EL potencial de accin de Na

Sirvindonos del programa informtico Neurons in action pretendemos con este trabajo conocer en profundidad el potencial de accin del sodio. Concretamente llevaremos a cabo las siguientes tareas: -Observar el potencial de accin y las corrientes inicas que conlleva, as como los cambios en la conductancia en un patch de la membrana. -Experimentar con la temperatura, analgsicos y toxinas y observar sus efectos en el potencial de accin. -Examinar el periodo refractario que tiene lugar tras un potencial de accin y las consecuencias de este en la excitabilidad de la membrana

Comprender la forma de la corriente de sodio

Tras haber estimulado un axn y haber disparado un potencial de accin, los canales de sodio dependientes de voltaje se abren originando esto una corriente de iones de sodio. Como sabemos, con unos milisegundos de posterioridad tendr lugar la apertura de los canales de potasio, lo que igualmente dar lugar a una corriente de iones de potasio. Comparando ambas corrientes, observamos una clara diferencia en la forma de las grficas: en el curso temporal de la corriente de sodio aparecen dos fases (Grfica 2).

Grfica 1: Potencial de accin de membrana En rojo: Potencial de equilibrio del sodio En verde: Estmulo (20mV) En negro: Potencial de accin En azul: Potencial de equilibrio del potasio Eje X: tiempo (ms) Eje Y: voltaje

Grfica 2: Corrientes inicas de sodio y potasio En rojo: Corriente inica de iones de sodio En azul: Corriente inica de iones de potasio Eje X: tiempo (ms) Eje Y: corriente de membrana (mA/cm^2)

Para explicar la causa del ciclo temporal de la corriente de sodio nos apoyaremos en el concepto de fuerza de conduccin (Grfica 3). La fuerza de conduccin es la diferencia entre el potencial de membrana y el potencial de equilibrio del in del cual estemos midiendo la fuerza de conduccin (Fuerza de conduccin= Vm- ENa); su incremento implica un aumento de la cantidad de iones que atraviesa la membrana [INa = GNa( Vm- ENa)]. Como observamos en la grfica 3 la fuerza de conduccin es mayor al principio (-120mV), y decrece casi hasta 0 durante el potencial de accin, para luego volver a crecer hasta un valor de -130mV.

Grfica 3: Fuerza de conduccin del sodio En rojo: Potencial de equilibrio del sodio En negro: Potencial de accin En marrn: Fuerza de conduccin de los iones de sodio Eje X: tiempo (ms) Eje Y: voltaje (mV)

Pues bien, la razn para la anomala en la corriente del sodio se debe a que mientras que el potencial de accin se acerca al potencial de equilibrio (ENa), la fuerza conductora de iones de sodio se acerca a 0, la corriente de de sodio es reducida. Como estamos muy cerca de un potencial en el que no hay corriente de iones de sodio esta es muy pequea. Mientras el potencial de accin se aleja del equilibrio del sodio en su fase de caida(falling phase), la corriente de sodio se incrementa de nuevo fluyendo hacia adentro, hacia canales abiertos que no han sido an inactivados. Es decir la cada del potencial de accin implica un alejamiento del ENa, los iones no se encuentran ya en su potencial y de reposo, y lo que tienden es a desplazarse.

Obsrvese como ese primer pico (kink) aparece en el mismo momento (X=1.3ms) que la fuerza de conduccin llega a 0, y que el potencial de accin se aproxima y casi alcanza el potencial de equilibrio del sodio. Esto nos da evidencia de la veracidad de nuestro razonamiento.

Utilizacin de agentes analgsicos, bloqueadores tanto de canales de Na+ como de K+ (procana y lidocana).

Esta simulacin de Neurons in Actions consiste en observar y analizar como vara un potencial de accin al aplicar diferentes frmacos a la clula que lo sufre. En esta ocasin se le suministrar procana y lidocana, agentes analgsicos locales que actan como bloqueadores tanto de canales de Na+ como de K+, es decir, inhiben el paso de iones Na+ al medio intracelular e inhiben el paso de iones K+ al medio extracelular, y por tanto, tambin inhiben la generacin de un potencial de accin, que tiene como consecuencia el bloqueo de la propagacin del impulso nervioso. Como el programa de simulacin virtual Neurons in Actions no tiene la posibilidad de aplicar frmacos, se conseguir un efecto similar a la aplicacin de estos variando la densidad de los canales de Na+ y K+ de una clula hipottica. A menor densidad de canales de Na+ y K+ mayor cantidad de analgsico suministrado.

A continuacin se procede a observar y comentar cada una de las situaciones que se nos han mostrado a la hora de realizar la simulacin: 1- Al aplicar una densidad de canales de Na+ de 0,06 S/cm y una densidad de canales de K+ de 0,018 S/cm, es decir, al aplicar una cierta cantidad de procana y lidocana, observamos que se produce un potencial de accin de 40 mV aproximadamente, por lo que habr que suministrar ms cantidad de analgsicos o bien disminuir la densidad de canales de Na+ y K+ para que el potencial de accin no se produzca. 2- Al disminuir la densidad de canales de Na+ a 0,03 S/cm y la densidad de canales de K+ a 0,009 S/cm, es decir, al aplicar una mayor cantidad de procana y lidocana que la inicial, observamos que se sigue produciendo un potencial de accin de 30 mV aproximadamente, es decir, menor que el anterior potencial de accin, por lo que se deber seguir suministrando mayor cantidad de analgsicos hasta que el potencial de accin cese. 3- Al seguir disminuyendo la densidad de canales de Na+ a 0,01 S/cm y la densidad de canales de K+ a 0,004 S/cm, o bien, al suministrar una cantidad de dichos analgsicos an mayor que la anterior, podemos observar que el potencial de accin se ha visto reducido notablemente a 5mV aproximadamente, pero todava se sigue produciendo por lo que se tiene que aumentar an ms la cantidad de dichos frmacos. 4- Finalmente, al reducir la densidad de canales de Na+ a 0,005 S/cm y la cantidad de canales de K+ a 0,003 S/cm observamos que ya no se produce el potencial de accin, debido a que hemos suministrado la cantidad precisa de procana y lidocana para que dicho potencial de accin no se genere.

Podemos observar que a medida que se aumenta la cantidad de analgsicos suministrados disminuye la densidad de canales de Na+ y K+ por lo que la despolarizacin del potencial de accin ( entrada de iones Na+ al medio intracelular) y la repolarizacin de dicho potencial ( salida de iones K+ del medio intracelular al extracelular) tardan ms tiempo en producirse, debido a que al disminuir el nmero de canales de Na+ y K+ activos, cada vez entran menos iones Na+, lo que provoca que la despolarizacin se produzca ms lentamente, y cada vez salen menos iones K+ del medio intracelular al extracelular por lo que la repolarizacin tambin se producir con mayor lentitud (tardarn en producirse ms milisegundos).

Aplicacin de tetrodotoxina (TTX), bloqueador altamente especfico de canales de Na+.

En esta ocasin suministraremos a una clula hipottica un frmaco conocido como tetrodotoxina o TTX. La TTX es extrada del pez globo y acta como un bloqueador altamente especfico de canales de Na+, al igual que otros frmacos como la saxitoxina (STX) o la batracotoxina (BTX). Como slo utilizaremos la TTX, en el programa de simulacin virtual Neurons in Actions slo modificaremos la densidad de canales de Na+, dejando la densidad de canales de K+ en su valor inicial, ya que en este caso no se van a utilizar bloqueantes de canales de K+.

A continuacin se procede a observar y a comentar cada una de las situaciones que se nos han mostrado a la hora de realizar la simulacin:

1- Al aplicar una densidad de canales de Na+ de 0,06 S/cm, es decir, al suministrar una cierta cantidad de TTX observamos que se produce un potencial de accin de 32 mV aproximadamente, por lo que habr que suministrar una mayor cantidad de TTX o bien disminuir la densidad de canales de Na+ hasta que el potencial de accin no se produzca.

2- Al disminuir la densidad de canales de Na+ a 0,005 S/cm y 0,004 S/cm, es decir, al aplicar una mayor cantidad de TTX que en el caso anterior, se producen potenciales de accin de 25 mV y 15 mV respectivamente, por lo que podemos observar, que dicho potencial de accin ha disminuido pero se tendr que aplicar an ms TTX o bien reducir todava ms la densidad de canales de Na+ para que el potencial de accin no se produzca. 3- Finalmente, al disminuir la densidad de canales de Na+ a 0,003 S/cm, o lo que es semejante, al aplicar una mayor cantidad de TTX, observamos que ya no se produce el potencial de accin, debido a que hemos suminisrado la cantidad precisa de tetrodotoxina para que el potencial de accin no se genere.

Podemos observar que a medida que aplicamos mayor cantidad de TTX o disminuimos la densidad de canales de Na+ , la despolarizacin ocurrida en el potencial de accin ( entrada de iones Na+ al medio intracelular) tarda ms tiempo en producirse, debido a que cada vez entran

menos iones Na+ del medio extracelular, ya que cada vez hay menos canales de Na+ funcionando con normalidad. En cambio, observamos que la repolarizacin de dicho potencial de accin no se ve modificada, ya que al no bloquear los canales de K+, stos no se ven afectados en su normal funcionamiento, permitiendo as la salida de iones K+ del medio intracelular al extracelular en condiciones totalmente normales.

Cabe destacar que tanto en la aplicacin de agentes analgsicos bloqueantes tanto de canales de Na+ como de K+ como en la aplicacin de TTX observamos siempre una pequea despolarizacin inicial, que no es debida a la activacin de dichos canales voltaje-dependientes sino al propio estmulo suministrado. Como conclusin, a la hora de bloquear potenciales de accin es ms eficaz la aplicacin de tetrodotoxina que la de agentes analgsicos locales como la procana y lidocana, ya que como hemos podido comprobar se necesita menos cantidad de TTX (al necesitar menor cantidad se produce una mayor densidad de canales de Na+, 0,03 S/cm) que de agentes analgsicos, de los que se necesita una mayor cantidad (al necesitar mayor cantidad se produce una menor densidad de canales de Na+, 0,005 S/cm) para bloquear un potencial de accin, por lo que ser ms efectivo si suministramos TTX que dichos agentes analgsicos locales.