Étude de La Phytochimie Et Activités Biologique...

Thse de Pharmacie
Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Syzygium guineense Willd (Myrtaceae).

0
MINISTERE DE LEDUCATION REPUBLIQUE DU MALI
NATIONNALE Un Peuple - Un But - Une Foi
.
UNIVERSITE DE BAMAKO

FACULTE DE MEDECINE, DE PHARMACIE
ET DODONTO-STOMATOLOGIE (FMPOS)

N

TITRE:

THESE

Prsente et soutenue publiquement lejanvier 2005 devant la Facult de Mdecine, de
Pharmacie et dOdonto-Stomatologie du Mali.

Par

Monsieur Amadou DIALLO
Pour obtenir le Grade de Docteur en Pharmacie
(DIPLME DETAT)

Jury

PRESIDENT Professeur Moussa HARAMA
MEMBRES Docteur Elimane MARIKO
Docteur Rokia SANOGO
DIRECTEUR DE THESE Professeur Drissa DIALLO

ETUDE DE LA PHYTOCHIMIE ET DES ACTIVITES
BIOLOGIQUES DE Syzygium guineense WILLD.
(MYRTACEAE)
Thse de Pharmacie
1

NTRODUCTON NTRODUCTON NTRODUCTON NTRODUCTON
Thse de Pharmacie
2
INTRODUCTION

Lutilisation des plantes en thrapeutique (phytothrapie) est trs ancienne et connat
actuellement un regain dintrt auprs du public. Il est possible dutiliser les plantes entires
ou les produits dextraction quelles fournissent. (Marc, 2001).
Selon lorganisation mondiale de la sant (O.M.S); la mdecine traditionnelle se dfinit
comme lensemble de toutes les connaissances pratiques explicables ou non pour
diagnostiquer ou liminer un dsquilibre physique, mental en sappuyant exclusivement sur
lexprience vcue et lobservation, transmises de gnration en gnration (oralement ou par
crit) (Adjanohoun et coll, 2001).
Par ailleurs, selon lOMS, prs de 6377 espces de plantes sont utilises en Afrique, dont plus
de 400 sont des plantes mdicinales qui constituent 90% de la mdecine traditionnelle.
En 2004, prs de 75% de la population africaine a recours aux plantes qui lentourent pour se
soigner et na pas accs aux mdicaments dits modernes (Pousset, 1989).
Sachant quune plante peut contenir plusieurs milliers de substances diffrentes, on peut se
rendre compte de la richesse naturelle du rgne vgtal.
Dans le contexte socio-conomique des pays en voie de dveloppement, ltude des plantes
peut aboutir lobtention de rponses thrapeutiques adquates et de faible prix, joignant
une efficacit scientifique prouve et une acceptabilit culturelle optimale.
La valorisation scientifique de la mdecine traditionnelle doit conduire notamment la mise
au point de mdicaments base de plantes.
Les mots cls, dans ce domaine, doivent tre : scurit, efficacit et qualit.
Lensoleillement, la pollution (auto, industrialisation) et la consommation de cigarettes
peuvent provoquer dans lorganisme des substances qui sont appeles radicaux libres. Un
radical libre est une molcule indpendante ayant un ou plusieurs lectrons non apparis sur
sa dernire couche. Loxydation de ces radicaux libres peut favoriser le dveloppement de
certaines maladies comme larthrite, lasthme, la maladie de Parkinson, la neurodgnration
(Muller, 1993 ; Harman, 1992).
Aujourdhui il a t estim que les principes actifs provenant des vgtaux reprsentent 25%
des mdicaments prescrits soit un total de 120 composs dorigine naturelle provenant de 90
plantes diffrentes (Potterat et Hostettmann, 1995).
De multiples tudes, certes disperses, ont t faites sur les plantes mdicinales ce qui dnote
toute limportance accorde la mdecine traditionnelle dans la politique sanitaire de notre
Thse de Pharmacie
3
pays. Toutefois, une approche dynamique de ce systme curatif traditionnel visant saisir son
mcanisme dadaptation et de rsistance aux diffrentes transformations socioconomiques
na pas encore t faite.
Au Mali lexemple illustre est celui du Dpartement de Mdecine Traditionnel (D.M.T) ; qui
est un dpartement de lInstitut National de Recherche en Sant Publique (I.N.R.S.P), o pour
le moment sept Mdicaments Traditionnels Amliors (M.T.A) sont produits et
commercialiss dans les officines (Diallo, 2000).

Lathrosclrose, considr comme une inflammation chronique de lintima des vaisseaux,
fait partie des premires causes de mortalit dans les pays industrialiss. La raction
inflammatoire dorigine infectieuse ou non peut entraner un tat de choc avec dfaillance
multi-viscrale qui engage le pronostic vital (Timbo, 2003).
Ces affections qui englobent la fivre et la douleur sont dune trs grande diversit, qui en
absence dun traitement efficace voluent vers une chronicit do la ncessit de rechercher
et de mettre au point des mdicaments anti-inflammatoires accessibles par tous.
Syzygium guineense Willd de la famille des Myrtaces est utilis dans le traitement des
maladies diarrhiques (corces de tronc) ; lactivit anti-bactrienne de ces extraits ont t
dmontre sur des souches des microorganismes suivants : Staphylococcus aureus,
Escherichia coli, Salmonella enteridis, Sigella flexneri, Shigella dysenteriae, Enterobacter
aerogenes, Klebsiella pneumoniae. Ces extraits ont galement rvl une activit sur des
souches dEntamoeba hystolytica de type 1 et 2 (Adjanohoun et coll, 2001 ).
Cest une plante utilise dans le traitement de la fivre et dans la malnutrition. Elle est
caractristique des rivires et des forets galeries en zone soudano-guineene (Denis, 1992) dont
ltude phytochimique et des activits biologiques de la poudre de feuilles fait lobjet de notre
travail.

Thse de Pharmacie
4
Motivations

Ce travail a t motiv par :
- La revalorisation des plantes mdicinales utilises en mdecine traditionnelle en vue de la
formulation de mdicaments traditionnels amliors.

- Les multiples pathologies douloureuses, abdominales, inflammatoires et infectieuses sont
parmi les motifs de consultations frquentes en Afrique du fait dun environnement
cologique favorable au dveloppement dagents contaminant (chaleur, humidit, eaux
stagnantes).

- La ncessit de faciliter laccs des populations des mdicaments de moindre cot
compte tenu du prix lev des mdicaments conventionnels.

- Lexistence sur le plan national de peu de travaux phytochimiques et pharmacologiques
sur Syzygium guineense Willd.

- Les utilisations traditionnelles de cette dans le traitement de la fivre et la malnutrition.

- La contribution ltude de la toxicit de cette plante.

Thse de Pharmacie
5
OBJECTIFS

OBJECTIF GENERAL

Etudier la phytochimie et les activits biologiques de Syzygium guineense.

OBJECTIFS SPECIFIQUES

Identifier les diffrents groupes chimiques prsents dans les feuilles de Syzygium
guineense,
Dterminer leffet du dcoct aqueux des feuilles de la plante sur le mtabolisme
et certains paramtres biologiques de la souris,
Dterminer lactivit anti-oxydante des extraits aqueux, hydro-alcooliques et
organiques de feuilles de Syzygium guineense,
Dterminer lactivit anti-inflammatoire du dcoct aqueux des feuilles de
Syzygium guineense,
Dterminer la toxicit aigu du dcoct aqueux des feuilles de Syzygium
guineense.

Thse de Pharmacie
6

TRAVAUX
ANTEREUR8
Thse de Pharmacie
7
1 Monographie de Syzygium guineense Var. Guineense (Willd.):
Synonyme: Calyptranthes guineensis (Willd.)
Noms vernaculaires: (kisa deau)
Bambara: kkisa, kuri, konyume.
Malink: kkisa
Minyanka: dugutaga
Serere: sukomon (Wagbo Vananga)
Bobo: dibi
Dogon: alukile.
1-1 Position systmatique (Crte, 1965) :

Rgne vgtal
Sous-rgne Eucaryotes
Embranchement Spermaphytes
Sous-embranchement Angiospermes
Classe Dicotyldones
Ordre Myrtales
Famille Myrtaceae
Genre Syzygium
Espce guineense

1-2 Description botanique (Kerharo et Adams, 1974) :
Cest une plante appartenant la famille des Myrtaces, cette famille a plus de 500 espces.
Elle est trs aromatique et riche en essences.
Syzygium guineense est un arbre de 12 15 m de hauteur, fus robuste et rarement droit, il
possde des basses branches avec des rameaux extrmits retombantes ; les corces sont
fonces, rugueuses, un peu strie, se dtachant par petites plaques (Figure n1).
Les feuilles sont elliptiques ou oblongues, cunes la base, et acumines au sommet de 11 cm
sur 4,5 cm; les nervures latrales sont unies avant le bord du limbe (Figure n1).
Les cymes sont terminales de fleurs blanches de 5 mm de diamtre.
Les baies, de 1 cm long sont de forme ellipsode, de couleur violet fonce maturit.
Thse de Pharmacie
8

Photo plante entire de Syzygium guineense

Rameaux feuills de Syzygium guineense

Figure n1 : Photos plante entire et rameaux feuills

Thse de Pharmacie
9
1-3 Habitats :
Cest une plante commune en Casamance maritime le long des marcages et dans les sols
humides ctiers. Elle est frquente sur les berges des affluents de la Gambie. Au Mali cette
plante se trouve sur les berges du fleuve Niger et dans les galeries forestires en zone
soudano-guineenne.
1-4 Cycle vgtatif :
Feuillage permanent, fleurit de mars en avril, les fruits sont mrs en mai juin (Denis, 1992).
1-5 Utilisations traditionnelles :
Syzygium, bien que signal dans diverses rgions, est dutilisation peu courante. Les corces
sont lgrement antidiarrhques et labsorption rgulire du macr dcorces et de feuilles
est recommande aux femmes durant la gestation, plus particulirement lorsquelles sont
atteintes des maux de ventre. (Kerharo et Adams, 1974).
Les racines bouillies en association avec celles de Combretum glutinosum et de Bombax
costatum sont utilises pour aider un enfant marcher.
La dcoction des racines est utilise dans la cirrhose du foie ;
La dcoction de lcorce sert rincer la bouche en cas de stomatite. La potion est utilise
contre les diarrhes.
Le macr dcorces et de feuilles dans leau sert de boisson pour aider les femmes en
gestation.
Les corces riches en tanin, servent pour la prparation des peaux.
Feuilles et rameaux feuills :
Les feuilles en dcoction sont utilises comme fortifiant par voie orale;
Les rameaux feuillus en dcoction sont utiliss en fumigation contre les ankylostomes ;
Le gui est utilis en dcoction comme bain oculaire lutte contre la cataracte (Denis, 1992).
1-6 Chimie :
Lespce Congolaise S. owariense Bent, souvent confondue par les botanistes avec S.
guineense, (Degant, 1920) a donn les pourcentages dans les feuilles sches de cendres (5,85),
albuminodes (9,35), cellulose (30,65), et lextrait thr (11,35). La recherche des alcalodes
a t ngative.

Thse de Pharmacie
10
Donnes pharmacologiques :
Les tudes ont dmontr lactivit antibactrienne des extraits de Syzygium guineense sur des
souches de microorganismes suivants :
Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Salmonella enteridis, Shigella flexneri, Shigella
dysentteriae, Enterobacter aerogenes, Klebsiella pneumoniae.
Les mmes extraits ont galement montr une activit sur les souches dEmtamoeba
histolitica de type 1 et 2 (Adjanohoum et coll, 2001).

Thse de Pharmacie
11
LES ANTIOXYDANTS

1 Gnralits sur les antioxydants :
Le concept selon lequel loxygne, molcule indispensable pour la vie, peut entraner des
dommages cellulaires importants par formation de drivs oxygns activs tel que les
radicaux libres , est encore mal peru dans le milieu mdical. Pourtant, de trs nombreuses
tudes pidmiologiques et cliniques ont suggr le rle de ces espces ractives de loxygne
(ERO) dans le dveloppement de nombreux processus pathologiques comme lathrosclrose
et la cancrogense. Pour se protger des effets toxiques de loxygne, lorganisme a
dvelopp des systmes de dfense antioxydants composs denzymes (la glutathion
peroxydase), de vitamines (A,C,E), doligo-lments (le slnium), de protines (la ferritine).
En situation physiologique, ces systmes antioxydants ont la capacit de rguler parfaitement
la production des ERO. Un stress surviendra lorsquil y aura un dsquilibre dans cette
balance prooxydants/antioxydants en faveur des ERO. Chaque individu ne possde pas le
mme potentiel antioxydant selon ses habitudes alimentaires, son mode de vie (le tabagisme),
ses caractristiques gntiques ou lenvironnement dans lequel il vit. Dterminer le statut de
stress oxydant dun individu devient donc un sujet de priorit en termes de prvention de
maladies. Ceci se justifie sur la base de trs nombreuses tudes montrant que les personnes
ayant des concentrations sanguines faibles en antioxydants (vitamines A, C ou E) ou des
concentrations leves en marqueurs doxydation des lipides ou de lADN, ont plus de risques
de dvelopper des maladies cardiovasculaires ou un cancer que des personnes ayant un bilan
antioxydant normal rsultant dune alimentation quilibre en fruits et lgumes. Sur base de
bilans sanguins perturbs, prendre des complments en antioxydants des doses
physiologiques pourra donc se justifier condition que ceci soit ralis sous un contrle
mdical strict. (Jol et coll, 2002).
Au niveau mdical, les vitamines C et E tout comme les oligo-lments, ont t et sont encore
maintenant considrs comme des molcules permettant de lutter contre un tat de fatigue.
Actuellement, il est toujours trs difficile de convaincre le milieu mdical du rle potentiel
que peuvent jouer ces vitamines comme antioxydants dans la prvention de diffrentes
maladies. Ceci est pourtant connu de longue date. En 1960 le clbre chercheur franais
Henry Laborit attirait dj lattention sur la toxicit de loxygne pressuris et prconisait
lusage dantioxydants comme agents protecteurs (Laborit et coll, 1960).
Thse de Pharmacie
12
En 1968, le Food and Nutrition Board aux Etats-Unis reconnaissait la vitamine E comme
tant une molcule essentielle en vertu de ses proprits antioxydantes. Limplication des
antioxydants dans notre vie de tous les jours a vritablement pris son essor lorsque les
Amricains McCord et Fridovich isolent en 1969 la SOD, enzyme capable de dtruire lanion
superoxyde (McCord et Fridovich, 1969). Malgr un nombre incalculable de travaux
scientifiques de haute qualit, il faudra attendre ce dbut de nouveau millnaire pour que
limportance des antioxydants soit reconnue en matire de mdecine de prvention.
Lavnement de la biologie molculaire nous permettra par ailleurs de dcouvrir dautres
faces caches de ces antioxydants.
Bien qutant anti-oxydants, les flavonoides ont des effets pro-oxydants sur les protines, sur
la peroxydation des lipides et sur lADN.
On dfinit comme radical libre, nimporte quelle molcule indpendante contenant un ou
plusieurs lectrons non apparis. Bien que le terme de radical libre ait souvent t assimil
une espce ractive ou un oxydant, il est important de signaler que tous les radicaux libres
ne sont pas forcement des oxydants. De mme que, tous les oxydants ne sont pas des radicaux
libres.
On dsigne par antioxydant toute substance qui, lorsquelle est prsente en faible
concentration compare celle du substrat oxydable, retarde ou prvient de manire
significative loxydation de ce substrat.
Lorigine des radicaux est diverse : tout dabord, la pollution de notre environnement peut
gnrer la formation despces ractives de loxygne. Une bouffe de cigarette contient
environ 10
14
radicaux. Ces mmes cigarettes contiennent galement des traces dions
mtalliques qui peuvent ragir avec le peroxyde dhydrogne pour former des radicaux
hydroxyles.
Les antioxydants dorigine naturelle semblent contribuer de manire significative la
prvention de certaines maladies telles que les cancers et les maladies cardiovasculaires.
2 Types dantioxydants (Keta, 2002) :
Il existe deux catgories dantioxydants :
Les squestrants de mtaux et les phagocytes de radical libre. Les squestrants de mtaux
prcipitent un mtal ou suppriment sa ractivit en occupant tous les sites de coordination ;
les phagocytes de radical libre comprennent lhydroxytolune butylat (BHT),
lhydoxyanisole butylat (BAT), les tocophrols (vitamine E) et lacide ascorbique (vitamine
C).
Thse de Pharmacie
13
3 Les sources dantioxydants :
En plus des substances propres lorganisme, les mdicaments, lalimentation et les plantes
peuvent tre galement des sources dantioxydants.
3-1 Mdicaments :
Ils constituent une source importante dantioxydants. Actuellement, les classes thrapeutiques
comme les anti-inflammatoires non strodiens, les anti-hyperlipoprotinmiques, les
bta-bloquants et autres antihypertenseurs ont t valus pour leurs proprits
antioxydantes :
AINS : Le mcanisme daction commun de tous les AINS est la diminution de la production
de prostaglandines du fait de linhibition de la cyclo-oxygnase.
Antihypertenseurs : Ils agissent en inhibant la rabsorption des ions Na
+
et Cl
-
differents
niveaux.
Le probucol par exemple est un mdicament qui en plus de ses effets reconnus dans la baisse
de cholestrol, prvient lathrogense en agissant comme antioxydant et en supprimant la
modification oxydative des lipoprotines de basse densit (LDL).
3-2 Source alimentaire : Certaines substances ingres sont utilises par lorganisme comme
antioxydants. Ce sont principalement : la vitamine C, la vitamine E, le slnium et le -
carotne.
La vitamine C ou acide ascorbique : Cest un puissant rducteur. Il joue un rle
important dans la rgnration de la vitamine E. Il est prsent dans les lgumes, le choux,
le poivron, les agrumes. (Colette, 2003).

La vitamine E ou tocophrol : prvient la peroxydation des lipides membranaires in vivo
en capturant les radicaux peroxyles. Elle est prsente dans les huiles vgtales, les noix,
les amandes, les graines, le lait, les ufs et les lgumes feuilles vertes (Ahmet, 2003).

O
CH
OH
CH
2
OH
O
OH HO
Acide ascorbique
Thse de Pharmacie
14
O
HO
H
3
C
CH
3
CH
3
CH
3
CH
3
CH
3

n-tocophrol

Le slnium : Cest loligo-lment le plus la mode pour ses proprits
antioxydantes avres. Jadis comme un toxique, ses effets bnfiques sur lorganisme ne
sont connus que depuis un quart de sicle. Il neutralise les mtaux toxiques (plomb,
mercure). Il aurait aussi une action prventive sur certains cancers (Ahmet, 2003)
Le -carotne : outre lactivit pro vitaminique A, possde la capacit de capter
loxygne singulet. Il est retrouv dans les lgumes verts, les pinards, la salade, les
carottes, labricot, le melon, la papaye et dautres fruits jaunes. (Ahmet, 2003).

-carotne

3-3 Antioxydants naturels :
En ce qui concerne les plantes mdicinales bien connues et conomiquement importants, nous
pouvons citer lail (Allium sativum L ; Liliaceae) et le ginkgo (Ginkgo biloba L ;
Ginkgoaceae) qui sont utiliss dans le traitement des maladies cardio-vasculaires et
circulatoires dues au vieillissement (Igor, 2002).
Les flavonoides :
Prsentes dans la plupart des plantes, les flavonoides sont des pigments polyphnoliques qui
sont responsable dans la plupart des colorations des fleurs et des fruits. Ils possdent de
nombreuses vertus thrapeutiques. Ils sont particulirement actifs dans le maintien dune
bonne circulation. Certains ont aussi des proprits anti-inflammatoires et anti virales,
dautres ont des effets protecteurs sur le foie.
Des flavonoides comme lhespridine et la rutine, prsentes dans plusieurs plantes, dont le
Sarrasin et le Citronnier, renforcent les parois capillaires et prviennent linfiltration dans les
tissus voisins.
Thse de Pharmacie
15
Les relations structure activits antioxydantes des flavonoides et des composs phnoliques
ont montr que lactivit antioxydante etait dtermine par la position et le degr
dhydroxylation (Igor, 2002).
O
O
HO
HO
OH
OH
HO OH

Morine

Les tanins :
Toutes les plantes en contiennent des degrs differents. Ce sont des composs
polyphnoliques qui permettent de stopper les hmorragies et de lutter contre les infections.
Les plantes riches en tanins sont utilises pour retendre les tissus souples, comme dans le cas
des veines variqueuses, pour drainer les scrtions excessives, comme dans la diarrhe et pour
rparer les tissus endommags par un eczma ou une brlure (Domart, 1981).
Ces tanins sont des donneurs de protons aux radicaux libres lipidiques produits au cours de la
peroxydation. Des radicaux tanniques plus stables sont alors forms, ce qui a pour
consquence de stopper la raction en chane de lauto oxydation des lipides (Cavin, 1999).

O
O C
O
O
-
OH
OH
OH
OH
OH
OH

Gallate dpigalocatchine

Les coumarines :
Les coumarines, de differents types, se trouvent dans de nombreuses espces vgtales et
possdent des proprits trs diverses.
Thse de Pharmacie
16
Ils sont capables de prvenir la peroxydation des lipides membranaires et de capter les
radicaux hydroxyles, superoxydes et peroxyles. Les conditions structurales requises pour
lactivit antiperoxydante des coumarines sont similaires celles signales pour les
flavonoides (Igor, 2002).
O O

Coumarine

Les phnols :
Il existe une trs grande varit de phnols, de composs simples comme lacide salicylique,
molcule donnant par synthse laspirine, des substances plus complexes comme les
composs phnoliques auxquels sont rattachs les glucosides. Les phnols sont anti-
inflammatoires et antiseptiques. On suppose que les plantes, en les produisant, cherchent se
prmunir contre les infections et les insectes phytophages. Les acides phnoliques, comme
lacide rosmarinique, sont fortement antioxydants et anti-inflammatoires et peuvent avoir des
proprits antivirales.
Parmi les drivs phnoliques, le resvratrol est le compos qui est le plus tudi. En effet, ce
stilbne, isol du raisin possde de fortes proprits antioxydantes (Igor, 2002).

OH
OH
HO

Resvratrol

Les xanthones :
Les proprits pharmacologiques reconnues des xanthones sont essentiellement : leur activit
antimicrobienne, leur cytotoxicit et surtout linhibition de la monoamine-oxydase (Sidib,
2003).
La manguifrine est une xanthone qui possde la proprit dinhibition envers la peroxydation
des lipides, ainsi que des proprits de capteurs de radicaux libres contre les anions super
oxydes (Anderson et al., 1996).
Thse de Pharmacie
17
O
O
OH
O
HO
HO Glc

Manguifrine

4 Quelques plantes activit antioxydante (Keta, 2002) :

Tableau n1 : Quelques plantes activit antioxydante

Plantes Partie utilise Famille
Diopyros abyssinica Hiem.f.W Feuilles Ebenaceae
Psorospermum guineense Spach. Feuilles Hypericaceae
Burkea africana Hook. corces tronc Caesalpiniaceae
Cussonia barteri Seenm. corces racines Ceasalpinaceae
Entada africana Guill et Perr. corces racines Mimosaceae
Lannea velutina Rich. Feuilles, corces (racines et tronc) Anacardiaceae
Guiera senegalensis J.F Gmel. Feuilles Combretaceae

Thse de Pharmacie
18
5 Mcanisme daction des antioxydants :
Les mcanismes daction des antioxydants sont divers, incluant le captage de loxygne
singulet, la dsactivation des radicaux par raction daddition covalente, la rduction de
radicaux ou de peroxydes, la complexation dions et de mtaux de transition.
Cet intrt a plusieurs origines ; en tant que constituants alimentaires, ces antioxydants
dorigine naturelle semblent contribuer de manire significative la prvention des maladies
telles que le cancer ou encore des maladies cardio-vasculaires.
6 Mthodes de tests antioxydants :
6-1 Test mesurant lactivit antioxydante contre le lysosome :
Principe : Dtection de lactivit antioxydante dune substance par oxydation des lysosomes
par le 2,2-azobis,2-amidino propane (Salvi, 1998).
6-2Test par CCM :
Rduction du radical 1,1 diphenyl-2-picrylhydrazyle :
Il sagit de dposer des extraits, fractions ou produits purs tester sur des plaques CCM de
gel de silice GF254 en aluminium et dveloppes dans les systmes appropris.
Aprs schage, gicler les plaques CCM avec une solution mthanolique 2mg/ml de DPPH.
Des activits antiradicalaires apparaissent sous de spots de couleur jaune-blanc sur fond
violet. Nous avons utilis ce test au cours de notre mthodologie pour dterminer lactivit
antioxydants (Cavin, 1999).
Test mesurant lactivit antioxydante au moyen de carotnodes :
Les plaques CCM sont prpares de la mme manire que pour le test du DPPH, puis gicles
avec une solution chloroformique 0.5mg/ml de -carotne. La plaque CCM est ensuite
expose sous une lampe UV 254 nm jusqu dcoloration de la plaque. Les zones
antioxydantes apparaissent en jaune sur fond blanc. Il faut faire particulirement attention aux
substances dj colores en jaune, car elles peuvent donner de faux positifs (Cavin, 1999).

Thse de Pharmacie
19

LINFLAMMATION :

1 Dfinition de linflammation :
Linflammation est un mcanisme de dfense qui contribue la restauration du sujet, mme si
elle peut parfois entraner des consquences dommageables (http://www.diffu-
sciences.com/pages/med_acces/encyclo/12_syst_immunitaire.html).Fvrier 2004
Elle peut tre aigu, subaigu ou chronique. Ce processus de dfense de lorganisme peut
parfois voluer de faon anormale et dclencher des maladies auxquelles on oppose des
mdicaments anti-inflammatoires pouvant tre conventionnels ou traditionnels.
2 Facteurs tiologiques :
Agents exognes :
Agents physiques : radiations, lectricit, froid, chaleur, piqre, coupure, contusion.
Agents chimiques : acide, base, substances minrales diverses.
Agents biologiques : microorganismes pathognes (virus, bactrie, parasite, champignon ) et
dautres agents comme le vin, le pollen et les toxines. (Dieng, 1993 ; Bayes, 1997).
Agents endognes :
Ce sont essentiellement les antignes, les auto-antignes, les complexes immuns circulants,
galement les cristaux forms dans les liquides biologiques (urates, cholestrol,) (Bayes,
1997).
3 Les phases de linflammation :
Classiquement, les mcanismes de linflammation peuvent tre groups selon la squence et
les manifestations cellulaires et tissulaires suivantes :
phase vasculaire et plasmatique :
Elle est caractrise par une vasodilatation artrielle entranant un rythme, un dgagement
de chaleur locale, une hyperesthsie.
Il se produit une altration des micro capillaires par relchement des cytokines et des
substances vasoactives (histamine, bradykinine, srotonine, prostaglandine, drivs du
complment) entranant lexsudation des cellules et du plasma vers les tissus.

Thse de Pharmacie
20
phase cellulaire :
La migration extra vasculaire (diapdse) des leucocytes et la libration de cytokines sont
lorigine de lactivation cellulaire et de la libration de mdiateurs. Ds lors une succession
dvnements au sein de la lsion inflammatoire entrane :
- la phagocytose dagents extrieurs
- la captation et la prsentation dantignes
- la production de radicaux libres
Les cytokines en outre agissent au niveau systmique pour augmenter la dfense de lhte
sous forme de fivre.
phase de rgnration :
Elle passe par :
Une dtersion ou limination de lagent causal et des dbris cellulaires et tissulaires du
foyer inflammatoire de faon interne (phagocytose, pinocytose) ; externe par les orifices
naturels ou par formation dabcs : artificielle (incision chirurgicale).
Une cicatrisation, celle-ci dpend de limportance de la perte de substances survenue la
phase aigu.
Le tissu conjonctif est construit de nouveau par la synthse de collagne, la multiplication
cellulaire (fibroblastes) et la nognse vasculaire partir des capillaires persistants ou
localiss en priphrie du site.
La surproduction de tissu conjonctif lors de la cicatrisation aboutit la formation de cicatrices
hypertrophiques et de chlodes, galement un dfaut de dtersion peut entraner une
persistance des phnomnes inflammatoires (chronicit) (Schorderet et coll.,1998 ; Haslett et
coll., 2000 ; Cohen, 1986).
4 Les cellules et mdiateurs de linflammation :
4-1 Les cellules :
Les polynuclaires neutrophiles : ils librent des protases, des protines cationiques,
les icosanodes. Ils prsentent des rcepteurs membranaires responsables de leurs
proprits dadhrence, de chimiotactisme, de migration, endocytose et phagocytose. Ces
polynuclaires neutrophiles sont phagocyts par le macrophage aprs leur mort sur le site.
Les phagocytes mononucls : les mononucls sont produites par la moelle osseuse.
Leur rle principal est ladsorption et la lyse dagents pathognes. Ils assurent galement
la prsentation des antignes aux lymphocytes, la rsorption de substances trangres et
Thse de Pharmacie
21
de dbris. Ils scrtent des cytokines, participent lagression tissulaire par la libration
de mtabolites de loxygnes, de protase.
Enfin ils participent la fibrinognse et au remodelage cellulaire par lapport de collagnase.
Les lymphocytes : ils naissent dans la moelle osseuse et se retrouvent dans le sang et les
tissus lymphodes.
Ils sont de deux types : les lymphocytes B qui par diffrenciation donnent naissance aux
plasmocytes, producteurs dimmunoglobulines et les lymphocytes T responsables de
limmunit mdiation cellulaire.
Les polynuclaires osinophiles : Ils librent les drivs de lacide arachidonique.
Les mastocytes : Ils contiennent de lhistamine.
Les cellules endothliales : Elles scrtent les cytokines, leur multiplication et leur
differenciation sont indispensables langiognse, facteur cl de rparation tissulaire.
Les fibrinoblastes : Ils librent la collagnase.
Les plaquettes : Elles constituent le lieu de stockage de la srotonine (Capron, 1998 ;
Diouf, 1991).
4-2 Mdiateurs de linflammation :
4-2-1 Mdiateurs cellulaires :
Les amines vasoactives : il sagit de :
* La srotonine, stocke dans les plaquettes sanguines et dans les cellules chromaffines de la
muqueuse intestinale libre, elle stimule les fibres lisses vasculaires et la disjonction des
cellules endothliales.
* Lhistamine, dont la premire source est les mastocytes, est libre par dautres cellules
comme les phagocytes ( polynuclaires neutrophiles et basophiles, macrophage ), les cellules
sanguines ( plaquettes, hmaties ). Elle est retrouve au niveau de lpiderme de la muqueuse
gastro-intestinale et du systme nerveux. Dans toutes ces cellules, lhistamine se trouve
stocke sous forme de complexes protiques inactifs car lie lhparine. Elle est libre lors
de la dgranulation des cellules phagocytaires et a des proprits chimiotactiques pour les
phagocytes ( Capron, 1998).
Les icosanoides : Ce sont des composs vingt acides amins drivs de lacide
arachidonique. Les uns sont de structure linaire, les leucotrines et les autres de structure
cyclique, les prostaglandines, prostacyclines et thromboxanes.
En rponse une perturbation physique ou chimique, il se produit une activation de la
phospholipase A
2
qui hydrolyse les liaisons esters des phospholipides membranaires et libre
des drivs de lacide arachidonique, ce dernier son tour est mtabolis selon deux voies :
Thse de Pharmacie
22
- La voie de la lipooxygnase qui le transforme en leucotrines.
- La voie de la cyclooxygnase qui le transforme principalement en
prostaglandines.
Les leucotrines augmentent la permabilit capillaire et exercent une chimioactivit sur les
polynuclaires.
Les prostaglandines produisent une vasodilatation locale, favorisent ldme et lafflux
leucocytaire, en outre, elles dpriment certains mcanismes immunitaires et potentialisent les
effets algognes de la bradykinine.
Les thromboxanes stimulent les mcanismes de lagrgation plaquettaire (Diouf, 1991)
Les cytokines : les monokines et lymphokines forment un groupe de protines jouant un
rle essentiel dans les communications intercellulaires et notamment entre les acteurs du
processus inflammatoire. Elles sont scrtes par les lymphocytes, les macrophages, les
fibroblastes, les cellules endothliales, les plaquettes et dautres types de cellules telles
que les cellules pithliales ( Capron, 1998).
Les cytokines pro inflammatoires sont essentiellement linterleukine (IL)-1 qui est produite
par les phagocytes mononucles sous l'influence de divers facteurs inducteurs. Son action
majeure est de promouvoir la scrtion de lIL-2 ; lIL-6 induit la scrtion danticorps par les
lymphocytes B, favorise la synthse par les hpatocytes des protines de linflammation
aigu ; lIL-8 favorise la chimiotaxie des neutrophiles ; tumor necrosis factor TNF.
Le PAF acether, phosphoglycride issu de la dgradation des phospholipides
membranaires, est vasodilatateur et augmente la permabilit capillaire.
4-2-2 mdiateurs plasmatiques :
Les kinines : polypeptides plasmatiques phlogognes, les kinines dont la plus active est la
bradykinine ont divers effets sur l'inflammation. La bradykinine entrane entre autre une
activation de la phospholipase A2, une irritation des fibres sensorielles au niveau
lsionnel, la bradykinine favorise en plus une vasoconstruction la base de la stase
intracapillaire ( Diouf, 1991).
Le systme du complment, intervient dans le phnomne inflammatoire comme dans
limmunit par lactivation des deux voies ( classique et alterne) et entraine la fixation sur
la particule cible de C3 responsable de lopsonisation et de C5, C6, C7 et C8 responsables
de la lyse avec libration de fragments peptidiques, les anaphylatoxines provoquant une
inflammation locale.
Thse de Pharmacie
23
Les facteurs de la coagulation, la fibrine qui sdimente dans le site de linflammation
la phase aigu est le rsultat de lactivation de la fibrinognse (Capron, 1998 ; Haslett et
coll., 2000).
5 Anti-inflammatoires :
5-1 Les anti-inflammatoires conventionnels :
Les anti-inflammatoires sont nombreux et appartiennent des familles de mdicaments
diffrents puisquon y trouve des analgsiques, des corticodes, des antihistaminiques (Yvan,
1997).
5-1-1 Anti-inflammatoires non strodiens (AINS) :
Ils forment un groupe htrogne de mdicaments qui agissent sur les consquences de la
raction inflammatoire quelle que soit son origine(Yvan, 1997).
5-1-1-1 Mode daction :
Le mode daction commun de tous les AINS est la diminution de la production de
prostaglandines du fait de linhibition de la cyclo-oxygnase.
Les prostaglandines sont directement impliques dans linflammation, la douleur et
lhyperthermie.
5-1-1-2 Classification (Marc et coll, 2001):
Les AINS sont regroups en plusieurs familles chimiques qui possdent certaines
particularits. On distingue ainsi :
- anti-inflammatoires indoliques : indomtacine (INDOCID
)
- anti-inflammatoires arylcarboxyliques : diclofenac (VOLTARENE
),
naproxne (APRANAX
)
- anti-inflammatoires oxicams : piroxicam (FELDENE
)
- anti-inflammatoires anthraniliques (fnamates) : acide niflumique
(NIFLURIL
)
- anti-inflammatoires pyrazols : phnylbutazone (BUTAZOLIDINE
)
- anti-inflammatoires salicyls : acide actylsalicylique (ASPIRINE
).
Lacide actylsalicylique (ASPIRINE
) ne possde des proprits anti-inflammatoires qu

fortes doses (3 6 g/j).
5-1-1-3 Contre-indication et surveillance :
Syndrome inflammatoire accompagnant un foyer infectieux non contrl,
Ulcre gastro-duodnal mme ancien,
Hmopathie,
Insuffisance cardiaque ou rnale,
Thse de Pharmacie
24
Grossesse et priode de lactation,
Porphyrie,
Faire un rgime sans sel pendant le traitement.

5-1-1-4 Effets secondaires :
Digestifs (gastralgies, nauses, vomissement)
Nerveux (cphales, vertiges)
Allergiques (ruption, asthme)
Rnaux (hmaturies isoles)
Sanguins (leucopnie et risque dagranulocytose).

Thse de Pharmacie
25
Quelques structures des AINS :

COOH
O C CH
3
O

N
CH
2
COOH
CH
3
C
O
H
3
OC

AAS (Aspirine
)
Indomtacine (Indocid
)

NH
Cl
Cl
CH
2
COOH

N
COOH
NH
CF
3

Diclofenac (Voltarene
) Acide niflumique (Nifluril
)

NH
COOH
CF
3 CH
3

H
2
C C
H
CH
H
3
C
H
3
C
CH
3
COOH

Acide mefenamique (Niflugel
) Ibuprofne (Tabalon
)
C
O
CH COOH
CH
3

N
N O
O C
4
H
9

Ketoprofne (Ketoderme
) Phenylbutazone (Butazolidine
)

Thse de Pharmacie
26
5-1-2 Les anti-inflammatoires strodiens : les glucocorticodes
les glucocorticodes sont reprsents par :
la cortisone et lhydrocortisone, produits naturels scrts par la corticosurnale ;
les produits synthtiques.
5-1-2-1 Mode daction :
Les corticodes agissent sur de nombreux mtabolismes et fonctions de lorganisme.
Ils augmentent la production de la lipocortine, inhibant ainsi la phospholipase A
2
donc la
libration de lacide arachidonique. Par contre ils diminuent fortement la migration des
polynuclaires, monocytes-macrophages vers le site de linflammation et la production
dautres mdiateurs comme lhistamine, la srotonine, la bradykinine, les cytokines, les ions
superoxydes.
5-1-2-2 Contre-indications :
Hypersensibilit au mdicament ;
Toute affection bactrienne et mycosique non contrle,
Affections rnales manifestation ophtalmique,
Ulcre gastro-duodnal volutif,
Cirrhose alcoolique avec ascite,
Vaccination par un vaccin vivant (Lechat, 1990 ; Coyen, 1990 ; Schorderet et coll., 1998 ).
5-1-2-3 Effets secondaires :
Troubles mtaboliques (hydrolectriques, glucide, lipide, protide)
Troubles gastro-intestinales : dyspepsie, ulcre ;
Troubles rnaux, calcul ;
Troubles hmatologiques : thrombose, hyper leucocytose, lymphopnie ;
Dficit musculo-squelettique : faiblesse, atrophie musculaire, ostoporose ;
Troubles dermatologiques ;
Troubles neuropsychiques : euphorie, troubles du sommeil, convulsion ;
Troubles ophtalmiques : augmentation de la pression rtinienne.

Thse de Pharmacie
27
Structures de quelques AIS de synthse et naturels :

O
H
3
C
C O
CH
2
OH
OH
CH
3
F
OH
HO

CH
3
C
CH
2
OH
O CH
3
O
HO
OH

Dexamethasone (DECADRON) Prednisone (CORTANCYL)

O
H
3
C
C O
CH
2
OH
OH
CH
3
HO

O
H
3
C
O
C O
CH
2
OH
OH
CH
3

HYDROCORTISONE Cortisone

O
F
H
3
C
OH
H
3
C
OH
C
CH
2
OH
CH
3
O

CH
3
C
CH
2
OH
O
OH
CH
3
O
CH
3
HO

Bethamethasone (CELESTENE) Methylprednisolone (MEDROL)

Thse de Pharmacie
28
5-2 Les anti-inflammatoires dorigine vgtale :
Quelques plantes anti-inflammatoires (Timbo, 2004) :
Tableau n2 : Quelques plantes activit anti-inflammatoire

Nom scientifique Famille Parties utilises
Annona senegalensis Pers. Annonaceae Racines et feuilles
Baissea multiflora ADC. Apocynaceae Rameaux feuills
Biophytum petersiannum Klotz Oxalidaceae Plante entire
Cola nitida (Vent),Shlott Sterculiaceae Coques
Combretum nigrans Lepr. Combretaceae Feuilles
Datura inoxia Mill. Solanaceae Feuilles
Guiera senegalensis J.F Gme Combretaceae corces de racines
Securidaca longipedonculata Fres. Polygalaceae corces de racines
Tamarindus indica L. Caesalpiniaceae Rameaux feuills
Balanites aegyptiaca L Balanitaceae Feuilles

Thse de Pharmacie
29

Phospholipase A
2
AIS

Cyclooxygnase AINS

Leucotrines Lypoxines prostaglandines Thromboxane A
2

LTB
4
LTC PGE
2
/PGF
2

PGD
2
/PGI
2
Prostacycline

LT :Leucotrine
PG : Prostaglandine

Figure n2 : Cascade arachidonique et site daction des anti-inflammatoires (Timbo, 2003).

6 Mthodes de tests anti-inflammatoires :
6-1 Gnralits :
Les mthodes dtude des anti-inflammatoires sont trs nombreuses. Aprs avoir cr
linflammation sur les animaux de laboratoire, les effets sur les diffrentes phases de
linflammation sont recherchs.
6-2 dme de la patte de rat :
Linjection de carragnine sous laponvrose plantaire de la patte postrieure de rat provoque
un dme dont on peut ralentir le dveloppement par un mdicament anti-inflammatoire
prventif (Winter et al., 1962).

Stimulus
Dsordre cellulaire
Phospholipides membranaires
Acide arachidonique/Acide dihomo-gamma linolnique
Hydroxyproxyde Endoproxydes
Thse de Pharmacie
30

6-3 Permabilit capillaire chez le lapin :
Lessence de trbenthine ou de lhuile de croton est applique sur la peau pile du lapin
albinos. Une exsudation plasmatique est mise en vidence par linjection intraveineuse de
bleu trypan ou de bleu Evans qui se lie aux protines plasmatiques. Ltendue de la tche bleu
cutane est proportionnelle la permabilit capillaire. Ltendue de la diffusion du bleu dans
la substance fondamentale du derme est rduite en prsence danti-inflammatoires (Coyen,
1981).
6-4 Erythme aux rayons ultraviolets chez le cobaye :
Il sagit dapprcier lintensit de la coloration rouge de la peau pile du dos du cobaye
soumis aux rayons ultraviolets, en absence puis en prsence danti-inflammatoires. Ce test
peut tre effectu sur la souris (Cohen, 1981).
6-5 Arthrite `a ladjuvant de Freud :
Il sagit de rduire par des substances anti-inflammatoires linflammation primaire et
linflammation secondaire provoques par injection intra-articulaire dans la patte postrieure
du rat de ladjuvant de Freud (suspension de bacilles tuberculeux tus) dterminant une
raction dmateuse qui se dveloppe immdiatement (inflammation primaire). La raction
immunitaire secondaire napparat pas chez tous les rats traits, ce qui rend dlicate la mise en
uvre de cet essai (Cohen, 1981).
6-6 Linflammation locale de loreille :
Linflammation de loreille de rat, provoque par lapplication locale dhuile de croton peut
tre rduite par lapplication locale de substances anti-inflammatoires (Rainsford, 1984).

Thse de Pharmacie
31

NOTION DE TOXICITE

1 Toxicit par administration unique : Toxicit aigu
Elle se manifeste rapidement, voire immdiatement, aprs une prise unique ou court terme
aprs plusieurs prises rapproches.
Cest ltude qualitative et quantitative des phnomnes toxiques quil est possible de
rencontrer aprs administration unique de la ou des substances actives contenues dans le
mdicament. Cette tude dcrit les symptmes observs, y compris les phnomnes locaux et
fournit pour autant que cela est possible, lindication de la DL
50
avec ses limites de confiance
(95%). Ltude sur lanimal de laboratoire doit tre effectue sur un nombre gal danimaux
mles et femelles. La dure de lobservation des animaux est prcise par lexprimentateur.
En gnral elle nest pas infrieure une semaine (Ruckebusch, 1981).
Ltude de la toxicit aigu permet dexprimer la dose qui tue 50% des animaux dexprience
(DL
50
) ainsi que la dose maximale sans effet toxique (DME) cest dire la dose la plus leve
pour laquelle aucun effet toxique nest relev par rapport au lot tmoin (TRAORE, 1999).
2 Toxicit par administration ritre : toxicit sub-aigu et chronique :
Ces preuves ont pour objet de mettre en vidence les altrations fonctionnelles et/ou
pathologiques conscutives aux administrations rptes de la substance active examine et
dtablir les conditions dapparition de ces altrations en fonction de la posologie. Les
exprimentations se font sur deux espces de mammifres dont une non-rongeur. Une des
deux preuves durera 2 4 semaines, lautre 3 6 mois. Le choix de la ou des voies
dadministration doit tenir compte de la voie pour lemploi thrapeutique et des possibilits de
rsorption. Le mode et le rythme des administrations ne sont pas codifis strictement mais
doivent tre clairement indiqus ainsi que la dure des essais. Il est utile de choisir la dose la
plus leve de faon faire apparatre des effets nocifs, les doses infrieures permettent alors
de situer la marge de tolrance du nouveau produit chez lanimal. Lapprciation des effets
toxiques est faite sur la base de lexamen du comportement, de la croissance, de la formule
sanguine et des preuves fonctionnelles particulirement celles qui se rapportent aux organes
extrieurs ainsi que la base des comptes rendus ncropsiques, accompagns des examens
histologiques qui sy rattachent (Ruckebusch, 1981).

Thse de Pharmacie
32

3 Dtermination de la dose ltale 50 : DL
50

3-1 Dfinition : La DL
50
est la dose dune substance chimique, qui administre des animaux
de laboratoire provoque la mort de la moiti dentre eux (Fan, 2003).
3-2 Diffrentes mthodes de dtermination :
Mthode de Dragstedt et Lang
Mthode de Karber et Behrens
Mthode de Miller et Tainter
Mthode de Wilcoxon
3-2-1 Mthode de Dragstedt et Lang :
Deux postulats :
. Tout animal ayant survcu une dose donne aurait survcu toute dose infrieure celle-ci
si elle lui avait t injecte.
. Tout animal ayant succomb une dose dtermine aurait succomb nimporte laquelle
des doses suprieures si elle lui avait t administre.
On peut ainsi pour chaque dose de la substance, totaliser tous les morts dj observs aux
doses infrieures et tous les vivants encore observs aux doses suprieures. Elle permet de
calculer le pourcentage de mortalit chaque dose sur un plus grand nombre danimaux que
celui qui a rellement reu cette dose. On fait ensuite la courbe reprsentant les pourcentages
de mortalit en fonction de la dose. Si au voisinage de la DL
50
la courbe est une droite, on
pourra dterminer ce point daprs lquation de la courbe en utilisant la formule suivante :

50 (X
2
-X
1
) + X
1
Y
2
Y
1
X
2
DL
50
=
Y
2
Y
1

X
2
: dose suprieure encadrant la DL
50

X
1
: dose infrieure encadrant la DL
50
Y
1
: pourcentage de mortalit correspondant X
1
Y
2
: pourcentage de mortalit correspondant X
2

Thse de Pharmacie
33

3-2-2 Mthode de Karber et Behrens :
Principe : On administre des doses croissantes de substance des lots de souris de masses
uniformes.
La dose administre est exprime en mg/ kg de masse corporelle.
La diffrence entre les doses voisines doit tre constante.
Pour chaque lot, on note le pourcentage de mortalit dans lheure qui suit ou au bout du temps
imparti.
La DL
50
est obtenue par la formule :

S(a.b)
DL
50
= DL
100
- (Karber et Behrens, 1935)
n

DL
100
: la plus petite dose tuant tous les animaux
a = la moyenne de la somme des morts deux doses conscutives
b = la diffrence entre deux doses successives
n = nombre danimaux utiliss par lot
. Manipulation :
- peser chaque animal
- administrer un volume correspondant de solution
- aprs chaque administration, marquer lanimal suivant le code indiqu
- suivre le comportement des animaux et noter les symptmes observs
- relever le nombre de morts au bout du temps imparti.
3-2-3 Mthode de Miler et Tainter ( Valette, 1972) :
On dispose dun papier logarithme-probabilit sur lequel on porte en abscisse (chelle
logarithme) les doses et en ordonne (chelle probits) les pourcentages de mortalit.
En gnral il se trouve dans chaque srie dessai une dose assez faible pour laisser en survie
tous les animaux et une dose assez leve pour tuer tous les animaux dans les lots assigns
respectivement chacune des doses. Pour ces deux rsultats, la valeur des probits est
infiniment grande. On convient alors suivant la suggestion de Bartlett, de remplacer 0 par
0,25 au numrateur de la fraction 0/n reprsentant le rsultat obtenu avec la <<dose maximum
supporte>> (aucun animal mort sur les n animaux employs) et de mme de remplacer n par
Thse de Pharmacie
34
n-0,25 au numrateur de la fraction n/n qui reprsente le rsultat obtenu avec la dose 100%
mortelle.
Les deux points dfinis par ces coordonnes sont inscrits sur le graphique en regard des doses
correspondantes. On trace alors vue une droite de rgression provisoire sajustant au
mieux avec les points exprimentaux et les deux rsultats de la correction effectue ci-dessus
pour les pourcentages 0 et 100%. Ce faisant, on accordera une valeur plus grande aux points
situs au voisinage du pourcentage 50 (probits = 5) qu ceux qui ont des coordonnes
suprieures 84 (probits = 6) ou infrieures 16 (probits = 4). Le point correspondant au
pourcentage 100 doit tre situ au-dessus.
La dose DL
50
est alors lue directement sur labscisse du point dordonne 50 pour lestimation
de lcart type de la DL
50
, on lit sur le graphique les doses correspondant respectivement
16% et 84% de mortalit (probits 4 et 6) ; en soustrayant le premier du second, on obtient la
valeur 2 S qui est laccroissement de dose ncessaire pour accrotre de 2 probits la rponse.
Lcart type approch est donn par :
2S
E =
2 N

N tant le nombre total danimaux dans les groupes qui ont donn des pourcentages de
mortalit compris entre 6,7 et 93,3% ( soit en probit : 3,5 et 6,5).
3-2-4 Mthode de Litchfield et Wilcoxon (Dupont, 1970) :
Principe : La mthode de Litchfield et Wilcoxon permet, grce lutilisation dun test de
signification statistique, appel X
2
( ki deux) de Pearson, de tracer la droite de rgression
dose-mortalit dune faon simple, les deux valeurs : DL
50
et intervalle de confiance sur la
DL
50.
Mthode

:
Dans un tableau de 6 colonnes, noter les valeurs suivantes :
Premire colonne(di) : donnes exprimentales
Soit K le nombre de doses choisies et n = K 2 le nombre de degrs de libert.

Deuxime colonne : ri/ni Nombre danimaux morts
Nombre danimaux tests

Thse de Pharmacie
35
Troisime colonne : pourcentage de rponse (100 pi) correspondant chaque dose. Sur papier
logarithmique-probabilit, noter chacun des points (100 pi) pour chaque dose (di), en ne
tenant pas compte des effets 0 et 100%. Tracer une droite passant au mieux travers tous les
points.
Quatrime colonne : les pourcentages thoriques (100 p) sont lus sur la droite trace, pour
chaque dose teste.
Cinquime colonne : noter la contribution au X
2
qui peut tre calcule par la formule :

(pi p)
2

X
2
=
Pi (1 p)
Le nomogramme I de Litchfield et Wilcoxon donne trs simplement la contribution au
X
2
: la droite passant par les valeurs correspondantes de pi et (pi p) coupe la ligne situe
droite en un point qui est la contribution au X
2
pour un p donn.

Faire la somme des differentes valeurs inscrites dans cette sixime colonne.
N
Pour obtenir une valeur approche du X
2
, on multiplie la somme prcdente par K soit X
2
0

le rsultat obtenu. Relever dans la table de valeur de X
2
0,05
pour le nombre n de degrs de
libert. Comparer X
2
0,05
et X
2
0
. Deux cas sont disponibles :
X
2
0
< X
2
0,05

On peut admettre que la droite trace est bien ajuste aux donnes exprimentales.
X
2
0
> X
2
0,05

Il faut essayer de diminuer X
2
0
en traant une autre droite plus proche des conditions de
lexprience.
Dans le cas favorable o X
2
0
X
2
0,05
relever sur la droite, la valeur de la DL
50
.

Thse de Pharmacie
36

TRAVAUX
PER8ONNEL8
Thse de Pharmacie
37
1-Matriels :
1-1 Matriel vgtal :
Le matriel vgtal est constitu par les feuilles de S. guineese, collectes le 24 janvier 2004
Blendio. Un spcimen est dpos lherbier du DMT.Les feuilles fraiches ont t
pralablement broyes laide dun mortier traditionnel avant schage.
Le schage a t effectu lombre la temprature ambiante au DMT. Aprs schage, les
feuilles ont t piles au mortier traditionnel pour obtenir une poudre grossire, puis rduite
en poudre fine laide dun broyeur hlice type Retsch SM 2000. Nous avons obtenu une
poudre fine de couleur gris verdtre claire. Cest cette poudre que nous avons utilis pour nos
investigations phytochimiques et pharmacologiques.
1-2 Matriel technique :
Balance analytique de prcision type Sartorius
Mortier et pilon
Moulin Retschde type S.M 2000/1430upm
Ballons
Erlenmeyer
Fioles
Becher
Eprouvettes gradues
Entonnoirs en verre
Papiers filtres wattman
Baguette dagitation
Agitateur magntique
Rotavapor vacuum Rotary evaporator type 349/2
Lyophilisateur Heto-Drywinner Model DW 1,0-60
E
Plaque de silicagel G
60
F
254
Cuves avec couvercle
Crayon de papier
Flacons
Lame
Pipettes et micro pipettes
Pinces
Pulvrisateurs
Thse de Pharmacie
38
Lampe UV (254 ; 366 nm)
Schoir
Rgle gradue
Ampoule dcanter
Les rvlateurs (ractifs de Godin, AlCl
3
, Dragendorff)
Solvants
Eau distille
Acide sulfurique
Mthanol
Ethanol 80
Buthanol
Acide actique
Chloroforme
1-3 Matriel animal :
. Souris : Nous avons travaill sur des souris mles et femelles de masse comprise entre 18 et
27 g.
Cest une souche non consanguine qui a t slectionne partir dune ligne de souris
prsentant des caractristiques de vigueur et de rproductivit appele CF1 (Carworth Farms
Souche1) et qui a pris le nom de OF1 (Oncins France Souche 1).
Elles ont t fournies par le Centre National dAppui la lutte contre la Maladie.
2- Etude phytochimique :
2-1 Ractions de caractrisation en tubes :
Il est indispensable de connatre la composition des plantes pour comprendre comment elles
agissent sur lorganisme.
2-1-1 Les Alcalodes : les Alcalodes forment un groupe important de substances naturelles
dintrt thrapeutique par leur diversit structurale et lventail de leurs activits
pharmacologiques. Ce sont des substances organiques azotes, proprits basiques et
prsentant une forte activit pharmacologique.
Solution analyser :
Nous avons introduit de la poudre vgtale (10 g) dans un erlenmeyer de 250 ml laquelle
nous avons ajout 50 ml de H
2
SO
4
dilu au 1/10 (50 ml).
Ce mlange a t agit et macr pendant 24 heures la temprature ambiante du laboratoire.
Nous avons filtr sur papier lav leau distille de manire obtenir environ 50 ml de filtrat.
Thse de Pharmacie
39
Caractrisation :
Nous avons effectu une caractrisation par prcipitation en nous servant dun tmoin quest
la strychnine (alcalode extrmement toxique extraite du Strychnos nux vomica). Elle peut tre
administre petites doses comme stimulant du nerf et du muscle.
Prendre 4 tubes essai et introduire 1 ml de filtrat dans chacun des deux premiers et 1 ml de
strychnine dans chacun des deux autres.
Ajouter dans les tubes 1 et 3 ; 5 gouttes de ractif de Mayer, ensuite dans les tubes 2 et 4 ; 5
gouttes de ractif de Dragendorff.
Les rsultats ont t classs comme suit :
Prcipit abondant : + + +
Prcipit moyen : + +
Prcipit louche : +
2-1-2 Les substances polyphnoliques :
Les substances polyphnoliques constituent un groupe trs variable difficile dfinir. La
prsence dau moins un noyau benznique auquel est directement li un groupement
hydroxyle est fondamentale pour la structure de ce groupe.
Solution analyser : Nous avons introduit de la poudre sche (5 g) dans de leau distille
bouillante (100 ml) contenue dans un erlenmyer de 250 ml.
Nous avons arrt lbullition et ferm avec un verre de montre; aprs infusion pendant 15 mn
(infus 5%) ; nous avons filtr sur papier et rinc avec un peu deau chaude de manire
obtenir 100 ml de filtrat.
Caractrisations :
Tanins : Ce sont des esters du glucose ou de lacide gallique. Les proprits biologiques de
ces tanins sont en relation avec leur pouvoir de former des complexes avec les
macromolcules, en particulier les protines.
Nous avons introduit dans un tube essai 5 ml dinfus 5% ; puis nous avons ajout 1 ml
dune solution aqueuse dilue de FeCl
3
1%.
En prsence de tanins il se dveloppe une coloration verdtre ou bleu noirtre.
Pour caractriser la prsence de tanins catchiques, nous avons ajout 1 ml dacide
chlorhydrique concentr 5 ml dinfus 5%, puis port lbullition pendant 15 mn ensuite
filtr sur papier.
En prsence de tanins catchiques, il y a formation dun prcipit rouge soluble dans lalcool
amylique.
La diffrenciation des tanins (catchiques et galliques) est obtenue par la raction de Stiasny :
Thse de Pharmacie
40
A 30 ml dinfus 5%, nous avons ajout 15 ml de ractif de Stiasny (10 ml de formol 40%
plus 5 ml HCl concentr) et chauff au bain-marie 90C pendant 15 mn.
Lobtention dun prcipit montre la prsence de tanins catchiques. Filtrer et saturer le filtrat
dactate de sodium pulvris. Ajouter 1 ml dune solution de FeCl
3
1%. Le dveloppement
dune teinte bleu noire indique la prsence de tanins non prcipits par le ractif de Stiasny :
ce sont les tanins galliques.
flavonodes : Ce sont des pigments universels des vgtaux responsables de la coloration
des fruits, des fleurs et parfois des feuilles.
A 5 ml dinfus prsentant une coloration plus ou moins fonce ; ajouter 5 ml dacide
sulfurique puis 5 ml de NH
4
OH.
Si la coloration saccentue par acidification puis vire au bleu violac en milieu basique, on
peut conclure la prsence danthocyane.
La raction la cyanidine : Introduire dans un tube essai 5 ml dinfus, ajouter 5 ml
dalcool chlorhydrique (alcool 95, eau distille, HCl concentr parties gales en volume) ;
1 ml dalcool iso amylique puis quelques copeaux de magnsium. Il se produit une raction de
crpitation pendant quelques minutes.
Lapparition dune coloration rose orange (flavones) ou rose- violace (flavanones) ou rouge
(flavonones, flavanonols) rassemble dans la couche surnageante dalcool iso amylique
indique la prsence dun flavonode libre (gnine).
Les colorations sont moins intenses avec les htrosides flavoniques.
La raction est ngative avec les chalcones, les dihydrochalcones, les aurones, les catchines
et les isoflavones.
Effectuer la raction la cyanidine sans ajouter de copeaux de magnsium et chauffer
pendant 15 mn au bain-marie.
En prsence de leucoanthocyane, il se dveloppe une coloration rouge cerise ou violace ; les
catchols donnent une teinte brun-rouge.
2-1-3 Drivs anthracniques : Les drivs anthracniques appartiennent au groupe des
quinones. Ils se caractrisent par leur pouvoir oxydant lev.
Solution analyser :
Extraits chloroformiques : A 1 g de drogue en poudre, ajouter 10 ml de chloroforme et
chauffer prudemment au bain-marie pendant 3 mn, filtrer chaud et complter 10 ml si
ncessaire.
Hydrolyst : A une partie du rsidu de la poudre puise par le chloroforme, ajouter 10 ml
deau distille et 1 ml dacide chlorhydrique concentr. Maintenir le tube essai dans le bain-
Thse de Pharmacie
41
marie bouillant pendant 15 mn. Refroidir sous un courant deau et filtrer. Complter 10 ml
avec leau distille.
Caractrisation :
Drivs anthracniques libres :
Introduire dans un tube essai 1 ml dextrait chloroformique, ajouter 1 ml de NH
4
OH dilu
puis agiter ; la coloration plus ou moins rouge indique la prsence danthraquinones libres.
Drivs anthracniques combins :
O-Htrosides :
Prlever 5 ml dhydrolyst et agiter avec 5 ml de chloroforme, soutirer la phase organique et
lintroduire dans un tube essai, ajouter 1 ml de NH
4
OH dilu. Agiter, la prsence
danthraquinones est rvle par la coloration rouge plus ou moins intense. Si la raction est
ngative ou faiblement positive, rechercher les O-htrosides gnine rduite.
Prlever 5 ml dhydrolyst et ajouter 3 4 gouttes de FeCl
3
10 %, chauffer pendant 5 mn au
bain-marie. Refroidir, agiter avec 5 ml de chloroforme. Soutirer la phase chloroformique et
lintroduire dans un tube essai, ajouter 1 ml de NH
4
OH dilu et agiter. En prsence de
produits doxydation des anthranols ou anthrones, la coloration rouge est plus intense que
prcdemment.
C-htrosides :
Reprendre la phase aqueuse qui a t conserve au cours de la caractrisation des O-hrosides
par 10 ml deau distille et ajouter 1 ml de FeCl
3
10%. Maintenir le tube essai dans un
bain-marie bouillant pendant 30 mn, refroidir
et agiter avec 5 ml de chloroforme, soutirer la phase chloroformique dans un tube essai.
Ajouter 1 ml de NH
4
OH dilu et agiter. Une coloration rouge plus ou moins intense indique la
prsence de gnines de C-htrosides.
2-1-4 Strols et triterpenes :
Solution analyser : Introduire dans un tube essai 1 g de poudre et 20 ml dther. Boucher,
agiter et laisser au refrigirateur pendant 24 heures ; puis filtrer sur papier filtre , ensuite
complter 20 ml avec de lther.
Caractrisation :
Raction de Liebermann-Buchard :
Evaporer jusqu sec dans une capsule 10 ml dextrait chloroformique, dissoudre le rsidu
dans 1 ml danhydride actique plus 1 ml de CHCl
3
. Recueillir dans deux tubes essai, lun
servira de rfrence. A laide dune pipette, dposer 1 2 ml de H
2
SO
4
concentr au fond du
tube essai, ne pas agiter. A la zone de contact des deux liquides il y a formation dun anneau
Thse de Pharmacie
42
rouge bruntre ou violet, la couche surnageante devenant verte ou violette rvle la prsence
de strols et de triterpnes.
Caractrisation chimique des carotnodes :
Evaporer 5 ml dextrait chloroformique dans une capsule, ajouter 2 3 gouttes de solution
sature de SbCl
3
dans le chloroforme ou dans CCl
4
. Il se dveloppe une coloration bleue
devenant rouge par la suite en cas de raction positive.
2-1-5 Htrosides cardiotoniques :
Solution analyser :
Introduire 1 g de poudre dans un tube essai, ajouter 10 ml dthanol 60 et 5 ml dune
solution dactate neutre de Pb 10%. Porter au bain-marie bouillant pendant 10 mn, filtrer
sur coton.
Caractrisation :
Agiter le filtrat avec 10 ml de CHCl
3
( en vitant la formation dmulsion). Laisser dcanter,
soutirer la phase chloroformique et la partager entre 3 tubes essai. Evaporer au bain-marie
bouillant sec, reprendre les rsidus par 0.4 ml disopropanol. Ajouter dans les 3 tubes :
-tube n1 : 1 ml de raction de Baljet
-tube n2 : 1 ml de ractif de Kedde
-tube n3 : 1 ml de ractif de Raymond-Marthoud
Puis introduire dans chacun des 3 tubes 4 gouttes de KOH 5% dans lalcool. En cas de
raction positive il se dveloppe les colorations suivantes :
-tube n1 : orange
-tube n2 : rouge violace
-tube n3 : violet fugace
2-1-6 Saponosides :
Solution analyser : Introduire 1 g de poudre dans un erlenmeyer de 250 ml. Ajouter 100 ml
deau distille. Maintenir bullition pendant 15 mn. Filtrer et aprs refroidissement ajuster
100 ml.
Caractrisation :
Dans une srie de 10 tubes essai numrots de 1 10, introduire successivement 1,2,3,,10
ml de dcoct. Ajuster le volume de chaque tube 10 ml avec de leau distille.
Agiter chaque tube dans le sens de la longueur du tube pendant 15 secondes raison de 2
agitations par seconde en maintenant le tube ferm laide du pouce. Laisser reposer 15 mn et
mesurer la hauteur de la mousse. Si celle ci est infrieure 1 cm dans tous les tubes lindice
Thse de Pharmacie
43
est moins de 100. La dilution dans le tube o la hauteur de la mousse est gale 1 cm
reprsente lindice recherch.
Si la hauteur de la mousse est suprieure 1 cm dans les tubes, dans ce cas il est ncessaire de
prparer une nouvelle srie de dilution de la dcoction et recommencer le processus de
dtermination.
100
Indice de mousse =
n du tube

2-1-7 Recherche de stupfiants : les ttrahydrocannabinols
Peser 0.5 g de poudre et lintroduire dans un tube essai. Ajouter 5 ml dther de ptrole et
agiter pendant 15 mn.
Dcanter la phase thro-ptrolique dans une capsule.
Evaporer sec au bain-marie.
Ajouter 3 4 gouttes de KOH 5 % dans lalcool. La coloration violette indique une raction
de Beam positive.
2-1-8 Autres caractrisations :
Composs rducteurs :
Introduire 5 ml de dcoct aqueux dans une capsule puis vaporer au bain-marie jusqu sec.
Au rsidu ajouter 1 ml de ractif de Fehling (0.5 ml de ractif A + 0.5 ml de ractif B,
mlange extemporan).
Lobtention dun prcipit rouge brique indique la prsence de composs rducteurs.
Oses et holosides :
Introduire 5 ml de dcoct aqueux 10 % dans une capsule et vapore sec au bain-marie.
Ajouter au rsidu 2 3 gouttes de H
2
SO
4
concentr. Aprs 5 mn ajouter 3 4 gouttes dalcool
satur avec du thymol. Le dveloppement dune coloration rouge rvle la prsence doses et
holosides.
Mucilages :
Introduire 1 ml de dcoct aqueux 10 % dans un tube essai et ajouter 5 ml dalcool
absolu, attendre 10 mn.
Lobtention dun prcipit floconneux par mlange, indique la prsence de mucilage.
Coumarines :
Evaporer 5 ml dextrait thrique (macration pendant 24 heures) dans une capsule lair
libre. Ajouter au rsidu 2 ml deau chaude. Partager la solution entre 2 tubes et ajouter au
Thse de Pharmacie
44
contenu de lun des tubes 0,5 ml de NH
4
OH 25%, mlanger et observer la fluorescence sous
UV 366 nm. Une fluorescence intense dans le tube o il a t ajout du NH
4
OH indique la
prsence de coumarines, lautre tube sert de tmoin.
2-2 Dosage de leau :
Les plantes fraches renferment 60 80% deau. Pour assurer une bonne conservation, la
teneur en eau doit tre infrieur ou gale 10% (Paris et Moyse, 1965).
Nous avons utilis deux mthodes de dosage : la mthode gravimtrique ou pondrale et la
mthode par entranement azotropique.
2-2-1 Mthode gravimtrique ou pondrale :
Cest la dtermination de la perte de masse par dessiccation ltuve. Celle-ci concerne
lchantillon broy et se droule dans des conditions bien dfinies.
Matriel :
-une balance analytique de prcision, type Sartorius.
-une tuve MEMMENT la temprature de 103C plus ou moins 2
-une spatule et une pince mtallique
-cinq capsules en verre
-un dessiccateur.
Mode opratoire :
Oprer en utilisant cinq verres de montre pralablement chauffs et les peser aprs
refroidissement. La masse du verre de montre vide reprsente la tare. Prendre 2 5 g de
poudre qui sont placs dans les diffrents verres.
Peser les verres de montre pour obtenir la masse totale avant ltuvage. Placer les cinq verres
de montre dans ltuve 103C pendant 24 heures. Peser ensuite pour obtenir la masse aprs
tuvage. Calculer donc laide de ces donnes, le pourcentage deau en sachant que :
Masse drogue essai = Masse totale avant tuvage tare
Masse eau = Masse totale avant tuvage Masse totale aprs tuvage

Masse eau x 100
Pourcentage deau =
Masse drogue essai

Nous avons considr la moyenne des cinq prises dessai pour dterminer la teneur en eau de
notre chantillon par la mthode pondrale.
Thse de Pharmacie
45
2-2-2 Mthode par entranement azotropique :
Dans ce cas, leau est entrane, par distillation dans un solvant non miscible mais qui forme
avec elle un mlange azotrope une temprature dbullition constante. Aprs condensation
par rfrigration des vapeurs de lazotrope, leau se spare et est mesure en volume.
Matriel et Ractif :
Lappareillage ncessite un ballon de 250 ml, un rfrigrateur reflux et un tube gradu reli
au rfrigrant. Nous avons utilis 100 ml de xylne comme solvant et 1 ml deau distille
(introduite dans le xylne).
Mode opratoire :
Faire bouillir cet ensemble
2-3 Dosage des cendres :
2-3-1 Cendres totales :
Matriels :
Balance analytique de prcision type Sartorius
Etuve MEMENT
Pince et spatule mtallique
Creuset en quartz
Four lectrique rgl 600C
Mode opratoire :
Cest une mthode pour mesurer la quantit de substances rsiduelles non volatilises lorsque
lchantillon de drogue est compltement calcin.
Introduire une prise dessai de 1 5 g de poudre dans un creuset de quartz pralablement tar.
Calciner 600C au four moufle, laisser refroidir et peser.
Calcul
Masse drogue essai = masse avant calcination - tare
Masse cendres = masse aprs calcination tare

Masse cendre x 100
Pourcentage cendres totales =
Masse drogue essai
2-3-2 Cendres insolubles dans HCl 10% :
Ce sont les rsidus obtenus aprs traitement des cendres totales par HCl, cest dire les
sables qui peuvent souiller les drogues mal laves ou mal tries.
Thse de Pharmacie
46
Ajouter dans un creuset en silice, 20 ml dHCl 10% aux cendres totales obtenues. Les
mlanger dans un erlenmeyer, puis chauffer au bain-marie pendant 10 mn. Filtrer sur un
papier filtre sans cendres. Laver le rsidu insoluble leau trs chaude. Incinrer le filtre
sch et le rsidu insoluble dans un four 600C jusqu poids constant. Laisser refroidir et
peser. Lorsque la teneur est trs leve, la drogue est mal entretenue. Les calculs se font
comme pour les cendres totales.

Masse cendres x100
Pourcentage des cendres =
Masse drogue essai
2-3-3 Cendres sulfuriques :
Cest une mthode dvaluation des substances inorganiques de la drogue vgtale. Les
cendres sulfuriques sont obtenues aprs une attaque de la drogue par lH
2
SO
4
. La teneur est
dtermine par dosage pondral des sulfates non volatils obtenus par calcination de la matire
vgtale pralablement traite avec H
2
SO
4
dilu 50%. Les sulfates rsultent de la conversion
des sels organiques.
Nous avons introduit la prise dessai (P.E) dans un creuset en platine pralablement tar. La
prise dessai est mouille avec une quantit suffisante de H
2
SO
4
dilu au demi, triture avec
une baguette.
Nous avons plac le creuset ltuve jusqu vaporation sec puis au four jusqu obtention
des cendres. Il est refroidi dans un dessiccateur, sa masse est dtermine (P).
La masse de cendre sulfurique de la prise dessai est : S = P - T

S x 100
La teneur en cendre sulfurique =
P
S = masse de cendre sulfurique de la prise dessai,
P = masse en g de la prise dessai,
T = tare du creuset,
P = masse en gramme du creuset aprs calcination.

Thse de Pharmacie
47
2-4 Substances extractibles :
2-4-1 Substances extractibles par lthanol 80% :
Introduire dans un erlenmeyer 1 g de poudre puis 20 ml dthanol 80% ; laisser macrer
pendant 24 heures la temprature du laboratoire du DMT aprs avoir fermer laide dun
verre de montre. Filtrer avec du papier filtre. Peser le bcher vide (n).
Mettre le filtrat dans ce bcher, vaporer sec et peser le bcher avec le rsidu (n).
(n n) x 100
Substance extractible par lthanol 80% =
P.E (Prise dEssai)
2-4-2 Substances extractibles par leau :
Introduire dans un ballon 1 g de poudre et 20 ml deau distille. Faire une dcoction pendant
15 mn.
Laisser refroidir pendant 20 mn. Filtrer sur du papier filtre.
Peser une capsule vide (n)
Mettre le filtrat dans cette capsule. Evaporer sec.
Peser la capsule avec le rsidu (n)
(n n) x100
Substances extractives par leau =
P.E (Prise dEssai)
2-5 Extractions :
Principe : La dtermination des extraits est une mthode destine mesurer la quantit des
composs ou substances pouvant tre extraites par un solvant dans des conditions spcifiques.
Matriels : Ballon de 3000 ml, erlenmeyer, entonnoirs, prouvette, baguettes magntiques,
agitateurs, thermomtre, ballons, papier filtre, tissu percale.
Appareillage : balance de prcision type Sartorius, bain-marie, Rotavapor de type Bchi R-
200, conglateur.
Types : Nous avons utilis des mthodes dextraction froid et des mthodes dextraction
chaud.
2-5-1 Mthodes dextraction chaud :
2-5-1-1 Dcoction 10% :
Introduire 200 g de poudre de feuilles sches dans un ballon. Ajouter 2000 ml deau distille.
Faire bouillir dans un bain-marie pendant 3 heures. Filtrer aprs refroidissement. Le filtrat a
t concentr au Rotavapor une temprature comprise entre 40-50C pour tre lyophiliser.
Les extraits lyophiliss ont t rcuprs dans des flacons et conservs.
Thse de Pharmacie
48

Figure n3: Schma de dcoction de poudre de feuilles de Syzygium guineense.

2-5-1-2 Digestion 50C :
A 100g de poudre nous avons ajout 1000 ml deau distille dans un ballon de 3000 ml.
Lensemble est port au bain-marie 50C pendant 3 heures. Aprs refroidissement et
filtration le filtrat est concentr au rotavapor puis lyophilis.

Figure n4: Schma de digestion de poudre de feuilles de Syzygium guineense

2-5-2 Mthodes dextraction froid :
2-5-2-1 Macration par leau :
A 50 g de poudre nous avons ajout 500 ml deau distille. Nous avons laiss sous agitation
magntique, pendant 72 heures. Chaque jour nous avons filtr et le marc a t repris de

200g de poudre
de feuilles
Marc
Extrait
aqueux
Eau 100
o
C, 3h

100g de poudre
de feuilles
Extrait
aqueux
Marc
Eau 50
o
C,3h
3h
Thse de Pharmacie
49
nouveau avec 500 ml deau distille et cela pour (3x 500 ml). Les filtrats ont t concentrs au
Rotavapor et lyophiliss.

Figure n5 : Schma de macration par leau de la poudre de feuilles de Syzygium guineense.

2-5-2-2 Macration par lthanol :
Le procd est le mme que pour la macration avec de leau. Le solvant utilis a t lthanol
80%.

Figure n6: Schma de macration par lthanol de poudre de feuilles de Syzygium
guineense.
2-5-2-3 Macration par le chloroforme :
A 50 g de poudre de feuilles de Syzygium guineense, nous avons ajout 500 ml de
chloroforme dans un erlenmeyer. Le mlange a t mis sous agitation magntique pendant
72heures et nous avons repris lopration avec la mme quantit de chloroforme. Aprs

50g de poudre
de feuilles
Extrait
aqueux
Marc
500ml H
2
O, 3x24h

50g de poudre
de feuilles
Extrait
thanolique
Marc
Ethanol 80%, 3x24h
Thse de Pharmacie
50
filtration sur coton, le filtrat a t concentr 45C au Rotavapor et nous avons laiss le
concentr la temprature du laboratoire pendant 3 jours.

Figure n 7: Schma de macration par le chloroforme de poudre de feuilles de Syzygium
guineense

2-5-3 Extraction par les solvants organiques polarit croissante: Elle a t ralise au
Soxhlet.
Principe : lextraction au soxhlet consiste en un puisement continu de la drogue par un
solvant donn laide dun dispositif de Soxhlet.
Matriel et Solvants :
-Chauffe ballon,
-Balance analytique de type SARTORIUS,
-Ballon de 1000 ml,
-Cartouche en tissu tergal
-Eprouvette gradue de 500 ml,
-Rfrigrateur
-Solvants : ther de petrole, DCM, et mthanol.

Mode opratoire :
Nous avons utilis 70 g de poudre pour 250 ml dther de petrole, 200 ml de DCM et 250 ml
de mthanol.

Poudre
de feuilles (50 g)
Extrait
CHCl
3

Marc
Chloroforme,
3x24h
Thse de Pharmacie
51

Figure n8: Schma dextraction par les solvants organiques de la poudre de feuilles de
Syzygium guineense.

Marc
Extrait
DCM
Marc
Extrait
MeOH

Marc
puis
70g de
poudre
Ether de ptrole
DCM
Mthanol
Extrait
ther
Thse de Pharmacie
52

Figure n9: Photo du Lyophilisateur utilis pour scher les extraits aqueux de Syzygium
guineense.

Figure n10: Photo du Rotavapor utilis pour concentrer un extrait de Syzygium guineense.
Thse de Pharmacie
53
2-7 Chromatographie sur couche mince :
Principe :
La chromatographie sur couche mince est une mthode physico-chimique rapide de contrle
dont labsorbant ou phase stationnaire est constitue dune couche mince et uniforme de 0,25
mm dpaisseur, dune substance sche et finement pulvrise, applique sur un support
appropri (dans notre cas, nous avons utilis une feuille daluminium). La phase mobile ou
luant migre la surface de la plaque par capillarit. Cest une mthode analytique de
contrle qui, chaque stade de sparation permet de :
-suivre lefficacit des extractions avec diffrents solvants,
-suivre la composition des diffrents fractions obtenues au cours des sparations,
-faire le meilleur choix des solvants dlution des colonnes,
-vrifier la puret des produits isols.
Les techniques chromatographiques ne sont pas suffisantes pour identifier un produit mais
elles apportent des renseignements susceptibles dorienter vers une hypothse de structures,
par exemple: fluorescence, coloration, Realising factor Rf = facteur de rtention .
Matriels:
-une balance analytique de prcision de type Sartorius,
-une cuve avec couvercle,
-un solvant de migration,
-un rvlateur,
-une lampe Ultra Violet,
-un crayon de papier,
-des prouvettes gradues,
-micopipettes,
-une pince,
-plaque de silicagel 60F
254,

-pulvrisateur,
-une rgle gradue,
-un schoir,
Technique :
Solution analyser : nous avons dissous 10 mg des extraits aqueux et hydro-alcoolique dans
1 ml dun mlange de solution mthanol eau ( 1-1 ) et 10 ml des extraits organiques dans un
1 ml dactate dthyle.
Thse de Pharmacie
54
Dpt : Nous avons dpos 10 l de chaque solution laide dune micropipette sur une
plaque de CCM.
Migration :
Nous avons plac des plaques dans les cuves de dveloppement dans lesquelles se trouvait un
systme de solvants appropris appels phase mobile, environ 0,5 cm de hauteur, pour
chacun. Pour la migration, nous avons choisi le systme Butanol Acetic acid Water (BAW)
dans les proportions 60-15-25 pour les extraits aqueux, hydro-alcoolique et pour lextrait
dichloromthane nous avons choisi le systme ligrone-acetate dthyle (1- 1).
Rvlation :
Lobservation a t faite lUV 254 et 366 nm et la rvlation a t faite avec le ractif de
Godin ou AlCl
3
. Nous avons dtermin le facteur de rtention (Rf) pour chaque extrait.

Distance parcourue par la substance
Rf =
Distance parcourue par le solvant

Thse de Pharmacie
55
3 LES TESTS BIOLOGIQUES :
Ces tests ont t raliss sur les souris sauf le test antioxydant. Nous avons ralis des tests in
vivo (tests de transaminases, hmogramme, anti-inflammatoire et de toxicit) et un test in
vitro (test antioxydant).
3-1 Test antioxydant :
Nous avons utilis la mthode de Takao et coll, 1994.
Test sur CCM par rduction du radical 1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyle : DPPH
Le DPPH est un radical stable prsentant une absorption spcifique 527 nm qui lui confre
une couleur violette mais cette couleur disparat lorsquil est rduit par un capteur de
radicaux.
Mode opratoire: Nous dpos nos extraits sur des plaques de CCM de gel de silice GF254
en aluminium et nous fait migr Butanol Acetic acid Water (B.A.W.) dans les proportions
60-15-25. Les chromatogrmmes sont gicles aprs schage avec une solution mthanolique
2mg/ml de DPPH. Les activits antiradicalaires apparaissent sous formes de spots de couleur
jaune-blanc sur un fond violet.
HN N
NO
2
NO
2
O
2
N
(Chevalley, 2000)
DPPH

Thse de Pharmacie
56
Animaux
Il sagit des souris mles et femelles de masse comprise entre 24 et 30 g.
Origine : souche non consanguine slectionne partir de la ligne CF1 ( Carworth Farms
Souche 1).
Dnomination : OF1 ( Oncins France Souche 1).
Ces souris ont t fournies par le Centre National dAppui la lutte contre la Maladie.
3-2 Effet du dcoct aqueux sur le mtabolisme, la masse et certains paramtres
biologiques des souris :
Gnralits du suivi des souris :
Notre tude a eu lieu sur 20 souris (10 femelles et 10 mles). Ces souris taient classes en
deux lots (un lot traitant et un lot tmoin) de dix souris dont cinq femelles et cinq mles.
Le lot trait recevait une dose de 100mg/kg du dcoct aqueux (soit 0.92g/kg de poudre).
Le tmoin recevait uniquement de leau distille.
Le volume administr tait de 0.025ml/g.
Le suivi a dur 3 semaines dont 5 jours dadministration de produit et 2 jours de repos par
semaine.
Durant le suivi la quantit de nourriture consomme tait calcule et le volume hydrique
mesur.
Les souris taient peses chaque jour juste avant ladministration.
Aprs le traitement, les souris ont t sacrifies et les organes (reins, rates et foies) ont t
prlevs, pess et conservs dans le formol 10% pour des tudes anatomopathologiques.
Des prlvements de sang ont t faits et ont servi pour diffrentes analyses (hmogramme,
transaminases).

Thse de Pharmacie
57

Figure n11 : Photo dadministration par voie orale de lextrait aqueux de Syzygium
guineense.

Thse de Pharmacie
58

Test de transaminase (Reitman et coll. 1957) :
Il a t ralis au laboratoire danalyse de biochimie lInstitut National de Recherche en
Sant Publique (INRSP).
Principe : Dtermination colorimtrique de lactivit GOT ou GPT selon les ractions
suivantes :
GOT
GOT : Aspartate + ctoglutarate oxaloactate + glutamate
GPT
GPT : Alanine + ctoglutarate pyruvate + glutamate

Le pyruvate et loxaloactate forms sont doss sous forme de leurs drivs 2,4-
dinitrophnyldrazones.
Dosage ou mthode danalyse:
Les chantillons ont t prlevs sur tube sec et centrifugs pour obtenir des srums.
Nous avons prpar deux tubes pour chaque srum de la manire suivante :
Dans le tube N1 mettre 1 ml du ractif 1 et dans le tube N2 mettre 1 ml du ractif 2. Laisser
incuber pendant 5 mn 37C. Ajouter dans chaque tube 0,2 ml de srum. Mlanger et mettre
37C pendant 1 h pour le premier tube (GOT) et 30 mn pour le deuxime tube (GPT).
Ensuite ajouter chaque tube 1 ml du ractif 3, laisser pendant 20 mn la temprature
ambiante du laboratoire, puis ajouter dans chaque tube 10 ml de soude 0,4 N. Mlanger et
attendre 5 mn puis faire la lecture au photomtre 505 nm.
Test de lhmogramme (Tangara, 2004) :
Lhmogramme est ralis sur du sang total prlev sur citrate trisodique laide dun
automate (ABX MICOSot) qui donne directement les valeurs des huit paramtres suivants :
globules blancs, globules rouges, taux dhmoglobine, hmatocrite , plaquettes , volume
globulaire moyen , taux globulaire moyen en hmoglobine , concentration globulaire moyen
en hmoglobine. Cest un appareil qui donne les rsultats en 86 secondes aprs aspiration de
lchantillon.

Thse de Pharmacie
59
3-3 Dtermination de lactivit anti-inflammatoire :
Elle a t ralise lanimalerie du Centre National dAppui la lutte contre la
Maladie(C.N.A.M). Nous avons utilis la mthode de ldme de la patte de souris (Winter et
al., 1962).
Principe :Linjection de carraghnine sous laponvrose plantaire de la patte postrieure de la
souris entrane lapparition dun dme de la rgion mtatarsienne. Lintensit de cet dme,
qui atteint sont maximum de dveloppement en 5 heures, est value grce laugmentation
du volume de la patte (par rapport au volume initial). Ladministration prventive par voie
orale dun produit anti-inflammatoire rduit de faon significative le dveloppement de
ldme.
Ractifs :
Solution dindomtacine dans leau physiologique la dose de 8 mg/kg
Solution de carraghnine 1% dans leau physiologique (1g de carraghnine poudre dans 100
ml deau physiologique)
Solution du dcoct aqueux de Syzygium guineense dans leau distille la dose de 100mg/kg
et 200mg/kg dextrait.
Appareils et instruments
Le Pltysmomtre UGO BASIL 71.40, cest un appareil de mesure du volume de la patte de
la souris soit en valeur absolue, soit en valeur relative par comparaison avec la patte non
traite. Il est compos dune cellule de mesure en perspex contenant de leau dans laquelle
plonge la patte de la souris et la diffrence du niveau de leau aprs immersion de la patte est
mesure par un transducteur de conception, elle est affiche sur un appareil numrique.
- La canule gastrique
- La balance pse souris
- Des seringues gradues aiguilles
- Les cages
- Les gants
Mthode : Test dinhibition de ldme de la patte de la souris la carraghnine
Protocole : Mettre les souris jeun pendent 18 heures avec accs libre leau.
Au moment de lexprimentation, peser les souris et les repartir en quatre lots homognes si
possible de dix souris (cinq males et cinq femelles).
Dterminer les volumes au temps To des pattes (Vo), pour cela remplir le rservoir deau de
lappareil (R), mettre lappareil sous tension et rgler correctement le niveau deau contenue
dans la cellule de mesure (CM) avec la vis (V).
Thse de Pharmacie
60
Tremper ensuite la patte de la souris dans la CM, le transducteur (T) permet dobtenir la
correspondance du volume de la patte en lisant directement le rsultat sur lcran numrique
(EN). Enfin fixer le rsultat en appuyant sur la pdale (P).
Administrer les diffrents produits par voie orale de la manire suivante :
Lot tmoin 1: 0,025 ml/g de souris deau distille
Lot 2 (lot de rfrence) : la solution dindomtacine la dose de 8 mg/kg
Lot trait 3: la solution dextrait la dose de 100 mg/kg
Lot trait 4: la solution dextrait la dose de 200 mg/kg
NB : les rsultats du lot tmoin et de rfrence ont servi de juger leffet de notre extrait pour
les deux doses.
Une heure aprs ladministration, injecter 0,005 ml de la solution de carraghnine par voie
sous-cutane au niveau de laponvrose de la patte postrieure droite de la souris. Il ne doit
pas sortir de liquide aprs linjection de la carraghnine.
Faire les diffrentes mesures de volume de la patte sur une priode donne intervalle de
temps rgulier.
Nous avons effectu une tude cintique de 5h avec 1h dintervalle, cela en rfrence aux
rsultats obtenus avec un lot tmoin essai.
Les rsultats obtenus ont permis dapprcier leffet du produit sur lvolution de ldme
chez la souris.
Evaluation de lactivit anti-inflammatoire :
Le pourcentage dinhibition (%Inb) de ldme est calcul pour chaque groupe de souris
traites par rapport au lot tmoin. Il est donn par la formule suivante :
Po - Pt
%Inb = X 100
Po
Avec Po = % moyen daugmentation de la patte du tmoin
Pt = % moyen daugmentation de la patte trait
Le pourcentage daugmentation (%Aug) de la patte de souris est donn par la formule :
Vt Vo
%Aug = X 100
Vo
Avec Vo = volume initial de la patte de la souris
Vt = volume aprs injection de la carraghnine et traitement
Thse de Pharmacie
61

Figure 13 : Le Pltysmomtre

Fig. 12: Test de l'activit anti-inflammatoire
Thse de Pharmacie
62
3-4 Etude de la toxicit aigu par voie orale:
Principe : Les souris pralablement mises jen pendant 17 h sont regroupes par lot de dix
pour chaque dose ( 5 mles et 5 femelles ) et un lot de dix souris comme tmoin de mme
type.
Nous avons administr par voie intra gastrique des doses de 400; 800; et 1600 mg/kg
dextraits respectivement trois lots de 10 souris. Lextrait a t repris avec de leau distille
et administr aux souris par gavage avec un volume de 0,025 ml de solution par gramme de
souris. Le lot tmoin a reu le mme volume deau distille. Aprs administration,
lobservation a t faite pendant 2 h avant de les donner manger (cela pour observer le cas
de mort immdiat). Nous avons observ les souris pendant 72 h afin de noter les symptmes
de lintoxication et la ltalit.

Thse de Pharmacie
63

RE8ULTAT8 RE8ULTAT8 RE8ULTAT8 RE8ULTAT8
Thse de Pharmacie
64
1- Donnes phytochimiques :
1-1 Ractions en tube :
Tableau n3 : Rsultats des ractions en tubes de la poudre de feuilles de Syzygium
guineense.

Le nombre de + est fonction de lintensit de la coloration et/ou des prcipits. Les
ractions ont t positives avec les tanins, les strols et triterpnes et les leucoanthocyanes.
Mais il a t observ labsence dhtrosides, doses et holosides, de composs rducteurs,
dalcalodes, danthocyanes, des coumarines, des mucilages, des anthracnosides, des
carotnodes et des flavonodes.
1-2 Dosages:
1-2-1 Substances extractibles par leau :
Masse de la capsule vide (n) = 31.02 g ;
Masse de la capsule avec le filtrat (n) = 31.06 g
Les substances extractibles par leau pour la poudre de feuilles de Syzygium guineense ont t
de 4%.
1-2-2 Substances extractibles par lthanol 80 :
.n = 30.99 g n = 31.11 g
Les substances extractibles par lthanol pour la poudre de feuilles de Syzygium guineense ont
t de 12%.

Tanins catchiques: raction de Stiasny + + Prcipit rouge

Tanins galliques: raction de Stiasny + + + Bleu-noirtre

Strols et triterpnes: (Liebermann) + + + Anneau violet

Leucoanthocyanes + + Rouge cerise

Saponosides + Mousse visible
Recherche Rsultats
Thse de Pharmacie
65
1-2-3 Cendres :
. Cendres totales :

Tableau n4 : Pourcentage des cendres totales dans la drogue

Pour la teneur moyenne (TM), nous avons utilis la formule suivante :
4.18 + 4.24 + 4.33
TM = = 4.25
3
. Cendres sulfuriques :
Le pourcentage des cendres sulfuriques est de 7,20%. Cette valeur est lgrement leve ce
qui peut se justifier par une richesse en lments minraux de notre poudre.
.Cendres insolubles dans HCl 10% : ou cendres chlorhydriques
Le pourcentage des cendres insolubles dans HCl 10% est de 1.93
1-2-4 Leau :
. Mthode pondrale :
Tableau n5 : Pourcentage deau dans la drogue

Pour la teneur moyenne en eau (TME), nous avons utilis la formule suivante :

Tare Masse avant Masse aprs Masse drogue Masse % cendres
calcination calcination essai cendre
15.55 18.49 15.68 2.94 0.13 4.18
13.46 16.34 13.58 2.88 0.12 4.24
24.15 27.44 24.29 3.29 0.14 4.33
Tare Masse avant Masse aprs Masse drogue Masse % eau
tuve tuve essai eau
12.58 15.04 14.89 2.45 0.15 6.00
13.23 16.73 16.52 3.50 0.21 6.00
12.65 16.99 16.74 4.33 0.25 5.80
13.36 17.44 17.16 4.08 0.27 6.80
12.57 16.26 16.05 3.68 0.20 5.60
Thse de Pharmacie
66
6 + 6 + 5.8 + 6.8 + 5.6
TME = = 6.04
5
Le pourcentage de leau par la mthode pondrale est = 6.04%
.Mthode azotropique :
Vi = 0.75 et Vf = 1
Le pourcentage deau par la mthode azotropique est de 5%.
Le pourcentage deau est infrieur 10% par les deux mthodes, ce qui pourrait confrer
notre drogue une bonne conservation.

Tableau n6 : Tableau rcapitulatif des diffrents dosages effectus sur la poudre.

Substances extractibles par l eau 4

Substances extractibles par l thanol 80% 12

Saponosides: indice de mousse <100

Mthode pondrale 6.02
Eau
Mthode azotropique 5

Cendres totales 4.25

Cendres sulfuriques 7.20

Cendres insolubles dans HCl 10% 4.16

Dosages Pourcentages
Thse de Pharmacie
67
1-3 Extractions : Le rendement des extractions, laspect et la couleur des extraits sont
reports dans le tableau n7.

Tableau n7: Rsultats des diffrents extractions de la poudre de feuilles de Syzygium
guineense.

MacEtOH 6.56 Friable Marron

DecH
2
O 11.00 Masse Noir brillant

MacCHCl
3
18.50 Cristaux Verdtre

MacH
2
O 16.00 Cristaux Noirtre

DigH
2
O 8.22 Collant Chocolat

ExtEP 1.50 Pteux Noir

ExtMeOH 5.10 Glatineux Noir

ExtDCM 2.46 Glatineux Noir

Le rendement le plus lev est obtenu avec le macr chloroformique avec 18,50 ; et le plus
faible rendement est obtenu avec lther de ptrole au Soxhlet avec 1.50, cela peut
sexpliquer par le fait que lther de ptrole est un solvant organique trs volatil et juste utilis
pour dgraisser les drogues.
1-4 Chromatographie sur couche mince :
La chromatographie sur couche mince des extraits de Syzygium guineense a permis de sparer
certaines substances qui ont apparues sous formes de tches visibles (UV254 nm), de
Extraits Rendement Aspect Couleur
Thse de Pharmacie
68
fluorescences (UV366 nm) ou colores (Godin, AlCl
3,
le ractif de Dragendorff) ; (Tableau
n10).
Les tches apparaissent sous diffrentes formes selon le mode de rvlation.
Tableau n8: Rsultats de la CCM selon le solvant B.A.W. (60 :15 :25).

A 254 nm la plupart des constituants de nos extraits aqueux et alcooliques sont visibles et
apparaissent sous forme de taches noires. A 366 nm la majorit des tches apparaissent en
blanc.
Aprs rvlation avec le ractif de Godin, les taches noires et blanches sont colores en brun,
violet, rose et jaune.
Extraits Rf 254nm 366nm Godin AlCl
3

DecH
2
O 0.06 visible verdtre violet
0.12 visible - violet orange
0.30 - blanc violet
0.50 visible rose - jaune

DigH
2
O 0.08 visible - -
0.12 visible gris
0.52 - rose
0.90 - blanc brun

MacH
2
O 0.08 visible blanc violet jaune
0.13 - violet rose
0.45 visible blanc violet

MacEtOH 0.13 visible blanc violet
0.27 visible - jaune jaune
0.40 - bleu rose
0.65 visible blanc - jaune
0.77 - rouge vif rose orange
0.92 visible orange violet

ExtMeOH 0.21 visible blanc brun
0.40 visible - violet
0.58 visible gris brun jaune
0.76 - violet violet
0.92 visible blanc brun

Thse de Pharmacie
69
Avec AlCl
3
nous avons observ trois taches jaunes et orange avec lextrait thanolique
(flavonodes).
Le ractif de Dragendorff na donn aucune coloration.

Tableau n9 : Rsultats de CCM selon le solvant ligrone : actate dthyle (1 :1)

MacCHCl
3
0.12 visible - - jaune
0.43 - rouge violet
0.50 visible rouge brun
0.55 - blanc brun
0.65 - - brun
0.71 visible rouge violet
0.80 visible orange -
0.87 jaune rouge bleu
0.90 vert rouge violet
0.96 visible rouge brun

ExtDCM 0.05 visible blanc - jaune
0.07 - blanc
0.11 visible - brun
0.15 visible - brun
0.40 visible rouge -
0.55 - blanc bleu
0.61 - - -
0.72 visible - violet jaune
0.81 visible brun -
0.85 visible rouge -
0.91 visible orange violac

ExtEP 0 visible - -
Extraits Rf 254nm 366nm Godin AlCl
3

Thse de Pharmacie
70
0.03 - bleu brun
0.43 visible - brun

0.48 visible blanc -
0.72 visible - violet Vert
0.80 visible blanc -
0.88 visible bleu

La rvlation avec le ractif de Dragendorff na donn aucune coloration.
Lobservation 254 nm a donn des tches visibles et la plus part des extraits 366 nm a
donn de taches rouges. La rvlation au ractif de Godin a donn des taches brunes, violettes
(triterpnes) et bleues. Avec AlCl
3
nous avons obtenu une coloration verte Rf = 0.72 avec
lextrait thr et des fluorescences jaunes (flavonodes).

Thse de Pharmacie
71
2 Tests biologiques :
2-1 Test antioxydant:
Les chromatogrammes des extraits de feuilles de Syzygium guineense, rvls par une
solution de DPPH la concentration de 2mg/ml dans le mthanol, prsentent des tches
jaunes sur un fond violet : ce sont des constituants, capables de rduire le radical DPPH
oxydant, qui donnent des indications intressantes pour une activit anti-radicalaire des
extraits de feuilles de Syzygium guineense. Lextrait chloroformique na pas donn de rsultat
avec le radical DPPH.
Tableau n10: Rsultats du test antioxydant sur les extraits de feuilles de Syzygium
guineense.

Tous nos extraits ont donn une activit antioxydante qui sest manifeste par des taches
jaunes sur fond violet aux diffrents Rf indiqus.
Ainsi, les extraits aqueux et thanolique ont prsent plus de substances qui rduisent le
DPPH.

MacEtOH 0.20 ; 0.38 ; 0.42 ; 0.75

DecH
2
O 0.20 ; 0.38 ; 0.75

MacCHCl
3
0.30

MacH
2
O 0.38 ; 0.75

DigH
2
O 0.37 ; 0.75

ExtEP 0.18

ExtDCM 0.12

Extraits Rf des substances actives
Thse de Pharmacie
72

Figure n11: Plaque de CCM des extraits prsentant plus de tches activit antioxydante
avec le DPPH des feuilles de Syzygium guineense.

Thse de Pharmacie
73
2-2 Effet du dcoct aqueux sur le mtabolisme, la masse et certains paramtres
biologiques des souris:
Une souris de 20 g doit consommer 3 4 g daliment par jour, et 3 7 ml deau (Amalia et
coll, 1991).
Tableau n11 : Variation des masses des souris

Figure n14 : Variation des masses des souris soumises
males SG : mles traits avec Syzygium guineense
femelles SG : femelles traites avec Syzygium guineense.
Nous avons not une croissance dans les deux cas mais elle a t plus remarquable dans le lot
tmoin.

Temps Masse en gramme
mles traits femelles traites mles tmoins femelles tmoins
Semaine 1 22.39 21.14 20.62 21.80
Semaine 2 23.05 22.78 22.35 24.18
Semaine 3 23.21 23.24 22.97 24.51
1 5
2 0
2 5
1 2 3
Te mp s en he ures
M
a
s
s
e

e
n

g
r
a
m
m
e
s
m al es S G
fem el l es S G
m al es t em oi ns
fem el l es t em oi ns
Thse de Pharmacie
74
Tableau n12 : Consommation moyenne daliments en grammes par lot de cinq souris.

males SG: mles traits avec Syzygium guineense
femelles SG : femelles avec Syzygium guineense
Figure n15 : Consommation moyenne daliments en grammes par lot de cinq souris.

Nous constatons que la consommation des tmoins a augment dans la premire semaine et
une diminution de consommation a t observe dans les deux cas aprs cette semaine. La
consommation moyenne tait de 3.17 g par souris pour les traites et 4 g par souris pour les
tmoins la premire semaine et 2.3 g pour les traites, 2.4 g pour les tmoins la troisime
semaine

0
5
10
15
20
25
1 2 3
Temps en semaine
Q
u
a
n
t
i
t
e

e
n

g
r
a
m
m
e
femelles SG
males SG
males temoins
femelles temoins
Temps Quantit en gramme
Semaine 1 16.06 14.47 20.54 19.98
Semaine 2 14.67 12.41 14.38 12.70
Semaine 3 10.96 9.80 11.77 12.39
Thse de Pharmacie
75
Tableau n13 : Consommation moyenne deau en ml par lot de cinq souris.

males SG : mles traits avec Syzygium guineense
femelles SG : femelles traites avec Syzygium guineense
Figure n16: Consommation moyenne deau en ml par lot de cinq souris.

Nous constatons que la consommation deau a augment chez les femelles traites la
premire semaine, et demeure stationnaire dans les deux cas avec le temps.
La consommation deau tait de 5.5 ml par souris pour les traites et 5.3 ml par souris pour les
tmoins la premire semaine et 4.5 ml par souris pour les traites et 5 ml la troisime
semaine

0
5
10
15
20
25
30
35
1 2 3
Temps en semaine
V
o
l
u
m
e

e
n

m
l
femelles SG
males SG
males temoins
femelles temoins
Temps Volume en ml
Semaine 1 29.28 21.10 28.00 25.00
Semaine 2 24.28 26.78 27.14 22.14
Semaine 3 23.57 22.30 25.71 25.00
Thse de Pharmacie
76
Tableau n14: Rsultats des masses des organes des souris tmoins.

Les masses moyennes sont respectivement pour les souris, les foies, les rates, et les reins :
23.78g, 0.928g, 0.091g et 0.190g. On constate que les poids des organes ne sont pas en
rapport avec la masse des souris.

Souris masse des souris masse foie masse rate masse reins
1 male 25.2 1.013 0.096 0.200
2 male 25.4 0.828 0.088 0.234
3 male 22.4 0.894 0.099 0.175
4 male 27.4 1.012 0.090 0.204
5 male 22.3 0.932 0.118 0.180
6 femelle 22.4 0.790 0.084 0.150
7 femelle 22.3 0.843 0.081 0.178
8 femelle 24.5 1.108 0.077 0.243
9 femelle 21.4 0.854 0.060 0.144
10 femelle 24.5 1.014 0.122 0.196
M. moyennes 23.781.90 0.929 0.104 0.0920.018 0.1900.032
V.S - 1.70-3.58 0.10-0.42 0.15-0.56

Thse de Pharmacie
77
Tableau n15: Rsultats des masses des organes des souris traites avec le dcoct aqueux

V.S : Valeurs standards.
Les masses moyennes sont respectivement pour les souris, les foies, les rates, et les reins :
23.5g, 0.956 g, 0,082g, et 0,164g.
Transaminases : Nous avons effectu le dosage des transaminases sur le sang de dix
souris femelles dont cinq traites et cinq tmoins. Les rsultats sont reprsents dans le
tableau ci aprs.

Tableau N16:Rsultats du taux des transaminases des souris tmoins et traites.

La diffrence de valeurs des GOT et GPT entre les souris traites et les souris tmoins nest
pas significative.

Souris masse des souris masse foie masse rate masse reins
1 mle 25.1 0.942 0.089 0.184
2 mle 22.5 0.873 0.104 0.181
3 mle 24.4 0.950 0.076 0.170
4 mle 22.9 0.843 0.086 0.149
5 mle 22.9 0.842 0.085 0.150
6 femelle 23.8 0.963 0.078 0.153
7 femelle 21.9 0.956 0.059 0.143
8 femelle 22.9 1.141 0.105 0.186
9 femelle 24.7 0.954 0.067 0.108
10 femelle 23.3 0.985 0.076 0.202
M. moyenne 23.41.0 0.9460.085 0.0830.014 0.1630.027
V.S - 1.70-3.58 0.10-0.42 0.15-0.56
Srum GOT GPT
5 souris tmoins 47 30

5 souris traites 46 31
Thse de Pharmacie
78
Hmogramme :
Tableau n17 : Rsultats de lhmogramme des souris traites.

Nous navons pas pu dterminer la valeur des globules rouges cause de leur nombre plus
lev que celui des humains. Les globules blancs des souris traites sont lgrement infrieurs
la normale.
2-3 Test anti-inflammatoire :
Evaluation de ldme :
Nous avons valu ldme en fonction du volume de la patte de la souris tout au long de
lexprience.
Tableau n18: Variation des volumes moyens des pattes de souris traites avec
lindomtacine, leau et le dcoct aqueux de Syzygium guineense.

Produits Dose V (ml) M DS n = 10
T
0
T
1h
T
2h
T
3h
T
4h
T
5h
E.D 0.025ml/kg 0.090.02 0.180.04 0.180.04 0.190.03 0.180.03 0.160.03

Indo 8 mg/ml 0.120.01 0.180.01 0.170.03 0.150.03 0.150.02 0.150.02

DecH
2
O 100 mg/ml 0.120.02 0.180.02 0.170.03 0.180.03 0.180.03 0.160.04

DecH
2
O 200 mg/ml 0.120.02 0.180.03 0.150.03 0.160.04 0.190.02 0.180.02
Paramtres Valeurs traites Valeurs standards Unit
GB 8.4 10 10
3
/mm
3
GR >10 9 10
6
/mm
3

Pla 502 - 10
3
/mm
3

HGB 16.2 10-19 g/dl
HCT 47.4 - %
VGM 46 - m
3

TGMH 15.9 - pg
CGMH 34.2 - g/dl
Neutrophiles 40 10-40 %
Lymphocytes 60 35-90 %
Thse de Pharmacie
79

M : Moyenne de 10 souris
DS :Dviation standard
E.D : Eau distille
Dec aq : Dcoct aqueux
Indo : Indomtacine
t : test Student
P < 0,01 statistiquement trs significatif par rapport au tmoin.
La diffrence daugmentation du volume de la patte dans le temps entre les groupes traits et
le groupe tmoin est toujours statistiquement trs significative selon le test de Student avec P
< 0,01. Les extraits de S. guineense comme lindomtacine empchent la formation de
ldme

Thse de Pharmacie
80
Evaluation de lactivit anti-inflammatoire :
Tableau n19: % dinhibition de ldme des souris traites avec lindomtacine et le
dcoct aqueux de la poudre de feuilles de Syzygium guineense.

Les doses 100mg et 200mg du dcoct aqueux correspondent respectivement 0.92 g et 1.85
g de poudre. (r = 10.82 ). Le dcoct la dose 200 mg/kg agit dj la premire heure, ce qui
dmontre un effet sur la phase primaire de linflammation. La dose 100 mg/kg ne donne un
effet qu la cinquime heure. La dose 200 mg/kg donne un effet moindre que lindomtacine
(figure n17).
Dec 100 : Dcoct aqueux la dose 100 ; Indo : Indomtacine
Dec 100 : Dcoct aqueux la dose 200
Figure n17 : % dinhibition de ldme des souris traites avec lindomtacine et le dcoct
aqueux.
Produits Dose % d inhibition
mg/kg 1h 2h 3h 4h 5h
DecH
2
O 100 49.58 53.89 53.21 49.85 56.25

DecH
2
O 200 51.19 74.94 74.52 45.19 43.54

Indo 8 52.36 62.11 80.02 75.53 70.53
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
1 2 3 4 5
Temps en heures
%

d
'
i
n
h
i
b
i
t
i
o
n
Dec 100
Dec 200
Indo
Thse de Pharmacie
81
2-4 Toxicit aigu :

Tableau n20: Dtermination de la mortalit en fonction de la dose.

Nous constatons que la DL
50
du dcoct aqueux des feuilles de Syzygium est suprieure
1600 mg/kg de poids corporel, cette dose rapporte au rendement (r = 10.82) nous montre que
cette DL
50
est suprieure 14.72 g/kg de poudre.
Avec la dose 400 mg/kg (soit 3.68 g/kg de poudre), nous navons pas observ de mortalit ; la
dose 800 mg/kg (7.38 g/kg de poudre) a donn un pourcentage de mortalit la quarante
huitime heure (soit 10%) et la dose 1600 mg/kg (14.72 g/kg de poudre) a entran la mort de
deux souris en soixante douze heures soit une mortalit de 20%.

Produits Dose nombre de Mortalit nombre de Pourcentage de
g/kg souris 24h 48h 72h morts mortalit
DecH
2
O 3.68 10 0 0 0 0 0

DecH
2
O 7.38 10 0 1 1 1 10

DecH
2
O 14.72 10 0 1 2 2 20

H
2
O 0.025ml/kg 10 0 0 0 0 0

Thse de Pharmacie
82

ANALY8E ET
D8CU88ON
Thse de Pharmacie
83
ANALYSES ET DISCUSSION

Notre travail a port sur lidentification des diffrents groupes chimiques, la recherche de
lactivit antioxydante ; leffet du dcoct aqueux sur la masse corporelle, le mtabolisme et
la masse de certaines organes de souris ; lactivit anti-inflammatoire et la toxicit aigu des
extraits aqueux des feuilles de Syzygium guineense ; nous avons aussi valu les
transaminases et lhmogramme des souris au cours de ce travail.

Dans la littrature cette plante est dutilisations diverses ; cest ainsi que les corces de tronc
sont lgrement antidiarrhques et labsorption rgulire du macr dcorces de tronc et des
feuilles est recommande aux femmes durant la gestation et plus particulirement lorsquelles
sont atteintes des maux de ventre (Kerharo et Adams, 1974).
Les ractions en tubes nous ont permis de mettre en vidence la prsence de tanins galliques,
de tanins catchiques, de strols et de triterpnes et de leucoanthocyanes ; par contre dautres
constituants comme les alcalodes, les flavonodes, les coumarines, les htrosides nont pas
t rvls. La teneur en eau, infrieure 10% confre notre poudre une meilleure
conservation long terme. Le pourcentage des cendres chlorhydriques est de 1.93 ce qui peut
nous permettre de dire que notre drogue na pas t contamine par la poussire ou le sable.

Nous avons ralis trois extractions aqueuses (dcoction, macration, digestion) et cinq
extractions organiques (thanol, mthanol, chloroforme, ther de ptrole, DCM). Cependant,
les extractions avec lther de ptrole, le mthanol, et le dichloromthane ont t ralis au
Soxhlet (extraction par les solvants polarit croissante). La masse, laspect et les rendements
de nos diffrents extraits obtenus sont ainsi nots dans le tableau n7.
Les rendements des extraits aqueux ont t de 10.82% ; 16.36% ; et 8.22% respectivement
pour la dcoction, la macration et la digestion ; les extractions alcooliques ont donn 6.56%
pour lthanol et 5.10% pour le mthanol et nous avons obtenu 18.50% ; 1.50% et 2.46%
respectivement pour le chloroforme, lther de ptrole et le DCM.
Le macr chloroformique a donn le plus fort rendement avec 18,85 alors que le plus faible
est obtenu avec lther de ptrole au Soxhlet 1,5.

La CCM nous a permis de mettre en vidence dautres constituants. Lobservation des
chromatogrammes des extraits de la plante lUV nous a permis de noter la prsence de
Thse de Pharmacie
84
constituants UV actives 254 nm ; des fluorescences 366 nm. La rvlation avec le ractif
de Godin nous a permis de confirmer la prsence de strols et triterpnes. Les tches et les
fluorescences jaunes aprs la rvlation des chromatogrammes avec AlCl
3
nous informe sur la
prsence de flavonodes qui navaient pas t observs avec les ractions en tubes.

Pour lvaluation des activits pharmacologiques, nous avons travaill sur le dcoct aqueux
de feuilles de Syzygium guineense, mais le test antioxydant a concern tous nos extraits.

Au cours du suivi des souris avec la dose de 100mg/kg pendant les trois semaines nous avons
not une augmentation de la masse corporelle dans les deux groupes (trait et tmoin).
Cependant, laugmentation de masse corporelle chez le groupe tmoin a t plus importante
que le groupe trait.
Les transaminases des souris traites taient normales par rapport aux souris tmoins. En effet
une hypertransaminasmie peut faire souponner une hpatite virale mais ne peut pas tre
considre comme un diagnostic sr dautant plus quil peut y avoir une hpatite virale avec
transaminases normales. Comparativement lhomme, nos souris ont donn des
transaminases infrieures si bien dans le lot trait que dans le lot tmoin.

Ladministration du dcoct aqueux a eu peu dinfluence sur lhmogramme des souris. Nous
avons surtout not une lgre diminution des globules blancs. Les investigations doivent se
poursuivre sur cette proprit pour une ventuelle utilisation dans les leucmies.

Le test antioxydant que nous avons ralis sur des plaques de CCM a donn de nombreuses
tches anti-radicalaires dont les extraits les plus actifs ont t DecH
2
0, DigH
2
0, le MacH
2
0 et
le MacETOH comme le montre la figure n11. Les extraits thanolique et le DecH
2
0 ont
donn plus de tches. La prsence dans les feuilles de Syzygium guineense de certains
composs identifis pour leurs proprits antioxydantes (tanins, flavonodes,
leucoanthocyanes) peut expliquer cette activit. Ces substances antioxydantes rentrent dans
larsenal thrapeutique de la lutte contre larthrosclrose, la polyartrite chronique, lasthme et
les cancers (Chevalley, 2000).
Pour lvaluation du test anti-inflammatoire nous avons utilis le test dinhibition de ldme
de la patte postrieure de souris la carraghnine avec le Pltysmomtre. Par ce principe
notre extrait aqueux sest rvl plus actif plus prcisment la deuxime heure avec la dose
de 200 mg/kg. Ainsi, le dcoct aqueux la dose de 100 mg/kg et 200 mg/kg prsente une
inhibition de linflammation dans les premires phases.
Thse de Pharmacie
85
Avec lindomtacine utilise la dose de 8mg/kg comme produit de rfrence, linhibition
maximum de ldme a t de 80,02% la troisime heure.
Lactivit de la drogue est dose dpendante et moindre que celle de lindomtacine.
Lactivit leve de lindomtacine sexplique par le fait que cest une molcule pure
contrairement lextrait brut de Syzygium guineense. Cependant, lactivit anti-inflammatoire
de lextrait brut peut sexpliquer en partie par la prsence dans les feuilles de Syzygium
guineense des composs polyphnoliques comme les tanins et les flavonodes dont la
prsence a t rvle par la chromatographie sur couche mince (Bruneton, 1993).
Les tanins sont des substances chimiques reconnues pour leur pouvoir de fixation aux
protines avec une tendance limpermabilit des couches externes et la protection des
couches sous-jacentes. Ceci ajout leurs proprits de retendre les tissus et de drainer les
scrtions excessives pourrait expliquer leur activit antidiarrharque (Bruneton, 1993).
Les leucoanthocyanes, les strols et triterpnes sont des composs phnoliques qui sont
reconnus par leur trs grande varit de composs simples comme lacide salicylique,
molcule donnant par la suite laspirine et des substances plus complexes, ce qui pourrait
expliquer les activits antipyrtique et anti-inflammatoire des phnols (Paul, 2001).

Pour ltude de la toxicit, nous avons administr les doses de 400 ; 800 et 1600mg/kg
dextrait aqueux, correspondant respectivement 3,68 ; 7,36 et 14,72 g/kg de poudre de
feuilles de Syzygium guineense. Aprs observation 72 heures, nous navons pas obtenu de
mortalit avec la dose de 400 mg/kg, la dose de 800 mg/kg a donn une mortalit soit 10% et
la dose de 1600 mg/kg deux mortalits soit 20%. Au regard de ces rsultats, nous pouvons
dire que notre drogue a une forte tolrance lgard des souris et que la dose ltale 50 du
dcoct aqueux est suprieure 1600 mg/kg correspondant 14,72 g/kg de poudre.

Thse de Pharmacie
86

CONCLU8ON CONCLU8ON CONCLU8ON CONCLU8ON
Thse de Pharmacie
87
Conclusion

Notre travail qui est une contribution ltude des activits biologiques et de la phytochimie
de la poudre de feuilles de Syzygium guineense, nous a permis de comprendre que le domaine
des plantes demeure encore un domaine valable de recherche scientifique.
Cette tude nous a permis de mettre en vidence dans notre chantillon, des tanins (galliques
et catchiques), des leucoanthocyanes, des strols et triterpnes par des ractions en tubes.
Lindice de mousse est infrieur 100.
Nous avons ralis la chromatographie sur couche mince qui a confirm la prsence de
certains composs mis en vidence par les ractions en tubes comme les strols avec le ractif
de Godin (tches bleues).
Les rsultats de nos travaux ne nous permettent pas de confirmer lutilisation de la plante dans
la malnutrition. Cependant, tous nos extraits ont donn une activit antioxydante et nous
avons not une activit anti- inflammatoire avec le dcoct aqueux aux doses de 100 mg/kg et
de 200 mg/kg. Cette dernire activit est dose dpendante et moindre que celle de
lindomtacine.
Ces activits peuvent tre utiles pour renforcer lorganisme dans des situations dprimes.
Par ailleurs, une tude approfondie de la toxicit serait ncessaire pour parvenir dterminer
la dose ltale 50.
Les extraits des plantes sont en gnral utiliss ltat brut. Cest pourquoi nous avons utilis
des doses leves pour nos tests comparativement au produit de rfrence. Pour palier cela,
il est prfrable disoler les principes actifs des diffrents extraits de plantes et de les prsenter
sous une forme galnique acceptable. Une sensibilisation est encore ncessaire sur lusage
appropri de la mdecine traditionnelle et limportance de lenvironnement.
Au regard des rsultats de lhmogramme des investigations pourraient se poursuivre pour
une ventuelle utilisation de cette plante dans les leucmies.

Par le biais de ce travail, nous esprons avoir apport notre modeste contribution la
valorisation de la mdicine traditionnelle pour parvenir mettre la disposition de la
population des mdicaments base de plantes mdicinales efficaces et accessibles.

Thse de Pharmacie
88

REFERENCE8 REFERENCE8 REFERENCE8 REFERENCE8
BBLOGRAPHOUE8 BBLOGRAPHOUE8 BBLOGRAPHOUE8 BBLOGRAPHOUE8
Thse de Pharmacie
89
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES

1. Adjanohoum J.E.; Ak Assi L.;Floret J J.; Guinko S.; Koumar M.; Ahyi A.; M.R.;
Raynal J. (1979). Mdicine traditionnelle et Pharmacope Contribution aux tudes
ethnobotaniques et florestiques au Mali. ACCT, Paris. 291 P.
2. Ahamet S. (2003). Etude phytochimique et des activits biologiques de Balanites
aegyptiaca L. (Balanitaceae). Thse Pharmacie, Bamako; 117 P.
3. Amalia G. ; Alessandra C. ; Ivan B. (1991). LANIMALE DA LABORATORIO.
Principi etico-scientifici, tecnici e legislativi. Manuali Tecnici N. 4.
4. Assetou C. (2001). Etude des plantes utilises dans le traitement des plaies au Mali :
Polysaccharides de Biophytum petersinum Klotz (Oxalidaceae). Thse Pharmacie,
Bamako; 111 P.
5. Boire A S. (2003). Etude de la phytochimie et des activits biologiques des corces de
racines de Cussonia batteri Seem. (Araliaceae). Thse, Pharmacie; 110 P.
6. Brunton J. (1993). Pharmacognosie et Phytochimie des plantes mdicinales 2
eme
Edit.
Technique et documentation, Paris, 914 P.
7. Capron F. (1998). Forme anatomo-clinique de linflammation, in trouble de la mortalit
et de la sensibilit digestive. Revue du praticien, 20, 2273-2276.
8. Cavin A. (1999). Investigation phytochimique de trois plantes Indonsiennes aux
proprits antioxydante et antiradicalaire : Tinospora crispa ( Mnispermaces),
Merremia emarginata (Convolvulaces) et Oropea enneandra (annonaces). Thse de
Doctorat, Lausanne, 241 P.
9. Cohen Y. (1997). Les anti-inflammatoires, in Abrg de pharmacologie. Ed.4 Masson,
Paris, 465 P .
10. Colette E. (2003). Etude phytochimique et pharmacologique de 5 recettes traditionnelles
utilises dans le traitement des infections urinaires et de la cystite. Thse Pharmacie
Bamako. 147 P.
11. Coyen Y. (1981). Abrgs de pharmacologie. Ed 4, Masson, Paris, 355 P.
12. Coyen Y. (1990). Les mdiateurs chimiques de linflammation, in Abrg de
pharmacologie. Ed.3 Masson, Paris, 350 P.
13. Crt P. (1965). Prcis de botanique, systmatique des angiospermes tome 2 ; 2
ime

dition rvise. Facult de Pharmacie de Paris-masson ; 429 P.
Thse de Pharmacie
90
14. Chevalley I. (2000). Contribution ltude phytochimique des Saxifragaces : isolement
dantioxydant partir de Saxifraga stellaris L. et Saxifraga cuneifolia L. et dun compos
antifongique de Ribes rubrum L. Thse de Doctorat, Lausanne, 175 P.
15. Degant P. (1929). Sur la composition chimique des feuilles de Syzygium owariensis. J.
pharm. Belge, 11, n4, 57-59.
16. Denis M. (1992). Arbres et arbustes gurisseurs des savanes maliennes. Edit. Karthala et
A.C.C.T., paris. 474 P.
17. Diallo D. (2000). Ethnopharmacological survey of medical plants in Mali and
phytochemical study of four of them :Glinus oppositifolus (Aizoaceae), Diospyros
abyssinica (Ebenaceae), Entada africana (Mimosaceae), Trichilia emetica (Meliaceae).
Thse de Doctorat, Lausanne ; 221 P.
18. Dieng C. (1993). Contribution ltude de Khaya senegalensis (DESR.) A.JUSS
(Meliaceae). Thse Pharmacie, Dakar ; 109 P.
19. Diouf A. (1991). Etude des mdiateurs et leurs rles physiopathologiques. Thse
Pharmacie, Dakar ; 44 P.
20. Dragstedt A. ; Lang B. (1957). Etude de la toxicit par administration unique dun
nouveau mdicament. Annales Pharmaceutiques Franais, 11.
21. Dupont CH. (1970). Dtermination de la DL
50
chez la souris (mthode de Litchfield et
Wilcoxon).J. Pharmacol. Paris, 1, 407-412.
22. Metou G. ; Faye B. ; Richard T. (1989). Activit anti-inflammatoire chez le rat des
corces de racine de Securidaca longepedunculata Fres. (Polygalaces) in Mdecine
Traditionnelle et Pharmacope. Vol.3, 41.
23. Tsakala T.M. ; Penge O. ; Tonal ; Kengmene T. ; Lokangu L. ;Mesia K. (2001). Essai
de mise en forme pharmaceutique dun extrait de Syzygium guineense (Willd) in Revue de
Mdecines et Pharmacopes Africaines. Vol.15, 69.
24.Elizabeth M. ; Okpato D. ; Evans F.J. (1996). Anti-inflammatory and analgesic activity.
Selection, preparation and pharmacological evaluation of plant material. Pharmacological
methods in phytotherapy research. Edit. Wiley, England, 131-1154.
25. Fan S. (2002). Etude de la toxicit de certaines plantes vendues sur le march du district
de Bamako. Thse pharmacie, Bamako, 130 P.
26. Godin P. (1954). A new spray reagent for paper chromatography of polyols and cetoses.
Nature, 154, 134.
27. Hans-jrgen.; Von Maydell. (1990). Arbres et arbustes du Sahel leurs caractristiques et
leurs utilisations.
Thse de Pharmacie
91
28. Hostettmann K. (1989). Xanthones : Methods in plant biochemistry, vol.1.
(Harbone,J.B.Edit.). Academic press, London; 508 P.
29. Hostettmann K. (1997). Tout savoir sur le pouvoir des plantes, source de mdicaments.
Ed. Fabre S A, Lausanne, Suisse, 253 P.
30. Igor Passi L B. (2002). Etude des activits biologiques de Fagara zanthoxylodes Lam.
(Rutaceae). Thse Pharmacie, Bamako ; 133 P
31. Jol P. ; Karine P. ; Karine C. ; Jean-Olivier D. (2002). Nutrition et stress antioxydant.
Mcanismes physiologiques de la dfense antioxydante.
32. Karber C. et Brehrens B. (1935). Wie sind Reihenversuche fur biologische
Auswertungen am Zweckmssigsten Anzuordnen ? Arch. Exp. Path.Pharm., 177, 379-
388.
33. Keta R. (2002). Etude de lactivit antifongique et antioxydante de 14 plantes utilises
dans le traitement traditionnel des infections sexuellement transmissibles. Thse
Pharmacie, Bamako ; 107 P.
34. Kerharo J. (1971). Recherche ethnopharmacologique sur les plantes mdicinales et
toxiques de la pharmacope sngalaise traditionnelle. Thse Pharmacie, Dakar, 285 P.
35. Kerharo J.; Adams G. (1974). Pharmacope sngalaise traditionnelle. Plantes
mdicinales et toxique. Edit. Vigot et frres, Paris, 1011 P.
36. Laborit H.; Drouet J.; Gerard J.; Jouany JM.; Narvaes C.; Niaussat P.; Weber B.
(1960). La ranimation mtabolique: les structures lectrons clibataires. Leur emploi
thrapeutique en neurologie et psychopharmacologie. Presse Mdicale 1960; 68: 305-8.
37. Letonturier P. (1996). Abrgs immunology gnrale, 5
me
Edit. Masson : Paris-Milan.
Barcelone ;160 P.
38. Marc T. ; Gerard W. ; Denis L (2001). Classification des anti-inflammatoires in Guide
pharmacologie. Etudiants et professionnels paramdicaux. 4
eme
Edition. 426 P.
39. McCord JM.; Fridovich I. (1969). Superoxide dismutase, an enzymic function for
erythrocuprein. J Biol Chem; 44:6049-55.
40. Paris R. et Moyse M. (1965). Prcis de matire mdicale. Edit. Masson. Paris, 412 P.
41. Paul Iserin. (2001). Encyclopdie des plantes mdicinales. Identification-Prparation-
Soins.
42. Potterat O. (1997). Antioxydants and free radical scanvengers of natural origin. Current
organic chemistry 1 ; 415-440.
Thse de Pharmacie
92
43. Prin Lionel ; Hachulla Eric ;Hennache Bernadette ; Bonnotte Bernard ; Dubucquoi
Sylvain ; Abbal Michel ; Faure Gilbert. (2003). Raction inflammatoire, Aspect
biologique et clinique, Conduite tenir. http :www.assim.refer.Org/112402.Htm.
44.Reitman S. ; Frankel S. (1957). Dtermination colorimtrique de lactivit GOT et GPT,
Am. J. Clin. Path. 28,56.
45. Ruckebusch Yves (1981). Physiologie, pharmacologie, thrapeutique animales, 2
me
Edit.
Maloine S.A. Paris.
46. Sangar D. (2003). Etude de la prise en charge du paludisme par les thrapeutiques
traditionnels dans les aires de Kendi (Bandiagara) et de Finkolo AC (Sikasso). Thse
Pharmacie, Bamako ; 105 P.
47. Sidib F. (2003). Etude phytochimique et pharmacologique de Stereospermum
kunthianum Cham. (Bignoniaceae). Thse de Pharmacie, Bamako ; 79 P.
48. Takao T. ; Kitatani F. ; Watanabe N. ; Yagi A. and Sakata K. ( 1994). A simple
sreening method for antioxydants and isolation of several antioxydants produced by
marine bacteria from fish and shell fish. Brusci. Brotech-Brochem, 58, 1780-1783.
49. Tangara O. (2004). Co-infection hpatite B et hpatite C chez les donneurs de sang au
CNTS de Bamako. Thse de pharm. Bamako; 57 P
50. Timbo B. (2003). Etude phytochimique et des activits biologiques de Trichilia emetica
Vahl (MELIACEAE). Thse de Pharmacie, Bamako. 108 P
51. Tolo A. (2002). Etude des activits biologiques et de la toxicit des corces de racine de
Securidaca longepedunculata Fres. (Polygalaceae). Thse Pharmacie ; 110 P.
52. Traore D. (1983). Mdecine et Magie Africaine. Edit prsence Africaine. Paris ; 569 P.
53. Traor I. ; Nebout Max. (1983). Formules et techniques partir des matires premires
locales concernant la nourriture des souris dexprimentation en pays tropicaux. Acta
leprologoca, 1, 3.
54. Valette G. (1972). Prcis de pharmacodynamie, 3
me
Edit. Masson, Paris ; 113 P
55. Wagner H. ; Bladt S. (1996). Plants drug analysis. A thin layer chromatogragy Atlas.
Edit. 2 Springer. Munich, 384 P.
56. Winter C.A .; Risley E.A. ; Nuss G.W. (1963). Carragenine-induced edema in ind-paw
of rat as an assay for anti-inflammatory drug. Journal of pharmacology and experimental
therapeutics, 141, 369-373.
57. Yamasaki T. ; Li ; L ; and Lau ; B ;H. (1994). Garlic compounds protect vascular
endothelial celle from hydrogen peroxide-induced oxidant injury. Phytother. Res. 8, 408.
58. Yvan T. (1997). Pharmacologie 8
me
Edit. Masson. Paris-Milan-Barcelone ; 388 P.
Thse de Pharmacie
93

ANNEXE8 ANNEXE8 ANNEXE8 ANNEXE8
Thse de Pharmacie
94
Annexe n1 : Composition des ractifs
Ractif de Dragendorff :
Nitrate de Bismuth pulvris.20,80 g
Iode38,10 g
Iodure de sodium anhydre.200 g
Eau distille...600 cc
Agiter pendant 30 mn.
Ractif de Godin :
Solution A
Vanilline 1 g + 1000 ml dthanol
Solution B
Acide perchlorique 3 cc + eau distille 100 cc
Mlanger les 2 solutions au moment de lemploi
Ensuite pulvriser les plaques avec une solution de H
2
SO
4
10%
Liqueur de Fehling :
Ractif chaud
Solution A
CuSO
4
35 g
Eau distille.. 500 cc contenant 5 cc dH
2
SO
4
Laisser refroidir puis complter un litre avec de leau distille
Solution B
Sel de Seignette.. 150 g
Eau distille.500 cc
Refroidir puis ajouter 300 cc de lessive de soude non carbonate, complter un litre avec de
leau distille.
NB : mlanger les deux solutions volume gal au moment de lemploi.

Ractif de Guignard :
Prparation du papier picrosod
Acide picrique...1 g
Carbonate de sodium... 10 g
Eau distille..100 cc
Ractif de Raymond Marthoud :
1-3 meta dinitrobenzne...1 g
Ethanol 96 QSP.100 cc
Thse de Pharmacie
95
Ractif de Kedde :
Acide dinitro 3-5 benzoque1 g
Ethanol 96 QSP.100 cc
Ractif de Baljet :
Acide picrique.1 g
Ethanol 50 QSP 100 cc
Ractif de Valser Meyer :
Iodure de potassium 25 g
Chlorure mercurique... 6,77 g
Eau distille .250 cc

Thse de Pharmacie
96
Annexe 2 : Alimentation des souris
Formule pour la nourriture des souris (Traor et Nebout, 1983)
La formule pour lalimentation des souris a t la suivante :
Farine de mas...50 kg
Pte darachide.20 kg
Son de mil 17.5 kg
Lait en poudre ..7,0 kg
Farine de poisson..3,0 kg
Feuilles de salade piles .. 2,0 kg
Sel ( sel gemme )..0,5 kg
Eau q s p /100 kg..38 l

Thse de Pharmacie
97
Annexe n3 : Composition des ractifs de la transaminase : (Reitman, 1957)

Ractif Composition Concentration

Ractif 1 tampon phosphate
substrat GOT pH 7.5 85 mmol/l
aspartate 200 mmol/l
cetoglutarate 2 mmol/l

Ractif 2 tampon phosphate
substrat GPT pH 7.5 95 mmol/l
alanine 200 mmol/l
cetoglutarate 2 mmol/l

Ractif 3 2.4 dinitropnylhydrazine 1 mmol/l
Ractif de coloration

Ractif 4 pyruvate
talon

Thse de Pharmacie
98
FICHE SIGNALETIQUE

Nom: DIALLO
Prnom: Amadou

Titre du thse: Etude phytochimique et des activits biologiques de la poudre de
feuilles Syzygium guineense (Willd).
Anne de soutenance: 2004-2005
Ville de la soutenance : Bamako
Pays dorigine : Mali
Lieu de dpt : Bibliothque de la FMPOS

Rsum :

Notre travail a port sur ltude de la phytochimie et des activits biologiques de la poudre de
feuilles de Syzygium guineense qui est une plante de la famille des Myrtaces. Elle est
caractristique des rivires et des forts galeries en zone soudano-guineene.
Les grands groupes chimiques ont t dtermins par les ractions en tubes et confirms par la
CCM. Nous avons ralis des extractions hydro-alcooliques et organiques. Les extractions
avec les solvants polarit croissante ont t ralises au Soxhlet. Nous avons dos la teneur
en eau et des cendres.
Lactivit antioxydante a t observe dans tous nos extraits.
Avec le dcoct aqueux, nous avons not une lgre diminution des globules blancs chez la
souris.
Ce dcoct aqueux la dose 200 mg/kg a donn une activit moins leve que lindomtacine
la dose 8 mg/kg.
Ltude de toxicit a rvl une tolrance de lextrait aqueux chez les souris.

Mots cls : Mdecine traditionnelle, Plantes mdicinales, Syzygium guineense, antioxydant,
anti-inflammatoire, toxicit.

Thse de Pharmacie
99

SERMENT DE GALIEN

Je jure, en prsence des matres de la facult, des conseillers de lordre des pharmaciens et de
mes condisciples :

Dhonorer ceux qui mont instruit dans les prceptes de mon art et de leur tmoigner ma
reconnaissance en restant fidle a leur enseignement ;
Dexercer dans lintrt de la sant publique, ma profession avec conscience et de
respecter non seulement la lgislation en vigueur, mais aussi les rgles de lhonneur, de la
probit et du dsintressement.
De ne jamais oublier ma responsabilit et mes devoirs envers le malade et de sa dignit
humaine.
En aucun cas, je ne consentirai utiliser mes connaissances et mon tat pour corrompre
les murs et favoriser les actes criminels.
Que les hommes maccordent leur estime si je suis fidle mes promesses.
Que je sois couvert dopprobres et mpris de mes confrres si jy manque.
Je le jure.

Étude de La Phytochimie Et Activités Biologique...

Transféré par

Informations du document

Titre original

Copyright

Formats disponibles

Partager ce document

Partager ou intégrer le document

Options de partage

Avez-vous trouvé ce document utile ?

Ce contenu est-il inapproprié ?

Droits d'auteur :

Formats disponibles

Étude de La Phytochimie Et Activités Biologique...

Transféré par

Droits d'auteur :

Formats disponibles

Thse de Pharmacie

Etude de la phytochimie et des activits biologiques de Syzygium guineense Willd (Myrtaceae).

) ne possde des proprits anti-inflammatoires qu

) Acide niflumique (Nifluril

Vous aimerez peut-être aussi