ELECTROFORESIS.

MARITZA CAMACHO OLVERA. RUBEN LINCE LUNA. CARLOS EMMANUEL CRUZ PONCE. FABIOLA CHONG SANCHEZ.

Antecedentes
Elektron= ambar, phoros= trasladar Arne Tiselius 1937 Electroforesis de frentes en movimiento

ELECTROFORESIS.
Es un mtodo analtico de separacin, a travs del movimiento de molculas cargadas en un campo elctrico y se emplea particularmente para la caracterizacin y anlisis de polmeros biolgicos cargados como las protenas y los cidos nucleicos.

Tipos de elctroforesis
Electroforesis libre
Aplicada en soluciones o suspenciones Poco poder resolucin

Electroforesis de zona
Aplicada en muestras con un soporte estabilizante. Amplia resolucin

FUNDAMENTOS.
Alta sensibilidad, resolucin y versatilidad. -Mtodo de separacin de: cidos nucleicos Protenas Otras biomolculas Entrega criterio de pureza. Separa mezclas complejas Permite determinar: El peso molecular de una protena Punto isoelctrico. Nmero de cadenas polipeptdicas de una protena.

FUNDAMENTOS.
Migracin de solutos en un campo elctrico. Se mueven las partculas en base a: Su carga neta. Peso molecular. Estructura tridimensional.

FUNDAMENTOS.
La velocidad de migracin (V) de la partcula es directamente al producto de su carga efectiva (q) y el gradiente de potencial elctrico (E) e inversamente proporcional al coeficiente de friccin (f) relativo a la talla y forma de la molcula, o sea, a la resistencia que le ofrece el medio. V = qE/f

FUNDAMENTOS.
Las biomolculas: Poseen carga elctrica. Grupos catinicos y aninicos disociables. La carga neta de una Molcula: pH del medio La interaccin con otras pequeas molculas de iones. La interaccin con otras macromolculas.

DNA

PROTEINAS

GELES USADOS.
Los soportes usados Polmeros Gel poroso Restringe el movimiento de las molculas Disminuyen los flujos de conveccin del solvente. Se han usado como soporte Papel (celulosa) Almidn Poliacrilamida Agarosa Acetato de Celulosa

 La electroforesis presenta gran poder resolutivo. Pequea cantidad de protena. Zona estrecha (carril). Gran longitud de trayecto (longitud del carril).

 Equipamiento necesario. Fuente de poder, Cubeta vertical u horizontal. 2 electrodos Actualmente existen sistemas automatizados de electroforesis.

ELECTROFORESIS EN GEL DE POLIACRILAMIDA.

La poliacrilamida: Soporte empleado frecuentemente (3.5 20 %) Qumicamente Inerte.

La poliacrilamida: De propiedades uniformes Geles transparentes Estabilidad mecnica Insolubles en agua Relativamente no inicos Rango pequeo de separacin Alta resolucin El tamao del poro, vara de manera uniforme con la concetracin del gel. De preparacin rpida, pero trabajosa Reproducible

 Separacin electrofortica Funcin importante: pH Fuerza inica Gradiente de potencial Tiempo de corrida Concentracin de acrilamida y bisacrilamida Las condiciones ptimas Determinadas experimentalmente

ELECTROFORESIS EN GEL DE AGAROSA.

Polisacrido extraido de algas marinas Usado de 0.5 2% Geles fciles de preparar No es txico Amplio rango de separacin Baja resolucin Usado tpicamente para ADN

CUANTIFICACION DE DNA.
Se cuantifica el DNA en el espectrofotmetro de luz UV utilizando como blanco TE. Al TE se le agrega DNA aislado y se lee la absorbancia en el rango de 260-280nm. Se calcula la concentracin de DNA. La lectura 260nm indica la presencia de DNA y los 280nm a protenas contaminantes. Cociente de 260/280nm debe ser 1.6 de DNA para considerarse puro. Se hacen clculos para cargar DNA en la cmara.

PARTES DE LA CAMARA DE ELECTROFORESIS.

PREPARACION DE LA CAMARA DE ELECTROFORESIS.

ANALISIS EN EL TRANSILUMINADOR.

ELECTROFORESIS DE PROTEINAS PLASMATICAS.

En clnica se usa normalmente acetato de celulosa Soporte Inerte Se lee en un fotodensmetro Dibuja un trazado de absorbancia Se obtiene una curva El proteinograma Permite orientacin rpida y clnicamente significativas