.. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :..

ELEMENTO8 DE CNETCA ENZMATCA ELEMENTO8 DE CNETCA ENZMATCA ELEMENTO8 DE CNETCA ENZMATCA ELEMENTO8 DE CNETCA ENZMATCA


Un Enfoque Totalmente Prctico
Michaelis, Inhibicin Reversible Simple, Hill y pH

Prof. Jos Antonio Pliego Garza



.. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :..
P E
k
k
ES
k
k
S E +

+
2
2
1
1


La constante de velocidad k
-2
del regreso de productos a complejo ES, es
eliminada tomando las velocidades iniciales de la reaccin.

P E
k
ES
k
k
S E +

2
1
1


Para analizar mas fcilmente la reaccin podemos dividirla en 2, asumiendo la
siguiente mentira piadosa

k
-1
>>>k
2


as tendremos una primera parte prcticamente en equilibrio, que nos permitir
describir [ES] en trminos de cosas que podamos medir o controlar.
S E
k
k
ES
ES
k
k
S E
+

1
1
1
1

Primero veamos la reaccin como la disociacin del complejo ES en S y E

] [
] [
] [
] [
] ][ [
S
ES K
E
ES
S E
K
S
S
=
=

As tendremos K
S
que es la constante de sustrato, para luego resolver para la
concentracin de enzima libre [E]

Luego planteamos la ecuacin de conservacin para la enzima [E]
0


] [ ] [ ] [
0
ES E E + =

Sustituyendo la [E]

] [
] [
] [
] [
0
ES
S
ES K
E
S
+ =

Tomamos a [ES] como factor comn

.. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :..
) 1
] [
]( [ ] [
0
+ =
S
K
ES E
S


y despejamos.

1
] [
] [
] [
0
+
=
S
K
E
ES
S


Multiplicamos todo por [S]

] [
] [ ] [
] [
0
S K
S E
ES
S
+
=

De esta manera tenemos [ES] en trminos de cosas que podemos medir.

P E
k
ES
k
k
S E +

2
1
1


As que en la segunda parte, tendremos la reaccin de velocidad.

P E
k
ES + >

2


] [
] [ ] [
] [
0
2 0
2 0
S K
S E
k v
ES k v
S
+
=
=


Veamos lo que sucede a muy bajas concentraciones de sustrato, en donde +[S] se
hace despreciable

] [
] [
0 2
0
S
K
E k
v
S
=
Vo a muy bajas [S]
0.00
2.00
4.00
6.00
8.00
10.00
0.00 1.00 2.00 3.00
[S]
V
o
Vo

.. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :..
quedando una ecuacin lineal o de primer orden para [S]
1
.

Por el contrario, a muy altas concentraciones de sustrato la K
S
es la que se hace
despreciable

Vm S E k v = =
0
0 2 0
] [ ] [
Vo a muy elevadas concentraciones de [S]
0.00
20.00
40.00
60.00
80.00
100.00
0.00 50.00 100.0
0
150.0
0
200.0
0
[S]
V
o
Vo
Vm

quedando una ecuacin de orden cero para [S]
0
, definimos entonces Vm=k
2
[E]
0


la ecuacin resulta ser la ecuacin de una hiprbola rectangular

] [
] [
0
S K
S Vm
v
S
+
=
Hiprbola Rectangular
0.00
10.00
20.00
30.00
40.00
50.00
60.00
70.00
80.00
90.00
0.00 50.00 100.00 150.00 200.00
[S]
V
o
Vo

.. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :..
para corregir nuestra mentira piadosa, analizaremos empricamente el significado
de la K
S


Km S K
S S K
Vm
S Vm
S K
S K
S Vm Vm
S
S
S
S
= =
=
= +
+
=
] [
] [ ] [ 2
] [ 2
] [
] [
] [
2


de esta forma, llamaremos Constante de Michaelis Km a la concentracin de
sustrato [S] necesaria para alcanzar de la Vm de la reaccin

As tendremos la Ecuacin de Michaelis y Menten

] [
] [
0
S Km
S Vm
v
+
=


Sin mentiras piadosas

] [ ] [ ] ][ [
] [
2 1 1
ES k ES k S E k
t
ES
=

en Steady State 0
] [
=

t
ES


luego

Km
k
k k
ES
S E
ES k k S E k
ES k ES k S E k
=
+
=
+ =
+ =

1
2 1
2 1 1
2 1 1
] [
] ][ [
] )[ ( ] ][ [
] [ ] [ ] ][ [


.. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :..
Formas Lineales

Lineweaver & Burk
(Dobles Recprocas)

Primero le damos la vuelta a la Ec. de Michaelis & Menten

Vm S Vm
Km
S Vm
S
S Vm
Km
S Vm
S Km
v
1
] [ ] [
] [
] [ ] [
] [ 1
0
+ = + =
+
=

luego buscamos b mx y + =

Vm S Vm
Km
v
1
] [
1 1
0
+ =

Lineweaver & Burk
-0.10
0.00
0.10
0.20
0.30
0.40
0.50
-1.00 0.00 1.00 2.00
1/[S]
1
/
V
o 1/Vo
Regresin L&B


Si
m
b
a

=

Entonces
Km
Vm
Km
Vm
a
1
1

=

Hanes & Wolf

Para obtener esta forma lineal, solo hay que multiplicar la Ec. de Lineweaver &
Burk por la [S].

.. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :..
[S](
Vm S Vm
Km
v
1
] [
1 1
0
+ = )

Vm
S
Vm
Km
Vm
S
S Vm
S Km
v
S ] [ ] [
] [
] [ ] [
0
+ = + =

Acomodando para la recta b mx y + =

Vm
Km
S
Vm v
S
+ = ] [
1 ] [
0


Hanes & Woolf
-0.20
0.00
0.20
0.40
0.60
0.80
1.00
-5.00 0.00 5.00 10.00
[S]
[
S
]
/
V
o
[S]/Vo
Regresin H&W


Aqu tendremos que Km
Vm
Vm
Km
a =

=
1


Eadie & Hofstee

Aqu partiremos de la Ec. de Michaelis

] [
] [
0
S Km
S Vm
v
+
=


] [ ] [
] [ ]) [ (
0 0
0
S Vm S v Km v
S Vm S Km v
= +
= +


luego dividimos todo sobre [S]
.. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :..

Vm v
S
Km v
S
S Vm
S
S v
S
Km v
= +
= +
0
0
0 0
] [
] [
] [
] [
] [
] [


acomodando trminos

Vm
S
v
Km v + =
] [
0
0


Eadie & Hofstee
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
-4 1 6 11
Vo/[S]
V
o
Vo/[S]
Regresin E&H


Km
Vm
Km
Vm
a =

=

Mtodo Lineal directo de Eisenthal y Cornish-Bowden

Este mtodo consiste en despejar de la Ec. de Eadie & Hofstee las variables como
constantes y las constantes como variables.

Vm
S
v
Km v + =
] [
0
0


0
0
] [
v Km
S
v
Vm + =

donde

.. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :..
] [
] [
0
0
S
S
v
v
a =

=

quedando una recta en su forma simtrica

1
] [
0
=
S
Km
v
Vm


por lo que al graficar cada punto ([S],Vo) como la abscisa (-Km) y la ordenada (Vo)
al origen de la recta que corta los ejes Vm y Km., tendremos una familia de rectas
que deberan cruzarse en la solucin comn a todas ellas que sera la Vm y la
Km.
Como esto no sucede por la variacin experimental, tendremos una familia de
cruces de la rectas, por lo que se tendr que calcular la mediana de las posibles
Vm y Km. Se utiliza la mediana, para no sesgar los valores debido a puntos
extremos.



.. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :..
Inhibicin Reversible

E + S ES E+P
+ + x
I I x



EI ESI x

La ecuacin general de ste modelo

)
] [
1 ]( [ )
] [
1 (
] [
0
I i
K
I
S
K
I
Km
S Vm
v
+ + +
=

Inhibicin Competitiva, se observa cuando I solo se une a la enzima libre E.

] [ )
] [
1 (
] [
0
S
K
I
Km
S Vm
v
i
+ +
=

En este tipo de inhibicin la Km aumenta, mientras que la Vm no sufre cambio
alguno.

Inhibicin Acompetitiva o Incompetitiva, se observa cuando I solo se une al
complejo enzima-sustrato ES.

)
] [
1 ]( [
] [
0
I
K
I
S Km
S Vm
v
+ +
=

En este tipo de inhibicin la Km y la Vm disminuyen en la misma proporcin.

Inhibicin No Competitiva, se observa cuando I se une exactamente de la misma
manera a ambas formas de la enzima.

)
] [
1 ])( [ (
] [
0
iI
K
I
S Km
S Vm
v
+ +
=

En este tipo de inhibicin la Vm disminuye, mientras que la Km no sufre cambio
alguno.

K
I
K
i

.. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :..
Inhibicin Mixta tipo Competitiva, se observa cuando I se une a ambas formas de
la enzima, pero preferentemente a la enzima libre E.

)
] [
1 ]( [ )
] [
1 (
] [
0
I i
K
I
S
K
I
Km
S Vm
v
+ + +
=

K
i
< K
I


En este tipo de inhibicin la Km aumenta mientras que la Vm disminuye.

Inhibicin Mixta tipo Acompetitiva, se observa cuando I se une a ambas formas de
la enzima, pero preferentemente al complejo enzima-sustrato ES.

)
] [
1 ]( [ )
] [
1 (
] [
0
I i
K
I
S
K
I
Km
S Vm
v
+ + +
=

K
i
> K
I


En este tipo de inhibicin la Km y la Vm disminuyen pero no lo hacen en la misma
proporcin.

Inhibidores Reversibles
Inhibicin Vm Km Vm/Km K
i
K
I

Competitiva = aumenta disminuye

-
A(In)competitiva disminuye disminuye = -

No competitiva disminuye = disminuye

Mixta Competitiva disminuye aumenta disminuye

Mixta Acompetitiva disminuye disminuye disminuye

I n hi b i c i n R e v e r s i bl e
0 . 00
10 . 00
20 . 00
30 . 00
40 . 00
50 . 00
60 . 00
70 . 00
80 . 00
90 . 00
100 . 00
0 5 0 10 0 150 2 00 2 50
[ S ]
Vo
Vcomp
Vacomp
Vn ocomp
Vmxcomp
Vmxacomp

.. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :..
La mejor manera de distinguir el tipo de Inhibicin, es utilizando la Ec. de Eadie &
Hofstee.

Inhibicin Competitiva

Vm
S
v
K
I
Km v
i
+ + =
] [
)
] [
1 (
0
0


Inhi bi ci n Compet it iva
y = -37.5x + 100
y = -15x + 100
0.00
20.00
40.00
60.00
80.00
100.00
120.00
140.00
-1. 00 0.00 1.00 2.00 3. 00 4.00 5.00 6.00 7. 00
Vo/ [ S]
Vcomp
Contr ol
Competi ti va
Contr ol

.. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :..
Inhibicin A(In)competitiva

)
] [
1 (
] [
)
] [
1 (
0
0
I I
K
I
Vm
S
v
K
I
Km
v
+
+
+

=

I nhibicin A( In) compet i t iva
y = - 15x + 100
y = -6x + 40
0.00
20.00
40.00
60.00
80.00
100.00
120.00
-2. 00 -1.00 0.00 1.00 2.00 3. 00 4.00 5.00 6.00 7.00
Vo/ [ S]
Vacomp
Cont r ol
Cont r ol
Acompeti ti va

.. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :..
Inhibicin No Competitiva

)
] [
1 (
] [
0
0
i
K
I
Vm
S
v
Km v
+
+ =

I nhibicin No Compet i t iva
y = -15x + 100
y = -15x + 40
0. 00
20. 00
40. 00
60. 00
80. 00
100. 00
120. 00
-2. 00 -1.00 0.00 1.00 2. 00 3. 00 4.00 5.00 6. 00 7. 00
Vo/ [ S]
Vnocomp/ [S]
Contr ol
Contr ol
NoCompeti ti va

.. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :..
Inhibicin Mixta

)
] [
1 (
] [
)
] [
1 (
)
] [
1 (
0
0
I I
i
K
I
Vm
S
v
K
I
K
I
Km v
+
+
+
+
=

Mixta Competitiva

I nhibi ci n M i xt a Compet it iva
y = - 15x + 100
y = - 24x + 40
0.00
20.00
40.00
60.00
80.00
100.00
120.00
-2. 00 -1. 00 0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6. 00 7. 00
Vo/ [ S]
Vmxcomp/ [S]
Contr ol
Contr ol
Mi xtaCompeti ti va

.. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :..
Mixta Acompetitiva

Inhibicin M ixt a Acompet i t i va
y = -15x + 100
y = - 9.375x + 25
0.00
20.00
40.00
60.00
80.00
100.00
120.00
-2. 00 -1. 00 0. 00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00
Vo/ [ S]
Vmxacomp/ [S]
Cont r ol
Mi xt aAcompeti ti va
Mi xt aAcompeti ti va



.. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :..
Cintica Sigmoide de Algunas Enzimas Alostricas

El modelo que considerarmos, es el siguiente:

hP E
k
ES
k
k
hS E
h
+

2
1
1


Al igual que con el Modelo de Michaelis, para analizar mas fcilmente la reaccin
podemos dividirla en 2, asumiendo la siguiente mentira piadosa

k
-1
>>>k
2


as tendremos una primera parte prcticamente en equilibrio, que nos permitir
describir [ES
h
] en trminos de cosas que podamos medir o controlar.
hS E
k
k
ES
ES
k
k
hS E
h
h
+

1
1
1
1

Primero veamos la reaccin como la disociacin del complejo ES
h
en S y E

h
h S
h
h
S
S
ES K
E
ES
S E
K
] [
] [
] [
] [
] ][ [
=
=


As tendremos K
S
que es la constante de sustrato, para luego resolver para la
concentracin de enzima libre [E]

Luego planteamos la ecuacin de conservacin para la enzima [E]
0


] [ ] [ ] [
0 h
ES E E + =

Sustituyendo la [E]

] [
] [
] [
] [
0 h h
h S
ES
S
ES K
E + =

Tomamos a [ES
h
] como factor comn

) 1
] [
]( [ ] [
0
+ =
h
S
h
S
K
ES E
.. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :..
Cintica Sigmoide
0.0
1.0
2.0
3.0
4.0
5.0
0.0 0.5 1.0 1.5 2.0
[S]
V
o
v

y despejamos.

1
] [
] [
] [
0
+
=
h
S
h
S
K
E
ES

Multiplicamos por [S]
h


h
S
h
h
S K
S E
ES
] [
] [ ] [
] [
0
+
=

De esta manera tenemos [ES
h
] en trminos de cosas que podemos medir.

En la segunda parte, tendremos la reaccin de velocidad.

hP E
k
ES
h
+ >

2

h
S
h
h
S K
S E
k v
ES k v
] [
] [ ] [
] [
0
2 0
2 0
+
=
=


Veamos lo que sucede a muy bajas concentraciones de sustrato, en donde +[S]
h

se hace despreciable.

h
S
S
K
E k
v ] [
] [
0 2
0
=
La curva resultante, es una curva de potencia ya que el rden inicial de la
reaccin, es diferente a 1,
.. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :..
Sigmoide
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
0 5 10 15 20
[S]
V
v
quedando una ecuacin de orden h para [S]
h
.

Por el contrario, a muy altas concentraciones de sustrato la K
S
es la que se hace
despreciable

Vm S E k v = =
0
0 2 0
] [ ] [

Vo a muy elevadas concentraciones de [S]
0.00
20.00
40.00
60.00
80.00
100.00
0.00 50.00 100.0
0
150.0
0
200.0
0
[S]
V
o
Vo
Vm


quedando una ecuacin de orden cero para [S]
0
, definimos entonces Vm=k
2
[E]
0


la ecuacin resulta ser la ecuacin de una sigmoide

h
S
h
S K
S Vm
v
] [
] [
0
+
=


.. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :..
para corregir nuestra mentira piadosa, analizaremos empricamente el significado
de la K
S


Km S K
S S K
Vm
S Vm
S K
S K
S Vm Vm
h
S
h h
S
h
h
S
h
S
h
= =
=
= +
+
=
] [
] [ ] [ 2
] [ 2
] [
] [
] [
2


de esta forma, llamaremos Constante de Michaelis Km a la concentracin de
sustrato [S] necesaria para alcanzar de la Vm de la reaccin

As tendremos la Ecuacin de Michaelis y Menten modificada para cinticas
iniciales de rden h 1

h
h
S Km
S Vm
v
] [
] [
0
+
=


Sin mentiras piadosas

] [ ] [ ] ][ [
] [
2 1 1 h h
h h
ES k ES k S E k
t
ES
=

en Steady State 0
] [
=

t
ES
h


luego

Km
k
k k
ES
S E
ES k k S E k
ES k ES k S E k
h
h
h
h
h h
h
=
+
=
+ =
+ =

1
2 1
2 1 1
2 1 1
] [
] ][ [
] )[ ( ] ][ [
] [ ] [ ] ][ [


.. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :..
Km S h
v
v Vm
S Km
v
v Vm
S Km
ES
E
h
h
h
log ] log[ log
] [
] [
] [
] [
+ =

Obtencin de las Constantes Cinticas de la Curva Sigmoide

Ecuacin de Hill

Partiendo de la ecuacin

] [
] ][ [
h
h
m
ES
S E
K =


Y considerando que
























Tendrmos



.. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :..
Km S h
v
v Vm
log ] log[ log + =

Vm
S
v
Km v
h
+ =
] [
La ecuacin de Hill




Aqu el problema es que de donde? o cmo obtenemos Vm?
Definitivamente, con la ecuacin de Hill es imposible.
Sin embargo, si consideramos la ecuacin de Eadie & Hofstee,
en la que, si se utiliza el valor correcto de h, tendremos una lnea recta en la que la
pendiente con signo contrario, ser la Km y la ordenada al origen ser la Vm.

La manera de hacer esto, segn el mtodo propuesto por el autor (Prof. Pliego),
consiste en evaluar las rectas obtenidas por mnimos cuadrados analizando un
rango determinado de valores para h (digamos entre 0.1 y 5 en incrementos de
0.1) y escogiendo la recta que de la mejor correlacin estadstica evaluada a
travs del coeficiente de determinacin r
2
.

.. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :..
Efecto del pH

El efecto del pH en la cintica de las enzimas es sumamente complejo debido a
que el pH afecta el estado de ionizacin de:
a. la enzima, afectando:
1) la concentracin de las formas inicas activas de la enzima (E
0
)
2) la formacin del complejo ES (Km)
3) la velocidad de descomposicin del complejo ES hacia productos (k
2
)
b. los sustratos y cofactores (grupos prostticos y coenzimas), de los cuales
solo algunas formas inicas son reconocidas por la enzima
De cualquier manera si podemos calcular la concentracin de las especies
inicas de una molcula poliprotonada a cualquier pH, podremos predecir con
cierta exactitud la actividad enzimtica en funcin del pH.




El nmero de especies inicas que puede tener una
molcula poliprotonada, ser igual al nmero de pKas
diferentes + 1.

Por ejemplo, si una molcula poliprotonada tiene 3 pKas
diferentes, tendr 4 especies inicas diferentes.

En base a la ecuacin de Henderson y Hasselbalch, se han
desarrollado las siguientes frmulas:

1.- Para calcular la concentracin de la especie inica totalmente protonada
[I]
1
tenemos la primera frmula.

) log( 1
] [
] [
1
0
1
pKa pH anti
ada Poliproton
I
+
=

o lo que es lo mismo

1
10 1
] [
] [
0
1
pKa pH
ada Poliproton
I

+
=


donde [Poliprot]
o
, es la concentracin total de la molcula poliprotonada.

.. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :..
2.- Para calcular la concentracin de la segunda especie inica [I]
2
y de todas
las que sigan, hasta llegar a la penltima [I]
m-1
, necesitamos definir lo
siguiente:
m = nmero total de especies inicas = nmero de pKas diferentes + 1
n = nmero ordinal para los pKas, ordenados desde el mas cido (menos
bsico) pKa
1
, hasta el menos cido (mas bsico) pKa
m-1
.

As que para calcular [I]
n
, para n desde n=2 hasta n=m-1.
tendremos

)
) log( 1
1
) log( 1
1
( ] [ ] [
1
0

+
=
n n
n
pKa pH anti pKa pH anti
ada Poliproton I

o lo que es lo mismo

)
10 1
1
10 1
1
( ] [ ] [
1
0

+
=
n n
pKa pH pKa pH
n
ada Poliproton I


3.- Por ltimo, para calcular la ltima de las especies inicas [I]
m,
usaremos
cualquiera de las siguientes frmulas.

)
) log( 1
1
1 ( ] [ ] [
1
0

+
=
m
m
pKa pH anti
ada Poliproton I

o lo que es lo mismo

)
10 1
1
1 ( ] [ ] [
1
0

+
=
m
pKa pH
m
ada Poliproton I

o lo que es lo mismo

) log( 1
] [
] [
1
0
pH pKa anti
ada Poliproton
I
m
m
+
=

o lo que es lo mismo

pH pKa
m
m
ada Poliproton
I

+
=
1
10 1
] [
] [
0



.. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :.. .. .: u.|.... ...,. :..
Especies Inicas
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
pH
[Ion] %
[Ion]1 %
[Ion]2 %
[Ion]3 %
[Ion]4 %
[Ion]5 %


Especies Inicas
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
pH
[Ion] %