UNIVERSIDADE FEDERAL DE CINCIAS DA SADE DE PORTO ALEGRE

FARMCIA

PREPARAO E ANLISE DA QUALIDADE DE TINTURA DE BOLDO (PEUMUS BOLDUS)

Aluna: Marina Gomes de Moraes Sassi Virginia Paladino Cardozo V. Fernandes Professora: Kellen de Almeida Disciplina: Farmacognosia

Porto Alegre, dezembro de 2011

Introduo
O Boldo (Peumus boldus), tambm conhecido como Boldo-Medicinal, Boldu, Boldus, Boldoa, Boldina, Baldina e Molina, uma planta medicinal utilizada inicialmente na medicina popular chinesa e peruana, para tratar problemas no fgado, intestino e vescula biliar, sendo considerado um tnico geral. Originrio da Amrica do Sul, pertence ordem Laurales, que inclui cerca de 2500 a 2800 espcies, distribudas em cerca de 90 gneros, compreendendo 7 famlias de arvores e arbustos, o Boldo pertence a famlia Monimiaceae e ao gnero Peumus, ocorre em climas tropicais e subtropicais. encontrado nas regies andinas do Chile e Peru, tambm cresce selvagem em algumas regies do Marrocos. cultivada na Itlia, Brasil e frica do Norte, para atender as demandas medicinais. O botnico Dr. James Duke, documentou usos tradicionais do boldo para tratamento de inflamaes urogenitais, gonorria, sfilis, gota, ictercia, dispepsia, reumatismo, resfriado. Na Europa, alm destes usos e dos usos referentes ao trato gastrointestinal, o boldo tambm utilizado para perda de apetite e como antiespasmdico. No Brasil, a planta tem os mesmos usos tradicionais. Suas propriedades medicinais so: anestsico, andico, antibacteriano, antiespasmdico, antifngico, antihemntico, antiinflamatrio, antioxidante, anti-sptico, colagogo, demulcente, depurativo, desitoxicante, diurtico, laxante, sedativo, tnico digestivo, vermfugo. Seus principais constituintes qumicos so: alcalides derivados de aporfina (boldina, reticulina, isocoridina, espartena), resina, reticulina, taninos, sitosterol, sais minerais, cidos orgnicos, glicdeos e lipdeos. A preparao de fitoterpicos requer conhecimento e habilidades em todas as fases da preparao, que vai da aquisio da matria-prima, a certificao do produto final, objetivando a produo de produtos farmacuticos adequados, com conceitos atuais de qualidade. Em relao matria-prima, devero ser implementados cuidados de conservao e manipulao e teste de controle de qualidade. sabido que o teor de substncias ativas e a caga microbiana so altamente influenciados pelo teor de gua do material vegetal. Para extratos lquidos, necessrio conhecer a composio do meio extrator e a concentrao de substncias ativas ou marcadores. Os parmetros de qualidade para fins farmacuticos so, em princpio estabelecidos nas Farmacopias e Cdigos Oficiais, para espcies que no constam em uma Farmacopia atualizada, necessrio que a empresa elabore uma monografia adequada. Saber a origem geogrfica, condies de cultivo, estgio de desenvolvimento, colheita, secagem, descontaminantes e conservantes devem ser conhecidos. Alm disso, deve-se estabelecer parmetros quantitativos, normalmente, determinando o teor de um conjunto de substncias,

preferivelmente, relacionada com a finalidade de uso, as quais chamamos de marcadores, onde, baseadas em anlises sistemticas estabelecida uma concentrao mnima. O controle de qualidade de matrias-primas vegetais feita por amostragem, relacionada ao numero de embalagens por lote, e peso das embalagens. Trs amostras so retiradas de cada embalagem (das regies superior, intermediria e inferior). So realizadas anlises de identificao microscpicas e macroscpicas, comparando-se com a monografia da planta, e de constituintes qumicos caractersticos, atravs de reaes de prospeco fitoqumica. As reaes nos permitem verificar presena de grupos de substncias, mas so inespecficas para componentes isolados. A anlise cromatogrfica tambm pode ser utilizada, para isso, deve-se determinar o perfil cromatogrfico, a tcnica e o sistema cromatogrfico adequado para a separao das substncias e de acordo com a estrutura disponvel, recomendada a utilizao de padres das substncias caractersticas. Alm dos ensaios de identificao, a pureza da amostra precisa ser avaliada, pela pesquisa de materiais estranhos, de constituintes qumicos indesejveis, de contaminantes microbiolgicos, de agrotxicos ou pesticidas, de metais pesados, e determinao de teor de cinzas indesejveis, do teor de umidade.Deve ser feito a anlise quantitativa dos constituintes qumicos, atravs do doseamento dos constituintes de acordo com as substncias da amostra. Todos esses ensaios devem ter como referncia a monografia da planta, e, de acordo com o preconizado em Boas Prticas de Fabricao (RDC 134/ANVISA de 13/7/2001), todos procedimentos que envolvem a produo e controle de qualidade de medicamentos devem ser devidamente documentados. A formalizao por escrito evita a perda de informaes e permite a reproduo dos procedimentos. A preparao de fitoterpicos comea no planejamento da rea fsica da empresa, as tcnicas de preparao e controle de qualidade necessitam de parmetros que influenciem a qualidade de uma operao de transformao. A sequncia de preparao deve ser conhecida, reprodutvel e documentada atravs do procedimento operacional padro (POP), o processamento deve garantir a manuteno das substncias de interesse. A qualidade de processamento depende do tipo de solvente, que determinar as substncias e suas concentraes no extrato, preciso utilizar um solvente seletivo. A escolha do mtodo de extrao influencia quantitativamente e qualitativamente, a relao droga:solvente tambm deve ser avaliada. Para assegurar a qualidade da tintura, uma srie de ensaios podem ser feitos: determinao da densidade relativa, determinao do teor alcolico, determinao de resduo seco (teor total de slido extrado), determinao do pH (auxiliar no controle de qualidade), anlise qualitativa por cromatografia em camada delgada ou quantitativa por mtodos espectrofotomtricos. O controle microbiolgico final tambm necessrio. Os cuidados com a embalagem garantem a manuteno da qualidade, a rotulagem deve seguir a legislao vigente, tratamentos usados para diminuir a contaminao devem ser documentados.

FARMACOGNOSIA Procedimento Operacional Padro (POP) Preparao e Anlise de Qualidade de Tintura de Boldo (Peumus boldus)

Elaborao: Marina G. de Moraes Sassi Virginia Paladino C. V. F. Revisado em: 12/12/2011

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1.

Objetivo Definir procedimento para realizar a preparao e anlise de qualidade de tintura da droga vegetal Boldo (Peumus boldus), a partir de folhas secar e modas.

2.

Responsabilidades:

Marina Gomes de Moraes Sassi e Virgnia Paladino C. V. Fernandes, alunas da disciplina de Farmacognosia da Universidade de Cincias da Sade de porto Alegre, sob superviso da prof Kellen de Almeida 3. Material Necessrio:

3.1 Para Preparao da tintura: Vidrarias: Frasco de vidro mbar, pistilo, funil, bquer, proveta de 10mL Solventes/ Reagentes: folhas secas de Boldo (Peumus boldus), etanol 60% (v/v) Equipamentos e outros materiais: papel filtro, balana analtica 3.2 Para ensaio de identificao: Vidrarias: bquer, funil de separao, pipetas de volumes variados, proveta de 25mL, funil, tubo capilar Solventes/ Reagentes: Tintura de boldo a 10% (p/V), soluo de vanilina a 1% (p/V) em cido clordrico SR, cido clordrico 2M, hidrxido de amnio 2M, ter etlico, metanol, boldina SQR, iodobismutato de potssio aquo-actico SR. Equipamentos e outros materiais: placa de slica CF254, lpis, rqua, secador de cabelo, chapa de aquecimento, capela reveladora luz UV/vis, pHmetro. 3.3 Para ensaios de pureza: Vidrarias: pesa-filtro, pipeta de 2mL, destilador, balo de fundo redondo, picmetro Solventes/ Reagentes: Tintura de boldo 10%, gua destilada

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Equipamentos e outros materiais: bico de bulsen, balana analtica, mufas, haste de ferro, estufa, dessecador. 3.4 Para doseamento: Vidrarias: Balo de fundo redondo, funil de separao, bquer, erlenmeyer, bureta, funil. Solventes/ Reagentes: Tintura de boldo 10%, gua destilada, hidrxido de ammio 6M, diclorometano, reagente de Mayer SR, sulfato de sdio anidro, cido sulfrico 0,005M, hidrxido de sdio 0,01M SV, vermelho de metila SI. Equipamentos e outros materiais: Balana analtica, evaporador rotatrio, mufas, haste de ferro, provetas e pipetas de volumes variados.

4.

Procedimento

4.1 Preparao Da Tintura: -Pesar 20g de droga vegetal em um bquer, adicionar 200mL de etanol 60% (v/v) q.s.p. - Com o pistilo, macerar a mistura, transferir para um recipiente fechado ao abrigo de luz, manter por 7 dias em temperatura ente 15C e 25C. - Filtrar a soluo, lavando os resduos com a soluo filtrada. Guardar em frasco mbar. 4.2 Ensaio De Identificao: 4.2.1 Fitoqumico - Evaporar 10 ml da tintura em banho-maria at a secura. - Adicionar ao resduo resultante algumas gotas da soluo de vanilina a 1% (p/V) em cido clordrico SR - Verifica-se a colorao

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4.2.2 Cromatografia - Soluo 1: - Evaporar 25 ml da tintura em banho-maria at a consistncia de extrato mole. - Triturar o resduo ainda quente duas vezes com 10 ml de cido clordrico 2 M em cada vez. - Filtrar e alcalinizar o filtrado em pH 9,0 com hidrxido de amnio 6 M. - Extrair o filtrado duas vezes em funil de separao com 20 ml de ter etlico em cada vez, com agitao moderada para evitar a formao de emulso. - Reunir as fases orgnicas e evaporar o solvente em banho-maria. - Dissolver o resduo em 0,5 ml de metanol. - Soluo 2: - Dissolver 2 mg de boldina SQR em 5 ml de metanol - Aplicar as duas solues em placa de placa de slica CF254, com front de 6 cm, utilizando mistura de metanol, dietilamina e tolueno (10:10:80) como fase mvel. - Observar sob luz UV (365nm). - Nebulizar a placa com iodobismutato de potssio aquo-actico SR, esperar 5 minutos. - Nebulizar a placa com nitrito de sdio SR. - Observar luz visvel. 4.3 Ensaios De Pureza 4.3.1 Determinao de resduo seco: - Transferir 2mL de tintura de boldo ao pesa filtro.

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- Evaporar at a secura em banho-maria. - Dessecar em estufa a 100C 105C, por 3 horas. - Resfriar em dessecador. - Pesar 4.3.2 Determinao de etanol: - Adicionar 20mL de tintura de boldo e 40mL de gua destilada a um balo. - Proceder a destilao. - Ao destilado lmpido, completa-se com gua at o volume inicial (60mL). - Mede-se a densidade em densmetro. - Compara-se a proporo de lcool com a tabela alcoomtrica. 4.5 Doseamento - Pesar exatamente cerca de 100 g de tintura. - Evaporar em evaporador rotatrio at a consistncia de extrato mole. Transferir quantitativamente a amostra para um funil de separao, utilizando alguns mililitros de gua. - Adicionar 6 ml de hidrxido de amnio 6 M. Agitar com sucessivas fraes de 40 ml, 25 ml e 25 ml de diclorometano. - Verificar a completa extrao dos alcalides pela adio de uma gota de Reagente de Mayer SR a algumas gotas da fase aquosa. - No caso de reao positiva, agitar a fase aquosa com sucessivas fraes de 20 ml de diclorometano at reao de Mayer negativa. - Reunir as fases orgnicas em funil de separao e lavar com gua at a neutralidade. - Adicionar soluo orgnica 2 g de sulfato de sdio anidro, deixar em contato por alguns minutos, com agitao casual. A soluo orgnica deve estar lmpida.

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- Filtrar e lavar o sulfato de sdio com 10 ml de diclorometano trs vezes. Reunir as fraes orgnicas e evaporar em evaporador rotatrio. - Transferir o resduo com a menor quantidade possvel de diclorometano para frasco de Erlenmeyer, - Adicionar 20 ml de cido sulfrico 0,005 M. SV. -Titular o excesso de cido com hidrxido de sdio 0,01 M SV em presena de vermelho de metila SI. - Calcular o teor, em porcentagem, de alcalides totais, expresso em boldina, segundo a expresso:

Em que : n = nmero de mililitros de hidrxido de sdio 0,01 M SV gastos; m = massa da tintura (g).

5.

Resultados

Para ser aprovada a tintura de boldo deve: - Ser um lquido lmpido, castanho-esverdeado escuro, de odor e sabor caractersticos. 5.1 Na identificao - Desenvolver colorao castanho-avermelhada ou vermelha intensa, na reao de identificao com vanilina e cido clordrico. - Obter com a soluo (2) uma mancha azul violcea e com a soluo (1) mancha similar em posio e colorao mancha obtida no cromatograma da soluo (2). 5.2 Ensaios de pureza: - Graduao alcolica de 60 5% (p/V).

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- Obter no mnimo 2.0% de resduo seco 5.3 Doseamento: - Conter, Contm, no mnimo, 0,01% de alcalides totais expressos em boldina.

6. Rotulagem:

Deve seguir a legislao vigente: Portaria n 6/MS/SNVS, de 31 de janeiro de 1995

7. Referncias: BRASIL. Farmacopeia Brasileira, volume 2 / Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria. Braslia: Anvisa, 2010. 698 p., 1v/il. PRODUTOS FITOTERPICOS. Preparao de extratos fludos. <http://cheirosdaterra.hd1.com.br/producao_fitoterapicos.htm> Disponvel em:

Justificativa
Os ensaios escolhidos so de simples execuo, necessitando de instrumentaes simples e de fcil acesso. Os alcalides derivados da aporfina so os constituintes em maior concentrao na droga vegetal, estando associados ao seu potencial farmacolgico, sendo o principal deles, a boldina. Os ensaios de identificao visaram detectar a presena de alcalides totais e, principalmente da boldina, j que, esse composto que devemos extrair e obter na tintura, os mtodos utilizados so de simples execuo, utilizando-se como padro a prpria boldina, a cromatografia em camada delgada permite comprovar a identidade da droga vegetal alm da presena dos seus principais constituintes. Nos ensaios de pureza, o resduo seco constitudo de todos os compostos que nas condies de determinao so extrados pelo solvente, dessa forma, deve haver um mnimo de resduo seco aps a evaporao, que garanta que a extrao foi bem sucedida. A determinao do teor alcolica um parmetro exigido pela ANVISA, e que, permite-nos observar se houve evaporao do solvente, o que pode prejudicar a estabilidade da preparao farmacutica. O ensaio de doseamento permite detectar se a concentrao de princpios ativos maior do que a mnima solicitada pela monografia. O ensaio escolhido, no exige nenhum equipamento de alto custo, dessa forma, pode ser desenvolvido em situaes em que no se pode contar com grande instrumentao, sendo de baixo custo em relao a outra possibilidade de ensaio por doseamento por cromatografia lquida de alta eficincia. O mtodo consiste de uma extrao seletiva de alcalides seguido de uma titulao, envolvendo apenas reaes qumicas. O resultado a porcentagem de alcalides expressos em boldina. A escolha da droga aconteceu pelo fato de ser uma planta muito usada na cultua popular, existindo diversos mtodos de preparao usados tradicionalmente, alm de existir facilidade de troca e falsificao da planta j que existem vrias espcies chamadas por boldo, como a Plectranthus barbatus (boldo de jardim) e Vernonia condensata (Boldo-baiano), usados
erroneamente pela cultura popular. O Peumus boldus possui indicaes para tratamento de afeces do fgado e da vescula, clculo biliar, clica, diarria, digesto, dispepsia, febre, fraqueza orgnica, gota, hepatite, insnia, m-flatulncia, previr ictercia, priso de ventre, problemas diurticos, reumatismo, uria, porm em altas doses pode provocar vmitos, diarrias e alteraes do sistema nervoso (efeito narctico), sendo at hoje, um dos medicamentos fitoterpicos mais utilizados. Pode ser abortivo e provocar hemorragias internas. Segundo Steinegger & Hansel (1988) podem ocorrer, com o uso prolongado ou de altas doses: hepatotoxicidade, hiperemia da mucosa gastrintestinal, que pode levar a inflamaes, distrbios da coordenao, alteraes psquicas e convulses. A correta preparao, com qualidade certificada, assegura um tratamento efetivo para todos essas morbidades, sendo a tintura de boldo principal ou coadjuvante no tratamento, responsabilidade do farmacutico certificar o tratamento, no s com a preparao com com a

dispensao de qualidade, prestando um bom atendimento em todos os aspectos de sua profisso.

Referncias
SIMES, C. M. O; SHENKEL, E. P; et al. Farmacognosia: da planta ao medicamento. 6 Ed. UFRGS editora. RS. 229p, 289p, 271p STEINHOFF, G. Herbal Medicinal Products. CRC Press, 2000. 37p. BRASIL. Farmacopeia Brasileira, volume 2 / Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria. Braslia: Anvisa, 2010. 698 p., 1v/il. PRODUTOS FITOTERPICOS. Preparao de extratos fludos. <http://cheirosdaterra.hd1.com.br/producao_fitoterapicos.htm> ANVISA. Portaria n 6/MS/SNVS, de 31 de janeiro de 1995.Disponvel em: < http://www.anvisa.gov.br/legis/portarias/6_95.htm> Disponvel em: