UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS ESCUELA DE BIOQUIMICA Y FARMACIA CARRERA QUIMICA DE ALIMENTOS LABORATORIO DE BIOTECNOLOGIA

Nombre: Rentera Vanessa Fecha de entrega: 18/04/2011 TEMA: TURBIDIMETRIA, DENSIDAD OPTICA, CURVAS DE CRECIMIENTO VFENTAJAS Y DESVENTAJAS DEL METODO DE CUANTIFICACION DE BIOMASA La turbidimetra es medida de la intensidad de un haz de luz incidente cuando ste pasa a travs de una suspensin de partculas. Se mide a 0 grados del haz incidente, es decir, en su misma direccin. La disminucin de la intensidad se puede medir como %T o como A en cualquier espectrofotmetro. Cuando un haz de luz choca contra una partcula en suspensin sufre los siguientes fenmenos: Dispersin de la luz Reflexin Absorcin Transmisin La Dispersin de la luz depende de varios factores: Tamao y peso molecular de las partculas Longitud de onda de la luz incidente Distancia del detector a la cubeta Concentracin de partculas DENSIDAD OPTICA El Espectrofotmetro mide la densidad ptica (D.O.), es decir la absorbancia o extincin E que es la medida de la luz transmitida a travs de la suspensin, hay que realizar una curva estndar para relacionar los valores de A con la masa bacteriana en una muestra problema; la cantidad de luz dispersada es proporcional al cociente entre el tamao de la partcula y la longitud de onda incidente; la sensibilidad de la tcnica aumenta pues a longitudes de onda () cortas. La proporcionalidad entre A y masa bacteriana slo es vlida para >107cls/ml. Da: Lunes Hora: 10:00-13:00

La densidad ptica es igual a: D = log CURVAS DE CRECIMIENTO

1 = log T T

Para estimar el nmero de microorganismos totales o el nmero de microorganismos viables de una suspensin bacteriana debe realizarse una curva de calibracin con cada tipo de microorganismo, slo de esta forma es posible relacionar Absorbancia (Densidad ptica) con el nmero de microorganismos totales o con UFC. ABSORBANCIA EN FUNCIN DE CONCENTRACION BACTERIANA

Absorbancia = K x Peso Seco; donde K: constante que vara con la longitud de onda utilizada y representa la inversa del peso seco del microorganismo que produce un aumento de 10 veces en el valor de la absorbancia (1/W0). Peso seco: Concentracin celular bacteriana expresada en unidades de peso seco (g/mlmg/ml). La relacin directa entre la absorbancia y el peso seco slo se aplica para suspensiones diluidas de bacterias, estas no deben tener una absorbancia mayor a 0.3, ya que valores mayores producen desviaciones de la ley de Beer. INCONVENIENTE en suspensiones diluidas puede involucrar un mayor error de pipeteo y menor sensibilidad por el bajo nivel de absorcin. ABSORBANCIA EN FUNCIN DEL PESO SECO

DESVENTAJAS:

Cuando la concentracin sobrepasa los lmites de linealidad se deja de cumplir la Ley de Beer lo que se traduce a un resultado de una concentracin falsa. No es posible diferenciar a las clulas vivas de las muertas

VENTAJAS:

Permiten establecer la poblacin total de microorganismos existentes son rpidos La metodologa es til con suspensiones de densidad microbiana baja y con cultivos en donde los microorganismos son unicelulares y con un tamao de unos cuantos micrmetros, caractersticas que les permiten mantenerse suspendidos y homogneamente distribuidos; en tanto que con microorganismos de mayor tamao y con aquellos productores de polisacridos esta metodologa no es adecuada.

BIBLIOGRAFA: http://es.scribd.com/doc/15957855/8-Cuantificacion-de-microorganismos-porturbidimetria http://es.scribd.com/doc/22450159/eq-8-cuantificacion-y-aislamiento-demicroorganismos-microbiologia http://www.google.com/url? sa=t&source=web&cd=10&ved=0CGYQFjAJ&url=https%3A%2F %2Fwww.itescam.edu.mx%2Fprincipal%2Fsylabus%2Ffpdb%2Frecursos %2Fr51986.DOC&rct=j&q=turbidimetria%20%2Bdensidad %20optica&ei=xrOpTdKqK8nXgQekm4n0BQ&usg=AFQjCNFRYK2i7CALA9P7J3z68DW21MbZQ&cad=rja VOGUEL, Arthur, Qumica Analtica Cuantitativa, pgs.844, 845