INGENIERA GENTICA: Por Mara Sols Diago 4B

INTRODUCCIN: La ingeniera gentica es el proceso de transferir ciertas partes de ADN de un organismo a otro. Es una tcnica que manipula los genes. Puede alterar o introducir genes en el genoma de un ser vivo que carece de ellos. Todo comenz cuando a principios de la dcada de los setenta, Paul Berg descubri las enzimas de restriccin. stas actan como bisturs genticos que son capaces de cortar el ADN en puntos concretos y as separar los segmentos de ADN que interesan. De esta forma surgi la tecnologa del ADN recombinante; se llama as por intercalar un segmento de ADN extrao en un ADN receptor. En 1997 se clona el primer mamfero, la oveja Dolly. Actualmente la Ingeniera Gentica est trabajando en la creacin de tcnicas que permitan solucionar problemas frecuentes de la humanidad Para manipular informacin gentica, lo primero que se debe hacer es extraer el ADN de la muestra. Lo segundo es decidir con que fragmentos de ADN se va a trabajar. Si se trata de identificacin, se trabajar con un trozo de ADN basura, pero si se trata de detectar una enfermedad, se trabajar con ADN codificante. El ADN mitocondrial y el ADN cromosmico tienen unas zonas que se conservan muy bien y son zonas muy variables entre los individuos por lo que es recomendable trabajar con ellos. Para empezar hay que cortar el trozo de ADN con el que se quiere trabajar y despus incorporarlo a un plsmido bacteriano para hacer un plsmido recombinante, luego introducirlo en una bacteria y dentro de sta tiene que replicarse el plsmido con el inserto de ADN, luego hay que trabajar con los plsmidos. Para hacer esto se necesita bastante cantidad de ADN de partida, por eso, mediante el uso de enzimas se consigue trabajar usando poco ADN de partida. Las enzimas que se utilizan para cortar ADN (tambin llamadas tijeras moleculares) se denominan enzimas de restriccin o restrictasas (Hidrolasas) que son endonucleasas, porque cortan el ADN por el medio de la molcula. Estas enzimas cortan por secuencias especficas, dejando extremos pegajosos: TCACGATGC AGTGCTACG Existen de muchos organismos mapas de restriccin para el ADN, que indican los lugares de corte de distintas enzimas. Para el ADN humano se conocen mapas de restriccin de distintas zonas con diferentes cromosomas. Las enzimas de restriccin se obtienen de bacterias, y los preparan los laboratorios comerciales. Actualmente se utiliza otro mtodo de clonacin de genes, en este caso no es necesario cortar la zona de ADN que se quiere estudiar, lo que se necesita es utilizar primers iniciadores: Un primer es un trozo pequeo de una cadena de ADN, con una secuencia determinada. Segn la zona de ADN que se quiere amplificar se tiene que utilizar un primer diferente que va a ser complementario y antiparalelo a el fragmento del ADN a amplificar. La ingeniera gentica incluye un conjunto de tcnicas biotecnolgicas, entre las que destacan: La tecnologa del ADN recombinante;

La secuenciacin del ADN;

La reaccin en cadena de la polimerasa

La tecnologa del ADN recombinante

Con ella es posible aislar y manipular un fragmento de ADN de un organismo para introducirlo en otro. Si se quieren unir dos ADNs procedentes de especies diferentes podemos utilizar enzimas como herramientas. Cada ADN se trata con una endonucleasa de restriccin que origina un corte escalonado en las dos hebras dobles de ADN. Los extremos escalonados del ADN1 y el ADN2 son complementarios. Los dos ADNs cortados se mezclan, se calientan y se enfran suavemente. Sus extremos cohesivos se unirn dando lugar a un nuevo ADN recombinado, con uniones no covalentes. Las uniones covalentes se consiguen aadiendo ADN ligasa y una fuente energtica para formar los enlaces.

El ADN vector es el vehculo de clonacin, ya que transporta el inserto de ADN a una molcula hospedadora, donde puede se replica. Los vectores o transportadores ms utilizados son los plsmidos y el ADN del fago lamda. Los plsmidos son pequeos fragmentos de ADNs de cadena doble y circular, que se encuentran en el citoplasma de la mayora de las bacterias. Cada plsmido contiene varios genes que se replican, transcriben y traducen independientemente de los genes de la bacteria, pero lo pueden hacer al mismo tiempo que ella. Se pueden unir genes extraos a los plsmidos con mucha facilidad, y despus ser transportados como pasajeros al interior de las clulas. El ADN del fago lambda es otro vector que puede ser utilizado para introducir genes en bacterias. Cuando el ADN recombinado del fago lambda, con su gen pasajero, se mezcla con la cubierta del virus lambda, se producen partculas fgicas infecciosas. Los procesos de clonacin y de aislamiento de estos fragmentos se inician con la construccin de un banco de ADN. Estn formadas por todas las molculas de plsmidos o fagos recombinantes originados al unir un ADN a un vector. Los bancos deben cumplir la caracterstica de poder introducirse en clulas donde cada recombinante pueda aplicarse in vivo.

La secuenciacin del ADN Esta tcnica permite saber el orden o secuencia de los nucletidos que forman parte de un gen. Este es el mtodo a seguir. Como la tcnica se basa en la sntesis de ADN, para hacer la reaccin de secuenciacin se necesita: Un "molde" para el que se utiliza una de las cadenas del fragmento de ADN que se va a secuenciar. Un cebador para iniciar la sntesis, se necesita un corto oligonucletido complementario en el extremo de la cadena. Desoxinucletidos de las cuatro bases: dAMP, dTMP, dGMP, dCMP. Didesoxinucletidos de una base en cada una de las cuatro reacciones de secuenciacin.

Al aadir la ADN-polimerasa, comienza la polimerizacin en el cebador, pero cesa al incorporarse un didesoxinucletido. Se produce un conjunto de cadenas dobles cuyas longitudes dependen de la situacin del didesoxinucletido incorporado. Deben prepararse cuatro reacciones de secuenciacin, cada una con un didesoxinucletido distinto. Los fragmentos resultantes se separan por tamao mediante electroforesis, se autorradiografa, y la sucesin de bandas de cada una de las cuatro reacciones dan la secuencia del ADN.

La reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) Con esto se consigue aumentar el nmero de copias de un fragmento determinado de ADN, por lo tanto, con una mnima cantidad de muestra de ADN, se puede conseguir toda la que se necesite para un determinado estudio. La tcnica consiste en: 1.En un tubito se mezcla el ADN molde, los dos cebadores (oligonucletidos), los cuatro dNTPs y la ADN-polimerasa termorresistente. 2.Se calienta a 94 C durante 5 min, con lo que se separan las cadenas del ADN molde a amplificar, generndose cadenas sencillas. 3.Se baja la temperatura a unos 60 C, de modo que cada cebador se empareja con el extremo correspondiente de una de las cadenas del molde.

4.Se sube la temperatura hasta 72 C , y se deja durante 5 min, tiempo durante el que se est produciendo la sntesis in vitro de las cadenas complementarias de cada hebra molde. 5.Se sube la temperatura a 94 C durante 20 segundos, para separar la cadena recin sintetizada respecto del molde original. 6.Las cadenas sencillas generadas entran ahora en un nuevo ciclo (de nuevo pasos 1 a 5), y as sucesivamente, de modo que tras 30-60 ciclos obtenemos una amplificacin del ADN original de millones o miles de millones de veces. 7.Se puede usar para aplicaciones comerciales de los estudios de la ingieniera que, entre otras cosas, se emplea para organismos trangnicos. APLICACIONES DE LA INGENIERA GENTICA Las dos tcnicas bsicas de la ingeniera son la clonacin y la produccin de individuos trasgnicos, junto con la mejora en el conocimiento de ADN y ARN, han hecho posible que el ser humano pueda manipular el material gentico de muchos organismos, incluido el propio. La bsqueda cientfica dirige sus esfuerzos, bsicamente, hacia dos campos: La terapia gentica. Sector alimentario: agricultura y ganadera. Terapia gentica

Las investigaciones genticas se concentran en solucionar muchas enfermedades propias de nuestra especie; ya sean de manera directa, es decir, actuando directamente en los genes, o bien por medios de productos que pueden sanar estas enfermedades. Algunos de los campos en que trabaja la ingeniera gentica son: Produccin de antibiticos, hormonas y anticuerpos Desde que en 1929 se descubri la penicilina, el nmero y el uso de los antibiticos no ha dejado de aumentar. En la actualidad la ingeniera gentica ha conseguido mejorar el proceso de fabricacin de tales medicamentos. Esta mejora se ha conseguido aislando el gen productor del antibitico e introducindolo en un microorganismo con una gran capacidad de reproduccin; este hecho supone que el antibitico en cuestin se produzca en gran cantidad y con gran pureza. Por ejemplo en la enfermedad de la diabetes, donde la hormona de la insulina se extraa de los conejos y cerdos mediante un proceso caro y no exento de problemas de rechazo, la ingeniera gentica la ha aislado en el gen humano que codifica para la insulina y la ha introducido en una bacteria denominada Eschlerichia coli. El resultado es una hormona sin efectos secundarios y ms barata. Solucin a enfermedades genticas Las enfermedades de tipo gnico se caracterizan porque tienen su origen en algn defecto en los genes implicados. El progresivo conocimiento del genoma humano ha permitido localizar muchas de estas enfermedades en los diferentes cromosomas. La ingeniera gentica puede cambiar los cromosomas defectuosos por los normales. Por ejemplo la deficiencia de adenosina deaminasa) es una enfermedad que provoca una grave deficiencia inmunolgica, por lo cual los enfermos que la padecen tienen que vivir dentro de una cmara completamente aislada y esterilizada(nios burbuja).La terapia consiste en extraer los glbulos blancos del paciente, modificarlos y retornarlos a la sangre. Esta modificacin consiste en la sustitucin de los genes alterados(del cromosoma 20) por otros correctores. Los linfocitos transformados se multiplican de manera artificial en laboratorio hasta generar miles de millones de clulas. El retorno de las clulas sanas se hace de manera peridica. Este tratamiento tena un efecto bastante breve, ya que estos glbulos blancos modificados genticamente tiene una vida ms bien corta, de manera que el tratamiento se tena que repetir ms o menos cada mes. La mejora de la terapia consiste en introducir los genes correctores en las clulas en las clulas formadoras de glbulos blancos. La ventaja est en que estas clulas modificadas tienen una vida mucho ms larga y se pueden dividir y generar billones de clulas sanguneas, todas ellas con el nuevo gen. Otro ejemplo es el cncer, se conocen muchos tipos que se pueden tratar mediante la terapia gentica; de hecho, ms de la mitad de los protocolos de esta terapia son para tratamientos de cncer. En 1989 se iniciaron tratamientos en enfermos con tumores epidrmicos graves; se les introducan linfocitos modificados genticamente para que provocaran una respuesta inmunitaria mucho ms

intensa que la habitual. El resultado fue poco esperanzador, aunque algunos pacientes llegaron a curarse. Otro tratamiento consiste en introducir todo un grupo de genes suicidas destinados a las clulas cancerosas. La efectividad se basa en que estas clulas, al dividirse ms rpidamente, tienden a incorporar todo tipo de molculas, incluso genes modificados que pueden actuar de diversas formas: Matar la clula directamente, segregando sustancias txicas. Sensibilizar las clulas a determinados frmacos txicos. Sustituir los genes responsables de la divisin celular desordenada para que se dividan con normalidad.

Solucin a problemas de fertilidad Las tcnicas de fecundacin asistida suelen ser poco eficaces por la dificultad para conseguir una buena implantacin de vulos en el tero y la dificultad para conseguir vulos maduros en un poco tiempo. Esto ltimo se resuelve sometiendo a la futura madre a un tratamiento hormonal para que produzca varios vulos. La clonacin soluciona estos dos problemas, ya que ha partir de un solo vulo se pueden obtener decenas de clnicos dotados para obtener un nio normal. Soluciones a problemas cardiovasculares Las arterioesclerosis es una enfermedad propia de las personas mayores, en las cuales el colesterol se acumula en el interior de las venas y se dificulta la circulacin. El tratamiento gentico consiste modificar un gen del epitelio vascular para producir una protena que estimula el desarrollo de los vasos sanguneos provocando la formacin de pequeos capilares y aumentando la circulacin local. Este proceso permite tratar problemas circulatorios en zonas donde normalmente hay dificultades con los tratamientos de ciruga convencional, como el corazn y el cerebro. Agricultura y ganadera A lo largo de los siglos se han ido seleccionando las variedades de animales y plantas ms idneas para los propsitos humanos(seleccin artificial).La ingeniera gentica ha permitido hacer esta seleccin de manera ms rpida y directa al poder modificar sus genes. La facilidad a la hora de aplicar la tcnicas genticas depende de la complejidad del ser vivo sobre el que se acta. Agricultura Las caractersticas fisiolgicas y celulares de los vegetales han permitido cultivarlos de manera artificial y conseguir plantas completamente desarrolladas a partir de una clula nica. Gracias a la ingeniera gentica se han mejorado muchas variedades de plantas. Uno de los avances ms extendidos es la obtencin de nuevas variedades ms productivas y/o ms nutritivas. La tecnologa tambin ha permitido obtener plantas con una produccin muy alta de determinadas sustancias necesarias para la alimentacin o la industria como antitumorales, drogas, aminocidos, perfumes y otros productos difciles de obtener mediante simples procesos industriales.

Ganadera

Los casos de ingeniera gentica en mamferos ms famosos son los de las ovejas Dolly y Polly. La obtencin de stas ovejas forma parte de un experimento bastante complejo desarrollado por una empresa escocesa cuyo objetivo era obtener determinados medicamentos como un componente ms en la leche de oveja. La primera fase(desarrollada el ao 1991) consisti en la obtencin de un ejemplar transgnico, Tracy, al cual se incorpor el gen humano que codifica la protena que sirve para tratar el edema pulmonar. La dificultad de los genes insertados adecuadamente en el genoma haca muy difcil obtener un nmero razonable de ejemplares con estas caractersticas. La siguiente fase tena que consistir en poder duplicas cuantas ms veces mejor una de las ovejas transgnicas. La segunda fase tena que permitir clonar ovejas; el resultado fue Dolly. El proceso es muy similar a la clonacin que se ha explicado anteriormente. La diferencia ms importante se basa en que Dollyes una oveja clnica formada a partir de una clula completamente diferenciada proveniente de una oveja adulta(oveja X). El proceso de fusin de un vulo, con anterioridad vaciado del contenido gentico(aportada por la oveja O) y de una clula mamaria con el material gentico intacto que provena de la oveja X, origin un cigoto normal que se implanto en una madre de alquiler(oveja M), Hasta que naci la oveja clnica. Dolly es, por lo tanto, una oveja idntica a la oveja X(la que aport el nico material gentico). Con este tratamiento se consiguen individuos clnicos a partir de otros adultos. Si los descendientes de los individuos transgnicos se hubieran obtenido mediante la reproduccin sexual tpica haba sido muy improbable la transmisin de este gen a la descendencia. La tercera y ltima fase consisti en clonar las ovejas transgnicas; el resultado culmin cuando naci la oveja Polly en 1997. Por lo tanto, Polly es una oveja transgnica(lleva un gen insertado en su material gentico) y clnica, ya que es la copia exacta de otra oveja tambin transgnica.

Otros casos son: Cerdos en los que se han insertado genes humanos que codifican para determinados rganos(corazones, hgados, etc.) con el fin de que sirvan como rganos para futuros trasplantes en humanos y no tener que depender de las aportaciones de otras personas. Ratones en los cuales se les han introducido genes humanos defectuosos para que se desarrollen enfermedades propias de nuestra especie, y as, poder estudiar as los procesos patolgicos que se derriban a fin de determinar los mejores tratamiento. Vacas transgnicas con el gen que codifica para diversas sustancias importantes a la hora de luchar contra determinadas enfermedades.

Aplicaciones de la biotecnologa al medio ambiente Hay investigaciones orientadas para intentar conseguir que el nitrgeno atmosfrico se convierta en orgnico y nutritivo sin el empleo de fertilizantes qumicos, que encarecen y dificultan por ello la produccin. De igual modo, con estos mecanismos de insercin podran introducirse en las plantas genes que las dotaran de mayor resistencia y adaptabilidad a la dureza del clima, sequedad de la tierra, a otras infecciones, aumentando al mismo tiempo su capacidad de produccin y la riqueza de sus elementos nutritivos.Su aplicacin resultar beneficiosa incluso para la purificacin de los metales, como lo sera tambin para eliminar los peligros de las mareas negras mediante bacterias que se alimentaran precisamente de estos residuos oleosos.

Repercusiones de la ingeniera gentica El negocio de la ingeniera gentica est en manos de las grandes multinacionales agroqumicas y farmacuticas.Sus intereses comerciales estn haciendo a los investigadores intervenir directamente en procesos biolgicos que apenas hemos empezado a comprender, y mucho menos a controlar. Los peligros potenciales de la Ingeniera Gentica son enormes. Las estructuras genticas existentes han evolucionado a travs de millones de aos formando un ecosistema infinitamente complejo e interconectado. Ahora los cientficos estn estropeando este equilibrio delicado con cambios que no podran ocurrir naturalmente. Esto se esta haciendo extremadamente rpido sin suficiente cuidado para las posibles consecuencias. Los organismos genticamente modificados son los ms peligrosos. No se pueden contener y sus efectos son irreversibles. Los peligros de la ingeniera gentica incluyen comida de calidad baja, animales enfermos, insectos, organismos y enfermedades ms peligrosas, una biodiversidad ms reducida, mayor contaminacin del agua, el alimento y la tierra, y la alteracin del equilibrio de la naturaleza. Con una ya mayor intervencin cientfica en la produccin alimentara, se esta haciendo ms comn la comida no sana y txica. Esta tecnologa ya ha despertado preocupacin desde el punto de vista cientfico y socioeconmico: Podra resultar en algunos organismos peligrosos hacindose resistentes a los antibiticos, y en las malas hierbas y los insectos hacindose resistentes a los pesticidas y a los herbicidas. Podra accidentalmente crear nuevos venenos y enfermedades. Si cambiamos la estructura fundamental de un alimento, podra crear enfermedad. Las plantas tratadas genticamente estn dejando como resultado la contaminacin de ros y embalses. La modificacin gentica del ganado lleva a animales enfermos a un alimento de nfima calidad. Ya se estn criando animales con enfermedades para experimentos y una vida de sufrimiento. Estos animales frecuentemente son enfermizos y tienen una vida ms corta. Se estn vendiendo semillas genticamente modificadas, haciendo peligrar la biodiversidad de los cultivos a travs de la perdida de las semillas tradicionales. La contaminacin biolgica puede ser el mayor peligro resultante de la ingeniera gentica. Nuevos organismos vivos, bacterias y virus sern soltados para reproducir, migrar y mutar. Pasarn sus nuevas caractersticas a otros organismos y nunca se podrn recuperar o contener. La evidencia cientfica indica que las aplicaciones en gran escala de la ingeniera gentica pueden: - Ser dainas para la salud humana. - Amenazar al ecosistema mundial. - Ser socialmente destructivas. Estos peligros surgen debido a que la ingeniera gentica de lnea germinal altera los genes del embrin o clulas reproductivas de un organismo. En consecuencia, los genes alterados pasarn a todas las generaciones siguientes. Los errores y efectos secundarios causados por las manipulaciones genticas entrarn en la base gentica de esas especies y se perpetuarn creando nuevas enfermedades genticas. Adems los organismos modificados genticamente pueden potencialmente tener enormes e imprevisibles efectos sobre el ecosistema. Habr efectos mucho ms dainos penetrantes y de larga duracin de los que produce la contaminacin qumica o incluso la contaminacin nuclear. Esto equivale a contaminacin gentica y es una invitacin a una alteracin ecolgica desastrosa. Bibliografa:

http://purageneticacientifica.blogspot.com/ http://html.rincondelvago.com/codigo-genetico_3.html

http://es.wikipedia.org/wiki/Ingenier%C3%ADa_gen%C3%A9tica#T.C3.A9cnicas http://html.rincondelvago.com/ingenieria-genetica_8.html