismo

Productos

ATP

Fuerza motriz de protones

Compuestos simples

Anabolismo

Macromolculas y otros constituyentes celulares

Enzimas
Khne, 1798; levadura. catalizadores alto poder cataltico

especificidad
regulacin Energa de activacin

Energa libre
E+S E-S E+P

Actividad enzimtica

Actividad enzimtica

pH
Concentracin del sustrato

Concentracin de la enzima Actividad enzimtica Actividad enzimtica

temperatura sales

pH

Temperatura

reversible inhibicin no reversible

competitiva no competitiva

EFECTO DEL pH SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

Los enzimas poseen grupos qumicos ionizables (carboxilos COOH; amino -NH2; tiol -SH; imidazol, etc.) en las cadenas laterales de sus aminocidos. Segn el pH del medio, estos grupos pueden tener carga elctrica positiva, negativa o neutra. Como la conformacin de las protenas depende, en parte, de sus cargas elctricas, habr un pH en el cual la conformacin ser la ms adecuada para la actividad cataltica. Este es el llamado pH ptimo. Como ligeros cambios del pH pueden provocar la desnaturalizacin de la protena, los seres vivos han desarrollado sistemas para mantener estable el pH intracelular: Los amortiguadores fisiolgicos.

EFECTO DEL pH SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

Enzima Pepsina Tripsina Catalasa Arginasa Fumarasa Ribonucleasa pH ptimo 1.5 7.7 7.6 9.7 7.8 7.8

EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA En general por cada 10C de incremento, la velocidad de reaccin se duplica. Las reacciones catalizadas por enzimas siguen esta ley general. Sin embargo, al ser protenas, a partir de cierta temperatura, se empiezan a desnaturalizar por el calor. La temperatura a la cual la actividad cataltica es mxima se llama temperatura ptima. Por encima de esta temperatura, el aumento de velocidad de la reaccin debido a la temperatura es contrarrestado por la prdida de actividad cataltica debida a la desnaturalizacin trmica, y la actividad enzimtica decrece rpidamente hasta anularse.

EFECTO DE LOS COFACTORES SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

A veces, un enzima requiere para su funcin la presencia de sustancias no proteicas que colaboran en la catlisis: los cofactores. Los cofactores pueden ser iones inorgnicos como el Fe2+, Mg2+, Mn2+, Zn2+ etc. Casi un tercio de los enzimas conocidos requieren cofactores. Cuando el cofactor es una molcula orgnica se llama coenzima. Cuando los cofactores y las coenzimas se encuentran unidos covalentemente al enzima se llaman grupos prostticos. La forma catalticamente activa del enzima, es decir, el enzima unida a su grupo prosttico, se llama holoenzima. La parte proteica de un holoenzima (inactiva) se llama apoenzima.

Apoenzima + coenzimas = Holoenzima

Vitaminas Iones metlicos
Vitamina Tiamina (B1) Coenzima Cocarboxilasa Funcin de la enzima Descarboxilacin de los alfacetocidos, p.ejemplo el cido piruvico

Riboflavina (B2)
Niacina Piridoxina (B6) cido flico

Riboflavina-adenina- Reacciones de oxidacin-reduccin dinucletido

NicotinamidaReacciones de oxidacin-reduccin adenina-dinucletido Fosfato de piridoxal cido tetrahidroflico Transaminacin y descarboxilacin de aminocidos Intercambio de unidades de carbn

COENZIMAS

EFECTO DE LAS CONCENTRACIONES SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

La velocidad de una reaccin enzimtica depende de la concentracin de sustrato. La Figura 1 muestra la velocidad de una reaccin enzimtica a 6 concentraciones distintas de sustrato. Adems, la presencia de los productos finales puede hacer que la reaccin sea ms lenta, o incluso invertir su sentido (Figura 2 ).

EFECTO DE LOS INHIBIDORES SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

Ciertas molculas pueden inhibir la accin cataltica de un enzima: son los inhibidores. Estos inhibidores bien pueden ocupar temporalmente el centro activo por semejanza estructural con el sustrato original (inhibidor competitivo) o bien alteran la conformacin espacial del enzima, impidiendo su unin al sustrato (inhibidor no competitivo) .

MODULACIN ALOSTRICA DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

Hay enzimas que pueden adoptar 2 conformaciones interconvertibles llamadas R (relajada) y T (tensa). R es la forma ms activa porque se une al sustrato con ms afinidad. Las formas R y T se encuentran en equilibrio R <==> T Ciertas sustancias tienden a estabilizar la forma R. Son los llamados moduladores positivos. El propio sustrato es a menudo un modulador positivo. Las molculas que favorecen la forma R pero que actan sobre una regin del enzima distinta del centro activo son los activadores alostricos

EFECTO DE LA MODIFICACIN COVALENTE SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

Otros enzimas pasan de una forma menos activa a otra ms activa unindose covalentemente a un grupo qumico de pequeo tamao como el Pi o el AMP. Tambin se da el caso inverso, en el que un enzima muy activo se desactiva al liberar algn grupo qumico. En las enzimas de las vas degradativas del metabolismo, la forma fosforilada es ms activa que la no fosforilada, mientras que en las vas biosintticas ocurre lo contrario.

ACTIVACIN PROTEOLTICA DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

Algunos enzimas no se sintetizan como tales, sino como protenas precursoras sin actividad enzimtica. Estas protenas se llaman proenzimas o zimgenos. Para activarse, los zimgenos sufren un ataque hidroltico que origina la liberacin de uno o varios pptidos. El resto de la molcula proteica adopta la conformacin y las propiedades del enzima activo. Muchos enzimas digestivos se secretan en forma de zimgenos y en el tubo digestivo se convierten en la forma activa. Es el caso de la a-quimotripsina, que se sintetiza en forma de quimotripsingeno . Si estos enzimas se sintetizasen directamente en forma activa destruiran la propia clula que las produce. As, la tripsina pancretica (una proteasa) se sintetiza como tripsingeno (inactivo). Si por alguna razn se activa en el propio pncreas, la glndula sufre un proceso de autodestruccin (pancreatitis aguda), a menudo mortal.

Reaccin Hidrlisis de casena Inversin de sacarosa Hidrlisis de butirato etlico Descomposicin de H2O2

Catalizador HCl Tripsina H+ Invertasa de levadura H+ Lipasa pancretica plata Catalasa de hgado

Ea (cal/mol) 20 600 12 000 26 000 11 500 13 200 4 200 18 000 11 700 5 500

Unidad Internacional de Actividad Enzimtica, es la cantidad de

enzima que se requiere para transformar en producto un micromol de sustrato por minuto en condiciones de T y pH ptimos.
Numero de recambio, es el nmero de molculas de sustrato

transformadas en producto, por minuto, por molcula de enzima Invertasa 42 000 Polifenoloxidasa Lipooxigenasa Lactasa B-amilasa 120 000 180 000 750 000 1 200 000

Usos en alimentos:
Fermentacin Ablandamiento de carnes Elaboracin de quesos

De qu depende la actividad? Conformacin

Centro activo

Cofactores
Coenzimas: Vitaminas (riboflavina, tiamina, niacina, etc) Cationes (Cu2+, Mo2+, Zn2+, Fe2+, Ca2+)

Temperatura pH

El sitio activo

Grupos ionizables en el centro activo

Clasificacin de las enzimas

Nomenclatura: 1965. Comisin de Enzimas de la Unin Internacional de Bioqumica

1. Oxidoreductasas 2. Transferasas (sintasa) 3. Hidrolasas 4. Liasas 5. Isomerasas 6. Ligasas (sintetasas)

EJEMPLOS DE ENZIMAS

1. Oxidoreductasas
Peroxidasas Fenolasas cido ascrbico oxidasa

Catalasa
Lipoxigenasa Glucosa oxidasa

2. Transferasas (sintasa)

3. Hidrolasas, introduccin de agua

Lipasas Proteasas carbohidrasas

4. Liasas, rompimiento sin participacin del agua, remocin de

agua y formacin de dobles enlaces Pectin liasa

5. Isomerasas. Cis-trans, L-D, aldehdo-cetona.

Glucosa isomerasa
racemasas

6. Ligasas, se necesita ATP (sintetasas)

NOMENCLATURA DE LA COMISIN ENZIMTICA

El nombre de cada enzima puede ser identificado por un cdigo numrico, encabezado por las letras EC (enzyme commission), seguidas de cuatro nmeros separados por puntos. El primer nmero indica a cual de las seis clases pertenece el enzima, El segundo se refiere a distintas subclases dentro de cada grupo,

NOMENCLATURA DE LA COMISIN ENZIMTICA

El tercero y el cuarto se refieren a los grupos qumicos especficos que intervienen en la reaccin. As, la ATP:glucosa fosfotransferasa (glucoquinasa) se define como EC 2.7.1.2. El nmero 2 indica que es una transferasa, el 7 que es una fosfotransferasa, el 1 indica que el aceptor es un grupo OH, y el ltimo 2 indica que es un OH de la D-glucosa el que acepta el grupo fosfato.

Nomenclatura

1.1.1.27 1. Oxidoreductasa 1.1. Provoca el rompimiento o deshidrogenacin entre H-C-OH 1.1.1. Utiliza como coenzima el NAD 1.1.1.27.Numero particular de la lactato deshidrogenasa

CINETICA ENZIMATICA
1. Protenas con actividad cataltica de los seres vivos. 2. Unidades del Metabolismo 3. Regulan la vel. de las reac. qum. espontneas (DG-). 4. No promueven reacciones no-espontneas (DG +). 5. Incrementan la Vel. De reaccin 103 a 1012 veces sin afectar el sentido de la reaccin. 6. No forman parte del producto de la reaccin.

PROPIEDADES GENERALES
AUMENTAN LA VELOCIDAD DE REACCIN
De 106 to 1012 veces vs sin enzima. An ms rpido que los catalizadores qumicos.

CONDICIONES DE REACCIN
Temperatura 25-40 oC (algunas hasta 75 oC) pH neutro (5-9), la mayora 6.5 7.5 Presin atmosfrica normal

CAPACIDAD DE REGULACIN
Por concentracin de sustrato Por concentracin de enzima Por inhibidores competitivos (semejantes al sustrato) Por inhibidores no competitivos (modificacin covalente de la enzima) Por regulacin alostrica

ALTA ESPECIFICIDAD DE REACCIN

Interaccin estereoespecfica con el sustrato No hay productos colaterales

Modelos de interaccin enzima-sustrato

Estudio de la velocidad de una reaccin enzimtica CINETICA:

Estudio de la velocidad de cambio de sustratos a productos

VELOCIDAD:
Cambio en la concentracin de sustrato o producto por unidad de tiempo

TASA:
Cambio en la cantidad de sustrato o producto por unidad de tiempo

V=-d[S]/dt = d[P]/dT Complejo Enzima-Sustrato

Sustrato

Producto

Curva de progreso de una reaccin enzimtica

S4>S3>S2>S1

Orden 1

Orden 0

Medida de la velocidad de una reaccin enzimtica

V=-d[S]/dt = d[P]/dT

Midiendo la desaparicin del sustrato o la aparicin del producto

En presencia de cantidades catalticas de enzima (tpicamente: 10-8-10-12 M) Se determina la velocidad inicial de reaccin ([S] es prcticamente constante)

El modelo de Michaelis-Menten

Equilibrio V0 de [S4]

Velocidad mxima (Vmax) Velocidad inicial (V0) Conc. de sustrato [S]

E+S

k1 k2

ES

k3 k4

E+P

Suponiendo que la reaccin inversa de E y P sea desdeable. Por tanto la velocidad de formacin de los productos es:

En el estado estacionario las velocidades de formacin y degradacin de ES son iguales. Por consiguiente:

Formacin a partir de sustrato = descomposicin en la enzima y el sustrato + descomposicin en la enzima y los productos

Se puede reordenar de la forma siguiente:

Combinando la relacin de las constantes de velocidad de la ecuacin en una sola constante KM

Combinando las ecuaciones tenemos:

Combinando con la ecuacin de Velocidad obtenemos una expresin para V en funcin de Et y S.

Ecuacin de Michaelis-Menten

si S>>Km, entonces

Por lo tanto la ecuacin puede escribirse de la forma:

El modelo de Michaelis-Menten

Curva hiperblica
Cintica de saturacin

Cintica de Michaelis-Menten
[S] = KM V = Vmax/2 [S] >> KM V = Vmax

V=

Vmax [S] Km + [S]

El estado estacionario en la cintica enzimtica

Modelo del estado estacionario (Supuestos de aplicacin)

La concentracin de ES es constante: V formacin = V destruccin Cuando [S] es saturante, todo el enzima est en forma ES: [ET] [ES]
Al inicio de la reaccin, el paso ESE + P es irreversible

Linealizacin de la ecuacin de Michaelis-Menten

Representaciones de Lineweaver-Burk

Representaciones de Eadie Hofstee

Implicaciones e inters prctico de la ecuacin de MichaelisMenten

Significado de Km (Constante de Michaelis-Menten): Concentracin de sustrato para la que se alcanza la velocidad igual a la mitad de la mxima (Vmax) Indica la afinidad de un enzima por un sustrato determinado

Permite comparar la afinidad de un enzima por distintos sustratos y la

afinidad de varios enzimas por el mismo sustrato Se puede determinar con facilidad en el laboratorio La velocidad de reaccin es muy sensible a cambios en [S] en la zona de Km Significado de Kcat ( K3, Nmero de recambio):

Nmero de moles de sustrato transformado por unidad de tiempo

Su inversa define el tiempo requerido por el enzima para transformar una molcula de sustrato

Km de algunas enzimas
ENZIMA Catalasa SUSTRATO H2O2 Km (mM) 25.0

Hexoquinasa

ATP
D-Glucosa D-Fructosa

0.4
0.05 1.5 9.0 108.0 2.5 4.0 5.0

Anhidrasa carbnicoa Quimotripsina -Galactosidasa Treonina deshidrogenasa

HCO3Gliciltirosinilglicina N-Benzoiltirosinamida D-Lactosa L-Treonina

La KM es un parmetro de Actividad Enzimtica

La KM es inversamente proporcional con la actividad de la enzima. Valor de KM grande, baja actividad Valor de KM pequeo, alta actividad

Inhibicin enzimtica (competitiva)

INHIBICION COMPETITIVA
K1 E+S + K-1 I Ki ES Kcat E+P

EI

Inhibicin no competitiva

Inhibicin no competitiva
K1 E+S + K-1 I Ki K1 EI + S
K-1

Kcat ES + I E+P

EIS

INHIBIDORES ENZIMATICOS IRREVERSIBLES

 Una molcula de enzima no tiene por qu actuar siempre a la misma velocidad. Su actividad puede estar modulada por:

REGULACION DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA

cambios en el pH cambios en la temperatura presencia de cofactores las concentraciones del sustrato y de los productos finales presencia de inhibidores modulacin alostrica modificacin covalente activacin por proteolisis isoenzimas