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TEMA 8: GENETICA MOLECULAR

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1. GENTICA.
La Gentica es la ciencia que se ocupa del estudio de todo lo relativo a los genes. Esta definicin engloba todas las posibilidades que abarca la Gentica, desde el estudio de lo heredable (herencia) hasta lo gnico o gentico (no necesariamente heredable). Esta ciencia abarca aspectos diferentes como son: Herencia mendeliana o gentica mendeliana o formal que estudia los modelos de transmisin de la informacin independientemente de la naturaleza qumica del gen, de lo que estn hechos los genes. Para la gentica mendeliana un gen es la unidad de herencia que produce la expresin de una caracterstica observable en un ser vivo o sus descendientes. La gentica molecular se ocupa, adems, de la naturaleza de los genes y su expresin. Los genes estn compuestos por molculas de ADN que se replican antes de la mitosis. Por lo tanto lo que se hereda es ADN, una molcula informativa. Para la gentica molecular un gen es un fragmento de ADN que se expresan cuando la informacin que contienen se traduce para formar protenas con una funcin biolgica especfica. Otras posibilidades son la gentica de poblaciones que estudia las transmisiones para toda la poblacin. Por lo tanto es el gen, y no la caracterstica como tal, lo que el ser vivo recibe de sus antecesores. As una planta no hereda el color rojo de sus flores, sino genes que determinan el color rojo de los ptalos. La gentica estudia las expresin gnica y las relaciones entre genes que son aspectos no heredables, pero si genticos.

2. GENTICA MENDELIANA.
2.1 Conceptos generales: Para estudiar gentica mendeliana es necesario conocer una serie de conceptos: Genotipo. Dotacin gentica de un individuo para un determinado carcter. Tambin se puede aplicar al conjunto total de genes que tiene un individuo. Fenotipo. Expresin observable del carcter. Es tambin la expresin global del genotipo. Alelo. Cada una de las variantes gnicas que determinan un carcter. Genes alelomorfos son los que transmiten el mismo carcter. En un principio se referan a genes que podan ocupar un mismo lugar en el cromosoma y que determinaban un mismo carcter. Hoy se consideran el resultado de mutaciones y por lo tanto variantes de un mismo gen. Alelo dominante. Aquel que transmite un carcter que se manifiesta siempre. Alelo recesivo. Aquel que transmite un carcter que se manifiesta solo si no est presente el alelo dominante. Alelos codominantes. Cuando no existe dominancia manifiesta de un alelo sobre otro y el carcter observable es intermedio entre los dos. Homozigtico. Individuo con el genotipo para un determinado carcter compuesto por dos alelos iguales. Las lneas puras de Mendel son individuos homozigticos.

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Heterozigtico. Individuo que porta en su genotipo dos alelos distintos para un carcter concreto. Los hbridos de Mendel. Herencia dominante. Aquella en la que existen alelos dominantes y que determinan que los hbridos presentan el carcter del alelo dominante. Herencia intermedia. Aquella en la que los alelos son codominantes y por lo tanto los hbridos presentan un carcter intermedio entre los dos.

2.2.- LEYES DE MENDEL Frente a todas las teoras que se haban postulado anteriormente, Mendel tuvo el gran acierto de utilizar un adecuado planteamiento experimental en el desarrollo de sus trabajos llevados a cabo en el monasterio de Brnn (Repblica Checa). Mendel quera saber como se heredaban los caracteres individuales y utiliz para ello la planta del guisante (Pisum sativum) por ser econmica, producir gran nmero de descendientes, y como era hermafrodita permite su autofecundacin y la fecundacin cruzada artificial. Al acierto de eleccin de la planta, Mendel aadi la del mtodo cientfico empleado, consiguiendo demostrar que la herencia se produca de manera predecible. Sus trabajos fueron publicados en 1866, aunque sus experiencias pasaron inadvertidas, hasta que 35 aos despus fueron reconocidas y renombradas como leyes de Mendel. En 1900, tres botnicos confirmaron, de forma independiente, las conclusiones de Mendel, dando a conocer sus tres leyes. La primera y segunda ley se refieren a la herencia de un solo carcter (monohbridos), y la tercera estudia la transmisin simultnea de dos caracteres (dihibridismo). 2.2.1 HERENCIA DE UN SOLO CARCTER Los caracteres se heredan de forma predecible. 2.2.1.1. Primera ley. Ley de la uniformidad de los hbridos de la primera generacin filial. Cuando se cruzan dos individuos razas puras (homocigticos) de una misma especie que difieren entre s en un carcter, todos los individuos de la F1 (primera generacin) son idnticos entre s genotpica y fenotpicamente (fenotipo idntico al mostrado por uno de los progenitores). Mendel inicio sus experimentos cruzando dos individuos homocigticos para un determinado carcter. As, en el siguiente cruzamiento entre guisantes, para el carcter color de la vaina, representamos por A el alelo dominante (amarillo) y por a el alelo recesivo (verde), la generacin parental estar formada por: - Plantas homocigticas de vainas amarillas (AA) - Plantas homocigticas de vainas verdes (aa) Los gametos producidos por las plantas AA llevan un solo alelo A, mientras que los de las aa llevan solo el a. Los dos tipos de gametos se unen en la fecundacin y todas las vainas formadas en la F1 sern heterocigticas (Aa).

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2.2.1.2 Segunda ley. Ley de la segregacin de los caracteres en la F2 Segregacin de los genes que forman la pareja de alelos de la F 1 para formar los gametos que luego vuelven a unirse al azar en la F2. Al cruzar entre s individuos pertenecientes a la F1 , los factores o genes que controlan un determinado carcter, y que se encontraban juntos en los hbridos, se separan y se transmiten separadamente uno del otro, de tal manera que en la F 1 reaparecen los fenotipos propios de la generacin parental. Para obtener la F2, Mendel dejo que las plantas de genotipo Aa de la F1 se autofecundaran. Cuando los heterocigticos (Aa) forman los gametos, los dos alelos se separan. As se forman con la misma probabilidad, los gametos con el alelo A y con el a.

La unin al azar de los distintos tipos de gametos origina las siguientes combinaciones de los genotipos de la F2: AA, Aa y aa. Los individuos de genotipo AA y Aa, de los que se obtiene un 75%, presentan el fenotipo dominante (amarillo), y los de genotipo aa, un 25 %, el fenotipo recesivo (verde). Es decir una proporcin fenotpica 3:1 y una proporcin genotpica 1:2:1

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Retrocruzamiento o cruzamiento de prueba. Los genes no se ven se ven y los fenotipos que son el reflejo de los genes. Por eso, en los casos de herencia dominante en los cuales obtenemos individuos heterocigticos (Aa) y homocigticos (AA) con el fenotipo dominante amarillo, para conocer cul es el genotipo, se cruzan con otro individuo de genotipo homocigtico recesivo (aa), lo que se denomina retrocruzamiento. Por ejemplo al cruzar vainas de guisantes amarillas que pueden ser AA o Aa, con, vainas de guisantes verdes, aa, son posibles dos resultados. Resultado 1.- Aparecen plantas con guisantes verdes: el individuo problema es Aa. Resultado 2.- No aparecen plantas con guisantes verdes: el individuo del problema puede ser AA. 2.2.2. HERENCIA DE DOS CARACTERES SIMULTANEAMENTE Estudia la transmisin simultnea de dos caracteres 2.2.2.1 Tercera ley. Ley de la independencia de los caracteres. A. Cuando los genes que regulan ambos caracteres se localizan en pares de cromosomas homlogos distintos Cuando se forman los gametos, los alelos de un gen se transmiten independientemente de los alelos del otro gen. En la transmisin de dos o ms caracteres, cada par de alelos que controla un carcter se transmite a la F2 independientemente de cualquier otro par de alelos que controle otro carcter y no est en el mismo cromosoma.

Durante la anafase I se separan los cromosomas homlogos de cada par y en la anafase II se separan las cromtidas de cada cromosoma; despus de la autoduplicacin del ADN se forman cuatro clases de gametos, cada uno de los cuales posee dos cromosomas. Puesto que su distribucin se realiza totalmente al azar, existen cuatro 4

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posibilidades para que los cromosomas con sus genes se agrupen en cada gameto: (AB), (A-b), (a-B) y (a- b). Esta conclusin, a la que llego Mendel contabilizando los descendientes de los cruzamientos, en la actualidad se entiende porque sabemos que los cromosomas emigran aleatoriamente a los polos. B. Cuando los genes que regulan ambos caracteres se localizan en el mismo par de cromosomas homlogos: genes ligados. Aos despus de que se redescubriesen las leyes de Mendel, se demostr que la tercera ley o principio de independencia de los caracteres, tiene numerosas excepciones. Estas excepciones se producen cuando los genes que controlan caracteres diferentes se encuentran en el mismo par de cromosomas homlogos. a) Ligamiento absoluto. Si dos genes que rigen la aparicin de dos caracteres distintos estn en el mismo cromosoma, se transmiten juntos y no se segregan al azar. Todos los genes que estn un cromosoma se transmiten ligados. Utilizando el ejemplo de los guisantes: si los genes para el color verde y la forma lisa estn ligados, y el rugoso y amarillo tambin; nunca podramos encontrar individuos amarillos rugosos o verde lisos b) Ligamiento relativo: Se ha visto que en algunas ocasiones, dos genes que estn juntos en los cromosomas de los padres, no siempre se transmiten as a los hijos. Estos genes aunque se encuentran en los mismos cromosomas, es decir, estn ligados, su ligamiento no es total. Esto significa que los resultados obtenidos son posibles siempre que los cromosomas en los que se encuentran situados los genes implicados intercambian fragmentos, este proceso esta originado por el sobrecruzamiento durante la meiosis I, que trae como consecuencia el intercambio de genes o recombinacin gentica, que lleva a la formacin de nuevas combinaciones de genes como ya se ha explicado anteriormente. Utilizano el mismo ejemplo anterior: aqu, aunque estn ligados, si podremos encontrar verde lisos y amarillo rugosos

3. GENTICA MOLECULAR
3.1.- INTRODUCCIN. En la actualidad se sabe que la informacin gentica es la causa de la sntesis de protenas especficas, entre ellas las enzimas, responsables de las caractersticas estructurales y funcionales de los seres vivos. En la dcada de 1940, el genetista George Beadle, junto con Edgard Tatum enunciaron la hiptesis denominada un gen- una enzima,segn la cual cada gen (fragmento de ADN) lleva informacin para un enzima. Con posterioridad esta hiptesis fue ampliada, ya que el gen poda codificar una protena cualquiera y no necesariamente enzimtica. Por otra parte, como algunas protenas estn formadas por mas de una cadena polipeptdica, resultaba ms apropiado decir que cada gen codifica solamente una cadena polipeptdica.

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Quedaba claro que la expresin del mensaje gentico, es decir, la ejecucin de las rdenes contenidas en la molcula de ADN, consiste en la sntesis de protenas especficas. Los avances en bioqumica y el descubrimiento de los distintos tipos de ARN permitieron a Francis Crick enunciar en 1970 el dogma central de la biologa molecular, que dice lo siguiente: El ADN copia una parte de su mensaje sintetizando una molcula de ARN mensajero (proceso denominado transcripcin), la cual constituye la informacin utilizada por los ribosomas para la sntesis de una protena (proceso de traduccin). ADN
TRANSCIPCION

ARN

TRADUCCION

PROTEINA

Con los datos obtenidos despus de descifrar el genoma de diversas especies es necesario hacer determinadas precisiones a este dogma central, ya que no todos los genes parecen codificar para protenas o por lo menos no se expresan como tales. Por ello cuando se conozca con exactitud el nmero de genes en nuestra especie y su relacin con la informacin contenida en el ADN, ser el momento de hacer estas precisiones. 3.2.- REPLICACIN DEL ADN. El ADN como portador de la informacin gentica debe transmitirse fielmente a cada una de las clulas hijas obtenidas tras la divisin celular. Por lo tanto antes de dividirse la clula, el ADN debe de formar dos copias idnticas. Este proceso se conoce como replicacin o autoduplicacin, y resulta fundamental para lograr que todas las clulas de un organismo pluricelular mantengan la misma informacin. En el modelo de Watson y Crick se indic cual poda ser el mecanismo para llevar a cabo la replicacin del ADN : separacin de las dos cadenas y sntesis de la complementaria de cada una de ellas. Sin embargo se plantearon otras hiptesis de manera que podan existir tres tipos posibles de replicacin: Conservativa. La doble cadena original se mantiene y se sintetiza otra completamente nueva. Semiconservativa. Es la propuesta por Watson y Crick. Una de las hebras de cada doble hlice procede de la original, mientras que la otra se sintetiza de novo. Dispersiva. En cada doble hlice existen fragmentos originales y fragmentos nuevos en una misma hebra. Los experimentos de Meselson y Stahl demostraron experimentalmente que la hiptesis correcta era la semiconservativa. Para demostrarlo prepararon un cultivo de Escherichia coli en un medio nutritivo cuya nica fuente de nitrgeno era un istopo pesado el N15, mantenindose el cultivo varias generaciones para garantizar que todo el ADN contena nitrgeno pesado. Se extrajo a continuacin el ADN y se centrifug en un medio que contena una disolucin de cloruro de cesio, tras la centrifugacin aparece una banda donde se encuentre el ADN, que ocupa el lugar en el que la densidad de esta molcula es igual al de una determinada zona del gradiente de la disolucin de CLCs . La banda que contiene N15 se forma en distinto lugar que la del ADN con N14. Posteriormente se realiz un cultivo de las bacterias con N15 en un medio con N14 durante el tiempo necesario para que se produjera una replicacin. La centrifugacin del ADN, en este caso, origin una banda que ocupa una posicin intermedia entre la del ADN con N14 y la del ADN con N15. 6

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Si se haca durante dos generaciones bacterianas aparecan dos bandas distintas. Una igual a la anterior y otra en la posicin de ADN con N14. Tambin consiguieron separar las dos hebras de la molcula hbrida y comprobaron que una de ellas posea N14 y la otra N15. Con estas experiencias demostraron que la replicacin era semiconservativa. 3.2.1 Elementos necesarios en la replicacin: ADN patrn que sirve de molde para la replicacin. Desoxirribonucletidos que deben estar trifosforilados en 5. Iones de Mg2+. Enzimas: ADN polimerasa, es una enzima que se caracteriza por tener mltiple actividad, posee varios locus o lugares donde se fijan los sustratos. Estos son ocupados por el ADN patrn, el cebador y los siguientes nucletidos. De hecho el ADN polimerasa comprueba la complementariedad de los nucletidos de la cadena molde, tambin comprueba que los nucletidos estn trifosforilados y los une al extremo 3 y tiene capacidad de autocorreccin. Existen dos polimerasas la III que es la que copia las cadenas y la I que retira los segmentos de ARN y luego rellena los huecos. ARN polimerasa (primasa), que genera un fragmento de ARN cebador o primer. ADN ligasa que une los fragmentos de Okazaki. Helicasas: son enzimas que rompen los puentes de hidrgeno que mantienen unidas las dos cadenas de la doble hlice. Entre las helicasas de E. coli se encuentran las protenas Dna B y Rep. La protena Rep parece ayudar a desenrollar la doble hlice por delante de la polimerasa. Topoisomerasas: pueden producir o eliminar nudos o enlaces en una hlice. Existen topoisomerasas de la clase I que cortan solamente una de las dos hlices y topoisomerasas de la clase II que cortan ambas cadenas. En E. coli, las enzimas Topi I i Topo III pertenecen a la clase I, mientras que la Girasa es de la clase II. Cuando se separan las dos hlices durante el avance de la horquilla de replicacin se producen superenrollamientos positivos en otras regiones que relajan la tensin. La Girasa se necesita para eliminar los superenrollamientos positivos que se generan por delante de la horquilla de replicacin. La protena SSB: se une al ADN de hlice sencilla y lo estabiliza retrasando la regeneracin de la doble hlice. 3.2.2 Mecanismo de la replicacin: La replicacin comienza en ciertas zonas del ADN donde existen determinadas secuencias de nucletidos. En primer lugar interviene una enzima , helicasa , que separa las dos hebras del ADN al romper los puentes de hidrgeno. La separacin y desespirilizacin de las dos hebras genera torsiones en ellas, que son eliminadas por la intervencin de las topoisomerasas. Para ello cortan una de las hebras (topoisomerasa I) o las dos (topoisomerasa II o girasa). Una vez separadas las protenas SSB las mantienen as. A continuacin comienza la sntesis de las hebras complementarias sobre cada una de las originales. El proceso se lleva a cabo mediante la enzima ADNpolimersa III , que presenta las siguientes caractersticas: - Necesita una hebra molde de ADN que recorre en sentido 3 5 y sobre la que sintetiza la hebra complementaria.

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- Une nucletidos en direccin 5 3, es decir, la nueva hebra formada crece en este sentido. Los nucletidos que se van uniendo son los que se sitan previamente frente a los correspondientes nucletidos complementarios del ADN molde. - Utiliza nucletidos trifosfato, los cuales proporcionan, al mismo tiempo, la energa necesaria para la unin. - No puede comenzar la sntesis por si misma, pues solo puede aadir nucletidos sobre el extremo 3 libre de una cadena polinucletida previa. Por este motivo es necesario que exista una cadena corta de ARN, denominada cebador o primer, sintetizado por la ARN polimerasa (primasa). A medida que la doble hlice original se va separando se forma la llamada burbuja de replicacin donde se produce la accin de la ADN polimerasa III. Existe una horquilla de replicacin en cada extremo, pues el proceso es bidireccional. Como la ADN polimerasa III recorre el ADN molde en la direccin 3 5, la sntesis de una de las hebras es continua, ya que a medida que se abre la doble hlice la enzima va avanzando y aadiendo nuevos nucletidos a la cadena en formacin, denominada hebra conductora. La otra hebra no se puede sinterizar a la vez ya que la enzima no puede leerla y su sntesis es discontinua y se produce en fragmentos separados. Esta cadena se llama hebra retardada y los segmentos de ADN sintetizados de esta manera se llaman fragmentos de Okazaki. Cada fragmento de Okazaki (de 1000 a 2000 nucletidos) necesita para su sntesis de un cebador. La enzima ADN polimerasa I elimina los fragmentos de ARN cebador gracias su actividad exonucleasa y debido a que tiene actividad polimerasa puede rellenar el hueco dejado por el cebador. Posteriormente las ligasas unen los fragmentos. 3.2.3 Correccin de errores. El proceso de replicacin no acaba hasta que se comprueba que la copia es correcta. Aunque la ADN polimerasa solo coloca los nucletidos complementarios y es capaz de eliminar los errores en la sntesis, provoca un error cada 107 bases incorporadas. Este valor es muy bajo, pero si tenemos en cuenta que nuestro ADN tiene 3* 109 bases, en la copia de una molcula se produciran 300 errores. Si tenemos en cuenta que nuestro ADN se puede replicar billones de veces, el nmero de errores sera excesivo e incompatible con la vida. Por ello existe un sistema multienzimtico que recorre las hebras recin formadas y corrige los errores que se hayan podido producir. Este sistema acta entre fragmentos concretos sealados con las secuencias GATC que son eliminados si detecta un error. Para comprobar cual es la cadena molde y cual la recin sintetizada comprueba cual de ellas tiene las adeninas metiladas, ya que las cadenas recin sintetizadas no tiene las adeninas metiladas, con lo que se elimina la cadena que no tenga las adeninas metiladas. Con este sistema se consigue reducir el nmero de errores a uno cada 1010 nucletidos, lo cual parece suficiente. A pesar de todo se producen errores en la sntesis.

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3.3.- TRANSCRIPCIN Otra de las exigencias que debe cumplir el material gentico es que sea capaz de transmitir la informacin que contiene al resto de la clula. Como el material gentico es ADN y ste se encuentra en los cromosomas, dentro del ncleo, debe existir una molcula que transporte esta informacin desde el ncleo hasta el citoplasma atravesando la envoltura nuclear. Esta molcula es el ARNm. Adems, a partir del ADN tambin deben sintetizarse los restantes tipos de ARN. El proceso de sntesis de ARN a partir del ADN se denomina transcripcin gentica. El enzima encargado de llevar a cabo este proceso la ARN-polimerasa que cataliza la unin de los ribonucletidostrifosfato (ATP, GTP, CTP y UTP) segn una secuencia determinada; para ello utiliza como molde o patrn una de las dos cadenas del segmento de ADN (un gen) que se va a transcribir. La secuencia de ARN transcrito es complementaria de una de las dos

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cadenas del gen salvo por el hecho de que la base complementaria de la A es el U. La energa necesaria para la unin de los ribonucletidos se obtiene de la hidrlisis de los ribonucletidos-trifosfato que liberan un grupo pirofosfato. Es, por tanto, semejante a lo que ocurre en la duplicacin del ADN. La transcripcin vara en algunos detalles en los organismos procariotas y eucariotas. 3.3.1.- TRANSCRIPCIN EN PROCARIOTAS: Slo existe un tipo de ARNpolimerasa que cataliza la sntesis de todos los ARN. En el caso del ARNm, su sntesis transcurre en 4 etapas: - Iniciacin: En todos los genes hay una secuencia caracterstica denominada promotor que indica dnde debe empezar la sntesis del ARNm y cul de las dos hebras del ADN debe ser transcrita. - Elongacin: Despus de unirse al promotor, la ARNpolimerasa se acopla a una de las cadenas del ADN y desenrolla aproximadamente una vuelta de hlice, con lo que queda al descubierto la hebra de ADN que actuar como patrn. El enzima se desplaza por la hebra patrn de ADN en sentido 3'--5', mientras que la cadena de ARNm se va formando en sentido 5'--3' conforme se aaden nucletidos. A medida que el enzima se desplaza, el ADN recupera su configuracin inicial de doble hlice. - Terminacin: La ARN-polimerasa sigue aadiendo ribonucletidos hasta que se encuentra con la seal de terminacin, lo que marca el final de la sntesis del ARN, cuya cadena recin formada se libera en forma de una sola hebra, aunque en algunos casos, cuando presenta secuencias autocomplementarias, adopta estructura secundaria. - Maduracin: En los procariotas los genes son continuos, no tienen intrones, por lo que las molculas de ARNm no necesitan ningn tipo de transformacin previa a la traduccin por los ribosomas. Sin embargo, los ARNt y ARNr no se sintetizan como tales, sino que provienen de molculas de ARN, llamado ARN transcrito primario, que precisan un proceso de maduracin. 3.3.2.- TRANSCRIPCIN EN EUCARIOTAS: Presenta dos diferencias fundamentales respecto a la de procariotas: (1) los genes estn fragmentados, poseen intrones y exones, por lo que todos los ARN necesitan un proceso de maduracin a partir del ARN transcrito primario, y (2) existen tres clases de ARNpolimerasa diferentes, cada una de las cuales cataliza la sntesis de un ARN distinto. La ARN-polimerasa I , transcribe la informacin necesaria para sintetizar los ARNribosmicos , excepto el de 5S. La que sintetiza el ARNm es la ARN-polimerasa II. La ARN- polimerasa III, produce los ARNt ,el ARNr de 5S y realiza la transcripcin de los genes que codifican para las histonas. La sntesis de ARNm en eucariotas transcurre tambin en 4 fases: - Iniciacin: El promotor est formado por una secuencia de T y A, llamada TATA box, que es reconocida por la ARN-polimerasa II. - Elongacin: La diferencia con los procariotas es que, cuando se han transcrito unas 30 bases del gen, al ARNm se le aade en el extremo 5' una caperuza formada por una guanosn-trifosfato metilada (metil-GTP). Mientras tanto, la cadena de ARNm continua creciendo (en sentido 5'--3') a unos 30 nucletidos por segundo, transcribindose tanto los exones como los intrones.

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- Terminacin: Cuando la ARN-polimerasa II transcribe la secuencia de finalizacin, formada por la secuencia TTATTT, la transcripcin termina y acta otro enzima que aade en el extremo 3' del ARNm una cola de poli-A formada por unos 150-200 ribonucletidos de A. - Maduracin: Los ARNm transcritos primarios contienen secuencias intercaladas (las que corresponden a los intrones) que no codifican ningn pptido, por lo que deben ser eliminadas. En este proceso intervienen las enzimas denominadas ribonucleoproteinas pequeas nucleares (RNPpn). Esto se realiza mediante cortes entre los intrones y los exones: los primeros se enrollan en lazos y se eliminan, mientras que los segundos se empalman y forman una molcula de ARNm que contiene los nucletidos necesarios para sintetizar la protena. 3.4.- EL CDIGO GENTICO El moderno concepto de informacin gentica establece que un gen es un fragmento de ADN que contiene la informacin necesaria para la sntesis de una protena. Dado que la informacin gentica est contenida en secuencias de bases nitrogenadas, es preciso transformar esta informacin en cadenas de aminocidos para formar las protenas. Los cidos nucleicos estn formados por 4 clases de nucletidos mientras que las protenas estn formadas por 20 aminocidos. Es necesario establecer una correlacin entre las bases y los aminocidos para averiguar de qu modo la informacin contenida en el ADN es capaz de ordenar la sntesis de una determinada protena. Si a cada aminocido correspondiese un solo nucletido entonces slo se podran codificar 4 aminocidos. Si fuesen dos nucletidos los que codifican un aminocido, las posibles combinaciones seran 42=16 y tampoco seran suficientes. Las combinaciones de 3 nucletidos son 43=64 con lo que es posible codificar los 20 aminocidos y sobraran cdigos. Se puede imaginar segn esto el ADN formado por una sucesin de grupos de 3 nucletidos, llamados tripletes, correspondiente cada uno a un aminocido. Este planteamiento terico ha sido demostrado experimentalmente y, efectivamente, el cdigo de cada aminocido est contenido en un triplete o en varios de nucletidos del ADN. Este cdigo que asocia a cada aminocido un grupo de 3 nucletidos se denomina cdigo gentico. Se considera que es degenerado porque existen ms tripletes que aminocidos hay para codificar, y universal ya que sin apenas variaciones es utilizado por todos los seres vivos, aunque con la excepcin de las mitocondrias, que utilizan un cdigo gentico ligeramente diferente para traducir la informacin contenida en sus pequeos cromosomas circulares. En este punto de las investigaciones, el siguiente problema era establecer qu triplete corresponda a cada aminocido. Esto se logr gracias a un enzima descubierto en 1955 por Severo Ochoa, la polinucletido-fosforilasa, que cataliza la sntesis de polinucletidos. Esta sntesis se puede realizar en presencia de cualquiera de los nucletidos-fosfato que forman los cidos nucleicos. Si en el medio de la reaccin slo existen, por ejemplo, nucletidos de U, el enzima sintetiza un cido nucleico con U como nica base nitrogenada (poli-U). Con este enzima y la bacteria E.coli Niremberg consigui empezar a descifrar el cdigo gentico; usando poli-U como ARNm la bacteria sintetizaba protenas formadas nicamente por el aminocido fenilalanina (Phe), por lo que su cdigo deba ser forzosamente UUU. Del mismo modo se estableci que el cdigo de la Pro era CCC, el de la Lys AAA y el de la Gly GGG. Para tripletes con bases nitrogenadas distintas el proceso es mucho ms complicado, pero

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finalmente se ha llegado a establecer el cdigo gentico completo, sabindose actualmente el significado de los 64 tripletes.

1 Base

Segunda base U
UUU UUC UUA UUG CUU Phe

C
UCU UCC UCA UCG CCU CCC CCA CCG ACU ACC ACA Ser

A
UAU UAC UAA UAG CAU CAC CAA CAG AAU AAC AAA AAG GAU GAC GAA GAG Tyr

G
UGU UGC Cys

3 Base U C A G U C A G U C A G U C A G

Leu

Ser

Stop

UGA Stop UGG Trp CGU CGC CGA CGG AGU AGC AGA AGG GGU GGC GGA GGG Arg

CUC CUA CUG AUU

Leu

Pro

His

Leu

Pro

Gln

Arg

AUC

Ile

Thr

Asn

Ser

AUA Ile

AUG Met ACG GUU Val GCU GCC GCA GCG

Thr

Lys

Arg

GUC GUA GUG

Ala

Asp

Gly

Val

Ala

Glu

Gly

3.5.- TRADUCCIN GENTICA Es el proceso mediante el cual se sintetiza una protena a partir de un ARNm que, previamente, se ha transcrito en un gen del ADN. Tiene lugar en los ribosomas, por tanto en el seno del citoplasma. Para que la informacin contenida en la secuencia de bases del ARNm sea traducida a una secuencia de aminocidos de una protena debe existir una molcula intermediaria que solucione dos problemas: (1) para que cada aminocido se coloque en su triplete correspondiente del ARNm es preciso que dicho triplete sea descodificado, y (2) el tamao molecular de un triplete de nucletidos es mucho mayor que el de un aminocido. Esta molcula intermediaria es el ARNt y su funcionamiento durante la traduccin se debe fundamentalmente a su estructura secundaria en forma de hoja de trbol. Cada molcula de ARNt es especfica de cada aminocido, de tal manera, que segn el anticodon de anclaje que posea, sujeta por el triplete CCA a uno u otro aminocido de los que existen libres en el citoplasma de la clula. La fijacin de un aminocido al triplete CCA del ARNt exige una previa activacin de dicho aminocido 12

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por una molcula de ATP que libera un grupo pirofosfato y se precisa la intervencin de un enzima, la aminoacil-ARNt-sintetasa, especfico de cada aminocido. El complejo aminocido-ARNt unidos recibe el nombre de complejo de transferencia y constituye la forma en que los aminocidos son transportados y unidos para formar las cadenas de protenas. Ejemplo: el triplete que codifica el aminocido Metionina (Met) es AUG. Cuando en una posicin determinada de una protena debe colocarse una Met, en el ARNm aparece el triplete (codon) AUG. Sobre este codon slo podr colocarse aquel ARNt que posea un triplete (anticodon) complementario, es decir UAC. Dicho ARNt llevar en el otro extremo de su molcula, unido al triplete CCA el aminocido Met que habr sido unido por el enzima Metionil-ARNt-sintetasa formando un complejo de transferencia con Met (representado por ARNtMet). Tanto en los procariotas como en los eucariotas, el mecanismo de la sntesis de protenas se puede considerar dividido en tres etapas sucesivas: iniciacin, elongacin y terminacin. - Iniciacin de la sntesis de protenas: Hacen falta dos seales de iniciacin para que comience la sntesis de protenas: el triplete iniciador AUG, que codifica la Metionina, y la caperuza de metil-GTP del ARNm, de tal manera que la traduccin comienza por el triplete AUG ms prximo a la caperuza. Con la energa que produce la hidrlisis del metil-GTP la subunidad menor del ribosoma se une al ARNm en la zona prxima a la caperuza (extremo 5'), formando el complejo de iniciacin, y se coloca el ARNt iniciador, que est cargado con el aminocido Metionina y posee el anticodon complementario al AUG (por ello, todas las protenas recin sintetizadas poseen metionina en su extremo N-terminal; despus, en muchos casos, esta Met se elimina).La unin del ARNm a la subunidad menor se produce gracias al factor proteico de iniciacin IF3. Al final de esta etapa de iniciacin la subunidad mayor del ribosoma se acopla con el complejo de iniciacin para formar un ribosoma completo dotado de dos hendiduras o sitios de fijacin: el sitio P, que queda ocupado por el ARNtMet, y el sitio A, que est libre para recibir a un segundo ARNt cargado con su correspondiente aminocido, para ello necesitamos otro factor de iniciacin IF1 y la presencia de iones de Mg2+. - Elongacin de la cadena polipeptdica: consiste en la unin de sucesivos aminocidos que se van aadiendo a la cadena polipeptdica en el seno de los ribosomas. Puede considerarse como la repeticin de ciclos de elongacin, cada uno de los cuales consiste en aadir un nuevo aminocido. Cada ciclo de elongacin consta de tres fases: Primera fase: Unin de un aminoacilARNt al sitio A. El sitio P est ocupado inicialmente por el ARNtMet y en el sitio A, que est vaco, se introduce el ARNt cargado con su correspondiente aminocido, cuyo anticodon es complementario al triplete siguiente al AUG (supongamos ACU); se aloja por tanto el ARNt con el anticodon UGA, que lleva la Treonina (ARNtThr). Se necesita la energa que suministra la hidrlisis de GTP y dos factores de elongacin (FE) Segunda fase: Formacin del enlace peptdico. La Metionina, que est unida por su grupo carboxilo al ARNt, rompe este enlace y se une, mediante enlace peptdico, al grupo amino de la Treonina, que, a su vez, est enlazada a su ARNt. El proceso est catalizado por la peptidiltransferasa y el resultado es la formacin de un dipptido (Met-Thr) unido al ARNt de la Treonina y alojado en el sitio A. Tercera fase: Translocacin del ribosoma. El ribosoma se desplaza a lo largo del ARNm exactamente 3 nucletidos en sentido 5'--3'. Esto provoca la expulsin del ARNt de la Met del sitio P, mientras que el ARNt de la Treonina, junto con el

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dipptido que lleva unido, pasan del sitio A al sitio P, dejando vaco el primero, con lo que se vuelve a la primera fase y se inicia otro ciclo de elongacin . - Terminacin de la sntesis de protenas: La sntesis de la cadena polipeptdica se detiene cuando aparece, durante la tercera fase de un ciclo de elongacin, en el sitio A uno de los tres codones de terminacin en el ARNm (UAA, UAG o UGA). En este momento un factor proteico de terminacin (RF) se une al codon de terminacin e impide que algn complejo de transferencia se aloje en el sitio A, con lo que al desplazarse el ribosoma queda libre el extremo C-terminal de la protena, y por tanto la protena misma, habiendo terminado su sntesis.

3.6.- REGULACIN DE LA EXPRESIN GNICA La supervivencia en ambientes a menudo hostiles y cambiantes ha obligado a los seres vivos a adoptar un conjunto de estrategias encaminadas a regular con la mxima eficacia la expresin de sus genes. Por ello, para aprovechar adecuadamente las fuentes energticas de que disponen, que no siempre son abundantes, y evitar el despilfarro de energa, las clulas procariticas y eucariticas sintetizan en cada momento slo aquellas protenas que necesitan. Las bacterias estn obligadas a responder continuamente a los cambios producidos en el ambiente externo y, por tanto, utilizan en cada momento solamente aquella fraccin de informacin gentica que resulta realmente necesaria para dar respuesta a la variacin de factores ambientales (nutrientes, temperatura, etc.). A principios de los aos sesenta, Jacob y Monod propusieron un modelo denominado

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opern para la regulacin de la expresin gnica en las bacterias. Un opern es un conjunto de genes que codifican protenas diferentes implicadas en procesos bioqumicos muy relacionados (por ejemplo los enzimas que intervienen en una misma ruta metablica); todos estos genes se localizan en el cromosoma unos cerca de otros, con el fin de que la regulacin de su expresin se realice de forma coordinada. En cada opern se diferencian las siguientes partes: a) Los genes estructurales (GE1, GE2, GE3, ......) que codifican la sntesis de las protenas enzimticas (E1, E2, E3, .....) que participan en un determinado proceso bioqumico. b) El gen regulador (R) que codifica la sntesis de una protena represora y es el agente que controla materialmente la expresin. Esta protena puede estar en forma activa o inactiva. c) El promotor (P) que est prximo a los genes estructurales y que es la zona donde se une la RNA-polimerasa y decide el inicio de la transcripcin. d) El operador (O) que es una regin intercalada entre el promotor y los genes estructurales y que posee una secuencia caracterstica que cuando es reconocida por la protena represora, bloquea el operador impidiendo el avance de la RNApolimerasa con lo que la transcripcin se interrumpe y se produce una represin gnica (los genes no se expresan).

Induccin enzimtica (opern lactosa) , el proceso seguido es el siguiente: el gen regulador se transcribe y se sintetiza la protena represora activa que bloquea el operador e impide la sntesis de los enzimas E1, E2, E3, .....encargados de metabolizar la lactosa y transformarla en los productos 1, 2, 3 .... y P (producto final). La lactosa aportada por la dieta es capaz de unirse a la protena represora y provocarle un cambio que la vuelve inactiva, por lo que, al alcanzar la lactosa un nivel determinado de concentracin, se inactiva toda la protena represora y el operador se desbloquea; los

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genes estructurales se expresan (se transcriben y traducen) y los enzimas E1, E2, E3,.... catalizan la transformacin de la lactosa en el producto P; a medida que descienden los niveles de lactosa, la protena represora vuelve a activarse, se bloquea el operador y la expresin de los genes estructurales vuelve a reprimirse. Represin enzimtica (opern histidina). En este caso la protena represora es inactiva , por lo que el operador est libre y los genes estructurales se transcriben. La presencia de histidina acta a modo de correpresor que activa al represor y que evita la sntesis de nuevas molculas de Histidina. La disminucin de concentracin de sta inactivara de nuevo al represor y se volveran a formas nuevas molculas de histidina.

En los seres pluricelulares existe tambin una especializacin de las clulas que responde a determinados factores del ambiente interno. Esta especializacin lleva consigo la diferenciacin de tejidos en el organismo pluricelular. Aunque todas las clulas de un mismo organismo poseen el mismo ADN, los mismos genes, stos no se expresan en todas por igual; por ejemplo, los genes de la hemoglobina slo se expresan en los eritrocitos. Los mecanismos que regulan la expresin gnica constituyen, por tanto, el fundamento molecular de la diferenciacin celular, proceso por el cual, ya durante el desarrollo embrionario, determinados genes se reprimen y otros se expresan en diferentes tipos celulares para dar lugar ms tarde a los distintos tejidos de un organismo. El mecanismo ms importante y generalizado de regulacin de la expresin gnica, tanto en bacterias como en eucariotas, es el control sobre la transcripcin. En los tejidos de los organismos pluricelulares la mayora de las decisiones encaminadas a producir unas protenas y no otras se realiza mediante la activacin de la transcripcin de unos genes y la represin de otros. La activacin de la transcripcin se lleva a cabo frecuentemente por medio de una descondensacin de la cromatina. Frente a seales reguladoras del medio interno, generalmente de naturaleza hormonal, la cromatina de una regin determinada se descondensa durante un perodo de tiempo corto pero suficiente para que se transcriban los genes localizados en esa zona. En las plantas se da un caso especial de regulacin de la expresin gnica en el que es la luz la que ejerce una funcin activadora de determinados genes vegetales. La luz, adems de ser fuente de energa para la fotosntesis, controla el desarrollo de la planta mediante un proceso llamado fotomorfognesis que decide el tamao que debe

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alcanzar la planta, el nmero de hojas, cundo debe florecer y fructificar y, por ltimo, el tiempo que debe durar hasta que envejece y muere.

3.7.- MUTACIONES: CONCEPTO Y CLASES Es todo cambio en la informacin hereditaria. Esto es, ser una mutacin todo cambio que afecte al material gentico: ADN, cromosomas o cariotipo. Las mutaciones pueden producirse tanto en clulas somticas como en clulas germinales, en estas ltimas tienen mayor trascendencia. Las mutaciones slo son heredables cuando afectan a las clulas germinales. Si afectan a las clulas somticas se extinguen por lo general con el individuo, a menos que se trate de un organismo con reproduccin asexual. Las mutaciones pueden ser: naturales (espontneas) o inducidas (provocadas artificialmente con radiaciones, sustancias qumicas u otros agentes mutgenos). Estas mutaciones pueden ser dominantes, respecto al alelo normal no mutado, o recesivas segn se expresen. Segn la extensin del material gentico afectado se distinguen los siguientes tipos de mutaciones: 1) Gnicas 2) Cromosmicas estructurales 3) Cromosmicas numricas o genmicas Los efectos que pueden provocar una mutacin pueden ser: - Neutros, si no se produce ninguna alteracin . - Beneficiosos, si el gen mutado provoca un beneficio biolgico. - Perjudiciales, si provocan daos y pueden ser: o Letales: si producen la muerte, como mnimo del 90% de los individuos que la poseen. o Subletales: mueren menos del 10%. o Patolgicas, producen alguna enfermedad. 3.7.1 Mutaciones gnicas: son las mutaciones en sentido estricto. Son aquellas que producen alteraciones en la secuencia de nucletidos de un gen. Estas alteraciones pueden afectar tanto a los genes estructurales como a los reguladores y pueden provocar cambios en un par de bases (microlesiones) o en un segmento gnico (microlesiones). Las mutaciones gnicas pueden aparecer fundamentalmente por dos causas: -errores producidos durante la replicacin del ADN. - la accin de determinados agentes fsicos o qumicos, como las radiaciones o algunas sustancias procedentes del exterior celular o del propio metabolismo, que alteran el ADN. Existen varios tipos: a) Sustituciones de pares de bases. stas pueden ser: - Transiciones: Es el cambio en un nucletido de la secuencia del ADN de una base prica por otra prica o de una base pirimidnica por otra pirimidnica. - Transversiones: Es el cambio de una base prica por una pirimidnica o viceversa. Estas sustituciones son posibles porque algunos de los tomos de hidrgeno de cada una de las cuatro bases pueden cambiar sus posiciones para originar formas

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tautomricas distintas a las usuales. Estos tautmeros permiten apareamientos atpicos de bases en la hlice y provocan en la replicacin formacin de secuencias errneas. Los cambios de bases nitrogenadas pueden ser producidos por agentes mutagnicos que originan su desaminacin, la rotura del enlace entre una base prica y con la desoxirribosa (despurizacin) o la formacin de dmeros de timina.

b) Prdida o insercin de nucletidos. Este tipo de mutacin produce un corrimiento en el orden de lectura. Pueden ser: - Adiciones gnicas: Es la insercin de nucletidos en la secuencia del gen. - Deleciones gnicas: Es la prdida de nucletidos. Se producen por un emparejamiento anmalo durante la replicacin o cuando ciertos compuestos, como los colorantes de acridina, se intercalan en las cadenas polinucletidas. Las sustituciones provocan la alteracin de un nico triplete y, por tanto, salvo que indiquen un triplete de parada, o un aminocido del centro activo de una enzima, no suelen tener grandes efectos sobre la protena codificada, pues afectan a un nico aminocido y la protena seguir pudiendo realizar la misma funcin. Sin embargo, las mutaciones que impliquen un corrimiento en el orden de lectura, adiciones o deleciones, salvo que se compensen entre s, pueden alterar la secuencia de aminocidos de la protena codificada a partir del punto donde se produjo la mutacin y sus consecuencias suelen ser graves, pues todos los aminocidos de la secuencia proteica a partir de dicho punto sern diferentes.. c) Transposiciones .Son cambios de lugar espontneos de determinados segmentos del ADN. Estos pueden ser menores que un gen (denominadas secuencias de insercin), un gen o un grupo de genes (transposones). 3.8.- AGENTES MUTAGNICOS. Los agentes mutagnicos son aquellos factores que aumentan sensiblemente la frecuencia normal de mutacin. Pueden ser agentes fsicos, qumicos o biolgicos. 3.8.1- Agentes mutagnicos fsicos. Aunque las subidas intensas y rpidas de la temperatura pueden provocar mutaciones, los agentes fsicos mutagnicos por excelencia son las radiaciones, que se dividen en ionizantes y no ionizantes. -Radiaciones ionizantes. Son radiaciones de longitud de onda muy corta y, por tanto, muy energticas, que provocan la ionizacin de los tomos de las sustancias que atraviesan. Entre estas radiaciones se encuentran los rayos X y , as como las partculas y . Sus efectos son de tres tipos: - fisiolgicos, pueden producir cambios enzimticos que se traducen en modificaciones metablicas. - citogenticas, comportan alteraciones en la estructura de los cromosomas, como deleciones y translocaciones. - genticos, son producidos por ionizaciones directas del ADN o a travs de otros iones que, a su vez, provocan nuevas ionizaciones y la aparicin de radicales libres muy reactivos. Estos cambios se traducen en mutaciones gnicas, como la rotura de los enlaces nucletidos, la rotura y prdida de bases nitrogenadas y la aparicin de formas tautomricas. - Radiaciones no ionizantes. Son las radiaciones ultravioletas. No producen ionizacin y su accin primaria consiste en provocar el paso de electrones a

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niveles energticos ms altos, lo cual puede dar lugar a formas tautomricas y dmeros de timina. 3.8.2.- Agentes mutagnicos qumicos. Numerosas sustancias tienen accin mutagnica (hidrocarburos policclicos, aminas aromticas , agentes alquilantes, colorantes industriales, pesticidas, etc). A diferencia de las radiaciones sus efectos suelen ser retardados. Los cambios que provocan son: - Modificaciones de las bases nitrogenadas. Comprenden las reacciones de desaminacin, alquilacin e hidroxilacin, que provocan emparejamientos errneos. - Sustitucin de bases. Estn causados por anlogos de bases nitrogenadas que provocan un emparejamiento errneo durante la replicacin al cambiar una base por otra. Los anlogos de las bases nitrogenadas, se emplean, en ocasiones como frmacos antitumorales y antivricos, ya que al evitar una correcta replicacin del ADN, impiden la reproduccin del organismo. Es el caso del medicamento conocido como AZT. - Introduccin de ciertas molculas en la cadena polinucletida del ADN. Estas inserciones provocan la aparicin de un exceso de nucletidos en la hebra de nueva formacin durante la replicacin. De este modo, a partir de ese punto los tripletes de bases se alteran y el mensaje gentico cambia. 3.8.3.- Agentes mutagnicos biolgicos. Algunos agentes biolgicos aumentan la frecuencia de la mutacin gnica. Destacan entre ellos ciertos virus que pueden producir cambios en la expresin de algunos genes y los transposones. Estos ltimos son segmentos mviles de ADN que pueden cambiar de posicin, trasladndose a otro lugar distinto del cromosoma o incluso a otro cromosoma. Este tipo de elementos mviles se han encontrado en todo tipo de organismos y pueden originar mutaciones, ya que causan una activacin, o inactivacin no deseada al insertarse en genes reguladores o en los estructurales. Se cree ,adems, que los virus mutagnicos podran realizar su accin al llevar al genoma transposones tomados de una clula previamente infectada que incorporaran a la nueva clula parasitada

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